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Gentica molecular: avanos e problemas Molecular genetics: advances and problems

Eloi S. Garcia 1 Claudia Ins Chamas

1 Vice-Presidncia de Pesquisa e Ambiente, Fundao Oswaldo Cruz. Av. Brasil 4365, Rio de Janeiro, RJ 21045-900, Brasil. 2 Coordenao de Gesto Tecnolgica, Fundao Oswaldo Cruz. Av. Brasil 4365, Rio de Janeiro, RJ 21045-900, Brasil.

Abstract This article is an attempt to draw the discussion on molecular genetics in health into
the public health domain. Now that the genetic engineering revolution has arrived, it is important to point out the advances and problems this technology poses for society. It is time for a clear, informed assessment of what we have already achieved and may soon achieve using this technology. Clearly, society needs to understand the ethical and practical implications of a technology which can produce miracle drugs and modern diagnoses and cure virtually every disease. Important points from sensitive social issues raised by molecular biology and the human genome project are discussed. Key words Molecular Genetics; Biotechnology; Public Health; Ethics

Resumo Este artigo traz a discusso sobre gentica molecular em sade ao campo da sade
pblica. Com a revoluo produzida pela chegada da engenharia gentica, importante discutir alguns dos avanos e problemas desta tecnologia para a sociedade. Est na hora de se fazer uma avaliao clara e bem informada acerca do que j se conseguiu e do que ainda podemos conseguir atravs desta tecnologia. A sociedade precisa compreender as implicaes ticas e prticas de uma tecnologia capaz de produzir drogas milagrosas, dagnsticos modernos e a cura de todas as doenas. Alguns pontos particularmente delicados pertinentes s questes sociais ligadas biologia molecular e ao projeto genoma humano so discutidos. Palavras-chave Gentica Molecular; Biotecnologia; Sade Pblica; tica

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A partir de 1972 uma srie de descobertas revolucionou o estudo da gentica e permitiu o surgimento de uma nova cincia, a gentica molecular ou engenharia gentica um conjunto de tcnicas onde um determinado fragmento de DNA (cido desoxirribonuclico) isolado e os genes so purificados, examinados e manipulados: (i) a descoberta de enzimas que tinham a propriedade de clivar (hidrolisar) material gentico em locais especficos (seqncias nucleotdicas) dos genes, dividindo a dupla hlice do DNA em pedaos menores estas enzimas foram chamadas de enzimas de restrio; (ii) a descoberta de enzimas capazes de unirem fragmentos de DNA (genes) enzimas de ligao; e (iii) a descoberta de inmeros microcromossomos (miniorganismos) os plasmdios, usados como vetores de fragmentos de DNA. Estava comeando uma nova tecnologia baseada na expanso do conhecimento sobre o DNA. Estas descobertas levaram a tecnologia de clonagem, i.e., a purificao de genes ou cpia deles por reproduzi-los em grande nmero na bactria hospedeira. Da para a tecnologia de DNA recombinante dominar a cincia biolgica e biomdica foi um passo. Tornou-se possvel o uso de sondas (probes) genticas pedaos de genes ou cpias de DNA complementar para hibridizao. A sonda marcada com traadores radioativos ou fluorescentes poderia detectar a forma hbrida (complementar) de fragmentos ou regies especficas do DNA. Esta tecnologia tornou-se o princpio molecular de inmeras tcnicas utilizadas em diagnsticos de doenas genticas, infecciosas e parasitrias. A gentica molecular pode ser utilizada para fazer com que genes estranhos sejam expressos em bactrias e leveduras ou mesmo em outras clulas superiores. As indstrias qumica, farmacutica e agrria passaram a investir milhares de dlares no desenvolvimento desta tecnologia. Com isto, foram desenvolvidas tcnicas capazes de produzir diagnsticos extremamente sensveis, e corrigir genes com erros inatos, fabricar animais transgnicos, etc. Tornou-se possvel modificar o genoma e algumas caractersticas de um indivduo na direo planejada. O conhecimento molecular de genes possibilitou a oferta de variados testes na forma de kits, ao contrrio dos procedimentos clssicos trabalhosos usados anteriormente em diagnsticos. Uma outra tcnica desenvolvida no mesmo perodo tambm por clonagem foi a produo de anticorpos monoclonais, que so utilizados

como marcadores genticos. Juntas, as tecnologias da gentica molecular e de hibridoma produziram as ferramentas biolgicas necessrias para explorar e conhecer as principais funes celulares em nvel molecular e desenvolver mtodos sensveis e especficos de diagnsticos. Nesta rea, a biologia comeou a ser comercial. No final dos anos 70 at meados dos anos 80 foram criadas nos EUA vrias companhias que se propunham desenvolver comercialmente produtos utilizando estas metodologias. Foi um verdadeiro boom na poca. Acreditava-se em um novo milagre industrial. Quase tudo na biologia poderia ser produzido desde que fossem conhecidos os genes. Logo depois veio o desencantamento. Nem tudo poderia ser realizado pelo conhecimento gerado pela biologia molecular. Mesmo assim alguns produtos foram consagrados nesta poca. Em 1982 a Lilly foi autorizada pelo Food and Drug Administration (FDA) agncia governamental americana responsvel pelo registro de medicamentos para entrar no mercado com a insulina obtida por engenharia gentica. Hoje j foram reconhecidos outros produtos: vacina contra hepatite B, hormnio de crescimento, ativador de plasminognio espcie-especfico (TPA), alfa-interferon. No entanto, outros produtos no tiveram o mesmo sucesso no mercado. Com o avano da engenharia gentica e a possibilidade de se conhecer cada gene e sua funo nos seres humanos (Projeto Genoma Humano), as cincias biolgicas e biomdicas deixaram de ter um papel secundrio na evoluo das cincias em geral. O Projeto Genoma Humano est causando uma grande mobilizao e esforo de vrios pases para mapear e investigar o conjunto dos genes humanos. Deve-se lembrar que o complemento total dos cromossomos humanos no ncleo celular contm o equivalente a 3 bilhes de pares de bases. Assumindo, pragmaticamente, que cada gene codifica uma protena com peso molecular em mdia de 40.000 daltons, pode-se estimar que um gene corresponde a 1.200 pares de bases. O ncleo da clula humana contm cerca de 2,5 milhes de genes. O DNA contido nas clulas de um homem, se desenrolado, poderia atingir a lua e voltar. No entanto, um grande nmero de genes no tem propriedades de codificar protenas geralmente so seqncias repetitivas, que no expressam protenas, ou pseudogenes e introns, pedaos de genes que so eliminados sem funo conhecida. Estima-se que o ser humano tenha de 50.000 a 100.000 distintos genes funcio-

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nais contidos em 23 pares de cromossomos. Assim, se tivermos 200 grupos trabalhando, com a tecnologia atual, seriam necessrios cerca de 10 a 12 anos para se ter o genoma humano totalmente mapeado. O Projeto Genoma Humano considerado o mais ambicioso projeto cientfico realizado neste sculo. Seu custo de cerca de 2,5 bilhes de dlares. O bilogo norte-americano Dr. James Dewey Watson (n. 1928 ) um dos descobridores da estrutura de dupla hlice do DNA e prmio Nobel em 1962 sugeriu que 3% deste montante fosse utilizado no estudo dos aspectos ticos, sociais e jurdicos do trabalho. Watson coordenou o Centro Nacional para Pesquisa do Genoma Humano de 1989 a 1992. Em meados de 91, foi anunciado que os National Institutes of Health estariam tentando patentear seqncias de DNA de genes expressos no crebro humano. Watson foi totalmente contra esta estratgia e, em abril de 92, pediu demisso, ficando como diretor apenas do Laboratrio Cold Spring Harbor. Em seu lugar, assumiu Francis Collins, descobridor do gene da fibrose cstica. O mapeamento dos genes permitir o conhecimento da funo de cada um no organismo. A posse de toda a informao codificada no genoma humano nos d crdito, pelo menos inicial, para compreender os mecanismos do desenvolvimento, da fisiologia e at mesmo do comportamento humano. Ser um biologista nos dias de hoje, na rea da bioqumica e da gentica molecular, uma tarefa de entusiasmo e dificuldade. Entusiasmo devido ao avano no conhecimento que esta tecnologia nos traz e que pode levar a mudanas e a novos desafios sociais e culturais. Dificuldade em funo da possibilidade do nascimento de uma nova moral, um novo escrpulo, uma nova tica cientfica e tecnolgica. Nos dias de hoje, se h um campo cientfico em que pesquisadores e sociedade devem estar juntos e fazer uma grande reflexo a entrada da engenharia gentica na rea da sade. Realmente, tem-se diminudo o perodo de tempo que separa as descobertas nas bancadas dos laboratrios e suas aplicaes na sade pblica. Cientistas e populao so faces de uma mesma moeda. As recentes tecnologias da biologia molecular e da imunologia, as quais resultaram em mtodos de diagnsticos extremamente sensveis, demoram de 6 a 8 anos para sarem dos laboratrios e serem usados na medicina. O Projeto Genoma Humano atrai grandes empresas (veja Tabela 1). Os testes para detectar partes falhas do DNA, causadoras de doen-

as como a fibrose cstica, representam um mercado no valor de US$ 376 milhes ao ano. O mtodo de seqenciamento rpido de genes desenvolvido por J. Craig Venter, ex-cientista dos National Institutes of Health e atual chefe do The Institute for Genome Research, est levando vrias firmas a reavaliarem suas tecnologias.

Tabela 1 Algumas Empresas Envolvidas no Projeto Genoma Humano Empresas farmacuticas e firmas de biotecnologia que esto explorando o genoma humano Empresa Human Genome Sciences Estratgia Decodificar todos os genes humanos e desenvolve medicamentos e diagnsticos, em parceria com outras empresas. Investiu US$125 na Human Genome Sciences para utilizar suas seqncias para criar novos produtos. Ler DNA de muitos tecidos diferentes para encontrar genes interessantes. Vender o acesso aos seus dados. Pagou InCyte US$ 25 milhes para ter acesso ao banco de dados. Assinou acordo de US$ 20 milhes com a InCyte para obter dados de genes. Investiu na SEQ e Cadus para desenvolver nova tecnologia de leitura de genes e seleo de drogas. Pesquisar genes especficos que causam a obesidade, diabetes, asma, ateriosclerose e cncer. Assinou acordo de US$ 70 milhes com a Millennium. Pagou Universidade de Washington para ler 200 mil fragmentos genticos. Divulgar os dados ao pblico. Pesquisar histria de famlias e dados da HMO em busca de genes que causam hipertenso, asma e obesidade. Decodificar genes para encontrar novos alvos de medicamentos. Usar dados da Smithkline e Human Genome Sciences para desenvolver remdios.

Smithkline Beecham InCyte Pharmaceutical

Pfizer Upjohn Bristol-Myers Squibb Millennium Hoffmann-LaRoche Merck

Sequana Therapeutics

Amgen Takeda

Fonte: Business Week, 1995.

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A biologia molecular tornou-se um grande negcio para a sociedade. Os bons cientistas saram da torre de marfim e junto com profissionais da rea de sade, juristas, filsofos e religiosos, comearam o debate com a sociedade sobre o uso da engenharia gentica em seres humanos, o patenteamento da vida e a tica. A sociedade ainda no esqueceu o impacto terrvel da experincia nazista, nem as campanhas de esterilizao macia dos alcolatras, psicticos, portadores de doenas genticas realizadas em alguns estados americanos nos anos 20 e 30. Seria fcil cair no maniquesmo. Mas, para a cincia, o impacto social de novas tcnicas, por exemplo, de diagnstico pr-natal, erros inatos ou mesmo de reproduo humana assistida, necessitam de uma reflexo profunda da sociedade. Com estes questionamentos que a biotica entrou seriamente no cenrio cientfico e tecnolgico. Seria tico manipular a natureza? Como vimos, o genoma humano imenso e possui milhares de genes. O tamanho do DNA humano facilita alteraes e combinaes genticas que podem refletir em conhecidas doenas hereditrias. Por longo tempo, essas doenas eram estudadas baseando-se em observaes teratognicas, as malformaes congnitas, ou doenas geneticamente transmissveis, como a conhecida hemofilia, bastante estudada nos descendentes da famlia real russa. Aps a ltima guerra os erros inatos comearam a ser investigados pelo refinamento das tcnicas citolgicas e caritipos. Os avanos da bioqumica e imunologia permitiram o diagnstico de vrias doenas genticas relacionadas ao metabolismo alcaptonria, cistinria, hemo-globinopatias, albinismo, etc. A estas doenas acrescentamos outras como anencefalia, espinha bfida, psicoses manaco-depressivas, doena de Huntington, mal de Alzheimer, sndrome de Down, fibrose cstica, mucoviscidose, bem como a deteco dos genes responsveis pelo cncer de mama vrios anos antes do tumor ser detectado por mamografia. Hoje se conhece cerca de 3.000 doenas relacionadas a defeitos genticos. Estima-se que 1% dos nascimentos traga de alguma maneira um beb com deficincia gentica, e que 30% da mortalidade infantil (em pases no afetados com doenas endmicas e m nutrio) estejam relacionados a um erro inato do metabolismo ou a uma malformao congnita que reflete tambm alterao metablica. Assumindo que 1 gene com defeito causa uma doena gentica, h situaes em que as modificaes levam a condies polignicas. Por exemplo, fatores ambientais como doenas

infecciosas (principalmente as virais) e parasitrias podem causar alteraes complexas. Um nmero alto de pessoas possui condies polignicas diabetes dependente de insulina, arteriosclerose, hipertenso, algumas formas de depresso , onde vrios genes se interagem e se combinam com o ambiente e estilo de vida, produzindo a doena. Como o progresso a engenharia gentica permite deteco de cpias ou mesmo fragmentos de genes (hibridizao, PCR, RFLP, etc.) havendo possibilidade de se diagnosticar doenas genticas no recm-nascido ou no feto, ou mesmo em adultos. Quando realizado em pessoas adultas estes dados podem levar ao aconselhamento do casal a no ter filhos devido, por exemplo, probabilidade de ter genes de alto risco. Um outro ponto a ser considerado a conseqncia da doena para o recm-nascido ou feto, quando no h terapia. A sociedade no deve subestimar este problema. As conseqncias legais e morais de uma expanso de diagnsticos genticos so ameaadoras. Por exemplo, o que fariam os pais de uma criana nascida com erro inato de metabolismo, se soubesse que a doena poderia ser diagnosticada no feto, ou mesmo antes da concepo do beb? Um outro problema, a impresso gentica (DNA fingerprint) de um indivduo tecnologia j utilizada hoje para identificao de paternidade e que, futuramente, poder ser utilizada para apoio s autoridades de imigrao, identificar possveis alteraes individuais ou potenciais modificaes de personalidade, ou mesmo fatores de risco para determinadas doenas hereditrias e produzir seres humanos de primeira e segunda classe. O que fariam a medicina preventiva, as companhias de seguro, as indstrias na seleo de seus empregados, o noivo na escolha da companheira, etc? A sociedade precisa saber disto. Vamos aprofundar um pouco mais estes pontos. Um feto com alguns meses de desenvolvimento que apresentasse, por diagnstico gentico, uma doena hereditria. Seria recomendvel um aborto? Esta tentao de eugenia nos leva a esquecer a essencialidade humanitria, a sensibilidade das pessoas, a tica pessoal. A sociedade precisa discutir profundamente esta questo. A engenharia gentica poderia ainda influenciar a medicina no controle da reproduo. Por exemplo, poderia modificar embries humanos por tcnicas transgnicas. Isto quer dizer, manipulao de genes, eliminao de genes ruins e insero de genes bons (terapia gnica). Certas doenas podero ser tratadas

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por reposio do gene defeituoso. Seria a verso moderna do beb de proveta ou da reproduo assistida. bem verdade que reproduo assistida, principalmente, inseminao artificial, fertilizao in vitro, implante de embrio, j vem sendo usada pela medicina veterinria por vrios anos. A medicina humana comeou a usar estas tecnologias mais recentemente. Neste cenrio podemos pensar que uma criana poder ser gerada totalmente fora do organismo da me, como as plantas cultivadas na ausncia de solo, no Epcot Center (EUA). Genes foram inseridos em camundongos, coelhos, porcos e ovelhas. Cerca de dez anos aps a descoberta da transgnese foram produzidas mais de 1.000 cepas de camundongos e mais de dez tipos de porcos geneticamente alterados. Hoje j so geradas ovelhas que produzem leite contendo fator 9, que pode ser extrado e utilizado como medicamento para hemofilia. Tambm foi criada um tipo de ovelha que produz leite contendo TPA em quantidade suficiente para suprir a demanda mundial da droga. O patenteamento da vida outra questo bastante complexa. Em 1972, a microbiologista Ananda Chakrabarty, da Universidade de Illinois, desenvolveu um microorganismo engenheirado no-recombinante capaz de degradar componentes do petrleo bruto. Em 1980, a Suprema Corte Americana concedeu a patente a este microorganismo, constituindo o primeiro ser vivo patenteado nos EUA. O caso tornou-se jurisprudncia para o Escritrio Americano de Patentes. Desde ento, os pedidos de patente relacionados a seres vivos parecem no ter limites. Em 12 de abril de 1988 foi concedida Universidade de Harvard a patente U.S. 4.736.866, para um rato transgnico, que continha um gene causador de cncer. O problema tico srio. Os conhecimentos sobre a gentica humana e animal podem ser explorados economicamente por empresas? A tendncia internacional que prevalea as razes econmicas. Acreditamos que em breve as legislaes de propriedade industrial dos pases em desenvolvimento estaro adaptadas aos novos tempos e globalizao dos mercados, de acordo com a lgica neoliberal. A sociedade precisa refletir e decidir como ela quer e deve utilizar os conhecimentos gerados pela engenharia gentica. No basta ter uma vida saudvel e maior expectativa de vida. necessria uma vida tica e necessariamente mais feliz. Para finalizar, historicamente sabemos que quando Darwin publicou h cerca de 130 anos

a obra A Origem das Espcies, a sociedade reagiu s idias levantadas pelo cientista sobre seleo natural. Este conceito mudou os rumos da biologia nos ltimos 100 anos. Hoje a nossa sociedade deve discutir se a manipulao da natureza pelas tcnicas de biologia molecular pode levar a uma seleo induzida/artificial. Talvez, nos prximos 100 anos tenhamos uma compreenso melhor do que significa a biologia molecular e a engenharia gentica para a humanidade.

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