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PRCTICA N 7.

MTODOS ESPECTROFOTOMTRICOS
EXPERIMENTO N 1. DETERMINACIN ESPECTROFOTOMTRICA DE HIERRO. OBJETIVO: Aplicar la Ley Lambert-Beer para determinar la concentracin de hierro empleando el mtodo espectrofotomtrico del 1,10 fenantrolina. La ley de Lambert-Beer es la base cuantitativa para los mtodos espectrofotomtricos basados en medidas de absorbancia (A), ya que establece una relacin lineal entre sta y la concentracin(C) de sustancia cuando la trayectoria (b) permanece constante. De modo que mediante la construccin de una curva de calibrado obtenida por el ajuste lineal de las medidas de la A obtenidas con disoluciones patrn del analito, se puede determinar la concentracin del analito en muestras problemas, slo interpolando el valor de la absorbancia de la muestra.
2 El Fe2+ reacciona con la 1,10 fenantrolina y forma el complejo Fe (Ofen) 3 de color rojoanaranjado. La intensidad del color de este complejo es independiente de la acidez de la disolucin entre valores de pH de 3 y 9. Sin embargo, debido a que la velocidad de formacin del complejo es mayor en medio cido, la reaccin suele efectuarse a pH entre 3,0 y 3,5. El mtodo requiere que el Fe+3 presente en las muestras se deba reducir previamente con hidroxilamina antes de aadir la O fenantrolina. Los interferentes ms importantes son los agentes oxidantes fuertes, los polifosfato y los iones metlicos como Cu2+, Zn2+ , Ni2+ y Cd2+. La ley de Beer se cumple para concentraciones de hierro entre 0.2 a 4.0 ppm.

3
N

Fe

2+

Fe
N 3

2+

PREPARACIN DE LA CURVA DE CALIBRACIN Y DETERMINACIN DEL HIERRO PRESENTE EN LAS MUESTRAS. Se mide el porcentaje de transmitancia (%T) de cada solucin patrn y de las muestras, a 510 nm, que es la longitud de onda de mxima absorcin (ver espectro de absorcin del complejo). Para mantener constante la trayectoria (b) se usa la misma celda para realizar todas las mediciones de absorbancia, lo que hace necesario enjuagarla cada vez antes de usarla con una porcin de la solucin que va a medirse. Se efectan mediciones por duplicado con una solucin dada, para lo cual se vaciar el tubo de muestra y se volver a llenar con una porcin nueva de la solucin de anlisis. Las soluciones patrn se medirn de menor a mayor concentracin. Con los datos obtenidos de las cuatro soluciones patrn y el blanco, se prepara una grfica de calibrado de absorbancia en funcin de la concentracin (mg/L) del hierro. Seguidamente a partir de la absorbancia medida de cada una de la solucin problema y la grfica de calibrado, se determinar la concentracin del hierro en las soluciones desconocidas. La concentracin desconocida tambin puede obtenerse a partir de la ecuacin de la lnea recta obtenida por el mtodo de mnimos cuadrados.

Espectro de absorcin visible del complejo Fe(o-fenantrolina)32+


0.8
Absorbancia 0.6 0.4 0.2 0 380 430 480 530 580 630 680 Longitud de onda (nm)

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL I Preparacin de las soluciones patrones del complejo. 1. A partir de una solucin madre de hierro +3 de 1000 ppm, calcule el volumen necesario para preparar 50 mL de una solucin de 100 ppm en hierro +3 (Solucin cida). 2. Mida este volumen con una pipeta volumtrica y trasvselo a un baln aforado de 50 mL y enrase con agua destilada hasta la lnea de aforo. 3. Calcule el volumen necesario, de la solucin de concentracin 100 ppm en hierro, para a preparar por dilucin 100 mL de cada solucin patrn con las siguientes concentraciones: 1,0; 2,0; 3,0 y 4,0 ppm. 4. Mida los volmenes con pipetas volumtricas y virtalos en cuatro balones aforados de 100 mL. 5. A continuacin siguiendo estrictamente el orden, agregue a cada baln 1,0 mL de cloruro de hidroxilamina al 10 % p/v, 10,0 mL de solucin de acetato de sodio (NaOAc) 2,0 M y 10,0 mL de solucin 1,10 Fenantrolina y diluya con agua destilada hasta la lnea de aforo. Agite bien cada uno de los patrones y deje transcurrir 10 minutos para que se desarrolle el color rojo anaranjado. 6. Prepare el blanco en un baln aforado de 100 mL, adicione al baln aproximadamente 20 mL de agua destilada, 1,0 mL de cloruro de hidroxilamina, 10,0 mL de solucin de NaOAc 2,0 M y 10,0 mL de solucin 1,10 Fenantrolina y enrase con agua destilada hasta la lnea de aforo. Agite bien la mezcla. II. Preparacin del complejo empleando: a) Muestra de alambre dulce comercial. El Auxiliar Docente preparar con anterioridad la disolucin de la muestra de alambre dulce de la siguiente forma: Colocar aproximadamente 1,00 g de muestra de alambre dulce comercial en un beaker de 100 mL y lo disolver qumicamente al aadir 10 mL de HCl (1:1). Luego dentro de la campana, calentar en una plancha para disolucin total de la muestra de alambre. Enfriar y diluir con agua destilada hasta 100 mL. La muestra del alambre dulce disuelto, se les entregar al estudiante para que realic la preparacin del complejo hierro-1,10 fenantrolina y se les indicar en la etiqueta cuanto peso exacto del alambre fue disuelto y en que volumen.

Estudiante: Para formar el complejo con la muestra de Alambre dulce, Mida 1,0 mL de la solucin anterior y diluya hasta 100 mL con agua destilada. Luego tome dos alcuotas de 3 ml de la solucin resultante y virtalos en balones aforados de 100 mL, adicione a cada alcuota. 1,0 mL de cloruro de hidroxilamina, 10,0 mL de solucin de NaOAc 2,0 M y 10,0 mL de solucin 1,10 Fenantrolina y diluya con agua destilada hasta la lnea de aforo. Agite y deje transcurrir 10 minutos. b) Muestra Sinttica (muestra acuosa artificial) Estudiante: Para formar el complejo con la muestra sinttica, tome dos alcuota de 10 mL de la muestra sinttica de Hierro, virta cada una en un baln aforado de 100 mL, a continuacin agregue 1,0 mL de cloruro de hidroxilamina al 10 % p/v, 10,0 mL de solucin de acetato de sodio (NaOAc) 2,0 M y 10,0 mL de solucin 1,10 Fenantrolina, diluya con agua destilada hasta la lnea de aforo. Agite y deje transcurrir 10 minutos. Obtencin del % T y Absorbancia en el Spectronic 20. 1. Formar el complejo Fe-1,10 Fenantrolina en las soluciones patrn, el blanco y las muestras. 2. Una vez seleccionada la longitud de onda de trabajo (510 nm) ajuste el equipo a 0% T , luego con el blanco ajuste a 100% T. 3. Proceda a leer el porcentaje de Transmitancia a cada una de las soluciones patrn y muestras. Obtenga la Absorbancia respectiva aplicando la ecuacin A= 2 - log %T. Concentracin de Fe3+ (mg/L) %T Absorbancia Muestra Muestra Muestra Muestra 0 100 0 1 2 3 4
Alambre Alambre Sinttica Sinttica 2 1 2 1

NOTA 1 : Si el valor de la Absorbancia de alguna muestra, es menor o mayor que la de todos los

patrones, repita nuevamente todo el proceso para la muestra empleando otro factor de dilucin. Actividades a Desarrollar 1) Grafique en Excel la absorbancia de cada patrn vs concentracin de hierro y aplicando el mtodo de mnimos cuadrados encuentre la ecuacin de la lnea recta. Recuerde incluir el dato Concentracin =0, A=0. 2) A partir de la representacin grfica obtenida determine la pendiente y el coeficiente de absortividad (a) sabiendo que la longitud de la trayectoria del haz de radiacin (b) es 1 cm. 3) Tomando en cuenta el factor de dilucin respectivo determine la concentracin de hierro (mg/L) en la muestra sinttica. 4) Determine el % Fe en la muestra de alambre dulce comercial. 5) Aplicando el test de la t-student a un nivel de significancia de 0,05, compare el valor medio del % de Fe en el alambre obtenido por todos los grupos con el valor aceptado del 100 %.

Preguntas de Desarrollo 1) Explique porque se realizaron la medicin de la absorbancia a 510 nm y no a 530 nm. 2) Explique a qu tipo de transicin debe el espectro de absorcin del complejo Fe(o-fen)32+. 3) Explique por qu el espectro de absorcin del complejo es una banda ancha y no una seal aguda.
3

NOTA 2: Instrucciones generales para el manejo del Spectronic 20. Una vez conectado el equipo a la toma de 110 voltios, mediante un regulador de voltaje, ponga en marcha el instrumento por rotacin del amplificador (clavija izquierda en el frente del equipo) y deje que el espectrofotmetro se caliente por unos minutos. Por rotacin de la clavija del amplificador ajuste la aguja del medidor a 0% de Transmitancia. Introduzca la celda con el blanco en el portamuestra, de tal manera que coincidan las lneas ndices de la celda y el portamuestra, y cierre la cubierta del comportamiento del portamuestra. Ajuste la longitud de onda al valor deseado (510 nm) por rotacin del selector de longitudes de onda (parte superior del equipo). Ajuste el control de la lmpara (clavija de la derecha al frente del equipo) hasta que la aguja del medidor se site en 100 % de Transmitancia. - Retire la celda que contiene el blanco e introduzca la celda con el patrn o la muestra en el portamuestra y lea el % de Transmitancia o la Absorbancia sin hacer ningn otro ajuste. INVESTIGUE 1. Los siguientes trminos: 1. Radiacin electromagntica. 2. Radiacin monocromtica. 3. Espectro electromagntico. 4. Espectrofotmetro. 5. Transmitancia. 6. Absorbancia. 7. Espectro de absorcin. 8. Espectro de emisin. 9. Longitud de onda mxima. 10. Rango Visible. 11. Rango Ultra Violeta. 2. Transiciones que ocurren en las zonas de espectro electromagntico: Onda de radio, Microondas, Infrarrojo, Visible, Ultravioleta, Rayos X y Rayos gamma. 3. Ley de Lambert y Beer e indique los factores que ocasionan desviaciones de la Ley. 4. La Propiedad aditiva de la Ley de Lambert y Beer. 5. Explique, con base al tipo de transicin que ocurre en los tomos y molculas, las diferencias en sus espectros de absorcin.