TEMA 5. CINTICA ENZIMTICA E INHIBICIN ENZIMTICA Generalidades. Concepto y significado cintico de Km y Vmax. Constante cataltica. Eficiencia cataltica.

Inhibicin de las reacciones enzimticas. Tipos de inhibicin. Reacciones bisustrato.

ACTIVIDAD ENZIMTICA: se mide en trminos de velocidad

La velocidad puede determinarse midiendo la aparicin de los productos o la desaparicin de los reactivos. V= -d[S]/dt = d[P]/dt =K [S]

vo

Unidad de Actividad Enzimtica (U): La cantidad de enzima que transforma 1.0 mol (10-6 M) de S /min, a 25 oC, en las condiciones de medida ptima. Actividad especfica: Es el no de U de una enzima / mg de protena.

Enzima

No. de Recambio 36 000 000 1 000 000 12 000 1 240

Anhidrasa carbnica B-Amilasa B-Galactosidasa Fosfoglucomutasa

Nmero de recambio: nmero de molculas de S transformadas /unidad de tiempo, por una molcula de E ( o por un solo sitio cataltico)

Curvas de progresin para una reaccin simple catalizada por una enzima

La relacin entre la concentracin de sustrato y la velocidad de reaccin puede expresarse de manera cuantitativa: Ecuacin de Michaelis- Menten

Transformacin de la ecuacin de Michaelis-Menten: grfica de dobles recprocos. Ecuacin de Lineweaver-Burk

Parmetros de Michaelis-Menten para algunas enzimas

Kcat (constante cataltica): n de moles de sustrato transformados por mol de enzima en la unidad de tiempo, cuando la enzima est saturada por el sustrato. Llamado tambin n de recambio: tiempo necesario para que una molcula de enzima recambie una molcula de sustrato. (Unidades: tiempo 1)

Kcat =

Vmax [Et]

Factores que afectan la cintica enzimtica

La actividad enzimtica puede ser modificada por: El pH La temperatura Inhibidores EFECTO DEL PH EFECTO DE LA TEMPERATURA

INHIBICIN ENZIMTICA INHIBICIN REVERSIBLE: E + I EI Competitiva No competitiva: pura y mixta Acompetitiva INHIBICIN IRREVERSIBLE : E + I EI

INHIBICIN COMPETITIVA

El inhibidor ocupa temporalmente el centro activo por semejanza estructural con el sustrato original.

INHIBICIN COMPETITIVA

Kmi = Km Vmaxi = Vmax

Ejemplos de inhibicin competitiva

Sustrato

Inhibidor

INHIBICIN NO COMPETITIVA

alteran la conformacin espacial de la enzima, impidiendo su unin al sustrato

Si Ki=Kies I. Pura; si Ki#Kies I. Mixta.

I. pura Kmi = Km Vmaxi = Vmax/

INHIBICIN ACOMPETITIVA

Se unen al complejo E-S impidiendo la catlisis del sustrato

Kmi = Km/

Vmaxi = Vmax/ Kmi/Vmaxi= Km/Vmax

Inhibicin Irreversible
Inhibicin permanente Unin irreversible por medio de enlaces covalentes. Modificaciones qumicas de los grupos catalticos. Una vez modificada la enzima, est siempre inhibida. Para distinguirlo de los reversibles, el complejo EI se somete a dilisis y si no se separan enzima e inhibidor, ste es permanente.

Inhibicin irreversible de un resto de serina del centro activo de una enzima por un el diisopropil fluorofosfato (DFP, gas nervioso)

INHIBIDORES ENZIMTICOS IRREVERSIBLES

Reacciones bisustrato: son reacciones Bi-Bi (2 sustratos y 2 productos)

a) Desplazamiento secuencial o simple: se forma compuesto ternario a1) Ordenado a2) Al azar b) Doble desplazamiento o ping-pong: no se forma compuesto ternario