Structura genei Gena (din gr. genos descendent) reprezint unitatea elementar a ereditii.

. Pentru a specifica particularitile ereditii G. Mendel (1865) a folosit termenul de factor ereditar. Noiunea de gen a fost propus de W.I.Johannsen (1909) pentru a desemna unitatea ereditar de baz, care este localizat n cromozomi i nu prezint subdiviziuni. Genele sunt redate prin simboluri din 1-5 litere, care desemneaz succint caracterul afectat n limbile latin sau englez. Tipul normal (slbatic) al caracterului respectiv se noteaz cu semnul +. Genele aprute prin modificarea genelor normale sunt numite gene mutante. De regul, genele slbatice sunt dominante (predomin n prima generaie). n rezultatul procesului de mutaie, una i aceeai gen poate aprea sub mai multe forme discrete, cunoscute sub denumirea de alele. Alelele sunt expresii difereniate ale unui caracter. n fiecare cromozom exist doar o singur gen alel. n organismele diploide, fiecare gen se afl n doz dubl n cei doi cromozomi omologi, ocupnd acelai locus i fiind gene identice (alele). n cazul n care gena a suferit mai multe procese mutaionale n aceti loci se pot gsi gene polialele. n funcie de plasarea lor n autozomi sau heterozomi, genele pot fi autozomale sau heterozomale. n cazul plasrii lor n heterozomi, genele manifest fenomenul de sexlinkage, transmindu-se cu frecven mai mare la unul dintre sexe. Dup funcia lor, genele sunt divizate n: gene structurale, gene reglatoare i gene operatoare. Genele structurale codific diferite proteine cu rol structural sau enzimatic. Cele operatoare declaneaz sau nu activitatea genelor structurale. Genele reglatoare controleaz i dirijeaz activitatea genei operatoare i a genei structurale. Evoluia conceptului de gen T.H.Morgan i colaboratorii si (1910), n rezultatul investigaiilor efectuate cu musculiele de oet, au stabilit c genele sunt localizate n cromozomi i sunt particule materiale, aranjate liniar de-a lungul cromozomului, iar fiecare gen ocup un loc bine definit, care se numete locus. Pornind de la aceast idee, a fost elaborat concepia clasic, conform creia gena are trei caracteristici de baz:

unitate funcional (determin caracteristicile ereditare); unitate mutaional (structura chimic a genei se schimb prin mutaie, ceea ce duce la apariia caracterului nou); unitate de recombinare (n cadrul procesului de crossing-over are loc un schimb de gene corespunztoare ntre cromatidele nesurori ale cromozomilor omologi).

n concepia clasic gena stabilete ordinea aminoacizilor n molecula proteic ce determin caracterul dat. O gen este alctuit din aproximativ 900-1500 de nucleotizi din lanul de ADN (sau ARN viral). n anul 1941 concepia clasic despre gen s-a completat cu ipoteza o gen o enzim, formulat de G.W.Beadle i E.L.Tatum. Iradiind cu raze ultraviolete culturile prototrofe de ciuperci Neurospora sitophila i Neurospora crassa, ei au obinut o serie de mutaii biochimice dependente de sinteza anumitor enzime. G.W.Beadle i E.L.Tatum consider c ntre gene i enzime exist raportul 1:1. Ipoteza o gen o enzim susine c fiecare gen controleaz sinteza i funcionarea unei anumite enzime. Constatarea, dup anul 1944, a faptului c genele sunt molecule complexe, constituite din acizi nucleici (ADN i ARN la unii virui), a determinat schimbarea vechii concepii despre gen. S-a stabilit c gena corespunde unui segment de acid nucleic format dintr-o secven liniar de nucleotizi n care este nscris un mesaj chimic sau informaia ereditar. Dup apariia geneticii moleculare, n anii 50-60, gena este definit drept un segment de ADN sau ARN care conine informaia genetic necesar sintezei unei catene polipeptidice. Gena este alctuit dintr-o secven de codoni care codific succesiunea aminoacizilor ntr-o caten polipeptidic. Conform concepiei o gen o caten polipeptidic, unele proteine sunt sintetizate pe baza informaiei genetice din dou sau mai multe gene. De exemplu, hemoglobina A de la om este alctuit din dou catene polipeptidice a i b i este determinat de dou gene diferite. V.M.Ingram (1957) pune n relief particularitile de structur a hemoglobinei (HbS), diferit de cea normal (HbA), prin substituia glutaminei cu valina n poziia a 6a a lanului ). S.Benzer (1957), cercetnd mutaiile r a fagului T4 ce paraziteaz pe E.coli, a dovedit c mutaiile i recombinrile pot avea loc la nivel intragenic, adic la nivelul codonilor i a nucleotizilor aparte. El propune o serie de noiuni noi, i anume:

muton cea mai mic subdiviziune a genei, echivalent dup mrime cu un nucleotid, a crui schimbare se soldeaz cu o mutaie; recon cea mai mic subdiviziune a genei care poate fi separat i schimbat prin crossing-over; cistron cea mai mic parte funcional a materialului genetic reprezentat de ADN (sau ARN viral).

P.A.Sharp (1977) a constatat c segmentul de ADN dintr-o gen particular este mult mai lung dect segmentul respectiv de ARNm transcris de pe aceast gen. Astfel, gena const din secvene informaionale i neinformaionale. W.Gilbert (1978) a propus termenii de exon pentru denumirea fragmentelor informaionale i intron pentru fragmentele neinformaionale.

B.Mc.Clintorck nc n an.1940 a demonstrat fenomenul de instabilitate somatic la porumb. Datorit acestui fenomen, pe frunze, pe tulpini, pe inflorescene, pe endospermul boabelor etc. apar pete de culoare. Pentru a explica fenomenul, B.Mc.Clintorck a presupus c exist elemente de control, care au capacitatea de a circula dintr-o regiune n alta a genomului i se pot insera n diverse locuri n genom. Aceste elemente au fost numite elemente genetice transpozabile (transpozoni). Astfel, s-a dovedit c gena este o unitate mult mai complex dect se credea iniial. Conform concepiei moderne:

gena constituie unitatea funcional a informaiei ereditare; gena prezint segmentul de ADN (sau ARN viral) format n medie din 10001500 de nucleotizi dispui liniar; n cadrul genei pot avea loc recombinri i mutaii; exist gene structurale i reglatoare; genele structurale codific sinteza proteinelor; genele reglatoare controleaz i dirijeaz aciunea genelor structurale; exist diferite mecanisme ale reglrii activitii genelor la procariote i eucariote. Activitatea genic la procariote

Materialul genetic la procariote se caracterizeaz printr-o serie de particulariti, i anume: 1. genomul bacterian este alctuit din dou categorii de determinani genetici: a. genele eseniale (eucromozomiale), localizate n cromozomul bacterian; b. genele accesorii, localizate n afara cromozomului bacterian, exist, mai mult sau mai puin, autonom (plasmidele, elementele genetice transpozabile, fagii); 2. molecula de ADN este circular (marginile ei sunt unite prin legturi covalente); 3. molecula de ADN nu formeaz complexe cu proteinele histonice i nehistonice (este nud); 4. genomul bacterian este reprezentat printr-un numr relativ restrns de gene; 5. genomul bacterian conine un singur grup linkage (caracteristic cromozomului bacterian sau nucleoidului); 6. bacteriile sunt organisme haploide (atunci cnd nu are loc replicarea ADN), dar pot fi diploide i parial diploide, n funcie de sinteza ADN); 7. transmiterea caracterelor ereditare este diferit de cea a eucariotelor, ntruct lipsete procesul clasic al reproducerii sexuale. Cromozomul bacterian este alctuit dintr-o molecul de ADN dublu catenar circular. Lungimea ei variaz ntre 10001400 m, diametrul fiind de 2,5 nm. Numrul de nucleotizi la E.coli este de 4,1106, iar masa molecular de circa 2,5 109 daltoni.

Se presupune, c nucleoidul vzut la microscopul electronic reprezint ADN-ul condensat, genetic neactiv (Ryter, Cohen, 1975), iar secvenele de ADN ce se transcriu sunt prezentate sub form de bucle, externe nucleoidului. Numrul de gene n cromozomul bacterian este de cteva mii (de exemplu, la E.coli circa 4000). Dup funcia lor, genele respective se divizeaz n:

gene structurale, ce determin structura primar a proteinelor (circa 90% din gene). n genom ele pot fi grupate n operoni (Jacob, Monod, 1961); gene reglatoare, ce determin activitatea genelor structurale prin intermediul produsului lor (represor i aporepresor); gene operatoare, ce reprezint receptorul semnalelor (represorului sau inductorului) i asigur funcionarea ordonat a operonului. Ele sunt parte component a operonului; promotor gen ce reprezint un sector al operonului de care se leag ARN polimeraza, i determin nceputul transcripiei; terminator, ce reprezint un sector al operonului unde are locul sfritul transcripiei informaiei genetice necesare; iniiator gen ce determin sinteza produsului care declaneaz replicarea ADN; replicator ce reprezint uniti funcionale de ADN i dirijeaz replicarea; secvene de inserie reprezint fragmente mici de ADN (1-2 gene, circa 8001400 de nucleotizi) care se pot deplasa n genomul bacterian, singure sau n complex cu unele gene structurale (transpozoni); suprafee de legare fragmente de ADN care se leag de membrana celular (mezozomi); gene rARN i tARN ce determin sinteza rARN (10-20 de gene) i tARN (circa 50 de gene); gene criptice (tcute) ce nu se manifest (exprim) n mod normal n cursul vieii.

Odat cu descoperirea importanei acizilor nucleici n biosinteza proteinelor i a mecanismelor de realizare a mesajului genetic a aprut problema modalitii de asigurare a cantitii optime de proteine necesare organismului. Se tie, c sinteza unei proteine sau a unei enzime nu este constant n timp, ea trebuie s se adapteze variatelor cerine ale funciei celulei. Schema general a reglrii activitii genelor procariote a fost propus de geneticienii F.Jacob i J.Monod n 1961 i expus n lucrarea Mecanismul reglajului genetic n sinteza proteinelor. Dup schema de mai jos, genele cu funcii nrudite, care funcioneaz asociat, sunt organizate n operon (fig.1).

Fig. 1. Schema unui operon: R gena reglatoare; P promotor; O operator; S gene structurale; T terminator; r represor. Un operon este transcris ntr-o singur molecul de ARNm i este alctuit din genapromotor, gena-operator, gena reglatoare, genele structurale i terminator. Promotorul reprezint o poriune specific de ADN care iniiaz transcripia mesajului genetic de unde ncepe sinteza moleculelor de ARNm. De promotor se leag ARNpolimeraza. Aceast secven cuprinde cel puin 1000 de nucleotizi. Urmeaz gena operator, de care depinde funcionarea operonului. Operatorul servete drept int pentru proteina represor, care mpiedic o gen s funcioneze, adic s fie transcris i translat. Urmeaz genele structurale, care controleaz sinteza unor proteine specifice cu rol structural sau enzimatic. La procariote genele structurale funcioneaz n grup, iar la eucariote funcioneaz individual. Genele structurale sunt urmate de un sector de ADN, numit terminator, care condiioneaz sfritul transcripiei ARNm. Genele promotor i operator sunt precedate de ctre o gen reglatoare. Ea este separat de genele operonului, asupra cruia acioneaz. Gena reglatoare, prin produsul su chimic (represor), dirijeaz activitatea genei operatoare i a genelor structurale prin inducia sau represia transcripiei. Reglajul genetic la procariote este de dou tipuri: 1. inductibil intervin n sintez enzimele catabolismului. n lipsa substratului n celula bacterian, proteina represor se fixeaz pe gena operator i blocheaz transcripia genelor funcionale. n consecin, nu se produc enzime, ce ar participa la descompunerea substratului. Atunci cnd n celul apare substratul, moleculele lui se fixeaz pe represor. Astfel, acesta nu se mai poate fixa pe operator. n rezultat, genele structurale se activeaz, are loc transcripia ARNm i sinteza enzimelor specifice necesare pentru metabolizarea substratului. Atta timp ct n mediu i n celul este prezent substratul, enzima ce-l descompune se sintetizeaz permanent. Dac substratul din mediu este consumat,

represorul se elibereaz i trece n form activ, blocheaz operatorul, iar genele structurale nu mai funcioneaz. 2. represibil intervine n sinteza enzimelor anabolismului. Conform acestui mecanism, proteina represor blocheaz operatorul numai atunci cnd este asociat cu substratul. Cnd n celula bacterian nu exist substrat, operatorul este liber i genele structurale funcioneaz. Are loc transcripia ARNm i sinteza enzimelor necesare. Acest proces continu pn cnd apare surplus de substrat, care se unete cu proteina represor i blocheaz operatorul. n rezultat, genele structurale se inactiveaz i sinteza enzimei respective se ntrerupe.

Fig. 2. Structura genei bacteriene i a genei eucariote. Rezultatele experienelor lui F.Jacob i J.Monod au fost confirmate i completate n multe laboratoare. Sistemul operonului reprezint unul dintre mecanismele de reglare a sintezei dintre proteine. Se presupune c organismele eucariote posed sisteme asemntoare, dar au un caracter mai complicat. Activitatea genelor la eucariote

La eucariote materialul genetic are o organizare cu mult mai complex. Moleculele liniare de ADN, dublu catenare, formeaz complexe cu proteinele histonice, alctuind fibra elementar nucleohistonic (nucleozomal) (fig.2). Aceste substane, completndu-se cu ARN i proteinele nehistonice, formeaz cromatina, materialul din care se difereniaz, n procesul de diviziune, cromozomii. De menionat c la eucariote materialul genetic se caracterizeaz printr-o discontinuitate genetic (n molecula de ADN se succed secvene informaionale (exoni) i neinformaionale (introni), care sunt eliminate n procesul de transcripie a informaiei genetice (fig.3). Purttorii materiali ai informaiei ereditare sunt considerai cromozomii. Termenul a fost propus n anul 1888 de ctre W.Waldeyer. Acesta a descoperit nite corpusculi cromatici n celulele n diviziune. Cromozomii (din gr.chroma culoare, soma corp) reprezint uniti structurale compacte, constante, alctuite din acizi nucleici i proteine, vizibili n timpul diviziunii celulare la o tratare cu colorani bazici. Cromozomii au un rol deosebit n viaa celulei (organismului), deoarece asigur transmiterea caracterelor la descendeni.

Fig. 3. Structura nucleozomului (dup Alberts).

La organismele eucariote, genele nu sunt organizate n operoni, sistemele de reglaj fiind mult mai complicate dect la bacterii. n general, reglarea activitii genelor la eucariote este mai puin studiat. Aceast situaie este determinat de o serie de factori, printre care: existena nucleului separat de citoplasm, structura complicat a cromozomului, influena sistemelor generale de reglare a organismului, n special a hormonilor etc. S-a descoperit c unii hormoni steroizi pot determina activitatea/inactivitatea anumitor gene. Conform datelor lui Watson i col.(1983), aceti hormoni se fixeaz n citoplasm pe moleculele de receptori specifici. Aceste complexe receptor-hormon ptrund n nucleu

(n timpul interfazei), unde mai apoi se unesc cu cromozomii i afecteaz (pozitiv sau negativ) sinteza proteinelor. S-a stabilit c ARNm din celulele eucariote sunt monocistronice, astfel c un ARNm codific o singur protein. La eucariote, n cromozomul condensat cu histone, ADN-ul nu funcioneaz ca matrice pentru transcripia ARNm, genele sunt n stare de represare. Trecerea acestor gene n stare activ este posibil doar prin nlturarea histonelor i eliberarea ADN-ului. Eliminarea histonelor are loc sub aciunea histon-proteazei. Reglarea expresiei genelor la organismele eucariote se face, n primul rnd, la nivelul transcripiei. n unele cazuri, reglarea se poate manifesta i n momentul decodificrii mesajului la nivelul translaiei. Astfel, unele proteine sunt capabile de a se fixa ntr-o manier selectiv pe propriul ARNm, n acest fel mpiedicnd ribozomii s sintetizeze proteina respectiv n cantitate mai mare. Spre deosebire de genele procariote, care sunt unitare att n replicare, ct i n transcripie i translaie, genele organismelor eucariote sunt unitare n replicare, dar neunitare i discontinue n transcripie i translaie. S-a demonstrat c genele organismelor eucariote sunt fragmentate n exoni i introni. Intronii i exonii ntr-o gen ocup poziii stabile, i sunt variabili n numr i mrime. Astfel, gena ce codific actina (proteina necesar motilitii celulei) posed doi exoni i un singur intron. n genele ce codific fiecare dintre lanurile hemoglobinei, exist trei exoni separai i doi introni. n gena ce codific colagenul (proteina ce asigur elasticitatea pielii), exist cteva zeci de introni. Cercetrile efectuate de ctre Slonimski i col. (1978, 1980) au demonstrat c intronii particip la reglarea expresiei genelor prin controlul cantitii de proteine sintetizate sub aciunea genelor. Ipotetic, se consider c intronii au fost prezervai de evoluie n cromozomii eucariotelor, deoarece ei au un rol particular, prezent doar la eucariote i absent la procariote. Pornind de la diferena fundamental dintre procariote i eucariote (prezena diferenierii celulare la organismele superioare), a aprut ipoteza privind existena unei legturi dintre introni i reglarea expresiei genelor. De menionat c reglarea activitii genelor n celulele eucariote are loc pe tot parcursul procesului de realizare a informaiei genetice, de la transcripie pn la translaie. Deosebim cinci niveluri principale de reglaj genetic: 1. reglajul transcripional, prin care se determin tipul genelor ce vor fi transcrise n ARNm;

2. reglajul maturrii ARNm, prin care este dirijat modul n care are loc eliminarea intronilor din gene i procesul de asamblare a exonilor pentru a forma ARNm. Aceste procese au loc n nucleu, iar urmtoarele n citoplasm; 3. reglajul transportului ARNm, prin care se selecteaz moleculele de ARNm matur, moleculele ce vor trece din nucleu n citoplasm; 4. reglajul translaional, prin care se selecteaz moleculele de ARNm ce vor fi translate n proteine; 5. reglajul degradrii ARNm,prin care se selecteaz moleculele de ARNm ce vor fi degradate (fig.4).

Fig.4. Nivelurile reglajului genetic la eucariote. Dei reglajul genetic se poate realiza la oricare dintre nivelurile menionate, cel mai important la eucariote este nivelul transcripional. Pentru controlul transcripiei genelor exist doar dou mecanisme de reglaj genetic:

reglajul negativ, prin care genele funcioneaz numai n prezena proteinelor represoare; reglajul pozitiv, prin care genele funcioneaz numai n prezena unor proteine inductoare.

n celulele eucariote sunt prezente ambele mecanisme de reglaj, ns predomin mecanismul de reglaj pozitiv. Pentru celul este mai economic s sintetizeze proteine inductoare pentru 7-10% din ADN, care se transcriu n ARNm, dect s sintetizeze proteine represoare pentru 90-93% din genom. n reglajul genetic, la eucariote, intervin dou tipuri de proteine cromozomiale: histonice i nonhistonice. Histonele asigur stabilitatea structurii fibrei de cromatin, condensarea

sa n cromozomii eucariotelor i inactivarea nespecific a genelor. Nonhistonele au un rol important n reglajul specific difereniat al genelor. Prezena lor determin tipul genelor ce vor fi transcrise n anumite celule i esuturi.