MICROBIOLOGA

Msc. (c) Maribel Denise Riveros Ramirez Microbiloga Invest. asociado de la UPCH Instituto de Medicina Tropical Alexander von Humboltd

Qu es la microbiologa?
Estudio de los organismos microscpicos 3 palabras griegas: mikros (pequeo), bios (vida) y logos (ciencia)

estudio de la vida microscpica

Surgi como ciencia tras el descubrimiento y perfeccionamiento del microscopio.

Qu son los microorganismos?

Organismos que no pueden ser observados a simple vista, al menos en parte de su ciclo. Organismos que viven como clulas aisladas o entidades que contienen cidos nucleicos capaces de replicarse, por lo menos en parte de su ciclo. Incluidos: algas, hongos, protozoarios, bacterias y virus.

Cmo afectan nuestra vida?

causantes de enfermedades y expuestos a un contagio. Afectan aspecto econmico (enfermedades a los animales y a las plantas daando las cosechas y las clases de ganados y otros animales domsticos que sirven como fuente de alimento.

Cmo afectan nuestra vida?

M.O. de utilidad industrial: ms de cien especies microbianas son usadas en la produccin de sustancias que no pueden ser obtenidas de forma ms fcil o ms barata por otros medios. Ventajas: tamao, alta tasa metablica, posibilidad de cultivarse a gran escala, estabilidad gentica, etc.

Cmo afectan nuestra vida?

M.O. en la produccin de alimentos: Biotecnologa
yogures y quesos (Roquefort, Brie, etc.) alcohol producido por levaduras cido oxlico utilizado en tintes y colorantes. cido propenoico (cido acrlico) utilizado como intermediario en la produccin de plsticos. cido lctico empleado para acidificar alimentos y como anticongelante. cido actico enzimas utilizadas para aplicaciones tan diversas, como la eliminacin de manchas en los tejidos (incorporacin de enzimas a detergentes) conversin de harina de maz en miel utilizada como endulcorante Industria farmacutica: produccin de antibiticos, drogas, hormonas (insulina y GH), factores de crecimiento, interfern, eritropoyetina, etc.

Epidemias
Descritas a lo largo de toda la historia de la humanidad. Atribuidas en la antigedad a hechizos o magia. SIN EXPLICACIN HASTA EL SIGLO XVII.

1.Generacin espontnea
La vida surge a partir de la no vida.

idea que perdur hasta finales del siglo XIX, la vida poda surgir del lodo, del Agua, del mar o de las combinaciones de los cuatro elementos fundamentales: aire, fuego, agua, y tierra.
Jean-Baptiste de Lamarck publica en 1809 su clebre Filosofa zoolgica y coloca a la generacin espontnea como el punto de partida de la evolucin biolgica. Algunas recetas de la Generacin espontnea.

Biblia: El hombre surge a partir del barro (tierra y agua).

Aristteles (s. IV A.D.C.): Los animales pueden originarse en el suelo. Virgilio (s. II A.D.C): Las abejas se originan a partir de la miel.

Anton van Leeuwenhoek

(1632-1723)

Pionero en descubrimientos sobre los protozoos, los glbulos rojos de la sangre, el sistema de capilares y los ciclos vitales de los insectos. Construy como entretenimiento diminutas lentes biconvexas montadas sobre platinas de latn, que se sostenan muy cerca del ojo. A travs de ellos poda observar objetos, que montaba sobre la cabeza de un alfiler, amplindolos hasta trescientas veces. Otros: red de capilares (de Malpighi), glbulos rojos, protozoos y bacterias en agua animculos y espermatozoides de insectos y humanos. Demostr los huevos de gorgojos, pulgas y mejillones y que estos no surgan espontneamente a partir de granos de trigo y arena. Describi el ciclo vital de las hormigas mostrando que las larvas y pupas proceden de huevos, examin plantas y tejidos musculares, y describi tres tipos de bacterias: bacilos, cocos y espirilos. Mantuvo en secreto el arte de construir sus lentes, por lo que no se realizaron nuevas observaciones de bacterias hasta que se desarroll el microscopio compuesto en el siglo XIX.

Anton van Leeuwenhoek

(1632-1723)

Sus primeros dibujos fueron publicados en 1684

http://www.youtube.com/watch?v=GBIw1qAOBjA

Robert Hooke (1635-1702)

Lazzaro Spallanzani (1729-1799)

Louis Pasteur (1822-1895)

Qumico y bilogo francs que fund la ciencia de la microbiologa. fermentacin del vino y la cerveza introdujo los trminos de aerbico y anaerbico, demostr la teora de los grmenes como causantes de las mismas. Introdujo el trmino virus sin hacer distincin y vacuna en honor a Jenner Desarroll vacunas que consiguieron salvar miles de vidas: clera aviar, antrax y rabia

los seres vivos se forman solamente a partir de seres vivos . Uno de los trabajos ms recordados, con microbios, es el del qumico Louis Pasteur. En los aos 60 del siglo pasado, los resultados de Pasteur se abrieron paso con dificultad en medio de creencias milenarias. Los acompaaba una idea igualmente reciente y provocativa, la del bilogo Charles Darwin, quien aseguraba que la vida, como la conocemos, es la consecuencia de un lento proceso evolutivo regido por la seleccin natural.

Robert Koch (1843-1910)

Iniciador de la bacteriologa mdica moderna. Estudi botnica, fsica y matemticas y MEDICINA. Otros intereses: arqueologa, antropologa, las enfermedades ocupacionales, como el envenenamiento por plomo, y la bacteriologa.

Robert Koch (1843-1910)

Demostr que el carbunco infeccioso o ntrax slo se desarrollaba en los ratones cuando el material inyectado en su torrente sanguneo contena bastones o esporas viables del Bacillus anthracis. Mostr cmo trabajar con dichos microorganismos, cmo obtenerlos a partir de animales infectados, cmo cultivarlos artificialmente y cmo destruirlos. En 1881 dio a conocer sus estudios sobre la tuberculosis y al ao siguiente anunci que haba aislado el bacilo responsable de la enfermedad. Despus se dedic al estudio del clera, que en 1883 haba alcanzado niveles de epidemia en la India. Identific al bacilo causante y descubri que era transmitido a los seres humanos sobre todo a travs del agua. Ms tarde viaj a frica, donde estudi las causas de las enfermedades transmitidas por insectos. Desde 1891 fue director del Instituto de Enfermedades Infecciosas de Berln creado para la investigacin mdica hasta su jubilacin en 1904. En 1905 obtuvo el Premio Nobel de Fisiologa y Medicina. Muri el 27 de mayo de 1910 en el balneario alemn de Baden-Baden.

Postulados de Koch

Otros eventos importantes del siglo XIX

1878: Joseph Lister publica sus estudios sobre la fermentacin de la leche Bacterium lactis 1879: Albert Neisser identifica al agente causal de la gonorrea 1880: Alphonse Laverin encuentra al parsito de la malaria en glbulos rojos. 1881: Paul Erlich utiliza el azul de metileno

Siglo XX
Aerobiosis y anaerobiosis En 1938 se observaron por primera vez los virus gracias a la invencin del microscopio electrnico. En las dcadas de 1960 y 1970 se descubrieron numerosos virus y se determinaron sus caractersticas fsicas y qumicas. Diversas tcnicas innovadoras: microscopio electrnico de barrido o las tcnicas de secuenciacin del cido desoxirribonucleico (ADN). Descubrimiento de los priones por Stanley Prusiner y su equipo en 1982 ha abierto una va de estudio dentro de la microbiologa (simples protenas desprovistas de material gentico) En 1988 Kary Mullis utiliza la enzima de Thermus aquaticus para estabilizar la PCR (premio Nobel en 1993)

Alexander Fleming (1881-1955)

Descubri que algunas colonias crecidas de S. aureus eran destruidas por el crecimiento del hongo Penicillium Realiz la extraccin del compuesto activo: penicilina

Karl Woese (1928-

Por anlisis de rARN 16S

Ramas de la Microbiologa

Microbiologa Medica

DEFINICIN
Es el estudio de las interacciones entre los humanos y los microorganismos con los que coexisten. Los microorganismos son clasificados de acuerdo a la naturaleza de su interaccin en un espectro que va desde los beneficiosos hasta los dainos.

CLASIFICACIN DE LOS MICROORGANISMOS

Comensales Colonizan el cuerpo sin causar dao Microbiota o flora microbiana normal Patgenos Producen dao en el husped humano Invasin directa e injuria Por la produccin de una toxina Patgenos oportunistas

INTERACCIN HUSPED PARSITO

Defensas del husped e inmunidad natural Sistema multifactorial de mecanismos protectivos Evitan la entrada y limitan la diseminacin Trauma fsico directo, medicamentos y toxinas. Virulencia microbiana Habilidad intrnseca relativa de un microorganismo de causar enfermedad.

CLASES DE MICROORGANISMOS PATOGENOS

Por su posibilidad de cultivarse No exigentes Exigentes Parsitos intracelulares obligados Tipo Priones Virus Bacterias Hongos Parsitos

Estructura de la clula Procaritica y Eucaritica

Dominio Archae
Las arqueas o arqueobacterias Procariontes con organizacin interna ms sencilla. Habitan ambientes extremos : - Ambientes sin oxgeno - Agua con sales concentradas. - Agua cida y caliente. 3.500 millones de aos antigedad Caractersticas rna: separacin del reino monera y la creacin de archae.

Dominio Bacteria o Eubacterias

Segn la forma de alimentacin: - Hetertrofos - Autotrfos fotosintticos - Auttrofos quimiosintticos Segn requerimiento de Oxigeno: - Aerobios: desarrollan en presencia de O2 - Anaerobios: desarrollan en presencia de CO2 - Microerfilos:Requieren pequeas cant de O2

Diferencias
PROCARIOTAS(Eubacterias y archaebacterias) Informacin gentica esta libre en el citoplasma Pared celular, qumicamente compleja (peptidoglicano) No organelas membranosas pero si RIBOSOMAS pequeos 70s Locomocin con flagelos (flajelina) y presencia de filamentos axiales
EUBACTERIAS (todas las otras clulas) Informacin gentica en un ncleo rodeado de membrana DNA asociado con protenas (Histonas) Pared celular en plantas (celulosa) y hongos (quitina) pero ausente en clulas animales Organelas membranosas, mitocondrias y cloroplastos Ribosomas 80s Locomocin con flagelos (microtubulos,t ubulina y dineina) motilidad contrctil, basado en actina y miosina.

Estructura de una Clula Procariota

Procariota (Bacteria) 0.2 2.0 m de dimetro Mo unicelulares Ausencia de organelos con membrana o unidades citoplasmticas funcionales ejm: centriolos

Procariota: Cpsula
Una cpsula gelatinosa, o glicoclix, formado a partir de polisacridos, polipptidos o ambos, rodea una pared celular. Bacterias mviles tienen un flagelo

Procariota: Pili
Pili. Proyecciones que asisten en la adhesin de dos bacterias para el intercambio gentico.

http://www.youtube.com/watch?v=-6PMZZMpVFo

Procariota: ADN
El ADN bacteriano se encuentra en 2 lugares: cromosoma circular el cual puede estar unido a la membrana celular plsmido circular el cual es un ADN mucho ms pequeo y libre.

Procariota: Ribosomas
Ribosomas y los grnulos de inclusin se encuentran en todo el citoplasma.

Estructura de la Bacteria

Dos componentes: Arreglo Forma

Forma
Bacilo: bacillus Esferas: coccus Espiral: spirillum

Arreglo
En parejas: diplo Formando grupos como racimo: staphylo Cadenas: strepto

Ejemplos
Streptococcus: Cadena de esferas o cocos Staphylococcus: Racimo de esferas o cocos Lactobacillus:Cadenas de bacilos

Otras formas
Cocos Cadena = Streptoccus Racimo = Staphylococcus Bacilos Cadena = Streptobacillus Coccobacillus Vibrio = curvos Espirilos Espiroquetas

Componentes de la bacteria
Flagelo Pili o pelo Capsula Membrana plasmtica Citoplasma Pared celular Lipopolisacridos cidos teicoicos Inclusiones Esporas

Envoltura celular
Cubierta externa del citoplasma Compuesto de 2 capas: Pared celular y membrana celular Mantiene la integridad celular Divide a las bacterias en 2 grupos = Tincin Gram Gram-positivos: Pared celular gruesa compuesta de peptidoglicanos y membrana celular Gram-negativos: Membrana celular externa, capa de peptidoglicanos delgado, y membrana celular.

Pared celular
Determina la forma de la bacteria Su resistencia previene ruptura por presin osmtica Presente slo en bacterias Algunos antibiticos lo afectan directamente. Ejm: Penicilina

Estructura: Pared celular

Polmero de peptido-glycano (amino acidos + azcares) Azcares: N-acetilglucosamina (NAG) cido N-acetilmuramico (NAM) Aminocido en forma D no en forma L Aminocidos se entre cruzan con NAG & NAM

Formacin de la pared celular de Gram positivos por unin de cinco glicinas entre las unidades de peptidoglicano

cidos teicoicos
Presente slo en Gram positivos Glicerol, fosfatos y ribitol Sitio de unin de fagos

Lipopolisacrido (LPS)
Endotoxina Causante de fiebre Nomenclatura de la toxina Endo- parte of bacteria Exo- excretado en el medio externo Estructura Lipido A Polisacrido Antgeno O de E. coli y Salmonella Slo en Gram negativas Puede ser removido con alcohol/acetone

LPS
Funciones Txico; causa muerte en ratones, cerdos y humanos
a LPS

G- septicemia; muerte debido

Pyrogeno; causa fiebre Vacunacin. Siempre causa fiebre Adyuvante; estimula inmunidad Resistente al calor Caracterstica de las colonias Mucoide = Cremoso (bastante LPS) Seco = Rugoso (poco LPS)

Paredes celulares atpicas

Algunas bacterias carecen de la estructura tpica de la pared celular ejm. Mycobacterium y Nocardia Gram-positivos con lpidos (cidos miclicos) Patogenicidad y alto grado de resistancia a ciertos qumicos y colorantes. Base de la coloracin cido resistente usado para el diagnstico de estos microorganismos. Algunas bacterias no tienen pared celular ejm. Mycoplasma La pared celular estabilizada por esteroles

Pared Celular de las micobacterias

Factor Cordn Acidos Micolicos (Ac graso betahidroxilo) Arabino Galactano Peptidoglicano Membranacitopla smtica

COLORACIN DE ZIELH NELLSEN B.A.A.R.

Fijar la muestra. Agregar fucsina bsica. Calentar la lamina y colorante hasta tres veces, observar la presencia de humo. Lavar con agua de cao. Agregar azul de metileno 1 min Lavar con agua destilada

Flagelo bacteriano
Los flagelos bacterianos son simples pero son motores poderosos - Motilidad Movimiento rotacional de 360 grados. Partes: - Filamento. Largo, delgado, estruct helicoidal compuesto de la protena flagelina. - Gancho. Vaina curveada - Cuerpo basal. Anillos superpuestos fijos en la pared celular. Bacterias sin flagelo: Movimiento Browniano

Flagelo - Funcin
Gua a la bacteria en una direccin en respuesta a un estmulo externo: - Estmulo qumico quimiotaxis; positivo y negativo - Estmulo de luz fototaxis Genera movimiento horarios y antihorarios: - Antihorario resulta en un movimiento linear suave corren - Horario - tumbos

Flagelo bacteriano

http://www.youtube.com/watch?v=Jno9DqbVDdY

Quimiotaxis
Movimiento dirigido hacia atrayentes qumicos y lejos de repelentes qumicos Sistema molecular sensorial Ms de 30 genes en el opern; codifican receptores, comunicadores, transductores, reguladores de tambor, y motores Conseguido por paseos aleatorios sesgados Mecanismo de accin Paseos al azar se logran a partir de alteraciones en la frecuencia de volteo

Fimbria
Pelos finos de protena que salen de la superficie celular Funcin: Adhesin a otras clulas y superficies

 Estructura tubular rgida compuesta de la protena pilin Slo en clulas Gram negativas Funcin: Unin de bacterias para la transferencia de DNA (conjugacin)

Pili

Glicocalix
Molculas que recubren la parte externa de la pared celular, compuesto de azcares y/o protenas Dos tipos: 1. Capa mucosa poco organizado 2. Cpsula altamente organizada Funciones: Proteger a la clula de deshidratacin y falta de nutrientes Evita la fagocitosis de los glbulos blancos contribuyendo a la patogenicidad Unin formacin de biofilms

Biofilm

Cpsula
Material compacto alrededor de la clula Algunas bacterias segregan materiales mucosos: polisacridos, polipptidos y complejos de polisacridos y protenas (glucoclix) Capa mucosa: si el material es laxo, de modo que forma solo una capa difusa.

Las bacterias se comunican

Sistemas de quorum sensing en bacterias

Quorum sensing
mecanismos de cooperatividad entre microorganismos desarrollan un comportamiento multicelular que les suponga una ventaja selectiva El mecanismo bacteriano de comunicacin intercelular que controla la expresin gnica en funcin de la densidad celular. Regulacin de la induccin de la patogenicidad mediante quorum sensing en la bacteria simbionte del ser humano S. aureus.

Crecimiento, Nutricin y Metabolismo Bacteriano

METABOLISMO

CRECIMIENTO

NUTRICION

Introduccin
Qu utilidad tiene conocer las condiciones que un microorganismos requiere para crecer?
# Obtenerlo en el laboratorio Cultivo

# Combatirlo o evitar su proliferacin

Nutricin Microbiana
La nutricin es el proceso por el que los microorganismos toman del medio donde habitan las sustancias qumicas que necesitan para crecer Dichas sustancias se denominan nutrientes Los nutrientes se requieren para:
energa biosntesis

Nutrientes: Dependiendo de las cantidades que se requieran se habla de macronutrientes y micronutrientes. Existen diferencias en cuanto a los requerimientos nutricionales de cada microorganismo.
MACRO
Carbono. Nitrogeno. Fosforo. Azufre Potasio Magnesio Sodio Calcio Hierro

MICRO
Cromo Cobalto Cobre Manganeso Molibdeno Niquel Selenio Tungsteno Vanadio y Zinc.

Factores de crecimiento
Se requieren en muy pocas cantidades y solo por algunas clulas:
Vitaminas, Aminocidos, purinas y pirimidinas.

La mayora de los microorganismos son capaces de sintetizarlos.

Tipos Nutricionales Desde el punto de vista biosinttico:

Organotrofas: requieren compuestos orgnicos (hidratos de carbono, hidrocarburos, lpidos, protenas, alcoholes...). Litotrofas: son aquellas que slo requieren sustancias inorgnicas sencillas (SH2 S0, NH3, NO2-, Fe, etc.). Mixotrofas: son aquellas bacterias con metabolismo energtico litotrofo (obtienen energa de compuestos inorgnicos), pero requieren sustancias orgnicas como nutrientes para su metabolismo biosinttico.

Segn la fuente de carbono que utilizan:

auttrofos, fuente de carbono = CO2 hetertrofos fuente de carbono = materia orgnica.

Segn la fuente de energa:

Fototrofos, fuente de energa = la luz, Quimiotrofos, fuente de energa = un compuesto qumico que se oxida.

Tipos Nutricionales
Tipo
Fotoautotrofas

Fuente de energa
Luz

Fuente de carbono
CO2

Ejemplos
Algas y cianobacterias

Fotoheterotrofas
Quimioautotrofas o Litotrofas

Luz
Qumica

Compuestos orgnicos
Compuesto inorgnicos: H2, NH3, NO2, H2S, CO2

Algas y bacterias fotosintticas

Pocas bacterias

Quimioheterotrofas o Heterotrofas

Qumica

Compuesto La mayora de orgnicos: glucosa bacterias

Diversidad metablica de los microorganismos

El mundo microbiano es de una sorprendente diversidad metablica. Algunos metabolismos solo han evolucionado en procariotas. Ejemplos: En heterotrofos: desde metilotrofos (usan metano o metanol) hasta los verstiles Pseudomonas, que usan ms de 100 tipos de C orgnico, incluyendo hidrocarburos alifticos y cclicos Los quimiolitoautotrofos crecen en oscuridad en medios a base solamente de sales minerales La fijacin de N2 solo ha evolucionado en procariotas

Clases de nutrientes
Universales (los requeridos en esta forma por todos los procariotas): H2O, CO2, fosfatos y sales minerales Particulares: elementos que se pueden captar de diferentes maneras, segn especies: N y S. Especiales: los microorganismos pueden tener necesidades especiales. Ej: Las diatomeas necesitan cido silcico Las bacterias halfilas requieren grandes cantidades de Na (mares) Factores de crecimiento

El Carbono
El C es necesario para construir el esqueleto de todas las molculas orgnicas Auttrofos: pueden usar CO2 como nica fuente de C Hetertrofos: emplean molculas orgnicas preformadas y reducidas como fuente de C
Los microorganismos tienen gran flexibilidad con respecto a la fuente de C

Fijacin del CO2

La reduccin o incorporacin del CO2 requiere una gran cantidad de energa. Casi todos los auttrofos microbianos incorporan CO2 mediante el Ciclo de Calvin. Tiene lugar en los cloroplastos (eucariotas) o carboxisomas (procariotas). La formacin de glucosa a partir de CO2 puede resumirse: 6CO2 + 18 ATP +12NADPH + 12H+ + 12H2O glucosa + 18(ADP+Pi) + 12NADP+ Los azcares formados pueden usarse para sintetizar otras molculas esenciales

El CO2
El CO2 es requerido por todo tipo de bacterias.
Los autotrofos lo requieren como fuente de C, y lo reducen usando como fuente de energa
sustancias qumicas : quimioautotrofos la luz: fotoautotrofos

Las arqueas metanognicas lo pueden usar como aceptor final de electrones en la respiracin, produciendo CH4. Adems, algunas lo usan tambin como fuente de C Los heterotrofos necesitan pequeas cantidades de CO2 para sus carboxilaciones en rutas metablicas

El CO2
El origen del CO2 puede ser:
Endgeno: procedente de descarboxilaciones que ocurren al degradar la fuente orgnica de carbono Exgeno: el CO2 de la atmsfera o disuelto en las soluciones acuosas Normalmente, las bacterias crecen a la concentracin de CO2 atmosfrico (0.03%), pero algunas bacterias (Neisseria, Brucella), cuando se aislan por primera vez, requieren atmsferas enriquecidas, con 5-10% de CO2. (capnofilia o microaerofilia)

Fosfatos
El P suele requerirse en forma de fosfatos
Bacterias que usan fosfatos orgnicos poseen fosfatasas extracelulares (secretadas) en Gram-positivas, periplsmicas en Gram-negativas Fosfatos inorgnicos
Las bacterias que usan fosfatos orgnicos no dependen de ellos, ya que tambin pueden usar fosfatos inorgnicos

El fsforo se usa principalmente para la sntesis de los cidos ncleicos y los fosfolpidos, pero aparece tambin en coenzimas y en protenas.

Sales minerales: cationes

Ion Potasio K+
en activacin de enzimas asociado con Ac. teicoicos de Gram+ estabiliza ribosomas, membranas y cidos nucleicos cofactor en reacciones con ATP en clorofilas y bacterioclorofilas cofactor de enzimas como proteinasas en citocromos, FeS-protenas cofactor en enzimas

Ion Magnesio Mg2+

Ion Calcio Ca2+

El Hierro como ion Fe2+

Oligoelementos o micronutrientes
Mn2+ (cofactor de ciertas enzimas) Co2+ (vitamina B12) Zn2+ (estabiliza ADN-polimerasas y ARNpolimerasas) Ni (en hidrogenasas, enzimas que captan o liberan H2)

Nitrgeno y azufre
Los elementos N y S son requeridos por todos los seres vivos, se encuentran en la clula en estado reducido:
El -NH2 forma parte de los aminocidos y de las bases nitrogenadas El radical SH interviene en aminocidos y coenzimas

Factores de crecimiento
Son molculas orgnicas, componentes celulares esenciales, que no pueden ser sintetizados por el microorganismo, los toman del ambiente, y son requeridos en muy pequeas cantidades Existen 3 clases principales

Aminocidos: sntesis de protenas Purinas y pirimidinas: sntesis de cidos nucleicos Vitaminas: cofactores enzimticos
Ejemplos:
Brucella requieren biotina, niacina, tiamina y pantotnico Haemophilus necesita hemo y piridn-nucletidos

Factores de crecimiento
Factor o vitamina p-aminobenzoico (PABA) Acido flico Biotina Cobalamina (vitamina B12) Niacina (cido nicotnico) funciones principales precursor del cido flico metabolismo de compuestos C1, transferencia de grupos metilo biosntesis de cidos grasos; fijacin de CO2 reduccin y transferencia de compuestos C1; sntesis de desoxirribosa precursor del NAD; transferencia de electrones en reacciones redox

Riboflavina cido pantotnico Tiamina (vitamina B1) Complejo B6 (piridoxal, piridoxamina) Grupo Vitamina K, quinonas

precursor de FAD y FMN precursor de la CoA descarboxilaciones; transcetolasas. transformaciones de aminocidos y cetocidos
transportadores de electrones (ubiquinonas, menaquinonas, etc.)

Captacin de Fe
La captacin de Fe es difcil debido a la insolubilidad del ion Fe3+ Los siderforos son molculas de bajo PM capaces de formar complejos de Fe3+ y aportarlos a la clula Los mo secretan siderforos cuando hay poco Fe disponible. E complejo Fe-siderof se une a la prot receptora del siderforo. Dentro de la clula el Fe se reduce a Fe2+

Captacin celular de nutrientes

Los microorganismos utilizan varios sistemas de transporte diferentes. Los ms importantes son:
Difusin simple Difusin facilitada Transporte activo Traslocacin de grupo

Biosntesis: Ingreso de substancias para transformarse en compuestos estructurales

Difusin pasiva Difusin facilitada Transporte activo Translocacin de grupo

Categoras Nutritivas

Crecimiento Bacteriano
Se define como el aumento ordenado de todos los constituyentes qumicos de la clula. Se trata de un proceso complejo, que supone la replicacin de todas las estructuras y componentes celulares a partir de los nutrientes exgenos.

Crecimiento Bacteriano
Aumento de nmero (no de tamao) Multiplicacin bacteriana: fisin simple o binaria
1. 2. 3. 4. 5. 6. Replicacin de DNA Elongacin Auto duplicacin de ADN cromosmico Tabicado central Invaginacin membrana celular Sntesis de pared

Tiempo de generacin
Tiempo de generacion: es el tiempo que se requiere para que la poblacion se duplique. Los tiempos de generacion varian ampliamente entre las diferentes bacterias. Ej. 1 a 3 horas, 10 min, o varios dias. Varan de 20 minutos (Escherichia coli) hasta 24 horas

Curva de Crecimiento Bacteriano

Bacteria en medio adecuado Grfico de coordenadas: nmero de bacterias (logaritmo) versus lapso de tiempo. Distinta para cada bacteria En todas se identifican cuatro etapas

Fase de Latencia
El nmero de microorganismos no vara Adaptacin al medio, produccin de enzimas Tiempo variable: entre una hora a das. Tamao relativo aumentado por divisin

Fase exponencial o de crecimiento logartmico

Es la consecuencia del hecho de que cada clula se divide en dos. Las bacterias se encuentran en un estado ptimo. Su velocidad esta influenciada por temperatura, nutrientes.

Fase Estacionaria
El medio de cultivo no se renueva, comienzan a acumularse metabolitos txicos, se modifica el pH, los nutrientes se agotan, la velocidad de multiplicacin se retrasa y hay un equilibrio entre bacterias vivas y muertas. Fase de Esporogenesis para las especies productoras de esporas.

 Cuando continua el crecimiento en el medio de cultivo viejo se produce una inversin numrica con respecto a la fase exponencial. En este periodo son mas las bacterias muertas que las vivas, hasta que se termina con la muerte de todas. Si son bacterias con capacidad de esporular, se produce la esporulacin en esta fase. Disminucin de nutrientes

Fase de declinacin o muerte

Tcnicas para determinar el nmero y viabilidad de las clulas

Contar al microscopio el nmero de clulas en un volumen conocido Establecer el nmero de clulas por turbidimetria Recuento de elementos viables por cultivo (Unidad Formadora de Colonias o UFC)

Efecto de la Temperatura
Temperatura mnima de crecimiento Temperatura ptima de crecimiento Temperatura mxima de crecimiento

Efecto de la Temperatura
Sicrfilos Requieren bajas temperaturas 15 20 C La mnima puede ser muy baja Bacterias en el fondo del mar y en los polos Mesfilos Rango de temperaturas: 25 40 C Temperatura ptima: 37 C 1 C Agentes que afectan al hombre y los animales Termfilos Toleran altas temperaturas Temperatura ptima: 55 C Temperatura mxima: 80 C o mas.

Clases de M.O. segn la temperatura

Tipo Psicrofilo Mesofilo Termofilo Hipertermo filos
Rango de Temperatura Temperatura Optima

M.O Algas

0 - 20 20 - 40 40 - 70 90 - 115

15 38 60 106

E. coli
Bacillus stearothermophi llus Thermus acuaticus

Condiciones de pH
pH : Potencial Hidrgeno. Va desde 0 a 14. pH < 6,5 cido pH > 7,5 bsico o alcalino pH 6,5 7,5 neutro Mas adecuado para crecimiento bacteriano Bacterias que crecen hasta pH 4 Acidfilas (Por ejemplo: Lactobacillus) Vibrio cholerae : medio alcalino

Presin Osmtica
Los solutos (sales y azcares) disueltos se desplazan a zonas de menor concentracin. El agua se desplaza a zonas de mayor concentracin de solutos Una presin osmtica alta causa prdida de agua y plasmlisis de la clula Halfilas: bacterias que toleran altas concentraciones salinas Halfilas facultativas : toleran hasta un 2 % de sales

Condiciones atmsfricas
Potencial de xido-reduccin o Redox (Eh) Respiracin bacteriana : reacciones de xidoreduccin, en cadena El aceptor final de electrones o hidrogeniones es variable

Requerimientos de O2 y CO2

En funcin de los requerimientos de O2 y CO2, las bacterias pueden clasificarse en: Bacterias aerobios estrictas: necesitan una concentracin de alrededor del 21% de oxgeno para poder desarrollar. (Pseudomonas, Mycobacterium, Corynebacterium) Bacterias microaerfilas: slo necesitan alrededor de un 5% de oxgeno para desarrollar. Mayores concentraciones inhiben su desarrollo. (Campylobacter, Helicobacter) Bacterias anaerobios obligadas o estrictas: son incapaces de sobrevivir en presencia de oxgeno, es decir requieren un 0% de oxgeno (Fusobacterium, Clostridium) Bacterias anaerobias aerotolerantes: pueden sobrevivir, aunque no crecer, en presencia de hasta un 0,5% de oxgeno. (Actinomyces, Propionibacterium) Bacterias anaerobias facultativas: son capaces de crecer en una atmsfera tanto con o sin oxgeno. (Streptococcus, Staphylococcus, Enterobacteriaceae) Bacterias capnfilas: son bacterias aerobias que necesitan adems para crecer un 5-10% de CO2. (Neisseria, Haemophilus)

Metabolismo Microbiano
Produccin de Energia y biosntesis

1. Introduccin
Metabolismo:
Conjunto de procesos mediante los cuales un microorganismo obtiene la energa y los nutrientes que necesita para crecer.

2 tipos:
liberan E = exergonicas catablicas utilizan E = endergonicas - anablicas

E = capacidade de realizar trabajo

qumica luminosa

2. Produccin de Energia (E)

Requerimentos de energia:

Crescimento celular, reproduccn, e movimento

Componentes celulares como protenas (enzimas), DNA, RNA, carboidratos, lipdeos, etc.

Sntesis
Compuestos y estruturas

Degradacin
E requerida
Sistema de almacenamiento y transferencia de E

E liberada
degradacin de sustratos y nutrientes

Produtos de degradacin sirven como unidades para a producin de compuestos celulares

3.Tipos de energia
Energia qumica energa contida en enlaces qumicas
de las molculas

Energia radiante (energia da luz) debe ser

convertida en energia qumica

Clasificacin de los MO segn la fuente de energa y carbono

(utilizan sustancias qumicas como fuente de energia)

Quimiotrficos

Quimiolitotrficos
C= CO2

Quimiorganotrficos
C=orgnico

Clasificacin de los MO segn la fuente de energa y carbono

Clasificacin de los MO segn la fuente de energa y carbono

Tipo fisiolgico Fonte de Energia Fonte de Carbono

Fotoautotrfico = plantas, cianobactrias, algas verdes Fotoorganotrfico/hetero = bactrias prpuras, exceto as abaixo Foto Luz Fotolitotrficas = bactrias prpuras metabolizantes do S
Quimio Qumica Quimioautotrfico = Archaea metanognicas Quimiorganotrfico/hetero = maioria bactrias e fungos Organotrfico/heterotrfico Molculas orgnicas Quimiolitotrfico = bactrias nitrificadoras Autotrfico/litotrfico Molculas inorgnicas

COMPLEJO ENZIMA-SUSTRATO

Componentes ricos en energa: almacenamiento y transferencia de energia (inmediata)

ATP = adenosina trifosfato
ADP = adenosina difosfato Fosfoenolpiruvato Glicose-6-fosfato Coenzimas: Acetil CoA, NAD, NADH, NADPH

Almacenamiento de energa

Ligacoes tioster

(Madigan et al., 2010)

4.Generacin de ATP por MO

Ausencia de aceptores exgenos de eMenos E

Fermentacin
Sntese de ATP acoplada reaccin de xido-reduccin

Respiracin
O2 u otro compuesto como aceptor exgeno de eMas E

Oxidacin = perdida de e- (liberan energia) Reduccin = ganancia de e- (requiere energia)

Recordemos.....(redox)
- Un compuesto se torna oxidado cuando: 1. Pierde e2. Se une a un atomo mas electronegativo 3. Esto generalmente ocurre cuando se une a un O - Un compuesto se torna reducido cuando: 1. Gana e2. Se une a un atomo menos electronegativo 3. Esto generalmente ocurre cuando se une a un H Formas reducidas de C (carboidratos, metano, lipdios, alcoholes) son importantes fuentes de energa en sus enlaces. Formas oxidadas de C (cetonas, aldedos, cidos carboxlicos e CO2) disponen de poco potencial energtico en sus

enlaces.

Mecanismos para obtener energa

(Sntesis de ATP) Los quimiotrficos presentan 2 mecanismos conocidos:
1. Respiracin: obtienen energa de la oxidacin (fosforilacin oxidativa) Pudiendo ser: a) Aerbia: aceptor externo es O b) Anaerbia: aceptores diferentes de oxigeno (nitrato, sulfato, carbonato, ...) 2. Fermentacin: ocurre en ausencia de aceptores externos de e(fosforilacin a nvel de substrato)

1a) Respiracin aerbia

Es el procedimiento mas comum comprende 3 etapas:

1) Piruvato (glucolisis) 2) Ciclo do cido ctrico (ciclo de Krebs) 3) Cadena transportadora de e-

1 etapa: Piruvato (via glicoltica)

Es considerada la vida metablica mas primitiva, presente en todas las formas de vida. Ocurre en el citoplasma de las clulas.

Caractersticas: 1.Oxidacion parcial de la glucosa a piruvato

2.Pequea cantidad de ATP (produccin lquida de 2 ATP)

3.Pequea cantidad de NAD reducida a NADH

2 etapa: Ciclo de Krebs

Ocurre en el citoplasma (procariotos) y en las mitocondrias (eucariotos).
Reacciones preparatorias: formacin de compuestos clave del proceso

ELEMENTOS CLAVES PARA REACCIONES CATABOLICAS E IMPORTANTES REACCIONES BIOSINTETICAS Los intemediarios son desviados para vias biosinteticas cuando es necesario:

Ejemplos:
Oxalacetato: precursor de aminocidos Succinil-CoA: formacion de citocromos y clorofila, entre otros Acetil-CoA: biosintesis de cidos graxos

3 etapa: Cadena respiratoria (sistema de transporte de e-)

Ocurre en la membrana de las mitocondias(eucariotas) y em la membrana citoplasmatica (procariotas)

Los protones y electrones obtenidos en la glucolisis por

el NAD y en el Ciclo de Krebs por el NAD y FAD son

transportados a una larga cadena de citocromos en niveles sucesivamente mas bajos de energia de modo que sea mejor aprovechada en forma de de ATP.

Fosforilacin oxidativa
Genera la gradiente de Protones

Las 3 etapas de la via respiratoria

Sntesis de la respiracin aerbia

Reaccion de oxido y reduccion en presencia de un aceptor de e- externo, u O2 A molcula entera de sustrado es oxidada hasta CO2 Alto potencial de energa Gran cantidad de ATP puede ser generada: teoricamente 38 ATPs

Produccin de ATP:

En la cadena respiratoria:
4 NADH formados em la glucolisis 6 NADH formados en ciclo de Krebs 2 FADH formados en ciclo de Krebs Formacin directa en la glucolisis 12 ATP 18 ATP 4 ATP 2 ATP

Formacin directa en el Ciclo de Krebs

Total de at ....................................................

2 GTP
38 ATP

1b) Respiracin anaerbia

aceptores diferentes de oxigeno

Rendimento energtico inferior: Ningun aceptor alternativo apresenta potencial oxidante cuanto O2. El uso de aceptores alternativos permite a los microrganismos respirar en

ambientes sin oxigeno, siendo de extrema importancia ecolgica.

Oxidacin de substratos orgnicos e inorgnicos: C6H12O6 + 12 NO3- 6CO2 + 6H2O + 12NO22 lactato + SO4= + 4H+ 2 acetato + 2CO2 + S= + H2O

Cantidad de energa producida es menor

2. Fermentacin (tambien es una forma de respiracion anaerobia. Ocurre en el citosol)

Reaccion de oxido-reduccion internamente balanceada. Ausencia de aceptores externos.

La concentracin de NAD + en las clulas es baja, necesita ser reoxidado a no dejar la va glucoltica. Una reduccin del piruvato a etanol u otros productos establece un NAD y permite la continuidad de la glucolisis. Produccin lquida de apenas

2 ATP.

Caractersticas de la Fermentacin:

cido pirvico es reducido a ac.organicos y alcoholes NADH es oxidado a NAD: esencial para la continuidad de la via glicoltica O2 no es necesario No se obtiene ATP adicional. Gases (CO2 y/o H2) pueden ser producidos

Produtos da fermentacin
Espcie microbiana
Acetivibrio cellulolyticus Actinomyces bovis Clostridium acetobutylicum Enterobacter aerogenes Escherichia coli Lactobacillus brevis

Principal produto da fermentao

cido actico cidos actico, frmico, lctico, etc. Acetona, butanol, etanol, cido frmico, etc. Etanol, cido frmico, CO2, etc. Etanol, cidos lctico, actico, frmico, succnico, etc. Etanol, glicerol, CO2, cidos lctico, actico, etc.

Streptococcus lactis
Succinimonas amylolytica

cido lctico
cidos actico e succnico

Biosntesis (anabolismo)
Energia para sntesis de compuestos celulares: cidos nuclicos (DNA, RNA), sustancias nitrogenadas (aa, enzimas, protenas), carbohidratos (peptidoglicano), lipdeos, etc. ATP para procesos como division celular, motilidad, transporte activo de nutrientes, etc.

Utilizacin de energa

Biosntesis de Compuestos Nitrogenados

N2 N inorgnico (NH3+)

Aminocidos

Arranjo de aminocidos

Protenas/enzimas

Purinas e pirimidinas
Nucleotdeos

cidos nuclicos (DNA, RNA)

Formacin de precursores de aminocidos

(Madigan et al., 2004)

Biosntesis de nucleotdos y cidos nucleicos

Nucleotdeo = base nitrogenada-pentose-fosfato

ribose = ribonucleotdeos (RNA) desoxirribose = desoxirribonucleotdeos (DNA) Activacin de dos nucleotdeos (ATP) Sntese de cidos nuclicos a partir de nucleotidos activados

Biosintesis de nucleotidos y cidos nuclicos

(Madigan et al., 2004)

Biosntesis de carbohidratos
CO2

Triose

Pentoses e hexoses

Nucleotdeos

(peptidoglicano, celulose, amido, etc.)

Polissacardeos

RNA e DNA

Biosintesis de cidos grasos

Glicose Gliclise cido pirvico

Acetil CoA e Malonil CoA

cidos grasos de cadena larga

Fosfolipdios

Glicerol fosfato

Otros usos de energa

Transporte Motilidade Reparos Produccion de estruturas de resistencia (endosporos)