Dr.

Mircea Leabu Aparatul Golgi, curs pentru studen ii n medicin APARATUL GOLGI Organizarea cursului Aspecte introductive Considerente istorice Ultrastructura aparatului Golgi Funciile aparatului Golgi - Aspecte generale - Prelucrarea i definitivarea structurilor glucidice N -glicozidice - Biosinteza structurilor O-glicozidice - Modele referitoare la dinamica structurilor golgiane - Biogeneza lizosomilor Cooperarea reticul endoplasmic Golgi n biogeneza i traficul intracelular al membranelor - Traficul RE Golgi - Traficul reea trans-Golgi locaie final - Direcionarea transportului intermembranar Ciclul secteror celular (calea secretorie celular) Consideraii finale Bibliografie Aspecte introductive Aparatul Golgi, denumit i complexul Golgi este un organit celular delimitat de endomembrane, structurat sub forma unei stive de cisterne recurbate prezentnd polaritate morfologic i biochimic, cu rol cheie n precesele de biogenez a membranelor, n maturarea, sortarea i distribuirea de molecule i macromolecule att ctre locurile celulare crora le sunt destinate ct i n calea secretorie. Face parte din sistemul de organite implicat n traficul intracelular al membranelor, care ncepe cu reticulul endoplasmic i se termin la membrana celular sau la componentele sistemului endosomal. Termenul de polaritate este folosit n acest context pentru a sublinia existena unei diferene ntre doi poli, dou extremiti - n cazul aparatului Golgi, dou fee cis i trans. Exist o multitudine de exemple de structuri polarizate de la molecule, la organite i chiar celule n asamblul lor. De exemplu actina, dei este o protein globular, prezint un pol care favorizeaz polimerizarea, denumit capt + i un pol care favorizeaz depolimerizarea filamentului de actin capt -. Enterocitul sau nefrocitul sunt dou exemple de celule polarizate, ai cror poli apicali, prezentnd microvili, difer de cei bazali, att morfologic, ct i biochimic. Organitul a fost pentru prima dat evideniat n 1898 de ctre Camilo Golgi, n celulele Purkinje, prin impreganare argentic. Structura intracelular s-a dezvluit ca o dantelrie esut sub form de co, n jurul nucleului. Golgi a denumit-o, pe baza morfologiei, aparat reticular endocelular (endocellular reticular apparatus n conferina prilejuit de decernarea Premiului Nobel), sau aparat reticular intern. n scurt timp, organitul a primit denumirea de aparat Golgi, aa cum se numete (fr alternativ) i n momentul de fa. n 1906, Camilo Golgi a primit, mpreun cu Santiago Ramon y Cajal, Premiul Nobel pentru fiziologie sau medicin. Motivaia juriului a fost: "in recognition of their work on the structure of the nervous system". Unul din aspectele legate de structura sistemului nervos l reprezenta descrierea aparatului reticular endocelular. Microscopia optic, prin varianta ei microscopia de fluorescen, permite n momentul de fa att evidenierea, ct i studiul complexului Golgi, n celulele vii, prin procesele de trafic membranar n care el este semnificativ implicat. Considerente istorice Din 1898, cand a fost descoperit, pn n 1954, cnd i-a fost pentru prima dat descris ultrastructura n imagini de microscopie electronic, informaiile despre aparatul Golgi nu au 1

Dr. Mircea Leabu Aparatul Golgi, curs pentru studen ii n medicin evoluat spectaculos. Dup descrierea sa ultrastructural, dei a existat suspiciunea c aceast structurare ciudat poate fi artefactual, datele au nceput s se acumuleze n favoarea existenei reale a acestui organit. ntre altele, menionm contribuia colectivului de cercettori condus de G. E. Palade, care a evideniat implicarea complexului Golgi n calea secretorie celular (numit i ciclu secretor celular; vezi mai jos la seciunea cu acest nume). Suspiciunea a fost spulberat cnd, prin citochimie ultrastructural, s-a dovedit c cisternele golgiene prezint polaritate biochimic. O asemenea distribuie ordonat i selectiv a bagajului enzimatic ntre cisterne, evideniat nc din 1961, nu poate fi posibil ntr-o structur artefactual. Astfel, structurile cis-golgiene (reeaua cis-golgian, cisternele cis cele mai proximale) i numai ele, au proprietatea de a reduce ioni metalici (argint, osmiu); cisternele cis distale, ctre cele mediene prezint reacie citochimic specific pentru manozidaz; cisternele mediene i trans dau reacie citochimic specific nucleozid-difosfatazelor (cunoscute i sub denumirea veche de tiaminpirofosfataz); poriunile cele mai distale ale organitului, cunoscute sub numele de re ea transgolgian, prezint reacie citochimic pentru fosfataza acid, o enzim lizosomal. Parte dintre aceste distribuii vor fi motivate prin asocierea cu aspectele legate de funciile organitului, pe masur ce vom detalia aspecte legate de rolul acestuia (vezi la seciunea Funciile aparatului Golgi). Cu timpul datele referitoare la organizarea molecular i funcionarea complexului Golgi au nceput a se acumula cu respectarea unei curbe exponeniale. Aparatul Golgi a devenit din suspect, fascinant i el reprezint una dintre structurile celulare ce suscit un acut interes n lumea biologilor celulari, n momentul de fa. Ultrastructura aparatului Golgi Complexul Golgi este structurat, aa cum am mai spus deja, ca o stiv de cisterne recurbate. Numrul cisternelor este variabil, diferind de la un tip de celul la altul, .Dispoziia i numrul cisternelor aparatului Golgi difer n funcie de tipul celular i, implicit, de activitatea de sintez a proteinelor destinate ciclului secretor. n celulele eukariote, aparatul Golgi este format din mai multe astfel de stive, unite prin tubuli nreelai care formeaz o panglic n vecintatea nucleului, n zona pericentrozomal. Din cele amintite n comentariile anterioare se desprinde ideea c aparatul Golgi este o structur caracterizat ultrastructural prin polaritate morfologic, dar i prin polaritate biochimic. Vom defini astfel, din punct de vedere morphologic, urmtoarele caracteristici ultrastructurale: o fa convex, numit i fa cis, orientat ctre cisterne ale reticulului endoplasmic din care nmuguresc vezicule (reticul endoplasmic tranziional ); (ii) o fa concav, numit i fa trans,: (iii) re ea trans-Golgi, un sistem de vezicule i/sau vacuole, tubuli nreelai i fragmente de cisterne din care rezult macrovezicule ce vor fi trimise ctre destinaiile lor finale. Aceast reea este n continuarea feei trans. (iv) ntre RE tranziional i faa cis-golgian au fost evideniate microvezicule cu diametrul mediu de 50 nm, care, n momentul de fa, sunt dovedite a conflua (fr a prezenta o real independen) ntr-un sistem veziculo-tubular (compartiment veziculo-tubular), considerat un compartiment intermediar ntre RE i Golgi. Acest compartiment este numit prescurtat fie VTC (de la Vesicular Tubular Cluster), fie ERGIC (de la Endoplasmic Reticulum- Golgi Intermediate Compartment). Prezena unui asemenea compartiment face s se vorbeasc, de regul i de o re ea cis-Golgi; (i)

ntre reeaua trans- Golgi i sistemul endosomal se descrie de asemenea un sistem de recirculare a unor vezicule de transport, denumit compartiment de reciclare endosomal

Dr. Mircea Leabu Aparatul Golgi, curs pentru studen ii n medicin n ceea ce privete stiva de cisterne, se opereaz cu noiunile: cisterne cis, cisterne mediene i cisterne trans, dup cum acestea sunt orientate ctre faa cis-Golgi, ctre faa transGolgi, sau sunt aezate n zona din mijloc a stivei. Morfologic, polaritatea se poate evidenia att ntre cisterne i nu numai datorit recurbrii (cisternele cis au lumenul mai subire, cele trans mai gros), ct i n cadrul cisternelor (mai efilate n zonele centrale i mai ngroate n zonele limitrofe). Pentru a ne completa imaginea n spaiu a morfologiei complexului Golgi, este bine s specificm faptul c cisternele trebuie vzute ca mbrcnd un sector de sfer, ca i cum ar forma un cu. Dei corespondena dintre polaritatea morfologic i cea biochimic a fost dovedit ntre cisterne, nu acelai lucru s-a ntmplat n ceea ce privete polaritatea din cadrul aceleiai cisterne. Nu exist, n momentul de fa, dovezi cum c ntre zonele mediene ale cisternelor (mai subiri n grosime) i zonele lor limitrofe (mai gonflate) ar exista diferene de molecularitate. Dimpotriv, prin metode de refacere a fluorescenei dup foto-stingere (FRAP), coroborate cu rezultate obinute prin tehnici de pierdere a fluorescenei prin foto-stringere (FLIP, de la Fluorescence Loss In Photo-bleaching) s-a evideniat c moleculele i/sau macromoleculele din cisternele golgiene difuzeaz fr restricii n planul membranelor fiecrei cisterne. Metodele FLIP presupun stingerea repetat a fluorescenei n aceeai zon micronic a unei structuri celulare i observarea efectului asupra fluorescenei la nivelul ntregii structuri. Dac moleculele difuzeaz fr restricii n membrana structurii, este de ateptat ca fluorescena la nivelul acesteia s dispar complet dup stingeri repetate. Acest lucru a fost observat la nivelul cisternelor golgiene. Din punct de vedere al structurii biochimice, la nivelul aparatului Golgi se descriu dou tipuri de proteine: i) Structurale, cu rol n formarea matricei aparatului Golgi, responsabile de organizarea lui tridimensional i poziionarea corect intracelular; din aceast familie fac parte golgina i proteinele din familia GRASP ( Golgi Re -Assembly Stacking Protein). Experimental s- a demonstrat c proteinele din familia GRASP sunt capabile s reasambleze n aproximativ 12 ore panglica/aparatul Golgi, dup extragerea organitului din celul prin microdisecie laser ii) Funcionale enzimele specifice aparatului Golgi, cu rol n definitivarea structurii proteinelor i lipidelor glicozilate, enzime despre care vom discuta n seciunile urmtoare Funciile aparatului Golgi Problema izolrii i purificrii cisternelor golgiene, n vederea studierii funciilor, rmne nc o provocare pentru cercettori. Au existat ncercri dintre cele mai ingenioase, ns marea problem o reprezint eficiena. ntruct complexul golgian reprezint o fraciune membranar slab reprezentat n structura celulelor, toate metodele presupun consum de fore i mijloace, care nu se justific sub aspectul randametelor. O metod cu mare grad de specificitate a fost dezvoltat de colectivul lui G.E. Palade la sfritul deceniului nou al secolului trecut, folosinduse izolarea pe suporturi de polizaharide (utilizate i n tehnicile cromatografice) conjugate cu anticorpi la proteine rezidente n membranele golgiene. Legarea afin a permis depunerea prin centrifugare a cisternelor adsorbite pe bile de Sepharose (sefaroz, un polimer de galactoz). Metoda nu a avut ns impact n lumea cercettorilor, din motivele amintite mai sus: consum mare de efort i resurse, care nu erau recompensate de rezultate. De aceea, au fost gsite alternative de studiu, pentru a surmonta aceste dezavantaje. Aspecte generale Ceea ce cunoatem n momentul de fa asupra funciilor complexului Golgi provine, n general, din studii de citochimie ultrastructural i din folosirea de diverse ci de inhibare a proceselor celulare care antreneaz acest organit. S ncepem cu o enumerare a funciilor mai bine cunoscute ale acestui organit:

1. 2.

3. 4.

5. 6. 7. 8.

Dr. Mircea Leabu Aparatul Golgi, curs pentru studen ii n medicin prelucrarea sfingolipidelor (biosinteza sfingomielinelor i glicolipidelor prin modificarea ceramidelor produse n RE); glicozilarea proteinelor (prelucrarea structurilor N-glicozidice continuarea tunderii i efectuarea glicozilrii terminale; formarea n ntregime a structurilor O-glicozidice inserate pe serin sau treonin); producerea glicozaminoglicanilor cu asamblri ale proteoglicanilor membranari, sau ai matricei extracelulare; sulfatarea unor glucide (att din glicozaminoglicani, ct i din unele glicoproteine); substratul de pe care sulfo-transferazele transfer sulfatul este 3-fosfoadenozin-5fosfosulfatul; marcarea enzimelor lizosomale prin eticheta manozo-6-fosfat (M6P) i biogeneza lizosomilor; maturarea proteinelor (proces ce implic att modificri enumerate la punctele 2 5, ct i prelucrri proteolitice); sortarea i transportul moleculelor i macromoleculelor la destinaia final n celul, sau pentru secretarea (exocitarea) lor; biogeneza i traficul intracelular al membranelor (proces care nu poate fi separat de toate celelalte enumerate, dar care necesit un comentariu mai detaliat).

Dintre cele opt funcii enumerate, vom detalia doar o parte, astfel nct s nelegem mai bine importana prezenei aparatului Golgi pentru economia celulei. De menionat c toate aceste procese se petrec ntr-o succesiune ordonat de etape bine controlate i reglate, pe msur ce substanele primite de la RE avanseaz prin aparatul Golgi dinspre faa cis, ctre faa trans. Acest lucru este posibil prin meninerea polarizrii biochimice a organitului, despre care am punctat mai sus unele detalii i pe care le putem mbogi cu date referitoare la polaritatea enzimelor implicate n prelucrarea i definitivarea structurii chimice a lanurilor N-glicozidice ale glicoproteinelor. Fenomenele legate de formarea structurilor Nglicozidice din glicoproteine au fost unele dintre primele studiate i sunt printre cele mai bine cunoscute procese ce se petrec n aparatul Golgi. Enzimele implicate n prelucrarea, n diverse direcii, a structurilor N-glicozidice prezint urmtoarea distribu ie ntre cisterne: n reeaua cis-Golgi este prezent enzima care produce precursorul etichetei M6P a enzimelor lizosomale (o N-acetil-glucozaminil-fosfotransferaz; vezi mai jos la Biogeneza lizosomilor detalii asupra procesului); (ii) n cisternele cis-Golgi este localizat manozidaza I, care tunde anumite manoze din oligozaharidul inserat pe asparagin n RE; (iii) n cisternele mediene se afl manozidaza II, dar i N-acetil-glucozaminiltransferaza care ncepe glicozilarea terminal; (iv) n cisternele trans se gsete galactozil-transferaza ce continu glicozilarea terminal a structurilor N-glicozidice; (v) n sfrit, n reeaua trans-Golgi sunt ntlnite sialil-transferazele care definitiveaz glicozilarea terminal prin adugarea de acizi sialici. (i) Distribuia glicozil-transferazelor, prezentat mai sus, justific i prezena nucleoziddifosfatazelor la nivelul cisternelor mediene i trans. Explicaia o constituie faptul c glucidele sunt transferate pe lanul oligozaharidic n cretere de pe nucleozid-difosfo-glucide (de ex: uridin-difosfogalactoza). Dup transfer, rmn n lumenul cisternelor nucleozid-difosfai (de ex: uridin-difosfat). Acetia nu au transportori n membrane care s-i transfere n citosol pentru refolosire (fig 1). Nucleozid-monofosfaii i fosfatul au ns transportorii corespunztori, astfel nct este necesar scindarea nucleozid-difosfailor, pentru asigurarea reciclrii moleculelor. Ne achitm parial, prin acest comentariu de promisiunea fcut n seciunea Considerente istorice. 4

Dr. Mircea Leabu Aparatul Golgi, curs pentru studen ii n medicin

Figura 1 Exemplificarea procesului de O-glicozilare.

Legend: Monoglucidele ( )se gsesc n lumenul aparatului Golgi cuplate cu nucleozid- difosfai, de pe care sunt transferate ctre lanul oligozaharidic n formare de ctre o glicozil- transferaz. n urma acestui proces rezult nucleozid -difosfat, care este mai departe defosforilat la nucleozid- monofosfat, care este eliminat n citoplasm printr-un transportor specific Prelucrarea i definitivarea structurilor glucidice N-glicozidice Analiznd aceast polaritate enzimatic putem deduce n ce const activitatea complexului Golgi asupra structurilor N-glicozidice. Cunoatem c producerea acestora este iniiat n RE sub forma unei structuri complexe oligozaharidice, triantenare format (considernd dinspre asparagin spre captul liber) din 2 N-acetil-glucozamine, 9 manoze i 3 glucoze. Cunoatem deasemnea c, dup inserarea pe asparagina aflat ntr-o secven consens (N XS/T), structura ncepe s fie tuns chiar n RE (mai nti glucozele, apoi o manoz); i mai cunoatem semnificaia funcional a tunderii de primele dou glucoze (asigurarea mpachetrii corecte prin aciunea calnexinei). Ei bine, dup ajungerea n Golgi, celula este n msur s decid asupra destinului acestor glicoproteine. Cele care vor fi enzime lizosomale, sunt marcate la cel puin una dintre manozele cu care ajunge aici (vezi mai jos detalii ale fenomenelor, la Biogeneza lizosomilor). Cele care au alte destinaii vor fi prelucrate, prin continuarea tunderii manozelor i, de regul, prin glicozilri terminale, pentru a deveni structuri nalt manozilate , structuri hibride , sau structuri complexe (Fig. 2).

Dr. Mircea Leabu Aparatul Golgi, curs pentru studen ii n medicin

Fig. 2: Tipuri de structuri N-glicozidice produse n aparatul Golgi.

Structurile nalt manozilate sunt slab reprezentate n afara enzimelor lizosomale (unde sunt modificate prin fosforilare). Structurile hibride conin nc un numr de cel puin cinci manoze, dar i glicozilare terminal, de regul nedefinitivat pn la acizi sialici. n sfrit, structurile complexe conin un miez trimanozidic (cu manoza legat de N-acetilglucozamina predecesoare, ca punct de ramificare) i, pe fiecare ramur iniiat de o manoz, cel puin cte un lan de glicozilare terminal definitivat. Aceste structuri se numesc biantenare. Structurile Nglicozidice complexe pot fi ns i triantenare (exemplul din Fig. 1), sau, mai rar, tetra-antenare cnd ambele manoze distale ale miezului trimanozidic conin cte dou lanuri de glicozilare terminal. Glicozilrile terminale implic aadar tunderea de manoze i adugarea pas cu pas (pe msura naintrii prin cisternele golgiene) de N-acetilglucozamin, apoi de galactoz i, la sfrit, de acid sialic. Structurile complexe pot conine i fucoz legat pe cea mai profound Nacetilglucozamin. Corespunztor tipurilor de structuri glucidice numite mai sus definim i tipuri de glicoproteine: glicoproteine nalt manozilate, glicoproteine hibride, sau glicoproteine complexe. Biosinteza structurilor O-glicozidice Structurile O-glicozidice se produc n ntregime la nivelul cisternelor golgiene. Dei nu exist date referitoare la distribuia glicoziltransferazelor implicate n aceste glicozilri i dei lanurile oligozaharidice sunt mai puin elaborate (vezi Fig. 3 pentru cele mai simple exemple) este probabil ca aceste enzime s respecte tot o aranjare polarizat ntre cisterne.

Fig. 3: Tipuri de structuri O-glicozidice produse n complexul Golgi

Modele referitoare la dinamica structurilor golgiane Explicarea meninerii polarizrii biochimice a cisternelor golgiene, n pofida micrii anterograde a materialului prelucrat, a reprezentat i reprezint o provocare pentru cercettorii din domeniu. Pentru nelegerea acestor mecanisme au fost elaborate dou modele: 1. modelul transportului vesicular (model tip suveic); 2. modelul maturrii cisternelor. Modelul transportului vezicular stipuleaz c transportul anterograd este fcut prin microvezicule (diametru de ~50 nm) i presupune segregarea moleculelor a cror prelucrare este terminat n microdomenii ale membranei cisternelor donoare, desprinderea lor sub forma unor vezicule de transport, migrarea ctre cisterna urmtoare (acceptoare), fuzionarea cu membrana acesteia i predarea moleculelor/macromoleculelor transportate n vederea prelucrrii corespunztoare bagajului enzimatic al noii cisterne. Moleculele implicate n aceste procese de 6

Dr. Mircea Leabu Aparatul Golgi, curs pentru studen ii n medicin transport selectiv, ca i cele care scap accidental n veziculele de transport sunt apoi returnate printr-un transport vezicular retrograd, la cisterna donoare. Modelul maturrii cisternelor presupune c transportul anterograd se face prin naintarea ntregii cisterne dinspre faa cis ctre faa trans, pe msur ce procesele biochimice avanseaz. Din cisternele maturate, n fiecare etap, proteinele rezidente sunt returnate la cisternele anterioare printr-un transport vezicular. Aadar, ambele modele presupun un transport vezicular retrograd, iar prezena unor vezicule accesorii organitului ce conin molecule rezidente n cisternele golgiene este singura realitate dovedit fr echivoc, n momentul de fa. n rest, controversa rmne actual, dei fiecare model are dovezile, dar i contra-argumentele sale. Astfel, au fost evideniate vezicule de transport (ce conin molecule ce sunt transportate i prelucrate la nivelul organitului) n toat adncimea complexului Golgi, ceea ce reprezint un argument n favoarea modelului tip suveic. Totodat, prin Golgi sunt transportate i agregate moleculare ce depesc diametrul unor asemenea vezicule de transport, ceea ce favorizeaz modelul maturrii cisternelor. Totui, modelul maturrii cisternelor nu poate justifica observaia c molecule ce i ncep aventura golgian n acelai moment, parcurg cisternele cu viteze diferite, ajungnd n reeaua transgolgian defazat. Fr ndoial c eforturile care se fac pentru studierea transportului membranar intracelular, transport care implic aparatul Golgi ntr-un mod semnificativ, vor avea ca rezultat i soluionarea disputei pe marginea celor dou modele: modelul tip suveic, respectiv modelul maturrii cisternelor. Nu putem exclude posibilitatea ca procesele caracteristice celor dou modele s fie utilizate simultan de celul pentru rezolvarea traficului intragolgian de substan. Recent a fost propus un nou model, denumit modelul partiionrii rapide , care presupune separarea (partiionarea) cisternelor golgiene n domenii care concentreaz proteine cargo i domenii care concentreaz proteine structurale. Aceast separare pe domenii este rezultatul existenei unor zone de membran cu compoziie lipidic diferit, n cadrul fiecrei cisterne. Acest model a aprut ca urmare a unor observaii de kinetic proteic, fcute n sisteme celulare n timp real, pe baza crora se stipuleaz c proteina glicozilat poate prsi aparatul Golgi la orice nivel, din oricare cistern. Acest model contravine ns polarizrii biochimice i funcionale ale aparatului Golgi, motiv pentru care este nc contestat. Biogeneza lizosomilor Lizosomii reprezint organitul prin care celula i asigur moleculele fundamentale att pe baza reciclrii acestora din unele componente intracelulare ct i prin preluri de substan din afara celulei. Funcia lor se bazeaz pe bogatul coninut n hidrolaze acide, pe care celula le produce i le direcioneaz corect printr-o colaborare nalt specializat dintre RE i complexul Golgi care implic i un trafic adecvat, selectiv de membran . Acest proces poart denumirea de biogenez lizosomal. El const n biosinteza proteinelor lizosomale (enzime, proteine ale membranei lizosomale) care implic mai nti activitatea RE, apoi pe cea a aparatului Golgi pentru maturarea, sortarea i direcionarea spre lizosomi a bagajului molecular specific. Dou sunt aspectele mai bine cunoscute asupra biogenezei lizosomilor i prezentndu-le pe acestea ne vom face o imagine clar asupra realit ii biologice legate de acest proces: (i) marcarea enzimelor lizosomale i (ii) sortarea, segregarea moleculelor i vezicularea lizosomilor primari. Ambele fenomene se petrec la nivelul aparatului Golgi. Marcarea enzimelor lizosomale presupune formarea unei etichete (manozo6fosfat, prescurtat M6P) i este un proces ce conine cel puin dou etape. n prima etap, care are loc la nivelul reelei cis-Golgi, proteinele care sunt destinate a sfri ca enzime lizosomale i care poart obligatoriu structuri oligozaharidice N-glicozidice sunt complexate de enzima N-acetilglucozaminil-fosfotransferaz. Aceasta modific cel puin una dintre manoze la hidroxilul carbonului 6 prin transferarea unei N-acetil-glucozamine mpreun cu un fosfat, de pe substratul N-acetil-glucozaminil-difosfo-uridin. Se formeaz, n acest fel, un precursor al etichetei finale M6P, care este cpcit cu molecula de N-acetil-glucozamin. Specificitatea interaciunii dintre 7

Dr. Mircea Leabu Aparatul Golgi, curs pentru studen ii n medicin viitoarea enzim lizosomal i N-acetil-glucozaminil-fosfotransferaz este asigurat de un semnal conformaional pe care l structureaz, pe baza mpachetrii asistat i de calnexin n reticulul endoplasmic, toi precursorii de enzime lizosomale. Semnalul conformaional reprezint o sum de segmente din secvena primar a unei proteine, care n structurarea teriar a acesteia se dispun alturi, formnd domeniul de interaciune cu partenerul. Aceste tipuri de semnale sunt afectate, pierzndu- i funcia, atunci cnd structura teriar a proteinei este denaturant. Dup transferul structurii fosfo-glucidice, complexul precursor de enzim lizosomal/N-acetilglucozaminil-fosfotransferaz se disociaz. Unde are loc etapa a doua a formrii etichetei (eliminarea N-acetil-glucozaminei), adic prelucrarea ulterioar a etichetei la forma ei final, ca i prelucrrile pe care enzimele lizosomale le sufer pentru a deveni funcionale sunt aspecte aflate deocamdat n studiu. Cert este ns faptul c n reeaua trans-Golgi capacul de N-acetilglucozamin nu mai mascheaz eticheta M6P, care devine funcional i este folosit n procesele de sortare, segregare i producere a lizosomilor primari. Dovedirea importanei M6P n biogeneza lizosomilor s-a fcut prin folosirea culturilor de celule ce prezentau boala incluziilor celulare (I-cell disease; I de la Inclusions). Aceste celule prezentau un defect structural necunoscut, prin care enzimele n loc s fie direcionate la lizosomi, ajungeau s fie exocitate. Sa constatat c aceste cellule, crescute n mediu suplimentat cu enzime lizosomale din celule normale, i recptau funcia lizosomal. Analizndu-se diferenele din structura chimic a enzimelor din cele dou tipuri de celule (normale, respectiv deficiente) s-a constatat c singura diferen consta n prezena de manoze fosforilate la hidroxilul 6 n enzimele celulelor normale. Sortarea are la baz interaciunea M6P cu un receptor specific transmembranar (receptorul la M6P). Acesta din urm este, la rndul su, folosit pentru segregarea i aglomerarea componentelor lizosomale la nivelul unor structuri cu nveli de clatrin din reeaua trans-Golgi. Acestea evagineaz din structurile trans-golgiene i se desprind, pierzndui instantaneu nveliul de clatrin i devenind ceea ce numim lizosomi primari. Specificitatea activitii clatrinei la acest nivel, prin comparaie cu i pentru difereniere de activitatea sa din procesele de endocitoz mediat de receptori (vezi la Transportul membranar), este dat de tipul de proteine accesorii (adaptine ) implicate: n endocitoza mediat de receptori opereaz adaptinele AP2 (AP de la Adaptor Protein), pe cnd n biogeneza lizosomilor opereaz AP1. n etapa urmtoare lizosomii primari fuzioneaz fie cu endosomi trzii, producnd lizosomi secundari, fie cu lizosomi secundari preexisteni, pentru a le spori bagajul de enzime cu componente proaspete. Biogeneza lizosomilor se sfrete cu procesele de reciclare a componentelor membranare implicate n sortare, segregare, veziculare i transport direcionat al lizosomilor primari. Pentru a ncheia dizertaia referitoare la biogeneza lizosomilor, punctm, odat n plus, faptul c, la nivelul reelei trans-Golgi, enzimele lizosomale se prezint n stare funcional, gata maturate. Acesta este motivul pentru care aici se poate evidenia o reacie citochimic pentru fosfataza acid (o enzim lizosomal). n ciuda faptului c sunt funcionale deja n reeaua transGolgi, enzimele lizosomale nu pot activa aici deoarece pH- ul n lumenul structurii, dei se plaseaz n domeniul acid, este cu cel puin o unitate mai ridicat dect n lizosom. Cooperarea reticul endoplasmic Golgi n biogeneza i traficul intracelular al membranelor Din ce am discutat pn aici, rezult c, n tot ceea ce face, aparatul Golgi este dependent de cooperarea cu RE. Dar aceast cooperare nu are semnificaie funcional numai pentru complexul golgian, ci i pentru reticulul endoplasmic. Aa cum aparatul Golgi nu ar avea ce face dac nu ar primi molecule i macromolecule spre prelucrare de la RE, la fel RE nu i-ar vedea munca finalizat dac nu ar exista n avalul su cisternele golgiene cu aspectele lor structurale i funcionale caracteristice. Pentru a completa imaginea complexitii acestei cooperri RE Golgi, vom aborda cteva aspecte legate de biogeneza i traficul intracelular al membranelor. Aceste aspecte sunt cu att mai importante cu ct vizeaz structuri fr de care celulele nu ar putea exista: biomembranele. 8

Dr. Mircea Leabu Aparatul Golgi, curs pentru studen ii n medicin Biogeneza membranelor este un proces deosebit de complex, care implic mai multe organite. Le amintim doar pe cele care particip pentru tipurile de membrane ale organitelor neautonome: ribosomul, RE i complexul Golgi. Practic biogeneza membranelor presupune: (i) (ii) (iii) (iv) biosinteza componentelor moleculare ale membranelor; asamblarea corect a acestora la nivelul structurii; maturarea structurii la una func ional ; transportul direcionat al noilor membrane la destinaie.

ntruct nu este obligatoriu ca toate aceste procese s se ntmple n succesiunea n care au fost enumerate, ci, de regul, ele se ntreptrund, este de la sine neles c necesit un bine elaborat, controlat i reglat trafic de membrane. Altfel spus, biogeneza i traficul intracelular al membranelor formeaz un sistem integrat de procese eseniale pentru organizarea i funcionarea celulei. Referitor la biosinteza componentelor moleculare ale membranelor avem deja informaii din ceea ce am abordat la RE ca i din ceea ce am prezentat pn acum la aparatul Golgi. La fel stau lucrurile i legat de asamblarea corect a (macro)moleculelor n cadrul structurilor nouformate (vezi detaliile, despre flipaze i cele asupra inserrii proteinelor transmembranare n bistrat, de la Reticulul endoplasmic). Ct privete maturarea structurii la una funcional ea presupune aducerea componentelor ei moleculare n stare funcional prin maturare (vezi prelucrarea (glico)proteinelor la Reticulul endoplasmic ca i (mai sus) prelucrarea sfingolipidelor i (glico)proteinelor n complexul Golgi. Rmne s mai discutm traficul de membrane, n decursul cruia i prin care toate celelalte sunt posibile. n aceast privin, vom aborda mai nti traficul dintre RE i Golgi, dup care traficul dintre reeaua trans-Golgi i locul destinaiei finale a noilor membrane. Traficul RE Golgi Acest trafic implic (vezi detaliile la Reticulul endoplasmic) mai multe procese: Sortarea la nivelul elementelor tranziionale ale RE (cu participarea proteinelor de nveli COP II i proteinei G monomerice Sar1, cu rol reglator); (ii) Traficul ctre aparatul Golgi; (iii) Sortarea la nivelul complexului Golgi (cu participarea proteinelor de nveli COP I i proteinei G monomerice Arf1, pentru reglare); (iv) Returul la RE (reciclarea unor componente). (i) Referitor la acest transport este dovedit n prezent, fr controverse, c respect un mecanism de tip suveic. Dac transportul anterograd nu a fost pus sub ndoial, existena transportului retrograd a fost subiect de disput pn n 1989. n acest an colectivul condus de Jennifer Lippincott-Schwartz (de la NIH, adic National Institute of Health, Bethesda, USA) a raportat observaia c, n celulele tratate cu brefeldin A (un metabolit fungic), complexul Golgi se dezorganizeaz i dispare, iar enzimele sale se regsesc n structuri ale RE, inclusiv n anvelopa nuclear. Prezena enzimelor golgiene n anvelopa nuclear s-a constituit ntr-o dovad indubitabil c celelalte structuri pozitive la reacia citochimic (reacia imunocitochimic pentru manozidaza golgian) aparin tot RE. Rezultatele nu pot fi explicate dect acceptnd c brefeldina A blocheaz specific transportul anterograd i c, drept urmare, aparatul Golgi se vars n RE datorit unui transport retrograd, de la Golgi ctre RE, care nu este blocat de brefeldina A. Dei transportul RE Golgi n ambele direcii este acum indiscutabil, mecanismele prin care acesta se face, ntr-una sau cealalt direcie, sunt departe de a fi elucidate. Cert este c el implic : (i) (ii) (iii) structurile intermediare ERGIC/VTC; proteine de nveli diferite; regulatori (proteine G monomerice) specifici direc iei. 9

Dr. Mircea Leabu Aparatul Golgi, curs pentru studen ii n medicin Transportul RE Golgi implic, de asemenea, sortri pe baz de motive de aminoacizi (grupe de doi, trei aminoacizi; vezi la Reticulul endoplasmic) i proteine motoare specifice microtubulilor (dezorganizarea microtubulilor afecteaz traficul). Traficul membranar discutat mai sus rezolv aspectele legate de biogeneza membranelor golgiene i iniiaz aspectele legate de biogeneza celorlalte tipuri de membrane destinate sistemului endosomal i membranei celulare. Ce se ntmpl mai departe pentru aceste din urm membrane punctm mai jos. Traficul re ea trans-Golgi loca ie final 1. Traficul trans-Golgi lizosom, ne este deja familiar. Amintim c el presupune sortri prin M6P, segregri prin receptorii la M6P, AP3 i clatrin i transport direcionat prin proteine transmembranare (vezi mai jos la Direcionarea transportului intermembranar). 2. Traficul trans-Golgi membran celular implic o discuie mai nuanat. Vom aborda mai nti traficul trans-Golgi membran celular n celulele polarizate, cu cele dou componente ale sale: (i) (ii) traficul trans-Golgi membran apical; traficul trans-Golgi membran latero-bazal.

Traficul trans-Golgi membran apical se caracterizeaz prin urmtoarele aspecte: Mecanismele sortrii nu sunt pe deplin elucidate, dar exist rapoarte care propun fenomene ce implic ectodomeniile proteinelor i chiar interaciuni de tip lectinic, ce presupun participarea structurilor glucidice ale glicoproteinelor, sau glicolipidelor de pe faa luminal a organitului. Pe de alt parte, este propus participarea structurilor de tip plut lipidic (lipid raft), care sunt descrise preferenial pentru domeniile apicale ale membranei. Transportul elementelor rezultate prin sortare implic un mecanism cooperativ, care folosete iniial ruta microtubulilor, apoi ruta filamentelor de actin. Asemenea mecanisme au fost dovedite n 1993, ntr-un articol publicat de K.R. Fath i D.R. Burgess n The Journal of Cell Biology. Mecanismele au fost descrise pentru enterocite (celule intestinale absorbante) i ele exploateaz organizarea specific a citoscheletului n aceste celule. n enterocite microtubulii ce trec pe lng cisternele golgiene sunt orientai cu captul (-) ctre membrana apical, strbtnd parial estura de filamente de actin ce formeaz trama terminal i terminndu-se n proximitatea filamentelor de actin ce structureaz axul citoscheletal al microvililor. Folosind aceast structurare i orientare, microveziculele ce transport componente nou sintetizate ale membranei apicale folosesc iniial proteine motoare din familia dyneine lor, pentru a se deplasa ctre captul (-) al microtubulilor. Cnd ajung la filamentele de actin ce strbat axul microvililor, trec la folosirea unei alte proteine motor, miozina I, cu ajutorul careia se deplaseaz de-a lungul acestor filamente. Ajungnd la nivelul membranei apicale de la baza microvililor, membrana veziculelor fuzioneaz cu membrana celular, mrindu-i suprafaa. Mecanismul descris concord cu rezultate experimentale raportate de alte colective, n care celule epiteliale intestinale au fost incubate cu nocodazol, sau colchicin, substane care depolimerizeaz tubulina dezorganiznd microtubulii. Dup acest tratament, eficiena transportului ctre membrana apical se reduce cu ~50%, iar veziculele care pot ajunge aleatoriu la filamentele de actin ale tramei terminale, sunt direcionate la membrana lateral, ctre care aceste filamente sunt orientate, conducnd la apariia nefireasc de microvili la acest nivel. Traficul trans-Golgi membran latero-bazal presupune sortri prin motive de aminoacizi din endodomeniile proteinelor transmembranare. Transportul se face tot pe calea microtubulilor, ns ctre captul (+), prin folosirea kinezine lor (alte proteine motor specifice pentru microtubuli). Este astfel folosit orientarea diferit a microtubulilor, cu captul (+) ctre membrana latero-bazal. O meniune care trebuie fcut este referitoare la reglarea acestui trafic. Ei bine, reglarea mecanismelor de selecie, sortare i veziculare n sisteme diferite de transport se face prin proteine G monomerice. Diversitatea acestora (probabil c nc nu cunoatem toate entitile moleculare din aceast super-familie de proteine) asigur o bun reglare a situaiilor pe care 10

Dr. Mircea Leabu Aparatul Golgi, curs pentru studen ii n medicin celula le are de rezolvat. Fr ndoial, controlul i reglarea acestor mecanisme de sortare i transport se vor dovedi mult mai complexe, pe masur ce cunoaterea noastr asupra fenomenelor se va detalia. Direc ionarea transportului intermembranar Specificitatea de direcionare a traficului membranar este asigurat de diversitatea proteinelor din familia denumit prescurtat SNARE (vezi la Reticulul endoplasmic, seciunea Sortarea i transportul ctre aparatul Golgi). Pentru fiecare membran int exist o pereche specific v-SNARE/t-SNARE. Specificitatea acestei perechi asigur transportul corect ctre membrana acceptoare. mperecherea corect atrage declanarea mecanismelor de fuziune a membranelor. Procesul implic o serie de proteine accesorii care structureaz o mainrie de fuziune, ce este activat dup legarea v-SNARE la t-SNARE. Se consider c specificitatea interaciunii dintre partenerii coreci ai perechii vSNARE/t-SNARE mpiedic fuzionrile dintre vezicule i alte membrane la care pot ajunge accidental. Acest punct de vedere pare totui a fi contrazis, cel puin n cazul experimentelor amintite mai sus pentru transportul membranei apicale n enterocite. Acolo se dovedete c mecanismul nu exceleaz n privina specificitii; altfel nu s-ar putea forma microvili la nivelul membranei laterale. Exist totui explicaii, dar validitatea lor trebuie dovedit experimental. O prim explicaie o poate constitui faptul c afectarea transportului direcionat ctre membrana apical, poate induce apariia de t-SNARE specifice membranei apicale, n membrana laterobazal. Nu putem ns exclude nici posibilitatea existenei unor aspecte de detaliu ale mecanismului direcionrii, care deocamdat ne scap i care este posibil s nuaneze situaiile. Abordarea experimental a rolului complexului Golgi n traficul intracelular al membranelor prin folosirea proteinelor himerice ob inute prin cuplarea proteinelor golgiene rezidente cu protein fluorescent verde (GFP, de la Green Fluorescent Protein) ar putea s aduc n viitor informaii detaliate asupra mecanismelor. GFP a fost extras dintr-o meduz. Proteinele himerice se obin modificnd genele corespunztoare celor dou proteine (proteina de studiat, respectiv GFP) prin cuplarea lor, pentru a obine o nou gen corespunztoare unei proteine himerice. Cuplarea se poate face pentru adugarea polipeptidei fluorescente fie la captul amino-terminal al proteinei de interes, fie la cel carboxi-terminal, astfel nct himera s pstreze funcia i distribuia intracelular ale proteinei studiate. Exprimarea proteinei himerice n celule se face dup transfecie . Transfecia este un procedeu prin care gena modificat, nglobat ntr-o plasmid, este introdus n celula care se supune studiului. Adesea materialul genetic este inserat n genom i se exprim, ducnd la obinerea de proteine cu funcie cunoscut marcate fluorescent. Asemenea studii au fost deja realizate, pentru studiul mobilitii proteinelor la nivelul membranelor cisternelor golgiene, ca si pentru studiul structurilor implicate n transportul RE-Golgi, respectiv Golgi-membran celular. O dezvoltare interesant o reprezint o reuit recent a colectivului condus de J. Lippincott-Schwartz. Acesta a reuit s obin mutante ale GFP, care devin fluorescente numai dup foto-activare. Aceast reuit va uura urmrirea proteinei himerice fluorescente, fr a mai fi pericolul ca celula s se suprancarce cu fluorescen prin producerea continu a himerei i fr s mai necesite inhibitori ai sintezei proteice. Viitorul n studiul aparatului Golgi rmne interesant i pare a deveni mai de succes. Ciclul secretor celular (calea secretorie celular) Celulele organismului produc alturi de (macro)molecule necesare folosinei interne i unele a cror destinaie este aceea de a fi secretate (exocitate). Aceast proprietate a celulelor, de a secreta componente biosintetizate, se poate manifesta permanent, sau periodic i implic, binen eles, un trafic membranar. Ciclul secretor se definete ca o succesiune de fenomene prin care se realizeaz : (i) biosinteza moleculelor/macromoleculor de secreie; (ii) prelucrarea (maturarea), sortarea, vezicularea vacuolelor de secreie; 11 i condensarea veziculelor/

Dr. Mircea Leabu Aparatul Golgi, curs pentru studen ii n medicin (iii) secreia propriu-zis, care poate fi constitutiv, sau semnalizat (stimulat). Aspectele legate de primele dou etape din calea secretorie ne sunt familiare din tot ce am discutat la reticulul endoplasmic i la aparatul Golgi, pn acum. La acestea trebuie adugat c n multe cazuri maturarea presupune proteoliza unor pro- sau pre-pro-componente. De exemplu, n cazul insulinei, maturarea presupune eliminare mai multor fragmente din lanul polipeptidic iniial, unic. Pre-pro-insulina nseamn lanul ce conine peptida semnal necesar translocrii prin membrane RE. Pro-insulina reprezint lanul proteic fr peptida semnal, eliminat de semnal-peptidaz. Aadar, pre-pro-insulina ar fi preursorul inserat n membrana RE (care, de regul, nu exist ca atare, deoarece funcia semnal-peptidazei se manifest ca fenomen co-traducere), iar pro-insulina (form cu existen real) este protein solubil, liber n lumenul RE, respectiv n lumenul cisternelor golgiene. Insulina matur se produce n granula de secreie prin eliminarea proteolitic a unei secvene din centrul lanului polipeptidic, astfel nct cele dou subunit i ale moleculei de insulin rmn solidarizate, dar prin dou puni disulfurice. Adesea, coninutul vacuolelor de secreie sufer un proces de condensare, ce const n eliminarea apei din lumen ctre citosol. Ceea ce este necesar s mai adugm, pentru o mai bun stpnire a proceselor celulare legate de secreie, vizeaz etapa secreiei propriu-zise. n ceea ce privete fenomenele de direcionare a veziculelor/vacuolelor de secreie ctre membran se consider c respect principiile deja prezentate. Calea de secre ie constitutiv opereaz n toate tipurile de celule. Se consider c ea se petrece concomitent cu traficul noilor suprafee de membran necesare a nlocui componente devenite nefuncionale, sau a satisface nevoile de cretere a suprafeei de membran din anumite fenomene de organizare/reorganizare a esuturilor ce nsoesc situaii fiziologice sau patologice. Aceste fenomene necesit i organizri/reorganizri ale spaiilor extracelulare, astfel nct este necesar secreia de componente ale matricei extracelulare, cel puin. Fenomenele par a se desfura de la sine prin transport i fuziuni constitutive de membrane, dei n momentul de fa se acumuleaz date ce indic faptul c n situaiile patologice, fenomenele care n situaii normale corespund secreiei constitutive, necesit amplificri care par a fi rezultatul unor fenomene de semnalizare n care capacitatea integrinelor de a semnaliza bidirecional (dinspre exterior ctre celul, respectiv dinspre celul ctre matricea extracelular) intervine activ. Aadar, trebuie s fim circumspeci i s evitm tentaia de a ncerca trasarea de granie ferme ntre cele dou ci de secreie. Calea de secre ie semnalizat este, de regul, specific celulelor specializate n secreie (spre exemplu celule galandulare). Ea presupune exocitarea componentelor accumulate n vezicule/vacuole de secreie, pe care celulele le stocheaz, pn la primirea unui semnal (stimul). Acest stimul ntiineaz c organismul are nevoie de substanele stocate n vederea secreiei ulterioare. Molecula mesager se leag de un receptor specific din membrana celulei secretoare i declanaz mecanisme de semnalizare, al cror efect este inducerea fuziunii membranei veziculelor/vacuolelor de secreie cu membrana celular i exocitarea coninutului. n multe cazuri, fuziunea semnalizat a membranelor se datoreaz creterii concentraiei de Ca2+ n citosol. De menionat c, n unele situaii, completa maturare a moleculelor secretate se petrece exact n momentul exocitozei. Acesta este, de exemplu, cazul colagenului tip I a c rui maturare final nseamn eliminarea, prin proteoliz, a unor fragmente din capetele pro-proteinei, eliminare care permite fibrilarea moleculei. Dac maturarea s-ar produce n celul, colagenul ar forma fibre n structurile intracelulare, afectnd funcionarea acesteia i inducnd situaii patologice. n concluzie, ciclul secretor (numit mai frecvent cale secretorie) implic att cooperarea dintre RE (la nivelul cruia se sintetizeaz componentele moleculare destinate exportului) i aparatul Golgi (rspunztor, de regul, de finalizarea maturrii moleculelor de secretat, de sortarea, condensarea i formarea vacuolelor de secreie), ct i traficul membranar aferent acestor procese. 12

Dr. Mircea Leabu Aparatul Golgi, curs pentru studen ii n medicin O remarc merit fcut asupra termenului de ciclu secretor, sau cale secretorie. Dac ar fi s considerm c noiunea de ciclu implic reciclri ale unor componente, atunci mai corect ar fi, n momentul de fa, termenul de cale secretorie. Aceasta deoarece nu exist dovezi asupra reciclrii unor componente implicate n mecanismele celulare ce realizeaz procesul. Mai mult, pentru secreia constitutiv exist dovezi c dinamica procesului implic ajungerea veziculelor n imediata apropiere a membranei, unde, dup o ateptare de 15-30 secunde, fuzioneaz rapid, iar componentele membranei veziculare se mprtie aproape instantaneu n planul membranei. (Asemenea dovezi experimentale au fost ob inute prin folosirea himerelor proteice fluorescente, despre care am amintit mai sus.) Asta nseamn c dac ar fi vorba de fenomene de reciclare, acestea ar trebui s se produc n alte circumstane, ca nsoind alte procese celulare. C t privete secreia semnalizat, nu avem, deocamdat, nici un fel de date referitoare la ce se ntmpl cu membranele implicate n proces. n sfrit, merit s evideniem aici c pionierul desluirii cii secretorii este G.E. Palade, care prin tehnici de autoradiografie, adaptate microscopiei electronice, a artat c aminoacizii tritiai se regsesc la nivelul reticulului endoplasmic imediat dup administrarea lor celulelor pancreatice acinare, apar la nivelul aparatului Golgi, 20 de minute mai trziu i marcheaz vacuolele secretorii, sau materiale exocitate, dup 90 de minute de la administrare. Consideraii finale Putem rezuma n finalul prezentrii datelor eseniale cunoscute asupra complexului Golgi c: - este singurul organit care a captivat permanent comunitatea cercettorilor; mai nti prin suspiciune, apoi prin complexitate structural i funcional; - se prezint ca o stiv de cisterne recurbate, cu polaritate morfologic , dar i biochimic; - primete materialul asupra cruia opereaz de la RE i funcioneaz ca o plac turnant pentru maturarea, sortarea i direcionarea componentelor lizosomale, membranare, sau de export ctre destinaie; - n tot ceea ce face este implicat un trafic intracelular permanent de membrane, pe care l controleaz i regleaz prin mecanisme care sunt departe de a fi pe deplin elucidate; - este un organit intens studiat n momentul de fa, pe celule vii, folosindu-se proteine himerice fluorescente, exprimate dup transfec ii cu gene inserate n plasmide. Este de ateptat ca viitorul apropiat s aduc noi date legate de acest organit cu implicaii semnificative asupra cunoaterii i nelegerii unor procese celulare eseniale n descrierea celulei normale i n stabilirea limitelor de la care se poate defini patologia celular. Se va putea astfel trece de la definirea patologicului prin simptomatologie clinic , la definirea sa pe baza deviaiilor subtile de la ceea ce reprezint normalul la nivel celular i molecular. Bibliografie
Fraquhar MG, Palade GE. (1998) The Golgi apparatus: 100 years of progress and controversy. Trends Cell Biol . 8, 2-10. Leabu M. (2006) Membrane fusion in cells: Molecular machinery and mechanisms. J Cell Mol Med . 10 , 423-427. Glick BS . (2000) Organization of the Golgi apparatus. Curr Opin Cell Biol . 12 , 450-456. Lippincott-Schwartz J, Roberts TH, Hirschberg K. (2000) Secretory protein trafficking and organelle dynamics in living cells. Annu Rev Cell Dev Biol . 16 , 557-589. Bonifacio JS, Glick BS . (2004) The mechanism of vesicle budding and fusion. Cell . 116 , 153-166. Fath KR, Burgess DR. (1993) Golgi-derived vesicles from developing epithelial cells bind actin filaments and possess myosin-I as a cytoplasmically oriented peripheral membrane protein. J Cell Biol . 120 , 117-127. Allan VJ, Thompson HM, McNiven MA. (2002) Motoring around the Golgi. Nature Cell Biol . 4 , E236-E242.

13

Dr. Mircea Leabu Aparatul Golgi, curs pentru studen ii n medicin

Palade G. (1975) Intracellular aspects of the proces of protein synthesis. Science. 189, 347-358. Nakano A. and Luini A (2010) Passage through the Golgi Curt Opin in Cell Biol. 2010, 22:471 478 Nakamura N, Wei JH and Joachim Seemann J (2012) Modular organization of the mammalian Golgi apparatus . Cell. Jun 13;133(6):1055-67. doi: 10.1016/j.cell.2008.04.044. . Patterson GH, Hirschberg K, Polishchuk RS, Gerlich D, Phair RD, Lippincott-Schwartz J . (2008) Transport through the Golgi apparatus by rapid partitioning within a two -phase membrane system. Curr. Opin Cell Biol 24 :467 474

14