Examen en Placa de Un Paso para Rotavirus (Heces) Inserto REF IRO-602 Espaol

Un examen rpido de un paso para la deteccin cualitativa de Rotavirus en heces humanas. Solo para uso profesional de diagnstico in vitro. USO INDICADO El Examen en Placa de Un Paso de Rotavirus (Heces) es un inmunoensayo cromatogrfico para la deteccin cualitativa rpida de Rotavirus en muestras humanas como ayuda en el diagnstico de infecciones de rotavirus. SUMARIO El Rotavirus es el agente responsable mas comn por la gastroenteritis aguda, principalmente en nios 1 pequeos. Su descubrimiento en 1973 y su asociacin con la gastroenteritis infantil represent un avance muy importante en el estudio de la gastroenteritis no causada por infeccin bacterial aguda. El Rotavirus es transmitido va oro-fecal con un periodo de incubacin de 1-3 das. Sin embargo las muestras colectadas realizadas durante el segundo y quinto da de la enfermedad son ideales para la deteccin del antgeno, el rotavirus puede an ser encontrado mientras contine la diarrea. La gastroenteritis rotaviral puede causar mortalidad en poblaciones de riesgo como las infantiles, de edad avanzada y pacientes inmunocomprometidos.2 En climas temperados, las infecciones de rotavirus ocurren mayormente en los meses de invierno. Se ha informado de las afecciones endmicas as como las epidmicas que afectan a miles de personas.3 El 50% de las muestras, tomadas a nios hospitalizados que sufran de enfermedades entricas agudas, resultaron positivas para rotavirus.4 Los virus replican en el ncleo celular y tienden a ser huspedes de especies especficas produciendo un efecto sicoptico caracterstico (CPE). Debido a que el rotavirus es extremadamente difcil de cultivar, es inusual usar mtodos de aislamiento del virus para diagnosticar una infeccin. En cambio una variedad de tcnicas se han desarrollado para la deteccin del virus en heces. El Examen en Placa de Un Paso para Rotavirus (Heces) es un inmunoensayo cromatogrfico para la deteccin cualitativa de rotavirus en muestras de heces humanas, dando resultados en 10 minutos. La prueba utiliza anticuerpos especficos para rotavirus para selectivamente detectar rotavirus de muestras de heces humanas. PRINCIPIO El Examen en Placa de Un Paso de Rotavirus (Heces) es un inmunoensayo de flujo lateral cualitativo para la deteccin de Rotavirus en heces. La membrana es precubierta con un anticuerpo anti Rotavirus en la banda de la regin de la prueba. Durante la prueba, el espcimen reacciona con partculas cubiertas con anticuerpo anti-rotavirus. La mezcla migra hacia arriba en la membrana cromatogrficamente por accin capilar para reaccionar con el anticuerpo de la prueba y genera una lnea coloreada. La presencia de una lnea coloreada en la banda de la regin de la prueba indica un resultado positivo mientras que su ausencia indica un resultado negativo. Para servir como un proceso una lnea coloreada siempre aparecer en la banda de control, indicando que un volumen apropiado del espcimen ha sido incluido y que la reaccin de la membrana ha ocurrido. REACTIVOS El examen contiene partculas recubiertas de anticuerpo de anti-rotavirus y anticuerpo de antirotavirus recubierto en la membrana. PRECAUCIONES Para Diagnstico profesional in vitro nicamente. No usar la prueba despus de la fecha de expiracin. La prueba debe permanecer en el sobre sellado hasta su uso. No coma, beba o fume en el rea donde el espcimen o los kits son manipulados. No utilizar la prueba si el sobre esta deteriorado. Maneje los especimenes como si contuviesen agentes infecciosos. Observe las precauciones establecidas contra cualquier dao microbiolgico durante la prueba y siga los procedimientos estndares para un buen descarte de los especimenes. Use vestimenta protectora como mandiles de laboratorios, guantes descartables, proteccin para los ojos mientras los especimenes son examinados. La prueba, una vez utilizado, debe desecharse de acuerdo con las regulaciones locales. La humedad y temperatura pueden afectar los resultados adversamente. ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD Almacene como viene empacado en el sobre sellado ya sea a temperatura ambiente o refrigerada (2-30C). El dispositivo de casette de la prueba es estable hasta su fecha de expiracin impreso en el sobre sellado. El dispositivo o casette de la prueba debe permanecer en su sobre sellado hasta su uso. NO CONGELAR. No utilizar la prueba despus de la fecha de expiracin. COLECCIN Y PREPARACIN DE LA MUESTRA Se mejora la deteccin viral colectando las muestras al comienzo de los sntomas. Se ha informado que la mxima excrecin de rotavirus en las heces de pacientes con gastroenteritis ocurre en los das 3-5 despus de los primeros sntomas. Si las muestras se colectan mucho despus de los primeros sntomas de diarrea, la cantidad de antgeno pueda que no sea suficiente para obtener una reaccin positiva o el antgeno detectado pudiera no estar relacionado con el episodio diarreico. Las muestras de heces deben ser colectadas en un recipiente a prueba de agua, limpio, seco que no contenga detergentes, preservativos o medios de cultivo. Los reactivos deben estar a temperatura ambiente antes de usarlos. MATERIALES Materiales Suministrados Placas Cuentagotas Tubos colectores de espcimen con bufer de extraccin Ficha tcnica

Materiales Requeridos no Suministrados Colector para la coleccin de la muestra Cronmetro Centrfuga y pipeta para dispensar 80 L DIRECCIONES PARA SU USO Deje que la placa, la muestra, buffer y/o los controles alcancen una temperatura ambiente estable (15-30C) antes de la prueba. 1. Para colectar muestras fecales: Coleccione suficiente cantidad de heces (1-2mL o 1-2g) en un recipiente limpio y seco para obtener suficientes partculas de virus. Los mejores resultados se obtienen si el examen se realiza en las 6 horas siguientes a la coleccin de la muestra. Las muestras colectadas pueden ser almacenadas por 3 das a temperatura de 2-8C si no han sido examinadas durante las 6 primeras horas. Para almacenajes de largo tiempo, las muestras deben mantenerse a una temperatura menor a -20C. 2. Para procesar muestras fecales: Para Muestras Slidas: Desenrosque la tapa del tubo colector de la muestra, luego al azar clave el aplicador dentro de la muestra fecal en al menos 3 sitios diferentes para colectar aproximadamente 50 mg de heces (equivalente a de guisante). No sacuda la muestra fecal. Para Muestras Lquidas: Sostenga el gotero verticalmente, aspire la muestra fecal, y luego transfiere 2 gotas (aproximadamente 50 L) dentro del tubo colector de la muestra que contiene el buffer de extraccin. Ajuste la tapa del tubo colector de la muestra, luego agite el tubo vigorosamente para mezclar la muestra con el buffer de extraccin. 3. Antes de abrir el sobre ste debe encontrarse a temperatura ambiente. Remueva la placa del sobre laminado y selo tan pronto sea posible. Los mejores resultados se obtienen cuando el examen se realiza inmediatamente despus de abrirse el sobre laminado. 4. Sostenga el tubo colector hacia arriba y rompa la punta del tubo colector de la muestra. Invierta el tubo colector de la muestra y transfiera 2 gotas completas de la muestra extrada (aproximadamente 80 L) al pozo de la muestra (S) de la placa del examen, luego empiece a cronometrar. Evite atrapar burbujas en el pozo de la muestra (S). Observe la ilustracin de abajo. 5. Espere hasta que las lneas coloreadas aparezcan. Lea los resultados a los 10 minutos despus de haber dispensado las gotas de la muestra. No lea resultados despus de 20 minutos. Nota: Si la muestra no migra (presencia de partculas) centrifugue la muestra diluida que contiene el vial del buffer de extraccin. Colecte 80 L del sper nadante y dispnselo en el pozo de la muestra (S). Comience a cronometrar y contine desde el paso 5 hacia adelante de estas instrucciones.

LIMITACIONES 1. El Examen en Placa de Un Paso de Rotavirus (Heces) es para uso diagnstico in vitro nicamente. El examen debe ser usado para la deteccin de Rotavirus en muestras de heces humanas nicamente. Ni el valor cuantitativo ni la proporcin del incremento en la concentracin de rotavirus pueden ser determinadas por esta prueba cualitativa. 2. El Examen en Placa de Un Paso de Rotavirus (Heces) solo indica la presencia de rotavirus en la muestra y no debe ser usada como el nico criterio para la confirmacin de que el rotavirus sea el agente etiolgico de la diarrea. 3. Como todas las pruebas de diagnstico los resultados deben ser interpretados conjuntamente con otra informacin clnica que est al alcance del mdico. 4. Si el resultado de la prueba resulta negativo y los sntomas clnicos persisten, exmenes adicionales utilizando otros mtodos clnicos son recomendados. Un resultado negativo en ningn momento excluye la posibilidad de infeccin de rotavirus con baja concentracin de partculas de virus. VALORES ESPERADOS El Examen en Placa de Un Paso de Rotavirus (Heces) ha sido comparado con el mtodo de aglutinacin por Ltex, sealando una exactitud total de >99,0%. RENDIMIENTO DE LAS CHARATERISTICAS Sensibilidad Clnica, Especificidad y Exactitud El rendimiento del Examen en Placa de Un Paso de Rotavirus (Heces) ha sido evaluado con muestras clnicas colectadas de nios y adultos jvenes comparndolos con mtodos de Aglutinacin por Ltex. Los resultados muestran que la sensibilidad relativa del Examen en Placa de Un Paso de Rotavirus (Heces) es >99,9% y la especificidad relativa es 97,8%. Examen en Placa de Un Paso de Rotavirus vs. Aglutinacin x Ltex Mtodo Aglutinacin x Ltex Resultados Totales Positivo Negativo Examen en Placa Resultados de Un Paso de 178 Positivo 3 181 Rotavirus 0 Negativo 131 131 Resultados Totales 178 134 312 Sensibilidad Relativa: >99,9% (97,9% - 100,0%)* Especificacin Relativa: 97,8% (93,6% - 99,5%)* Exactitud Relativa: 99,0% (97,2% - 99,8%)* *95% Confidencia de Intervalos Precisin Intra-Ensayo Las Intra-corridas de precisin han sido determinadas usando 10 rplicas de cuatro muestras: una negativa, una baja positiva, una mediana positiva y una alta positiva. Las muestras fueron correctamente identificadas >99% de las veces. Inter-Ensayo Entre-corridas la precisin fue determinada mediante 10 ensayos independientes en las mismas cuatro muestras: una negativa, una baja positiva una mediana positiva y una alta positiva. Las muestras fueron correctamente identificadas >99% de las veces. Reaccin Cruzada La reaccin cruzada fue estudiada con los siguientes organismos a 1,0 x 109 organismos/ml. Los siguientes organismos dieron resultados negativos cuando fueron examinados con el Examen en Placa de Un Paso para Rotavirus (Heces). Staphylococcus aureus Proteus mirabilis Neisseria gonorrhea Pseudomonas aeruginosa Acinetobacter spp Group B Streptococcus Enterococcus faecalis Salmonella choleraesius Proteus vulgaris Group C Streptococcus Gardnerella vaginalis Enterococcus faecium Klebsiella pneumoniae Acinetobacter calcoaceticus Hemophilus influenzae Branhamella catarrhalis E.coli Neisseria meningitidis Candida albicans Chlamydia trachomatis BIBLIOGRAFIA 1. WILHELMI I, ROMAN E, SANCHEZ-FAUQUIER A. Viruses causing gastroenteritis. Clin Microbiol Infect. April. 2003, vol.9:247-262 2. Cubitt, WD (1982) Rotavirus Infection: An Unexpected Hazard in Units Caring for the Elderly. Geriatric Medicine Today 1: 33-38 3. Hung, T et al (1984) Waterborne outbreak of Rotavirus Diarrhea in Adults in China caused by a Novel Rotavirus. Lancet, May 26;1(8387): 1139-1142 4. Cukor, G; Perron, DM; Hudson, R and Blacklow, NR (1984) Detection of Rotavirus in Human Stools by Using Monoclonal Antibody. J. Clin. Microl. 19: 888-892
ndice de Smbolos Atencin, ver instrucciones de uso Solo para uso de diagnstico in vitro Almacenar entre 2-30C Pruebas por kit Caducidad Nmero de lote REF Representante Autorizado No reutilizar N de referencia

INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS (Consultar la figura anterior) POSITIVO:* Dos lneas coloreadas aparecen. Una lnea debe estar en la banda de regin de control (C) y otra lnea debe estar en la banda de la regin de la prueba (T). *NOTA: La intensidad del color de la banda de la regin de la prueba (T) puede variar dependiendo en la concentracin de la Rotavirus presente en el espcimen. Por lo tanto cualquier tonalidad del color en la regin de la prueba (T) debe ser considerado positivo. NEGATIVO: Una lnea coloreada aparece en la banda de control de la regin (C). Ningn color aparente aparece en la banda de la regin de la prueba (T). NO VLIDO: La lnea de control no aparece. Volumen insuficiente del espcimen o tcnicas procesales incorrectas son las razones ms frecuentes para que el control de la lnea no aparezca. Revise el procedimiento y repita la prueba con un nuevo dispositivo, si el problema persiste, descontine el uso del kit inmediatamente y contacte a su distribuidor local. CONTROL DE CALIDAD Un proceso de control esta incluido en la prueba. Una lnea coloreada que aparece en la banda de la regin de control (C) es considerada un procedimiento de control interno. Confirma el uso de volumen suficiente de espcimen, y una adecuada reaccin de la membrana y tcnicas procesales correctas. Estndares de control no son proporcionados con este kit, sin embargo se recomienda controles positivos y negativos para ser usados con la prueba como una buena prctica de laboratorio y para verificar un buen rendimiento de ella.

Fabricante

ACON Laboratories, Inc. 4108 Sorrento Valley Boulevard, San Diego, CA 92121, USA

MDSS GmbH Schiffgraben 41 30175 Hannover, Germany

Nmero: 1150390301 Fecha Efectiva: 2007-05-28