Guia de Practicas 2012

UNIVERSIDAD ALAS PERUANAS
FACULTAD DE MEDICINA HUMANA Y CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE ESTOMATOLOGIA
GUA DE PRCTICAS DE BIOLOGA Y GENTICA
PARA LA ESCUELA PROFESIONAL DE ESTOMATOLOGA
SEMESTRE CADMICO 2012 - I
COORDINADOR DEL CURSO: Mg. Marco Antonio Mesa Guevara
DOCENTES COLABORADORES:
Blgo. Nelson Rivera Fernandez Q.F Adriana Cordero Vilca CD. Giovanna Garca Huamn CD. Ciro Caldern Guevara
Mg. Marco Antonio Mesa Guevara
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INTRODUCCIN
El laboratorio constituye el lugar trabajo, tanto para la enseanza como para la investigacin y es preciso conocer los diferentes materiales, instrumentos, reactivos y equipos con los que cuenta. Las prcticas de biologa son una parte fundamental en la enseanza de dicha materia ya que permiten que los conocimientos tericos aprendidos por el alumno se puedan aplicar, es por esta razn que los estudiantes deben comprender los procedimientos bsicos en la tcnica del manejo de los materiales y equipos de laboratorio para lograr un buen aprendizaje de la biloga. El concepto de asepsia y de trabajo ordenado ayuda al desarrollo de la prctica. El trabajo de laboratorio representa uno de los aspectos fundamentales que contribuye en la definicin de la vocacin tecnolgica y cientfica del ser humano y en especial de los jvenes por estar en un periodo de formacin intelectual, ya que ello permite que la teora sea comparada con la prctica. Es tarea fundamental de los docentes es motivar la participacin activa de los estudiantes en el desarrollo de prcticas de laboratorio y de campo, con el fin de que se mejoren sus habilidades y destrezas en cuanto al manejo de materiales y reactivos, con lo cual estn en posibilidades de lograr un cambio o transformacin del entorno en donde vive, as como la de su propia realidad.
Por esta razn, cremos por conveniente la elaboracin de esta gua de prctica, cuyo contenido tiene como finalidad brindar al estudiante un material ordenado y de fcil acceso al trabajo de laboratorio en la asignatura de Biologa. Esta gua est descrita de manera clara y sencilla con el fin de que la ejecucin
prctica pueda hacerse completamente. El presente desarrollaron en trabajo consta de catorce experiencias, las cuales se prcticas. Cada
varias etapas mediante la recopilacin de
prctica inicia con el ttulo en la parte central, el cual se seleccion de acuerdo a la dosificacin del programa por semana. La competencia hace referencia al aspecto
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significativo que se pretende que logren los alumnos al final del experimento. El fundamento terico de cada una de las prcticas, fue elaborado en base a
diversas referencias bibliogrficas. En la parte experimental, el procedimiento fue desarrollado consultando diversos manuales de Educacin Superior; del mismo modo, en la preparacin de la gua nos hemos apoyado en los aos de experiencia en la enseanza universitaria en diversas instituciones. El cuestionario en el que el alumno demuestra su aprovechamiento logrado al final de la secuencia de aprendizaje, se elabor basado en el aspecto introductorio y resultados
experimentales que se esperan de cada prctica. Finalmente, agradezco anticipadamente en nombre de la plana del curso y el mo propio a sus lectores por hacerlo de su conocimiento. Asimismo; agradezco de manera muy especial a la profesora Adriana Cordero Vilca por su valiosa participacin en la elaboracin de la presente gua.
Mg. Marco Antonio Mesa Guevara Coordinador de la Asignatura de Biologa y Gentica
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RECOMENDACIONES GENERALES PARA EL TRABAJO EN EL LABORATORIO DE BIOLOGA
1. La asistencia a prctica es obligatoria, no habr tolerancia y el inicio es a la hora indicada, despus de este tiempo, no se permitir al acceso al laboratorio. 2. Los alumnos debern ingresar con el uniforme completo, estando el guardapolvo debidamente abotonado. 3. Las mesas debern estar siempre limpias y desocupadas, las mochilas sern colocadas en los cajones de las mesas de trabajo. 4. Est prohibido comer y fumar en el laboratorio, evite el uso de celulares durante el desarrollo de la prctica. 5. Limpiar y desinfectar el rea de trabajo antes y despus de usarla. 6. No pasear entre las mesas del laboratorio, el trabajo deber efectuarse sentado y en su equipo de trabajo. Hablar slo lo necesario con los compaeros. 7. El material para el desarrollo de la prctica, es responsabilidad de los integrantes del grupo, en caso de no traerlo se suspender la prctica para dicho grupo. 8. Ser cuidadoso con el uso del material de laboratorio (microscopios, materiales de vidrio y porcelana, reactivos, etc.), con el fin de evitar cualquier accidente. 9. Verifique que los frascos con las sustancias a emplear estn debidamente rotulados o etiquetados. 10. El material una vez terminada la prctica, deber ser entregado totalmente limpio y ordenado. 11. Informe al profesor de cualquier accidente que ocurra. En caso de dao o deterioro de algn instrumento o equipo, SON LOS ALUMNOS QUE CONFORMAN LA MESA LOS RESPONSABLES DE DICHO DAO y debern subsanarlo a la brevedad posible y en un tiempo no mayor a una semana, siendo retenido su carnet hasta el cumplimiento de la deuda pendiente. 12. La evaluacin en el laboratorio ser permanente. Se tomar dos exmenes, un examen parcial y un examen final de prctica sin derecho a sustitutorio.
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CONTENIDO DE LAS PRCTICAS
SEMANA 1
PRCTICA 1
TEMAS RECONOCIMIENTO, USO Y MANEJO DE MATERIALES DE LABORATORIO.
PGINA 6
2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
2 3 4 5 6 7
MICROSCOPA RECONOCIMIENTO DE GLCIDOS RECONOCIMIENTO DE LPIDOS RECONOCIMIENTO DE PROTENAS ACTIVIDAD ENZIMTICA AISLAMIENTO DE LOS CIDOS NUCLEICOS EXAMEN PARCIAL
16 26 32 38 42 49
8 9 10 11 12 13 14
CLULA PROCARIOTA: TCNICA DE COLORACIN BACTERIANA CLULA EUCARIOTA: SMOSIS PLASTIDIOS E INCLUSIONES CITOPLASMTICAS CARIOTIPO HUMANO DIVISIN CELULAR: MITOSIS LEYES DE MENDEL LA FERMENTACIN
53 59 69 75 84 87 90
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PRCTICA 1: RECONOCIMIENTO DEL MATERIAL DE LABORATORIO Y MEDICIN DE VOLMENES
I.
COMPETENCIAS: Reconoce los materiales de laboratorio. Describe correctamente el uso de ellos. Efecta mediciones de volmenes usando los materiales necesarios.
II.
MATERALES
Vaso de Precipitado
Erlenmeyer
Baln de Fondo Redondo Baln de Fondo Plano
Tringulo
Pinza para Tubos de Ensayo

Esptula Soportes
Probeta
Bureta Pipeta Graduada.
Vidrio de Reloj
Pizetas Placas de toque
Pipetas Aforadas
Tubos de Ensayo Agitador
Micropipetas
Pipeteadores Mortero y piln.
Embudo
Embudo de Separacin Cpsula de Porcelana
Escobilla para tubos

Mechero bunsen
Crisoles
Gradilla
III.
FUNDAMENTO TERICO
En el laboratorio se emplean una variedad de implementos para la realizacin de las experiencias, algunos de ellos son denominados volumtricos, ya que se usan para medir volmenes de fluidos, ya sean lquidos o gases. Entre los aparatos volumtricos ms usados tenemos: Probetas, Pipetas, Buretas, Vasos de precipitado, tubos de ensayo, entre otros. En algunos aparatos el lquido se mide adicionndolo en el interior de este, mientras que en otros como en el caso
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de las pipetas el lquido se mide llenando esta mediante succin (o vaco) con peras de caucho. Una alternativa poco recomendable es hacerlo por succin por la boca y poniendo el dedo ndice sobre la parte superior de la pipeta para evitar la salida de lquido, pero cuando se trabaja con lquidos corrosivos o venenosos esto puede desembocar en quemaduras o envenenamiento. Al medir un lquido con el uso de pipetas se debe tener la precaucin de que la punta inferior quede muy por debajo de la superficie del lquido, ya que de lo contrario absorber aire, el cual impulsar el lquido hasta hacer contacto con la boca o con la pera de caucho.
Cuando se mide un lquido, la superficie de este generalmente adopta una curvatura denominada menisco, para efectos de una buena medicin la parte inferior del menisco debe quedar tangente a la seal de referencia. Diferencia entre materiales, instrumentos, reactivos y equipos de laboratorio
Artefactos que facilitan el estudio
A continuacin se hace referencia a los materiales de uso comn en el laboratorio:
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PROBETA GRADUADA Se utiliza, para contener o medir volmenes de lquidos de una forma aproximada. Es un recipiente cilndrico de vidrio con una base ancha, que generalmente lleva en la parte superior un pico para verter el lquido con mayor facilidad.
PIPETA VOLUMTRICA Instrumento de laboratorio que se utiliza para medir o transvasar pequeas cantidades de lquido..
ERLENMEYER Son matraces de paredes rectas, muy usados para las valoraciones. Se pueden calentar directamente sobre la rejilla.
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MORTEROS Se utilizan para disgregar sustancias, mediante la presin ejercida, suelen ser de porcelana.
BURETA Bureta, instrumento de laboratorio que se utiliza en volumetra para medir con gran precisin el volumen de lquido vertido.
PIZETA O FRASCO LAVADOR Se utilizan para enjuagar el material de laboratorio
BALON DE FONDO PLANO Son recipientes de vidrio, esfricos, provistos de un cuello. Algunos tienen marcada una determinada capacidad (aforados).
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TRPODE Se utiliza como soporte para calentar distintos recipientes; sobre la plataforma del trpode se coloca una malla metlica para que la llama no d directamente sobre el vidrio y se difunda mejor el calor.
MECHERO BUNSEN Mechero Bunsen, dispositivo que se utiliza mucho en los laboratorios debido a que proporciona una llama caliente, constante y sin humo.
REJILLA DE ASBESTO Material de laboratorio de metal que est cubierto con un crculo de asbesto; se usa para proteger el fuego directo el material de vidrio que va a sufrir calentamiento. Se suelen colocar encima del mechero, apoyadas en un aro sujeto al soporte. Sobre ellas se coloca el matraz o recipiente que queremos calentar, evitando as que la llama le d directamente.
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EMBUDO BUCHNER Es un embudo con la base agujereada. Se acopla por su extremo inferior mediante un corcho taladrado al matraz kitasato. Encima de los orificios se coloca un papel de filtro. Se utiliza para filtrar sustancias pastosas.
CAJA PETRI La placa de Petri es un recipiente redondo, de cristal o plstico, de diferentes dimetros (siendo ms comunes los de dimetros alrededor de 10 cm), de fondo bajo, con una cubierta de la misma forma que la placa, pero algo ms grande de dimetro, para que se pueda colocar encima y cerrar el recipiente. Se utiliza en los laboratorios principalmente para el cultivo de bacterias y otros microorganismos.
CRISOL GUSH O CRISOL FILTRANTE Suele ser de porcelana, de un metal inerte o de algn tipo de material refractario. Se utiliza para calcinar o fundir sustancias. Se calienta a fuego directo. Es similar a las cpsulas.
CPSULA DE PORCELANA Sirve para calentar y evaporar lquidos, fundir cristalizar slidos.
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VARILLA DE AGITACIN La varilla de agitacin es de vidrio y se utiliza para agitar las disoluciones.
GRADILLA Pueden ser de metal, madera o platico. Se utilizan para sostener los tubos de ensayo.
TUBOS DE ENSAYO Son cilindros de vidrio cerrados por uno de sus extremos que se emplean para calentar, disolver o hacer reaccionar pequeas cantidades de sustancias. Los hay de vidrio ordinario y de PIREX. Estos ltimos son los que se deben utilizar cuando se necesita calentar.
VASOS DE PRECIPITADO Se usan para preparar, disolver o calentar sustancias. Junto con el matraz, la probeta y los tubos de ensayo constituyen lo que se llama en el laboratorio Material de vidrio de uso general. Se fabrican en vidrio ordinario y en PIREX, y de distintos tamaos. Son cilndricos y en la boca llevan un pequeo apndice en forma de pico para facilitar el vertido de las sustancias cuando se transvasan. Puede ir aforados o graduados, si bien su exactitud es menor que la de un matraz aforado o una probeta.
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MATRAZ FONDO REDONDO Tambin se conoce con el nombre de matraz de fondo esfrico y se utiliza en pocas experiencias.
EMBUDOS Se emplean para filtrar sustancias liquidas o simplemente para trasvasarlas de un recipiente a otro. En el laboratorio se utilizan embudos de diversos materiales: vidrio ordinario, PIREX, plstico o porcelana, segn el tipo aplicacin que se les vaya a dar. Hay embudos de cristal graduados; en este caso tienen una llave en el tubo que, al cerrarla, impide la salida del lquido. Es preferible que el extremo del embudo tenga un corte oblicuo para facilitar la cada del lquido.
PINZAS PARA TUBOS DE ENSAYO Son instrumentos en forma de tenacillas que sirven para sujetar los tubos de ensayo; pueden ser de madera o metlicas.
ESCOBILLA Se utiliza para la limpieza del material de laboratorio.
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SOPORTE UNIVERSAL El soporte universal es una herramienta que se utiliza en laboratorio para realizar montajes con los materiales presentes en el laboratorio y obtener sistemas de medicin o de diversas funciones, como por ejemplo: un fusimetro, un equipo de destilacin. Est formado por una base o pie en forma de semicrculo o de rectngulo, y desde el centro de uno de los lados, tiene una varilla cilndrica que sirve para sujetar otros elementos a travs de doble nueces.
IV.
PARTE EXPERIMENTAL :
RECONOCIMIENTO DE MATERIALES DE LABORATORIO
1- Para el desarrollo de la prctica el grupo recibir un conjunto de materiales para identificarlos y sealar sus caractersticas. 2- Efectuar el dibujo cientfico correspondiente de todos los materiales de la prctica. 3- Realizar la actividad con sumo cuidado evitando romper los materiales. MEDICIN DE VOLMENES 1. Cada alumno de la mesa medir 2,5 y 7 ml de agua destilada y lo colocar en tubos de ensayo. 2. Medir 10 ml. de agua con una pipeta aforada de 5 ml y colocarlos en un tubo de ensayo. 3. Colocar 50 ml de agua medidos desde una probeta a un beaker. 4. Colocar en un vaso de precipitado de 250 ml, 200 ml de agua medidos con probetas, comparando los volmenes.
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V.
CUESTIONARIO
1. Qu volumen cree usted ms exacto, el medido con una pipeta aforada o el medido con una graduada? 2. Qu implementos volumtricos miden vaciando? 3. Para qu se usan los implementos que se le entregaron en esta sesin de laboratorio? 4. Cul es el objetivo de usar la rejilla de asbesto?
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PRCTICA 2: MICROSCOPA
I.
COMPETENCIAS: Identifica sin error cada una de las partes del sistema mecnico y ptico del microscopio convencional. Describe correctamente el funcionamiento de cada una de las partes del microscopio compuesto. Prepara correctamente las muestras para ser observadas al
microscopio. Ilumina correctamente el campo del microscopio. Grada debidamente la apertura del diafragma del microscopio compuesto para visualizar una imagen. II. MATERIALES Microscopio Lminas Laminillas Pizeta con agua destilada Azul de metileno Lana Hisopos. Una hoja de papel peridico con letras pequeas. Papel absorbente. Microscopio. III. FUNDAMENTO TERICO
MICROSCOPIO PTICO
Se usa para aumentar el tamao de la imagen aparente de los objetos, lo cual permite observar los detalles estructurales de los microorganismos.
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El microscopio ptico normal que se usa para observar bacterias y otros organismos celulares es un microscopio compuesto, el cual est provisto de una fuente luminosa, una lente condensadora de luz que la dirige hacia el objeto a observar y dos juegos de lentes que ayudan a la amplificacin de la imagen. AMPLIFICACIN La capacidad amplificadora de un microscopio compuesto es el producto del aumento individual de los oculares y los lentes objetivos. Un microscopio tpico que se usa en bacteriologa tiene objetivos con poder de amplificacin de 10X, 40X y 100X y oculares de 10X, por lo cual es capaz de amplificar la imagen de la muestra 100, 400 y 1000 veces.
PODER DE RESOLUCIN La resolucin se define como la capacidad para observar claramente dos puntos vecinos en el campo visual como entidades diferentes o independientes. El poder de resolucin se mide utilizando como unidad la inversa del lmite de resolucin. Poder de resolucin= 1/Lmite de resolucin LMITE DE RESOLUCIN Se define como la distancia mnima entre 2 puntos, para que puedan distinguirse como tales. Se calcula con la frmula de Abbe:
Lmite de resolucin = 0,61 X Longitud de onda Apertura numrica
A menor lmite de resolucin, mayor es el poder de resolucin.
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APERTURA NUMRICA Esta expresin, que suele abreviarse AN, indica la cantidad de luz que entra en un objetivo desde un punto del campo del microscopio. La apertura numrica es una constante de cada lente y mide su calidad para concentrar luz. Tal valor es de suma importancia, de l depende el Lmite de Resolucin, la propiedad ms
importante de un objetivo. La apertura numrica es igual: n x seno
Siendo n el ndice de refraccin (cambio en la velocidad de la luz difractada) del medio entre el medio y el objeto, es el ngulo de semiapertura de la lente, su valor siempre es menor a 1 (0,93 como mximo en los microscopios actuales.)
El aire tiene un ndice de refraccin de 1.0, que limita la resolucin que se puede obtener, pero se puede incrementar la AN poniendo aceite de inmersin entre el espcimen y el objetivo, aumentando as el poder de resolucin del microscopio.
El aceite de inmersin tiene un ndice de refraccin de 1.5, lo que aumenta
considerablemente la AN ingresando por lo tanto un mayor cono de luz hacia el objetivo y permitiendo de esta manera la observacin de la muestra. La calidad de un objetivo es tanto mayor cuanto ms elevada es su apertura numrica.
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TIPOS DE MICROSCOPIO
Simple. Los primeros microscopios, construidos por Leeuwenhoek alrededor de 1675, eran simples, es decir, contenan slo una lente o lupa. Compuesto. Tiene varias lentes combinadas, capaces de producir gran aumento. Existe adems el Microscopio electrnico, que debido a sus posibilidades para obtener imgenes claras de los objetos ms diminutos, ha hecho contribuciones de la mayor importancia, sobre todo en el estudio de la constitucin y ciclos vitales de los virus filtrables.
MICROSCOPIO COMPUESTO DE CAMPO LUMINOSO
El microscopio de uso ms comn en el trabajo de laboratorio es el microscopio compuesto de campo luminoso. El microscopio compuesto consta de una fuente luminosa, una lente que concentra la luz (condensador) y la dirige hacia el espcimen y dos juegos de lentes
convergentes, objetivo y ocular, que ayudan a la amplificacin de la imagen. El objetivo est en el extremo inferior del tubo del microscopio, justo por encima del objeto que se halla encima de la platina, y cuya distancia focal es muy pequea (distancia focal, es la distancia entre el foco de la lente y su centro ptico). El objetivo forma imagen real, invertida y aumentada del objeto. La otra lente llamada ocular, se halla en el extremo superior, de mayor distancia focal, y es por donde se observa para percibir las imgenes. El ocular forma una imagen virtual, aumentada y derecha de la imagen formada por el objetivo. El microscopio compuesto consta bsicamente de dos lentes convergentes: el objetivo y el ocular que reproducen al combinarse una imagen virtual, i nvertida y cuyo tamao es el producto de las amplificaciones de ambas lentes.
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OCULAR X OBJETIVO = AUMENTO
OCULAR 10 X 10 X 10 X 10 X
OBJETIVO 4X 10 X 40 X 100 X
AUMENTO 40 X 100 X 400 X 1000 X
PARTES DEL MICROSCOPIO PTICO COMPUESTO Localice estas partes en su microscopio e indique en el esquema. PARTE MECNICA: 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 1. Tubo ptico Tornillo Macromtrico Tornillo Micromtrico Revolver Brazo Platina Base o pie Tubo ptico: Es un cilindro de metal que en su parte superior se encuentra colocado el OCULAR y en su parte inferior se dispone el REVOLVER al cual se atornillan los OBJETIVOS. En la parte posterior se encuentra la CREMALLERA que se adapta a un pin interno. 2. Tornillo Macromtrico: Se utiliza para enfocar la preparacin, es de largo recorrido y permite movimientos de gran amplitud. Se utiliza para movilizar el tubo o platina (enfoque grosero). 3. Tornillo Micromtrico: Tambin se utiliza para enfocar la preparacin, pero es de pequeo recorrido, para movimientos de pequea amplitud.
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4.
Revolver: Es un dispositivo metlico giratorio que se encuentra en la parte inferior del tubo ptico y posee de dos a cuatro lentes que al hacerles girar deben disponerse en el Retn, indicando que se encuentran en posicin de observacin.
5. Brazo: es el metal macizo, en forma de C. Por la parte superior se une con el TUBO y por su extremidad inferior se pone en contacto con la
BASE por medio de la CHARNELA, la que permite inclinar el aparato. En su extremo superior se encuentra el TORNILLO MACROMTRICO. El Brazo sirve para transportar el microscopio. 6. Platina: es una plancha metlica de forma circular o cuadrangular, que se encuentra en la parte inferior del Brazo. Posee una abertura central denominada ABERTURA DE PLATINA,
cuyo fin es dejar pasar la luz hacia el objeto de observacin colocado en su respectivo portaobjetos sujetado por las Presillas. 7. Base o pie: Es un dispositivo metlico pesado, unas veces en forma de herradura, otras en forma circular que permite la estabilidad del Microscopio. PARTE PTICA: 1. Oculares 2. Objetivos 3. Condensador 4. Diafragma 5. Espejo 1. Oculares.- Son cilindros cortos y huecos que se colocan en la parte superior del tubo ptico. Interiormente llevan dos lentes uno en cada
extremo y entre ambos existe un diafragma. La lente superior se denomina lente ocular y la inferior lente de campo.
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Observando la parte exterior del ocular notaremos la presencia de unos nmeros 5X, 10X, 15X, etc., que es el aumento de cada ocular. Esta parte se llama as porque el ojo del observador se coloca en este lugar. La funcin del ocular es aumentar la imagen real e invertida dada por el objetivo. Cuando se utiliza el ocular 10X con el objetivo de pequeo aumento da una amplificacin final de 100 veces. El de 50X dar una amplificacin final de 500 veces y el de 100X una amplificacin final de 1000 veces. Acta como una lupa y produce imagen virtual aumentada y derecha de la imagen del objetivo. 2. Objetivos.- Son tubos cortos atornillados al revolver en la parte inferior del tubo ptico. El objetivo es un sistema de lentes de los cuales el que est ms cerca del objeto se denomina lente frontal. El aumento de cada objetivo se encuentra en la parte exterior del mismo: 5X, 10X, 45X, etc. Objetivo de pequeo aumento o "Seco dbil". til para observar microorganismos grandes, p. ej. Protozoarios. Este objetivo est marcado con un 3 2/3, que significa 2/3 de pulgada 16 mm. Tambin est marcado como 10X. Tiene una lente en el extremo mucho ms grande que cualquiera de los otros objetivos. Objetivo de gran aumento o "Seco fuerte". Este se usa para el examen de microorganismos vivos suspendidos en gotas de agua u otros lquidos. Est marcado con 6 1/6 q ue significa 1/6 de pulgada 4 mm. Tambin est marcado como 45X o 50X. La lente del extremo es de menor tamao que la del seco dbil. Objetivo de inmersin en aceite. Existen los objetivos denominados de inmersin (100X), que se utiliza con aceite de cedro y se les reconoce por que llevan una banda roja. 3. Condensador.- Es un sistema de lentes cuya funcin es concentrar los rayos luminosos a la preparacin, los que son proyectados por el espejo.
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Se moviliza mediante una cremallera accionada por un tornillo de enfoque.
4.
Diafragma.- En algunos microscopios desprovistos de condensador, es un disco metlico circular que se encuentra dispuesto por debajo de la platina. Posee aberturas de diferentes dimetros y su funcin es regular la cantidad de luz proyectada a la abertura de platina. Existe diafragma iris que se encuentra por debajo del condensador.
5.
Espejo.- Se encuentra debajo de la platina montada en un soporte metlico en forma de herradura. Posee dos caras: una cncava y otra plana.
IV.
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL A. MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO PTICO 1. Coloque el microscopio delante suyo y acomode su asiento de tal manera que pueda observar con facilidad. Prenda el foco del microscopio. 2. Colocar el objetivo de menor aumento en posicin de empleo y bajar la platina completamente. Si el microscopio se recogi correctamente en el uso anterior, ya debera estar en esas condiciones. 3. Colocar la preparacin sobre la platina sujetndola con las pinzas metlicas. 4. Comenzar la observacin con el objetivo de 5x (ya est en posicin).
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PARA REALIZAR EL ENFOQUE DE LA MUESTRA a. Acercar al mximo la lente del objetivo a la preparacin, empleando el tornillo macromtrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a travs del ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparacin pudindose daar alguno de ellos o ambos. b. Mirando, ahora s, a travs de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la preparacin con el macromtrico y, cuando se observe algo ntida la muestra, girar el micromtrico hasta obtener un enfoque fino. c. Pasar al siguiente objetivo. Para cambiar de objetivo, gire
cuidadosamente el revlver hasta escuchar un click que indica un tope. De esta forma usted pasar desde el objetivo de 5 al de 10 X y luego al de 40X. ES PROBABLE QUE AL OBSERVAR LA MUESTRA LUEGO DEL CAMBIO DE OBJETIVO SE NOTE ALGO BORROSO. PARA CORREGIR SOLAMENTE DEBE MOVER EL TORNILLO MICROMTRICO, NO DEBE MOVER EL TORNILLO MACROMTRICO, SI LO HACE DESENFOCAR LA MUESTRA Y DEBER EMPEZAR DE NUEVO DESDE EL PASO 5 DE ENFOQUE DE LA MUESTRA. B. PREPARACION Y OBSERVACIN DE LAS MUESTRAS.1. Corte una letra e minscula de la hoja de peridico o revista, dejndole un pequeo marco alrededor. 2. Coloque el pedacito de papel en la parte media del portaobjeto. La letra debe estar siempre derecha. 3. Agregue una gota de agua sobre la muestra. 4. Cubra la muestra con una laminilla cubreobjetos evitando que se formen burbujas .Para esto en un primer momento, la laminilla debe ser colocada en uno de los extremos del preparado con una inclinacin en un ngulo de 45 grados. Luego se deja caer suavemente la laminilla sobre la muestra, de
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esta forma se evita la formacin de burbujas que evita la correcta visualizacin de la muestra .Si la laminilla quedara chueca enderezarla delicadamente con ayuda de la pinza. 5. Quitar el excedente de agua tanto en la parte superior como de la base de la laminilla con ayuda de un pedazo de papel higinico. 6. En otra lmina coloque una hebra muy delgada de lana o hilo de color y deje caer una gota agua sobre ella. Cbralo con la laminilla como hiciera con la letra e. NO SE DEBE COLOCAR UN PEDAZO DE LANA GRUESA PORQUE ESTO IMPEDIRA EL PASO DE LUZ Y NO PODRA VISUALIZAR LA MUESTRA. 7. Trabaje con las muestras que haya trado siguiendo el mismo procedimiento. C. CUIDADOS DEL MICROSCOPIO AL TERMINAR DE TRABAJAR 1. Luego de que ha realizado sus observaciones y hecho sus esquemas, saque la lmina de la platina y con un pedazo de papel higinico limpie dicha platina. 2. Gire el revlver y colquelo en el objetivo de menor aumento. 3. Apague la lmpara de iluminacin. 4. desenchufe el microscopio y enrolle el cable alrededor de l. CUESTIONARIO 1- Hacer un esquema del recorrido de la luz a travs de un microscopio ptico compuesto. 2- Mencione las caractersticas de un microscopio compuesto. 3- Defina: imagen virtual, imagen real, lmite de resolucin, lente convergente, poder de resolucin. 4- Cul es la importancia que tiene el diafragma en el microscopio? 5- Importancia del microscopio en la actualidad.
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PRCTICA 3: RECONOCIMIENTO DE GLCIDOS
I.
COMPETENCIAS: Identifica la presencia de carbohidratos en diferentes insumos alimenticios.
II.
MATERIALES Soluciones diluidas (5 gr. en 100 ml.) de glucosa, almidn. Muestras de tubrculos, semillas, jugos, etc.
Reactivo de Benedict Reactivo de Lugol (solucin iodada). Gradilla con tubos de ensayo, pinzas sujetatubos, pipetas,
Beaker y mechero de alcohol.
III.
FUNDAMENTO TERICO
Los carbohidratos o hidratos de carbono glcidos constituyen compuestos qumicos formados principalmente por carbono, hidrgeno y oxgeno, elementos que se conjugan para formar diversos tipos, en una proporcin generalmente de 1:2:1, respectivamente. Qumicamente se definen como polialcoholes con un grupo aldehdo o cetona. Estas biomolculas ejercen funciones fundamentales en los seres vivos, como: soporte (celulosa), reserva de alimento (almidn), reserva energtica (glucgeno), energa inmediata (glucosa). Pueden clasificarse atendiendo a varios criterios: de acuerdo al nmero de monmeros que constituyen al carbohidrato, al nmero de carbonos de sus monmeros, segn el grupo funcional que posee ese monmero. Responden a la frmula general (CH2O)n. Con n entre 3 y 7.
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RECONOCIMIENTO DE AZCARES REDUCTORES REACTIVO DE BENEDICT Los monosacridos tienen poder reductor debido a los radicales aldehdo o cetona de sus molculas. Los disacridos con enlace glucosdico entre un radical reductor y un grupo alcohol tambin tienen poder reductor. Si el enlace se realiza entre los dos radicales reductores (carbonos carbonlicos), no tienen poder reductor. Este poder reductor puede ponerse de manifiesto frente a sales de cobre, ya que el in cprico se reduce por ganancia de un electrn, pasando a in cuproso en un medio alcalino: Cu++ + radical reductor -----> Cu+ + radical oxidado (Cprico) (Cuproso)
Esta reaccin es especfica para azcares con grupo reductores libres (C=O). Todos los monosacridos poseen un grupo reductor libre. Los disacridos maltosa y lactosa tienen grupos reductores libres, pero la sacarosa no los posee, ya que se pierden los grupos reductores de sus componentes cuando sta es formada. La accin reductora se manifiesta mediante una solucin de sulfato cprico (SO4Cu) de color azul, que pasa a xido cuproso (Cu2O) de color rojo ladrillo que precipita. El reactivo utilizado es el de Benedict o el de Fehling, que contienen sulfato cprico. Una turbidez verde-amarillenta en los resultados indica un 0,1-0,3% de azcar reductor. Un precipitado de color mbar anaranjado, indica ms de un 1,5% de azcar reductor. La coloracin depender de la concentracin de xido de cobre y sta a su vez de la reduccin del cobre; va desde verde, amarillo, anaranjado o rojizo.
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RECONOCIMIENTO DE POLISACRIDOS REACTIVO DE LUGOL El Lugol (solucin de yodo-yodurado) colorea las micelas de almidn de color azul intenso casi negro. El almidn es una mezcla (en diferentes proporciones segn las especies) de los polisacridos amilosa (10-20%) y amilopectina (80-90%). El almidn es coloreado de azul en presencia de Lugol, debido a una adsorcin o fijacin del I-3 sobre las unidades de glucosa de la amilosa, y ayuda a mantener su estructura. Al calentar hasta ebullicin, desaparece la estructura ternaria (incoloro) y reaparece al enfriar (azul-violeta). IV. A. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL Preparacin de las muestras 1. Se preparan soluciones con las diferentes muestras de alimentos
raspando o triturando un trocito de tubrculo o semillas, adicionando aproximadamente 5 ml de agua destilada. 2. En el caso de jugos diluir previamente la muestra: Medir 0,5 mL de jugo y agregar 5 ml de agua destilada. Reservar en frascos rotulados.
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3. En el laboratorio se tendrn muestras controles de soluciones de almidn, glucosa, etc. B. Identificacin cualitativa de azcares reductores con el reactivo de Benedict 1. Se preparan una serie de tubos de ensayo con 2 ml. de las soluciones preparadas en A rotulando cada tubo. 2. Preparar un tubo control con 2 ml de la solucin de glucosa. 3. Agregar a cada tubo 0,5 ml de reactivo de Benedict. 4. Llevar todos los tubos a bao Mara hirviente por 3 minutos. Observar si se producen variaciones de coloracin e
interpretar los resultados. Concluye acerca de la existencia de azcares reductores en la solucin problema. C. Identificacin cualitativa de almidn con el reactivo de Lugol 1. Se preparan una serie de tubos de ensayo con 2 ml. de las soluciones preparadas en A rotulando cada tubo. 2. Preparar un tubo control con 2 ml de la solucin de almidn. 3. Agregar a cada tubo 5 gotas de reactivo de Lugol. 4. Observar e interpretar D. Resultados: 1. Llenar la siguiente tabla en donde se colocar positivo (+) si hay cambio de coloracin, formacin de precipitado, etc. o negativo (-) si la muestra no cambia con la adicin del reactivo de identificacin los resultados. Concluye acerca de la
existencia de almidn en la solucin problema.
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Muestra
Reactivo Lugol
Reactivo de Benedict
E.
Anlisis de resultados: 1- Por cada muestra se indicar por separado si existe almidn azcares reductores o si hay una mezcla de ambas.
V.
CUESTIONARIO
1. Qu otros reactivos qumicos se utilizan para la identificacin de carbohidratos? 2. Ejemplos de carbohidratos reductores y no reductores. 3. Esquematice la estructura qumica del almidn, de la glucosa, de la sacarosa, de la lactosa. 4. Por qu se considera reductor un azcar? 5. Escriba la reaccin de cada una de las pruebas realizadas en la prctica.
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6. Qu ocurre si la disolucin de sacarosa es tratada previamente con cido clorhdrico? Explica tu respuesta. 7. A qu se debe que el almidn con Lugol pierda el color al calentar, y que vuelva a recuperar su color azul-violeta despus de enfriarse?
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PRCTICA 4: RECONOCIMIENTO DE LPIDOS
I.
COMPETENCIAS: Identifica cualitativamente la presencia de lpidos en muestras de alimentos.
II.
MATERIALES Mechero. Trpode Rejilla de asbesto Gradillas con tubos de ensayo Vaso de precipitado Solucin de detergente Aceite vegetal Solucin de Sudn III en frasco cuentagotas Solucin de Hidrxido sdico al 20%. ter Cloroformo. Bencina Alcohol Acetona
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III.
FUNDAMENTO TERICO
Los lpidos son un conjunto de molculas orgnicas, la mayora biomolculas, compuestas principalmente por carbono e hidrgeno y en menor medida oxgeno, aunque tambin pueden contener fsforo, azufre y nitrgeno, que tienen como caracterstica principal el ser hidrofbicas o insolubles en aguay s en disolventes orgnicos como la bencina, el alcohol, el benceno y el cloroformo.
En trminos generales llamamos aceites a los triglicridos de origen vegetal, y corresponden a derivados que contienen cidos grasos insaturados
predominantemente por lo que son lquidos a temperatura ambiente. (aceites vegetales de cocina, y en los pescados. Los lpidos desempean diferentes tipos de funciones biolgicas: Funcin de reserva energtica . Los triglicridos son la principal reserva de energa de los animales ya que un gramo de grasa produce 9 kilocaloras en las reacciones metablicas de oxidacin, mientras que las protenas y los glcidos slo producen 4 kilocaloras por gramo. Funcin estructural. Los fosfolpidos, los glucolpidos y el colesterol forman las bicapas lipdicas de las membranas celulares. Los triglicridos del tejido adiposo recubren y proporcionan consistencia a los rganos mecnicamente estructuras o son aislantes trmicos. Funcin reguladora, hormonal o de comunicacin celular . Las vitaminas liposolubles son de naturaleza lipdica (terpenos, esteroides); las hormonas
y protegen
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esteroides regulan el metabolismo y las funciones de reproduccin; los glucolpidos actan como receptores de membrana; los eicosanoides poseen un papel destacado en la comunicacin celular, inflamacin, respuesta inmune, etc. Funcin transportadora . El transporte de lpidos desde el intestino hasta su lugar de destino se realiza mediante su emulsin gracias a los cidos biliares y a las lipoprotenas. La caracterstica comn a todos los lpidos es que son insolubles en agua y solubles en disolventes orgnicos como la gasolina, benceno, xilol, cloroformo. Las grasas son insolubles en agua. Cuando se mezcla agua y aceite y se agita fuertemente la mezcla, se forma una emulsin transitoria. Esto significa que si se deja la mezcla reposar unos instantes, las gotas de aceite, de menor densidad, suben y se unen entre s, formndose dos capas, la superior de aceite y la inferior de agua. Si a esta mezcla se la aade una solucin de jabn o detergente y se agita, se produce entonces una emulsin permanente. Esto es debido a que el jabn rodea a las gotas de aceite quedando su parte hidrofbica (cola del cido graso) en contacto con el aceite y su zona polar (COO Na+) en contacto con el agua. Esto es lo que da a los jabones en general, sus cualidades como agentes de limpieza y es una propiedad muy utilizada en la fabricacin de cosmticos que tienen en su composicin agua y aceites, consiguindose un producto homogneo (se evita la formacin de dos fases) IV. PARTE EXPERIMENTAL
1- PRUEBA DE SOLUBILIDAD OBJETIVO: Comprobar la solubilidad de las grasas y los aceites en diferentes solventes.
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PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL 1. Colocar aproximadamente 2ml de aceite en 4 tubos de ensayo previamente rotulados. 2. Aadir a uno de ellos 2ml de agua, al otro 2ml de bencina, al otro 2 mL de cloroformo y 2 ml de alcohol al ltimo tubo. 3. Agitar fuertemente ambos tubos y dejar reposar. 4. Observar los resultados. 5. Colocar soluble, poco soluble, insoluble de acuerdo a sus resultados en la siguiente tabla:
bencina Aceite
agua
cloroformo
alcohol
2- TINCIN CON SUDN III OBJETIVO: Reconocer Lpidos con la Coloracin de Sudan III. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL 1. Poner 2 ml. de aceite en un tubo, aadir 2 ml. de agua y dejar reposar. Una vez formadas las dos fases, dejar caer unas gotas de Sudn III y agitar. Dejar reposar el tubo y anotar los resultados. Las grasas se colorean en rojo anaranjado por el colorante denominado Sudan III.
Se observar en el tubo al que se le aadi Sudn, que todo el aceite aparece teido.
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3- SAPONIFICACIN OBJETIVO: Comprobar cmo los lpidos saponificables forman jabn. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
1. Colocar en un tubo de ensayo 2ml de aceite y 2ml de NaOH al 20%. 2. Agitar enrgicamente y colocar el tubo al bao Mara de 20 a 30 minutos. 3. Pasado este tiempo, se pueden observar en el tubo 3 fases: una inferior clara que contiene la solucin de sosa sobrante junto con la glicerina formada, otra intermedia semislida que es el jabn formado y una superior lipdica de aceite inalterado. 4. Dibuja el tubo de ensayo indicando lo que contiene cada una de las fases que observas.
4- FORMACIN DE EMULSIN ESTABLE OBJETIVO: Simular la accin de la Bilis durante la emulsin. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL 1. En 2 tubos de prueba secos colocar en cada uno de ellos ,2 ml de aceite ms 2 ml de agua. 2. Se mezcla y luego de unos minutos se le agrega 0,5 ml de detergente (que simula la accin de la Bilis) slo a uno de los tubos y nuevamente. 3. Observar los resultados. Dibuja los tubos e indica en cul se forma una emulsin transitoria y en cul una emulsin permanente. se mezcla
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V.
CUESTIONARIO
1. Qu son los jabones? 2. Qu enzima logra en el aparato digestivo la hidrlisis de las grasas? 3. Qu es el Sudan III? 4. Qu es una emulsin? 5. Qu son las sales biliares y cules son sus funciones?
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PRCTICA 5: RECONOCIMIENTO DE PROTENAS
I.
COMPETENCIAS: Identifica la presencia de protenas en diferentes insumos alimentarios
II.
MATERIALES Mechero. Trpode Rejilla de asbesto Gradillas con tubos de ensayo Vaso de precipitado Pipetas Clara de huevo o leche Pizeta con agua destilada HCl concentrado Alcohol etlico Reactivo de Biuret (Solucin de SO4Cu al 1% /NaOH al 20%) Solucin de albmina al 1-2% Solucin de Hidrxido sdico al 20%.
III.
FUNDAMENTO TERICO
Las protenas son macromolculas compuestas por carbono, hidrgeno, oxgeno y nitrgeno. La mayora tambin contienen azufre y fsforo. Las mismas estn formadas por la unin de varios aminocidos, unidos mediante enlaces peptdicos. El orden y disposicin de los aminocidos en una protena depende del cdigo gentico, ADN, de la persona. Las protenas constituyen alrededor del 50% del peso seco de los tejidos y no existe proceso biolgico alguno que no dependa de la participacin de este tipo de sustancias.
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Las protenas desempean un papel fundamental para la vida y son las biomolculas ms verstiles y ms diversas. Son imprescindibles para el
crecimiento del organismo. Realizan una enorme cantidad de funciones diferentes, entre las que destacan: Estructural (colgeno y queratina Reguladora (insulina y hormona del crecimiento) Transportadora (hemoglobina) Defensiva (anticuerpos), Enzimtica (sacarasa y pepsina) Contrctil (actina y miosina) Son esenciales para el crecimiento. Las grasas y carbohidratos no las pueden sustituir, por no contener nitrgeno. Proporcionan los aminocidos esenciales fundamentales para la sntesis tisular. Son materia prima para la formacin de los jugos digestivos, hormonas, protenas plasmticas, hemoglobina, vitaminas y enzimas. Funcionan como amortiguadores, ayudando a mantener la reaccin de diversos medios como el plasma. Las protenas estn formadas por aminocidos. Las protenas de todo ser vivo estn determinadas mayoritariamente por su gentica (con excepcin de algunos pptidos antimicrobianos de sntesis no ribosomal), es decir, la informacin gentica determina en gran medida qu protenas tiene una clula, un tejido y un organismo.
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COAGULACIN DE LAS PROTENAS
Las protenas, debido al gran tamao de sus molculas, forman con el agua soluciones coloidales. Estas soluciones pueden precipitar con formacin de cogulos al ser calentadas a temperaturas superiores a los 70C o al ser tratadas con soluciones salinas, cidos, alcohol, etc. La coagulacin de las protenas es un proceso irreversible y se debe a su desnaturalizacin por los agentes indicados, que al actuar sobre la protena la desordenan por la destruccin de su estructura secundaria, terciaria y cuaternaria. REACCIN DE BIURET Esta reaccin la producen los pptidos y las protenas, pero no los
aminocidos ya que se debe a la presencia del enlace peptdico CO-NH que se destruye al liberarse los
C HN
C NH HC Cu
2+
R O
CH C
R O
aminocidos. El reactivo de Biuret contiene CuSO4 en solucin acuosa alcalina (gracias a la presencia de NaOH o KOH). La reaccin se basa en la formacin de un compuesto de color violeta, debido a la
HN R CH
NH HC R
formacin de un complejo de coordinacin entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrgeno que forma parte de los enlaces peptdicos. La intensidad de color depende de la concentracin de protenas.
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IV.
PARTE EXPERIMENTAL
REACCIN DE BIURET 1. En 2 tubos de ensayo colocar en uno 2 ml de clara de huevo diluida con agua y en el otro tubo 2 ml leche diluida con agua. 2. Agregar 1 ml del reactivo de Biuret a cada tubo. 3. Observar los resultados. COAGULACIN DE PROTEINAS 1. Colocar en tres tubos de ensayo una pequea cantidad de clara de huevo (puede diluirse en un poco de agua para obtener una mezcla espesa) o 2-3ml de leche. 2. Calentar uno de los tubos al bao Mara, aadir a otro 2-3ml de HCl concentrado y al tercero 2 o 3ml de alcohol etlico. 3. Observar los resultados. V. CUESTIONARIO
1. Cmo se manifiesta la desnaturalizacin de la clara de huevo? 2. Cul de los agentes utilizados tiene mayor poder de desnaturalizacin? 3. Cmo podramos saber que una sustancia desconocida es una protena? 4. Qu coloracin da la reaccin del Biuret? 5. Una protena coagulada podra dar la reaccin del Biuret? 6. Si se realiza la reaccin del Biuret sobre un aminocido como la Glicina es positiva o negativa? Por qu?
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PRCTICA 6: ACTIVIDAD ENZIMTICA
I.
COMPETENCIAS: Al finalizar esta prctica el alumno: Pondr de manifiesto la presencia de la enzima catalasa en tejidos animales y vegetales. Comprobar la accin de la temperatura sobre la actividad de las enzimas. Comprobar la accin hidroltica de la amilasa. Realiza experimentalmente la hidrlisis del almidn por accin de la amilasa salival. Identifica cualitativamente la presencia de sustrato y producto. Evala el efecto del pH en la accin de la enzima.
II.
MATERIALES: Gradillas Tubos de ensayo
Mechero Pipetas
Bao Mara Trocitos de hgado Trocitos de papa
Arena fina
Agua oxigenada
Beaker pequeo para colectar saliva Solucin de almidn al 1%
HCl Reactivo Lugol

Reactivo de Benedict
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III.
FUNDAMENTO TERICO
Las enzimas son molculas de naturaleza proteica que catalizan reacciones qumicas, siempre que sea termodinmicamente posible .En estas reacciones, las enzimas actan sobre unas molculas denominadas sustratos, las cuales se convierten en molculas diferentes denominadas productos. Casi todos los procesos en las clulas necesitan enzimas para que ocurran a unas tasas significativas. A las reacciones mediadas por enzimas se las denomina reacciones enzimticas. Como todos los catalizadores, las enzimas funcionan disminuyendo la energa de activacin (G) de una reaccin, de forma que se acelera sustancialmente la tasa de reaccin. Las enzimas son generalmente protenas globulares sintetizadas por las propias clulas. Las actividades de las enzimas vienen determinadas por su estructura
tridimensional, la cual viene a su vez determinada por la secuencia de aminocidos. Casi todas las enzimas son mucho ms grandes que los sustratos sobre los que actan, y solo una pequea parte de la enzima (alrededor de 3 a 4 aminocidos) est directamente involucrada en la catlisis. La regin que contiene estos residuos encargados de catalizar la reaccin es denominada centro activo. La mayora de las enzimas, al igual que el resto de las protenas, pueden ser desnaturalizadas si se ven sometidas a agentes desnaturalizantes como el calor y los pHs extremos. Estos agentes destruyen la estructura terciaria de las protenas de forma reversible o irreversible, dependiendo de la enzima y de la condicin.
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IV.
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL A Para todas las pruebas, la velocidad de reaccin (desprendimiento de burbujas), se registrar como sigue: 0 = No reacciona 1 = Lenta 2 = Moderada 3 = Rpida 4 = Muy rpida 1. Reconocimiento de la catalasa:
Como se mencion anteriormente la catalasa es una enzima que se encuentra en las clulas de los tejidos animales y vegetales.
La funcin de esta enzima en los tejidos es necesaria porque durante el metabolismo celular, se forma una molcula txica que es el perxido de hidrgeno, H 2O2 (agua oxigenada). Esta enzima, la catalasa, lo descompone en agua y oxgeno, por lo que se soluciona el problema. La reaccin de la catalasa sobre el H2O2, es la siguiente:
La existencia de catalasa en los tejidos animales, se aprovecha para utilizar el agua oxigenada como desinfectante cuando se echa sobre una herida. Como muchas de las bacterias patgenas son anaerobias (no pueden vivir con oxgeno), mueren con
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el desprendimiento de oxgeno que se produce cuando la catalasa de los tejidos acta sobre el agua oxigenada. Desarrollo: Rotular tres tubos de ensayo con las letras A, B y C. Colocar en el tubo A un pedazo de hgado del tamao de un frijol, en el tubo B un pedazo similar de papa y en el tubo C arena. Aadir 3 mililitros de agua oxigenada a cada tubo. Se observa un intenso burbujeo debido al desprendimiento de oxgeno (anote la velocidad de reaccin segn lo indicado
anteriormente). 2. Reutilizacin de la enzima: Rotule dos tubos con las letras D y E. Sacar 2 ml del sobrenadante del tubo A. Verter 1 ml de dicho sobrenadante en D y 1ml en E. Aadir al tubo D un pedazo de hgado fresco y al tubo E 1ml de agua oxigenada. Anote sus observaciones. 3. Efecto del tamao de las partculas: Rotule dos tubos con las letras F y G. Triturar un pedazo de hgado y colocarlo en el tubo F. Triturar un pedazo de papa y colocarlo en el tubo G. Aadir 2 ml de agua oxigenada a cada tubo. Observar la velocidad de reaccin y anote sus resultados. 4. Desnaturalizacin de la catalasa: Mediante esta experiencia, vamos a ver una propiedad fundamental de protenas, que es la desnaturalizacin.
Ya que la catalasa qumicamente es una protena, podemos desnaturalizarla al someterla a altas temperaturas. Al perder la estructura terciaria, pierde tambin la funcin y como consecuencia su funcin cataltica, por lo que no podremos
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descomponer el agua oxigenada y no se observaremos ningn tipo de reaccin cuando hagamos la experiencia anterior con muestras de tejidos hervidos. 1. Colocar en un tubo de ensayo un trocito de hgado entero. 2. Poner el tubo en un beaker con agua hirviendo durante cinco minutos. 3. Despus de este tiempo, retirar el tubo. 4. Aadir 2 ml de agua oxigenada. 5. Observar el resultado. 6. Repetir lo mismo con la papa cruda. HIDRLISIS DEL ALMIDN POR ACCIN DE LA AMILASA El almidn es un polisacrido homogneo, formado por molcula de unidas mediante enlaces glucosdicos. Constituye la principal glucosa de
forma
almacenamiento de sustancias de reserva de los vegetales y de algunas bacterias bajo la forma de grnulos. Estructuralmente el almidn se encuentra bajo 2 formas: la - amilosa (cadena
lineal) y la amilopectina (cadena ramificada). Mediante esta experiencia, vamos a ver la actividad de la enzima amilasa, presente en la saliva. Esta enzima acta sobre el almidn, hidrolizando el enlace -glucosdico, obtenindose azcares
reductores como producto de la accin de la enzima. Se ver como el pH cido afecta la accin de la enzima. V. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL B
COLECCIN DE SALIVA Antes de la coleccin se proceder a un enjuague simple de la cavidad oral con agua; luego manteniendo la boca cerrada esperar entre 5 a 7 minutos evitando hablar y pasar saliva. La coleccin se realizar en un recipiente de boca ancha (beaker) dejando caer por gravedad la saliva, evitando as la formacin de espuma.
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DILUCIN DE LA SALIVA En un tubo de ensayo colocar 1 ml de saliva y agregar 4 ml de agua destilada. Mezclar por inversin .Se obtiene as la saliva diluida.
TUBOS DE DIGESTION ml de almidn al 1% ml de agua ml HCl 0.5 N ml saliva diluida
1 2.0 1,0 1.0
2 2.0 1,0 1.0
Incubar en bao Mara de 37 C por 10 minutos .Luego retirar del bao Mara y agitando previamente los tubos de la digestin preparar las siguientes bateras: REACCIN DE LUGOL TUBOS Digerido 1 ml Digerido 2 HCl 0.5 N Lugol ml ml ml 1 1.0 0.5 2.0 2 1.0 0.5 2.0
Mezclar y observar los resultados:
REACCIN DE BENEDICT:
TUBOS Digerido 1 Digerido 2 ml ml
1 0.5 0.5
2 0.5 0.5
Reactivo de Benedict ml
Colocar en bao de agua hirviente (100 C) por 5 minutos, observe los resultados.
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VI.
CUESTIONARIO a. Qu sucede cuando se pone perxido de hidrgeno en una herida? Qu sugiere la evidencia? b. Explique por qu tantas especies producen la enzima catalasa. c. Mencione ejemplos de cosas en nuestro diario vivir que envuelven algn uso de enzima. d. Cules son los productos finales de la digestin del almidn por la amilasa? e. Qu funcin cumple el HCl 0,5 N en el tubo 3 de digestin?
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PRCTICA 7: AISLAMIENTO DE CIDOS NUCLEICOS I. COMPETENCIAS Utiliza tcnicas de extraccin de ncleos de los tejidos Emplea tcnica de extraccin del ADN Reconoce las fibras de ADN extradas II. MATERIALES SDS al 20% detergente lquido. NaCl 2M Agua destilada Colorante Wright Baguetas Embudos Morteros c/ piln Hoja de bistur Guantes Lmina y laminilla por Alumno Hgado de pollo con sus dos lbulos. al que se ha quitado previamente todo el tejido conjuntivo 150 gr. de fresa(6 fresas) 2 vasos de Beaker medianos :100 mL 1 paquete pequeo de gasa Jugo fresco colado de pia recin hecho ( 50 mL) 2 frascos de 100 ml. alcohol etlico Helado
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ATENCIN el alcohol debe ser colocado en el frzer desde el da anterior y tiene que ser de 96 si Ud. tuvieran un recipiente hermtico colocarlo para que se
conserve bien frio hasta la hora de la prctica. III. FUNDAMENTO TERICO
La informacin necesaria para la construccin de los seres vivos se encuentra almacenada en los cidos nucleicos. Su nombre deriva de su carcter cido y del hecho de que fueron descubiertos en el ncleo de las clulas eucariontes. Existen dos variedades qumicas de cidos nucleicos: el DNA (cido desoxirribonucleico) y el RNA (cido ribonucleico). Generalmente, la informacin gentica se almacena en forma de cromosomas de DNA y se expresa en forma de mRNA (RNA mensajero).
Las clulas eucariotas presentan un contenido en DNA mucho mayor que las clulas procariotas. Las molculas de DNA en eucariotas se combinan con protenas y se organizan en fibras de cromatina, la cual est totalmente condensada con el fin de ocupar el mnimo volumen posible en el interior del ncleo de la clula. Las principales funciones del DNA son: - Almacenar la informacin gentica completa, necesaria para determinar la estructura de todas las protenas y RNAs de cada especie. - Programar en el tiempo y espacio ordenadamente la biosntesis de las clulas y los componentes de los tejidos. - Determinar las actividades de un organismo a travs de su ciclo de vida. - Determinar la individualidad de un organismo dado. Los RNAs, aun siendo mucho ms cortos que los DNAs, son mucho ms abundantes en la mayora de las clulas. Tanto en clulas eucariotas como procariotas las tres clases mayoritarias de RNAs son: mensajero (mRNA),
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ribosomal (rRNA) y transferente (tRNA). Cada uno consta de una cadena simple de ribonucletidos con un determinado peso molecular, secuencia de nucletidos y funcin biolgica. La cantidad y pureza de los cidos nucleicos en una preparacin puede estimarse mediante espectrofotometra. La absorcin a 260 nm permite calcular su concentracin: 1 unidad de absorbancia (UA) corresponde aproximadamente a 50 g/mL para DNA de cadena doble y 40 g/mL para DNA de cadena simple y RNA. El cociente A260/A280 da una estimacin de la pureza de los cidos nucleicos: una preparacin pura de DNA y RNA tiene un valor de A260/A280 de 1,8 y 2,0 respectivamente. Valores significativamente menores indican contaminacin con protenas o fenol, y, por consiguiente, no ser posible cuantificar con precisin la cantidad de cidos nucleicos. El objetivo de esta prctica es aislar cidos nucleicos (fundamentalmente DNA) a partir de un tejido animal: Hgado de pollo y tejido vegetal: Fresa UTILIDAD DE LA PURIFICACIN DE CIDOS NUCLEICOS La importancia del proceso de obtencin y purificacin del material gentico es recobrar el producto mximo de ADN de alto peso molecular libre de protenas, fenol e inhibidores de las enzimas de restriccin. El ADN de alta calidad es un prerrequisito para su uso en tcnicas de Biologa molecular como impresiones digitales de ADN o Fingerprinting (utilizando secuencias altamente repetitivas denominadas mini satlites que permite la identificacin gentica de las personas) y PCR (para la identificacin de las secuencias especficas de ADN mediante el usos de cebadores). IV. PROCEDIMIENTO
EXTRACCIN DE ADN: TEJIDO ANIMAL VEGETAL 1. Triturar el hgado de pollo la fresa en un mortero. 2. Aadir al triturado, 50 ml. de agua destilada y con una cuchara, mover y presionar hasta que se torne homognea.
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3. Filtrar, mediante una gasa, hasta verificar la separacin de los restos de tejido. 4. El filtrado trasvasarlo a un Beaker mediano y aadir un volumen similar de NaCl 2M, mezclar. Agregar 5 ml. de Lauril sulfato de sodio (SDS) detergente lquido y mezclar bien agitando suavemente por 10 minutos. 5. Aadir 2 mL de jugo de pia fresco y agitar suavemente para no romper el ADN. 6. Aadir suavemente, por la paredes del vaso, alcohol etlico de 96 (preferencia fro), verificando que se formen 2 fases. En la interfase precipita el ADN. 7. Introducir una bagueta o varilla de vidrio y mover en una misma direccin para que las hebras de ADN se vayan enrollando y adhiriendo a la bagueta. 8. COLORACION: Tomar una muestra del ADN enrollado en la bagueta y extender sobre una lmina, dejar secar bien y agregar el colorante Wright, dejar por 5 minutos. Lavar y dejar secar, observar al microscopio con los objetivos de 10 y 40X. V. CUESTIONARIO
1. Explique los paso para realizar la extraccin de ADN 2. Qu funcin cumplen cada uno de los reactivos utilizados en la extraccin de ADN? 3. Qu utilidad tiene la extraccin de ADN en el laboratorio? 4. Qu importancia tiene la extraccin del ADN en salud?
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PRCTICA 8: CLULA PROCARIOTA-TCNICA DE COLORACIN BACTERIANA TINCIN DE PARED CELULAR I. COMPETENCIA Conoce las diversas tcnicas de tincin y el fundamento de las mismas.
II.
MATERIALES Asa de siembra Microscopio Porta objetos Aceite de inmersin Pizeta con agua destilada Solucin salina Mechero Bunsen Batera para tincin Gram Mondadientes Guantes Gorro Mascarilla
III.
FUNDAMENTO TERICO PARED CELULAR Debajo de las sustancias extracelulares tales como las cpsulas o capas mucosas y externas a la membrana citoplasmtica est la pared celular que es una estructura muy rgida y que da forma a la clula. Las
paredes celulares bacterianas son esenciales para el crecimiento y la divisin. Todas las bacterias poseen paredes celulares rgidas que protegen a la clula de explotar en medios de baja presin osmtica. Composicin qumica de las paredes celulares .El pptidoglucano
proporciona a la pared celular una estructura rgida. Estos grandes polmeros, estn compuestos de tres clases de bloques estructurales: N-
Acetil-Glucosamina, cido N- Acetil-Murmico y un pptido que consta de cuatro o cinco aminocidos. Adems contiene protenas con polisacridos, lipoprotenas y lipopolisacridos.
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Propiedades y Funciones: Brinda proteccin y resistencia a la bacteria frente a los posibles cambios de presin osmtica del medio en el que se encuentra y a la accin de ciertos agentes externos. Presenta Poros que actan como filtros, permitiendo el pasaje de agua y metabolitos esenciales. Presenta antgenos de tipo y grupo especficos. Participa en la divisin (multiplicacin) bacteriana (se invagina junto con la membrana plasmtica). En las bacterias Gram .negativas tiene poder patgeno debido a que presenta endotoxinas (Lpido A).
MTODO DE TINCIN DE GRAM A pesar de que fue desarrollada en el siglo XIX la tincin de Gram es la ms utilizada en el diagnstico microbiolgico. La tincin de Gram es una tincin diferencial que permite distinguir dos grandes grupos bacterianos: las Gram (+) y las Gram (-). Tincin empleada en microbiologa para la visualizacin de bacterias en muestras clnicas. Tambin se emplea como primer paso en la diferenciacin bacteriana. El examen con microscopio ptico de preparacin con tincin de Gram se emplea de rutina para determinar la forma de las bacterias. Las formas comunes son cocos (esfricas), bacilos (alargadas) y formas espiraladas Las bacterias pueden
diferenciarse con esta tincin en dos grupos. Los microorganismos Grampositivos se tien de azul, mientras que aproximadamente un tercio de los cocos, la mitad de los bacilos y todos los organismos espira lados se tien de rojo y se dice que son Gramnegativos. El valor diagnstico de esta tincin es variable; normalmente permite una buena orientacin al microbilogo para seleccionar las tcnicas de cultivo ms adecuadas
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y tambin tiene valor en orientar hacia un diagnstico etiolgico, en especial para instaurar un tratamiento inicial. La tincin de Gram requiere cuatro soluciones: Primer colorante: El cristal violeta es un colorante bsico que en contacto con las clulas bacterianas cargadas negativamente, reaccionan con ellas colorendolas. Solucin mordiente: El Lugol que fija las tinciones y aumenta la afinidad entre el colorante y las clulas. El ingrediente activo de este compuesto es el I2; El KI simplemente hace soluble el I2 en el agua. El I2entra en las clulas y forma un complejo insoluble en agua con el cristal violeta. Hasta este momento las clulas Gram (+) como Gram (-) se encuentran teidas de color violeta. Agente decolorante: El alcohol acetona es un solvente orgnico que disuelve la membrana externa de las Gram (-) facilitando la salida del complejo colorante-mordiente. Debemos tomar en cuenta la delgada capa de murena incapaz de retener este complejo en las Gram (-). Luego de este tratamiento las bacterias Gram (+) mantienen el color violeta y las Gram (-) quedan decoloradas. Colorante de contraste: Es un colorante bsico de distinto color que el primer colorante, como la safranina ola fucsina bsica
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Los dos grupos bacterianos que distingue esta tcnica difieren en el color con el que finalmente aparecen. Las bacterias Gram (+) se tien de azul-violeta por el cristal violeta y no perdern esta coloracin durante los pasos sucesivos. Las bacterias Gram (-) perdern la coloracin inicial del cristal violeta en los siguientes pasos y se teirn de rosa debido al colorante de contraste. La diferencia est determinada por la composicin de su pared celular. Las bacterias Gram (+) poseen una gruesa malla de pptidoglucano en su parte ms externa, mientras que, las Gram (-), recubriendo una capa fina de pptidoglucano, presentan una membrana lipdica externa que envuelve toda la clula.
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PROCEDIMIENTO
REALIZACIN DEL FROTIS
1. Colocar una pequea gota de agua en el centro de un portaobjetos limpio. Es necesaria muy poca cantidad de agua, por lo que se puede usar el asa de siembra, ya que en el extremo curvo de su filamento queda retenida una mnima gota de agua, que resulta suficiente. 2. Flamear el asa de siembra, tomar, en condiciones aspticas, una pequea cantidad del cultivo bacteriano en medio slido y transferirlo a la gota de agua. Remover la mezcla con el asa de siembra hasta formar una suspensin homognea que quede bastante extendida para facilitar su secado. Si la muestra se toma de un cultivo en medio lquido, no es necesario realizar los dos primeros pasos ya que basta con colocar y extender una gota de la suspensin bacteriana, que se toma con el asa de siembra, directamente sobre el portaobjetos. 3. Esperar hasta que el lquido se evapore o acelerar su evaporacin acercando el portaobjeto a la llama del mechero. En este caso hay que tener mucha precaucin de no calentar demasiado el porta pues las clulas pueden deformarse o romperse. A) TINCIN DE GRAM 1. Realiza la preparacin del frotis bacteriano como se explic en el paso anterior 2. Teir con cristal violeta 1min. 3. Lavar con abundante agua el exceso de colorante. 4. Cubrir con Lugol 1min. 5. Lavar con agua el exceso de Lugol. 6. Decolorar con alcohol-acetona o simplemente con alcohol hasta que la preparacin deje de perder color (30 ) 7. Lavar con abundante agua para eliminar el resto de disolvente. 8. Teir con safranina 1min.
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9. Lavar con agua para eliminar el colorante de contraste. 10. Secar la preparacin. 11. Examinar al microscopio con aceite de inmersin y fijndose sobre todo en el color de cada preparacin. CUESTIONARIO 1. Qu es un frotis? 2. Con qu finalidad se fija la muestra de microorganismos en el porta objetos? 3. Qu importancia tiene teir las muestras bacterianas? 4. Por qu es necesario emplear aceite de inmersin para la observacin de los microorganismos? 5. De los reactivos que utilizaste para la tincin de Gram, cul es el que funciona como colorante primario? 6. Qu funcin tiene el Yodo en la tincin de Gram? 7. Qu color se tien las bacterias Gram (+) y Gram (-)? 8. Menciona tres bacterias Gram (+) y escribe la enfermedad que causan. 9. Menciona tres bacterias Gram (-) y escribe la enfermedad que causan.
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PRCTICA 9: CLULA EUCARIOTA-SMOSIS
I.
COMPETENCIAS: Al finalizar esta prctica el alumno: Describe la estructura general de las clulas animales y vegetales y comprueba la importancia que tiene la concentracin del medio en que estn inmersas, para la vida de las clulas. Comprueba el fenmeno de smosis en clulas animales y vegetales
II.
MATERIALES Proporciona el Laboratorio Microscopio Compuesto. Azul de metileno. Lugol Solucin salina: 0.9% NaCl 0.2% NaCl 2.0% NaCl Lminas portaobjeto Lminas cubreobjetos Gota de sangre Traern los alumnos Hisopos estriles. Planta Elodea Bulbo de cebolla Hoja de geranio Pinza Gotero Hoja de afeitar Papel servilleta
III.
FUNDAMENTO TERICO La biologa celular (antiguamente citologa de cito=clula y Logos=Estudio o Tratado ) es una disciplina acadmica que se encarga del estudio de las clulas en cuanto a sus propiedades, estructura, funciones, orgnulos que contienen, su interaccin con el ambiente y su ciclo vital.
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Con la invencin del microscopio ptico fue posible observar estructuras nunca antes vistas por el hombre, las clulas. Esas estructuras se estudiaron ms detalladamente con el empleo de tcnicas de citoqumica y con la ayuda fundamental del microscopio electrnico. La biologa celular se centra en la comprensin del funcionamiento de los sistemas celulares, de cmo estas clulas se regulan y la comprensin del funcionamiento de sus estructuras. Una disciplina afn es la biologa molecular La clula es la unidad fundamental de la vida, representa la unidad morfolgica, fisiolgica, gentica y evolutiva de todos los seres vivos. Las clulas vivientes difieren unas de otras en forma, tamao, estructura interna, funciones, etc. No existe pues, clula viva tpica, hay una gran variedad en morfologa y funcin, pero todas coinciden en la estructura bsica: Envoltura celular, membrana, citoplasma y ncleo. En las clulas vegetales podemos encontrar adems la presencia de plastos y pared celular celulsica y la ausencia de centriolo y lisosomas. Sin embargo, hay caractersticas comunes a la mayor parte de las clulas, de este modo, las cuatro partes bsicas corresponden a: a. Envoltura celular b. Membrana celular c. Citoplasma d. Ncleo DIFERENCIAS ENTRE CELULA ANIMAL Y VEGETAL
CLULA ANIMAL . 1. Presenta una membrana celular simple. 2. La clula animal no lleva plastidios. 3. El nmero de vacuolas es muy reducido. 4. Tiene centrosoma. 5. Presenta lisosomas.
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6. No se realiza la funcin de fotosntesis (nutricin hetertrofa). 7. Nutricin hetertrofa. CLULA VEGETAL 1. Presenta una membrana celulsica o pared celular, rgida que contiene celulosa. 2. Presenta plastidios o plastos como el cloroplasto. 3. Presenta numerosos grupos de vacuolas. 4. No tiene centrosoma. 5. Carece de lisosomas. 6. Se realiza funcin de fotosntesis (nutricin auttrofa).
IV.
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL Para observar clula animal: 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Con un hisopo haga un raspado del epitelio bucal. Coloque en una lmina porta objetos la muestra obtenida. Realice un frotis en una sola direccin (extendido de la muestra). Secar al medio ambiente durante 5 minutos. Agregar 1 a 2 gotas de azul de metileno y esperar 3 minutos. Echar unas gotas de agua sobre la preparacin para lavar el exceso. Observe al microscopio a menor y mayor aumento. Esquematice.
Para observar clula vegetal: Clula de epidermis de la cebolla (Allium cepa) 1. Coloque una gota de agua en el centro de la lmina. 2. Con una pinza desprenda la
epidermis de la cara interior de un catfila de cebolla, deber la capa ser Pgina 61
epidrmica
transparente. 3. 4. 5. Coloque en la lmina porta objeto la epidermis de la cebolla. Extienda cualquier doblez de la epidermis. Coloque una lmina cubre objetos sobre la epidermis; no aplique presin alguna sobre la lmina. 6. 7. Observe con los objetivos: seco dbil y seco fuerte. Esquematice. Una vez observado la muestra anterior, separe la lmina del microscopio, levante el cubre objetos para agregarle 2 gotas de lugol y espere unos 3 minutos. 8. Si hay exceso de colorante, lave la muestra con cuidado o elimine con papel servilleta. 9. Coloque nuevamente el cubre objeto y observe. Clula de Elodea (Planta acutica) 1. 2. 3. Coloque una gota de agua en el centro de la lmina. Tome una hoja de Elodea, llvela al porta objeto. Coloque una laminilla. Luego observe con los objetivos: seco dbil y seco fuerte. Esquematice.
Pared celular
Cloroplastos
Citoplasma
Clula de Geranio 1. Coloque una gota de agua en el centro de la lmina. 2. Con una pinza desprenda la epidermis de la cara interior de la hoja, la capa epidrmica deber ser transparente.
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3. Coloque en la lmina porta objeto la epidermis del geranio. 4. Extienda cualquier doblez de la epidermis. 5. Coloque una lmina cubre objetos sobre la epidermis; no aplique presin alguna sobre la lmina. 6. Observe con los objetivos: seco dbil y seco fuerte. Esquematice. 7. Una vez observado la muestra anterior, separe la lmina del microscopio, levante el cubre objetos para agregarle 2 gotas de lugol y espere unos 3 minutos. 8. Si hay exceso de colorante, lave la muestra con cuidado o elimine con papel servilleta. 9. Coloque nuevamente el cubre objeto y observe. Ostiolo
Clula estomtica
FUNDAMENTO TERICO-SMOSIS La membrana celular adems de delimitar y proteger las clulas, se encarga de regular el transporte de materiales entre stas y su medio circundante. Existen diferentes tipos de transporte, dependiendo de la naturaleza de las sustancias transportadas y de la cantidad en que se encuentren, dentro o fuera de las clulas. A escala celular se reconocen 2 tipos de transporte: el pasivo y el activo. El transporte pasivo es el movimiento de molculas a travs de los poros de la membrana celular, desde una zona de alta concentracin a otra de menor concentracin; el proceso no implica gasto de energa. La difusin y osmosis son ejemplo de este tipo de transporte. La smosis es el movimiento de molculas de agua a travs de una membrana semipermeable. Pgina 63
La difusin es el movimiento de molculas de una sustancia a travs de la membrana desde una zona de mayor concentracin de molculas a una de menor concentracin. Es un proceso fsico irreversible, en el que partculas materiales se introducen en un medio que inicialmente estaba ausente, aumentando la entropa del sistema conjunto formado por las partculas difundidas o soluto y el medio donde se difunden o disolvente. Normalmente los procesos de difusin estn sujetos a la Ley de Fick. La membrana semipermeable puede permitir el paso de partculas y disolvente siempre a favor del gradiente de concentracin. La difusin, proceso que no requiere aporte energtico, es frecuente como forma de intercambio celular. La smosis es el movimiento de molculas de agua a travs de una membrana semipermeable, se la define como un fenmeno en el que se produce el paso o difusin de un disolvente a travs de una membrana semipermeable, la cual permite el paso del disolvente pero no el del soluto, desde una disolucin ms diluida a otra ms concentrada. La capacidad que tiene el agua de atravesar la membrana plasmtica, que se comporta como una membrana semipermeable, depende de la diferencia de concentracin entre los lquidos extracelular e intracelular y viene determinada por la presencia de sales minerales y molculas orgnicas disueltas. SOLUCIONES FISIOLGICAS El agua se mueve fcilmente cruzando las membranas celulares, a travs de canales especiales revestidos de protena. Si el total de la concentracin de todos los solutos disueltos no es igual en ambos lados, habr un movimiento neto de molculas de agua hacia dentro o fuera de la clula. Para donde es el movimiento del agua, depende si el medio donde se encuentra la clula es isotnico, hipotnico o hipertnico.
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Solucin isotnica Cuando dos medios son isotnicos, el total de la concentracin molar de los solutos disueltos es el mismo en ambos. Cuando las clulas estn en una solucin isotnica, el movimiento de agua hacia afuera est balanceado con el movimiento de agua hacia adentro. Un 0.9% de solucin de NaCl (salina) es isotnica para las clulas animales. Note que el nmero de molculas de agua en ambos lados de la membrana, permaneces esencialmente sin cambios. Solucin hipotnica Hipotnico viene del griego "hypo," que significa bajo, y "tonos," que significa dilatarse. En una solucin hipotnica, el total de la concentracin molar de todas las partculas disueltas, es menos que el de otra solucin o menos que el de la clula. Si las concentraciones de solutos disueltos son menos fuera de la clula que dentro, la concentracin de agua afuera es correspondientemente ms grande. Cuando una clula es expuesta a condiciones hipotnicas, hay un movimiento neto de agua hacia dentro de la clula. Las clulas sin pared celular se inflan y pueden explotar (lisis). Si el exceso de agua no es removido de la clula. Las clulas con paredes celulares a menudo se benefician de la presin que da rigidez en medios hipotnicos. Note que el nmero de molculas de agua dentro de la clula se incrementa con el tiempo, y la clula se hincha como resultado.
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Solucin hipertnica Hipertnica viene del griego "hyper," que significa sobre y "tonos," que significa expandirse. En una solucin hipertnica, la concentracin molar total de todas las partculas de soluto disuelto, es ms grande que el de la otra solucin, o ms grande que la concentracin de la clula. Si las concentraciones de solutos disueltos son mayores fuera de la clula, la concentracin de agua es correspondientemente menor. Como resultado, el agua dentro de la clula sale para alcanzar el equilibrio, produciendo un encogimiento de la clula. Al perder agua la clula tambin pierden su habilidad para funcionar o dividirse. Los medios hipertnicos, como la salmuera o jarabes, han sido utilizados desde la antigedad para preservar la comida, debido a que los microbios que causan la putrefaccin, son deshidratados en esos medios hipertnicos y son incapaces de funcionar. Note que el nmero de molculas de agua dentro de la clula disminuye con el tiempo, y la clula se encoge como resultado.
I.
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Experiencia 1: Permeabilidad celular en epidermis de cebolla Haga tres preparaciones hmedas de epidermis de cebolla. En la primera lmina coloque tres gotas de solucin salina 0.9% (solucin isotnica), en la segunda lmina coloque solucin salina 2% (solucin hipertnica) y en la ltima lmina coloque solucin salina 0.2% (solucin hipotnica). Marque cada una de las preparaciones. Cubra las diferentes preparaciones con las laminillas. Examine al microscopio cada una de las preparaciones con los objetivos de menor y mayor aumento.
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Dibuje sus observaciones. Incluya los dibujos con el aumento en donde se note mejor la estructura. Experiencia 2: Permeabilidad celular en hoja de Elodea Haga tres preparaciones hmedas de la hojita de Elodea. Adicinele tres gotas de solucin isotnica a la primera lmina, tres gotas de solucin hipertnica a la segunda lmina y finalmente tres gotas de solucin hipotnica a la tercera lmina. Marque cada una de las preparaciones. Cubra las diferentes preparaciones con laminillas. Observe con menor y mayor aumento. Dibuje sus observaciones. Experiencia 3: Permeabilidad celular en eritrocitos Haga tres preparaciones colocando una gota de sangre sobre lminas portaobjeto. Adicinele tres gotas de solucin isotnica a la primera lmina, tres gotas de solucin hipertnica a la segunda lmina y finalmente tres gotas de solucin hipotnica a la tercera lmina. Marque cada una de las preparaciones. Cubra las diferentes preparaciones con laminillas. Observe con menor y mayor aumento. Note el cambio que se produce en las clulas Dibuje sus observaciones.
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Plasmlisis en clulas de cebolla
Plasmlisis en Elodea
Crenacin En glbulos rojos
II.
CUESTIONARIO 1. Por qu es posible obtener algunas clulas por simple frotamiento del interior de la mejilla? 2. Qu diferencia existen entre una clula eucariota y una clula procariota? 3. 4. 5. 6. Qu es una clula animal? Con qu finalidad empleamos el Lugol? Qu es una clula vegetal y cules son sus componentes? Por qu la pared celular es ms fcil de observar que las estructuras de la reas internas de la clula? 7. 8. Qu estructuras observ en la clula de Elodea? Qu diferencias estructurales existen entre las clulas del epitelio bucal con las de la cebolla? 9. Qu es la ciclosis?
10. A qu se llama solucin hipertnica, hipotnica e isotnica? 11. Qu es el osmmetro y en qu consiste? 12. Qu es y en qu tipo de clulas acta la bomba de Sodio / Potasio? 13. Qu mecanismo presentan los peces para vivir, algunos en el agua salada y otros en el agua dulce? Explique. 14. Qu puedes decir sobre la concentracin osmtica del citoplasma de las clulas de la epidermis de cebolla? 15. Se habran obtenido los mismos resultados si se hubiera empleado un alga marina en el experimento?
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PRCTICA 10: PLASTIDIOS E INCLUSIONES CITOPLASMTICAS
I.
COMPETENCIAS: Reconoce algunos orgnulos vegetales: cromoplastos y amiloplastos, as como las diferentes inclusiones citoplasmticas.
II.
MATERIALES Microscopio ptico Portaobjetos y cubreobjetos Soporte para tinciones Cuchilla o bistur Lugol. Material biolgico : Papa Camote Yuca Semillas de trigo Arroz Tomates Pimiento Zanahoria Penca de tuna Ajos.
III.
FUNDAMENTO TERICO Los vegetales son seres auttrofos fotosintticos. Gracias a la clorofila son capaces de sintetizar materia orgnica, fundamentalmente glcidos, a partir de compuestos inorgnicos como el CO2. Los plastos son los principales orgnulos implicados en dicho proceso. A. LOS PLASTIDIOS
Son orgnulos exclusivos de vegetales, provistos de una doble membrana y cuya funcin es almacenar y sintetizar determinadas sustancias.
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Pueden ser: CLOROPLASTOS: Son los plastidios ms importantes, dentro de ellos se encuentra la clorofila y por eso los vegetales pueden fotosintetizar. CROMOPLASTOS: Son plastidios fotosintticamente inactivos, contiene pigmentos amarillos, (Xantofilas) anaranjados (Carotenos) y rojos (Licopeno) Son los responsables del color de las flores y frutos. Sirven como indicadores de madurez en funcin de su concentracin adems poseen protenas lpidos y RNA. LEUCOPLASTOS Presentes en rganos de reserva. Los encontramos en tubrculos (papa), rizomas (batata), frutos (banana), y semillas (maz). Es una fuente de energa. AMILOPLASTOS Son leucoplastos especializados en la reserva de almidn B. INCLUSIONES CITOPLASMTICAS: CRISTALES DE OXALATO DE CALCIO:
La formacin de cristales de oxalato de calcio parece jugar un papel central en importantes funciones de las plantas, entre las que se incluyen la regulacin en los niveles de calcio, la proteccin contra la herbivora y la detoxificacin de metales pesados. Las morfologas especie-especficas que presentan estos cristales, indican que su formacin est altamente regulada. Esta regulacin es llevada a cabo por una matriz proteica que se encuentra dentro de la vacuola de clulas altamente especializadas llamadas idioblastos. Esta matriz controla la forma, orientacin y estado de hi dratacin de los cristales de oxalato de calcio formados por la planta, dotndolos de caractersticas especiales que no comparten con su contraparte inorgnica.
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La mayora de las plantas producen cristales de oxalato de calcio, los cuales pueden representar ms del 85 % del peso seco de algunas de ellas (cactceas) (1). Los primeros reportes de estos cristales en las plantas fueron realizados por Leeuwenhoek en el siglo XVII; sin embargo, no se les dio mucha importancia, ya que se les consider slo como productos de desecho. Debido a que presentaban morfologas peculiares y una compleja fenomenologa asociada a su formacin, en la dcada de los aos 70 se iniciaron una serie de estudios para demostrar que estos cristales no eran simples productos de desecho. Cristales de este mineral han sido observados virtualmente en todos los tipos de tejidos vegetales e igualmente en algunas bacterias, hongos y animales. La formacin de oxalato de calcio es un proceso esencial en la mayora de las especies de plantas conocidas y en algunos casos cerca del 90 % del calcio total en la planta puede encontrarse secuestrado en forma de cristales de oxalato de calcio; sin embargo, este porcentaje vara entre las diferentes especies de plantas que presentan este tipo de cristales. Lo anterior parece indicar que su formacin representa el mayor mecanismo de regulacin de los niveles de calcio en la planta. Las plantas producen cristales de oxalato de calcio en una gran variedad de formas y tamaos, aunque la mayora de los cristales pueden clasificarse dentro de cuatro tipos principales en base a su morfologa: rafidios (cristales aciculares en agregados), drusas (agregados cristalinos esfricos), estiloides (cristales aciculares) y prismas. (Fig.1). Generalmente la morfologa de los cristales y su distribucin dentro de los tejidos de la planta son especie especficos. El tipo de polimorfo del oxalato de calcio presente en las plantas tambin es especieespecfico y puede ser la whewellita (oxalato de calcio monohidratado) o la weddellita (oxalato de calcio dihidratado) CLULAS FORMADORAS DE CRISTALES Los idioblastos son clulas que estn especializadas para la acumulacin de Ca2+ en forma de oxalato de calcio cristalino. Estas clulas crecen muy rpidamente y se diferencian de todas las dems clulas vegetales por su gran tamao. Los idioblastos jvenes son clulas extremadamente activas en relacin a la sntesis de protenas, adems poseen una gran cantidad de mitocondrias, aparato de Golgi,
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ribosomas y retculo endoplsmico, organelos asociados con los procesos metablicos, los cuales proveen la energa para el secuestro del calcio, la sntesis de protenas, lpidos y polisacridos y la produccin de cido oxlico. Cuando los idioblastos maduran totalmente (es decir poseen un cristal totalmente formado en su interior) inhiben el flujo de calcio hacia su interior, lo cual demuestra su capacidad para regular los procesos de transporte de calcio a travs de la membrana plasmtica. A pesar de que el cristal ocupa casi todo el espacio disponible en los idioblastos, estos permanecen activos, lo cual est relacionado con su habilidad para utilizar el calcio cristalino almacenado bajo condiciones de dficit de calcio en la planta.
TIPOS DE CRISTALES DE OXALATO CLCICO: DRUSAS Cristales de oxalato clcico con numerosas caras y puntas muy agudas. Tamao: 5-10 nm de dimetro. Normalmente hay una por clula.
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RAFIDIOS Cristales de oxalatos clcicos muy largos, finos y afilados que se presentan agrupados y en gran nmero formando un haz dentro de la clula. Algunos estn bajo presin dentro de la clula. IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
CROMOPLASTOS. 1. Partir una zanahoria y raspar con la punta del bistur, depositando el producto obtenido en un portaobjeto. 2. Adicionar una gota de agua y colocar el cubreobjetos. 3. Observar al microscopio a menor y mayor aumento. 4. Esquematice sus observaciones. 5. Repetir con tomate, pimiento.
LEUCOPLASTOS: AMILOPLASTOS. 1. Partir una patata y raspar con la punta del bistur, depositando el producto obtenido en dos objetos. 2. A la primera lmina adicionar una gota de agua y colocar la lmina cubreobjetos. 3. A la segunda lmina adicionar una gota de Lugol y colocar la lmina cubreobjetos. 4. Observe al microscopio a menor y mayor aumento.
porta-
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5. Esquematice sus observaciones. 6. Repetir el proceso con camote, yuca y semillas de arroz, trigo. INCLUSIONES CITOPLASMTICAS : CRISTALES OBSERVACIN DE DRUSAS 1. Realizar un corte fino de la aparte interna del tallo de una tuna y extenderla sobre una lmina. 2. Agregar una gota de agua y cubrir con una lmina cubreobjetos. 3. Observar a menor y mayor aumento. 4. Esquematice sus observaciones. OBSERVACION DE RAFIDIOS 1. Exprimir un trozo de hoja proporcionara. 2. Extender sobre un portaobjetos. 3. Cubrir con una lmina cubreobjetos. 4. Observar a menor y mayor aumento. 5. Esquematice sus observaciones. ANLISIS Y CONCLUSIONES. Realizar un informe en el que se incluyan las figuras de cada uno de los tipos de plastos, y cristales analizando las diferencias de los mismos. V. CUESTIONARIO: 1- Qu son los cromoplastos y leucoplastos y qu funciones cumplen? 2- Qu importancia tienen los cristales de oxalato de calcio para la planta? 3- Cul es la razn de utilizar Lugol para el reconocimiento de leucoplastos. 4- Defina cada una de las inclusiones observadas en la prctica. de una planta ornamental que el profesor le
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PRCTICA 11: CARIOTIPO
I.
COMPETENCIAS: Al finalizar esta prctica el alumno: Reconoce los pares cromosmicos humanos a partir de las placas metafsicas. Construye el Cariotipo Humano sobre la base de las caractersticas establecidas.
II.
MATERIALES Foto de placas matafsicas (Anexo) Lpiz Tijeras Regla Goma
III.
FUNDAMENTO TEORICO
El conjunto de cromosomas de un individuo constituye su cariotipo. En 1956 Tjio y Levan demostraron que el cariotipo humano est formado por 46 cromosomas, o lo que es igual, 23 parejas. Para estudiar los cromosomas humanos se cultivan linfocitos y mientras se estn dividiendo se tratan con colchicina, que interrumpe las mitosis en metafase, que es el momento ms adecuado para observar los cromosomas. Despus se someten a una solucin hipotnica para que se hinchen y dispersen, y por ltimo se tien con orcena actica y se fotografan a travs del microscopio. Los cromosomas se diferencian por su tamao y por su forma; en 1960 un grupo de expertos acord ordenar los cromosomas humanos de mayor a menor tamao, y dentro del mismo tamao, por la posicin del centrmero. Se clasificaron despus en 7 grupos designados por letras (desde la A a la G). Un idiograma es la representacin
esquemtica del tamao, forma y patrn de bandas de todo el complemento

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cromosmico, los cromosomas se sitan alineados por el centrmero, y con el brazo largo siempre hacia abajo.
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SNDROME Sndrome de Down o mongolismo
TIPO DE MUTACIN Trisoma del 21 (tienen 47 cromosomas)
Sndrome de Edwards
Trisoma del 18 (tienen 47 cromosomas) Trisoma del 13 o del 15 (tienen 47 cromosomas) 44 autosomas + XXY
Sndrome de Patau
CARACTERSTICAS Y SNTOMAS DE LA MUTACIN Se caracteriza por retraso mental, ojos oblicuos, trastornos cardiacos, crecimiento retardado, propensin a las infecciones, etc. Es ms frecuente en hijos de madres adolescentes o de edades tardas, por anomalas en la meiosis. Anomalas en la forma de la cabeza, boca pequea, mentn huido, lesin cardiaca y membrana interdigital en los pies. Labio leporino, lesiones cardiacas, frecuentemente dedos supernumerarios, etc. Varones de estatura elevada, brazos y piernas largos, bajo coeficiente de inteligencia, desarrollo de mamas y esterilidad. Elevada estatura, personalidad infantil, bajo coeficiente intelectual, tendencia a la agresividad y al comportamiento antisocial, etc. Mujeres con cuello ancho y aspecto hombruno, trax en forma de escudo, baja estatura, atrofia de ovarios, etc. Infantilismo y escaso desarrollo de las mamas y de los genitales externos.
Sndrome de Klinefelter (intersexo masculino) Sndrome de duplo Y
44 autosomas + XYY
Sndrome de Turner (intersexo femenino) Sndrome de triple X
44 autosomas +X 44 autosomas + XXX
IV.
PROCEDIMIENTO
Realiza los idiogramas correspondientes a los cariotipos de los individuos de las pginas adjuntas. Para ello recorta los cromosomas y pgalos en los lugares correspondientes, fijndote en el cuadro que acompaa. En cada caso indica su sexo y, si la hay, tipo de anomala cromosmica y sndrome a que da lugar.
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INDIVIDUO N 1:
A 1 2 3
B 4 5
C X 6 7 8 9 10 11 12
D 13 14 15
E 16 17 18
F 19 20
G Y 21 22
SEXO: .............................. ANOMALA CROMOSMICA: .................................................................. SNDROME: ...................................................
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INDIVIDUO N 2:
A 1 2 3
B 4 5
C X 6 7 8 9 10 11 12
D 13 14 15
E 16 17 18
F 19 20
G Y 21 22
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INDIVIDUO N 3:
A 1 2 3
B 4 5
C X 6 7 8 9 10 11 12
D 13 14 15
E 16 17 18
F 19 20
G Y 21 22
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INDIVIDUO 1
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INDIVIDUO 2:
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INDIVIDUO 3:
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PRCTICA 12: MITOSIS
I.
COMPETENCIAS: Al finalizar esta prctica el alumno: Reconoce cada una de las fases de la mitosis en clulas meristemticas de raz de cebolla (Allium cepa)
II.
MATERIALES Races de cebolla Bistur Lminas portaobjetos Laminillas Orcena actica Lpiz con borrador en un extremo Microscopios
III.
FUNDAMENTO TERICO La divisin celular es el fenmeno citolgico por el que una clula origina dos
clulas hijas, cada una de las cuales recibe idntica informacin gentica. Consta de dos etapas: la cariocinesis o mitosis que asegura el reparto equitativo del material hereditario y la citocinesis o divisin del citoplasma. El significado biolgico de la mitosis es asegurar la conservacin del patrimonio hereditario nuclear en el proceso de formacin de un individuo adulto a partir de una clula inicial o cigoto. La mitosis consta de las siguientes etapas: profase, metafase, anafase y telofase. (a) Antes de la profase hay una interface, durante la cual se produce la duplicacin del
material hereditario, con lo cual los cromosomas estn formados por dos cromtidas
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unidas mediante el centrmero. Profase. La cromatina comienza a condensarse, a medida que avanza este estadio desaparece el nuclolo. Los cromosomas aparecen como filamentos delgados. Metafase. Cada cromosoma, integrado por dos cromtidas hermanas, se dispone con su centrmero en el plano ecuatorial. Anafase. Las cromtidas hermanas se separan y comienzan a migrar hacia los polos opuestos de la clula. Ahora los cromosomas se observan formados por una sola cromtida, con los centrmeros dispuestos hacia los polos y los telmeros hacia el centro de la clula. Telofase. Los nuclolos reaparecen y los cromosomas comienzan a descondensarse, con lo que dejan de ser visibles. La membrana nuclear reaparece alrededor de cada grupo de cromosomas, delimitndose as dos zonas nucleares, una en cada polo de la clula. Las membranas se forman a partir del retculo endoplsmico. IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Preparacin previa.
Tres o cuatro das antes de hacer la prctica se pone un bulbo de cebolla en un vaso de precipitados lleno de agua, de tal manera que la parte inferior del mismo est en contacto con el agua. Al cabo de esos tres o cuatro das se habrn formado numerosas raicillas, cuyos pices se utilizarn en esta prctica. 1. Con una tijera se corta el extremo de varias raicillas, procurando que su longitud
sea de unos 2 a 3 mm. ya que es en esta zona de la raz donde se encuentran las clulas en divisin. 2. Se depositan los trozos de raz en un vidrio de reloj, en el que previamente se
han vertido de 2 a 3 ml de orcena A, cuya funcin es la de reblandecer las membranas celulares.
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3.
Con ayuda de unas pinzas de madera se calienta el vidrio de reloj a la llama del
mechero durante 8 minutos, teniendo gran cuidado de que no entre en ebullicin (si es necesario se retirar el vidrio de reloj para que no se produzca la ebullicin); el calentamiento termina cuando se observa la emisin de unos tenues vapores. 4. Se coge con las pinzas de punta fina uno de los extremos (pice) de la raz y se
coloca en un portaobjetos aadiendo una gota de orcena B y se deja actuar durante un minuto. La funcin de la orcena B es la de completar el proceso de teido de los cromosomas. 5. Hacer un squash: que consiste bsicamente en poner la preparacin en un
portaobjetos y aplastarla con otro mientras este otro se gira.,la presin se ejerce para separar las clulas, que no haya capas de estas para que la observacin se pueda hacer claramente 6. Se observa la preparacin con el microscopio empezando con el objetivo de menor
aumento para luego utilizar los de mayor aumento. Resultados Dibujar lo observado a travs del microscopio, indicando: nmero de aumentos con lo que se est trabajando, estructuras observadas y etapas de la mitosis que se han visto.
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PRCTICA 13: LEYES DE MENDEL
I.
COMPETENCIAS Realiza cruzamientos simulados para comprobar los resultados estadsticos de las Leyes de Mendel.
II.
MATERIALES 20 fichas circulares de cartoncillo negro y 20 fichas de cartoncillo blanco, todas de 5 cm. de dimetro y con una ranura radial.
Frijoles de dos colores contrastantes (claro y obscuro) Dos bolsas de papel
III.
FUNDAMENTO TERICO
La Ciencia explica los fenmenos de la naturaleza mediante teoras que son en realidad la interpretacin de cmo actan y se relacionan los diferentes factores que intervienen en el fenmeno que se est estudiando. Estas teoras pueden representarse en el lenguaje matemtico o por otros medios. La herencia de gran cantidad de caractersticas somticas de los seres vivos obedece a las Leyes de Mendel.
Al cruzar dos individuos Homocigotos con una caracterstica contrastante, se obtendr en la Primera Generacin (F1), un 100% de Hbridos, todos con el carcter Dominante. Si se cruzan dos Hbridos de la Primera Generacin, se obtendr en la Segunda (F 2), una proporcin de 3:1 en el Fenotipo y una proporcin de 1:2:1 en el Genotipo. IV. PROCEDIMIENTO
Se maneja un modelo con fichas blancas y negras; frijoles claros y obscuros: cada ficha representa un Gameto o clula sexual que contiene un Gene Alelo. Las blancas llevan el Alelo Recesivo y las negras el Alelo Dominante, (nmero Haploide o n).
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Cada
pareja
de
fichas
ensambladas
representa
un
individuo
(nmero
2n).
Si son dos blancas, representa a un individuo con carcter puro Recesivo. Si son dos negras, representa a un individuo con carcter puro Dominante. Si es una blanca y una negra, representa a un Hbrido.
Los frijoles representan al Fenotipo. El frijol claro representa el carcter recesivo y el obscuro el dominante.
1. En una bolsa de papel, se colocan las fichas ensambladas de color negro, y en la otra bolsa las fichas ensambladas de color blanco, nmero 2 n de cromosomas. Ambas representan los genotipos de los individuos Homocigotos con carcter Dominante y los Homocigotos con carcter Recesivo.
2. Para obtener la primera generacin Filial (F 1), se separan las fichas ensambladas de cada bolsa, esto simula la meiosis o divisin celular para producir los gametos, los cuales tienen el nmero n de cromosomas.
Se saca una ficha sencilla de cada bolsa y se unen, esto representa la fecundacin. Las fichas ensambladas se colocan en la mesa y junto se pone un frijol que representa el fenotipo. Se anotan los resultados y la proporcin.
3. Segunda Generacin Filial (F 2). Las fichas ensambladas obtenidas anteriormente se distribuyen equitativamente en las dos bolsas vacas.
Se separan dentro de la bolsa (meiosis) y se repite el procedimiento del punto 2 Se sacan ala azar las fichas de ambas bolsas para formar parejas, pues esto demuestra la unin aleatoria de los gametos en la naturaleza. 4. Se anota cuntos puros Recesivos, cuntos puros dominantes y cuntos hbridos se 5. Se anotan los Fenotipos obtuvieron. obtenidos
6. En el pizarrn, se concentran en un cuadro los resultados de todos los equipos. 7. Se suman las columnas para comprobar que se presentan las proporciones aproximadas de 3:1 del Fenotipo y de 1:2:1 de Genotipo como lo establece la Ley de la Segregacin de Caracteres.
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V.
CUESTIONARIO 1. Qu importancia tienen los trabajos de Mendel? 2. Con que organismos trabaj Mendel? 3. Investigue Cules son los dos principios de probabilidad de importancia para la gentica? 4. Sale exacta la proporcin 3:1 y 1:2:1? Por qu? 5. Analice el dibujo o Cuadro de Punnett donde se muestra la herencia de la forma de la semilla de chcharo. Complete el Cuadro de Punnett, suponga que los progenitores son Homocigotos para el carcter dominante y recesivo. Interprete el cuadro.
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PRCTICA 14: LA FERMENTACIN
FERMENTACIN LCTICA Y BACTERIAS DEL YOGUR.
I.
COMPETENCIAS Obtiene yogur por fermentacin lctica. Distingue las bacterias causantes de la fermentacin.
II. MATERIALES Microscopio Portaobjetos Asa de siembra Mechero Estufa de cultivo o yogurtera Matraz de 250 mL Pipeta de 5 mL Varilla de vidrio Papel indicador de pH Metanol xileno Cristal metileno). violeta (o azul de
III. FUNDAMENTO TERICO Las fermentaciones son procesos de respiracin anaerobia realizados por ciertas bacterias y levaduras. En ellos, el aceptor de H+ y electrones cedidos por una molcula orgnica no es el oxgeno sino otra molcula. Dependiendo de cul sea esta molcula se obtendrn distintos productos finales. En el caso de la fermentacin lctica, la molcula aceptora es el cido pirvico y el producto resultante es el cido lctico. Esta fermentacin se emplea en la industria alimentaria para obtener derivados lcteos como el yogur.
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El yogur es un producto producido por la fermentacin natural de la leche. A escala industrial se realiza la fermentacin aadiendo a la leche dosis del 3-4 % de una asociacin de dos cepas bacterianas. El Streptococcus thermophilus, poco productor de cido, pero muy aromtico, y el Lactobacillus bulgaricus, muy acidificante. En esta preparacin se podrn, por tanto, observar dos morfologas bacterianas distintas (cocos y bacilos) y un tipo de agrupacin (estreptococos, cocos en cadenas arrosariadas). Adems, el tamao del lactobacilo (unos 30 um de longitud) facilita la observacin aunque no se tenga mucha prctica con el enfoque del microscopio. IV. PROCEDIMIENTO Experimento 1. Obtencin de yogur por fermentacin lctica. 1. Coloca 100 mL de leche en el matraz y aade 1 mL de yogur. 2. Incuba el matraz en la estufa durante 24 horas a 37 C. 3. Saca el matraz y observa el contenido. 4. Mueve con la varilla para homogeneizarlo e introduce una tipa de papel indicador de pH. 5. Describe lo observado en el matraz y en el papel indicador. Para realizar este experimento tambin puedes utilizar una yogurtera domstica.
Experimento 2. Observacin de las bacterias causantes de la fermentacin.

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1. Con el asa de siembra toma una gota de yogur y depostala sobre un portaobjetos limpio. Aade una gota de metanol tambin xileno para desengrasar y mzclala con el yogur. 2. Extiende la mezcla y djala secar completamente. Luego pasa el portaobjetos por la llama del mechero 4 o 5 veces para fijar la preparacin. 3. Aplica el colorante cristal violeta durante 2 minutos. 4. Lava cuidadosamente con agua destilada hasta que el lquido no salga teido y
deposita sobre ella un cubre cuidando que no se formen burbujas. 5. Observa al microscopio con el objetivo adecuado (utiliza los mayores aumentos) 6. Dibuja lo que ha observado.
V. CUESTIONARIO 1. Elabora hiptesis sobre lo sucedido en el experimento 1. 2. Por qu se utiliza papel indicador de pH en este experimento? 3. Si la leche utilizada no estuviera pasteurizada o esterilizada, El producto obtenido hubiera sido distinto? 4. Qu tipo de microorganismos observas al microscopio?
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UNIVERSIDAD ALAS PERUANAS

FACULTAD DE MEDICINA HUMANA Y CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA PROFESIONAL DE ESTOMATOLOGIA

GUA DE PRCTICAS DE BIOLOGA Y GENTICA

PARA LA ESCUELA PROFESIONAL DE ESTOMATOLOGA

SEMESTRE CADMICO 2012 - I

COORDINADOR DEL CURSO: Mg. Marco Antonio Mesa Guevara

Mg. Marco Antonio Mesa Guevara

varias etapas mediante la recopilacin de

Mg. Marco Antonio Mesa Guevara Coordinador de la Asignatura de Biologa y Gentica

Mg. Marco Antonio Mesa Guevara

RECOMENDACIONES GENERALES PARA EL TRABAJO EN EL LABORATORIO DE BIOLOGA

Mg. Marco Antonio Mesa Guevara

CONTENIDO DE LAS PRCTICAS

TEMAS RECONOCIMIENTO, USO Y MANEJO DE MATERIALES DE LABORATORIO.

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PRCTICA 1: RECONOCIMIENTO DEL MATERIAL DE LABORATORIO Y MEDICIN DE VOLMENES

Pinza para Tubos de Ensayo

Escobilla para tubos

Artefactos que facilitan el estudio

A continuacin se hace referencia a los materiales de uso comn en el laboratorio:

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PIZETA O FRASCO LAVADOR Se utilizan para enjuagar el material de laboratorio

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ESCOBILLA Se utiliza para la limpieza del material de laboratorio.

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RECONOCIMIENTO DE MATERIALES DE LABORATORIO

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Mg. Marco Antonio Mesa Guevara

Lmite de resolucin = 0,61 X Longitud de onda Apertura numrica

A menor lmite de resolucin, mayor es el poder de resolucin.

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importante de un objetivo. La apertura numrica es igual: n x seno

El aceite de inmersin tiene un ndice de refraccin de 1.5, lo que aumenta

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MICROSCOPIO COMPUESTO DE CAMPO LUMINOSO

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OCULAR X OBJETIVO = AUMENTO

AUMENTO 40 X 100 X 400 X 1000 X

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Se moviliza mediante una cremallera accionada por un tornillo de enfoque.

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PRCTICA 3: RECONOCIMIENTO DE GLCIDOS

COMPETENCIAS: Identifica la presencia de carbohidratos en diferentes insumos alimenticios.

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existencia de almidn en la solucin problema.

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PRCTICA 4: RECONOCIMIENTO DE LPIDOS

COMPETENCIAS: Identifica cualitativamente la presencia de lpidos en muestras de alimentos.

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