U N I V E R S I D A D D E C O L I M A

MAESTRA EN CIENCIAS
REA ACUACULTURA
ESTIMACIN DE LOS REQUERIMIENTOS ALIMENTICIOS PARA E L
CRECIMIENTO DEL BRAQUlPODO Artemia franciscana (Kellog, 1906)
ALIMENTADO CON LA DIATOMEA Chaetoceros muelleri (Lemmerman)
ORIENTADA A LA PRODUCCIN MASIVA .
T E S I S
QUE PARA OBTENER EL GRADO DE
MAESTRA EN CIENCIAS
REA ACUACULTURA
PRESENTA
IGNACIO PINZN GUTIRREZ
ASESORES
Dr. Manuel Garca Ulloa Gmez
M.C. Alfredo Mena Herrera
Dr. Manuel Patio Barragn
M.C. Sonia I . Quijano Scheggia
Manzanillo, Colima, Mxico, Julio de 2000
UNIVERSIDAD DE COLIMA
Facultad de Ciencias Marinas
Manzanillo, Col., 15 de Junio de 2000
M en C. Sergio Alberto Lau Cham
Director de la Facultad de Ciencias Marinas
Pr e s e n t e .
Los que suscriben, Sinodales de la Comisin nombrada para examinar el
manuscrito de Tesis titulado:
Estimacin de l os requerimientos alimenticios para el crecimiento del
branquiopodo Artemia franciscana (Kellog, 1906) alimentado con la
diatomea Chaetoceros muelleri (Lemmerman) orientada a la produccin
masiva.
que presenta el candidato al Grado Acadmico de Maestra en Ciencias: rea
Acuacultura, el
C. IGNACIO PlNZN GUTIRREZ
Manifiestan su aceptacin a dicho trabajo en virtud de que satisface l os
requisitos sealados por las disposiciones reglamentarias y que se han hecho
las correcciones que cada uno en particular consider pertinentes.
A t e n t a me n t e
Sinodal suplente
, /*
M. C. Sonia I. QuijanoScheggia
kilmetro 20 I Carretera Manzanillo - Barra de Navidad / A P. 9-21 / Telefax 01 (333) 5 00 01 / Colima. Mxico / E-mail: facimar@volcan.ucol.mx
AGRADECIMIENTOS
A la Universidad de Colima por mi formacin acadmica en el rea de
Acuacultura.
A todo el equipo de trabajo del Laboratorio de Ciencias Marinas de la Universidad
Autnoma de Guadalajara, por el gran apoyo recibido gracias.
Ing. Daniel E. Godnez Siordia
Sria. Sofa Bartoleo
Sr. Jos Mitoma Flores.
Sr. Juan Ramn Almada Mitoma.
Sr. Ramn Almada Hernndez.
Al Dr. Manuel Garca Ulloa Gmez por todo el apoyo brindado en la direccin de la
tesis, por su ejemplo y dedicacin.
A mis sinodales por sus valiosas sugerencias al trabajo:
M. en C. Alfredo Mena Herrera
Dr. Manuel Patio Barragn
M. en C. Sonia I. Quijano Scheggia
A mis compaeros de generacin.
DEDICATORIA
A Dios por esto y todo lo que me a dado en la vida.
Con mucho amor y cario a mi esposa e hijos.
Rosalva Lpez Sotelo
Francisco Javier, Liliana araceli, Juan Ignacio.
A mi madre con todo cario.
Rogelia Gutierrez Ramirez
A mis Hermanos con cario.
Bertha, Jos, Chabelo, Mauricio, Mara, Victoria, Jess.
A mis suegros y cuados.
INDICE
PAG
1
INTRODUCCION
ANTECEDENTES
5
OBJETIVO GENERAL 15
OBJETIVOS PARTICULARES
15
HIPOTESIS
16
MATERIALES Y METODOS 17
A)
Origen de la Artemia y decapsulacin

17
B)
Tratamiento de1 agua y cultivo de la microalga

17
C)
Mantenimiento de1 cultivo madre de Artemia
18
D) Condiciones experimentales para determinar los indices
de filtracin e ingestin de Artemia en tubos de ensayo

19
E)
Condiciones experimentales para determinar los indices
de filtracin e ingestin de Artemia en cultivo masivo
a diferentes densidades 20
F)
Evaluacin de 1os indices de filtracin e ingestin de
A. franciscana alimentada con Ch. muelleri
22
G)
Evaluacin de parametros biolgicos
23
1) Fase experimental en tubos de ensayo 23
2) Fase experimental en cultivo masivo 24
3) Evaluacin estadstica 25
RESULTADOS
A) Fase experimental en tubos de ensayo 26
B) Cultivo masivo de A. franciscana alimentada con Ch. muelleri y
cultivada a diferentes densidades 29
DISCUSIONES
CONCLUSIONES
BIBLIOGRAFIA
3 6
45
4 7
Lista de Tablas
Tabla 1, Valores promedio ( desviacin estndar) de filtracin
(ml/Art/h) de A. franciscana mantenida en tubos de ensayo y
alimentada con Ch. muelleri. (Los nmeros I a V representan las
replicas utilizadas en esta fase experimental) 2 6
Tabla 2. Valores promedio ( desviacin estndar) de ingestin
(cl. X 10
4
Art./h) de A. franciscana mantenida en tubos de ensayo y
alimentada con Ch. muelleri. (Los nmeros I a V representan las
rplicas utilizadas en esta fase experimental) 27
Tabla 3. Longitud promedio ( desviacin estndar) de A.
franciscana mantenida en tubos de ensayo y alimentada con
Ch. muelleri. (Los nmeros de1 I al V representan las replicas
Utilizadas en esta fase experimental). 2 8
Tabla 4. Valores promedio ( desviacin estndar, n=3) de filtracin
(ml/Art/h) de A. franciscana alimentada con Ch. muelleri
en condiciones de cultivo masivo y a diferentes densidades: I= 1,000
Art/1; II= 3,000 Al-t/1; III= 5,000 Art/1; IV= 7,000 Art/1. 3 0
Tabla 5. Valores promedio ( desviacin estndar, n=3) de ingestin
(cl X 10
4
/Art./h) de A. franciscana alimentada con Ch. muelleri
en condiciones de cultivo masivo y a diferentes densidades: I= 1,000
At-t/l; II= 3,000 Art/l; III= 5,000 Art/l; IV= 7,000 Art/l. 3 1
Tabla 6. Longitud promedio ( desviacin estndar, n=3) de A.
franciscana alimentada con Ch. muelleri en condiciones de cultivo
masivo y a diferentes densidades: I= 1,000 Art/l; II= 3,000 Art/l;
III= 5,000 Al-t/l; IV= 7,000 Art/l. 3 2
Lista de Figuras
Fig. 1. Produccin de recursos acuticos generados por la industria
de La acuacultura reportadas por FAO desde 1990 hasta 1997.
Los valores en cada barra horizontal representan millones de
toneladas (Aquaculture Magazine,2000). 1
Fig. 2. Criterios de seleccin para una dieta en beneficio de la
larva predadora (Lger et al., 1986). 5
Fig. 3. Principio de la tcnica de bioencapsulacin de A.
franciscana en la que varios ingredientes esenciales pueden ser
Incorporados a la dieta de1 predador. 11
Fig. 4. Relacin entre 1os valores promedio de ingestion (y)
y filtracin (x) de A. franciscana alimentada con la microalga
Ch. muelleri y cultivada en tubos de ensayo. 28
Fig. 5. Relacin entre 1os valores promedio de ingestin (y)
y longitud (x) de A. franciscana alimentada con Ch. muelleri
cultivada en tubos de ensayo. 2 9
Fig. 6. Correlacin entre 1os valores promedio de filtracin
(ml/Art/h) e ingestin (cl. X 10
4
/Art./h) de A.franciscana
(n=3) alimentada con la microalga Ch. muelleri en cultivo
masivo (A= 1,000 Art/l; B= 3,000 Art. /l; C= 5,000 Art/l;
D= 7,000 Art/l.
Fig. 7. Correlacin promedio entre la longitud total ( ) e ingestin
(cl. X 10
4
/Art./h) de A. franciscana alimentada con la microalga
Ch. muelleri en cultivo masivo (A= 1,000 Art/l; B= 3,000 Art. /l;
C= 5,000 Art/l; D= 7,000 Art/l ( n=3 por tratamiento).
33
34
Fig. 8. Porcentaje de sobrevivencia (%) y produccin de biomasa
promedio (g) de A.franciscana alimentada con Ch. muelleri a
diferentes densidades: I= 1,000 Art/l; 2= 3,000 Art. /l;
3= 5,000 Art/l; 4= 7,000 Art/l ( n=3 por tratamiento). 35
Lista de Fotos
Foto 1. Adulto macho de Artemia franciscana
3
Foto 2. Larva de1 sargo europeo Sparus aurata, alimentandose de
nauplios de A. franciscana 7
Foto 3 Dietas inertes micropulverizadas derivadas de subproductos
agricolas , levadura de pan, microalgas vivas y secas, para la
alimentacin de organismos filtradores. 8
Foto 4. Chaetoceros sp., una de las microalgas mayormente
Utiiizadas en acuacultura 11
Foto 5. Contenedor experimental para 1os ensayos de filtracin e
ingestin a nivel de cultivo masivo 22
RESUMEN
Se estim el requerimiento alimenticio de Artemia franciscana alimentada con la microalga
Chaetoceros muelleri, por medio de la obtencin de los ndices de filtracin e ingestin del
branquipodo bajo condiciones experimentales y de cultivo masivo a diferentes densidades.
Se sembraron 5 larvas Instar II/ml en tubos de ensayo y la microalga a una densidad de
1.2X106 cl/ml. Tanto la filtracin como la ingestin fueron registradas 2 horas despus de
la siembra y este procedimiento fue realizado los primeros 10 das una vez que las larvas
nauplio de Artemia alcanzaron la edad de 48 horas despus de la eclosin. El ensayo se
repiti dos veces y se usaron 6 rplicas por ensayo. Los valores mximos de filtracin e
ingestin promedio (al da 10 experimental) fluctuaron desde 0.051 hasta 0.079 ml/ind./h, y
desde 8.88 hasta 11.38 X 104 cl/ind./h, respectivamente. La misma densidad de Ch.
muelleri y condiciones experimentales fueron utilizadas para el ensayo en cultivo masivo
pero las densidades de Artemia se ajustaron a 1, 3, 5 y 7 ind./ml. En este caso, el
tratamiento con menor densidad obtuvo 1os valores ms altos de filtracin e ingestin
durante todos 1os das experimentales, observando una relacin inversa entre la densidad y
1os ndices alimenticios. La longitud promedio de Artemia obtenida en el presente ensayo
(< 4,300 ) sugiere que la densidad de la microalga se encontro por debajo de 1os
requerimientos alimenticios para promover el ptimo crecimiento y desarrollo de A.
franciscana, aunque es necesario tambien considerar aspectos relacionados con la
morfologa y digestibilidad de Ch. muelleri para la correcta interpretacin de resultados.
La diferencia en 1os resultados obtenidos en las dos etapas de los experimento pudieron
haberse debido principalmente a las condiciones de cultivo especficas en cada ensayo. De
acuerdo a las condiciones experimentales en este trabajo, una Artemia de 11 das de edad
consumi 50,000 clulas de Ch. muelleri por hora.
ABSTRACT
The food requirement of Artemiafranciscana fed on the microalgae Chaetoceros muelleri
was estimated by using the filtration and ingestion rates, under experimental and massive
culture conditions at different densities. Artemia and algae densities in small glass tubes
were adjusted at 5/ml and 1 .2X106/ml, respectively, in which the filtration and ingestion
indexes were registered after 2 hours. This routine was applied to animals from two to
eleven days old. The assay was performed twice with 6 replicates each. Mean higher
filtration and ingestion values (at the tenth experimental day) varied from 0.051 to 0.079
ml/Art/h, and from 8.88 to 11.38 X104 cells/Art/h, resp. The same culture conditions were
used for the massive culture phase, but Artemia densities were adjusted at 1, 3, 5 and 7/ml.
In this case, the group with the lowest density showed the higher fluctuation and ingestion
indexes during all the experimental days. There was an inverse relationship between the
density and the feed rates. The mean length of Artemia in this experiment (< 4,300 )
suggests that the algae density was below the optimum level for the growth and
development of A. franciscana, although algae morphology and digestibility should be
considered for better results interpretation. Differences in results between the two
experiments may be due to the specific culture conditions. According to the experimental
conditions used in this work, a 1l-days old Artemia consumed 50,000 Ch. muelleri cells per
hour.
I. INTRODUCCION
Las ltimas estadisticas sobre la produccin de organismos acuticos reportadas por la
Organizacin de Alimentos y Agricultura (FAO, por sus siglas en ingls) indican un
volumen de cosecha de 28.8 millones de toneladas en 1997 (Fig. l), y estima que tal
cantidad alcanzar 1os 37 millones de toneladas en el ao 2000 (Aquaculture Magazine,
2000). Dicho incremento en la produccin representa cerca de1 35% de1 volumen total
estimado para la industria pesquera, considerando un modesto indicador de solo 3.7% en la
prediccin anual.
Fig. 1. Produccin de recursos acuticos generados por la industria de la acuacultura
reportadas por FAO desde 1990 hasta 1997. Los valores en cada barra horizontal
representan millones de toneladas (Aquaculture Magazine, 2000).
En gran medida, la produccin de crias, huevecillos, esporas o semillas de calidad y en
cantidades suficientes y constantes para cubrir la creciente demanda de las unidades de
engorda en todo el mundo, ha significado un importante bastin en tal acelerado
crecimiento de la industria. Sin embargo, en 1os ltimos aos ha sido tambin un factor
muy crtico en la sustentabilidad de la produccin de crias, reconociendose como uno de 1os
cuellos de botella de mayor impacto en la acuacultura (Sorgeloos y Lger, 1992). Una de
las principales razones de lo anterior recae en el aspecto nutricional, en el que la produccin
de alimento vivo juega un papel primordial y la investigacin en este rubro se convierte en
una herramienta imprescindible para el mantenimiento de la acuacultura como industria
productora de alimento.
En la actualidad, tanto a nivel industrial como experimental, la produccin de crias de
larvas y peces y crustaceos sigue condicionada por la alimentacin basada en presas vivas
(Jones y Houde, 198 1) entre las que destaca el camarn de salmuera, Artemia, como la ms
utilizada, sobre todo en su fase de larva. El uso de Artemia como alimento vivo para
organismos acuticos a crecido exponencialmente de tal manera que sus primeros estados
larvarios constituyen no solo el mejor, sino algunos casos, el nico alimento vivo
disponible para las larvas de peces y crustaceos cultivados (Bardach et al., 1966; Goodwin,
1976; Kinne y Rosenthal, 1977). Sin embargo, la produccin de quistes de Artemia en 1os
ultimos aos, ha sido afectada por fenmenos naturales como El Nio y factores
relacionados a la captura de1 recurso de1 Gran Lago Salado, Utah, E.U.A. -embalse que que
surte cerca de1 95% de quistes para acuacultura en el mundo (Garcia-Ulloa, 1998a)-, por lo
que algunas de las principales altemativas adems de probar otros organismos vivos como
alimento, se refieren a la produccin de biomasa de Artemia en estadios juveniles y adultos
para posteriormente ser procesados de acuerdo a las necesidades particulares, y la
optimizacin de las tcnicas de decapsulacin, bioencapsulacin y uso comn de 1os
nauplios.
El empleo de biomasa de adultos y preadultos de Artemia en la acuacultura es relativamente
menor si lo comparamos con la utilizacin de 1os nauplios (Foto 1). En 1os ltimos aos se
han desarrollado tcnicas de cultivos que permiten cosechar grandes cantidades de biomasa
de Artemia adulta en volmenes reducidos de agua con gastos relativamente bajos aunque
superiores a mtodos extensivos. Adems, este tipo de produccin presenta ventajas en
primera instancia, por la obtencin de cantidades preestablecidas de biomasa en el
momento que se requiera sin depender de1 medio natural y en Segundo lugar, por obtener
organismos de mayor calidad nutricional (Amat et al., 1992).
Foto 1. Adulto macho de Artemia franciscana.
Uno de 1os principales factores biticos que influyen en el xito de su cultivo en forma
intensiva, se refiere a su nutricin. Actualmente, son varias las dietas que son usadas para
tal proposito, las cuales pueden diferenciarse en dietas vivas (microalgas, levaduras,
protozoarios y bacterias) y dietas inertes (microalgas secas, microparticulas, microcapsulas,
emulsiones y harinas derivadas de subproductos agricolas). Dado que Artemia es un
consumidor obligatorio y no selectivo de partculas (Dobbeleir et al., 1980; en: Sorgeloos et
al., 1986) es necesario considerar la cantidad de alimento que ingiere diariamente para
estimar su requerimiento alimenticio. Por otro lado, siendo un organismo filtrador captura
constantemente partculas nutritivas de1 medio, las cuales deben medir menos de 50 micras
de dimetro (Dobbeleir et al., 1980; en: Sorgeloos et al., 1986).
La herramienta ms til para estimar la cantidad de alimento necesaria para realizar las
necesidades metablicas de 1os organismos planctnicos que dependen de un sistema de
filtracin para alimentarse, es la obtencin de 1os indices de filtracin e ingestin (Tizol et
al., 1994) 1os cuales son utilizados para conocer la cantidad de alimento ingerido en un
lapso relativo de tiempo. Por esto, es necesario estimar la cantidad de alimento diario de
Artemia de tal manera que no carezca pero al mismo tiempo no exista en exceso, pues
ambas situaciones limitan su crecimiento y desarrollo pudiendo colapsar su cultivo antes de
que 1os organismos alcancen su estado adulto.
ll. ANTECEDENTES
Desde que Seale (1993) y Rollefsen (1939) descubrieron que las larvas de Artemia son un
buen alimento para estadios tempranos de peces, este crustaceo es utilizado como presa
viva para muchas especies acuticas. Considerando 1os criterios para la seleccin de un
alimento en beneficio del depredador (Fig. 2) sealados por Lger et al. (1986), es
indispensable conocer las caractersticas biomtricas y cualidades fisicas y nutritivas de la
dieta, las cuales deben ser lo suficientemente completas para las especies que se
alimentarn de ella (Sorgeloos, 1980).
CRITERIOS DE SELECCIN DE UNA
DIETA EN BENEFICIO DE LAS LARVAS
FISICOS:
Pureza
Disponibilidad
Aceptabl e:
Capturable
Palatable o sabor
Ingerible
NUTRICIONALES:
Requerimientos
nutricionales y energticos
completos
Digerible
Fig. 2. Criterios de seleccin para una dieta en beneficio de la larva predadora (Lger et
al., 1986).
Como algunas de las propiedades biolgicas que contribuyen al aumento en el uso de este
branquipodo en la alimentacin larvaria se mencionan las siguientes: Artemia es un
alimento disponible en cualquier etapa de su vida ya que tanto sus quistes decapsulados
como adultos, son ampliamente utilizados; es de fcil cultivo y tiene alta resistencia al
manejo, debido a que vive en amplios rangos de salinidad, oxgeno y temperatura; adems,
es un alimento vivo de tamao adecuado para la mayoria de 1os organismos acuticos en
sus primeros estados de vida (Castro et al., 1993)
Los nauplios de Artemia son bien aceptados por 1os depredadores por su brillante color y
permanente movilidad, caracteristicas que 1os hacen visibles (Foto 2.). La palatabilidad, es
adecuada para 1os depredadores, por lo que ha menudo Artemia se usa como atrayente
gustativo en las dietas artificiales. Artemia es digerible casi en un 83% en carpas y 89%
para la trucha arcoiris (Leger et al., 1986). La buena calidad de la protena y su alto
aprovechamiento, favorecen el crecimiento y la reproduccin de las especies depredadoras.
El contenido energtico de Artemia influye en la velocidad de desarrollo de las larvas
cultivadas. En cuanto al contenido energtico, la Artemia adulta viva alimentada con algas
contiene 5.854 cal/g mientras que en la misma biomasa, pero congelada, contiene 5.100
cal/g, es decir 0.754 cal/g menos. Por lo que se sabe, el contenido energetico de Artemia
adulta es 0.40 cal/g mayor que el de 1os nauplios, aunque a un costo ms alto por el
alimento que consume (Lger et al., 1986).
En cuanto a la calidad nutritiva, Artemia contiene la mayora de 1os macro y
micronutrientes que requieren las especies marinas y dulceacuicolas. Sin embargo, existen
diferencias en el contenido de protenas, lipidos y carbohidratos entre las diversas cepas de
este pequeo crustaceo. El contenido de aminocidos de adultos y nauplios es ms estable
debido probablemente, a que es una caracterstica controlada genticamente (Castro et al.,
1993). Ambos estados de desarrollo contienen la mayoria de 1os aminocidos que son
esenciales en la nutricin de peces y crustaceos. Sin embargo, Artemia como otros
organismos planctnicos
Foto 2. Larva de1 sargo europeo Sparus aurata, alimentandose de nauplios de A.
franciscana.
(rotferos, coppodos, cladoceros y microalgas), no contienen la totalidad de varios
compuestos como 1os cidos grasos esenciales, ni en las cantidades suficientes para las
especies cultivadas, por lo que se recomienda mejorar la calidad de este organismo
mediante tcnicas de enriquecimiento (Lger et al., 1986), o suministrarla junto con otros
organismos planctnicos para que en su conjunto, provean de 1os cidos grasos
polinsaturados que requiere el depredador.
De las dietas que mayormente se utilizan en la produccin de biomasa de Artemia se
mencionan las siguientes:
a) Los desechos derivados de productos de la industria agricola son usados como alimento
para larvas y juveniles de Artemia (Garcia Ulloa, 1998b). El salvado o cascarilla de arroz,
soya, maz y otros subproductos agrcolas (Foto 3) han sido reportados como fuentes
alimentarias apropiadas para cultivarla a altas densidades (Dhont et al., 1993).
Foto 3. Dietas inertes micropulverizadas derivadas de subproductos agrcolas, levadura de
pan, microalgas secas y vivas, para la alimentacin de organismos filtradores.
Bossuyt y Sorgeloos (1980) establecieron una tecnologa de produccin con la cual es
posible producir dos kilos de biomasa en 1,000 litros de agua despues de dos semanas,
manteniendo la temperatura de cultivo a 25C y alimentado con harina de arroz. Dobbeleir
et al. (1980: en Sorgeloos et al., 1986) examinaron el comportamiento de cultivo a altas
densidades probando harina de trigo, soya y arroz, concluyendo que la harina de trigo como
dieta nica,no es apropiada debido a su contenido bioquimico. Estos autores lograron
sobrevivencias mayores al 50% en contenedores experimentales de 1,000 ml de capacidad,
pero una vez que se realize en cultivo de tanques de produccin masiva, la sobrevivencia se
redujo hasta menos de 10% en el caso de la harina de trigo, pero no as en animales
alimentados con harina de soya, para 1os cuales se registr una sobrevivencia de1 80%. La
principal ventaja que ofrecen estos productos es su bajo costo combinado con la
disponibilidad a nivel mundial (Lavens y Sorgeloos, 1991), sin embargo y al igual que las
microalgas secas y las microcpsulas, se requiere de un cuidado extra durante el tiempo de
cultivo, ya que la calidad de1 agua puede ser facilmente deteriorada. Adems, las partculas
deben ser generalmente homogenizadas en cuanto a su tamao debido a que el producto
derivado de1 tratamiento de la micropulverizacin, no produce partculas de1 mismo
dimetro. Por ello, la preparacin de estas soluciones alimenticias debe realizarse
diariamente.
b) Las levaduras de pan (Foto 3) de cerveza y de origen marino que son usadas para
alimentar Artemia y otros organismos (Sorgeloos y Lger, 1992)-, presentan varias ventajas
como su pequeo tamao (< 20 micras), su pared celular que evita la solubilidad de 1os
nutrientes y su gran disponibilidad en el mercado (Litchfield, 1980). Coutteau et al. (1990)
recomiendan el uso de levaduras marinas siempre y cuando estas Sean tratadas por una
sustancia enzimatica (Novozim 234) que las convierta en partculas ms digeribles, sin que
al mismo tiempo pierdan su potencial nutritivo.
c) El uso de microcpsulas ha sido tambin reportado para engordar y mantener Artemia
(Kanazawa et al., 1982; Jones et al., 1997). Este tipo de dieta tiene la ventaja de presentar y
mantener una calidad bromatolgica constante la cual es retenida por una membrana que es
facilmente digerible por el crustaceo en cuestin, sin embargo 1os resultados obtenidos en
cuanto a la sobrevivencia no ha sido muy alentadores usndolas como nica fuente de
alimento. En este caso, 1os criterios para la seleccin de1 alimento para larvas de peces y
crustaceos mencionados por Lger et al. (1987) pudieran no ser cubiertos de1 todo.
d) Otra modalidad en su alimentacion lo representa el uso de molculas orgnicas solubles
aplicadas en altas concentraciones, mismas que son absorbidas por via cutanea. Tambin
existen emulsiones basadas en su contenido de cidos grasos esenciales, que sirven como
enriquecedores durante la incubacin de 1os diferentes estados de Artemia, 1os que
posteriormente son otorgados a 1os organismos presas o depredadores que se pretende
cultivar. Es decir, por medio de la tecnica de bioencapsulacin (Sorgeloos, 1987) o
enriquecimiento de Artemia (Fig. 3), su calidad bioqumica es capaz de ser mejorada
sustancialmente lo cual se ha comprobado con 1os resultados en la produccin de larvas de
peces y crustaceos a nivel mundial. Tocher et al. (1997) y McEvoy et al. (1997) han
reportado el uso de extractos de tejido nervioso de atn y bacalao, preparados como
soluciones enriquecedoras de Artemia y de1 rotifero Brachionus plicatilis, obteniendo
resultados muy alentadores en la produccin de larvas de rodaballo europeo.
rotifero
Artemi a
J
Fig. 3. Principio de la tcnica de bioencapsulacin de A. franciscana en la que varios
ingredientes esenciales pueden ser incorporados a la dieta de1 predador.
e) De las dietas que comnmente se han utilizado para la produccin de biomasa de
Artemia se encuentran las microalgas vivas (Foto 4). Su importancia radica en representar
una fuente confiable de energia para favorecer el crecimiento, regulando la digestin de1
depredador y por lo tanto, incrementando su valor alimenticio (Freeman, 1991).
Foto 4. Chaetoceros sp., una de las microalgas mayormente utilizadas en acuacultura
Fbregas et al. (1996) han demostrado que al cultivar la prasinofita Tetraselmis suecica con
diferentes concentraciones de nitrgeno en el medio de cultivo, provoca cambios en el nivel
nutricional de Artemia. Consecuentemente, sus funciones metablicas fueron tambin
afectadas, situacin que se reflej en la obtencin de diferentes valores en 1os parmetros
de sobrevivencia, peso seco, longitud total, porcentaje de hembras gravidas, cantidad de
desoves y nmero de nauplios por desove. Estos investigadores alimentaron inicialmente al
crustaceo con 25 g (peso seco) de Tetraselmis suecica/ind., y la racin alimenticia fue
incrementada gradualmente dependiendo de la transparencia del agua.
Barata et al. (1996) reportaron el uso de la microalga Dunaliefia sp. para la produccin de
biomasa de especies de poco uso comercial de Artemia (A. tunisiana, A. parthenogenetica)
con el objetivo de sugerir la seleccin de dichas cepas como recursos potenciales a ser
explotados y usados en la acuacultura. Sin embargo, existen reportes de microalgas que por
sus caractersticas morfolgicas, ms que por su cont eni do nutricional, no son
recomendadas para alimentar al crustceo en cuestin. Tal es el caso de Chlorella o
Stichococcus, las cuales presentan una pared celular rgida que dificilmente es dirigida por
Artemia (Sick, 1976); o la microalga Coccochloris, la cual produce sustancias gelatinosas
que obstaculizan 1os mecanismos digestivos (Takano, 1967).
Muchas especies de microalgas han sido utilizadas como alimento para Artemia en especial
de1 genero Chaetoceros spp., la cual es considerada como una de las mejores por su
pequeo tamao y su alto contenido de cidos grasos poli-insaturados (Jory, 1997). El alto
porcentaje de sobrevivencia, as como la obtencin de organismos de tallas ms grandes
refleja la calidad de1 alimento, particularmente en 1os organismos alimentados con
Chaetoceros sp. donde se demuestra con base en 1os resultados obtenidos en varios estudios
como el de Cordero-Esquivel et al. (1993) que esta microalga rene gran parte de 1os
requerimientos nutricionales para A. franciscana. Correa y Buckle (1993) y Correa et al.
(1994) reportaron una racin alimenticia de 1.5X10
5
clulas de Chaetoceros sp./da
incrementandola gradualmente hasta 1.14X16
6
clulas/da.
Como antecedente en el uso de esta microalga para la produccin de biomasa de Artemia, el
laboratorio de St. Croix Marine Station (Texas, USA), emplea sistemas de circuito abierto y
usa como alimento Chaetoceros sp. con la cual se han reportado producciones de 25 Kg de
biomasa de Artemia a partir de 30 g de huevecillos en un 1m
3
en solo dos semanas; esto
promovido adems, por un florecimiento artificial de nutrientes y por una biomasa de
microalgas excepcionalmente elevada (Castro y Gallardo, 1993).
Al parecer el valor nutricional de esta microalga es adecuado para el cultivo de Artemia ya
que por ejemplo, presenta un alto porcentaje de protena comparado con otras especies
(32.5% de protena, Paniagua-Chavez y Voltolina, 1995) pero se requiere la realizacin de
ms estudios en cuanto a la dosis y a otras caractersticas nutricionales de dicha dieta, ya
que existe mucha discrepancia en 1os resultados encontrados de la literatura.
Existen varios mtodos para determinar el consumo de partculas en organismos
planctnicos entre los que destacan el uso de radioistopos como el C
l4
(Davalos-Lind,
1996) el cual es captado e incorporado en las microalgas durante el proceso de fotosintesis
para despus ser trasmitido ya sea al organismo presa o desechado en las heces; otra
metodologa consiste en la medicin de pigmentos como la clorofila (Lee y Wong, 1997)
mediante un colorimetro. Sin embargo, el ms usado radica en la aplicacion de formulas
para obtener los indices de tiltracin e ingestin, para los cuales existen reportes especificos
para Artemia (Braun, 1980; Coutteau, 1992; Garcia-Ulloa, 1998b) y para otros organismos
planctnicos como el rotifero Brachionus calyciflomus (Ferrando et al., 1993) ambos
alimentados con diversas dietas inertes y vivas.
Por todo lo anterior y debido a la gran importancia que Artemia representa en el
crecimiento sostenido de la produccin acucola a nivel mundial, es importante la
optimizacin en el uso de dicho recurso para su mejor aprovechamiento. El presente estudio
pretende contribuir al conocimiento, acerca del requerimiento alimenticio mediante el uso
de una mi croal ga como o dieta nica en la produccin de biomasa, evaluando su
comportamiento alimenticio tanto a nivel de laboratorio como en cultivo masivo a
diferentes densidades.
III. OBJETIVO GENERAL
Estimar los requerimientos alimenticios de Artemia franciscana mediante la obtencin de
1os indices de filtracin e ingestin, alimentada con la microalga Chaetoceros muelleri bajo
condiciones de laboratorio y en cultivo masivo.
III.1 OBJETIVOS PARTICULARES
1) Determinar 1os indices de filtracin e ingestin de A. franciscana alimentada con la
diatomea Ch. muelleri bajo condiciones experimentales y en cultivo masivo.
2) Comparar el comportamiento alimenticio de A. franciscana alimentada con Ch. muelleri
y cultivada a nivel experimental e intensivo.
3) Evaluar la sobrevivencia de A. franciscana alimentada con Ch. muelleri, cultivada en
forma intensiva a diferentes densidades.
4) Evaluar la longitud corporal de A. franciscana alimentada con Ch. muelleri en cultivo
intensivo a diferentes densidades.
5) Comparar la produccin de biomasa de A. franciscana alimentada con Ch. muelleri,
cultivada de manera intensiva a diferentes densidades.
IV HIPOTESIS
a ) La microalga Ch. muelleri cubrir 1os requerimientos alimenticios de A. franciscana a
la concentracin experimental.
b) La filtracin e ingestin de A. franciscana sern similares en el experimentoh a nivel
laboratorio y en cultivo masivo.
c) La filtracin e ingestin presentaran una relacin directa respecto a la edad de 1os
organismos.
d) La longitud de Artemia ser proporcional a 1os indices de ingestin y filtracin
e) La produccin de biomasa y sobrevivencia estaran en relacin directa con la densidad
de siembra.
V. MATERIALES Y METODOS
A) Origen de la Artemia y decapsulacin
Los quistes de Artemia fueron obtenidos de la compaia comercial GREAT LAKE
ARTEMIA (grado A, USA) y fueron decapsulados e incubados siguiendo la tcnica
propuesta por Sorgeloos et al. (1986).
B) Tratamiento de1 agua y cultivo de la microalga
El agua de cultivo fue tomada de la laguna de Barra de Navidad, pasada a travs de un filtro
de arena (Jacuzzi

), quelada con NaEDTA a una concentracin de 12 mg/l, filtrada con

cartuchos (hasta 5 m) y esterilizada por medio de una unidad de 8 lamparas ultravioletas
antes de ser incorporada a 1os contenedores experimentales.
La microalga utilizada como alimento en este trabajo fue Chaetoceros muelleri (clave
CICESE; CH-M-l, Trujillo, 1993) cuyo contenido bromatolgico es: proteina, 38.1 %;
grasa, 19.12 %, cenizas, 25 %; carbohidratos, 17.77 % (Brown, 1991; Velasco, 1997; en:
Garcia-Ulloa, 1998b). El cultivo de Ch. muelleri se realiz en un cuarto acondicionado con
temperatura entre 20 y 22C, y 1os garrafones utilizados (20 1 de capacidad, a un volumen
de trabajo de 15 1) fueron provistos con aireacin e iluminacin constante por medio de un
turbo soplador (2HP) y 4 lmparas fluorescentes de 75 watts. Se utilizo el medio F
(Guillard y Ryther, 1962) como sustrato de crecimiento para la microalga y se mantuvo con
la tcnica de cultivo semicontinuo (Guillard, 1975) que consiste en realizar cosechas
parciales de1 medio y la reposicin de1 volumen extraido para mantener la concentracin
algal constante. En el presente trabajo, el volumen extraido se ajust de acuerdo a las
necesidades de alimento diario que se mencionan en el inciso C) de1 presente capitulo, lo
que signific una taza de renovacin de1 50% cada tercer da por garrafn.
Se utilizaron dos tipos de contenedores para su cultivo:
1) En garrafones de vidrio de 19.8 1 a una capacidad de trabajo de 15 1. bajo condiciones
controladas, para surtir el aliment durante la primera fase experimental y,
2) En condiciones ambientales y en forma masiva usando tanques de 1,000 1, para la
segunda fase experimental. La microalga en cuestin se suministro como alimento cuando
la curva de crecimiento se encontraba en la fase de crecimiento exponencial. Para
determinar dicha fase, se realizaron ensayos previos al experimento, cultivando la
microalga con el metodo de cultivo estatico (Guillard, 1975), manteniendo estables todas
las condiciones de1 ensayo y realizando conteos diarios de la poblacin.
C) Mantenimiento del cultivo madre de Artemia
Una vez que se obtuvieron nauplios recin eclosionados, se colocaron en una garrafon
invertido de plastico con capacidad de 20 1, a un volumen de trabajo de 10 1. Este
contenedor se mantuvo con aireacin constante y luz difusa. Se realizo un conteo
volumtrico con una pipeta de 1 ml para conocer la densidad de1 cultivo madre. Se
alimentaron diariamente dos veces por dia durante 1os primeros 5 dias, y tres veces por da
desde el da 6 hasta el final de 1os ensayos, con una densidad entre 1000,000 a 1500,000
c l / ml de la microalga Ch. muelleri. Para esto, se realiz un conteo de la poblacin algal en
el garrafon de Artemia y en 1os contenedores de cultivo de la microalga, ajustando dicha
concentracin. De este garrafn se extrajeron diariamente 1os organismos para el ensayo de
filtracin e ingestin en 1os tubos de ensayo.
Para el mantenimiento de las condiciones adecuadas de cultivo en dicho contenedor, se
realizaron recambios totales de1 medio todos 1os das, entre las 9:30 y 10:30 AM, y se
mantuvieron 1os parmetros fsicos y qumicos como sigue: temperatura de 280. 5C,
salinidad de 33l .3 g/l y 8.30.9 de pH. Este proceso implic la extraccin de todos 1os
animales de cada garrafn, su concentracin en un tamiz de 150 m, el lavado de1
contenedor y la adicin de alimento fresco para volver a sembrar 1os organismos.
D) Condiciones experimentales para determinar 1os indices de filtracin e ingestin de
Artemia en tubos de ensayo
El experimento se realiz utilizando una gradilla de madera en la que se colocaron 5 tubos
de ensayo de 12 ml, cada uno considerado como replica utilizndose un volumen
experimental de 10 ml. Se introdujeron animales en 1os tubos a una densidad de 5 Art/ml, y
Ch. muelleri una densidad de 1.2X10
6
cl./ml para evaluar 1os indices de ingestin y
filtracin, segn la racin alimenticia recomendada por Correa y Buckle (1993) y Correa et
al. (1994).
Para esto, se realiz un conteo de microalgas inicial (n=30) y se permitio que 1os animales
se alimentaran por 2 horas. Al final de dicho tiempo, se extrajeron 1os organismos y la
densidad de Ch. muelleri fue nuevamente obtenida, aadiendo una gota de formalina al
1O%, para obtener la concentracin de microalgas (n=6 por tubo o replica) por medio de un
hemacitmetro (0.1 mm de Prof., PROPPER

) y un microscopio compuesto(Bausch &

Este procedimiento fue llevado a cabo durante 10 dias desde el estadio larval Instar II de
Artemia (es decir 36 horas despus de la eclosin, edad en que 1os organismos presentan ya
el tracto digestivo abierto, Sorgeloos et al., 1986) y fue r epet i do 3 veces para la
verificacin de 1os resultados.
El trabajo se realiz en un cuarto semioscuro para evitar la reproduccin de la microalga.
En el transcurso de1 tiempo experimental 1os tubos fueron invertidos cada media hora para
I
mantener las microalgas en suspensin y evitar la sedimentacin, pero sin agitar el tubo
para no perturbar el proceso de filtracicin de 1os organismos (Spittler, 1988).
Para la obtencin de la longitud total de Arteinia (Amat, 1980) se extrajeron diariamente al
azar 10 organismos por tubo. La medicin se realiz con un microscopio de reflexion de
imagenes (Bausch & Lomb

) y un micrmetro ocular (10 mm/O. 1 mm).

E) Condiciones experimentales para determinar 1os indices de filtracin e ingestin de
Artemia en cultivo masivo a diferentes densidades
Lomb

)
Para esta fase se uso un mdulo experimental propuesto por Garca-Ulloa et al., (1998) el
cual consiste de 12 garrafones invertidos de plstico de 19.8 1. de capacidad con un
adaptador central para mallas intercambiables y con un sistema de cultivo que puede ser
modificado -ya sea abierto o cerrado de circulacin de aqua-, 1os que fueron usados como
contenedores de cultivo (Foto 5). En cada uno de estos, se coloc un anillo de tubo de
plstico al centro para proveer de la aireacin suficiente y mantener en suspension tanto
alimento como animales. El volumen de trabajo se ajust a 10 1. 1os animales fueron
sembrados a cuatro densidades experimentales (1,000, 3,000, 5,000 y 7,000 Art/l.) despus
de 24 horas de la eclosin de 1os quistes. Los tratamientos fueron distribuidos al azar
evalundose por triplicado. La alimentacin consisti en la microalga Ch. muelleri a la
densidad descrita en 1os experimentos en tubos de ensayo. Diariamente se monitorearon 1os
siguientes parametros: salinidad, pH y temperatura, y se realizaron recambios totales de
agua siguiendo la rutina descrita para el contenedor de1 cultivo madre. Tambipen para este
ensayo, la longitud de Artemia fue determinada por replica y tratamiento como se menciona
en el inicio anterior.
Al final de1 cultivo (edad de Artemia = dia 11) se cosecharon 1os animales de cada
tratamiento para obtener la biomasa hmeda y seca. Los indices de filtracin e ingestin
fueron obtenidos despues de 2 horas de haber alimentado a 1os animales con la microalga,
para lo cual se obtuvo la densidad celular de Ch. muelleri al tiempo de siembra y despus
de 120 minutos, en cada contenedor (n=l 0 en cada contenedor).
Foto 5. Contenedor experimental para 1os ensayos de filtracin e ingestin a nivel de
cultivo masivo.
F) Evaluacin de 1os indices de filtracin e ingestin de A. franciscana alimentada con Ch.
muelleri
Para el clculo de filtracin (ml/Art/h) e ingestin (clulas/Art./h) se emplearon las
frmulas propuestas por Hayward y Gallup (1976; en: Coutteau, 1992):
IR = [(Co-Cf)V]/n t (l),
CR = IR/Cm
(2),
IR = ingestin (cl.lArt./h),
CR = filtracin (ml/Art/h),
Co = concentracin inicial de algas (cl./ml),
Cf = concentracin final de algas (&L/ml),
Cm = (Co + Cf)/2,
t = tiempo experimental (hora),
n = densidad de Artemia/ ml,
V = volumen (ml).
G) Evaluacin de parametros biolgicos
I.- Fase experimental en tubos de ensayo
a) Para obtener la longitud de A. franciscana por dia se extrajeron 10 organismos de cada
tubo de ensayo (n = 50 org. por dia), se fijaron con lugol y se colocaron en un portaobjetos
el cual se fij en un microscopio de reflexion de imgenes provista de un micrmetro
ocular, midiendo 1os organismos desde el ojo naupliar hasta el telson (Amat, 1980).
b) Para la filtracin e ingestin se tomaron muestras de1 medio de cada uno de 1os 5 tubos y
se fijaron con 1 gota de formol al 10%. La densidad de microalgas se realiz con la ayuda
de un microscopio compuesto (Bausch & Lomb

) y un hematcimetro (0.1 mm de
profundidad) realizando 6 conteos por cada rplica.
2.- Fase experimental en cultivo masivo
a) Para obtener la longitud de A. franciscana por dia, se extrajeron 10 organismos de cada
garrafn para ser procesados como en el prrafo anterior.
b) Para la filtracin e ingestin se procedi tambien como en el parrafo anterior realizando
6 conteos de cada garrafn.
c) La sobrevivencia se evaluo diariamente, tomando 10 muestras por garrafn con una
pipeta de 10 ml., para finalmente estimar el nmero de organismos en el volumen de
cultivo aplicando la frmula, propuesta por Cruz et al., (1993): sobrevivencia = # final de
organismos/# inicial de organismos X 100.
d) La biomasa de Artemia por garrafn y tratamiento se obtuvo al extraer todos 1os
organismos de cada garrafn en un tamiz de 150 de abertura y quitando la humedad por
medio de1 papel absorbente para obtener el peso hmedo de 1os animales utilizando una
bascula electrica marca OHAUS

. Para el peso seco, las muestras anteriores se colocaron

en una estufa electrica (FELISA

) durante 48 horas a una temperatura de 60C. (Garca-

Ulloa, 1995).
3.- Evaluacin estadistica
Los resultados de filtracin e ingestin diarios tanto en tubos como en garrafones, fueron
evaluados por medio de un anlisis de varianza de una va, al igual que la longitud y
sobrevivencia de Artemia alimentada con la diatomea Ch. muelleri. En caso de encontrar
diferencias significativas (=0.05) en 1os valores medios tanto de filtracin e ingestin
como de 1os otros parmetros biolgicos, se aplic la prueba de rangos multiples de Tukey,
(95%). Tambin, se realizaron pruebas de correlacin entre factores como longitud y
filtracin o ingestin, expresando las ecuaciones de regresin lineal.
VI. RESULTADOS
Los parametros fsicos y qumicos de1 agua de cultivo durante la produccin masiva de
Artemia, mostraron valores dentro de1 rango indicado por Sorgeloos et al. (1986) siendo la
temperatura, salinidad y pH, de 280.5C, 331.3 g/l y 8.30.9 respectivamente.
A) Fase experimental de tubos de ensayo
La filtracin en 1os tubos de ensayo por da no presento diferencias significativas (P<0.05)
desde el da I al final de1 ensayo, mostrando en general una tendencia a incrementarse con
relacin al tiempo (Tabla 1). Los valores de filtracin al dia 10 fluctuaron desde 0.051 hasta
0.079 ml/ Art./ h
Tabla 1. Valores promedio ( desviacin estndar) de filtracin (ml/Art/h) de A.
fianciscana mantenida en tubos de ensayo y alimentada con Ch. muelleri. (Los nmeros I a
V representan las replicas utilizadas en esta fase experimental)
En promedio, 1os valores de filtracin iniciales registraron un aumento de casi el doble con
respecto a 1os observados para el ultimo da de1 ensayo.
En cuanto a la ingestin, tampoco se detectaron diferencias significativas (P I 0.05) entre
las replicas durante 1os 10 dias experimentales (Tabla 2) y no se observ tendencia a
incrementarse conforme 1os organismos crecieron. Solo se detecto un incremento notable
en el ndice de ingestin de1 dia 9 al 10, para el cual se registraron valores desde 8.88 hasta
11.38 X 10
4
cl/Art./h
Los valores en la longitud de 1os animales mantenidos en los tubos de ensayo no
presentaron diferencias signiticativas (P <0.05) por dia entre las replicas. Se observ una
tendencia en el incremento de la longitud total de Artemia con relacin al tiempo (Tabla 3),
desde 477.86 al da 1 para el tubo IV, hasta 3,5 17 al dcimo da en el tubo I. En
promedio, 1os animales crecieron alrededor de1 600% al final de1 tiempo experimental con
relacin a la longitud registrada el primer dia.





















La Fig. 4 muestra 1os valores promedio de correlacin entre la filtracin e ingestin de A.
franciscana alimentada con la microalga Ch. muelleri y cultivada en tubos de ensayo. Los
valores de correlacin fluctuaron entre 0.89 y 1.00, mostrando un aumento proporcional y
positivo entre 1os dos parmetros estudiados.
I
g 0.08
I e
3 0.06 r=0.95 l g
5 l g 0.02
z
c
z 0 / / , 1
IL
0 5 10 15
Ingestin (clE4/AR/h)
Fig. 4. Relacin entre los valores promedio de ingestin (y) y fiItracin (x) de A.
franciscana alimentada con la microalga Ch. muelleri y cultivada en tubos de ensayo.
61.42x y=3.86+
0.04
En la Fig. 5 se muestran 1os valores promedio de correlacin entre la longitud e ingestin
de A. franciscana alimentada con la microalga Ch. muelleri y cultivada en tubos de ensayo.
Los valores de correlacin fluctuaron entre 0.039 y 0.52, mostrando una baja correlacin
entre 1os dos parmetros estudiados.
g 12
2 10
1=0. 321
l
z
y=1. 57+0. 0023X
3 6 6
E 4 l l l
S 44 l
3 I
F 0 2000 4000
Longitud (mm)
L
Fig. 5. Relacin entre 1os valores promedio de ingestin (y) y longitud(x) de A.franciscana
alimentada con Ch. muelleri cultivada en tubos de ensayo.
B) Cultivo masivo de A. franciscana alimentada con Ch. muelleri y cultivada a diferentes
densidades
En el cultivo masivo, se observaron diferencias significativas (P > 0.05) en algunas rplicas
de 1os valores de filtracin desde el da 1 al 10 mostrando en general, una ligera tendencia a
incrementarse con relacin al tiempo (Tabla 4), a excepcin de1 da 10 que mostr un valor
ms bajo que el dia 9.
8
En la ingestin masiva, se observaron diferencias signiticativas (P > 0.05) en algunas
replicas desde el da 1 al 10, mostrando en general una tendencia a incrementarse con
relacin al tiempo (Tabla 5) con excepcin de1 dia 1 que mostr valores ms altos que el
dia 2 en 1os tratamientos I y IV.
Para todos 1os dias, 1os valores ms altos de ingestin fueron registrados en el grupo en que
la densidad de Artemia/1 fue menor.
Para la longitud de1 crustaceo en cuestin bajo condiciones de cultivo masivo, se observ
diferencia significativa (P > 0.05) en 1os dias 6 y 8 de1 ensayo, mostrando para todos 1os
tratamientos, una tendencia a incrementarse con relacin al tiempo (Tabla 6) a excepcin
de1 dia 8 en el tratamiento I, en el que el valor registrado fue mayor que para el resto de 1os
dias experimentales.
En este caso, el aumento promedio de la longitud he aproximadamente 5 a 7 veces mayor
con relacin a la talla del dia inicial.
La Fig. 6 muestra 1os valores promedio de la correlacin entre la filtracin e ingestin de A.
franciscana alimentada con la microalga Ch. muelleri y cultivada a nivel masivo a
diferentes densidades. Los valores de correlaci fluctuaron entre 0.679 y 0.801, mostrando
una baja correlaci entre estos dos parmetros estudiados para todos los tratamientos,
principalmente para el grupo de menor densidad de Artemia/1.
g 3
2 2.5
&2 . -
E. 1. 5
9' 1 . -
; 0.5
=
: 0
L
3. 5
$4 l

f=O.679
y=3. 16+0. 544x
, /
4.
4
A
\
5
1 g 3-
225- 4 %
=2
%. 5-
-.t t l
5 l HI . 738
5 O. 5 y=242+0. 69Ex C
E 0 I / /
3. 4 3. 9 4. 4 4. 9
g 3-
2
2.5 l t
= 4'
g
2 l
-
9
,o.n
e
.-
f 0. 5-
y=2. 68+0. 635x
B
g 01 1
3. 5 4 4. 5 5
Ingestibn (dlbUAtt/h)
F 3
*
3
g
2
5 1. 5
h 1
; 0.5
. -
E O
i
l
l
y=2.21+0.754X
l l
l
4
D
I 7
3. 2 3. 7
IngestM(cM3/AR/h)
4. 2
Fig. 6. correlacin entre 1os valores promedio de filtracin (ml/Art./h) e ingestin (cl. X
10
4
/Art./h) de A. franciscana (n = 3) alimentada con la microalga Ch. mueIieri en cultivo
masivo (A = 1,000 Art/l; B = 3,000 Art./1 C = 5,000 Art./1;, D = 7,000 Art/l).
La Fig. 7 muestra 1os valores promedio de correlacin entre la longitud e ingestin de A.
franciscana alimentada con la microalga Ch. muelleri y cultivada a nivel masivo. Los
valores de correlacin fluctuaron entre 0.87 y 0.79, mostrando una baja correlacin en estos
dos parmetros estudiados.
1
1.5
2. 5
r=0.801
r
z
,.j 4. 8
a
$ 4. 6
5
2 4. 4
g 4. 2
2
P 4
4
4
, I
0 2000 4000 60C
Loneiu (mm)
r= 0.794
y =4.14+O.aIOlX A
E
2 4.5
h4.2
y 3.9
g3.6
B 3.3
5
& 3
5
Longi tud ( mm)
I =0244
y=3.32+o.aI2X C
Longitud (mm)
r=0.80
y =3.75+0. omx B
Lcmgitud (mm)
r-O.87
y=3.11+o.ooow D
1
-I
Fig. 7. Correlacin promedio entre la longitud total (c e ingestin (cl./Art./h) de A
Franciscana alimentada con la microalga Ch. muelleri en cultivo masivo (A = 1,000 Art/l;
B = 3,000 Art/l; C = 5,000 Art/l; D = 7,000 Art/l (n = 3 por tratamiento).
1os cuales fluctuaron desde 27.7 g hasta 3 1.3 g, y desde 54% hasta 80%, respectivamente.
El valor promedio ms alto de sobrevivencia (n = 3 por tratamiento fue registrado para el
grupo de mayor densidad de Artemia por litro (7,000) mientras que la mayor cantidad de
biomasa fue obtenida para el tratamiento de 5,000 Art/l.
En la fig. 8 se muestran los valores de la biomasa hmeda (g) y sobrevivencia (%) finales
G32 - 100
; 31 -- F - -
z 30- -
80
%
5 29 -- - - 60 ' i
z 28 -- - - 40 ' $ s!
3 27- - 5l 26- - - - 20 !
E 25 0 cn
El 2 3 4
barras
1
I
liIlG3
Tratamientos
Fig. 8. Porcentaje de sobrevivencia (%) y produccin de biomasa promedio (g) de A.
franciscana alimentada con Ch. muelleri a diferentes densidades: 1 = 1,000 Art./A, 2 =
3,000 Art/l, 3 = 5,000 Art/l, 4 = 7,000 Art./1 (n = 3 por tratamiento).
VII. DISCUSIONES
No obstante que Artemia es un organismo que presenta varias ventajas biolgicas que
benefician su proceso de alimentacin -como no seleccionar las partculas que filtra en
forma constante-, existen muchos factores que de acuerdo a Braun (1980) influyen sobre el
comportamiento alimenticio. Entre estos destacan el volumen de1 contenedor, la edad y el
tamao de 1os organismos, y la calidad y la concentracin de1 alimento; pero an revisando
cada factor de manera aislada, Lavens y Sorgeloos (199 1) mencionan que el efecto de la
combinacin de condiciones o parametros de cultivo lejos de 1os niveles optimos, pueden
limitar su capacidad alimenticia lo cual pudiera reflejarse en la disminucin de 1os procesos
de filtracin e ingestin.
En el presente estudio, 1os valores de filtracin por da de A. franciscana alimentada con
Ch. muelleri en 1os tubos de ensayo no indicaron diferencias significativas (P > 0.05, Tabla
1) considerando as, que las condiciones de cultivo en cada replica fueron similares y
estables. Es posible establecer entonces, que dichos valores fueron confiables a las
condiciones usadas en el ensayo.
Aunque no se observ que tanto la filtracin como la ingestin se hayan incrementado con
el tiempo de cultivo en 1os tubos de ensayo como se reporta en 1os trabajos de Coutteau
(1991) Lavens y Sorgeloos (1991) y Makridis y Vadstein (1999), el valor mximo
encontrado al da 10 indica la necesidad de extender el tiempo experimental con la
microalga estudiada para obtener una mayor cantidad de medio filtrado, proporcional a la
presencia de animales de tallas mayores.
Los valores de filtracin obtenidos en la primera fase experimental coinciden con 1os
reportados por Coutteau (1991) de 0.01 a 0.03 ml/h para animales de 72 horas de edad, y de
0.2 a 1.08 ml/h para Artemia de 144 horas de edad, usando como alimento la levadura de
pan a diferentes concentraciones. Sin embargo, los resultados de dicho autor con animales
de 8 das de edad fueron mayores a 1os obtenidos en el presente trabajo.
Makridis y Vadstein (1999) obtuvieron una filtracin de ms de 2 ml/h en animales de 7
dias de edad alimentados con particulas de diversos tamaos, incluyendo microalgas vivas
como Isochrysis galbana y Tetraselmis suecica. Estos investigadores concluyeron que el
branquipodo en estudio mostr una preferencia alimenticia por filtrar e ingerir particulas
menores de 10 u de dimetro -como es el caso de la microalga Ch. muelleri usada en el
presente trabajo (Trujillo-Valle, 1993)-, condicionada principalmente a la distancia entre las
setas de 1os apndices filtradores, 1os cuales son ms complejos cuando 1os animales
alcanzan la edad adulta. En comparacin a 1os valores de filtracin reportados por Makridis
y Vadstein (1999) la filtracin en este ensayo fue 3 a 4 veces menor, lo que sugiere que el
tipo de alimento y las condiciones de cultivo especificas para cada trabajo pudieron
provocar las diferencias entre 1os resultados.
De acuerdo a Lavens y Sorgeloos (1991) la actividad filtradora de1 camarn de salmuera
no es muy eficiente en 1os primeros estados de vida debido a que sus estructuras
morfolgicas para tal funcion no estn completamente desarrolladas. De esta manera, la
maxima filtracin es slo alcanzada cuando todos 1os apndices conocidos como
toracpodos son funcionales. En 1os tubos de ensayo no f ue posible observar dicho efecto
por el hecho de que la longitud registrada para el da 10 de cultivo (Tabla 3) indica que 1os
a n i m a l e s no haban alcanzado an su mximo desarrollo, lo cual se corrobora comparando
las tallas de Artemia reportadas por Coutteau (1991) y Garcia-Ulloa (1998) a la misma edad
(> 4,000 y > 6,000 de longitud, respectivamente).
En comparacin con otros organismos filtradores, Lurling y Van Donk (1997) mencionan
que una pulga de agua (Daphnia pulex) adulta filtra aproximadamente 1.3 ml/h, lo que
significa el doble de1 valor obtenido para una Artemia de 11 dias de edad en el presente
experimento. Por otro lado, Lu y Blake (1997) reportaron que una larva de la almeja
Argopecten irradians de entre 0.183 y 0.548 mm de altura y alimentada con lsochrysis
galbana, filtr una cantidad de medio de cultivo comparable al volumen filtrado de una
Artemia de 11 dias de edad (~ 0.06 ml/h) registrado en el presente trabajo, mientras que la
filtracin de larvas ms pequeas de dicho molusco fue equiparable a 1os valores obtenidos
el dia 3 de1 experimento con A. franciscana. Lo anterior confirma la teora de1 incremento
proporcional en 1os procesos de filtracin e ingestin con relacin al tiempo durante 1os
primeros das de desarrollo de organismos filtradores (Pavillon et al., 1980) siempre y
cuando la concentracin de partculas alimenticias no rebase la capacidad fisiolgica de 1os
animales, lo cual podra provocar mortalidad en el cultivo (Hirayawa y Ogawa, 1972;
Barlow y Sleigh, 1980; Braun, 1980; Lavens y Sorgeloos, 1991) por obstruccin de 1os
apendices filtradores y/o ahogamiento por exceso de partculas en suspensin.
La baja correlacin obtenida para la ingestin y la longitud representada en la Fig. 1 (r =
0.32) , pudiera sugerir que la cantidad experimental de clulas y posiblemente la
composicin bioqumica de las mismas, no fueron las ptimas bajo las condiciones en que
se realiz el ensayo, ya que 1os animales no rebasaron las 3,600 de longitud total.
Existen muy pocos trabajos sobre la ingestion de Artemia en sus primeros estados debido a
que es un proceso que varia continuamente de acuerdo a su rpido desarrollo. La mayora
de 1os trabajos se refieren a su etapa adulta (Correa-Sandoval et al., 1994; Olivares-
Gonzalez et al., 1994; Arriaga-Haro y Re-Araujo, 1997). La cantidad de clulas de Ch.
muelleri ingeridas en 1os tubos de ensayo fue diferente de 1os valores reportados por
Garcia-Uloa (1998) para 1os primeros nueve dias de edad y slo la ingestion al dia 10 (> 10
X l0
4
cl./Art/h) en ambos trabajos, es similar al valor promedio para animales de la
misma edad.
Los valores de filtracin para la segunda fase experimental en la que Artemia se cultivo a
varias densidades muestran diferencias significativas (P > 0.05) en el grupo de menor
densidad con relacin al resto de 1os tratamientos para 1os das 2, 4, 8, 9 y 10 de cultivo.
Ms an, l os valores de filtracin ms altos en todos 1os dias experimentales se obtuvieron
para la densidad de 1,000 org./l. Sin embargo, la filtracin promedio de1 da 10 de cultivo
(2.03 ml/Art/h) ue f 5 veces menor al reportado por Garcia-Ulloa, (1998) usando como
alimento la prasinofita Tetraselmis suecica, y 10 veces menor al obtenido por Braun (1980)
utilizando Phaedactylum tricornotum como nica fuente alimenticia. Por otro lado,
Olivares et al. (1994) reportaron una filtracin de 0.011 ml/Art/h, en animales de 45 de
das de edad.
Se observ que al igual que en la primera fase, no existi un incremento notable en la
filtracin, lo cual pudiera tambin explicarse, por la talla pequea (< 5,000 de longitud al
da 10 de cultivo) que presentaron 1os animales durante todo el experimento. El tipo de
contenedor, la densidad, el movimiento de partculas y animales provocado por la aireacin
en 1os garrafones, etc., pudieron influir en las diferencias encontradas tanto en la ingestin
y la filtracin entre las dos fases experimentales y entre el presente trabajo comparado con
otros. Aunque se observ una correlacin menor que la registrada en 1os tubos de ensayo, la
ingestin de partculas en 1os garrafones, mostr ser una variable dependiente de la
filtracin, sin embargo, la tendencia indica que dichos indices mantuvieron una relacin
indirecta con la densidad. Es decir, a mayor densidad, menor la filtracin e ingestion a la
misma concentracin de microalgas (Fig. 6), lo cual coincide con las observaciones de
Sorgeloos et ul. ( 1986) Coutteau (199 1) y Lavens y Sorgeloos (199 1 ), quienes mencionan
que a cualquier edad, la Artemia cultivada a altas concentraciones filtran ms en conjunto
pero menos en forma individual por la reduccin espacial y la disminucin en la
disponibilidad de particulas alimenticias en el medio, entre algunos factores.
Aunque Dierckens et al. (1997) sugieren que las diferencias en la capacidad de filtracin
estn relacionados con las caracteristicas morfolgicas sexuales de algunos organismos
planctonicos filtradores, tal efecto no se observ en el presente trabajo porque 1os animales
no alcanzaron la madurez sexual en el tiempo de cultivo de 10 das. Al mismo tiempo, no
fue posible determinar su maxima capacidad filtradora debido a la pequea talla registrada,
lo cual sugiere que algunas de las condiciones experimentales no fueron las optimas como
puede ser la dosificacin de la racin alimenticia durante las 24 horas, lo cual es
recomendable para optimizar la produccin de biomasa de Artemiu (Lavens y Sorgeloos,
1991, Garcia-Ulloa, 1998). De acuerdo al resultado de ingestion promedio, una Artemia de
11 dias de edad consume cerca de 50,000 clulas de Ch. muelleri por hora (1200,000
c l ./d), por lo que serian necesarias 84 X IO
9
cl./d para mantener una densidad de 7,000
organismos por litro. Considerando que las densidades iniciales de siembra de Artemia en
cultivos masivos son mayores de 3,500 organismos por litro, es importante considerar
tambien, el incremento en el costo de produccin de biomasa de Artemia por concepto de1
cultivo intensivo de microalgas.
La obtencin de una mayor cantidad de biomasa hmeda (3 1.4 g) y la menor sobrevivencia
(55%) en el grupo de 5,000/l, sugiere una mejor eficiencia en el aprovechamiento de1
alimento a dicha densidad probada, reflejada probablemente en animales de mayor peso
corporal, lo cual coincide con Garcia-Ulloa (1998) produciendo Artemia con la microalga
seca Spirulina sp. Johns (1982) menciona que la eficiencia en la asimilacin de alimento
para organismos planctnicos en cultivo varia considerablemente por la metodologa y
condiciones experimentales, al igual que por las caractersticas morfolgicas, composicin
bioqumica y el contenido energtico de la dieta utilizada.
El valor calrico de una clula de Chaetoceros muelleri es de 3.23 X 10
-7
O- joules (Velasco,
1997). As, habiendo mantenido la misma concentracin de microalgas en todos 1os grupos
de la segunda fase experimental, se podra explicar el poco crecimiento de A. franciscana,
acentuandose an ms en 1os tratamientos de las mayores densidades. De acuerdo a la
concentracin de Ch. muelleri usada en el presente trabajo, la cantidad de energia
adicionada durante el tiempo en que se registraron 1os indices de filtracin e ingestin fue
de 3.876 Kj/d, lo cual es comparable con 1os reportes de Arriaga-Haro y Re-Araujo (1997)
Olivares et al. (1994) y Garcia-Ulloa (1998) utilizando Chaetoceros sp. como alimento sin
embargo, dicha cantidad de energa disminuy despus de1 tiempo experimental por el
consumo provocado por 1os animales hasta el siguiente tiempo en que la filtracin y la
ingestin fueron monitoreados. Lo anterior sugiere incrementar la concentracin de dicha
microalga y mantenerla constante durante todo el dia para cubrir 1os requerimientos de A.
franciscana y promover su crecimiento corporal a las condiciones probadas.
Observaciones al microscopio de heces fecales de Artemia alimentada con microalgas
vivas, han revelado la presencia de clulas sin digerir (Garcia-Ulloa, corn. per.), lo que
cuestionaria el uso de la energia total suministrada a A. franciscana en el presente trabajo, y
sugiere al mismo tiempo, un evidente incremento en la concentracin celular para cubrir 1os
requerimientos nutricionales de 1os primeros estados de1 crustaceo en cuestin.
Existen microalgas que por sus caracteristicas morfolgicas y nutricionales, no son
recomendadas como alimento de Artemia, tal es el caso de Chlorella o Stichococcus que
presentan una pared clular rgida que no es facilmente digerida (Sick, 1976) o
Coccochloris, que excreta sustancias gelatinosas que obstaculizan 1os mecanismos
digestivos (Takano, 1967). Algunas especies de Chaetoceros presentan un crecimiento en
cadenas o en forma individual. En el ltimo de 1os casos, pudieran presentar estructuras
externas como largas setas, o intemas como capas de slice, que pudieran dificultar su
., ., -
digestin y asimilacin (Borowitza y Borowitza,1989 )
Tambin es importante conocer el contenido bioqumico de la microalga para ajustar 1os
niveles de energa que satisfagan 1os requerimientos de1 branquiopodo en sus primeros
estados de vida. De acuerdo a varios autores Samain et al., 1980; Slegers, 1991; Garca-
Ulloa, 1998) el requerimiento alimenticio para el crecimiento de 1os primeros estados de
Artemia puede ser cubierto con el uso de dietas conteniendo mayormente carbohidratos
como fuente de energa, ya que las primeras enzimas que aparecen en el patron enzimatico
de dicho crustaceo estn encargadas de desdoblar tales molculas, lo cual se confirma con
la metabolizacin de trehalosa, glicerol y glicgeno durante el proceso embrionario
(Sorgeloos et al., 1986). El contenido de protenas y carbohidratos de Chaetoceros sp.
flucta entre 33-38% y 15-17% respectivamente (Paniagua-Chavez y Voltolina, 1995;
Garca-Ulloa, 1998) lo que pudiera haber influido en el pobre crecimiento de 1os animales
en el presente ensayo.
En ambas fases experimentales, la obtencin de animales de tallas menores a 5 micras (es
decir, organismos inmaduros sexualmente) despues de 10 dias de cultivo, podria
considerarse como un ndice importante que sugiere que la dieta debe ser ajustada en su
calidad y cantidad para que 1os organismos logren cubrir sus requerimientos alimenticios
para su crecimiento. Lo anterior es reforzado adems, por las cantidades de biomasa
humeda obtenida para todos 1os tratamientos, las cuales fueron menores con relacin a 1os
reportados por otros autores (Tobias et al., 1979; Tobias et al., 1980; Lger et al., 1986;
Coutteau, 1991; Lavens y Sorgeloos, 1991; Garcia-Ulloa, 1998) aunque la sobrevivencia
fue similar o mayor, lo que sugiere un estudio sobre la calidad de la dieta usada para
optimizar su produccin. En general, las diferencias en el comportamiento alimenticio de
Artemia en el presente trabajo, pudieran ser atribuidas a los diversos mtodos de cultivo y a
las condiciones experimentales.
VIII. CONCLUSIONES
1. El anlisis de 1os resultados obtenidos indican que 1os requerimientos de A. franciscana
alimentada con Ch. muelleri en ambas fases bajo las condiciones experimentales
probadas,no fueron cubiertos indicado por el pobre crecimiento de los animales.
. .
2. Las diferencias en 1os valores de filtracin e ingestin entre ambas fases experimentales
pudieron deberse a factores como el tipo de contenedor, las condiciones de cultivo, la
densidad y la calidad y cantidad de alimento ajustado.
3. Debido a que 1os organismos no alcanzaron tallas mayores a 5,000 micras de longitud
total en ambos ensayos, se presume una deficiencia energtica en la dieta. De esta
manera, no fue posible registrar valores de filtracin e ingestin con relacin a su
maxima capacidad alimenticia.
4. Los valores de sobrevivencia y biomasa obtenidos indican la produccin de organismos
de bajo peso corporal.
5. La cantidad promedio de clulas ingeridas de Ch. muelleri por A. franciscana en 1os
garrafones, sugiere una especial consideracin sobre 1os costos de produccin de
biomasa por el proceso tecnolgico en el cultivo de la microalga.
6. El estudo de 1os requerimientos alimenticios de A. franciscana alimentada con Ch.
muelleri, incluyen no slo la evaluacin de factores como el crecimiento debido a la
filtracin e ingestin, sino tambin al contenido bioqumico y energtico de la dieta,
adems de su digestibilidad y asimilacin.
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