LINHA LQUIDA

Creatinina
enzimtica AA
Mtodo enzimtico para a determinao de creatinina em soro, plasma ou urina SIGNIFICADO CLNICO A creatinina, composto muito difundvel, elimina-se do organismo quase exclusivamente por filtrao renal. Sua determinao em soro, assim como o clearance de creatinina endgena constituem parmetros importantes para o diagnstico de variadas afees renais. FUNDAMENTOS DO MTODO Baseado no seguinte esquema de reaes: creatininase creatinina + H2O > creatinina creatinase creatina + H2O > sarcosina + uria sarcosina oxidase sarcosina + H2O + O2 > glicina + HCHO + H2O2 peroxidase H2O2 + 4-AF + TOOS > quinoneimina colorida A intensidade da cor da quinoneimina originada diretamente proporcional concentrao de creatinina na amostra. REAGENTES FORNECIDOS A. Reagente A: soluo contendo creatinase 36 kU/l, sarcosina oxidase 11 kU/l, catalase 300 kU/l, ascorbato oxidase 3 kU/l e tampo Goods 20 mmol/l pH 8,2 com N-etil-N-2-hidroxi-3sulfopropil-3-metilanilina (TOOS) 1 mmol/l. B. Reagente B: soluo contendo 4-aminofenazona (4-AF) 4 mmol/l, creatininase 370 kU/l, peroxidase 15 kU/l, azida de sdio 0,8 g/l e tampo Goods 20 mmol/l pH 8,0. S. Padro*: soluo de creatinina 20 mg/l. REAGENTES NO FORNECIDOS - Calibrador A plus da Wiener lab. - gua desmineralizada. INSTRUES PARA USO Reagentes Fornecidos: prontos para uso. PRECAUES Os reagentes so para uso diagnstico "in vitro". Utilizar os reagentes observando as precaues habituais de trabalho no laboratrio de anlise clnica. Todos os reagentes e as amostras devem-se descartar conforme regulao local vigente. ESTABILIDADE E INSTRUES DE ARMAZENAMENTO Reagentes Fornecidos: so estveis em refrigerao (2-10oC) at a data de vencimento indicada na embalagem.
*No fornecido em todas as apresentaces

No manter a temperaturas elevadas por perodos prolongados. AMOSTRA Soro, plasma ou urina a) Coleta: obter soro ou plasma do modo usual. Pode-se utilizar tambm urina de 2 horas ou de 24 horas. Sua coleta deve realizar-se num frasco perfeitamente limpo mantendo-o sob refrigerao (2-10oC) durante a coleta. Medir a diurese, tomar uma alquota e efetuar uma diluio 1:50 da mesma. Caso a diurese seja de 2 horas, multiplicar o volume medido por 12 para calcular a quantidade de creatinina eliminada durante 24 horas. b) Aditivos: caso a amostra a utilizar seja plasma, recomenda-se unicamente o uso de heparina como anticoagulante para sua obteno. c) Substncias interferentes conhecidas: no se observam interferncias por cido ascrbico at 100 mg/dl, hemoglobina at 400 mg/dl (4 g/l), bilirrubina at 28 mg/dl (280 mg/l), nem triglicerdeos at 1250 mg/dl (12,5 g/l). Referncia bibliogrfica de Young para efeitos de drogas neste mtodo. d) Estabilidade e instrues de armazenamento: o soro ou plasma deve-se separar dos eritrcitos antes das 2 horas da coleta. Esta amostra estvel 3 dias sob refrigerao (210oC) e mantida ao abrigo da luz. Pode-se manter a urina at 4 dias sob refrigerao (2-10oC) sem conservantes. MATERIAL NECESSRIO (no fornecido) - Espectrofotmetro. - Micropipetas e pipetas para medir os volumes indicados. - Cubetas espectrofotomtricas. - Banho-maria a 37oC. - Cronmetro. CONDIES DE REAO - Comprimento de onda: 546 nm - Temperatura de reao: 37oC

PROCEDIMENTO Antes de acrescentar a amostra, zerar o aparelho com gua destilada. Em trs cubetas espectrofotomtricas marcadas B (Branco), P (Padro) e D (Desconhecido), colocar:

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B Amostra Padro gua desmineralizada Reagente A 0,07 ml 2,5 ml

P 0,07 ml 2,5 ml

D 0,07 ml 2,5 ml

3) Depurao de Creatinina Endgena (D.C.E.): Creatinina em urina (g/24 hs) D.C.E. ml/min = Creatinina em soro (mg/l) onde: g/24 hs 694 ml/min = mg/l = 1 mg x 1440 min 1000 mg x 1000 ml = 1440 min 1.000.000 ml x 694 ml/min

Misturar e incubar 5 minutos a 37oC. Ler a absorbncia a 546 nm (B1, P1 e D1). Reagente B 1,25 ml 1,25 ml 1,25 ml

Misturar e incubar 5 minutos a 37oC. Ler a absorbncia a 546 nm (B2, P2 e D2). CLCULO DOS RESULTADOS 1) Creatinina em soro (mg/l) = [(D2-B2) - (D1-B1) x k] x f 20 mg/l f= (P2-B2) - (P1-B1) x k onde: volume do Branco (ml) k= volume final (ml) = 3,82 ml 2,57 ml = 0,673

MTODO DE CONTROLE DE QUALIDADE Processar 2 nveis de um material de controle de qualidade (Standatrol S-E 2 niveles) com concentraes conhecidas de creatinina, com cada determinao. VALORES DE REFERNCIA Os valores esperados de creatinina so os seguintes: Soro ou plasma Homen: 7 - 13 mg/l Mulher: 6 - 11 mg/l Urina Homen: 0,8 - 2,0 g/24 hs Mulher: 0,6 - 1,8 g/24 hs Depurao de Creatinina Endgena Homen: 94 - 140 ml/min (mdia 125 ml/min) Mulher: 72 - 110 ml/min recomendvel que cada laboratrio estabelea seus prprios valores de referncia. CONVERSO DE UNIDADES AO SISTEMA SI Creatinina (mg/l) x 8,84 = Creatinina (umol/l) LIMITAES DO PROCEDIMENTO Vide Substncias interferentes conhecidas en AMOSTRA.

Significa a compensao por diluio do branco por adio do Reagente B.

Exemplo: B1: 0,123 B2: 0,137 Padro: 20 mg/l k = 0,673 20 (mg/l) f= (0,365-0,137) - (0,145-0,123) x 0,673 20 = 0,228 - 0,015 = 0,213 20 = 93,9 = 0,228-0,022 x 0,673 20 = P1: 0,145 P2: 0,365 D1: 0,164 D2: 0,412

PERFORMANCE a) Reprodutibilidade: processando soros segundo o documento EP5A do CLSI, obteve-se o seguinte: Preciso intra-ensaio (n = 20) Nvel 0,98 mg/dl 3,80 mg/dl Nvel 0,98 mg/dl 3,80 mg/dl D.P. 0,014 mg/dl 0,038 mg/dl D.P. 0,019 mg/dl 0,044 mg/dl C.V. 1,45 % 0,99 % C.V. 1,99 % 1,15 %

Creatinina (mg/l) = [(0,412-0,137) - (0,164-0,123) x 0,673] x 93,9 = = (0,275 - 0,041 x 0,673) x 93,9 = (0,275 - 0,028) x 93,9 = = 0,247 x 93,9 = 23,19

Preciso total (n = 20)

2) Creatinina em urina (g/24 hs) = Creatinina (mg/l) x 50 x D = 1000 = 20 Creatinina (mg/l) x D

onde: D = volume da diurese expresso em litros/24 hs 50 = fator de diluio 1000 = converso de mg a gramas

b) Linearidade: a reao linear at 170 mg/l (17 mg/dl) de creatinina. Para valores superiores, diluir a amostra 1:2 ou 1:4 com gua destilada e repetir a determinao. Corrigir os clculos multiplicando pelo fator de diluio empregado. c) Sensibilidade analtica: depende do fotmetro empregado e da comprimento de onda. Em espectrofotmetros a 546 nm com cubetas de faces paralelas de 1 cm de espessura, para um A de 0,001 a mudana mnima de concentrao detectvel ser de 1,2 mg/l.
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PARMETROS PARA ANALISADORES AUTOMTICOS Para a programao consultar o Manual do Uso do analisador a ser utilizado. Para a calibrao deve-se utilizar o Calibrador A plus da Wiener lab. APRESENTAO 60 ml: 1 x 40 ml Reagente A 1 x 20 ml Reagente B (Cd. 1260362) REFERNCIA - Fossatti, P.; Prencipe, L.; Berti, G. - Clin. Chem. 29:1494 (1983). - Curtis, C.A.; Ashwood, E.R. - Tietz Fundamentals of Clin. Chem. 5th Ed.: 422, 2001. - Burtis, C.A.; Ashwood, E.R. - Tietz Textbook of Clin. Chem. 3rd Ed.:1808, 1996. - Young, D.S. - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests", AACC Press, 5th ed., 2000. - CLSI: Clinical and Laboratory Standards Institute (ex-NCCLS) - Protocols EP 15A, 2001 / EP 17A, 2004.

SMBOLOS Os seguintes smbolos so utilizados nos kits de reagentes para diagnstico da Wiener lab.

C
V
X
H l

Este produto preenche os requisitos da Diretiva Europia 98/79 CE para dispositivos mdicos de diagnstico "in vitro"

P Representante autorizado na Comunidade Europia

Uso mdico-diagnstico "in vitro" Contedo suficiente para <n> testes Data de validade Limite de temperatura (conservar a) No congelar F Risco biolgico Volume aps da reconstituio
Cont.

Contedo Nmero de lote Elaborado por: Nocivo Corrosivo / Castico

g
M
Xn

Xi

Irritante Consultar as instrues de uso Calibrador Controle Controle Positivo Controle Negativo Nmero de catlogo

i
Calibr.

b b c h

Wiener lab.
2000 Rosario - Argentina
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