ATLAS de HISTOLOG IA VEGETAL y ANIMAL

CITOLOG IA AMPLIACIONES

Pilar Molist Manuel A. Pombal Manuel Meg as Depto. de Biolog a Funcional y Ciencias de la Salud Facultad de Biolog a Universidad de Vigo
(Versi on: Mayo 2011)

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 Indice
DETERMINA EL TAMANO CELULAR? 1. QUE 2. MUNDO ARN QUE ADHESION 3. MAS 4. CROMOSOMAS 5. COHESINAS y CONDENSINAS y FUSION de VES 6. FORMACION ICULAS 7. AUTOFAGIA 8. CENTROSOMA Y CICLO CELULAR 9. CILIOS y FLAGELOS 4 8 11 20 32 40 45 48 56

1.

DETERMINA EL TAMANO QUE CELULAR?

Esta es una pregunta a un no resuelta. A ella podr amos a nadir otras preguntas relacionadas tambi en sin resolver: por qu e el tama no de los organismos es caracter stico de especie?, por qu e existe proporcionalidad entre los organos de un organismo como por ejemplo la longitud de las extremidades en humanos?, por qu e incluso en los organismos que crecen constantemente hay organos que tienen unas dimensiones establecidas, como las hojas o los frutos de los arboles? En u ltima instancia todo ello depende de la cantidad y del tama no de las c elulas que componen los organos y por ello a los organismos. A pesar de que no se ha conseguido una teor a aceptada que explique el tama no de las c elulas, se han propuesto diversas hip otesis.

Figura 1: Ciclo celular. Una de ellas es el balance entre divisi on y crecimiento de las c elulas. En un cultivo de c elulas de un metazoo o en organismos unicelulares el tama no de las c elulas se conserva de generaci on en generaci on. En cada ciclo de divisi on las c elulas pasan por distintas fases (ver el apartado del ciclo celular). La fase G1 es la de crecimiento. En general, las c elulas tienen que crecer el doble de su tama no para dividirse y una vez conseguido comienzan la fase S, s ntesis del ADN, y ya no pueden parar hasta dividirse. Se propone que el balance entre crecimiento y divisi on es lo que determina el tama no de la c elula. De alguna manera la c elula sabe que 4

tiene que dividirse cuando ha alcanzado un tama no determinado. Por tanto, existe un sensor que detecta un umbral de tama no celular a partir del cual la c elula entra irremisiblemente en divisi on. Pero este umbral de tama no debe ser un mecanismo molecular que puede variar en funci on del tipo celular y de las condiciones externas, por ejemplo de la disponibilidad de alimento, de la temperatura o de la presencia de factores de crecimiento. Las levaduras sometidas a ambientes enriquecidos en nutrientes aumentan el tama no celular y en medios pobres lo disminuyen. En moscas bajo condiciones experimentales diversas se ha encontrado que el tama no celular y el n umero de c elulas contribuyen al aumento del tama no del organismo, sin saberse exactamente por qu e. As , moscas criadas en ambientes fr os son m as grandes porque tienen las c elulas m as grandes, mientras que aquellas cultivadas con m as alimento son m as grandes porque tienen m as c elulas pero con tama nos normales. Por tanto, los resultados experimentales apuntan a que el tama no celular depende del tipo celular que estemos considerando y de las condiciones en las que se encuentren. Cu ales son los sensores del tama no celular? Se ha propuesto que la cantidad de ribosomas es un sensor del tama no celular. La mayor a de la energ a celular se emplea en producir ribosomas. En levaduras se ha encontrado que la cantidad de ribosomas depende de la cantidad de nutrientes, con lo que se adapta la capacidad de traducci on, producci on de prote nas, a los recursos existentes en el medio. Curiosamente la transcripci on de otras prote nas no se ve afectada. En metazoos parece que la cantidad de ribosomas tambi en es un indicador del tama no celular, pero las v as moleculares que afectan a su s ntesis es multifactorial y dif cil de desentra nar. Tambi en hay resultados que indican que el sistema del factor de crecimiento similar a la insulina (insulin-like growth factor, IGF) parece controlar el tama no celular. Cuando est a mutado en ratones el tama no celular disminuye pero tambi en el n umero de c elulas. As , se tienen individuos que pueden ser un 50 % m as peque nos que sus controles. La ploid a (n umero de copias de un genoma) es otro factor que afecta al tama no celular. Cuanta m as ploid a (mayor n umero de copias del genoma) tiene una c elula mayor es. En salamandras se pueden conseguir individuos pentaploides. Estos animales son igual de grandes que los diploides, pero sus c elulas son m as grandes, luego el cuerpo tiene menos c elulas. Curiosamente existe proporcionalidad. Por ejemplo, un tetraploide tiene la mitad de c elulas que un diploide y por tanto el doble de grandes. Podr amos pensar que es la cantidad de ADN lo que condiciona el tama no celular. En las plantas se ha demostrado que las poliploid as producen 5

c elulas m as grandes, pero tampoco se afecta al tama no nal de la estructura, simplemente se disminuye la tasa de mitosis. La relaci on n ucleo-citoplasma (N:C) es otro factor propuesto, relacionado con la ploid a. El n ucleo no es mayor en las c elulas m as grandes por lo que puede detectar mayor cantidad de una mol ecula determinada en el citoplasma, aunque en el citoplasma la mol ecula siempre est e a la misma concentraci on. De hecho las c elulas poliploides tienen n ucleos m as grandes, as que podr a ser que no fuera la cantidad de ADN sino el volumen nuclear lo que determinara en los organismos poliploides un mayor tama no celular. De nuevo, esta no puede ser la causa u nica puesto que en un organismo existen diversos tipos celulares con tama nos diferentes y tienen la misma dotaci on gen etica.

Figura 2: Al aumentar la proporci on de citoplasma respecto a la del n ucleo aumenta la

cantidad de ciertas mol eculas en el n ucleo.

Una consecuencia de estas observaciones es que pareciera que los organismos fueran capaces de medir las dimensiones de sus cuerpos y el tama no de sus organos para mantenerlos dentro de las proporciones caracter sticos de su especie. Es curioso que cuando se manipulan las c elulas para producir c elulas m as peque nas en un organo, por ejemplo acelerando la tasa de divisi on, el tama no del organo seguir a siendo el mismo. Igual ocurre al contrario, cuando se incrementa el tama no celular, el organo ser a igual de grande pero con menos c elulas. Probablemente se debe a una competici on por los factores de crecimiento y de supervivencia, cuya concentraci on determina un umbral detectado por una v a molecular denominada hippo. La v a impide la sobredimensi on de un organo, y parece actuar tanto en las moscas como en los mam feros. Existen especies que crecen siempre: algunos peces y las plantas. Sin embargo, en las plantas existen partes que s tienen un crecimiento limitado como son las hojas. En peces con crecimiento indeterminado se ha encontrado que a partir de un tama no se cambia el aumento del n umero de c elulas por el aumento del tama no de las c elulas como principal factor de crecimiento. En resumen, numerosas mol eculas parecen afectar al tama no celular 6

complicando la interpretaci on de la respuesta celular frente a condiciones experimentales. No se ha encontrado un gen que controle por s solo el tama no, ni siquiera en organismos tan conocidos como las bacterias. La conclusi on es que el tama no celular puede estar condicionado por numerosos genes y cascadas de se nalizaci on con acciones conuentes. A pesar de ello deben existir unos sistemas sensores que se han mantenido durante la evoluci on y que mantienen a la mayor a de las c elulas dentro de unos par ametros de tama no caracter sticos.
Bibliograf a espec ca Arendt, J. Ecological correlates of body size in relation to cell size and cell number: patterns in ies, sh, fruits and foliage. Biological reviews. 2007. 82:241-256. Baserga R. Is cell size important? Cell cycle. 2007. 7:814-816. Cook M, Tyers M. Size control goes global. Current opinion in biotechnology. 2007. 18:341-350. Cooper S. Control and maintenance of mammalian cell size. BMC cell biology. 2004. 5:35. Day SJ, Lawrence PA. Measuring dimensions: the regulation of size and shape. Development. 2000. 127: 2977-2987. Leevers SJ, McNeill H. Controlling the size of organs and organisms. Current opinion in cell biology. 2005. 17:604-609. Rupes I. Checking cell size in yeast. Trends in genetics. 2002. 9:479-485.

2.

MUNDO ARN

La teor a de que las primeras c elulas surgen a partir de procesos f sico-qu micos, hoy plenamente aceptada, surgi o casi necesariamente. C. Darwin propuso en el Origen de las especies que los organismos proceden de otros organismos y que las diferencias entre ellos, que potencialmente pueden dar lugar a especies nuevas, se consiguen con la selecci on natural actuando sobre la variabilidad fenot pica de tales organismos. La teor a celular dice en uno de sus postulados que toda c elula proviene de otra c elula, pero L. Pasteur elimin o la posibilidad de que hubiera generaci on espont anea, incluso para los organismos m as simples. Todo ello conduce a que la primera c elula surgi o de sustancias inanimadas, una especie de generaci on espont anea, pero no la que refut o L. Pasteur sino una generaci on progresiva y compleja a partir de mol eculas simples que ir an ganando complejidad en sus estructuras, en su composici on y sobre todo en las interacciones de unas con otras. En la sucesi on de etapas que llevaron desde las mol eculas m as simples hasta las primeras c elulas hubo un momento en el que aparecieron mol eculas o conjuntos de mol eculas que tuvieron la capacidad de autoreplicarse y de sufrir selecci on natural. Una vez esto, el resto se podr a explicar por selecci on darviniana a nivel molecular! Los candidatos para ser los primeros protagonistas de la evoluci on podr an ser dos de las principales mol eculas que componen hoy en d a las c elulas: ADN y prote nas. Pero se les ha dejado de lado por las dicultades que presentan. El ADN es un buen soporte para almacenar informaci on, es muy estable y permite variabilidad, pero pr acticamente es inerte y no tiene capacidad de autoreplicarse. Las prote nas tienen una alta capacidad catal tica, es decir, hacen cosas, pero autoreplicar su secuencia de amino acidos parece hoy en d a inabordable. Entonces, qui en podr a ser el candidato? A nales de los a nos 60 del siglo pasado, F. Crick (propuso el modelo de la doble h elice para el ADN, junto con J. Watson), R. Woese y L.E. Orgel proponen que esa mol ecula ins olita debi o ser el ARN. Por qu e? La biolog a molecular ha ido colocando al ARN en un posici on protagonista en el funcionamiento de la c elula. Los siguientes datos lo avalan: 1.- Tiene capacidad catal tica. Las ribonucleoprote nas son capaces de procesar los transcritos primarios en el n ucleo y el ARN ribos omico participa de manera cr tica en la s ntesis de prote nas en los ribosomas. 2.- Transporta informaci on. El ARN mensajero recoge la informaci on del ADN y lo lleva hasta los ribosomas donde es le do para la s ntesis de 8

las prote nas. 3.- Rionucle otidos como el ATP (adenos n tri-fosfato) son la mol ecula energ etica por excelencia de los seres vivos. Cofactores como el NAD+ o el FAD son cruciales en muchas reacciones bioqu micas. 4.- Mol eculas de RNA sometidas a condiciones controladas son capaces de evolucionar. 5.- Los ARN de transferencia son los encargados de reconocer a los amino acidos y colocarlos en una secuencia determinada cuando leen una cadena de ARNm. 6.- La replicaci on del ADN requiere la presencia de peque nos segmendos de ARN denominados cebadores. 7.- La mayor parte del ADN que codica para ARN no lo hace para ARNm sino para ARN que no se traducir a a prote nas y que realiza numerosas funciones celulares. Parece que la proporci on de ADN que se transcribe a ARN mensajero es m nima comparada con la que se transcribe en ARN no codicante. Estos ARN pueden regular la expresi on g enica, la compactaci on del ADN, la metilaci on del ADN, la diferenciaci on celular, etc etera. Todas estas observaciones hacen que el ARN pueda ser esa mol ecula vers atil necesaria en el origen de la vida, pero no concluyen que lo haya sido. Algunos autores ven en la gran cantidad de funciones que desempe nan los distintos tipos de ARN en la c elula como una consecuencia del papel preponderante del ARN en la qu mica prebi otica. Hay sin embargo puntos d ebiles en esta propuesta y argumentos alternativos. Es dif cil reconstruir todos los pasos simulando condiciones primigenias. Los ribonucle otidos son dif ciles de sintetizar y sus componentes se degradan con facilidad, aunque se ha demostrado que en presencia de minerales con boro y bajo ciertas condiciones posibles en la Tierra de aquella epoca se pueden formar ribonucle otidos y con cierta estabilidad, pero se producir an en muy pocas cantidades y las condiciones ser an muy improbables. Pero a un quedar a el enorme problema de ensamblarlos de manera u til. Aparte del enorme obst aculo de la polimerizaci on, nos quedar a otro mayor: la probabilidad de que por azar se forme un pol mero con capacidad de autoreplicaci on es tan baja que algunos cient cos desechan esta posibilidad. Algunos cint cos no aceptan estas teor as por lo alta improbabilidad de que se den todos estos pasos de forma consecutiva. Por ello se ha retomado la propuesta de Oparin de los coacervados o complejos metab olicos. La base de esta teor a radica en que las primeras entidades que fueron capaces de replicarse o dividirse fueron unos conjuntos de mol eculas que sufr an una serie de reacciones de manera 9

que se establec a un ciclo de reacciones qu micas. Probablemente el mejor lugar fueron las fumarolas, pero las fumarolas blancas, menos extremas que las fumarolas negras. De esta manera los compuestos se regeneraban y aumentaban en n umero con la toma de sustratos y energ a externa. Un importante punto de esta idea es la necesidad del aislamiento respecto al medio externo, que podr a darse por pel culas qu micas o por aislamiento en oquedades de las rocas (ver gura =). En la serie de puntos que hemos colocado en la p agina principal habr a que cambiar algunas cosas de sito, la envuelta antes que la autorreplicaci on. Estos agregados ir an ganando en complejidad hasta producir el ARN, que en el fondo no se discute que fuese antes que el ADN y las prote nas. Esto implica que antes de la aparici on del mundo ARN habr a un mundo pre-ARN.
Bibliograf a espec ca Michalak R. RNA world - the dark matter of evolutionary genomics. J Evol Biol. 2006. 19(6):1768-1774. M uller UF. Recreating an RNA world. Cell Mol Life Sci. 2006. 63:1278-1293.

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3.

QUE ADHESION MAS

El agarre de las c elulas a la matriz extracelular o a otras c elulas vecinas mediante mol eculas de adhesi on como las integrinas, cadherinas, selectinas o las inmunoglobulinas, no sirve s olo para sujetarse o para resistir fuerzas de compresi on o de estiramientos. Estas prote nas no tienen una misi on con consecuencias u nicamente mec anicas para la c elulas, sino que tambi en act uan como mecanotransductores. Cuando se unen a sus ligandos.extracelulares, los dominios citos olicos de las prote nas de adhesi on pueden desencadenar procesos internos que afectan a la siolog a celular. As , pueden interactuar con ciertas v as de se nalizaci on interna, afectar a la movilidad celular, provocar cambios en la expresi on de genes, alterar el ciclo celular, incluso pueden determinar la supervivencia de la propia c elula. Asimismo, defectos en la adhesi on celular provocan numerosas patolog as en los organismos que en algunos casos son letales. De hecho la mayor a de las c elulas no se diferencian, proliferan o sobreviven si no est an adheridas correctamente a un sustrato, y la met astasis en los procesos cancerosos necesita un cambio previo de adhesi on celular. Se produce por tanto un ujo de informaci on desde el exterior celular que se transmite al citoplasma gracias a las prote nas de adhesi on, similar al que se da en los receptores cl asicos de la membrana plasm atica. Es decir, la c elula necesita anclarse al medio donde se encuentra y adem as saber a qu e tipo de mol eculas est a sujeta. Tambi en ocurre al contrario, cambios en la siolog a celular afectan a la adhesi on celular. Se produce entonces un ujo de informaci on en sentido contrario, es decir, determinadas mol eculas citos olicas pueden afectar al dominio intracelular de las prote nas de adhesi on que a su vez provoca cambios en la anidad por sus ligandos. As , las mol eculas de adhesi on se comportan como receptores tradicionales o, seg un muchos autores, se peuden considerar como verdaderos receptores ya que constituyen una v a bidireccional de comunicaci on entre el exterior y el interior celular. A las integrinas, por ejemplo, se le han asignado multitud de procesos de modulaci on de la se nalizaci on interna de la c elula, un repertorio tan amplio que se puede comparar con algunos receptores t picos de la membrana plasm atica. Esta comunicaci on bidireccional de las mol eculas de adhesi on es posible porque son prote nas integrales. Tienen un dominio externo con el cual se adhieren a las mol eculas extracelulares, un dominio hidr ofobo que se situa entre las cadenas de los acidos grasos de la membrana plasm atica y otro intracelular que interacciona con numerosas prote nas citos olicas. 11

Figura 3: Dominios extracelulares, transmembrana y intracelulares de las principales

mol eculas de adhesi on.

Figura 4: Las mol eculas de adhesi on pueden transmitir informaci on en los dos sentidos:
desde extracelular a intracelular (gura A, echa verde), y desde intracelular a extracelular (gura B, echa azul).

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Independientemente del sentido en el que viaje la informaci on lo har a mediante cambios conformacionales en la estructura tridimensional de la prote na de adhesi on. Existe otro mecanismo mediante el cual las c elulas pueden alterar su capacidad de adhesi on: alteraci on del n umero y del tipo de mol eculas de adhesi on que est an presentes en la membrana plasm atica. Estas dos variables, n umero y tipo, son controladas por la c elula seg un sus necesidades siol ogicas. Vamos a ver a continuaci on algunos ejemplos en los que las mol eculas de adhesi on afectan a la siolog a celular y tambi en como la c elulas modican las propiedades, tipo y n umero de mol eculas de adhesi on para llevar a cabo sus necesidades siol ogicas: Movilidad celular Cuando una c elula decide desplazarse tiene que cambiar sus reglas de adhesi on, es decir, debe romper los lazos con las c elulas o con la matriz extracelular a las que est a unida en el tejido en el que se encuentra y sintetizar nuevas mol eculas para desplazarsa por los tejidos. Las c elulas de los embriones deben moverse para ocupar sitios nuevos y eso supone un cambio de adhesi on que les permita migrar. Esto ocurre frecuentemente en los epitelios, donde las c elulas deben perder la polaridad, desprenderse de sus c elulas vecinas, convertirse en c elulas migradoras y viajar hasta su nuevo destino. El nuevo destino se reconoce tambi en por adhesi on. Se ha propuesto que las c elulas cancerosas tienen que realizar un proceso similar para convertirse en metast asicas. Las c elulas no nadan sino que reptan mediante puntos de adhesi on al sustrato, que es la matriz extracelular u otras c elulas, que le sirven como puntos de anclaje para tirar del resto de la c elula. Esto hace a las mol eculas de adhesi on elementos esenciales en el frente de avance de la c elula en movimiento, puesto que es esta parte la que se agarra al sustrato y permite al citoesqueleto tirar del resto del c elula. En la p erdida de anidad por las c elulas vecinas participan las cadherinas. Las c elulas epiteliales, por ejemplo, expresan E-cadherinas, mientras que las c elulas mesenquim aticas, que son m oviles, expresan un juego de cadherinas entre las que se encuentran las N-cadherinas, R-cadherinas y cadherina 11. Las N-cadherinas favorecen la movilidad de las c elulas y se ha demostrado que la expresi on de N-cadherina supone un cambio desde la inmovilidad a la movilidad por parte de la c elula. Hay una relaci on entre la progresi on de un c ancer y las cadherinas que se expresan

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Figura 5: El cambio en la expresi on del tipo de cadherina provoca que las c elulas pierdan
anidad por sus compa neras y migren a otros lugares de mayor adhesi on. Es lo que pasa con las c elulas tumorales que provocan met astasis, cambian la expresi on de E-cadherina por N-cadherina.

en las c elulas tumorales. Por ejemplo, las c elulas tumorales que no expresan N-cadherina no son metast asicas pero s las que lo hacen. Esta actividad se puede provocar experimentalmente mediante la inducci on de la expresi on de dicha cadherina. El cambio en el tipo y n umero de cadherinas que una c elula dispone en su membrana plasm atica es una consecuencia de se nales intracelulares. Las N-cadherinas, aunque no las E-cadherinas, producen tambi en otros efectos intracelulares que favorecen la movilidad celular, adem as de la adhesi on. As , cuando la cadherina N est a unida a su ligando, su dominio extracelular interacciona con los dominios extracelulares de los receptores de los factores de crecimiento. Esto impide una eliminaci on de la membrana de tales receptores y por tanto favorece la supervivencia de la c elula. Las N-cadherinas tambi en promueven la supervivencia y el crecimiento mediante la inactivaci on de las v as apopt oticas. Estas v as, que llevan a la muerte celular, se activan cuando las c elulas pierden sus puntos de adhesi on. 14

Figura 6: En el frente de avance de la c elula en movimiento participa el tr aco vesicular

para mantener una concentraci on elevada de integrinas y evitar su difusi on por el resto de la membrana plasm atica. Esto es m as eciente que degradar y sintetizar integrinas.

Si el cambio de mol eculas de adhesi on es importante para iniciar la movilidad celular, tambi en lo es para permitir su desplazamiento. Se ha demostrado que en el frente de avance de las c elulas que se mueven es necesario un recambio constante de las integrinas, mol eculas que se unen a la matriz extracelular, y de las cadherinas, ambas situadas en la membrana plasm atica. Este recambio est a mediado por los endosomas tempranos y otros org anulos que participan en el tr aco vesicular. Se ha demostrado que el tr aco vesicular de integrinas y cadherinas contribuye a promover la invasi on de muchos tejidos durante la met astasis de las c elulas cancerosas, probablemente favoreciendo el recambio y reciclado de uniones focales, que son puntos de adhesi on. Este mecanismo opera tambi en en las c elulas normales que se desplazan en los tejidos. Antes se pensaba que la endocitosis transportaba mol eculas de integrina desde la parte trasera de la c elula hasta el frente de avance para permitir as la adhesi on de las continuas extensiones celulares (podios) que se proyectan hacia la direcci on del movimiento. Sin embargo, los experimentos indican que el tr aco vesicular y r apido reciclado de las integrinas de la membrana plasm atica en

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la zona del frente de avance impide que estas mol eculas difundan por el resto de la membrana plasm atica de la c elula, focaliz andolos por tanto donde deben realizar su funci on, en el frente de avance. Este mecanismo es vital para que el frente de avance explore, se adhiera y sirva de punto de apoyo para arrastrar al resto de la c elula. El movimiento celular tiene que ir acompa nado adem as por la acci on de las cadherinas. Cambios en la expresi on de genes La uni on de la prote na de adhesi on a su ligando es capaz de alterar la expresi on g enica de la c elula. Numerosas prote nas citos olicas pueden interaccionar con los dominios intracelulares de las mol eculas de adhesi on. Estas prote nas, que hacen de intermediarios entre las mol eculas de adhesi on y el citoesqueleto, pueden viajar al n ucleo celular donde act uan como factores de transcripci on o modulan la actividad de otros factores de transcripci on. Esto provoca un cambio en la expresi on g enica. Poseen secuencias de amino acidos que son se nales que les permiten ser introducidas o sacadas del n ucleo por el sistema de importinas y exportinas que funciona en los poros nucleares. Sin embargo, cuando est an unidas a las mol eculas de adhesi on estas secuencias est an enmascaradas. Un primer ejemplo es la prote na denominada JAB, que se puede encontrar tanto asociada al dominio citos olico de las integrinas como localizada en el interior del n ucleo celular. Que alterne de un lugar a otro dependen de si la integrina est a unida a su ligando o no. En el interior del n ucleo JAB1 activa a los factores de transcripci on c-jun, los cuales favorecen la expresi on g enica. Un segundo ejemplo son las -cateninas, las cuales interact uan con el dominio citos olico de las E-cadherinas, pero tambi en se encuentran en el n ucleo donde se asocian con la mol ecula LEF-1, la cual favorece la expresi on de determinados genes. En este caso parece que la uni on de -catenina a las E-cadherinas no depende del estado de uni on de la E-cadherina sino de la cantidad de E-cadherinas que haya en la membrana, lo cual depende de la adhesividad general y del estado de diferenciaci on de la c elula. Cuando hay muchas mol eculas de E-cadherinas, indicio de que la c elula lleva a cabo una fuerte adhesi on, hay un mayor secuestro de -catenina. Un tercer ejemplo lo encontramos en las uniones estrechas donde las mol eculas ZO-1 pueden liberarse y trasladarse al n ucleo donde afectan la expresi on de ciertos genes, los cuales parecen ser necesarios para la reorganizaci on y diferenciaci on de los epitelios. Una de las peculiaridades de las mol eculas de adhesi on es que pueden

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Figura 7: Las mol eculas asociadas al dominio intracelular de las mol eculas de adhesi on
pueden viajar al interior del n ucleo donde afectan a la expresi on g enica. Esta localizaci on depende de la cantidad y estado de uni on de las mol eculas de adhesi on (Modicado de Aplin y Juliano, 2001)

afectar a otras cascadas de se nalizaci on que se dan en la c elula. Por ejemplo, las cadherinas pueden interaccionar con los dominios extracelulares de receptores de los factores de crecimiento, como vimos anteriormente. Esto permite que la v a que potencia el crecimiento y la supervivencia de la c elula se vea modulada por su adhesividad. Otro ejemplo es la interacci on de las prote nas que hacen de puente entre las mol eculas de adhesi on y el citoesqueleto, las cuales forman parte tambi en de otras cascadas de se nalizaci on como es el caso de la -catenina. Las mol eculas Wnt se secretan en los tejidos y afectan a la diferenciaci on, proliferaci on y homeostasis de las c elulas que poseen los receptores Frizzled y LRP. La v a Wnt necesita a la -catenina para llevar a cabo su funci on en el interior del n ucleo afectando a la expresi on g enica. La activaci on de los receptores Frizzled y LRP provoca que la -catenina no sea fosforilada, lo cual evita su degradaci on. Sin embargo, la disponibilidad de -catenina depende de su liberaci on desde los dominios intracelulares de las cadherinas, como vimos anteriormente. Todo esto implica que las v a Wnt

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y la adhesi on celular est an conectadas gracias a una mol ecula com un que es la -catenina y por tanto se modulan mutuamente.

Figura 8: En el interior de la c elula se producen interacciones entre las mol eculas asociadas a las prote nas de adhesi on y otras cascadas de se nalizaci on. As , la -catenina es compartida con la v a de se nalizaci on iniciada por Wnt. N otese que es necesario que exista coordinaci on entre las cadherinas y la activaci on de la v a Wnt para que se produzcan cambios en la expresi on g enica. (Modicado de Gordon y Nusse, 2006)

Ciclo celular El paso por las distintas fases del ciclo celular afecta a la adhesi on celular, y al contrario, la adhesi on afecta al avance del ciclo celular. As , la uni on de las integrinas a sus ligandos es necesaria para avanzar desde la fase G1 a la fase S. La se nal que emiten las integrinas intracelularmente act ua sin ergicamente con las producidas por los factores de crecimiento para hacer avanzar el ciclo celular. Por el contrario, la adhesi on de las cadherinas inhibe este cambio de fase. En las c elulas cancerosas estas v as de se nalizaci on en las que participan las mol eculas de adhesi on est an inhibidas. La uni on de las integrinas a sus ligandos provoca una serie de activaciones que llevan nalmente a favorecer la s ntesis y la estabilidad de la ciclina D, necesaria para la quinasa dependiente de ciclina que se 18

encuentra en el coraz on de la maquinaria molecular que permite el paso a la fase S. En el caso de las cadherinas, cuando est an unidas a otras cadherinas de otra c elula, unen a su dominio citos olico a las mol eculas - y -cateninas, las cuales a su vez unen lamentos de actina. Cuando las cadherinas no est an unidas las -cateninas quedan libres y pueden viajar al n ucleo, como vimos anteriormente, donde provocan la expresi on de la ciclina D1 y de otras prote nas que favorecen la proliferaci on. Estas v as no act uan por separado. Por ejemplo, la v a desencadenada por la integrina activa a una prote na Src, la cual act ua sobre una serie de prote nas que favorecen la internalizaci on de las cadherinas y su degradaci on. Durante la mitosis muchas c elulas pierden la adherencia y se vuelven m as redondeadas, pero la citocinesis y la entrada en G1 requiere que se vuelvan a unir al sustrato del entorno. En el inicio de la mitosis se fosforilan numerosas prote nas que interaccionan con los dominios citos olicos de las prote nas de adhesi on, lo que contribuye a disminuir la capacidad de adhesi on de la c elula. Estas prote nas fosforiladas viajan al interior de la c elula donde realizan funciones relacionadas con los eventos que ocurren en la mitosis. La citocinesis requiere de la acci on de las integrinas, si est an inactivadas no ocurre la separaci on de las c elulas hijas. Se supone que son puntos de anclaje para la generaci on de fuerzas de tracci on. Tanto cadherinas como integrinas se han relacionado con la orientaci on del surco de divisi on que separar a a las dos c elulas y tambi en con el establecimiento de las divisiones asim etricas.
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4.

CILIOS Y FLAGELOS

Los microt ubulos, elementos del citoesqueleto, tienen una funci on esencial en la siolog a celular. El entramado de microt ubulos que se extiende en el citosol es muy maleable gracias a su capacidad de polimerizaci on y despolimerizaci on, fundamentalmente en su extremo m as. Sin embargo, no todos los microt ubulos de la c elula est an sometidos a esta nestabilidad din amica. Existen estructuras celulares en las c elulas animales, en los gametos de algunas especies vegetales y en organismos unicelulares que poseen haces de microt ubulos altamente organizados y muy estables en cuanto a su disposici on y longitud: los centriolos, los cilios y los agelos. En esta secci on vamos a estudiar a los cilios y a los agelos. Cilios Los cilios son expansiones celulares liformes, de unos 0,25 m de di ametro y unos 10 a 15 m de longitud, que aparecen en las c elulas animales y en algunos protozoos. Suelen disponerse densamente empaquetados, a modo de cesped, en las supercies libres de numerosas c elulas, como las que forman los epitelios de los tractos respiratorios, de los conductos del aparato reproductor femenino de mam feros o de las branquias de los peces y bivalvos. Tambi en aparecen en numerosos protozoos. Son estructuras que pueden moverse y su principal misi on es la de desplazar uidos, como ocurre con el mucus del tracto respiratorio, pero tambi en empujan al ovulo a lo largo de las trompas de falopio hasta el u tero o mueven el agua alrededor de las branquias. Los organismos unicelulares los usan para moverse ellos mismos o para arremolinar el l quido que les rodea y as atraer alimento. Una funci on del movimiento ciliar descubierta recientemente est a implicada con el establecimiento de la lateralidad de determinadas estructuras de los vertebrados durante el desarrollo embrionario. El tipo de movimiento que realizan es de bateo, a modo de l atigo, de manera sincronizada, produciendo una especie de ola que desplaza el uido en una direcci on paralela a la supercie de la c elula. Se han observado numerosos cilios, denominados cilios primarios, que no funcionan como estructuras m oviles. Pr acticamente todos los tejidos animales estudiados, excepto las c elulas sangu neas, poseen cilios primarios: oviductos, neuronas, cart lado, ectodermo de las extremidades en desarrollo, c elulas mesenquim aticas, ventr culos cerebrales, c elulas epiteliales de los conductos urinarios, conductos prancre aticas, c elulas 20

hep aticas, e incluso c elulas en cultivo. La mayor a de estos cilios no son m oviles y se pens o que no eran funcionales. Sin embargo, se observ o que la membrana ciliar ten a numerosos receptores y canales i onicos, por lo que se le asign o un papel sensorial. Por ejemplo, los receptores olfativos se encuentran en cilios dendr ticos y los segmentos externos de los conos y bastones de la retina son en realidad cilios modicados. Algunos de los receptores est an m as densamente empaquetados en sus membranas que en el resto de la membrana plasm atica de la c elula. Adem as, existen numerosas mol eculas en el interior del cilio primario que transducen estas se nales. La mayor relaci on supercie/volumen hace que las respuestas intraciliares sean muy intensas frente a se nales externas relativamente d ebiles. Adem as de sustancias qu micas tambi en pueden detectar movimientos de uidos circundantes, actuando como mecanoreceptores.

Figura 9: Esquema que ilustra los modelos de movimiento propuestos para los cilios y
los agelos. En cada caso el ujo neto del uido es diferente.

Flagelos Los agelos son similares a los cilios pero mucho m as largos, con unas 150 m de longitud, y un poco m as gruesos. Su principal misi on es desplazar a la c elula. Son mucho menos numerosos que los cilios en las c elulas que los poseen. Su movimiento tambi en es diferente puesto que no desplazan el l quido en una direcci on paralela a la supercie de la c elula sino en una direcci on paralela al propio eje longitudinal del agelo. Los 21

agelos son frecuentes en c elulas m oviles como ciertos organismos unicelulares y gametos masculinos. Estructura Los cilios y agelos son estructuras complejas con m as de 250 prote nas diferentes. Ambos contienen una estructura central de microt ubulos y otras prote nas asociadas, denominadas conjuntamente como axonema, rodeado todo ello por membrana celular. En su interior, adem as del axonema, se encuentran una gran cantidad de mol eculas solubes que participan en cascadas de se nalizaci on y que forman la denominada matriz. Un axonema consta de 9 pares de microt ubulos exteriores que rodean a un par central. A esta disposici on se la conoce como 9x2 + 2. El par central de microt ubulos contiene los 13 protolamentos t picos, pero las parejas externas comparten protolamentos. Los cilios primarios carecen de par central. A uno de los microt ubulos de cada par perif erico se le denomina t ubulo A y al otro t ubulo B. El A es un microt ubulo completo mientras que el B contiene s olo 10 u 11 protolamentos propios y 2 o 3 compartidos con el A. Esta disposici on se mantiene gracias a un entramado de conexiones proteicas internas. Al menos doce prote nas diferentes se han encontrado formando parte del axonema, las cuales est an implicadas fundamentalmente en mantener la organizaci on de los microt ubulos. Las parejas de microt ubulos externos est an conectadas entre s mediante una prote na denominada nexina. Los t ubulos A de cada pareja est an conectados por radios proteicos a un anillo central que encierra al par central de microt ubulos. En los microt ubulos externos aparece una prote na motora asociada llamada dine na que est a implicada en el movimiento de cilios y agelos. Los microt ubulos se originan por polimerizaci on a partir de una estructura localizada en el citoplasma celular perif erico denominada cuerpo basal. La estructura del cuerpo basal es similar a la de los centriolos, es decir, 9 tripletes de microt ubulos que se disponen formando una estructura cil ndrica. Carece del par central (9x3 + 0). En cada triplete s olo uno de los microt ubulos contiene una forma completa y los otros dos comparten protolamentos. Entre el cuerpo basal y el axonema del cilio existe una zona de transici on que posee s olo los 9 dobletes t picos del cilio pero no el par central. Este se formar a a partir de una estructura llamada placa basal, localizada entre la zona de transici on y el doblete interno. Los microt ubulos tienen sus extremos menos localizados en la punta distal de los cilios y

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Figura 10: Esquema donde se indican los principales componentes de la estructura de

un cilio o un agelo. En los cilios primarios el par central de microt ubulos est a ausente.

agelos. La parte del cuerpo basal m as pr oxima al interior celular se ancla al citoesqueleto mediante estructuras proteicas denominadas radios ciliares Adem as del axonema y sus prote nas asociadas se pueden encontrar otros tres compartimentos en los cilios, sobre todo en los cilios primarios. La membrana ciliar que, en los cilios primarios, contiene numerosos receptores y canales, consistente con la funci on sensorial. Otro compartimento es la matriz, la fase uida que ocupa el interior ciliar. La matriz, adem as de ayudar a matener la estructura del agelo, tambi en tiene prote nas que transducen la se nales generadas en la membrana. Otros dos compartimentos son la base y la parte m as distal del cilio. En la base se encuentra el cuerpo basal y complejos proteicos desde los que parten y nuclean los microt ubulos del axonema. En la parte distal se encuentra un entramado proteico complejo donde aparecen prote nas asociadas a los microt ubulos que estabilizan los extremos menos.

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C omo se produce el movimiento? Cuando los cilios o agelos se separan articialmente de las c elulas contin uan movi endose hasta que se les acaban las reservas de ATP. Esto implica que tienen movilidad intr nseca. El movimiento se produce por deslizamientos de unos microt ubulos sobre otros. Las prote nas nexinas y los radios proteicos son los que impiden que el agelo se desorganice. El movimiento de los microt ubulos est a producido por la dine na, un motor molecular, puesto que es donde se produce la hidr olisis de ATP y si se elimina el movimiento cesa, a un en presencia de ATP. La dine na se ancla con su zona globular al microt ubulo B y con la zona motora al microt ubulo A del par vecino. El proceso es similar al que se utiliza para el transporte de org anulos en el citoplasma celular pero en este caso la carga que transporta es otro microt ubulo. Cuando la dine na se activa produce un desplazamiento de un par respecto al otro. Para permitir un movimiento eciente se necesita una coordinaci on entre las dine na de los dobletes externos de microt ubulos. El control del movimiento parece depender de las concentraciones de calcio y permite a la c elula variar el movimiento de estas estructuras. Una cuesti on interesante es que no todas las dine nas se pueden activar a la vez sino de manera sincr onica. Formaci on de cilios y agelos. Cuerpos basales. Los cilios y agelos que tendr a una c elula se produce durante la diferenciaci on celular y por tanto se tienen que formar de nuevo. Los microt ubulos se forman a partir de los microt ubulos que forman el cuerpo basal. Pero entonces, qui en forma los cuerpos basales? Inicialmente, uno de los centriolos del centrosoma migra hacia la membrana plasm atica, contacta con ella y se inicia la polimerizaci on de los t ubulos A y B del axonema. Al nal del proceso el centriolo se transforma en cuerpo basal. C omo aporta la c elula suciente cantidad de centriolos? Existen al menos tres formas de producir centriolos: a) por divisi on de los centriolos gracias a un proceso por el que se forman nuevos centriolos a partir de la pared de centriolos preexistentes; b) por la presencia de deuterosomas, que son estructuras proteicas a partir de las cuales los centriolos pueden formarse independientemente de otros centriolos. Esto es importante cuando la c elula tiene que crear una gran cantidad de cilios; c) las plantas, que carecen de centriolos, realizan un proceso similar al anterior pero con otro tipo de agregados propios de los vegetales.

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Bibliograf a espec ca Marshall WF, Nonaka S. Cilia: tuning in to the cells antenna. Current biology. 2006. 16:R604-R614. Satir P, Christensen ST. Overview of structure and function of mammalian cilia. Annual review of phisiology. 2007. 69:377-400.

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5.

Y FUSION DE VES FORMACION ICULAS

Las c elulas eucariotas se caracterizan por el reparto ordenado y dirigido de mol eculas entre diferentes compartimentos celulares mediado por ves culas, que act uan como veh culos. Esto supone una gran ventaja puesto que se pueden seleccionar de manera espec ca qu e mol eculas deben ir a cada compartimento,las cuales son en s mismas responsables de las funciones de tales compartimento. Por ejemplo, a la membrana plasm atica deben ir receptores, mol eculas de adhesi on, canales, etc etera. Las ves culas son cargadas en el compartimento fuente con aquellas mol eculas que deben ser transportadas, posteriormente son dirigidas hacia el org anulo diana, al que reconocen, y nalmente se fusionan con el. Entonces, las mol eculas transportadas formar an parte del org anulo y ser an las responsables de su funci on, aunque otras mol eculas s olo estar an de paso y ser an empaquetadas en otras ves culas para ser transportadas a otro compartimento celular.

Figura 11: Pasos que se siguen en el transporte de mol eculas mediado por ves culas. Todos estos pasos requieren la participaci on de una serie de herramientas moleculares: a) Un complejo molecular para reconocer y atrapar las mol eculas que se han transportar. Prote nas adicionales deben formar la ves cula a partir de las membranas del org anulo fuente. Hay que tener en cuenta que el proceso de formaci on de una ves cula es tremendamente complejo puesto que su membrana tiene que formar un pliegue y separarse de la membrana del org anulo fuente. b) Elementos del citoesqueleto para transportar las ves culas desde el org anulo fuente hasta el diana. 26

c) Un complejo molecular para permitir a la ves cula reconozcer y fusionarse con el org anulo diana. Vamos a tratar por separado cada uno de estos procesos. Hay que tener en cuenta que en un mismo org anulo se pueden producir tanto salida como llegada de ves culas como es el caso de la membrana plasm atica, donde endocitosis y exocitosis se producen de forma continua. Formaci on de ves culas La formaci on de una ves cula en un compartiemento fuente es un proceso complejo. Participan numerosas mol eculas: las que seleccionan a las mol eculas que tienen que ser transportadas, las que participan en la formaci on y escisi on de la propia ves cula.

Figura 12: El proceso de formaci on vesicular supone una serie de pasos antes de que sus
mol eculas formen parte de la ves cula.

La formaci on de ves culas recubiertas, como las recubiertas por clatrina, COPI y COPII, son los procesos mejor conocidos. La formaci on de una ves cula recubierta se inicia mediante el reclutamiento de prote nas Arf/Sar a la membrana del org anulo fuente. Son peque nas mol eculas que se activan e inactivan mediante la hidr olisis del GTP. Cuando las mol eculas Arf/sar son activadas en la membrana del org anulo fuente se encargan de reclutar a otras prote nas que formar an parte de la cubierta de la ves cula y que 27

tambi en se encuentran en el citosol. Entre las primeras prote nas reclutadas por las mol eculas Arf/Sar est an las prote na adaptadoras. Estas se encargan de seleccionar las prote nas que deber an incorporarse en la ves cula. Son capaces de reconocer secuencias se nal en los dominios citos olicos de las prote nas transmembrana que a su vez reconocer an a las prote nas del l umen del org anulo fuente que deben ser transportadas. Tambi en son las responsables de incorporar otras prote nas integrales que han de ser tambi en transportadas. Por ejemplo, en las ves culas de exocitosis constitutiva deben viajar prote nas hacia la matriz extracelular, as como receptores transmembrana que deben quedar en la membrana plasm atica. Al mismo tiempo que se produce el mecanismo de selecci on se incorpora una segunda capa de prote nas de la cubierta necesarias en para la formaci on de la ves cula. La formaci on de la ves cula es un proceso que va en paralelo con el reclutamiento de las mol eculas que se transportar an. Es un mecanismo complejo en el que participan numerosas prote nas. Curvar a las membranas en el inicio de la formaci on de una ves cula requiere energ a y la aportan prote nas que se insertan en parte en una de las hemimebranas y que tienen unas secuencias de amino acidos denominados BAR. Hay dos tipos N- y F-BAR. Es posible que ambos dominios generen la curvatura en diferentes momentos de la formaci on de la ves cula. En cualquier caso, ambas forman t ubulos que sobresalen de la membrana del org anulo fuente, en cuyas membranas se encuentran las prote nas adaptadoras unidas a las prote nas que han de ser transportadas. Paralelamente se incorpora una segunda capa de prote nas que forman parte del recubrimiento como la clatrina o las COP, las cuales parecen tener dos funciones: ayudar a reclutar m as prote nas adaptadoras para incorporar m as mol eculas a la ves cula y formar una estructura redondeada a partir de las curvaturas iniciales de la membrana, dando forma nal a la ves cula. Sin embargo, para escindir la ves cula del compartimento fuente se necesita de otras prote nas, denominadas dinaminas, que estrangulan la comunicaci on membranosa entre el compartimento diana y la ves cula. En la formaci on de ves culas, al menos en la membrana plasm atica durante la endocitosis, participan tambi en los lamentos de actina que arrastran y alejan a la ves cula de la membrana. Viaje Tras la separaci on del compartimento fuente la ves cula es dirigida hacia

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el compartimento diana. Este viaje est a mediado por prote nas motoras y elementos del citoesqueleto, tanto lamentos de actina como microt ubulos. Durante este trayecto el recubrimiento de la ves cula no se desprende sino que parece participar en el reconocimiento inicial del compartiemento diana. Tras ello todas las prote nas que envuelven a la ves cula son liberadas y devueltas al citosol para realizar un nuevo ciclo con la formaci on de una nueva ves cula. Fusi on de ves culas El mecanismo de fusi on de una ves cula con su compartimento diana es complejo. Ha de ser selectivo puesto que la c elula ha de asegurarse de que una ves cula s olo se fusiona con aquel compartimento para el que las mol eculas que transporta han sido destinadas. Pero adem as, abrir y fusionar membranas supone saltar una barrera termodin amica importante. Esto se hace en pasos sucesivos.

Figura 13: El proceso de fusi on vesicular supone una serie de pasos antes de que sus
mol eculas formen parte del compartimento diana. (Modicado de Martens 2008).

El primer paso es un reconocimiento inicial (en ingl es: tethering). Es como si se pescara a la ves cula desde el compartimento diana. Esta ca na.est a formada por unos complejos proteicos asociados a las membranas del compartimentos diana. Hay distintos tipos, como COG, CORVET, Dsl1, exocysto, GARP/VFT, HOPS/Class C VPS, TRAPPI y TRAPPII, 29

que se distribuyen de forma selectiva en distintos compartimentos. En este reconocimiento tambi en participan las prote nas Rab que se encuentran asociadas a las ves culas y que son de distinto tipo dependiendo del compartiemento o dominio del compartiemento fuente donde se hayan formado. Este reconocimiento inicial es esencial para la especicidad de la fusi on entre las ves cula y el compartimento fuente. Posteriormente sigue la fusi on de las membranas de la ves cula y del compartimento fuente. Para ello han de participar las prote nas transmembrana SNARE. Hay dos tipos: v-SNARE y t-SNARE. Las v-SNARE se incorporan en la ves cula durante su formaci on en el compartimento fuente y las t-SNARE se encuentran en las membranas del compartimento diana. La interacci on entre v-SNARE y t-SNARE provoca un acercamiento de las membranas de la ves cula y del compartimento diana, liberando adem as la energ a necesaria para la fusi on de ambas membranas. Sin embargo, otras prote nas parecen cooperar con las prote nas SNARE para provocar la fusi on de ambas membranas, que es un proceso termodin amicamente desfavorecido. Antes se pensaba que las prote nas SNARE eran necesarias para el reconocimiento entre ves cula y compartimento pero reconocimiento inicial y fusi on de membranas son procesos independientes. Hay que tener en cuenta que la fusi on entre membranas celulares no siempre involucra a una ves cula y a un compartimento diana. Se producen fusiones entre compartimentos semejantes como ocurre con los endosomas, las mitocondrias o incluso entre ves culas. Se cree que todos estos casos se siguen mecanismos parecidos con implicaci on de mol eculas similares.
Bibliograf a espec ca Cai H, Reinisch K, Ferro-Novick S. Coats, tethers, Rabs, and SNAREs work together to mediate the intracellular destination of a transport vesicle. Developmental cell. 2007. 12:671-682. Maldonado-Baez L, Wendland B. Endocytic adaptors: recruiters, coordinators and regulators. Trends in cell biology. 2006. 16:505-513. Martens S, McMahon H T. Mechanisms of membrane fusion: disparate players and common principles. Nature reviews in molecular cell biology. 2008. 8:543-556. McNiven MA, Thompson HM. Vesicle formation at the plasma membrane and trans-Golgi network: the same but dierent. Science. 2006. 313:1591-1594.

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6.

AUTOFAGIA

La autofagia es un proceso, presente en todas las c elulas eucariotas, por el cual se eliminan mol eculas y org anulos intracelulares en los lisosomas. La palabra autofagia fue acu nada por C. de Duve en 1963 y signica comida (fagia) propia (auto). Este mecanismo se activa cuando hay alg un tipo de estr es celular, infecci on por pat ogenos o malformaciones celulares internas. As , participa en procesos naturales como en el metabolismo energ etico, reciclado de org anulos, regulaci on del crecimiento, inicio del desarrollo embrionario, envejecimiento, etc etera. En las c elulas musculares la autofagia tiene la misi on de eliminar las mitocondrias defectuosas. La autofagia a veces lleva a la muerte celular como ocurre con las c elulas mamarias, tras la lactancia. Aunque el t ermino autofagia se utiliza normalmente para hablar de macroautofagia hay que tener en cuenta que existen diversos tipos de autofagia en las c elulas eucariotas: Macroautofagia: Se forma un compartimento delimitado por una doble membrana que contiene en su interior mol eculas y org anulos del citoplasma. Este compartimento se denomina autofagosoma y se fusionar a con un lisosoma donde se degrada su contenido y la membrana interna. Microautofagia: La membrana del lisosoma forma peque nas invaginaciones que se desprenden de la membrana y quedan en el interior del lisosoma, donde son degradadas. En estas invaginaciones se incorpora material citos olico. Autofagia mediada por chaperonas: En este caso se incorporan prote nas citos olicas al lisosoma mediante un transportador localizado en la membrana del lisosoma. Crinofagia: Este proceso supone la fusi on de ves culas destinadas a la exocitosis con el lisosoma. La macroautofagia se puede inducir experimentalmente, por ejemplo con la eliminaci on de amino acidos de la dieta de la c elula. Lo primero que se forma es una cisterna membranosa que crece en longitud denominada fag oforo o membrana de aislamiento, la cual crecer a en extensi on y terminar a por unir sus extremos para formar un compartimento cerrado denominado autofagosoma. El autofagosoma recibe ves culas desde los endosomas o puede llegar a fusionarse directamente con ellos, tanto tempranos como tard os, que le aportan prote nas lisosomales y bombas de protones, lo que va provocando su acidicaci on. A este compartimento resultante se le denomina ansoma. Como u ltimo paso, el ansoma se 31

Figura 14: Macroautofagia. Tras la aparici on del fag oforo se produce el cierre de sus
membranas y se forma el autofagosoma, que est a rodeado por una doble membrana. Tras esto, puede fusionarse con un endosoma form andose un ansoma. En cualquier caso el paso nal es fusionarse con un lisosoma para formar el autolisosoma, donde se degrada su contenido y la membrana interna. (Modicado de Klionsky 2007) .

fusiona con los lisosomas permitiendo la degradaci on del contenido interno del autofagosoma junto con su membrana interna. Al compartimento que se crea tras la fusi on se le denomina autolisosoma.

Figura 15: Distintos tipos de autofagia. (Modicado de Eskelinen 2008). Quedan dudas sobre el origen de las membranas del fag oforo. Hay dos posibilidades, que se forme a partir del ret culo endoplasm atico o como resultado de la fusi on de ves culas intracelulares. Curiosamente las membranas del autofagosomas carecen de mebranas integrales. En las levaduras parece originarse a partir de una estructura permanente, un compartimento perivacuolar denominado estructura preauofagos omica (PAS). Tampoco se sabe con exactitud si la macroautophagia es 32

inespec ca o si tambi en tiene capacidad de seleccionar a los org anulos que va a incorporar en el autofagosoma.
Bibliograf a espec ca Eskelinen G-L. New insights into the mechanisms of macroautophagy in mammalian cells. Internacional review of cell and mollecular biology. 2008. 266:207-247. Klionsky DJ. Autophagy: from phenomenology to molecular understanding in less than a decade. Nature reviews in molecular and cell biology. 2007. doi:10.1038/nrm2245.

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7.

CROMOSOMAS

En esta p agina vamos a tratar la organizaci on estructural de la cromatina a lo largo del ciclo celular y las caracter sticas morfol ogicas de los cromosomas. La informaci on gen etica de las c elulas eucariotas est a almacenada en cadenas de ADN enormemente largas (si exceptuamos a las mitocondrias y a los cloroplastos, con cadenas de ADN mucho m as cortas). El ADN es una mol ecula relativamente inerte y necesita de las prote nas para expresarse, para regular dicha expresi on, para replicarse y para organizarse en el interior del n ucleo. Tambi en necesita la actividad de las prote nas para que se repartan durante la fase M las dos copias de cada mol ecula de ADN, tras replicarse durante la fase S, entre las dos c elulas hijas resultantes. Por tanto, el ADN siempre est a asociado a prote nas y al conjunto de ADN m as prote nas asociadas se le denomina cromatina.

Figura 16: Imagen de varias c elulas realizada con un microscopio electr onico en cuyos
n ucleos se observan ac umulos de heterocromatina, que aparece de color negro (asteriscos blancos), y de eucromatina, de color claro y aspecto granulado (asteriscos rojos).

En el n ucleo en interfase (fases G1, S y G2) y en c elulas que no se est an dividiendo, se puede observar a la cromatina en dos estados: poco densa (eucromatina) y m as empaquetada (heterocromatina), mientras que en la fase M, sobre todo en metafase, la cromatina est a fuertemente compactada formando unas estructuras denominadas cromosomas. Tras la fase M, la cromatina que forma los cromosomas se descondensa para formar de nuevo un n ucleo t pico en interfase. Es decir, durante el ciclo celular se produce condensaci on y descondensaci on de la cromatina. Aunque tambi en fuera de la fase M se producen cambios en la compactaci on de la cromatina. As , la

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denominada heterocromatina facultativa, tambi en denominada eucromatina heterocromatinizada, puede cambiar entre los estados de heterocromatina y de eucromatina seg un las necesidades de la c elula. Nucleosomas (10 nm de di ametro) Como vimos en la p agina dedica a la cromatina, el ADN siempre se encuentra asociado a unas prote nas denominadas histonas. La asociaci on ADN-histonas produce una unidad de organizaci on b asica que se denomina nucleosoma. Podr amos decir que el nucleosoma es el nivel m as b asico de empaquetamiento del ADN. Se estima que un n ucleo de una c elula humana contiene 3,3x107 nucleosomas. Un nucleosoma est a formado por un n ucleo de histonas, alrededor del cual est a enrollada la cadena de ADN. Esta u ltima da aproximadamente dos vueltas al n ucleo de histonas, lo que representa unos 166 pares de bases (el ADN es una doble cadena). Entre dos n ucleos de histonas contiguos, m as ADN enrollado, existe ADN de uni on de unas 34 pares de bases de longitud, por lo que existen c uantosde unos 200 pares de bases que se repiten en la cromatina. Hay que tener en cuenta que este ADN de uni on entre nucleosomas puede variar ampliamente entre tipos celulares y tejidos diferentes, incluso dentro de un mismo n ucleo. La parte proteica del nucleosoma est a constituida por un oct amero de histonas formado por cuatro d meros de los tipos de histonas H3, H4, H2A y H2B. Cada una de estas histonas tiene una secuencia de unos 30 amino acidos en su extremo amino que sobresale del nucleosoma y que es una de las regiones mejor conservadas evolutivamente. Estas colasde las histonas tienen dos funciones importantes: regulan el acceso de otras prote nas al ADN para la transcripci on, replicaci on y reparaci on, y permiten grados de mayor compactaci on de la cromatina mediante la interacci on y acercamiento de nucleosomas vecinos. Fibras (30 nm de di ametro) La histona H1 o histona de conexi on, de la cual en mam feros hay al menos 8 variantes, se asocia al ADN de uni on, en un lugar muy pr oximo a la salida o entrada del ADN al nucleosoma. Una funci on de la histona H1, junto con las histonas del nucleosoma, es favorecer el empaquetamiento de la cromatina en bras de 30 nm de grosor. Existen diferentes teor as en cuanto al modo en que se organiza el ADN cuando se compacta en estas bras: formando una h elice, en zig-zag o con uniones cruzadas, entre otras. Hay diversos modelos de c omo se aumenta la compactaci on de la

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Figura 17: Esquema de los diferentes grados de empaquetamiento de la cromatina, desde

los nucleosomas hasta los cromosomas.

cromatina desde las bras hasta los cromosomas, el mayor grado de empaquetamiento de ADN. La mayor a de los autores proponen que las bras se organizan formando bucles, de unos 300 nm. Se ha propuesto que los bucles se empaquetan m as en unas estructuras denominadas crom omeros (300 a 700 nm). Estos u ltimos ser an tambi en constituyentes de la heterocromatina y aparecer an en forma de granulado oscuro en los n ucleos en interfase. Sin embargo, numerosos autores proponen que los bucles se compactan directamente, sin formar estructuras discernibles m as compactadas, hasta formar los cromosomas. La heterocromatina corresponder a con diferentes grados de empaquetamiento de las bras de 30 nm.

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Cromosomas La entrada en fase M supone que la mayor parte de la cromatina, tanto eucromatina como heterocromatina, pasar a a formar los cromosomas. Esta u ltima compactaci on est a dirigida y mantenida por una serie de prote nas entre las que se encuentran la cohesina y la condensina, y aparentemente la topoisomerasa 2. Cada cromosoma en metafase est a formado por dos crom atidas hermanas, que resultan de la replicaci on del ADN durante la fase S y se mantienen unidas por las condensinas. Esta uni on entre crom atidas quedar a posteriormente reducida a una u nica regi on, la regi on centrom erica. Muchas de las especies animales que nos son comunes son diploides, es decir, tienen dos copias de cada cromosoma (cromosomas hom ologos) y son portadoras por tanto de dos formas de cada gen, denominadas alelos. El cariotipo es el conjunto completo de los pares de cromosomas de una c elula tal y como aparecen en metafase. El n umero, las formas y los tama nos de los cromosomas que forman el cariotipo son caracter sticos para cada especie, aunque existan excepciones. Hay dos tipos de cromosomas en un cariotipo: los autosomas y los cromosomas sexuales. Mientras que los autosomas son los mismos en hembras y en machos, los sexuales pueden ser diferentes. Por ejemplo, las hembras de los mam feros presentan dos cromosomas X mientras que los machos presentan un cromosoma X y otro Y (La u ltima pareja de la primera la de la imagen anterior del cariotipo son los cromosomas sexuales). En cuanto al n umero de cromosomas, este puede variar seg un la especie considerada, desde 1 o 2 cromosomas, como en ciertas especies de hormigas, hasta m as de 700, como en algunos helechos. Con el microscopio optico se pueden observar diferentes regiones en los cromosomas caracterizadas por diferencias morfol ogicas debidas al distinto grado de compactaci on de la cromatina como los centr omeros o constricciones primarias, las constricciones secundarias y los sat elites, por su situaci on en el cromosoma como los tel omeros o por las diferencias en su tinci on como las bandas. Los extremos de los cromosomas se denominan tel omeros y el lugar de uni on de las crom atidas hermanas se denomina centr omero o constricci on primaria. La forma de los cromosomas es importante para el estudio de los cariotipos puesto que nos permite identicar y comparar cromosomas de forma individualizada. Principalmente viene determinada por la posici on del centr omero, pues este pone de maniesto en el cromosoma sus dos

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brazos, generalmente uno m as corto que el otro. Los cromosomas metac entricos presentan dos brazos de longitud similar (por ejemplo, las parejas A5 y E20 de la imagen del cariotipo), los submetac entricos tienen un brazo claramente m as corto que el otro (por ejemplo, las parejas A2 y C14 de la imagen del cariotipo). En los cromosomas subteloc entricos o acroc entricos la diferencia en longitud de los brazos es mayor que en los submetac entricos (por ejemplo, la parejas B6 y D19 de la imagen del cariotipo) y en los cromosomas teloc entricos uno de los brazos es muy corto o inexistente, es decir, el punto de uni on entre crom atidas hermanas est a en el extremo de estas (por ejemplo, las parejas D16 y D17 de la imagen del cariotipo). Un centr omero t pico aparece como una constricci on, denominada primaria, visible con el microscopio optico en los cromosomas en metafase de eucariotas superiores. Se podr a denir una constricci on primaria como un lugar del cromosoma donde no se pueden discernir las dos crom atidas hermanas y en el que ambas crom atidas son m as delgadas que en el resto del cromosoma. El centr omero es una regi on especializada del cromosoma, formada por cromatina menos condensada, que dirige la segregaci on de los cromosomas en la anafase. Esto es debido a que sobre el se ensambla un complejo proteico, el cinetocoro, al que se unen parte de los microt ubulos que constituyen el huso mit otico, posibilitando la correcta separaci on de las crom atidas hermanas a polos distintos durante la anafase. Hay dos tipos de cinetocoros, los denominados localizados y los difusos. En el primer caso, el m as frecuente, el cinetocoro ocupa una regi on u nica en el cromosoma (el centrosoma) y sobre el convergen parte de los microt ubulos del huso mit otico. Un caso extremo de este tipo es cuando el centr omero est a tan localizado que ensambla un cinetocoro al que s olo se une un microt ubulo, como ocurre en algunas levaduras. Los cinetocoros difusos, que son poco frecuentes, no se localizan en una regi on peque na del cromosoma sino que las prote nas del cinetocoro se distribuyen por todo el cromosoma, as como los puntos de anclaje de los microt ubulos. En los brazos de los cromosomas se detectan a veces otras constricciones, denominadas secundarias, en las que las crom atidas hermanas no est an unidas como en el centr omero y que son regiones de cromatina menos condensada. La constricci on secundaria mejor conocida es la generada por la presencia de las secuencias de ADN que forman parte del nucl eolo, denominada regi on organizadora del nucl eolo (NOR). Esta constricci on secundaria s olo aparece en uno o varios cromosomas del cariotipo y se encuentra situada en una regi on intermedia (no terminal) del cromosoma. Si estas regiones intermedias est an pr oximas a los tel omeros, 38

las constricciones secundarias separan un peque no fragmento terminal de la crom atida del resto de la misma. Estos fragmentos terminales son denominados sat elites y aparecen por ejemplo en los extremos de los brazos cortos de los cromosomas humanos 13, 14, 15, 21 y 22. Tambi en con el microscopio optico se pueden distinguir ciertas regiones dispuestas en bandas de distinta intensidad de tinci on o de distinto color cuando se ti nen los cromosomas con determinados colorantes, algunos uorescentes. El patr on de bandas depende del tipo de tratamiento previo del cromosoma y de la clase de tinci on empleada, as como de las caracter sticas estructurales (riqueza en pares de bases guanina y citosina, compactaci on de la cromatina) o funcionales (momento de la replicaci on) del ADN que las componen. Puesto que estos patrones de bandas son caracter sticos de cada cromosoma, su uso es esencial para identicar inequ vocamente cromosomas similares en tama no y morfolog a. Las bandas cromos omicas tienen una gran utilidad en la detecci on de alteraciones cromos omicas o para situar con precisi on la posici on ocupada por genes concretos en un cromosoma. Si pensamos en el n ucleo interf asico como un amasijo de cromatina, es dif cil imaginar c omo la c elula es capaz de manejar esta cromatina, condensarla y descondensarla, sin formar un enorme enredo. Lejos de ser un amasijo, la cromatina que corresponde a cada cromosoma est a claramente organizada y ocupa un determinado territorio dentro del n ucleo, es decir, hay una segregaci on espacial, aunque no fronteras estrictas, entre la cromatina de los diferentes cromosomas en el n ucleo en interfase. Es interesante rese nar que tambi en los cromosomas hom ologos se despliegan en regiones diferentes del n ucleo y que la posici on de los territorios de los diferentes cromosomas var a a lo largo del ciclo celular. No s olo eso, dentro de cada territorio las regiones que se replican durante la primera mitad de la fase S (regiones de replicaci on temprana) se encuentran separadas de las que se replican en la segunda mitad de la fase S (regiones de replicaci on tard a). Esta organizaci on tambi en est a relacionada con la concentraci on de genes y la actividad g enica en unas y otras regiones.
Bibliograf a espec ca Belmond AS. Mitotic chromosome scaold structure: new approaches to an old controversy. Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 2002. 99:15855 -15857. Bolzer A, Kreth G, Solovei I, Koehler D, Saracoglu K, Fauth C, Muller S, Eils R,

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Cremer C, Speicher MR, Cremer T. Three-dimensional maps of all chromosomes in human male broblast nuclei and prometaphase rosettes. PLOS biology. 2005. 3(5):e157. doi:10.1371/journal.pbio.0030157 Vagnarelli P, Ribeiro SA, Earnshaw WC. Centromeres: old tales and new tools. FEBS Letters. 2008. 582:1950 -1959. Wanner G, Formanek H. A new chromosome model. Journal of structural biology. 2000. 132:147 -161.

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Figura 18: Im agenes de cromosomas en metafase (pulsar en ellas para verlas ampliadas).
En estas dos im agenes se muestran los cromosomas en metafase de un h amster sirio te nidos con la mol ecula uorescente naranja de acridina. Las bandas que se observan en los cromosomas son bandas de replicaci on. En la imagen de arriba se muestran los cromosomas tal y como se observan tras el proceso experimental de obtenci on y tinci on, mientras que la imagen de abajo muestra el cariotipo, es decir, los cromosomas hom ologos emparejados y ordenados. (Im agenes donadas por Concepci on P erez Garc a y Juan Jos e Pasantes Lude na. Dpto. de Bioqu mica, Gen etica e Inmunolog a; Facultad de Biolog a. Universidad de Vigo)

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Figura 19: Esquema de las estructuras visibles de un cromosoma al microscopio o ptico.

Estas estructuras no necesariamente aparecen a la vez en todos los cromosomas.

Figura 20: Esquema de los diferentes nombres que se dan a los cromosomas seg un la
longitud de sus brazos.

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Figura 21: En la imagen de la izquierda aparecen cromosomas de humano donde se

aprecian bandas C o regiones de heterocromatina constitutiva, las cuales suelen localizarse en las proximidades de los centr omeros. En torno a ellos se asocian una serie de prote nas que constituyen los cinetocoros, a los cuales se unen parte de los microt ubulos del huso mit otico, esquematizado en la imagen de la derecha. (La imagen de la izquierda donada por Concepci on P erez Garc a y Juan Jos e Pasantes Lude na. Dpto. de Bioqu mica, Gen etica e Inmunolog a; Facultad de Biolog a. Universidad de Vigo).

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Figura 22: Im agenes de cromosomas en metafase (pulsar en ellas para verlas ampliadas).
Arriba) Cromosomas de humano te nidos con el colorante giemsa. Abajo) Cromosomas de humano te nidos con la mol ecula uorescente naranja de acridina. (Im agenes donadas por Concepci on P erez Garc a y Juan Jos e Pasantes Lude na. Dpto. de Bioqu mica, Gen etica e Inmunolog a; Facultad de Biolog a. Universidad de Vigo)

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Figura 23: Los cromosomas se descondensan durante la anafase y su cromatina se distribuye por el n ucleo de forma organizada ocupando territorios denidos que no suelen entremezclarse. (Modicado de Bolzer et al., 2005).

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8.

COHESINAS y CONDENSINAS

El cambio de estado de la cromatina durante el ciclo celular es dram atico. En la interfase una gran parte tiene una organizaci on laxa y desempaquetada (eucromatina), aunque otra parte est a condensada (heterocromatina). Durante el funcionamiento normal de la c elula hay porciones de cromatina que alternan entre los estados laxo y condensado. Estas transiciones en el grado de organizaci on del ADN son imprescindibles para el funcionamiento celular. Durante este periodo tienen que transcribirse (leerse) una gran cantidad de genes y por tanto ser accesibles a las polimerasas y factores de transcripci on, por lo que la cromatina ha de estar descondensada. Sin embargo, durante la mitosis la cromatina alcanza un alto grado de compactaci on y organizaci on para formar los cromosomas. En esta etapa del ciclo celular lo que prima es el reparto y la segregaci on del ADN entre las c elulas hijas, lo que se hace mejor si la cromatina est a bien empaquetada y dividida en porciones discretas, los cromosomas. Obviamente la cromatina no puede moverse por s misma ni tiene propiedades de adhesi on. Qui en mueve al ADN es el citoesqueleto, fundamentalmente los microt ubulos. Al empaquetamiento de la cromatina contribuyen las propias histonas y tambi en unos complejos proteicos que ayudan a la compactaci on como son las condensinas y las cohesinas. De estas u ltimas vamos a tratar en esta p agina. Cohesinas[0.5cm] La primera funci on que fue atribuida a las cohesinas, y por la cual llevan su nombre, es la de mantener las crom atidas hermanas unidas durante el ciclo celular hasta su correcta segregaci on en la anafase. En la levadura Saccharomyces cerevisae se ha comprobado que los complejos de cohesina se ensamblan a las crom atidas en las fases G1 y S del ciclo celular, al tiempo que estas se replican. Este proceso se conoce como carga es dependiente de ATP. Durante la mitosis es esencial en primer lugar la ordenaci on de los cromosomas en la placa metaf asica y en segundo lugar la p erdida de cohesi on entre crom atidas hermanas que permita la migraci on a polos opuestos durante la anafase. Este proceso es posible por la liberaci on de forma abrupta de las cohesinas que dejan de enlazar a las crom atidas hermanas. Proceso que ha de coordinarse de forma estricta con el cambio de metafase a anafase, es decir, con la puesta en marcha de los mecanismos de tracci on de los microt ubulos del huso mit otico. La acci on simult anea de la separaci on de crom atidas y la tracci on de los microt ubulos es el
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resultado de un mecanismo de convergencia entre dos v as moleculares que se inician antes en el tiempo y que est an disparadas por la enzima quinasa dependiente de ciclina M (M-cdk).

Figura 24: Esquema de la estructura y composici on molecular de la cohesina. SMC1 y

3: structural maintenance of chromosomas.o mantenimiento estructural del cromosoma (Imagen preparada por Angela L. Debenedetti y Daniel Garc a, alumnos de 4o de Biolog a. Modicado de Barbero 2009).

Al llegar a la fase M la cohesina une crom atidas hermanas en toda su extensi on, pero la M-cdk, entre los estados de profase y prometafase, fosforila directamente a un componente del complejo de la cohesina denominado kleisina (ver esquema molecular de la cohesina), lo que provoca la disociaci on de la cohesina de los brazos de las crom atidas pero no de los centr omeros, por lo que las crom atidas permanecen unidas por este punto. Las cohesinas del centr omero evaden esta fosforilaci on por la actividad de una prote na fosfatasa PP2A que se encuentra asociada a esta regi on. De este modo, las crom atidas hermanas enlazadas por el centr omero pueden disponerse de forma ordenada en la placa metaf asica. La M-cdk tambi en ha fosforilado en las primeras etapas de la mitosis el complejo proteico APC (factor promotor de la anafase; en ingl es: anaphase promoting factor), el cual disociar a el d mero proteico securina-separasa. La misma M-cdk se ha encargado de fosforilar a prote nas que hacen que el citoesqueleto del huso mit otico cree las fuerzas que arrastrar an y separar an las crom atidas, ya desunidas. Estas fuerzas se maniestan durante durante toda la mitosis. 47

Figura 25: Esquema donde se muestra la acci on de la cohesina durante la mitosis permitiendo la uni on de las crom atidas desde la profase hasta la anafase. La acci on de la M-cdk permite tres procesos de forma simult anea que convergen en la anafase: favorecer la formaci on del huso mit otico, desvincular las condensinas que no se encuentran en el centr omero y disparar la separaci on del complejo securina-separasa para permitir que la separasa elimine al complejo Shugosina-PP2A, que manten a los centr omeros unidos gracias a las cohesinas, y pueda comenzar la anafase. (Imagen preparada por Angela L. Debenedetti y Daniel Garc a, alumnos de 4o de Biolog a. Modicado de Barbero 2009).

Las cohesinas son tambi en esenciales en el reparto de cromosomas durante la meiosis, pero aqu su actuaci on es m as compleja que en la mitosis debido a que los procesos de segregaci on de los cromosomas son tambi en m as complejos. En la primera divisi on mei otica los complejos de cohesina se disponen entrelazando tanto a las crom atidas hermanas (en los brazos y en el centr omero), al igual que ocurr a en la mitosis, como a los brazos de los cromosomas hom ologos, manteniendo as la cohesi on de los bivalentes. De esta manera pueden permanecer unidos hasta su adecuada ordenaci on en el plano ecuatorial en la metafase I. Al comienzo de la anafase I, a trav es de la v a dependiente de separasa, se desligan los complejos de cohesina presentes en los brazos cromos omicos, los que 48

enlazan crom atidas hermanas y los que unen cromosomas hom ologos. De nuevo las cohesinas de la regi on centrom erica conservan la uni on existente entre crom atidas hermanas. Cada hom ologo, con su par de crom atidas, migra a polos opuestos. As concluye la primera divisi on mei otica. Alcanzada la segunda divisi on mei otica, en la prometafase II, los cinetocoros hermanos se asocian a los microt ubulos de polos opuestos celulares, a un con las cohesinas dispuestas en la regi on del centr omero. En la prometafase II tard a de mam feros, la interacci on de los microt ubulos de polos opuestos con los cinetocoros hermanos genera tensi on en el centr omero desencadenando la deslocalizaci on de la fosfatasa PP2A de los centr omeros y en la transici on metafase II/anafase II, la separasa puede romper las uniones de las cohesinas centrom ericas provocando la segregaci on de las crom atidas, al igual que ocurr a en la mitosis. Al margen de su funci on de cohesi on entre crom atidas hermanas a lo largo del ciclo celular, a las cohesinas se les han atribuido tambi en papeles en la reparaci on de ADN, en el control de la expresi on g enica y en otros nuevos roles que est an siendo descubiertos en procesos bioqu micos ajenos a los aqu descritos. Condensinas La condensaci on cromos omica resulta esencial por dos motivos. La primera es compactar la cromatina para formar los cromosomas y permitir as formar una estructura robusta que permita soportar el estr es de tracci on al que se ven sometidos durante la segregaci on cromos omica. Por otra parte, ser a dif cil pensar en una segregaci on correcta del ADN entre las c elulas hijas si la cromatina estuviese descondensada por todo el n ucleo, se dar an enrollamientos entre hebras de cromatina que impedir an su reparto. Se ha demostrado in vitro que el complejo SMC (ver el esquema del complejo molecular de la condensina) induce la tensi on del DNA en un proceso dependiente de ATP. Primeramente, y en presencia de la enzima topoisomerasa I, induce el superenrollamiento de la cromatina. En segundo lugar, promueve la formaci on de lazos, en colaboraci on con la enzima topoisomerasa II. Se cree que los mismos procesos ocurren en las c elulas durante la profase. Se cree que el d mero de subunidades SMC de la condensina puede aumentar el angulo de apertura de sus brazos y asociarse a regiones distantes de las mol eculas de DNA por interacci on de estas con los

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Figura 26: Esquema de la estructura y composici on molecular de la condensina (Ima gen preparada por Angela L. Debenedetti y Daniel Garc a, alumnos de 4o de Biolog a. Modicado de Maeshima y Eltsov, 2008).

dominios de sus cabezas. A continuaci on, la estructura del d mero regresa a su estado inicial, induciendo una fuerza de tracci on en el DNA que promueve su plegamiento formando un lazo. Mediante interacciones entre los d meros SMC de distintos complejos de condensinas se formar an estructuras nucleoproteicas de mayor orden en disposici on de anillos o h elices. Todo ello permite la condensaci on de la cromatina resultando en los cromosomas mit oticos. Hay distintos tipos de condensinas que act uan en diferentes fases del proceso de compactaci on de los cromosomas. La condensina II participa en una fase temprana de condensaci on cromos omica, mientras que la condensina I, ayudada por la condensina II, ser a la que d e forma y estabilice los cromosomas en una fase de condensaci on m as tard a. Durante la interfase, existe una diferencia en la localizaci on espacial de la condensina I y la condensina II: la primera se ubica en el citoplasma, mientras que la segunda se halla en el interior del n ucleo. Esta distribuci on desigual determina el momento de acceso de las condensinas al material gen etico. As , la condensaci on inicial de la cromatina durante la profase se produce por la actividad de la condensina II, gracias a que es fosforilada por diferentes quinasas. Al nal de la profase la envuelta nuclear se desorganiza y la condensina I, que se encontraba en el citoplasma, tiene acceso a la cromatina. Entonces las actividades conjuntas de las

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Figura 27: Esquema de la formaci on de bucles por parte de las condensinas (imagen de la
derecha). La l nea azul representa a la cromatina. Las im agenes de la derecha intentan dar una visi on tridimensional sobre el efecto de las condensinas sobre la cromatina. Hay que tener en cuenta que la disposici on de los bucles y su disposici on tridimensional (im agenes de la derecha) no son tan regulares como aparecen en el esquema (Im agenes preparada o por Angela L. Debenedetti y Daniel Garc a, alumnos de 4 de Biolog a. Modicado de Maeshima y Eltsov, 2008).

condensinas I y II ayudan a compactar el ADN hasta los niveles vistos en los cromosomas metaf asicos. A pesar de que los cromosomas de vertebrados son capaces de compactarse casi espont aneamente, en ausencia de condensinas pierden su arquitectura organizada durante la anafase. Adem as, se supone que los complejos de condensina deben permanecer activos tras el cese de la actividad Cdk a medida que transcurre la anafase, con el n de garantizar la correcta migraci on de los cromosomas a los polos opuestos. La actuaci on de las condensinas en la compactaci on mei otica de la cromatina todav a no ha sido estudiada con detalle, por lo que no podemos aportar datos en lo que ata ne a este mecanismo. Las condensinas tambi en se han relacionado con la regulaci on de la compactaci on de la cromatina durante la interfase. Al alterar el grado de compactaci on de la cromatina permiten o deniegan el acceso de la maquinaria de transcripci on a las regiones g enicas. Pero parece que este mecanismo regulatorio est a basado en otras rutas moleculares distintas a

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Figura 28: Acci on de las condensinas I y II en las diferentes fases de la mitosis (Im age nes preparada por Angela L. Debenedetti y Daniel Garc a, alumnos de 4o de Biolog a. Modicado de Ono et al., 2004)

Figura 29: Acci on conjunta de las cohesinas y las condensinas. (Im agenes preparada
por Angela L. Debenedetti y Daniel Garc a, alumnos de 4o de Biolog a. Modicado de Maeshima y Eltsov, 2008).

las que act uan durante la mitosis, aunque tambi en participen las condensinas. Se ha descrito la acci on de las condensinas y de las cohesinas por

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separado pero ambas act uan conjuntamente y de forma coordinada durante la divisi on celular. En el siguiente esquema se resumen ambas actuaciones.
Bibliograf a espec ca Barbero JL. Cohesins: chromatin architects in chromosome segregation, control of gene expression and much more. Cellular and molecular life sciences. 2009. 66:2025-2035 Hirano T. SMC proteins and chromosome mechanics: from bacteria to humans. Phylosophical transactions of the Royal Society B. 2005. 360:507-514 Hudson DF, Marshall KM, Earnshaw WC. Condensin: Architect of mitotic chromosomes. Chromosome Research. 2009. 17:131-144 Maeshima K, Eltsov M. Packaging the genome: the structure of mitotic chromosomes. Journal of biochemistry. 2008. 143:145-53. Nashmyth K, Haering CH. The structure and function of SMC and kleisin complexes. Annual Review of Biochemistry. 2005. 74:595-648 Ono T, Fang Y, Spector DL, Hirano T. Spatial and temporal regulation of Condensins I and II in mitotic chromosome assembly in human cells. Molecular biology of the cell. 2004. 15:3296-3308 Peters JM. The cohesin complex and its roles in chromosome biology. Genes and sevelopment. (2008) 22: 3089-3114 Uhlmann F, Lottspelch F, Nasmyth K. Sister chromatid separation at anaphase onset is promoted by cleavage of the cohesin subunit Scc1. Nature. 1999. 400, 6739:37-42

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9.

CENTROSOMA Y CICLO CELULAR

Los centrosomas son centros organizadores de microt ubulos que est an presentes en las c elulas animales. Est an formados por dos componentes: dos centriolos y el material pericentriolar. Adem as de organizar el entramado de microt ubulos en las c elulas, la actividad del centrosoma parece ser necesaria para la consecuci on del ciclo celular. Este papel est a mediado por las prote nas, se estiman en m as de 100 diferentes, que se encuentran formando parte de la matriz percentriolar, bien permanentemente o bien de forma pasajera. Los cambios en la actividad del centrosoma y su papel en las diferentes etapas del ciclo celular depende de la composici on de la matriz pericentriolar, la cual es distinta seg un la fase del ciclo celular en que se encuentre. Durante la fase G1 del ciclo celular, o cuando se est a fuera de el, cada c elula posee un solo centrosoma. Sin embargo, cuando una c elula pasa el punto de control G1/S y comienza la fase S, adem as de iniciarse la replicaci on del ADN, se produce la replicaci on del centrosoma. Para qu e se duplica el centrosoma en la fase S? Para formar el huso mit otico. La divisi on celular debe procurar que las crom atidas de cada cromosoma se repartan equitativamente entre las c elulas hijas. De otra manera se podr an producir c elulas con juegos anormales de cromosomas (aneuploid as) que desencadenar a la falta o el exceso de algunos cromosomas en las c elulas hijas o la desregulaci on de ciertos genes, todo ello con consecuencias potencialmente peligrosas para un organismo como por ejemplo la inviabilidad celular o la aparici on de c elulas tumorales. La segregaci on adecuada de los crom atidas depende de la formaci on y acci on de un sistema de microt ubulos denominado huso mit otico, el cual debe estar correctamente formado, y que depende a su vez de la acci on de los centrosomas. Estos se colocar an en lugares separados dentro de la c elula cuando va a iniciarse la fase M y formar an un huso mit otico bipolar. Tras la citocinesis cada c elula hija se habr a quedado con un centrosoma. Una nueva divisi on requerir a de nuevo un huso mit otico bipolar, por tanto dos centrosomas, por tanto duplicaci on del centrosoma presente. As , igual que el ADN, el centrosoma debe duplicarse una y s olo una vez.

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Figura 30: Esquema de los diferentes pasos por los que pasa el centrosoma durante
el ciclo celular. Durante la fase G1 los centriolos del centrosoma pierden su disposici on ortogonal. Al comienzo de la fase S se empiezan a nuclear nuevos centriolos, denominados procentriolos, a partir de los preexistentes. Al nal de la fase S se inicia la elongaci on de los procentriolos. Durante la fase G2 hay un crecimiento del material pericentriolar (no indicado en el esquema). Al nal de la fase G2 cada par de centriolos con una porci on del material pericentriolar migra hacia lugares opuestos de la envuelta nuclear. Durante la fase M se organiza el huso mit otico y del reparto de las crom atidas de cada cromosoma. Al nal de la fase M se produce la citocinesis y cada c elula hija queda con un centrosoma, pudiendo empezar de nuevo el ciclo celular.

C omo se duplican los centriolos? Nucleaci on de nuevos centriolos sobre los centriolos preexistentes. Los centriolos se duplican en la fase S del ciclo celular. Todo centrosoma antes de entrar en la fase S contiene dos centriolos denominados madre e hijo, respectivamente. El centriolo hijo es un 80 . % m as corto que el centriolo madre. El centriolo madre tiene una serie de ap endices distales y 55

subdistales que pueden nuclear microt ubulos, aunque la mayor a de los microt ubulos se forman en la matriz pericentriolar. La formaci on de cada nuevo centriolo, tanto en el centriolo madre como en el centriolo hijo, comienza al principio de la fase S. Se han encontrado al menos 5 prote nas necesarias para esta duplicaci on, las cuales crean en la base de los centriolos originales una estructura en forma de rueda de carro que permite la organizaci on y nucleaci on inicial de los microt ubulos de cada nuevo centriolo, denominados procentriolos, que se sit uan en el extremo proximal o menos de los microt ubulos . La elongaci on de los procentriolos ocurre al nal de la fase S. Es interesante hacer notar que a un centriolo reci en formado le lleva un ciclo de divisi on y medio convertirse en un centriolo maduro con la adquisisci on de los ap endices distales y subdistales.

Figura 31: Los centriolos se duplican gracias a una serie de prote nas que se organizan
en la zona proximal del centriolo madre y del hijo, respectivamente. Esto se produce al comienzo de la fase S del ciclo celular.

C omo se sincroniza la duplicaci on de los centriolos con la del ADN? Por la acci on fosforiladora de enzimas quinasas. El paso de la fase G1 a la S se debe a la actividad de quinasas (enzimas que a naden grupos fosfato) dependientes de ciclina. En el centrosoma y en el interior del n ucleo existen mol eculas (por ejemplo, la nucleofosmina en el centrosoma) que son fosforiladas por estas quinasas y que por tanto son activadas simult aneamente. Las prote nas fosforiladas provocan la duplicaci on del ADN en el n ucleo y la de los centriolos, y por tanto del

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centrosoma, en el citoplasma. Hay otros posibles mecanismos como los peque nos aumentos de calcio que se produce antes de iniciarse la fase S y que podr an activar otras quinasas dependientes de calcio en el citoplasma y tambi en en el n ucleo. C omo se forman dos centrosomas? Por la rotura de las bras de conexi on entre los centriolos originales. Durante la fase G2 se produce una separaci on de los dos centriolos originales con sus respectivos procentriolos en formaci on. Esto requiere la rotura de una serie de bras proteicas como la rootletinque conectaban ambos centriolos durante toda la fase G1 y S, liber andose cada centriolo con su procentriolo en formaci on. Esta separaci on de los centriolos originales m as procentriolos conlleva que se reparta el material pericentriolar, aparenciendo entonces dos centrosomas. En la transici on entre fase G2 y M requiere un cambio importante en los centrosomas que se denomina maduraci on del centrosoma. En este proceso se altera la composici on proteica de la matriz pericentriolar. Por ejemplo, aumenta el n umero de gamma tubulinas, con lo que aumenta la capacidad para originar microt ubulos. Los centromas en fase M. Formaci on del huso mit otico. El huso mit otico se forma durante la fase M. Desde la matriz pericentriolar de cada centrosoma se forman microt ubulos que crecer an hasta contactar con los cinetocoros de los cromosomas o con otros microt ubulos que crecen desde el centrosoma opuesto. Los centrosomas tambi en forman microt ubulos que se orientan hacia la membrana plasm atica, denominados microt ubulos astrales, que interaccionan con elementos del citoplasma. Los cromosomas no son actores pasivos sino que participan en la formaci on y estabilizaci on de los microt ubulos del huso. Este entramado y sus interacciones con otros componentes celulares son cruciales para orientar el huso mit otico dentro de la c elula y para orientar la formaci on del surco de escisi on por el cual se dividir a la c elula. Este plano por el que la c elula madre se dividir a en dos es siempre perpendicular al eje del huso mit otico y suele ser equidistante a los dos centrosomas. La localizaci on y orientaci on del plano de divisi on es trascendental para el reparto de constituyentes celulares entre las c elulas hijas y para el reparto desigual cuando las divisiones son de tipo asim etrico.

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Figura 32: Los dos centriolos del centrosoma est an unidos por una red de bras proteicas.
En la interfase entre la fase G2 y M estas bras se deshacen y los centriolos, con sus respectivos procentriolos, pueden viajar a distintas partes de la c elula arrastrando con ellos la mitad del material pericentriolar (modicado de Azimzadeh y Bornens, 2007).

Sin embargo, la estricta necesidad de los centrosomas, y por tanto de los centriolos, para formar el huso mit otico no est a totalmente clara. Se ha demostrado que cuando se eliminan los centriolos de una c elula animal mediante aplicaci on de l aser muy preciso se puede formar un huso mit otico gracias a la acci on de los cromosomas y de las prote nas motoras, aunque la citocinesis no se produce o es deciente. En las plantas vasculares no existen centrosomas, forman husos mit oticos normales y citocinesis completa. Por tanto, los centrosomas no parecen imprescindibles para la formaci on del huso mit otico en las c elulas animales, aunque cuando est an presentes son los principales responsables de su formaci on y s parecen imprescindibles para completar correctamente la divisi on celular.

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Los centrosomas en citocinesis. Quiz a uno de los papeles m as importantes que tienen los dos centrosomas en las c elulas animales se pone de maniesto durante la citocinesis porque establecen la orientaci on del surco de divisi on. Este plano, por el que se divide una c elula, es siempre perpendicular al eje del uso mit otico, y por tanto depende de la posici on de los dos centrosomas. La ausencia o la existencia de m as de dos centrosomas parece que impide una orientaci on adecuada. Esto, que aparentemente no es trascendente cuando las c elulas hijas son iguales a la madre, es crucial cuando han de producirse divisiones asim etricas. Las divisiones asim etricas son trascendentales durante la meiosis, durante el desarrollo temprano y en otros muchos procesos de diferenciaci on, como por ejemplo en el mantenimiento de las c elulas madre y la diferenciaci on de sus descendientes. Sin divisiones asim etricas correctas un animal no es viable. La orientaci on adecuada del huso mit otico se consigue gracias a la interacci on de los microt ubulos astrales con otros elementos del citoesqueleto situados en la periferia celular.

Figura 33: Los dos centriolos del centrosoma est an unidos por una red de bras proteicas.
En la La localizaci on de los centrosomas determina la orientaci on del huso mit otico y este a su vez el plano de divisi on celular.

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Aparte de la orientaci on del huso mit otico, el centrosoma parece importante durante la citocinesis puesto que algunas c elulas eucariotas, como en las humanas, el centriolo madre viaja hasta la zona de cirrre denitivo del surco de divisi on (zona de abcisi on) y este movimiento coincide con la separaci on celular. Tambi en es importante el centrosoma para regular el tr aco vesicular, importante durante la citocinesis. Qu e pasa si hay m as de dos centrosomas? A pesar de que intuitivamente parece conveniente tener dos centrosomas para que sea correcta la formaci on del huso mit otico y as una segregaci on segura y equitativa de los cromosomas entre las c elulas hijas y una divisi on celular adecuada, existen algunas c elulas en las que hay m as de dos centrosomas. Por ejemplo, durante la difereciaci on de los hepatocitos o de las c elulas musculares. Pero esto no es habitual y ocurre durante etapas muy limitadas. Por el contrario, la existencia de m as de dos centrosomas suele ser s ntoma de una anormalidad celular. Cuando esto ocurre se dice que la c elula tiene centrosomas supernumerarios. La presencia de centrosomas supernumerarios es habitual en un alto porcentaje de las c elulas tumorales, lo que llev o a pensar que eran los centromas los causantes de las aberraciones cromos omicas. La presencia de m as de dos centrosomas puede llevar a la formaci on de husos mit oticos multipolares que puede desencadenar un reparto anormal de crom atidas. Sin embargo, no est a claro si la presencia de numerosos centrosomas en estas c elulas tumorales es causa o consecuencia del proceso cancer geno. As , se pueden crear c elulas que son capaces de manejar un exceso de centrosomas. El mecanismo es concentrar m as de un centrosoma en cada uno de los polos del huso mit otico por la interacci on de los microt ubulos entre s gracias a la acci on de las prote nas motoras como la dine na, o por la acci on de los lamentos de actina en la regulaci on y posicionamiento del huso mit otico. Entonces, por qu e se controla tan estrictamente el n umero de centromas en las c elulas animales? Como dijimos anteriormente, parece que la orientaci on del huso mit otico y por tanto el plano de divisi on celular puede verse afectado cuando hay m as de dos centrosomas y por tanto las divisiones asim etricas pueden ser defectuosas, siendo este tipo de divisi on crucial para los organismos.
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