5.9 PRCTICA 6.

-PERMEABILIDAD MEMBRANAL La clula, para llevar al cabo sus funciones vitales, requiere de un intercambio constante de materia y energa con su entorno. Para esto, las molculas, requieren atravesar la membrana que la recubre. La membrana plasmtica, por el tipo de molculas que la componen, es de naturaleza no polar. Las molculas no polares tendrn libre paso a travs de ella, dependiendo de su grado de solubilidad en lpidos y de su tamao; a mayor liposolubilidad, la penetracin es ms rpida. Una molcula debe satisfacer dos condiciones para difundir al interior de una clula a travs de la membrana plasmtica: Debe estar presente en concentracin ms elevada fuera de la clula, y la membrana debe ser permeable a ella. Una membrana puede ser permeable a un soluto determinado porque pasa directamente a travs de la bicapa de lpidos, o porque es capaz de atravesar un poro situado en el espesor de la membrana que impide el contacto del soluto con las molculas lipdicas de la bicapa. Otro factor que determina la velocidad de penetracin de un compuesto a travs de una membrana, es su tamao. Las molculas de menor tamao tienden a penetrar en la bicapa de lpidos de una membrana con mayor rapidez en comparacin con la molcula ms grande. Las molculas de agua se desplazan con mucha mayor rapidez a travs de una membrana celular que los iones y pequeos solutos polares comnmente presentes en las clulas. Debido a esta diferencia de penetrabilidad del agua en comparacin con solutos se dice que las membranas son semipermeables. El agua se mueve rpidamente a travs de una membrana semipermeable desde una regin de baja concentracin hasta otra de alta concentracin de soluto. Este proceso se denomina smosis y puede demostrarse fcilmente colocando la clula en una solucin con una concentracin de soluto diferente de la presente en el interior de ella. Cuando se colocan las clulas en una solucin con una concentracin salina similar a la de su medio (isotnica), la concentracin de agua permanece constante dentro y fuera de la clula, por lo que su volumen y forma no se alteran. Los eritrocitos humanos pueden conservarse por largos periodos en una solucin de cloruro de sodio al 0.9% sin presentar alteracin ni hemlisis. Cuando las clulas son colocadas en soluciones de menor concentracin de soluto que la propia (hipotnicas), el agua tiende a pasar hacia donde est la mayor concentracin, dando lugar a que

las clulas se hinchen. Por otra parte, cuando se colocan en soluciones de mayor concentracin de soluto que la de ellas (hipertnicas), el agua tiende a salir ocasionando la contraccin celular. En las clulas vegetales, la presencia de una pared celular rgida, les ayuda a evitar un incremento excesivo de volumen ante soluciones hipotnicas, sin embargo, en soluciones hipertnicas, s se puede apreciar la contraccin del citoplasma por la prdida de agua. Objetivos Observar el comportamiento de las clulas vegetales y animales frente a soluciones con diferente concentracin de soluto. En la segunda parte de la prctica se observar el fenmeno de la permeabilidad en una membrana artificial. Materiales y reactivos 1 vaso de precipitado de 500 ml 1 microscopio de campo claro 1 vidrio de reloj Papel seda * Lanceta 3 pipetas Pasteur 5 ml de las soluciones de NaCl 0.15 M (0.9%) 0.075 M, y 0.3 M 2 ml de fenolftalena 2 ml de lugol Parrilla de calentamiento Varilla de vidrio NOTAS: 1. Tenga cuidado de utilizar la pipeta correspondiente para cada solucin y de no confundirlas, de hacerlo, se alterar la concentracin de las soluciones. 15 ml de solucin de almidn con hidrxido de Amonio Pipeta con etanol Una preparacin fija Papel celofn dulce * Etiquetas adheribles * Hilo * Portaobjetos Cubreobjetos Elodea, algodn * Regla graduada en cm * 1 vaso de precipitado de 2 litros Tijeras *

2. Etiquete debidamente los portaobjetos para evitar confusiones en sus observaciones y resultados. 3. Evite la desecacin de sus preparaciones. Procedimiento Estudio microscpico 1. Haga la iluminacin de Khler utilizando una preparacin fija. 2. Con una lanceta estril pique la yema de cualquiera de sus dedos y deposite una gota de sangre en un vidrio de reloj perfectamente limpio y etiquetado que contenga 2 ml de la solucin de NaCl 0.15 M (0.9%), deje reposar un minuto. Con ayuda de una pipeta Pasteur coloque una gota de esta suspensin celular en un portaobjetos, despus coloque el cubreobjetos y observe. Enfoque con el objetivo de 10X y pase al objetivo de 40X para hacer sus observaciones. 3. Repetir el mismo procedimiento con la solucin de NaCl 0.075 M, y con la de 0.3 M. 4. En un vidrio de reloj que contenga 2 ml de la solucin de cloruro de sodio 0.15 M, deposite una hoja de elodea, djela reposar de 2 a 3 min. Coloque la hoja en un portaobjetos, cbrala con el cubreobjetos y observe al microscopio a 10X y 40X. Ponga atencin en el movimiento de los cloroplastos. 5. Repita el paso anterior con las otras dos concentraciones. Estudio macroscpico con una membrana artificial 1. Por seccin: En un vaso de precipitado coloque 2 litros agua de la llave, ponga en l un cuadro de papel celofn de 20 x 20 cm por equipo y hirvalo por 15 minutos (Figura 20). Squelo y djelo enfriar.

Figura 20. Vaso de precipitados conteniendo los cuadros de papel celofn. Fuente: Ducolomb et al., 2012.

2. Una todas las orillas del papel celofn y coloque en su interior 15 ml de la solucin de almidn con hidrxido de amonio y amrrelo con hilo de tal manera que la bolsa que se forma quede perfectamente cerrada (Figura 12). 3. Enjuague la bolsa con agua de la llave. 4. Agite la bolsa dentro de un vaso de precipitado de 500 mI que contenga agua de la llave y 5 gotas de fenolftalena durante 5 minutos. Observe si cambia el color del agua. 5. Abra la bolsa y agregue 4 gotas de la solucin de lugol, observe si aparece color.

Figura 21. Bolsa de celofn que contiene la solucin de almidn con hidrxido de amonio. Fuente: Ducolomb et al., 2012. 6. Agregue 4 gotas de lugol al agua del vaso de precipitado y compare con la coloracin observada en el punto anterior. Cuestionario 1. Esquematice el comportamiento de las clulas vegetales y animales frente a las concentraciones de NaCl. 2. De acuerdo en las observaciones, llene la siguiente tabla:

Muestra Eritrocitos

Molaridad 0,075 M/L 0,15 M/L 0,3 M/L

Tipo de solucin Isotnica

Observaciones

Elodea

0,075 M/L 0,15 M/L 0,3 M/L

3. Con base en sus resultados y tomando como gua los siguientes enunciados, redacte la discusin de la prctica: 4. Diga qu propsito tiene colocar las clulas en una solucin isotnica. 5. Qu diferencias observ entre las clulas animales y vegetales en presencia de la solucin hipotnica? Explique la causa. 6. Qu efecto observ en las clulas al colocarlas en una solucin hipertnica? 7. De las sustancias utilizadas (almidn, hidrxido de amonio y fenolftalena), diga cul(es) atravesaron la membrana de celofn y cmo se demostr esto. Diga cules no atravesaron y a qu se debe. 8. Si los resultados obtenidos en su prctica no fueron los esperados, explique a qu pudo deberse). Bibliografa 1. Alberts, B., Bray, D., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K., Watson, J. D. 2004. Biologa

Molecular de la Clula. Omega. Espaa.

2. Becker, W. M., Kleinsmith, L. J., Hardin, J. 2006. El Mundo de la Clula. PearsonAddison Wesley, Mxico. 3. Ducolomb Ivone, Fierro, Reina., Gonzlez, Cristina., Ortiz Rocio., Rodrguez, Ernesto. Manual de Prcticas de Laboratorio de Biologa Celular. 2012. Divisin de Ciencias Biolgicas y de la Salud. Universidad Autnoma Metropolitana. Unidad Iztapalaca. Mexico. 4. Karp, G. 2009. Biologa Celular y Molecular: conceptos y experimentos. McGraw Hill. Mxico.

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Biologa Celular y Molecular. Mdica Panamericana.