DEMANDA BIOQUIMICA DE OXIGENO

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Dr. Caldern Laboratorios Ltda.

Avda 13 No. 87-81 Tel/Fax 6222687, 6224985, 6225567, 2578443 Apartado Areo 24888 Bogot, D.C., Colombia - South America www.drcalderonlabs.com E-Mail acaldero@cable.net.co DETERMINACION DE LA DEMANDA BIOQUIMICA DE OXIGENO DBO5 METODO RESPIROMETRICO Por: Felipe Caldern Senz y Margarita Pavlova. Bogot, Enero 15 de 2001; Rev. Enero31/2001; Rev. Septiembre 22 de 2004; Oct 21 de 2005; Mayo 9 de 2007 Dr. Caldern Laboratorios. www.drcalderonlabs.com INTRODUCCION Los siguientes mtodos aunque son vlidos en cualquier tiempo y lugar se hacen en la ciudad de Bogot Colombia, ubicada a 2540 metros sobre el nivel del Mar y una Presin baromtrica de 560 mm Hg. Estas condiciones afectan la disponibilidad de oxgeno disuelto disuelto en el agua y por consiguiente las condiciones en las cuales se realiza la prueba de la Demanda Bioqumica de Oxgeno en 5 das DBO5. ANTECEDENTES Desde principios de los aos de 1900s se han utilizado varios metodos para determinar el ndice de respiracin de bacterias para evaluar la capacidad de una poblacin bacteriana de quitar sustancias de las aguas residuales (tratabilidad, o biodegradabilidad) y para determinar el efecto de las sustancias en las bacterias (inhibicin o toxicidad). La tentativa ms antigua para utilizar la absorcin directa para medir la demanda del oxgeno de las aguas residuales fue hecha por Adney en 1890. El desarroll un tipo de aparato manomtrico de presin constante en el cual l observaba el ndice de la absorcin del oxgeno por el agua contaminada. A una presin constante, la disminucin del volumen, debido a la absorcin del oxgeno fue observada por la distancia que una columna del agua sube un un tubo vertical, graduado, en forma de "u" que conectaba dos recipientes, uno llenado parcialmente de la muestra, y el otro que contena un volumen igual de agua. El aparato entero fue colocado a una temperatura constante en un bao de agua, y agitado peridicamente para mantener un exceso del oxgeno disuelto en la muestra. Aunque Adney encontr que este mtodo era exacto, l concluy que no era conveniente para el trabajo rutinario. Rideal y Burgess (1909) utilizaron el aparato, pero lo encontraron insatisfactorio debido a los escapes que se producan en el curso de la agitacin. Sugirieron que el mtodo de la dilucin, con la incubacin de las botellas cerradas con la medida del oxgeno disuelto tanto antes como despus de la incubacin por un mtodo modificado de Winkler era ms exacto. Este mtodo fue el precursor de la prueba estndar BOD5. Sierp (1928) y otros revivieron y modificaron el aparato de aireacin directa de Adney "para reducir el dispendioso trabajo del mtodo de la dilucin y para producir lecturas rpidas, directas y frecuentes". El respirometro de Warburg (1926) usado extensivamente por Don Bloodgood en la universidad de Purdue y por H. Huekelekian en la universidad de Rutgers fu una modificacin del " manmetro de sangre-gas" desarrollado por Haldane y Barcroft (1902). El trabajo pionero de Sawyer, de Nichols y de Rohlich (1939) en el estudio y el desarrollo de las curvas de la utilizacin

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del oxgeno en lodos activados, fue hecho usando los dispositivos manomtricos que ellos desarrollaron para satisfacer su necesidad de utilizar muestras ms grandes y de sistemas mas hermticos - Estos sistemas, sin embargo, requeran la adicin manual de aire atmosfrico para suplir el oxgeno. Analistas expertos eran necesarios para funcionar y vigilar visualmente las lecturas del manmetro. La interpretacin era aburrida y dispendiosa ya que no existian aparatos automatizados para la manipulacin de los datos. John W. Clark en la universidad de estado de nuevo Mjico a fines de los aos 50 desarroll y report un dispositivo en el cual el oxgeno fue generado por una pila electroltica, que tambin funcion como un manmetro, asociado a un reactor cerrado. Cuando el dispositivo es accionado por la reduccin de la presin en el recipiente de la prueba causado por el retiro qumico del CO2 generado por la respiracin bacteriana, el oxgeno fue producido por una corriente controlada de corriente continua. El valor integrado de la corriente proporcion una indicacin del oxgeno consumido. Una de las primeras aplicaciones de aparato Voith-Sapromat (desarrollado por Popel en 1964) fue un procedimiento manual para evaluar el efecto de varios deshechos en degradacin de la peptona. Liebmann y Offhaus tambin colaboraron en procedimientos para determinar la DBO5 y la toxicidad de algunos elementos en el agua.

BOTELLA RESPIROMETRICA DE DR. CALDERON LABORATORIOS LTDA. FUNDAMENTOS El Mtodo Respiromtrico, para la determinacin de la DBO5 se basa en medir el consumo de oxgeno, o la produccin de CO2, en una Botella Respiromtrica. Este objetivo se logra entre otras formas (Mtodo Manomtrico) midiendo la variacin de la presin en la botella, mediante un manmetro lo suficientemente sensible. Otros mtodos respiromtricos propiamente dichos miden la produccin de CO2 u otros gases como Metano, Anhdrido Sulfhdrico, etc. dentro de la botella. En el Mtodo Clsico, para la determinacin de la DBO5, se calcula la diferencia entre el Oxgeno Disuelto en la muestra o en una dilucin de la misma, entre el da 0 y el da 5. Este mtodo tiene muchas limitaciones, siendo una de las principales la pequea cantidad de oxgeno disponible en la muestra. Usualmente unos 10 mg/lt a nivel del mar, y menos de 7 mg/Lt a nivel de Bogot (2540 m.s.n.m.). Si tenemos en cuenta que la muestra deber terminar la prueba con al menos 1 mg/Lt, (algunas normas especifican terminar con al menos 2 mg/Lt) se observa que el oxgeno

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total disponible para la prueba ser alrededor de 5 mg/Lt. En el supuesto caso de que se trabajase con Botellas de 0.5 Lt de capacidad, la cantidad absoluta de oxgeno disponible sera de tan solo 2.5 mg. En la mayora de los Laboratorios usualmente se trabaja con Botellas de 300 ml., lo cual disminuye aun mas la cantidad de oxgeno disponible para la prueba. Esta pequea cantidad a determinar hace que pequeos errores en la manipulacin de la prueba produzcan grandes diferencias (errores) en el resultado. En el mtodo Respiromtrico, trabajando con botellas de 1 lt de capacidad, llenas con medio litro de muestra o dilucin de muestra, se cuenta hasta con 125 mg de Oxgeno, contenidos en el aire presente en la cmara superior de la botella. Y se puede contar aun con mayor cantidad de oxgeno en caso de trabajar con volmenes inferiores de muestra. En este caso, el oxgeno disuelto, fuere cual fuere su contenido inicial en la muestra (exceptuando muestras altamente sobresaturadas) no tiene casi incidencia en el resultado. Por lo general esta por debajo de 2.5 mg frente a los 125 mg presentes en la cmara superior. Esto es un error mximo del 2 %. ABSORCION DEL CO2 En el mtodo llamado mtodo manomtrico, se mide el vaco creado por el consumo de oxgeno causado por la muestra. Para que el mtodo basado en la medicin manomtrica del vaco causado en la botella funcione adecuadamente es necesario absorber el CO2 formado de alguna manera. De lo contrario no habra cambio de presin en las botellas ya que el volmen de CO2 producido podra ser igual o casi igual al volmen de Oxgeno consumido. La absorcin del CO2 puede hacerse de varias maneras. 1. Adecuando el poder buffer de la solucin en ensayo para absorber la totalidad del CO2, en forma de Bicarbonato disuelto en el lquido y 2. Absorbiendo el CO2 mediante algn hidrxido alcalino en un recipiente apropiado en contacto con la fase gaseosa de la botella. En el presente artculo analizaremos ambas opciones aunque en principio consideramos que adecuar el poder buffer de la solucin de ensayo es especialmente adecuado para la determinacin de la Demanda Bioqumica de Oxgeno en 5 das en aguas y el mtodo de absorber el CO2 en un recipiente con reactivos especiales insertos en la botella respiromtrica es mas adecuado para la determinacin de la respiracin en muestras slidas como suelos, deshechos orgnicos, lodos secos etc. CAPACIDAD DE ABSORCION DE CO2 DEL SISTEMA DIFOSFATO-MONOFOSFATO La cantidad de CO2 producida en el mtodo respiromtrico, al igual que la cantidad de oxgeno consumida, es relativamente mas grande que la producida en el mtodo clsico. Esto requiere entonces de una adecuacin del poder buffer de la solucin de ensayo. Para adecuar el poder buffer de la solucin de ensayo a las nuevas condiciones es necesario conocer la capacidad de absorcin del CO2 del sistema Difosfato-Monofosfato dentro del rango de pH permisible o compatible con un crecimiento adecuado de los microorganismos presentes en la muestra en ensayo. Como base terica para la absorcin del CO2 dentro del sistema tenemos la siguiente ecuacin: Na2HPO4 + CO2 + H2O -------------> NaHCO3 + NaH2PO4 (1) De acuerdo con la anterior reaccin 142 mg de Fosfato Disdico anhidro absorberan 44 mg de CO2

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La anterior reaccin es reversible y a medida que procede hacia la derecha se va reduciendo el pH del medio de tal manera que esta misma condicin paraliza el desarrollo de la reaccin en un punto intermedio de la transformacin del Fosfato Disdico en Fosfato Monosdico. Creemos que no todo el Fosfato Disdico logra transformase en Fosfato Monosdico. Para saber que tanto CO2 logra capturar una solucin de Fosfato Disdico se llev a cabo el siguiente experimento: Se prepar una solucin de Fosfato Monosdico (NaH2PO4.H2O) de 2 gr/Lt. Se titul con NaOH 0.1 N hasta viraje incipiente de la Fenolftaleina (Aproximadamente pH = 8.5-9.0). En este punto la solucin se satur con CO2 permitiendo as que se desarrolle la reaccin (1) en la mayor extensin posible. Acto seguido se expuls el CO2 libre mediante agitacin y barrido con aire. Despus se titul en reversa con NaOH 0.1 N nuevamente hasta viraje incipiente de la fenolftaleina. Se considera que la cantidad de CO2 fijado por el sistema es directamente proporcional a la cantidad de NaOH consumida en la segunda titulacin. Los datos del ensayo fueron los siguientes: Titulacin del Fosfato Monosdico Alcuota de solucin de Fosfato Monosdico = 25 ml Cantidad de NaOH 0.1 N usado en la titulacin inicial = 3.65 ml Esta cantidad coincide casi exactamente con la cantidad terica necesaria para la transformacin de todo el Fosfato Monosdico en Fosfato Disdico segn la ecuacin siguiente: NaH2PO4 + NaOH -------------------> Na2HPO4 + H2O Fijacin de CO2 Alcuota de solucin de Fosfato Monosdico = 50 ml Cantidad de NaOH 0.1 N usado en la titulacin inicial = 7.2 ml Saturacin con CO2 y eliminacin del Sobrante con Aire. Titulacin en reversa con NaOH 0.1 N = 4.5 ml De acuerdo con la ecuacin: NaOH + CO2 --------> NaHCO3 40 gr de NaOH neutralizan 44 gr de CO2 Entonces 4.5 ml de NaOH 0.1 N neutralizarn 4.5 x 4 x 44/40 = 19.8 mg de CO2 Lo cual quiere decir que los 100 mg de Fosfato Monosdico (50 ml de solucin de NaH2PO4.H2O de 2 gr/lt) utilizados, equivalentes a 87 mg de Fosfato Monosdico Anhidro y transformados en 102.9 mg de Fosfato Disdico anhidro tienen capacidad para absorber 19.8 mg de CO2 transformndolo en Bicarbonato de Sodio. Al comparar el resultado terico segn la ecuacin (1) con la cantidad resultante de este ltimo ensayo se hace evidente que no todo el Fosfato disdico utilizado inicialmente logra transformarse en Fosfato Monosdico. En consecuencia, la cantidad de Fosfato Disdico que se debe utilizar como Buffer en la prueba respiromtrica deber ser de como mnimo de 102.9 mg por cada 19.8 mg de CO2 Si en una botella de 1 Lt de capacidad con medio litro de muestra y con disponibilidad de 125 mg de Oxgeno se espera una produccin de 171.8 mg de CO2 se aconseja agregar 892.8 mg de Fosfato Disdico anhidro en calidad de buffer. (En la prctica agregar 1.000 gr) Nota:

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Esta cantidad de Fosfato en la prctica es cerca de 40 veces mas grande a la que se utiliza con el mtodo tradicional. ABSORCION DEL CO2 EN RECIPIENTE APARTE INSERTO EN LA BOTELLA CON HIDROXIDO DE SODIO Esta forma de absorber los gases tambien funciona adecuadamente y consiste en colocar en la cmara de aire encima del lquido, un recipiente perforado, en el cual se coloca hidroxido de sodio como material absorbente para el CO2. Este material absorbe rpidamente el CO2 producido. Se ha observado que la botella requiere algo de agitacin para la adecuada y rpida absorcin del CO2. De lo contrario la difusin del CO2 desde la parte inferior de la botella hacia el recipiente de absorcin puede resultar demasiado lenta. Para la Absorcin se debe tener en cuenta la siguiente ecuacin: 2 NaOH + CO2 -----------> Na2CO3 + H2O as quie 80 gr de NaOH absorbern 44 gr de CO2 Para una botella respiromtrica de 1105 ml de capacidad, llena de CO2 puro a 20 C, se requieren 1.105x0.8878x80/44 = 1.784 gr de NaOH y para una Botella normal con medio litro de muestra, suponiendo que se agotara completamente el oxgeno de la cmara y que se generan 125 x 44/32 = 171.8 mg de CO2 se requieren 171.8 x 80/44 = 312 mg de NaOH. En la prctica se recomienda colocar 1 gr de NaOH. RESUMEN DEL METODO Para Botellas de 1 lt en las cuales Alcuota mas Agua de Dilucin = 500 ml, el Oxgeno disponible en la Botella a la altura de Bogot se calcula como sigue: Densidad del aire a 20 C = 0.8878 gr/lt. = 1.2931 x 273/293X560/760 Contenido de Oxgeno en el aire = 21 % volumtrico. Peso del Aire disponible en la Botella = 0.44388 gr. Contenido de Oxgeno disponible en la botella = aproximadamente igual a 103 mg de O2 puro. Para Botellas de 500 ml llenas hasta 250 ml, la disponibilidad de Oxgeno ser aproximadamente de 51.5 mg. De acuerdo con lo anterior, se podr entonces tomar la siguiente alcuota dependiendo de la DBO5 esperada: 1. Tomar una alcuota de muestra segn la DBO5 esperada as: DBO5 Bot 1000 Bot 500 esperada mg/lt Alcuota/Aforamiento Alcuota/Aforamiento mximo ml/ml ml/ml 32000 3/500 1.5/250 16000 6/500 3/250 8000 12/500 6/250 4000 25/500 12/250 2000 50/500 25/250 1000 100/500 50/250 500 200/500 100/250

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250 100 50

400/500 400/800 800/800

200/250 200/400 400/400

2. Colocarla en la probeta de aforamiento y agregarle agua destilada saturada de Oxgeno hasta un volmen cercano a los 400 ml. El Oxgeno presente en el agua de dilucin deber ser tenido en cuenta en los clculos finales ya que a grandes diluciones su valor alcanaza a ser muy significativo. 3. Agregarle 10 ml de Solucin A (Solucin Tampn de Fosfato Modificada 2X). 4. Agregarle 0.5 ml (10 gotas) de la Solucin B (Sulfato de Magnesio). 5. Agregarle 0.5 ml (10 gotas) de la Solucin C (Cloruro de Calcio). 6. Agregarle 0.05 ml (1 gota) de la Solucin D (Cloruro Frrico 10X). 7. Agregarle 0.5 ml (10 gotas) de Solucin Semilla Inculo de Agua Residual Urbana Fresca. 8. Completar a 500 ml con agua destilada y transferir a la botella respiromtrica. 9. Cerrar la Botella y conectar el Transductor. 10. Colocar la botella en la cmara de Incubacin, encima del agitador Magntico o de Vaivn. 11. Iniciar la agitacin, esperar que se homogenize la temperatura y tomar la primera lectura (L0). 12. Tomar una lectura cada 24 horas durante los siguientes 5 das. Anotar simultneamente el valor de la temperatura de la cmara de incubacin.

Simultneamente con lo anterior, se debe realizar un blanco y ese valor deber ser restado de los resultados de las muestras. PREPARACION DE REACTIVOS A. Solucin Tampn de Fosfato Modificada (2X). Pesar 43.5 gr de K2HPO4, 66.8 gr de Na2HPO4.7H2O y 3.4 gr de NH4Cl, disolver y aforar a 1 Lt. B. Solucin de sulfato de magnesio: Disolver 22,5 g de MgSO4.7H2O en agua destilada y diluir a 1 L. C. Solucin de cloruro de calcio: Disolver 27,5 g de CaCl2 anhidro o 36.5 gr de CaCl2.2H2O en agua destilada y diluir a 1Lt. D. Solucin de cloruro frrico (10X) : Disolver 2.5 g de FeCl3.6H2O en agua destilada, diluir a 1L. E. Solucin Patrn de Glucosa Acido Glutmico 50X: Disolver 7.5 gr de Glucosa y 7.5 gr de Acido Glutmico en 800 ml de agua destilada con ayuda de calor suave. Dejar enfriar y agforar a 1 lt con agua destilada. Guardar en nevera en frasco de color ambar. CALCULOS Para los clculos Utilizar el Software anexo. Clculo de la DBO5 OTROS DATOS Peso molecular Ponderado del Aire = 0.21 x 16 + 0.79 x 14 = 14.42 Densidad del Anhdrido Carbnico; D(aire=1) = 1.5291 DIAGRAMA

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