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UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA

FACULTAD DE AGRONOMA
Departamento Acadmico de Ciencias Agrarias

INFORME DE PRCTICAS PRE PROFESIONALES CRECIMIENTO MICELIAL DE BEAUVERIA BASSIANA Y METARHIZIUM ANISOPLIAE EN SEIS MEDIOS DE CULTIVO Y SU PRODUCCIN EN CINCO TIPOS DE SUSTRATOS.

EJECUTOR

WILMA GONZALES TOSCANO

ASESOR

Ing. Msc. GIANNFRANCO EGOAVIL JUMP

LUGAR

LABORATORIO DE ENTOMOPATGENOS UNAS.

DURACIN

3 MESES

INICIO

20 DE AGOSTO DEL 2012

TERMINO

20 DE NOVIEMBRE DEL 2012 TINGO MARA PER

NDICE I. II. A. B. C. D. E. INTRODUCCIN .................................................................................... 3 REVISIN LITERARIA ........................................................................... 4 BEAUVERIA BASSIANA ............................................................................... 4 METARHIZIUM ANISOPLIAE.......................................................................... 8 MEDIOS DE CULTIVOS .............................................................................. 11 PRODUCCIN DE BEAUVERIA BASSIANA Y METARHIZIUM ANISOPLIAE .......... 20 VALOR NUTRICIONAL DE ALGUNOS POSIBLES SUSTRATOS PARA LA
PRODUCCIN DE BEAUVERIA BASSIANA Y METARHIZIUM ANISOPLIAE

.......... 24

III. A. B. IV. A. B. C. D. E.

MATERIALES Y MTODOS ................................................................ 30 LUGAR DE EJECUCIN. ............................................................................ 30 F ASES

DEL DESARROLLO DE LA PRCTICAS PREPROFESIONALES ........ 30

RESULTADOS Y DISCUSIN ............................................................. 48 CRECIMIENTO MICELIAL DE B. BASSIANA EN SEIS MEDIOS DE CULTIVOS ....... 48 CRECIMIENTO MICELIAL DE M. ANISOPLIAE EN SEIS MEDIOS DE CULTIVOS .... 54 CONTEO DE CONIDIAS DE B. BASSIANA EN SEIS MEDIOS DE CULTIVOS .......... 61 CONTEO DE CONIDIAS DE M. ANISOPLIAE EN SEIS MEDIOS DE CULTIVOS ....... 68 CONTEO DE CONIDIAS DE B. BASSIANA Y M. ANISOPLIAE EN CINCO SUSTRATOS
DIFERENTES ............................................................................................ 76

V. VI. VII. VIII.

CONCLUSIN ...................................................................................... 84 RECOMENDACIN .............................................................................. 85 BIBLIOGRAFA .................................................................................... 86 ANEXO ................................................................................................. 90

I.

INTRODUCCIN

Beauveria bassiana y Metarhizium anisopliae son hongos que crece de forma natural en los suelos de todo el mundo.La aplicacin de mtodos biolgicos para el control de insectos con el hongo Beauveria bassiana y Metarhizium anisopliae constituye en uno de los enemigos naturales ms importantes de las plagas, especialmente del orden coleptera.

Su poder entomopatgeno le hace capaz de parasitar a insectos de diferentes especies, respectivamente, en especial es del orden coleptera y homptera biolgico o

actualmente

utilizado

como insecticida

biopesticida controlando un gran nmero de plagas como la broca del caf, el gorgojo negro del pltano, etc. Por ello es que se ha planteado en el presente trabajo realizar el estudio sobre el crecimiento micelial de Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae en diferentes medios de cultivo y su produccin en diferentes sustratos.

Objetivos: Determinar el crecimiento micelial de 2 cepas de Beauveria bassiana y 2 cepas de Metarhizium anisopliae en seis medios de cultivo. Produccin Beauveria bassiana y Metarhizium anisopliae en cinco tipos de sustratos

II.

REVISIN LITERARIA

A.

Beauveria bassiana Los primeros datos sobre B. bassiana fueron emitidos por Agostino Bassi en

1834 cuando demostr que este hongo era el agente causal de una enfermedad en el gusano de seda Bombix mori, conocida como la muscardina blanca. B. bassiana se conoce muy bien por su amplio rango de hospederos y distribucin geogrfica, ha sido probada por su patogenicidad contra ms insectos plagas que cualquiera otra especie de hongo (CARBALLO et al., 2004). Se encuentra distribuido por todo el mundo, de forma saproftica y parastica atacando mayormente insectos del orden coleptero y lepidptero (COMMONWEELTH MICOLOGICAL INSTITUTE, 1979).

1. Taxonoma y origen Segn BARNET y HUNTER (1999), clasifica taxonmicamente a Beauveria bassiana de la siguiente manera: Divisin Clase forma Orden forma Familia Gnero Especie : Deuteromycota. : Deuteromycete. : Moniliales : Moniliaceae. : Beauveria : Bassiana

Segn WAINWRIGHT (1995), citado por ESTRADA et al. (1997), seala que B. bassiana es uno de los entomopatgenos ms estudiados. COMMONWEELTH MICOLOGICAL INSTITUTE (1979), indica que el hongo B. bassiana, se encuentra distribuido por todo el mundo, en forma saproftica y parastica atacando mayormente insectos de orden coleptero y lepidptero. ROSSKAMP (1997) y GUARAY (1997), mencionan que constituye en uno de los enemigos naturales ms importantes de la broca. Adems, Deacon (1983), citado por VELEZ et al. Indica que existe un control biolgico, bastante significativo realizado por hongos entomopatgenos ocurre en forma primaria a travs de la cutcula.

2. Distribucin en el Per La distribucin de este hongo en el Per se report por primera vez en Huancayo en el que se encontraba gorgojos en estado de larva, pupa y adultos de la especie Premnotrypes suturicallus (Kuschell), infectados con el hongo Beauveria bassiana de en condiciones naturales. para comprobar la patogenicidad del hongo del genero Beauveria se realizaron trabajos en

laboratorio en invernadero utilizando insectos de la especie Premnotrypes suturicallus (Kuschell) y Epitryx sp. Se report en Huatata Chinchero (Urubamba) se encontr larvas, pupas y adultos del gorgojo de los andes Premnotrypes latithorax Piercei, infectados en forma natural por el hongo Beauveria sp (PLANTAS Y ENTOMOPATOGENOS, 2009).

En el Per actualmente se encuentran reportadas dos especies del gnero Beauveria los cuales estn ampliamente distribuidos tanto en costa sierra y selva; la especie Beauveria brongniartii (Saccardo) Petch se encuentra en la sierra en los departamentos de Puno, Huancayo, Cajamarca y Cuzco, otra especie del mismo gnero: Beauveria bassiana (Bals) Vuillemin se encuentra distribuida en la selva alta (San Ramn Junn) y en la costa (PLANTAS Y ENTOMOPATOGENOS, 2009).

3. Ciclo biolgico de Beauveria bassiana El ciclo de vida de B. bassiana (Figura 1) comprende dos fases una patognica y la otra saproftica. La fase patognica involucra cuatro pasos principales: adhesin, germinacin diferenciacin y penetracin. El proceso de infeccin se inicia con la unin de las conidias del hongo a la cutcula del insecto. Existen sitios preferenciales del tegumento del insecto hospedante donde los conidios se adhieren, germinan y penetran. Estos lugares corresponden a las regiones intersegmentales diferente al resto del tegumento (CARBALLO et al., 1988).

Las conidias ptimas para l la germinacin son: temperatura de 23 25C y humedad del 92%. El conidio germina originando un tubo germinativo en cuyo extremo de diferencia un apresorio cuya funcin podra ser debilitar la cutcula en los puntos de contacto o simplemente es una transicin hacia la formacin del pico o estaquilla de penetracin (CARBALLO et al., 1988). B. bassiana penetra la cutcula principalmente por las partes frgiles de los insectos originando dos procesos: uno fsico debido a la presin de las hifas que rompen reas membranosas y poco esclerotizadas; y otro qumico, por la elaboracin de enzimas producidas durante la germinacin y penetracin como son quitinasas, proteasa y lipasas que degradan la cutcula. La muerte del insecto ocurre por accin de mico toxinas, el rompimiento de tejidos bloqueo mecnico del aparato digestivo y otros daos fsicos por desarrollo del micelio (CARBALLO et al., 2004).

Figura 1. Ciclo de vida de Beauveria bassiana (CARBALLO et al., 2004)

Previo a la penetracin del hongo, hay una actividad metablica a nivel de apresorio que ayuda a degradar la capa cerosa de epicutcula probablemente con enzimas proteasas, amilopeptinas y esterasas que facilitan el proceso de penetracin, primero sobre la porcin cerosa de la epicutcula y luego sobre la matriz de protena y quitina. Otra va de entrada es a travs del tracto digestivo pero generalmente los

conidios no pueden germinar en el intestino. Adems la multiplicacin del hongo en el interior del hospedero conduce a la produccin de hifas y blastosporas y la produccin de toxinas que en conjunto van a provocar la enfermedad y la muerte del insecto esta ocurre con la accin fsica del micelio mismo invadiendo los rganos y tejidos comenzando por el tejido graso y tambin por la cada o desbalance de nutrientes y por la accin insecticida de los metabolitos txicos emitidos por el hongo, principalmente la beauvericine. Los cadveres de insectos infectados por B. bassiana, presentan una cubierta blanca muy densa formada por el micelio y esporulacin del hongo. Generalmente, los cadveres de insecto atacados se momifican quedando adheridas en la planta principalmente en el envs de la hoja (CARBALLO et al., 1988).

4. Caractersticas morfolgica Este hongo presenta unas estructuras que son visibles al microscopio llamadas fialidas o clulas conidigenas que tienen una base globosa o sea en forma de botella y se extienden apicalmente en grupos densos. Estas fialidas presentan un raquis que es denticulado en zig-zag y se extiende apicalmente con un conidio denticulado (CARBALLO et al., 1988).

El conidiforo mide de 1-2 de dimetro donde nacen clulas conidigenas en grupos grandes (CAEDO y AMES, 2004). La conidia es aceptado, globoso y menor a 3.5 mm para B. bassiana (CARBALLO et al., 1988). Adems CAEDO y AMES (2004), indican que estas conidias son hialinas, globosas a subglobosas, de 2 a 3 x 2 a 2.3 que se insertan sucesivamente en el raquis en forma opuesta.

Las Clulas conidigenas (c.cs.) , estn agrupadas formando grupos compactos grandes y a veces solitarias, en forma de botellitas de 3 a 6 x 3 a 5 . En ciertos casos, las c.cs. Se ramifican formando c.cs secundarias. Al final de las c.cs se forma un raquis que sostiene las conidias. El raquis mide: hasta de 20 de longitud y 1 de dimetro, denticulado, que sostiene una conidia en cada dentcula (CAEDO y AMES, 2004).

El micelio es de color blanco y los conidios presentan una coloracin blanca a crema (CARBALLO et al., 1988). En medio Agar Papa Dextrosa, la colonia a los 14 das es algodonosa a polvorienta, blanca. A medida que va pasando el tiempo se vuelve amarillento, cremoso. El revs es de color rojizo al centro y amarillento alrededor (CAEDO y AMES, 2004). 5. Importancia a. Agricultura B. bassiana. se encuentra afectando a una serie de insectos. Este hongo desarrollado en medio de cultivo bajo condiciones de laboratorio, siendo factible de multiplicarlo en forma masiva utilizando como sustrato una de serie de granos, como arroz, cebada, trigo, maz partido, etc (GOMEZ et al., 2002). Las colonias que desarrollan en medios de cultivos, presentan un aspecto aterciopelado o pulverulento, de color blanco, tomndose amarrillo plido a medida que la colonia envejece, lo cual se observa en el reverso de la placa de cultivo. La fructificacin est constituida por clulas conidiogenas que forman conidias sucesivas en un raquis que se desarrolla en forma de zig-zag. Esta fructificacin ocurre como synema o conjunto de clulas conidiogenes unidas (B.bassiana) (GOMEZ et al., 2002). B. Metarhizium anisopliae 1. Taxonoma Segn BARNETT & HUNTER (1999), clasifican a M. anisopliae de la siguiente forma: Divisin Clase Orden Familia Gnero Especie : Deuteromycota. : Deuteromycete. : Moniliales : Moniliaceae : Metarhizium : anisopliae

2. Origen y distribucin Metarhizium anisopliae es el agente causal de la muscardina verde y es un patgeno de ms de 300 especies de siete rdenes de insectos. Los Colepteros son los hospederos ms comunes (CARBALLO et al., 2004).

3. Ciclo biolgico de Metarhizium anisopliae El ciclo de vida de M. anisopliae comprende una fase patognica que se inicia con la unin de los conidios del hongo a las partes frgiles de la cutcula del insecto. Si las condiciones de humedad son adecuadas, ocurre la germinacin de los conidios originando un tubo germinativo y luego se forma la estaquilla de penetracin para penetrar la cutcula. Antes de que ocurra la muerte del insecto proliferan cuerpos hifales. La muerte del insecto marca el fi n de la fase patognica y el micelio empieza a crecer saprofticamente dentro del hemocele invadiendo todos los tejidos. La muerte del hospedante ocurre tanto por el efecto mecnico del hongo como por el efecto de los metabolitos txicos producidos. Despus de la muerte, ocurre una fase de crecimiento micelial hacia el exterior que concluye con la produccin de nuevas unidades reproductivas (conidios) sobre la superficie y rodeando el cadver del insecto (CARBALLO et al., 2004).

4. Modo de accin Despus de germinar, el hongo penetra al insecto por las regiones frgiles de la cutcula mediante la accin fsica propia del hongo a travs de las estructuras formadas despus de la germinacin como son los apresorios y la estaquilla de penetracin y tambin mediante la accin qumica gracias a la participacin de enzimas como proteasas, lipasas y quitinasas que degradan la cutcula (CARBALLO et al., 2004).

Adems de la accin fsica del micelio producido por la multiplicacin del hongo en el interior del cuerpo del insecto que invade los rganos y tejidos, es muy importante la participacin de las destruxinas que tienen una accin insecticida propia. El hospedero produce reacciones de defensa celular por

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ejemplo granulomas que son tejidos formados para rodear el micelio. Las toxinas producidas por el hongo erosionan estos granulomas y permiten a las blastosporas invadir el hemocele. Las toxinas tambin matan al hospedero al provocar una degradacin progresiva de sus tejidos debido a la prdida de integridad estructural de las membranas y la consecuente deshidratacin de las clulas por prdida de fluidos (CARBALLO et al., 2004).

M. anisopliae produce varias toxinas entre ellas los ciclodepsipeptideos como las dextruxinas A, B, C, D y la desmetildextruxina B y otras como la A1, A2, B1, C2, D1, D2, y E1. Son compuestos txicos para los insectos por inyeccin intrahemoclica y su efecto txico vara con la especie de insecto. Otros compuestos son las cytochalasinas que pueden contribuir al desarrollo de la enfermedad en insectos afectados por Metarhizium (CARBALLO et al., 2004).

Los insectos enfermos presentan cambios de conducta, entre ellos cese de la alimentacin, perdida de coordinacin, movilizacin a partes altas de la planta en que se encuentran o movilizacin hacia la superficie del suelo en caso de insectos del suelo y sntomas como cambio de coloracin del tegumento o manchas en la piel. Despus de morir, permanecen como cadveres presentando los signos caractersticos como son crecimiento del hongo en las zonas inter segmentales del insecto y una coloracin verde por efecto de las esporulacin (CARBALLO et al., 2004).

5. Caractersticas morfolgica Visto al microscopio, M. anisopliae presenta clulas conidigenas (filidas) de forma cilndrica, con pices redondeados o cnicos y estn arreglados en densos himenios. Los conidiforos son ramificados

repetidamente formando una estructura semejante a un candelabro. Los conidios son septados, cilndricos u ovoides, formando cadenas usualmente arregladas en columnas prismticas o cilndricas o en masas slidas de

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cadenas paralelas. Su color vara entre el verde plido o brillante a verde amarillo u olivceo. M. anisopliae var. anisopliae presenta conidios cortos de 3.5 a 9 m mientras que M. anisopliae var. Mejorada presenta conidios de 9 a 18 m. Los cadveres de los insectos afectados, se observan completamente cubiertos con micelio del hongo de color blanco. Cuando el hongo esporula sobre el cadver, adquiere una coloracin verdosa (CARBALLO et al., 2004).

6. Importancia a. Agricultura Es el segundo hongo entomopatgeno ms ampliamente usado en el control microbial y es el hongo ms utilizado en Latinoamrica para el control de diferentes especies de Cercpidos que son plagas en la caa de azcar (CARBALLO et al., 2004).

C.

Medios de cultivos Las sustancias nutritivas preparadas en el laboratorio para el crecimiento de

microorganismos se conocen como medio de cultivo. Algunoshongos y bacterias pueden crecer satisfactoriamente en casi cualquier medio de cultivo, otras necesitan medios especiales y an hay algunas que no pueden crecer en ninguno de los medios inertes desarrollados hasta ahora. Los microbios que crecen y se multiplican dentro o sobre un medio de cultivo constituyen lo que se denomina cultivo microbiana (TORTEZA et al., 1993).

Hay una gran variedad de medios disponibles para el cultivo en laboratorio de los microorganismos. La mayora de ellos, que estn disponibles comercialmente, tienen sus componentes previamente mezclados y necesitan slo la adicin de agua y la esterilizacin. Para los medios utilizados en el aislamiento e identificacin de las bacterias que son de inters para los investigadores en reas como alimentacin, aguas y microbiologa clnica, hay constantes revisiones de las antiguas frmulas e introduccin de otras nuevas (TORTEZA et al., 1993).

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1. Tipos demedios de cultivo

Segn TUITE (1969), clasifica a los medios de cultivos de la siguiente manera:

a. Segn su consistencia i. Liquido.- No se adiciona ningn elemento solidificante. Se utiliza

principalmente en el incremento de bacterias, en las determinaciones de sus propiedades fisiolgicas, para el incremento masivo de bacterias y hongos con fines experimentales (generalmente bajo agitacin) y para el estudio de crecimiento de microorganismos. Ejemplo: Caldo nutritivo (Bacterias), caldo papa (Hongos), melaza de caa de azcar (Trichoderma spp.), etc.

ii. Slido: Lleva compuestos solidificantes que endurecen el medio de cultivo como el agar gelatina, gelatina inorgnica. El uso principal es para el aislamiento de hongos y bacterias Ejemplo: Agar nutritivo (Bacterias), Agar Papa Dextrosa (para cualquier fitopatgeno). Malta Agar (Basidiomycetos) Oat Meal Agar(Phytophthora palmivora), etc.

b. Por sus propiedades nutritivas i. Carentes de nutricin Agua: Se utiliza agua desionizada estril, usado para la

conservacin de bacterias en el estado latente e inmutable o estado de conservacin de Fusarium spp. (clamidosporas). Agar agua: Para el estudio de determinado compuestos y ver el

efecto de ciertos compuestos (nutricionales). Nitrgeno lquido: Mantiene en estado congelado al hongo o

bacterias a temperaturas de 190C.

ii. Medio nutritivo Natural: Consiste nicamente de material vegetal. Ejemplo:

Tejido vegetal asptico (hojas y ptalos de clavel), tejido vegetal esterilizado (granos de cereales), tejido vegetal macerado (pastas y jugo de papaya).

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Semisinteticos o complejos: Contiene sustancias naturales y

sintticas o definidas. Ejemplo: Extracto de carne (Medio Extracto de Carne, Gelatina), extracto vegetales (Medio Caldo Papa, Gelatina), preparados vegetales como los medio: Oat Meal Agar (OMA), Corn Meal Agar (CMA), V8, Agar Extracto de Malta (MEA), Agar Papa Dextrosa (PDA), etc. Sintticos o definidos: Todo su contenido es qumicamente

definible, aunque generalmente son aceptables algunas impurezas. Ejemplo: Medio Czapecks, Solucin Richard, etc. Selectivos o diferenciales: Se denomina diferenciales a los

medios que contienen sustancias (no necesariamente nutritivas) con un papel especial para identificar, seleccionar, o caracterizar microorganismos.

Ejemplo: Medio Tetrazolio (TZC) usado para Pseudomonas spp.,etc.

2. Medios de cultivo y posibles insumos para preparar medios de cultivos artesanales a. Agar Papa Dextrosa Para la preparacin de medio de cultivo segn CAEDO et al. (2004), menciona las siguientes cantidades e insumos: 200 g papa sin pelar, 10 g dextrosa, 18 g agar y enrazar a 1 L agua destilada. Adems CAEDO et al. (2004) indica el siguiente procedimiento de preparacin: Lavar las papas, cortarlas y hacerlas hervir en un litro de agua destilada por 20 minutos, colar y disolver en el lquido la dextrosa y el agar. Esterilizar en autoclave durante 15 minutos a 15 libras de presin.

Es un medio muy usado que sirve para aislar todo tipo de hongos. Beauveria, Paecilomyces, Lecanicillium (Verticillium)y Metarhizium, los ms importantes hongos parsitos de insectos, al igual que los parsitos de plantas y los hongos saprofitos crecen muy bien y esporulan en este medio. Cuando se aslan hongos a partir de insectos colectados del suelo, es recomendable acidificar el medio con cido lctico al 25%. Se agregan 3 4 gotas sobre el agar solidificado de la placa con el objeto de evitar el desarrollo de bacterias. Con los

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mismos ingredientes, excluyendo el agar, se obtiene el medio lquido de Papa Dextrosa (PD), muy utilizado para la preparacin del inocul en forma masiva (CAEDOet al., 2004).

b. Agar granulado El agar agar es un polygalactosa soluble en agua que se obtiene de las algas marinas del Gelenium sesquipedal . El agar agar se mantiene solidificado en las temperaturas de crecimiento para muchos microorganismos y es generalmente resistente al dao ocasionado por las enzimas bacterianas. El agar es un gel en la temperatura ambiente, debilitando su firmeza hasta la temperatura de 65 C derritindose aproximadamente 85 C, una temperatura diferente para que el agar solidifique es de 32-40 C. El agar-agar se utiliza en una concentracin final de 1-1.5% (1.0-1.5 g/100 ml) para los medios de cultivo de slidos. Cantidades ms pequeas son utilizados en los medios para estudios de la movilidad (0.5% o 0.05 g/100 ml) y para el crecimiento de los anaerobios (0.1% o 0.01 g/100 ml) y de los microaerophiles. Si el medio de cultivo tiene un pH <5.0 se debe trabajar a 2% (2 g/100 ml). El medio completamente disuelto es esterilizado 121 C por 15 min (MERCK, 2011b). Segn Cuadro 1 la MERCK (2011a) para el agar agar (101614) seala datos qumicos y fsicos. El agar es un medio en polvo o granulado homogneo, de color mbar claro. Extracto seco (polvo deshidratado), que tienen la propiedad de formar gel. Qumicamente es un poligalactosido y aproximadamente el 90% de la galactosa se encuentran en la forma D y el 10 % en la forma L.

Cuadro 1. Datos qumicos y fsicos del agar agar Descripcin Solubilidad en agua Punto de fusin Bulkdensity (densidad) Valor de pH
Fuente: MERCK (2011a)

Unidades de medida (20 C) ligeramente soluble 90 C 550 kg/m3 6.8 (100 g/l, H2O, 20 C)

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El anlisis qumico del agar presenta: un contenido de metales de: 0.4 % de Sodio, 0.2 5 de Calcio, 0.1 % de Magnesio, 0.001% de Hierro, y 0.0005 % de plomo como mximo. Segn Cuadro 2 la MERCK (2011b) seala el anlisis tpico para el agar agar granulado.

Cuadro 2. Anlisis tpico del agar agar granulado. Descripcin Color del granulo Apariencia Color en la solucin Apariencia en la solucin pH (5% en agua) Perdida en la sequedad (humedad) Ceniza Metales pesados (txicos como Pb) Ca Mg Puntos de solidificacin Punto de fusin Concentracin de trabajo
Fuente: MERCK (2011b)

Cantidades Amarillo pardusco Granulos de flujo libre Claro ambarino Claro 5.0-6.0 <12% 12% 0.00% 0.50% 0.10% 32-36 C >85C 1-1.5%

c. Dextrosa El trmino glucosa procede del griego (glekos; "mosto", "vino dulce"), y el sufijo osa indica que se trata de un azcar. La palabra fue acuada en francs como "glucose" (con anomala fontica) por Dumas en 1838; debera ser fonticamente "gleucosa" (o "glicosa" si partimos de glykos, otro lexema de la misma raz (WIKIPEDIA, 2010).

La glucosa es un monosacrido con frmula emprica C6H12O6, la misma que la fructosa pero con diferente posicin relativa de los grupos -OH y O=. Es una hexosa, es decir, que contiene seis tomos de carbono, y es una aldosa, esto es, el grupo carbonilo est en el extremo de la molcula.

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Es una forma de azcar que se encuentra libre en las frutas y en la miel. La aldohexosa glucosa posee dos enantimeros, si bien la D-glucosa es predominante en la naturaleza. En terminologa de la industria alimentaria suele denominarse dextrosa (trmino procedente de glucosa dextrorrotatoria) a este compuesto (WIKIPEDIA, 2010).

d. Agar agar Es una gelatina vegetal, un polisacrido que se extrae de algas por medio del acido sulfrico diluido a una temperatura de 80C.se usa en asia como comestible. La produccin comercial se extrae de la siguientes especies Gelidium corneum (japon, E.U.A); Gracillaria sp (E.U.A); Gigartina sp. (G ran Bretaa); Pterocladia sp. (Nueva zelanda) (Ainsworth y Bisby, 1961) (FRENCH et al.,1982).

El agar tiene algunas propiedades muy importantes que lo hacen valioso para la microbiologa y no se ha encontrado an ningn sustituto realmente satisfactorio. Son pocos los microbios que pueden degradar el agar, as que permanece slido. Tambin es importante el hecho de que funde aproximadamente a la temperatura de ebullicin del agua, pero permanece en un estado lquido mientras la temperatura baja hasta cerca de 40 C. Para su uso en el laboratorio el agar es mantenido por tanto en baos de agua a unos 50 C. Esta temperatura no afecta a la mayora de las bacterias cuando se vierte el medio sobre un inoculo bacteriano. Las suspensiones bacterianas tambin se pueden mezclar con el agar fundido en el bao de agua para conseguir una suspensin uniforme de bacterias; esta tcnica se puede utilizar para ensayos de sensibilidad a antibiticos y otros fines. Una vez que el agar se ha solidificado se puede incubar hasta temperaturas cercanas a los -100 C antes de que se lice; esta propiedad es particularmente til cuando se estn cultivando bacterias termfilas (TORTEZA et al., 1993).

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Los medios con agar suelen emplearse en tubo de ensayo o en placas de Petri. Cuando se deja solidificar el medio con el tubo inclinado, para disponer de una superficie mayor para el crecimiento, se habla de agar Inclinado. Cuando solidifica con el tubo vertical se llama agar (para siembra en) picadura. Las placas de petri que recibieron el nombre de su inventor, sojas cilndricas plantas con una tapa que sobresale la parte inferior para evitar contaminaciones (TORTEZA et al., 1993).

e. Papa. La papa es una buena fuente de energa y tiene una gran capacidad para combinarse con otros alimentos. Estos pueden resultar muy completos cuando se acompaan de legumbres o carnes para completar las protenas necesarias para una alimentacin adecuada (CORRAL, 2010).

Este tubrculo contina siendo la base de la alimentacin de millones de personas, es una delicia culinaria en muchas regiones del globo que ha generado decenas de platos que la tienen de protagonista y, adems, representa un verdadero desafo para cientficos de varias disciplinas, que tratan de dilucidar su origen, gentica y fisiologa. Tambin, dentro del campo de la tecnologa, stos no cesan de encontrar una gran cantidad de aplicaciones ms all de las convencionales para este tubrculo, desde los cosmticos y el alcohol hasta el papel prensa, pasando por bolsas ecolgicas de plstico a base de almidn de papa, y como medios de cultivos, en este medio los hongos crecen y se reproducen muy fcilmente. (WIKIPEDIA, 2010).

i.

Valor nutricional de la papa Segn EGSQUIZA (2000), indica que los principales

componentes bromatolgicos del tubrculo de papa son la humedad, almidn, protenas, cenizas y grasas (Cuadro 3).

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Cuadro 3. Composicin promedio de una porcin de 100 gramos de papa fresca. Composicin Humedad Protena Almidn Cenizas Grasas Potasio Fsforo Calcio Sodio Fierro B1 (Tiamina) B2 (Riboflavina) B6 (Piridoxina) Vitamina C Niacina
Fuente: EGSQUIZA (2000).

Cantidad 78 g 2.1 g 18.5 g 1 g 0.1 g 560 mg 50 mg 9 mg 7 mg 0.8 mg 0.1 mg 0.04 mg 0.25 mg 20 mg 1.5 mg

f. Agar chino El agar-agar es uno de los gelificanteso espesantes vegetales ms utilizados en la cocina. Este polisacrido procede de las algas rojas Gelidium, un alga marina utilizada en Japn desde su hallazgo accidental en el siglo XVIII, aunque tambin se obtiene de otras especies de algas rojas de los gneros Gracilaria o Pterocladiaentre otras, stas de menor calidad. En Japn se conoce como Kanten (cielo-fro) por el mtodo artesanal produccin, pero los malayos le llamaron agar (gelatina) y como es costumbre repetir dos veces la palabra para dar ms nfasis, se qued con agar-agar (GASTRONOMIA&CIA, 2008).

g. Flan La cantidad de protenas del flan de vainilla, es de 3 g. por cada 100 gramos. Las protenas de este alimento perteneciente a la categora de de los postres lcteos, estn formadas por aminocidos como cido asprtico, cido glutmico, alanina, arginina, cistina, fenilalanina, glicina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, prolina, serina, tirosina, treonina, triptofano y valina. Estos aminocidos se combinan para formar las protenas del flan de vainilla. Nuestro cuerpo usa las

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protenas del flan de vainilla para construir los tejidos que forman nuestros msculos. Estas protenas tambin son tiles y necesarias para mantener nuestros msculos ya que sin un aporte adecuado de protenas, como las que proporciona el flan de vainilla (LOS ALIMENTOS, 2011). El valor nutricional del flan se muestra en el Cuadro 4, 5, 6, y 7.

h. Azcar Se denomina azcar a la sacarosa, cuya frmula qumica es C12H22O11, tambin llamada azcar comn o azcar de mesa, que se obtiene principalmente de la caa de azcar o de la remolacha. El azcar es un endulzante de origen natural, slido, cristalizado, constituido esencialmente por cristales sueltos de sacarosa, obtenidos a partir de la caa de azcar (Saccharum officinarum L) o de la remolacha azucarera (Beta vulgaris L) mediante procedimientos industriales apropiados (WIKIPEDIA, 2013).

El azcar blanco es sometido a un proceso de purificacin qumico, haciendo pasar a travs del jugo de caa, gas SO2, que proviene de la combustin del azufre.El azcar de tono ms oscuro es ms saludable. La pelcula de miel que rodea al cristal del azcar moreno o rubio contiene sustancias como minerales y vitaminas. En el argot azucarero, estas sustancias reciben el nombre de impurezas. Cabe aclarar que durante el proceso a todas las sustancias que no son sacarosa, se les denomina impurezas, pero son inofensivas para la salud. Son estas las que le otorgan el color y sabor particular (WIKIPEDIA, 2013).

El azcar moreno, negro, terciado o rubio es un azcar de sacarosa que tiene un color marrn caracterstico debido a la presencia de melaza. Es un azcar sin refinar o parcialmente refinado formado por cristales de azcar con algn contenido residual de melaza o producido por la adicin de melaza al azcar blanco refinado, adems el azcar blanca o azcar refinada tienen una mayor asimilacin por los organismos, en donde el tamao de las partculas es variable pero generalmente menor que las del azcar blanco granulado (WIKIPEDIA, 2012).

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i. valor nutricional del azcar El azcar moreno tiene un contenido calrico ligeramente inferior por peso que el de azcar blanco gracias a la presencia de agua. Cien gramos de azcar moreno contienen 373 caloras, frente a las 396 del azcar blanco (WIKIPEDIA, 2012).

D.

Produccin de Beauveria bassiana y Metarhizium anisopliae La produccin de hongos entomopatgenos se basan en la multiplicacin

masiva del hongo y sus estructuras reproductivas en un sustrato natural. Hasta la fecha se han evaluado diferentes tipos de sustratos naturales, principalmente arroz, trigo, maz, frijol y soya, pero los ms utilizados son arroz y trigo.

Adems, GOMEZ et al. (2002) indica que el sustrato en que mejor se desarrolla los hongos entomopatgenos es el arroz sustratos como trigo, cebada, maz, etc. pudiendo utilizarse otros

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Cuadro 4. Principales nutrientes del flan de vainilla Nutriente Acido fitco Grasas saturadas Adenina Agua Alcohol Cantidad 0 g. 0,89 g. 0 mg. 71,50 g. 0 g. Nutriente Colesterol Fibra insoluble Fibra soluble Fibra Fosfocolina Grasas monoinsaturadas Grasas poliinsaturadas Guanina Cantidad 7 mg. 0 g. 0 g. 0,00 g. 0 mg. 0,47 g. 0,06 g. 0 mg. Nutriente Licopeno Grasa Lutena Protenas Purinas Quercetina Teobromina Zeaxantina Cantidad 0 ug. 1,60 g. 0 ug. 3 g. 0 mg. 0 mg. 0 mg. 0 ug.

Cafena 0 mg. Caloras 122 kcal. Carbohidratos 23,90 g. Fuente: LOS ALIMENTOS (2011).

Cuadro 5.Vitaminas del flan de vainilla uno de los alimentos pertenecientes a la categora de de los postres lcteos Nutriente Cantidad cido flico aadido 0 ug. Alfa caroteno 0 ug. Alfatocoferol 0,16 mg. Beta caroteno 8 ug. Beta criptoxantina 0 ug. Betacaroteno 8 ug. Betatocoferol 0 mg. Caroteno 8 ug. Deltatocoferol 0 mg. Fuente: LOS ALIMENTOS (2011). Nutriente Folatos alimentarios Gammatocoferol Niacina preformada Retinol Tocoferoles totales Vitamina A Vitamina B1 Vitamina B12 Vitamina B2 Cantidad 8 ug. 0 mg. 0,10 mg. 37 ug. 0,16 mg. 39 ug. 0,03 mg. 0,30 ug. 0,20 mg. Nutriente Vitamina B3 Vitamina B5 Vitamina B6 Vitamina B7 Vitamina B9 Vitamina C Vitamina D Vitamina E Vitamina K Cantidad 0,77 mg. 0,28 ug. 0,03 mg. 0 ug. 8 ug. 0 mg. 0,07 ug. 0,16 mg. 2,50 ug.

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Cuadro 6. Minerales del flan de vainilla, uno de los alimentos pertenecientes a la categora de de los postres lcteos Nutriente Cantidad Aluminio 0 ug. Azufre 0 mg. Bromo 0 ug. Calcio 94 mg. Zinc 0,30 mg. Cloro 100 mg. Cobalto 0 ug. Fuente: LOS ALIMENTOS (2011). Nutriente Cobre Cromo Flor Fsforo Hierro Yodo Magnesio Cantidad 0,00 mg. 0 ug. 0 ug. 77 mg. 0,00 mg. 33 mg. 9 mg. Nutriente Manganeso Nquel Potasio Selenio Sodio Cantidad 0,00 mg. 0 ug. 150 mg. 2,10 ug. 70 mg.

Cuadro 7. Aminocidos del flan de vainilla, uno de los alimentos pertenecientes a la categora de de los postres lcteos Nutriente Cantidad cido asprtico 217 mg. cido glutmico 597 mg. Alanina 100 mg. Arginina 104 mg. Cistina 27 mg. Fenilalanina 138 mg. Glicina 60 mg. Fuente: LOS ALIMENTOS (2011). Nutriente Hidroxiprolina Histidina Isoleucina Leucina Lisina Metionina Prolina Cantidad 0 mg. 78 mg. 171 mg. 281 mg. 225 mg. 72 mg. 277 mg. Nutriente Serina Tirosina Treonina Triptofano Valina Cantidad 155 mg. 138 mg. 128 mg. 40 mg. 191 mg.

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1. Preparacin del sustrato del arroz Se utiliza arroz de buena calidad. El procedimiento en el siguiente: pesar 850g de arroz en una bolsa de polipropileno de 16 x 11 cm x 2 micras. Agregar 160 ml de agua destilada, engrapar haciendo dos dobleces, agitar la bolsa para impregnar el arroz con el agua. Esterilizar en autoclave a 121C y 15 lb de presin por espacio de 30 minutos. Las bolsas deben ponerse en un solo plano en una autoclave evitando sobreponerlas ya que no se consigue una buena esterilizacin. Para asegurar una buena esterilizacin se recomienda utilizar la cinta indicadora de esterilidad en las bolsas, pegando pedacitos de esta en ambas caras de las bolsas. Si la esterilizacin ha sido efectiva las lneas diagonales de la cinta indicadora se pondrn negras, si presentan otro color quiere decir que el arroz no ha sido bien esterilizado no pudiendo utilizarlo para producir hongos

entomopatgenos (GOMEZ et al., 2002).

Es importante que el pH de agua que se utiliza este en un rango entre 5 y 6 ya que el hongo se desarrollar mejor. Otra forma de preparar el sustrato es pre-coser el arroz por 3 a 4 minutos para esto se hace hervir el agua y cuando est en ebullicin se sumerge del arroz colocado con una malla fina, se deja 3 a 4 minutos, se retira la malla con el arroz, se pone en un colador se deja escurrir el agua, se embolsan inmediatamente y se engrapan. Una vez listas se ponen en el autoclave por 30 minutos (GOMEZ et al., 2002).

2. Inoculacin o siembra del sustrato arroz Segn GOMEZ et al. (2002), describe tres tipos de inculo, para la siembre del sustrato de arroz, como se indica a continuacin:

a. Con inoculo liquido (Pre -inoculo). Una vez retiradas la bolsa de la autoclave se deja enfriar en lugar limpio y fresco, cuando estn fros se llevan a la cmara de flujo laminar para inocular con el hongo que se desea producir, siguiendo los siguientes pasos:

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Limpiar las bolsas en el dobles con un algodn embebido en alcohol, cortar el dobles con la ayuda de unas tijeras y adicionar 30 ml aproximadamente de pre-inoculo liquido. Este proceso debe hacerse junto a un mechero de bunsen encendido dentro de la cmara de flujo laminar. Una vez sembrado el inoculo en la bolsa, se hacen dos dobleces se engrapa en tres puntos. Se mezcla bien tratando de homogenizar el arroz con el hongo, se pone fecha y el nombre de la especie de hongo inoculado luego se lleva a la sala de germinacin y esporulacin para que incube. Al tercer o cuarto da se revisan y se retiran las bolsas que presenten contaminacin. A la bolsa que est en un buen estado, se recomienda presionarles suavemente para evitar que el hongo desarrolle de manera compacta. Es conveniente que los hongos tengan fotoperiodo de 14 horas de luz.

b. Con inoculo solido (de placa Petri) Cuando se siembra con hongo que ha desarrollado en placa de petri se toma un trozo de agar con un hongo, ms o menos un cuarto de placa, con una pinza estril. (La pinza se pasa por alcohol se flamea en el mechero y se enfra en un algodn embebido), colocndolo inmediatamente dentro de la bolsa preparada se engrapa y se procede como con las bolsas con pre-inoculo.

E.

Valor nutricional de algunos posibles sustratos para la produccin de Beauveria bassiana y Metarhizium anisopliae 1. Arroz (Oryza sativaL.) As como el maz es el cereal americano por excelencia y el trigo el cereal

europeo, el arroz es el cereal asitico por excelencia, tanto por su origen como porque constituye el alimento ms importante de Asia. Aproximadamente un tercio de la poblacin mundial consume arroz y/o productos derivados de este como alimento principal (REPO, 1998).

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El arroz constituye un alimento bsicamente energtico ya que su componente ms importante son los glcidos o hidratos de carbono (almidn). Por el contrario, es pobre en sustancias nitrogenadas (composicin media: 8%), y el contenido en materia grasa (lpidos) es insignificante, con poco ms del 1% (FRANQUET & BORRS 2006)

a. Efecto del sancochado. El arroz se remoja en agua tres a cuatro das, despus de la cual es sometido a vapor por un periodo corto de tiempo. Luego se seca y descascara y pule. El sancochamiento endrese el grano y reduce la cantidad que se quiebra al molerlo. El producto beneficiado es menos susceptible de ser atacados por los insectos y se conserva mejor que el arroz crudo pulido al sancochar, algunas de las vitaminas se pasan al endospermo y por la gelatinizacin, el almidn de las capas externas sella la capa de aleurona y el esculeto, de tal manera que no se separan con facilidad en el molino. El arroz sancochado y beneficiado contiene de dos a cuatro tantos de tiamina y niacina que el arroz pulido en crudo y bastante ms riboflavina (GRIST 1975).

El lavado afecta el contenido de vitaminas solubles en agua del arroz sancochado mucho menos que el grano crudo. Swaminathan (1942) citado por GRIST (1975), ha demostrado que mientras que el arroz molido crudo pierde hasta el 77% de su tiamina en el lavado, la perdida en arroz sancochado y tratado en forma similar fue solo alrededor del 36%. Despus de lavarlo, el arroz sancochado puede contener cuatro veces ms de tiamina y niacina que el grano crudo lavado. La explicacin perece ser que la penetracin de las vitaminas solubles en el agua durante el tratamiento con vapor las hace menos accesibles al agua que utiliza par lavarlo.

Hinton (1948), citado por GRIST (1975) demostr que el sancochado o el tratamiento de conversin (que de hecho es un progreso de sancochamiento) conduce a la redistribucin de la vitamina B1 en el grano, con el grano, con el cual el

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endospermo se enriquece en forma considerable. Sugiere que la redistribucin se debe el almidn, de una pequea proporcin del agua condensada en su superficie, habiendo tambin encontrado que una proporcin, que vari segn las condiciones del tratamiento, no se redistribuy sino que se perdi lo cual en gran parte fue un efecto del proceso, al cual el escutelo result ms sensible que el embrin. Adems confirma que el arroz sancochado y pulido hay una marcada de retencin del escutelo en relacin a la que tiene en el grano y beneficiado.

No est claro hasta donde el mayor contenido de vitamina B1 en el arroz pulido, despus de sancochado, se deba a la retencin del germen, pero el hecho de que este no se desprenda con tanta facilidad del grano la severidad o el tipo de proceso de molienda y las condiciones detalladas de pretratamiento influyen en la calidad del producto final (GRIST 1975).

Done (1964), citado por GRIST (1975), encontr que la perdida de aneurina en el arroz sancochado depende de la temperatura y la duracin del proceso. Aunque de manera inevitable al sancochar se pierda algo de aneurina, los resultados ms satisfactorios se obtuvieron remojando el palay 2h a 80C, produciendo una distribucin de aneurina y cido nicotnico en el grano, de tal manera que una gran proporcin de esas sustancias se conserv en el producto beneficiado. En tal sentido GRIST (1975), indica que lo nicos mtodos alternativos para obtener arroz de alto valor nutritivo son el sancochado o la tonificacin.

b. Valor nutricional El arroz es un alimento bajo en grasas, por lo que se recomienda para mantener una buena salud cardiovascular. Tiene un gran contenido de almidn, de manera que resulta una buena fuente de energa. Por otro lado es antidiarreico, antigstrico, demulcente, y es muy til para eliminar lquidos, por ello resultar til para personas con problemas de obesidad, hipertensin, o diabetes. Tambin contribuye a disminuir el colesterol en sangre, e impide la formacin de piedras en el rin.

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La variabilidad de la composicin y de las caractersticas del arroz es muy amplia y depende de la variedad y de las condiciones ambientales en las que se efecta el cultivo. En el arroz descascarillado el contenido proteico oscila entre el 7% y el 12%, pudiendo variar hasta 6-7 puntos porcentuales (FRANQUET & BORRS 2006)

Se reporta que 100 gramos de arroz aporta 350 caloras a la dieta, de los cuales el 85% proviene de los carbohidratos, 7% de grasas y 8% de protenas. El arroz integral, adems de proporcionar gran cantidad de energa, adems cuenta con Vitaminas B y E, aporta fibra, pues se encuentra envuelto en una capa de celulosa que mejora la digestin y facilita el trnsito intestinal (CONARROZ 2011).

2. Trigo (Triticum aestivum (L). Thell) El trigo es uno de los cereales ms antiguos y ms extensamente cultivados. Se estima que fue cultivado por primera vez en 10000-15000 ao a.c. este cultivo era particularmente de Persia, Egipto y Europa. Su origen se dio probablemente en las tierras ridas de Asia menor. En la regin del mediterrneo del trigo ha sido junto con la cebada un cultivo muy extendido ya hace miles de aos. En el imperio romano tuvo un papel central en la alimentacin, aunque la introduccin del centeno resto importancia por un tiempo (REPO, 1998).

a. Valor nutricional del grano de trigo Las protenas de trigo aportan valor nutritivo en sus frmulas. El perfil de aminocidos de las protenas de trigo se caracteriza por altas cantidades de glutamina, prolina, metionina y cistena. Las protenas de trigo no tienen factores anti-nutricionales y s un magnfico nivel de contenido en protenas digestibles totales. A pesar de los procesos de modificacin, las propiedades nutricionales tpicas de las protenas de los cereales se mantienen. El valor calrico de las protenas de trigo es aproximadamente 17 kJ/g producto seco (TATE & LYLE, 2003).

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3. Cebada (Hordeun vulgare) La cebada (Hordeun vulgare) es probablemente el cereal cultivado ms antiguo en la historia de la humanidad. Su cultivo se remota a 15000 aos a.c. Los antiguos romanos. Y griegos la utilizaron para hacer pan y la cebada era el alimento ms importante para los gladiadores romanos. En el siglo XV los campesinos pobres de la Europa del norte consuman pan de cebada y centeno, mientras los nobles consuman pan de trigo. La cebada se puede cultivar en muy diferentes condiciones climticas y ambientales, desde los trpicos hasta el crculo polar. Este cereal necesita un tiempo relativamente corto para crecer y frtil como en el caso del trigo (REPO, 1998).

a. Valor nutricional del grano de cebada Es un grano con un contenido de energa similar y a veces hasta superior al del maz, presentando una buena respuesta en produccin. Si bien no es un suplemento proteico, tiene niveles de protena relativamente altos frente al resto de los granos de cereales. Tiene algunas deficiencias en minerales. Estas buenas condiciones nutritivas han determinado que se est usando en forma creciente en nuestro pas, en la suplementacin de ganado lechero y en engorde de novillos (INIA, 2009)

4. Morn(Hordeun vulgare) El morn se obtiene desde la cebada comn los cereales de grano pequeo encontramos a la cebada (Hordeum vulgare).En el Per el 93.6% de las zonas productivas consumen la cebada que producen. Contribuye con el 20% del total de las caloras ingeridas por las familias rurales. Se siembra a altitudes superiores a los 3000 msnm (LA SIEMBRA).

a. Valor nutricional del morn Cantidad por porcin 100g, con 339 kcal caloras, protenas 9.8%, grasa 1.18%, fibra 6.0%, cenizas 3.20%, humedad 7.51% (LA SIEMBRA 2013)

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5. Garbanzo (Cicer arietinum) Se trata de una planta herbcea, de aproximadamente 50 cm de altura, con flores blancas o violetas que desarrollan una vaina en cuyo interior se encontrarn 2 3 semillas como mximo. Su periodicidad es anual. El garbanzo es una legumbre con importantes cualidades culinarias y nutritivas.El garbanzo ocupa el segundo lugar en el mundo en importancia como leguminosa grano. Adems de ser empleado en la alimentacin animal es la alimentacin humana su principal utilizacin, entre otras razones por la calidad de su protena, considerada como la de mayor valor biolgico entre las legumbres destinadas al consumo humano. (MEJIAS et al., 2008)

a. Valor nutricional del garbanzo El garbanzo posee un alto valor nutritivo. Cien gramos suministran 360 caloras y contienen el 20 por 100 de protenas, el 6,5 por 100 de grasas, 130 mg de calcio, 8 mg de hierro, adems de diversas vitaminas (MEJIAS et al., 2008 )

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III.

MATERIALES Y MTODOS

A. Lugar de ejecucin. El presente trabajo se realiz en el laboratorio de Entomopatgenos de la Universidad Nacional Agraria de la Selva, ubicado Av. Universitaria s/n en la ciudad de Tingo Mara, distrito de Rupa Rupa, Provincia de Leoncio Prado, Departamento de Hunuco.

B. Fases del desarrollo de la prcticas preprofesionales La prctica preprofesional estuvo conformada por los siguientes trabajos experimentales: Crecimiento micelial de 2 cepas de B. bassiana y2 cepas de M. anisopliae en seis medios de cultivos Produccin de B. bassiana y M. anisopliae en cinco sustratos 1. Crecimiento micelial de B. bassiana y M. anisopliae en seis medios de cultivos a. Componentes en estudio Los componentes en estudio son los siguientes (Cuadro 8): Cuadro 8. Componentes en estudio Entradas Salidas (Crecimiento Medios de cultivo Ritmo Promedio de Seis medios de cultivo Beauveria bassiana y Crecimiento de B. bassiana Metarhizium anisopliae y M. anisopliae Unidad Experimental micelial)

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b. Diseo estadstico i. Diseo experimental Para el experimento se utiliz el diseo completamente al azar (DCA), compuesto de seis tratamientos, incluyendo al tratamiento testigo PDA (T1), con seis repeticiones (Cuadro 9).

Cuadro 9. Tratamientos en estudio.

Trat.

Descripcin Agar Papa Dextrosa

3

Siglas
1
2

Dosis%
Rep. Solidificante Glucosa

T1 T2 T3 T4 T5 T6
1 2

PDAMERK PDAMERK + LC PArAChino PAbAChino PFAr PFAb

3

----1 1 30 30
4

----1.0 1.5 1.0 1.5

6 6 6 6 6 6

Agar Papa Dextrosa+ Levadura de cerveza

Agar Chino Papa Azcar Rubia Agar Chino Papa Azcar Blanca Flan Papa Azcar Rubia Flan Papa Azcar Blanca
4 4 3

MERCK / 8 g de levadura de cerveza (LC) / Yong Xiang Food Compang / Universal

El Modelo Aditivo Lneal del DCA utilizado se representa en la ecuacin (1): Yij = + Ti + ij Donde: Yij : Respuesta del i simo tratamiento en la observacin Ti ij : Efecto de la media general. : Efecto del i - simo tratamiento. : Efecto aleatorio del error experimental j simo
(1)

Para: i j = 1, 2, 3. y 6 tratamientos (medios de cultivos). = 1, 2, 3. y 6 repeticiones (observaciones).

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ii. Anlisis estadstico Adems se realiz el Anlisis de Variancia (F. tab. = 0.05) (Cuadro 10) y se determin el coeficiente de variabilidad de los ensayos, ecuacin (2). Y se determin las diferencias de medias con la prueba de Tukey (= 0.05) (Cuadro 11) (CALZADA, 1982). Para esto se utilizar el software Microsoft Office Excel 2007 versin en espaol.

Cuadro 10. Modelo del Anlisis de Variancia

F.V Tratamiento Error Total G.L. t-1 r(t-1) tr-1 S.C. Sctra Scee Sctotal C.M. SCtra/gltra = CMtra SCee/glee = CMee F.Cal. CMtra/CMee F.Tab. F(gltra,glee)

t: Tratamiento y r: Repeticin

CV = CMe / (Y..) * 100

(2)

Cuadro 11. Prueba de Tukey ( = 0.05) de los promedios de los tratamiento.

Trat. T1 T2 T3 T4 T5 T6 2 Descripcin Agar Papa Dextrosa
1
2

Siglas PDAMERK PDAMERK + LC PArAChino PAbAChino PFAr PFAb

Promedio

Significancia

Agar Papa Dextrosa+ Levadura de cerveza

Agar Chino Papa Azcar Rubia Agar Chino Papa Azcar Blanca Flan Papa Azcar Rubia Flan Papa Azcar Blanca
4 4 3

MERCK / Universal

8 g de levadura de cerveza (LC) /

Yong Xiang Food Compang /

c. Metodologa i. Obtencin de los aislamientos Para el presente trabajo de investigacin se utiliz el aislamiento de Beauveria bassiana SENASA CCB-LE265 aislado de Hypothenemus hampei (broca del cafe), de la provincia de Sania en Puno Per, Beauveria bassiana cepa de Tingo Maria y Metarhizium anisopliae SENASA CCB-LE319 aislado de Comopolites sordidus (gorgojo negro del pltano) de la provincia de Chanchamayo en Junin Per, pertenecientes al Laboratorio de Entomopatgeno de la Universidad

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Nacional Agraria de la Selva, Metarhizium anisopliae cepa 302. Los hongos fueron cultivado en el medio Agar Papa Dextrosa (PDA) en placas petri 8.5 cm de dimetro. Las placas petri se incubaron en el medio ambiente a una temperatura aproximadamente de 24 5C durante 10 das (tres placas petri por aislamiento) esta operacin se realiz para obtener el cultivo puro sin contaminante(Figura 2).

Figura 2. Realizando el repique para la obtencin de cultivo puro

ii. Medios de cultivo Insumos Agar Papa de Dextrosa (PDA) Agar granulado.1.2 %. Dextrosa.1.0 %. Tubrculo de papa250g Agua destilada...Enrazar a 1000 mI Agar Papa de Dextrosa (PDA + LC) Agar granulado...1.2 %. Dextrosa1.0%. Tubrculo de papa...250g Levadura de cerveza...8g Agua destilada..........Enrazar a 1 000 mI.

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Agar Chino Papa Azcar Rubia (PArAchino) Agar chino.1.0 %. Azcar rubia..1.0%. Tubrculo de papa250g Agua destilada..Enrazar a 1000 mI. Agar Chino Papa Azcar Blanca (PAbAchino) Agar chino.1.0%. Azcar blanca...1.5%. Tubrculo de papa250g. Agua destilada...Enrazar a 1000 mI. Flan Papa Azcar Rubia (PArF) Flan universal30%. Azcar rubia...1.0%. Tubrculo de papa.250 g. Agua destiladaEnrazar a 1000 mI. Flan Papa Azcar Blanca (PabF) Flan universal30%. Azcar blanca1.5%. Tubrculo de papa.250 g. Agua destiladaEnrazar a 1000 mI.

Preparacin de los medios:

Agar Papa Dextrosa (PDA) Se pes 250 g de tubrculo de papa de buena calidad, seguidamente se lav bien con agua corriente, sin pelar se parti el tubrculo en pedazos y coccione en la microonda (Samsung Modelo AME8103WXPE) en 500 ml de agua destilada durante 15 minutos en microondas. Despus se filtr a travs de dos capas de gasa. Seguidamente se agreg el agar granulado en 400 ml de agua destilada y se calent hasta que el agar se halla fundido, luego mezcl el filtrado obtenido de los tubrculos de papa con el agar fundido, seguidamente agreg la dextrosa y mezcl, para luego ser enrazado con agua destilada hasta

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1000 ml y se verti el contenido en un envase de vidrio (botella de nctar con boca angosta) se llen los 2/3 del envase, adems se tap la boca con algodn y recubri con papel bond, luego se esteriliz en un autoclave (Allamerican Modelo NO. 25x) durante 20 minutos a 1210 C y 15 Lbs de presin. Agar Papa Dextrosa + Levadura de Cerveza (PDA + LC) Se pes 250 g de tubrculo de papa de buena calidad, seguidamente se lav bien con agua corriente, sin pelar se parti el tubrculo en pedazos y coccione en 500 ml de agua destilada durante 15 minutos en microondas (Samsung Modelo AME8103WXPE). Despus se filtr a travs de dos capas de gasa. Seguidamente se agreg el agar granulado en 400 ml de agua destilada y se calent hasta que el agar se halla fundido, luego mezcl el filtrado obtenido de los tubrculos de papa con el agar fundido, seguidamente agreg la dextrosa e inmediatamente se agreg la levadura de cerveza al contenido y se mezcl todo el contenido, para luego ser enrazado con agua destilada hasta 1000 ml y se verti el contenido en un envase de vidrio (botella de nctar con boca angosta) se llen los 2/3 del envase, adems se tap la boca con algodn y recubri con papel bond, luego se esteriliz en un autoclave (Allamerican Modelo NO. 25x) durante 20 minutos a 1210 C y 15 Lbs de presin. Agar Chino Papa Azcar Rubia (PArAchino) Se pes 250 g de tubrculo de papa de buena calidad, seguidamente se lav bien con agua corriente, sin pelar se parti el tubrculo en pedazos y coccione en 500 ml de agua destilada durante 15 minutos en microondas (Samsung Modelo AME8103WXPE). Despus se filtr a travs de dos capas de gasa. Seguidamente se agreg el agar chino (previamente cortado en pequeas tiras) en 400 ml de agua destilada y se calent hasta que el agar se halla fundido, luego se mezcl el filtrado obtenido de los tubrculos de papa con el agar fundido, seguidamente se agreg el azcar rubia, para luego ser enrazado con agua destilada hasta 1000 ml y se verti el contenido en un envase de vidrio (botella de nctar con boca angosta) se llen los 2/3 del envase, adems se tap

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la boca con algodn y recubri con papel bond, luego se esteriliz en un autoclave (Allamerican Modelo NO. 25x) durante 20 minutos a 1210 C y 15 Lbs de presin. Agar Chino Papa Azcar Blanca (PAbAchino) Se pes 250 g de tubrculo de papa de buena calidad, seguidamente se lav bien con agua corriente, sin pelar se parti el tubrculo en pedazos y coccione en 500 ml de agua destilada durante 15 minutos en microondas (Samsung Modelo AME8103WXPE). Despus se filtr a travs de dos capas de gasa. Seguidamente se agreg el agar chino (previamente cortado en pequeas tiras) en 400 ml de agua destilada y se calent hasta que el agar se halla fundido, luego se mezcl el filtrado obtenido de los tubrculos de papa con el agar fundido, seguidamente se agreg el azcar blanca, para luego ser enrazado con agua destilada hasta 1000 ml y se verti el contenido en un envase de vidrio (botella de nctar con boca angosta) se llen los 2/3 del envase, adems se tap la boca con algodn y recubri con papel bond, luego se esteriliz en un autoclave (Allamerican Modelo NO. 25x) durante 20 minutos a 1210 C y 15 Lbs de presin. Flan Papa Azcar Rubia (PArF). Se pes 250 g de tubrculo de papa de buena calidad, seguidamente se lav bien con agua corriente, sin pelar se parti el tubrculo en pedazos y coccione en 500 ml de agua destilada durante 15 minutos en microondas (Samsung Modelo AME8103WXPE). Despus se filtr a travs de dos capas de gasa. Seguidamente se agreg el Flan en el caldo papa y luego se mezcl, inmediatamente se agreg el azcar rubia y se mezcl el contenido. Para luego ser enrazado con agua destilada hasta 1000 ml y se verti el contenido en un envase de vidrio (botella de nctar con boca angosta) se llen los 2/3 del envase, adems se tap la boca con algodn y recubri con papel bond, luego se esteriliz en un autoclave (Allamerican Modelo NO. 25x) durante 20 minutos a 1210 C y 15 Lbs de presin.

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Flan Papa Azcar Blanca (PFAb) Se pes 250 g de tubrculo de papa de buena calidad, seguidamente se lav bien con agua corriente, sin pelar se parti el tubrculo en pedazos y coccione en 500 ml de agua destilada durante 15 minutos en microondas (Samsung Modelo AME8103WXPE). Despus se filtr a travs de dos capas de gasa. Seguidamente se agreg el Flan en el caldo papa y luego se mezcl, inmediatamente se agreg el azcar blanca y se mezcl el contenido. Para luego ser enrazado con agua destilada hasta 1000 ml y se verti el contenido en un envase de vidrio (botella de nctar con boca angosta) se llen los 2/3 del envase, adems se tap la boca con algodn y recubri con papel bond, luego se esteriliz en un autoclave (Allamerican Modelo NO. 25x) durante 20 minutos a 1210 C y 15 Lbs de presin.

T1
Trat. T1 T2 T3 T4 T5 T6

T2

T6

T5

T3

T4
Siglas PDAMERK PDAMERK + LC PArAChino PAbAChino PFAr PFAb

Descripcin Agar Papa Dextrosa

Agar Papa Dextrosa+ Levadura de cerveza

Agar Chino Papa Azcar Rubia Agar Chino Papa Azcar Blanca Flan Papa Azcar Rubia Flan Papa Azcar Blanca

Figura 3.medios de cultivos preparados

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iii. Plaqueo y siembra Posteriormente los medios fueron llevados a la cmara de flujo laminar (Captair CRUMASA 08080) que previamente fueron desinfestados, cuando los medios tuvieron aproximadamente a una temperatura de 40 45 C se procedi a realizar el plaqueo, para lo cual se utiliz placas petri de vidrio (20 x 100 mm) previamente esterilizados, echando entre 10 a 15 ml del medio, por cada tratamiento se obtuvo seis placas con el medio respectivo. Despus de media hora aproximadamente con el plumn indeleble se traz una lnea vertical y horizontal, al revers de cada placa de tal manera que se crucen las dos lneas en el centro de la misma y con la ayuda de un sacabocado de 0.5 cm de dimetro, se sembr una rodaja de PDA con el cultivo purificado de las dos cepas de B. bassiana y las dos cepas de M. anisopliae sobre el centro (cruce de las dos lneas) del medio de cada placa en los diferentes tratamientos de cada experimento, seguidamente se sell con parafilm y las placas sern rotuladas. Los tratamientos son colocados sobre una mesa de madera o un taper de plstico trasparente grande a temperatura ambiente (aproximadamente 27 C de temperatura) para su posterior evaluacin(Figura 5).

Figura 4.

Ensayo de crecimiento B. bassiana y/o M. anisopliae en seis medios de cultivo diferentes

39

Figura 5.

Procedimiento de siembra de B. bassiana y/o M. anisopliae en los medios de cultivos, a. plaqueo de los medios de cultivo, b. realizando los trazos horizontales y verticales, c. siembra de B. bassiana sobre el centro de cada placa con medio de cultivo, d. sellando las placas petri con parafilm.

d. Evaluacin Experimento anisopliae Despus de cinco, siete y diez das desde la siembra, se procedi a evaluar. Debido a que B. bassiana no tiene un crecimiento radial uniforme y M. anisopliae tiene un crecimiento radial uniforme, se procedi a medir el rea de crecimiento los entomopatgenos en estudio con la ayuda de una mica trasparente de tamao A4, tena impreso cuadrculas de 0.25 cm de lado, equivalente a 0.0625 cm2. Para esto las placas petri que contengan los medios de cultivos (repeticiones de cada tratamiento respectivamente) donde se desarroll el hongo, fueron colocadas al reverso, sobre la cual se coloc la mica y se procedi a realizar el conteo de las cuadrculas en donde se observ el crecimiento del utilizando Beauveria bassiana y Metarhizium

40

hongo, lo cual es una propuesta en la metodologa de evaluacin y para la homogenizacin en la evaluacin se realiz dicha metodologa a ambos entomopatgenos (Figura 6).

Figura 6.

Evaluacin del rea de crecimiento de B. bassiana y/o M. anisopliae. Conteo de cuadrculas en donde se observan el crecimiento del hongo.

Terminado el conteo de las cuadrculas, se multiplic el nmero total de cuadriculas contadas por el rea de la cuadrcula (0.0625 cm 2), obteniendo de esta manera el rea total ecuacin (3), luego se us la ecuacin de la circunferencia ecuacin (4) para determinar el radio promedio de crecimiento del hongo, seguidamente con la ecuacin del Ritmo Promedio de Crecimiento (RPC) ecuacin (5) se determin el RPC de cada tratamiento.

AT = NTC.AC Donde: AT Ac = rea total (cm2) = rea de la cuadrcula (0.0625 cm2) A = .r2 Donde:

(3)

NTC = Nmero total de cuadriculas evaluadas

(4)

41

A = rea de la circunferencia r = Pi cuyo valor es 3.141596 = Radio

RPC = IT / TT

(5)

Donde: RPC = Ritmo promedio de crecimiento (cm/da) IT (cm) TT = Tiempo total (das) = Incremento total (cm) o radio promedio de crecimiento

Determinacin de la concentracin de conidias en cada uno de los tratamientos La concentracin del inoculo se determin con el hemocitmetro de Neubauer. Para lo cual se tom una rodaja del medio de cada uno de los tratamientos para ello se utiliz un sacabocado (dimetro= 1.6 cm), cada muestra se deposit en vasos precipitados de vidrio y/o plsticos, en 10 ml de agua destilada con dos gotas de Tween 80 al 0.1%, seguidamente se agit con la ayuda de una vaqueta de vidrio por un minuto, obteniendo una suspensin original, de la cual se extrajo con una pipeta una alcuota de 1 ml de la suspensin original y se deposit con mucho cuidado dentro del hemocitmetro de Neubauer, de tal

manera que el lquido ingrese por capilaridad sin que entre burbuja en la cmara (FRENCH, 1982; JIMENEZ, 1992; VELEZ, 1997).Luego con la ayuda de un contmetro se realiz el conteo en tres repeticiones por tratamiento, para luego obtener concentraciones (suspensiones) de conidias por mililitro (Figura 7).

Se utiliz la cmara de Neubauer para la evaluacin porque tiene la forma de una lmina porta objeto con rieles en forma de H en la parte superior e inferior del riel central. Cada cmara est divido en 9 cuadros primarios (CP). Cada CP est dividido a su vez en 16 cuadros secundarios (CS). El cuadrado

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primario central (CPC) est dividido en 25 CS, estando cada uno de ellos divididos a su vez en 16 cuadros terciarios (CT). Para el conteo de conidias se utiliz el cuadro principal central (CPC).

Cuadro Secundario Central (CSC) = 1 + 2 + 3 + 4 + 5 = S S*50 000 = Nmero total de conidias (ufc / ml) a

CSC: cuadro primario central.

Figura 7.

a. Diseo de la cmara de Neubauer en donde se realiz el conteo, b. conidias en la cmara de Neubauer para realizar el conteo, c. Realizando el conteo de conidias.

43

2. Produccin de B. bassiana y M. anisopliae en cinco sustratos a. Componentes en estudio Los componentes en estudio son los siguientes (Cuadro 12): Cuadro 12. Componentes en estudio
Entradas Unidad Experimental Medios de cultivo Cinco sustratos Beauveria bassiana y Metarhizium anisopliae Nmero de conidias por mililitros de agua Salidas (Suspensin)

b. Diseo estadstico i. Diseo experimental Para el experimento se utiliz el diseo completamente al azar (DCA), compuesto de cinco tratamientos, incluyendo al sustrato arroz como testigo (T1), con cinco repeticiones (Cuadro 13). Cuadro 13. Tratamientos en estudio.
Trat. T1 T2 T3 T4 T5 Sustratos Arroz superior Trigo Morn Cebada Garbanzo Siglas SA ST SM SC SG Preparacin Repeticiones. Sustrato 250 250 250 250 250 Agua 50 50 50 50 50 5 5 5 5 5

El Modelo Aditivo Lneal del DCA utilizado se representa en la ecuacin (1): Yij = + Ti + ij Donde: Yij : Respuesta del i simo tratamiento en la observacin : Efecto de la media general. j simo
(1)

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Ti ij Para: i j

: Efecto del i - simo tratamiento. : Efecto aleatorio del error experimental

= 1, 2, 3. y 5 tratamientos (sustratos). = 1, 2, 3. y 5 repeticiones (observaciones).

ii. Anlisis estadstico Adems se realiz el Anlisis de Variancia (F. tab. = 0.05) (Cuadro 14) y se determin el coeficiente de variabilidad de los ensayos, ecuacin (2). Y se determin las diferencias de medias con la prueba de Tukey (= 0.05) (Cuadro 15) (CALZADA, 1982). Para esto se utiliz el software Microsoft Office Excel 2007 versin en espaol. Cuadro 14. Modelo del Anlisis de Variancia
F.V Tratamiento Error Total G.L. t-1 r(t-1) tr-1 S.C. SCtra SCee SCtotal C.M. SCtra/gltra = CMtra SCee/glee = CMee F.Cal. CMtra/CMee F.Tab. F(gltra,glee)

t: Tratamiento y r: Repeticin CV = CMe / (Y..) * 100 (2)

Cuadro 15. Prueba de Tukey ( = 0.05) de los promedios de los tratamiento.

Trat. T1 T2 T3 T4 T5 Sustratos Arroz superior Trigo Morn Cebada Garbanzo Siglas SA ST SM SC SG
Promedio Significancia

45

c. Metodologa i. Multiplicacin en sustrato Para la multiplicacin en sustrato artificial, se pes 50 g de cada sustrato en una bolsa de polipropileno de 8 x12, se adicion10 ml. de agua destilada, luego se realiz el doblez a la bolsa y se engrap. Seguidamente se esteriliz a 121 C. y 15 lb de presin por 15 minutos (GOMEZ, 1998). Las bolsas se dejaron enfriar en dentro de la cmara de flujo laminar previamente desinfestada. Luego se llev a la cmara de flujo laminar los cultivos puros de cada aislamiento en estudio desarrollados en placas petri, para lo cual se seleccion del mayor promedio entre las 2 cepas de B. bassiana as mismo para las 2 cepas de M. anisopliae, para mantener la asepsia se encendi un mechero de alcohol. Posteriormente se realiz la inoculacin del hongo en el sustrato estril, para lo cual se us un sacabocado para obtener tres rodajas de las placas seleccionadas anteriormente, seguidamente se abri el dobles de las bolsas y con la ayuda de un estilete estril se inocul las tres rodajas sobre los sustratos en estudio (arroz, trigo, morn, cebada y garbanzo) previamente esterilizados.

Se inocul tres bolsas por cada tratamiento por cada Entomopatgenos. Se homogeniz el hongo, se anot la fecha y se llev a la sala de incubacin (ambiente completamente limpio para que incube), durante 10 das. Diariamente se procedi a homogenizar diariamente, siempre con luz constante. (Figura 8)

46

d
c

Figura 8.

Multiplicacin sustrato, a. Sustratos a utilizar para el ensayo (derecha a izquierda) Garbanzo, Morn, Trigo, Cebada y Arroz, b y c. Inoculacin del hongo en el sustrato estril, d. Realizando el engrampado de las bolsas con sustratos inoculados.

ii.

Determinacin de la concentracin de conidias en los sustratos. La concentracin del inoculo se determin con el hemocitmetro de

Neubauer. Para lo cual se tom 1 g de muestras de tres bolsa por tratamiento en estudio, cada muestra se depositar en vasos precipitados de vidrio y/o plsticos, en 10 ml de agua destilada con dos gotas de Tween 80 al 0.1%, seguidamente se agit con la ayuda de una vaqueta de vidrio por un minuto, obteniendo una suspensin original, de la cual se extrajo con una pipeta una alcuota de 1 ml de la suspensin original y se deposit con mucho cuidado dentro del hemocitmetro de Neubauer, de tal manera que el lquido ingrese por capilaridad sin que entreburbuja en la cmara (FRENCH, 1982; JIMENEZ, 1992; VELEZ, 1997). Luego con la ayuda de un contmetro se realiz el conteo de las tres muestras,

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sacando un promedio de las concentraciones (suspensiones) de conidias por mililitro (Figura 9)

Figura 9.

Realizando el conteo de conidias.

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IV.

RESULTADOS Y DISCUSIN

A. Crecimiento micelial de B. bassiana en seis medios de cultivos 1. Ritmo promedio de crecimiento (RPC) de B. bassiana TM Se realiz la evaluacin a partir del quinto da, hasta los 10 das despus de la siembra, las evaluaciones se realizaron cada dos das, obtenindose los siguientes resultados (Cuadro 16, Figura10) se encontr que la diferencia del RPC mayor (0.384 cm/da) con el RPC menor (0.269 cm/da) es de 0.115 cm/da, en la cual el T4 tuvo mayor ritmo promedio de crecimiento con 0.384 cm/da, seguido del T3 con 0.352 cm/da, resultando el T2 y T5 con valores iguales de 0.318 cm/da, el T1 con 0.316 cm/da y T6 con 0.269 cm/da, siendo este ltimo tratamiento el que menor RPC obtuvo.Posiblemente esta diferencia de los resultados obtenidos en el RPC, se deba a los diferentes medios probados, en donde el hongo se comport de diferente manera por cada tratamiento, por consecuencia se obtendr diferentes valores para el RPC. Cuadro 16. Resultado del Ritmo Promedio de Crecimiento (cm/da) de B. bassiana TM en los diferentes medios de cultivo.
TRAT. R r1 r2 r3 r4 r5
RPC

(PDAMERK)
T1

PDAMERK + LC T2

PArAchino
T3

PAbAchino
T4

PFAr
T5

PFAb
T6

0.324 0.300 0.291 0.334 0.332 0.316

0.324 0.385 0.272 0.272 0.337 0.318

0.308 0.410 0.311 0.364 0.368 0.352

0.377 0.358 0.406 0.413 0.366 0.384

0.287 0.205 0.347 0.383 0.368 0.318

0.277 0.287 0.137 0.283 0.362 0.269

R2

0.80013 0.00039

0.72794 0.00228

0.78393 0.00185

0.89341 0.00060

0.84796 0.00060

0.97459 0.00661

a. Anlisis de Varianza (= 0.05) Con los resultados obtenidos se procedi a realizar el ANVA (= 0.05) del RPC del aislamiento de B. bassiana TM (Tingo Mara) de acuerdo a la prueba de F del ANVA (Cuadro 17), se encontr diferencias estadsticas significativas, esto quiere decir que uno o algunos de los tratamientos a base de los medios de cultivos estudiados tuvo condiciones favorables para un mayor desarrollo del entomopatgeno.

49

Cuadro 17. Anlisis de Variancia (=0.05) del Ritmo Promedio de Crecimiento (cm/da) de B. bassiana TM F.V. Tratamiento Error Experimental Total C.V. = 19.62% G.L. 5 24 29 SC 0.0375 0.0682 CM 0.00751 0.00284 * F.Cal. 2.64 F.Tab. 2.51

El coeficiente de variabilidad fue de 19.62%, esto quiere decir segn CALZADA (1986) que existe una adecuada homogeneidad en el desarrollo micelial del hongo dentro de las unidades experimentales de cada tratamiento, es decir el RPC, fue similar entre las repeticiones de cada tratamiento, debido a que cada entomopatgeno tiene un comportamiento bueno en un mismo medio de cultivo. b. Prueba de Tukey (= 0.05) Al existir diferencias estadsticas significativas en el ANVA (Cuadro 17) del RPC de B. bassiana TM, se procedi a realizar la prueba de TUKEY ( = 0.05) (Cuadro 18), donde se encontr diferencias estadsticas significativas del tratamiento T4(PAbAchino)=0.38 cm/da con el T6 (PFAb)=0.27 cm/da, es decir el entomopatgeno tuvo un mayor RPC cuando fue sembrado en el T4(PAbAchino), sin embargo con el resto de tratamientos no se obtuvo diferencias significativas, pero si se encontr diferencias numricas, es decir el tratamiento T4(PAbAchino)=0.38 cm/da fue superior numricamente a todos los tratamientos, esto puede deberse que el tratamiento T4 (PAbAchino) contena azcar blanca que es ms refinada que la azcar rubia, tal como lo seala WIKIPEDIA (2013) que indica que el azcar blanca es ms refinada ya que est sometido a un proceso de purificacin qumico a comparacin que el azcar rubia. Posiblemente al ser ms refinada tuvo una mejor asimilacin por el hongo, lo cual se observ un desarrollo ms rpido debido a una fuente de energa que fue metabolizada rpidamente, tal como indica WIKIPEDIA (2012) que los alimentos refinados tienen una mayor asimilacin por los organizamos, adems menciona que la azcar blanca contiene mayor nmero

50

de caloras frente a la azcar rubia. Adems se puede apreciar que todos los tratamientos a excepcin del tratamiento T 4(PAbAchino)=0.38 cm/da no tuvieron diferencias estadsticas significativas, siendo el tratamientoT6(PFAb)= 0.27 cm/da el que menor valor de RPC obtuvo. Cuadro 18. Prueba de Tukey (=0.05) del Ritmo Promedio de Crecimiento

(cm/da) de B. bassiana TM en seis medios diferentes. Trat. T4 T3 T2 T5 T1 T6

0.500 0.450 0.400 0.350

Tratamiento
Azcar Blanca + Agar Chino Azcar Rubia + Agar Chino Agar Papa Dextrosa+ Levadura de Cerveza Flan + Azcar Rubia Agar Papa Dextrosa Flan + Azcar Blanca

Siglas PAbAchino PArAchino PDAMERK + LC PFAr PDAMERK PFAb

RPC 0.38 0.35 0.32 0.32 0.32 0.27

Sign. abcde abcde abcde abcdf abcde abcdf

0.384 0.352 0.316 0.318

0.318
0.269

RPC

0.300 0.250 0.200 0.150 0.100 0.050 0.000 T1 T2 T3 T4 T5

T6

Tratamientos
T1 T2 T3 Figura 10. : Agar Papa Dextrosa : Agar Papa Dextrosa+ Levadura de Cerveza : Agar Chino Papa Azcar Rubia T4 T5 T6 : Agar Chino Papa Azcar Blanca : Flan Papa Azcar Rubia : Flan Papa Azcar Blanca

Ritmo Promedio de Crecimiento (cm/da) de B. bassiana TM en 6 medios diferentes.

51

2. Ritmo Promedio de Crecimiento (RPC) de B. bassiana - 265 Se realiz la evaluacin a partir del quinto da, hasta los 10 das despus de la siembra, las evaluaciones se realizaron cada dos das, obtenindose los siguientes resultados (Cuadro 19, Figura 11) se encontr que la diferencia del RPC mayor (0.387 cm/da) con el RPC menor (0.243 cm/da) es de 0.144 cm/da, en la cual el T3 tuvo mayor ritmo promedio de crecimiento con 0.387 cm/da, seguido del T2 y T4resultando con valores iguales de 0.334 cm/da, el T1 con 0.305 cm/da, el T6 con 0.300 cm/da y T5 con 0.243 cm/da, siendo este ltimo tratamiento el que menor RPC obtuvo. Posiblemente esta diferencia de los resultados obtenidos en el RPC, se deba a los diferentes medios probados, en donde el hongo se comport de diferente manera por cada tratamiento, por consecuencia se obtendr diferentes valores para el RPC.

Cuadro 19. Resultado del Ritmo Promedio de Crecimiento del aislamiento (cm/da) de B. bassiana del SENASA CCB-LE265 en los diferentes medios de cultivo
TRAT. R r1 r2 r3 r4 r5
RPC

(PDAMERK)
T1

PDAMERK + LC T2

PArAchino
T3

PAbA chino
T4

PFAr
T5

PFAb
T6

0.325 0.316 0.197 0.353 0.335 0.305

0.416 0.262 0.279 0.393 0.322 0.334

0.353 0.348 0.412 0.350 0.471 0.387

0.344 0.287 0.371 0.319 0.350 0.334

0.186 0.239 0.254 0.276 0.262 0.243

0.314 0.292 0.253 0.327 0.314 0.300

R2

0.84639 0.00383

0.98145 0.00461

0.76813 0.00294

0.80393 0.00103

0.94130 0.00122

0.92252 0.00083

a. Anlisis de Varianza (= 0.05) Del mismo modo de los resultados del RPCdel aislamiento de B. bassiana aislamiento del SENASA CCB-LE265 obtenidos se procedi a realizar el

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ANVA (= 0.05) de acuerdo a la prueba de F del ANVA (Cuadro 20), se encontr diferencias estadsticas significativas, esto quiere decir que uno o algunos de los tratamientos a base de los medios de cultivos estudiados tuvo condiciones favorables para un mayor desarrollo del entomopatgeno. Cuadro 20. Anlisis de Variancia (=0.05) del Ritmo Promedio de Crecimiento (cm/da) de B. bassiana aislamiento del SENASA CCB-LE265 F.V. Tratamiento Error Experimental Total CV =18.56% El coeficiente de variabilidad de B. bassiana aislamiento del SENASA CCB-LE265 fue de 18.56%, esto quiere decir segn CALZADA (1986) que existe una ventajosa homogeneidad en el desarrollo micelial del hongo entre las unidades experimentales de cada uno los tratamiento, es decir el RPC, fue similar entre las repeticiones de cada tratamiento, debido a que cada entomopatgeno tiene un comportamiento similar en un mismo medio de cultivo. . b. Prueba de Tukey (= 0.05) Al existir diferencias estadsticas significativas en el ANVA (Cuadro 20) del RPC de B.bassiana aislamiento del SENASA CCB-LE265, se procedi a realizar la prueba de TUKEY ( = 0.05) (Cuadro 21, Figura 11), donde se encontr diferencias estadsticas significativas del tratamiento T 3(PArAchino)= 0.39 cm/da con el T5(PFAr)= 0.24 cm/da, es decir el entomopatgeno tuvo un mayor RPC cuando fue sembrado en el T3(PArAchino), sin embargo con el resto de tratamientos no se obtuvo diferencias significativas, pero si se encontr diferencias numricas, es decir el tratamientoT3(PArAchino) = 0.39 cm/da fue superior numricamente a todos los tratamientos. Adems se puede apreciar que todos los tratamientos a excepcin del tratamiento T3 (PArAchino) = 0.39 cm/da no tuvieron diferencias G.L. 5 24 29 SC 0.0565 0.0578 CM 0.01130 * 0.00241 F.Cal. 4.69 F.Tab. 2.51

53

estadsticas significativas, siendo el tratamiento T5(PFAr)= 0.24 cm/da el que menor valor de RPC obtuvo. Cuadro 21. Prueba de Tukey (=0.05) del Ritmo Promedio de Crecimiento

(cm/da) de B. bassiana 265 en seis medios diferentes.

Trat.

T3 T2 T4 T1 T6 T5
0.500 0.450 0.400 0.350

Tratamiento Azcar Rubia + Agar Chino Agar Papa Dextrosa+ Levadura de Cerveza Azcar Blanca + Agar Chino Agar Papa Dextrosa Flan + Azcar Blanca Flan + Azcar Rubia

Siglas PArA chino PDAMERK + LC PAbAchino PDAMERK PFAb PFAr

RPC 0.39 0.33 0.33 0.31 0.30 0.24

Sign. abcd abcd abcd abcd abcd abcd

0.387 0.334 0.305 0.334 0.300 0.243

0.300 0.250

RPC

0.200 0.150 0.100 0.050 0.000 T1 T2 T3 T4 T5 T6

Tratamientos
T1 T2 T3 Figura 11. : Agar Papa Dextrosa : Agar Papa Dextrosa+ Levadura de Cerveza : Agar Chino Papa Azcar Rubia T4 T5 T6 : Agar Chino Papa Azcar Blanca : Flan Papa Azcar Rubia : Flan Papa Azcar Blanca

Ritmo Promedio de Crecimiento (cm/da) de B. bassiana 265 en seis medios diferentes.

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Los resultados obtenidos muestran que B. bassiana TM y B. bassiana 265, tuvieron un RPC menor cuando se desarrollaron en el medio a base de flan, esto puede deberse a varios factores, posiblemente el hongo se desarroll lentamente debido a la adaptacin del nuevo medio, tambin pudo deberse que en el momento de realizar el plaqueo con este medio se form una pelcula de agua, ya que este medio se solidificaba fcilmente a medida que se realizaba el plaqueo o pudo deberse a la fermentacin de este medio, como se pudo observar durante el ensayo el flan se fermenta a medida que trascurra el tiempo. Los resultados obtenidos coinciden con el ensayo realizado por HUAQUI (2013) donde B.

bassiana TM, tuvo un RPC menor cuando se desarroll en el medio a base de flan.

B. Crecimiento micelial de M. anisopliae en seis medios de cultivos 1. Ritmo promedio de crecimiento (RPC) de M. anisopliae 302 Se realiz la evaluacin a partir del quinto da, hasta los 10 das despus de la siembra, las evaluaciones se realizaron cada dos das, obtenindose los siguientes resultados (Cuadro 22, Figura 12) se encontr que la diferencia del RPC mayor (0.362 cm/da) con el RPC menor (0.197 cm/da) es de 0.165 cm/da, en la cual el T4 tuvo mayor RPC con 0.362 cm/da, seguido del T2 con 0.350 cm/da, el T1 con 0.348 cm/da, el T3 con 0.319 cm/da, el T6 con 0.242 cm/da y el T5 con 0.197 cm/da, siendo este ltimo tratamiento el que menor RPC obtuvo. Posiblemente esta diferencia de los resultados obtenidos en el RPC, se deba a los diferentes medios probados, en donde el hongo se comport de diferente manera por cada tratamiento, por consecuencia se obtendr diferentes valores para el ritmo promedio de crecimiento.

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Cuadro 22. Resultado del Ritmo Promedio de Crecimiento (cm/da) del aislamiento de M. anisopliae 302 en los diferentes medios de cultivo.
TRAT. R r1 r2 r3 r4 r5
RPC

(PDAMERK)
T1

PDAMERK + LC T2

PArAchino
T3

PAbAchino
T4

PFAr
T5

PFAb
T6

0.310 0.372 0.362 0.344 0.354 0.348

0.336 0.353 0.360 0.376 0.324 0.350

0.350 0.323 0.369 0.302 0.251 0.319

0.313 0.370 0.440 0.341 0.349 0.362

0.311 0.138 0.192 0.207 0.135 0.197

0.170 0.208 0.359 0.221 0.250 0.242

R2

0.86893 0.00057

0.68213 0.00041

0.97101 0.00211

0.99642 0.00228

0.96233 0.00509

0.97358 0.00513

a. Anlisis de Varianza (= 0.05) As mismo de los resultados del Ritmo Promedio de Crecimiento del aislamiento de M. anisopliae de la cepa 302, se procedi a realizar el ANVA (= 0.05) de acuerdo a la prueba de F del ANVA (Cuadro 23), se encontr diferencias estadsticas significativas, esto quiere decir que uno o algunos de los tratamientos de los medios de cultivos estudiados tuvo condiciones ptimos para un mejor y mayor desarrollo del entomopatgeno. Cuadro 23. Anlisis de Variancia (=0.05) del Ritmo Promedio de Crecimiento (cm/da) de M. anisopliae de la cepa 302 F.V. Tratamiento Error Experimental. Total CV = 20.19% G.L. 5 24 29 SC 0.1156 0.0624 CM 0.02312 * 0.00260 F.Cal. 8.89 F.Tab. 2.51

El coeficiente de variabilidad de M. anisopliae cepa 302 fue de 20.19%, esto quiere decir segn CALZADA (1986) que existe una regular homogeneidad en el crecimiento micelial del hongo entre las unidades experimentales de cada uno los tratamiento, es decir los valores de RPC fueron variables entre las repeticiones de cada tratamiento, por lo tanto el entomopatgeno en estudio tuvo un regular comportamiento en el medio de cultivo de cada tratamiento.

56

b. Prueba de Tukey (= 0.05) Al existir diferencias estadsticas significativas en el ANVA (Cuadro 23) del Ritmo Promedio de Crecimiento de M. anisopliae de la cepa 302, se procedi a realizar la prueba de TUKEY (=0.05) (Cuadro 24 y Figura 12), donde se encontr diferencias significativas entre T4(PAbAchino)=0.36 cm/da con respecto a los tratamientos T6 (PFAb)=0.24 cm/da y T5 (PFAr)=0.20 cm/daes decir M. anisopliae obtuvo un mejor crecimiento micelial al desarrollarse en el medio con PAbA Chino que con los otros dos medios a base de Flan (PFAr y PFAb), sin embargo el T4(PAbAchino) con el resto de los tratamientos no se encontr diferencias significativas, pero si existen diferencias numricas, es decir que el tratamiento T4(PAbAchino)=0.36 cm/da fue numricamente superior a los tratamientos T2 (PDAMERK + LC)=0.35 cm/da, T1 (PDAMERK)=0.35 cm/da y T3 (PArA
chino)=0.32

cm/da. Adems no se encontr diferencias significativas entre los tratamientos T3 y T6, es decir que el RPC del hongo en dichos medios de cultivo se comport de forma similar. As mismo el T6 estadsticamente fue similar al tratamiento T5, por lo tanto el tratamiento T6 tuvo un comportamiento similar al T5, ms no, con elT3. Cuadro 24 Prueba de Tukey (=0.05) del Ritmo Promedio de Crecimiento

(cm/da) de M. anisopliae de la cepa 302 en seis medios diferentes. Trat. T4 T2 T1 T3 T6 T5 Tratamiento

Azcar Blanca + Agar Chino Agar Papa Dextrosa+ Levadura de Cerveza Agar Papa Dextrosa Azcar Rubia + Agar Chino Flan + Azcar Blanca Flan + Azcar Rubia

Siglas PAbA chino PDAMERK + LC PDAMERK PArAchino PFAb PFAr

RPC 0.36 0.35 0.35 0.32 0.24 0.20

Sign. abcd abcd abcd abcd abcd abcd

57

0.500 0.450 0.400 0.350 0.300

0.348

0.350 0.319

0.362

RPC

0.250 0.200 0.150 0.100 0.050 0.000 T1 T2 T3 T4 T5

0.242 0.197

T6

Tratamientos
T1 T2 T3 Figura 12. : Agar Papa Dextrosa : Agar Papa Dextrosa+ Levadura de cerveza : Agar Chino Papa Azcar Rubia T4 T5 T6 : Agar Chino Papa Azcar Blanca : Flan Papa Azcar Rubia : Flan Papa Azcar Blanca

Ritmo Promedio de Crecimiento (cm/da) de M. anisopliae de la cepa 302 en seis medios diferentes.

2. Ritmo promedio de crecimiento (RPC) de M. anisopliae 319 Se realiz la evaluacin a partir del quinto da, hasta los 10 das despus de la siembra, las evaluaciones se realizaron cada dos das, obtenindose los siguientes resultados (Cuadro 25, Figura 13) se encontr que la diferencia del RPC mayor (0.309 cm/da) con el RPC menor (0.210 cm/da) es de 0.099 cm/da, en la cual el T4 tuvo mayor ritmo promedio de crecimiento con 0.309 cm/da, seguido del T1 con 0.289 cm/da, el T3 con 0.263 cm/da, el T2 con 0.260 cm/da, el T6 con 0.246 cm/da y el T5 con 0.210 cm/da, siendo este ultimo tratamiento el que menor RPC obtuvo. Posiblemente esta diferencia de los resultados obtenidos en el RPC, se deba a los diferentes medios probados, en donde el hongo se comport de diferente manera por cada tratamiento, por consecuencia se obtendr diferentes valores para el RPC.

58

Cuadro 25. Resultado del Ritmo Promedio de Crecimiento (cm/da) en del aislamiento de M. anisopliae 319 en los diferentes medios de cultivo.
TRAT. R r1 r2 r3 r4 r5
RPC

(PDAMERK)
T1

PDAMERK + LC T2

PArAchino
T3

PAbAchino
T4

PFAr
T5

PFAb
T6

0.304 0.331 0.288 0.271 0.253 0.289

0.303 0.273 0.182 0.263 0.277 0.260

0.313 0.293 0.255 0.215 0.239 0.263

0.285 0.309 0.318 0.310 0.321 0.309

0.163 0.220 0.149 0.195 0.320 0.210

0.208 0.314 0.150 0.321 0.235 0.246

0.90684 0.00089

0.92730 0.00211

0.74242 0.00159

0.93308 0.00021

0.97836 0.00459

0.96834 0.00526

c. Anlisis de Varianza (= 0.05) As mismo de los resultados del Ritmo Promedio de Crecimiento del aislamiento de M. anisopliae de la cepa 319, se procedi a realizar el ANVA (= 0.05) de acuerdo a la prueba de F del ANVA (Cuadro 26), no se encontr diferencias estadsticas significativas, esto quiere decir que posiblemente todos los tratamientos de los medios de cultivos estudiados se comportaron de forma igual ante el crecimiento micelial del entomopatgeno. Cuadro 26. Anlisis de Variancia (=0.05) del Ritmo Promedio de Crecimiento (cm/da) de M. anisopliae de la cepa 319 F.V. Tratamiento Error Experimental Total CV = 22.57% El coeficiente de variabilidad de M. anisopliae de la cepa 319 fue de 22.57%, esto quiere decir segn CALZADA (1986) que existe una regular homogeneidad en el crecimiento micelial del hongo entre las unidades experimentales de cada uno los tratamiento, es decir los valores de RPC fueron variables entre las repeticiones de cada tratamiento, por lo tanto el entomopatgeno en estudio tuvo un regular comportamiento en el medio de cultivo de cada tratamiento. G.L. 5 24 29 SC 0.0297 0.0586 CM 0.00594 ns 0.00244 F.Cal. 2.43 F.Tab. 2.51

59

d. Prueba de Tukey (= 0.05) A pesar que no existe diferencias estadsticas significativas en el ANVA (Cuadro 26) del Ritmo Promedio de Crecimiento de M. anisopliae de la cepa 319, se realiz la prueba de TUKEY (=0.05), (Cuadro 27 y Figura 13) para realizar las comparaciones de medias entre los tratamientos, donde todos los tratamientos a excepcin del tratamiento T4 (PAbAchino)=0.31 cm/da no tuvieron diferencias estadsticas significativas, siendo el tratamiento T5 (PFAr)=0.21 cm/da el que menor valor de RPC obtuvo. El tratamiento T4 (PAbAchino) es numricamente superior al resto de los tratamientos esto posiblemente se deba a que el medio de cultivo contena azcar blanca que es ms refinada que la azcar rubia, tal como lo seala WIKIPEDIA (2013) que indica que el azcar blanca es ms refinada ya que est sometido a un proceso de purificacin qumico a comparacin que el azcar rubia. Posiblemente al ser ms refinada tuvo una mejor asimilacin por el hongo, lo cual se observ un desarrollo ms rpido debido a una fuente de energa que fue metabolizado rpidamente, tal como indica WIKIPEDIA (2012) que los alimentos refinados tienen una mayor asimilacin por los organizamos, adems menciona que la azcar blanca contiene mayor nmero de caloras frente a la azcar rubia.

Adems se puede apreciar que T3 (PArAchino)= 0.26 cm/da con el T2 (PDAMERK + LC)= 0.26 cm/da tienen el mismo RPC, es decir el entomopatgeno se comporto igual en ambos medios de cultivo. Cuadro 27. Prueba de Tukey (=0.05) del Ritmo Promedio de Crecimiento

(cm/da) de M. anisopliae de la cepa 319 en seis medios diferentes.

Trat. T4 T1 T3 T2 T6 T5 Tratamiento Azcar Blanca + Agar Chino Agar Papa Dextrosa Azcar Rubia + Agar Chino Agar Papa Dextrosa + Levadura de Cerveza Flan + Azcar Blanca Flan + Azcar Rubia Siglas PAbA chino PDAMERK PArAchino PDAMERK + LC PFAb PFAr RPC 0.31 0.29 0.26 0.26 0.25 0.21 Sign. Abcd Abcd Abcd Abcd Abcd Abcd

60
0.500 0.450 0.400 0.350 0.300 0.250

0.289 0.260

0.309 0.263 0.210 0.246

RPC

0.200 0.150 0.100 0.050 0.000 T1 T2 T3 T4 T5 T6

Tratamientos
T1 T2 T3 Figura 13. : Agar Papa Dextrosa : Agar Papa Dextrosa+ Levadura de cerveza : Agar Chino Papa Azcar Rubia T4 T5 T6 : Agar Chino Papa Azcar Blanca : Flan Papa Azcar Rubia : Flan Papa Azcar Blanca

Ritmo Promedio de Crecimiento (cm/da) de M. anisopliae del aislamiento 319 en seis medios diferentes.

Los resultados obtenidos muestran que M. anisopliae 302 y M. anisopliae 319, tuvieron un RPC menor cuando se desarrollaron en el medio a base de flan, esto puede deberse a varios factores tal como sucedi con B. bassiana TM y B. bassiana 265, en donde posiblemente el hongo se desarroll lentamente debido a la adaptacin del nuevo medio, tambin pudo deberse que en el momento de realizar el plaqueo con este medio se form una pelcula de agua, ya que este medio se solidificaba fcilmente a medida que se realizaba el plaqueo o pudo deberse a la fermentacin de este medio, como se pudo observar durante el ensayo el flan se fermenta a medida que trascurra el tiempo. Los resultados obtenidos coinciden con el ensayo realizado por HUAQUI (2013) donde B. bassiana TM, tuvo un RPC menor cuando se

desarroll en el medio a base de flan.

61

C. Conteo de conidias de B. bassiana en seis medios de cultivos 1. Conteo de conidias de B. bassiana - TM a. Anlisis de Varianza (= 0.05) Se realiz el ANVA (= 0.05) de acuerdo a la prueba de F del ANVA (Cuadro 28), se encontr diferencias estadsticas significativas, esto quiere decir que uno o algunos de los tratamientos de los medios de cultivos estudiados tuvo condiciones ptimos para un mejor y mayor produccin de conidias/cm2 del entomopatgeno. Cuadro 28. Anlisis de Variancia (=0.05) del conteo de conidias/cm2de B. bassiana TM en los seis medios de cultivos F.V. Tratamiento Error Experimental Total CV = 26.82% G.L. 5 12 17 SC 7.05x1016 4.07x1015 CM 1.41x1016 * 3.39x1014 F.Cal. 41.56 F.Tab. 3.00

El coeficiente de variabilidad del conteo de conidias de B. bassiana TM fue de 26.82%, esto quiere decir segn CALZADA (1986) que existe un resultado variable en el conteo de conidias del hongo entre las unidades experimentales de cada uno los tratamiento, es decir el nmero de conidias/cm2es muy variado entre las repeticiones de cada tratamiento. b. Prueba de Tukey (= 0.05) Al existir diferencias estadsticas significativas en el ANVA (Cuadro 28) del conteo de conidias de B. bassiana TM , se procedi a realizar la prueba de TUKEY (=0.05) (Cuadro 29 y Figura 14), donde se encontr diferencias estadsticas significativas del T3 (PArAchino)=2.07x108, T4 (PAbAchino)=1.73x108, T2(PDAMERK + LC)=1.73x10 y T1 (PDAMERK)=1.68x108, con los tratamientos T6(PFAb)=6.58x107 y T5 (PFAr)=3.72x107, es decir en entomopatgeno se comport de manera diferente cuando se us los medios hechos a base de flan. Esto pudo deberse a que los medios hechos a base de flan se fermentaban

62

mientras transcurran los das, esto se pudo observar al momento de realizar las evaluaciones. Adems se puede apreciar que el T6 (PFAb)=6.58x107 con el T5 (PFAr)=3.72x107 no se encontr diferencias estadsticas significativas, es decir que el entomopatgeno se comporta de forma similar al usar cualquiera de estos dos medios. De igual manera con los tratamientos T 3 (PArAchino)=2.07x108, T4 (PAbAchino)=1.73x108, T2 (PDAMERK + LC)= 1.73x108 y T1 (PDAMERK)=1.68x108 no se encontraron diferencias estadsticas significativas entre ellos, es decir que el hongos se comportara de forma similar al usarse cualquiera de estos medios Los valores obtenidos del nmero de conidias/cm 2 en el presente trabajo de investigacin fue superior a los obtenidos por LIU et al. (2003) donde obtuvieron concentraciones de conidias entre 1.6x10 6 a 15.5x106 conidios/cm2 para los aislamientos de Beauveria y Metarhizium despus de de 10 das de incubacin a 20 C (oscil) en el medio medios agar de dextrosa ms doce y veinticinco % de extracto de levadura.
Cuadro 29. Nmero de conidias/cm2 de suspensin de B. bassiana TM en los diferentes medios de cultivos.

Tratamiento T3 T4 T2 T1 T6 T5

Tratamiento PArAChino PAbAChino PDAMERK + LC PDAMERK PFAb PFAr

Conidias/cm2 2.07 x 108 1.73 x 108 1.73 x 108 1.68 x 108 6.58 x 107 3.72 x 107

Sign. ab ab ab ab ab ab

63 2.50E+08

NUMERO DE CONIDIAS

2.00E+08

1.73 x 108 1.68 x 108

2.07 x 108 1.73 x 108

1.50E+08 1.00E+08

6.58 x107
5.00E+07 0.00E+00

3.72 x 107

T1

T2

T3

T4

T5

T6

TRATAMIENTOS
T1 T2 T3 Figura 14. : Agar Papa Dextrosa : Agar Papa Dextrosa+ Levadura de cerveza : Agar Chino Papa Azcar Rubia
2

T4 T5 T6

: Agar Chino Papa Azcar Blanca : Flan Papa Azcar Rubia : Flan Papa Azcar Blanca

Nmero de conidias/cm de suspensin de B. bassiana TM en los diferentes medios de cultivos.

2. Conteo de conidias de B. bassiana - 265 a. Anlisis de Varianza (= 0.05) Se realiz el ANVA (= 0.05) de acuerdo a la prueba de F del ANVA (Cuadro 30), se encontr diferencias estadsticas significativas, esto quiere decir que uno o algunos de los tratamientos de los medios de cultivos estudiados tuvo condiciones ptimos para un mejor y mayor desarrollo del entomopatgeno. Cuadro 30. Anlisis de Variancia (=0.05) del conteo de conidias/cm2 de B. bassiana 265 en los seis medios de cultivos F.V. Tratamiento Error Experimental Total CV =15.65% G.L. 5 12 17 SC 3.40 x 10
16

CM 6.79 x 10
15

F.Cal. * 77.11

F.Tab. 3.00

1.06 x 1015

8.81 x 1013

64

El coeficiente de variabilidad del conteo de conidias de B. bassiana 265 fue de 15.65%, esto quiere decir segn CALZADA (1986) que existe adecuada homogeneidad de conidias/cm2 del hongo entre las unidades experimentales de cada uno de los tratamientos, es decir que el nmero de conidias por ml son homogneos entre las repeticiones de cada tratamiento, donde el

entomopatgeno tiene un comportamiento similar. b. Prueba de Tukey (= 0.05) Al existir diferencias estadsticas significativas en el ANVA (Cuadro 30) del conteo de conidias de B. bassiana 265, se procedi a realizar la prueba de TUKEY (=0.05) (Cuadro 31 y Figura 15), donde se encontr diferencias estadsticas significativas de los tratamientos T1(PDAMERK)=1.62x108 y T4(PAbAchino)=1.58x108 con los dems tratamientos en estudio, sin embargo entre estos dos tratamientos T1 yT4 no se encontr diferencias significativas,siendo el T1 (PDAMERK)=1.62x108 superior numricamente con el resto de los tratamientos., es decir el T1 obtuvo numricamente el mayor nmero de conidias/cm2. Adems se puede apreciar en la prueba realizada que el T6 (PFAb)=7.29x107 con el T5 (PFAr)=4.89x107 no se encontr diferencias estadsticas significativas, es decir que en ambos tratamientos el entomopatgeno se desarrolla de forma similar. Los valores obtenidos del nmero de conidias/cm 2 en el presente trabajo de investigacin fue superior a los obtenidos por LIU et al. (2003) donde obtuvieron concentraciones de conidias entre 1.6x10 6 a 15.5x106 conidios/cm2 para los aislamientos de Beauveria y Metarhizium despus de de 10 das de incubacin a 20 C (oscil) en el medio medios agar de dextrosa ms doce y veinticinco % de extracto de levadura.

65

Cuadro 31

Nmero de conidias/cm2 de suspensin de B. bassiana 265 en los diferentes medios de cultivos.

Tratamiento T1 T4 T2 T3 T6 T5

Tratamiento PDAMERK PAbAChino PDAMERK + LC PArAChino PFAb PFAr

Conidias/cm2 1.62 x 108 1.58 x 108 1.47 x 108 1.31 x 108 7.29 x 107 4.89 x 107

Sign. abcde abcde abcde abcde abcde abcde

1.80E+08

1.62 x 108
1.60E+08 1.40E+08 1.20E+08 1.00E+08 8.00E+07 6.00E+07 4.00E+07 2.00E+07 0.00E+00

1.47 x 108

1.58 x 108

NUMERO DE CONIDIAS

1.31 x 108

7.29 x 107 4.89 x 107

T1

T2

T3 Tratamientos

T4

T5

T6

T1 T2 T3 Figura 15.

: Agar Papa Dextrosa : Agar Papa Dextrosa + Levadura de cerveza : Agar Chino Papa Azcar Rubia
2

T4 T5 T6

: Agar Chino Papa Azcar Blanca : Flan Papa Azcar Rubia : Flan Papa Azcar Blanca

Nmero de conidias/cm de suspensin de B. bassiana 265 en los diferentes medios de cultivos.

66

La relacin existente entre el Ritmo Promedio de Crecimiento (RPC) con la formacin de conidias por cm2 es directa en ambos entomopatgenos, es decir a mayor RPC tenga B. bassiana TM y B. bassiana 265 mayor ser la formacin de conidias por cm2, as como se muestra en la figura N 16 y la figura N 17 respectivamente, adems se puede observar ambas figuras que no todos los medios se comportaron de forma similar ya que en la figura N 16 y la figura N 17 el tratamiento T4 y T3 respectivamente son los que tienen un RPC mayor sin embargo forman menor nmero de conidias por cm 2 numricamente, esto posiblemente puede deberse a que exista competencia entre ellos por espacio, alimento, oxigeno, etc. o puede ser el entomopatgeno en estudio al llegar a su mxima colonizacin ya no desarrolle y por ende ya no forman mas conidias, mientras que estadsticamente se comporta de forma similar al los dems medios, mas no con el tratamiento T6 y T5 respectivamente, siendo estos dos tratamientos los que presentaron un menor RPC y nmero de conidias por cm2. 2.50E+08

N de Conidias/cm2

2.00E+08 1.50E+08 1.00E+08 5.00E+07 0.00E+00 y = 2x107 X + 6x107 R = 0.378

RPC

T1 T2 T3 Figura 16.

: Agar Papa Dextrosa : Agar Papa Dextrosa+ Levadura de cerveza : Agar Chino Papa Azcar Rubia
2

T4 T5 T6

: Agar Chino Papa Azcar Blanca : Flan Papa Azcar Rubia : Flan Papa Azcar Blanca

Relacin de Nmero de conidias/cm con el Ritmo Promedio de Crecimiento (RPC) de B. bassiana TM en los diferentes medios de cultivos.

67

1.80E+08 1.60E+08 1.40E+08 1.20E+08 1.00E+08 8.00E+07 6.00E+07 4.00E+07 2.00E+07 0.00E+00

N de Conidias/cm2

y = 2x107 X + 6x107 R = 0.498

RPC
T1 T2 T3 Figura 17. : Agar Papa Dextrosa : Agar Papa Dextrosa+ Levadura de cerveza : Agar Chino Papa Azcar Rubia
2

T4 T5 T6

: Agar Chino Papa Azcar Blanca : Flan Papa Azcar Rubia : Flan Papa Azcar Blanca

Relacin de Nmero de conidias/cm con el Ritmo Promedio de Crecimiento (RPC) de B. bassiana 265 en los diferentes medios de cultivos.

Informaciones sobre el nmero de conidias/cm 2 de Beauveria bassiana, es muy escasa, sin embargo es necesario conocer estos valores que contribuyen a la seleccin de microorganismos eficientes en la produccin de conidias en medio de cultivo, para una mejor seleccin de estos en programas de control biolgico, la necesidad de tener entomopatgenos con una mayor produccin de conidias/cm2 radica en el hecho de una mayor colonizacin del medio, por consiguiente tendr condiciones necesarias para un mejor desarrollo en los sustratos y patogenecidad de los insectos.

68

D. Conteo de conidias de M. anisopliae en seis medios de cultivos 1. Conteo de conidias de M. anisopliae - 302 a. Anlisis de Varianza (= 0.05) Se realiz el ANVA (= 0.05) de acuerdo a la prueba de F del ANVA (Cuadro 32), se encontr diferencias estadsticas significativas, esto quiere decir que uno o algunos de los tratamientos de los medios de cultivos estudiados tuvo condiciones ptimas para un mejor y mayor desarrollo del entomopatgeno. Cuadro 32. Anlisis de Variancia (=0.05) del conteo conidias/cm2de M. anisopliae 302 en los seis medios de cultivos F.V. Tratamiento Error Experimental. Total CV = 17.17% G.L. 5 12 17 SC 1.85 x 1016 3.25 x 1014 CM 3.70 x 1015 * 2.71 x 1013 F.Cal. 136.50 F.Tab. 3.00

El coeficiente de variabilidad del conteo de conidias de M. anisopliae 302 fue de 17.17%, esto quiere decir segn CALZADA (1986) que existe ventajosa homogeneidad en el conteo de conidias hongo entre las unidades experimentales de cada uno los tratamiento, es decir que el nmero de conidias/cm2 son homogneos entre las repeticiones de cada tratamiento, donde el

entomopatgeno tuvo un comportamiento similar. b. Prueba de Tukey (= 0.05) Al existir diferencias estadsticas significativas en el ANVA (Cuadro 32) del conteo de conidias de M. anisopliae 302, se procedi a realizar la prueba de TUKEY (=0.05) (Cuadro 33 y Figura 18), donde se encontr diferencias estadsticas del T3(PArAChino)=8.86x107, el T1(PDAMERK)=8.76x107 y el T2(PDAMERK)=8.58x107 con respecto al resto de los tratamientos, sin embargo entre estos tres tratamientos T3, T1 y T2 no existe diferencias estadsticas, siendo el T3 (PArAChino)=8.86x107 superior numricamente a todos los tratamientos, es decir al sembrar M. anisopliae 302 en el tratamiento T3 (PArAChino) se obtendr mayor

69

numero de conidias/cm2, pero estadsticamente no existe variacin para obtener cantidades similares de conidias/cm2entre los tratamientos T3, T1 y T2 Adems no se encontr diferencias estadsticas entre los tratamientos T6(PFAb)=2.20x107con el T5 (PFAr)=1.10x107siendo el T5 (PFAr) el que menor nmero de conidias/cm2 obtuvo, es decir que se obtuvo menor nmero de conidias/cm2 cuando se uso los medios hechos a base de flan. Esto pudo deberse a que los medios que contenan flan se fermentaban mientras transcurran los das, esto se pudo observar al momento de realizar las evaluaciones. Los valores obtenidos del nmero de conidias/cm 2 en el presente trabajo de investigacin fue superior a los obtenidos por LIU et al. (2003) donde obtuvieron concentraciones de conidias entre 1.6x10 6 a 15.5x106 conidios/cm2 para los aislamientos de Beauveria y Metarhizium despus de de 10 das de incubacin a 20 C (oscil) en el medio medios agar de dextrosa ms doce y veinticinco % de extracto de levadura. Adems nuestros valores obtenidos de concentracin de conidias/cm 2 Metarhizium anisopliae fueron similares a los obtenidos por KABALUK et,al (2007), quienes obtuvieron 6,38 x 107 conidios/cm2 formulados con grnulos, 4,22 x 106 conidios/cm2 mezclados con el suelo y con semillas de trigo 2,12 x 10 7 conidios cm2. Los valores obtenidos de concentracin de conidias/cm 2 de M. anisopliae en todos los tratamientos (diferentes medios de cultivo) fueron superiores a 1x107, esto significa que estamos ante un aislamiento muy favorable para los programas de control biolgico, tal como lo reporta KABALUK et,al (2007), donde en report en los estudios realizados que M. anisopliae se puede aplicar en el campo para infectar y matar los gusanos de alambre (Agriotes obscures), en concentraciones superiores a 4 x 106 conidios cm2.

70

Cuadro 33. Nmero de conidias/cm2 de suspensin de M. anisopliae 302 en los diferentes medios de cultivos. Tratamiento T3 T1 T2 T4 T6 T5 Tratamiento PArAChino PDAMERK PDAMERK + LC PAbAChino PFAb PFAr Conidias/cm2 8.86 x 107 8.76x 107 8.58x 107 6.89x 10
7

Sign. abcde abcde abcde abcde abcde abcde

2.20x 107 1.10x 107

1.00E+08 9.00E+07 8.00E+07

8.58 x 10 7 8.76 x 10
7

8.86 x 10 7

NUMERO DE CONIDIAS

7.00E+07 6.00E+07 5.00E+07 4.00E+07 3.00E+07

6.89 x 10 7

2.20 x 10 7
2.00E+07

1.10 x 10 7
1.00E+07 0.00E+00

T1

T2

T3

T4

T5

T6

TRATAMIENTOS
T1 T2 T3 : Agar Papa Dextrosa : Agar Papa Dextrosa + Levadura de cerveza : Agar Chino Papa Azcar Rubia T4 T5 T6 : Agar Chino Papa Azcar Blanca : Flan Papa Azcar Rubia : Flan Papa Azcar Blanca

Figura 18.

Nmero de conidias/cm de suspensin de M. anisopliae 302 en los diferentes medios de cultivos.

71

2. Conteo de conidias de M. anisopliae - 319 a. Anlisis de Varianza (= 0.05) Se realiz el ANVA (= 0.05) de acuerdo a la prueba de F del ANVA (Cuadro 34), se encontr diferencias estadsticas significativas, esto quiere decir que uno o algunos de los tratamientos de los medios de cultivos estudiados tuvo condiciones ptimos para un mejor y mayor desarrollo del entomopatgeno. Cuadro 34. Anlisis de Variancia (=0.05) del conteo de conidias de M. anisopliae 319 en los seis medios de cultivos F.V. Tratamiento Error Experimental. Total CV =23.10% G.L. 5 12 17 SC 1.24 x 1016 2.24 x 1014 CM 2.49 x 1015 * 1.87 x 1013 F.Cal. 133.12 F.Tab. 3.00

El coeficiente de variabilidad de M. anisopliae de la cepa 319 fue de 23.10%, esto quiere decir segn CALZADA (1986) que existe una ventajosa homogeneidad en la cantidad de conidias/cm2 del entomopatgeno entre las unidades experimentales de cada uno los tratamiento, es decir que la cantidad de conidias fueron variables entre las repeticiones de cada tratamiento, por lo tanto el entomopatgeno en estudio tuvo un regular comportamiento en el medio de cultivo de cada tratamiento. c. Prueba de Tukey (= 0.05) Al existir diferencias estadsticas significativas en el ANVA (Cuadro 34) del conteo de conidias de M. anisopliae 319, se procedi a realizar la prueba de TUKEY ( = 0.05) (Cuadro 35 y Figura 19), donde se encontr diferencias estadsticas significativas en los tratamientos T2 (PDAMERK + LC)=7.35x107 y T1(PDAMERK)=7.03x107 con respecto al resto de los tratamientos, sin embargo entres estos dos tratamientos T2(PDAMERK + LC)y T1(PDAMERK) no existe diferencias estadsticas significativas, siendo el T 2(PDAMERK + LC) superior

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numricamente a todos los tratamientos. Adems no se encontr diferencias estadsticas significativas entre los tratamientos T 3(PArAChino)=3.60x107 y T4 (PAbAChino)=2.76x107 del mismo modo entre los tratamientos T5(PFAr)=9.95x106 con el T6(PFAb)=7.23x106, sin embargo los tratamientos T3(PArAChino) T4(PAbAChino) fueron estadsticamente superior a los tratamientos T 5 (PFAr) y T6 (PFAb), siendo estos dos ltimos que menor valor de concentracin de conidias/cm2 obtuvieron, esto pudo deberse a que los medios que contenan flan se fermentaban mientras transcurran los das, esto se pudo observar al momento de realizar las evaluaciones. Los valores obtenidos del nmero de conidias/cm 2 en el presente trabajo de investigacin fue superior a los obtenidos por LIU et al. (2003) donde obtuvieron concentraciones de conidias entre 1.6x10 6 a 15.5x106 conidios/cm2 para los aislamientos de Beauveria y Metarhizium despus de 10 das de

incubacin a 20 C (oscil) en el medio medios agar de dextrosa ms doce y veinticinco % de extracto de levadura. Adems nuestros valores obtenidos de concentracin de conidias/cm 2 Metarhizium anisopliae fueron similares a los obtenidos por KABALUK et,al (2007), quienes obtuvieron 6,38 x 107 conidios/cm2 formulados con grnulos, 4,22 x 106 conidios/cm2 mezclados con el suelo y con semillas de trigo 2,12 x 10 7 conidios cm2. Los valores obtenidos de concentracin de conidias/cm 2 de M. anisopliae en todos los tratamientos (diferentes medios de cultivo) fueron superiores a 1x107, esto significa que estamos ante un aislamiento muy favorable para los programas de control biolgico, tal como lo reporta KABALUK et,al (2007), donde en report en los estudios realizados que M. anisopliae se puede aplicar en el campo para infectar y matar los gusanos de alambre ( Agriotes obscures), en concentraciones superiores a 4 x 106 conidios cm2.

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Cuadro 35. Nmero de conidias/cm2de suspensin de M. anisopliae 319 en los diferentes medios de cultivos. Tratamiento T2 T1 T3 T4 T6 T5
8.00E+07 7.03 x 107 7.00E+07

Tratamiento
PDAMERK + LC PDAMERK PArAChino PAbAChino PFAb PFAr

Conidias/cm2 7.35 x 107 7.03 x 107 3.60 x 107 2.76 x 107 9.95 x 106 7.23 x 106

Sign. abcde abcde abcde Abcde Abcde Abcde

7.35 x 107

NUMERO DE CONIDIAS

6.00E+07 5.00E+07 4.00E+07 3.00E+07 2.00E+07 1.00E+07 0.00E+00

T1 T2 T3 T4 T5 T6

3.60 x 107 2.76 x 107

7.23 x 106

9.95 x 106

Tratamientos
T1 T2 T3 Figura 19. : Agar Papa Dextrosa : Agar Papa Dextrosa+ Levadura de cerveza : Agar Chino Papa Azcar Rubia
2

T4 T5 T6

: Agar Chino Papa Azcar Blanca : Flan Papa Azcar Rubia : Flan Papa Azcar Blanca

Nmero de conidias/ cm de suspensin de M. anisopliae 319 en los diferentes medios de cultivos.

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La relacin existente entre el Ritmo Promedio de Crecimiento (RPC) con la formacin de conidias por cm2 es directa en ambos entomopatgenos, es decir a mayor RPC tenga M. anisopliae 302 y M. anisopliae 319 mayor ser la formacin de conidias por cm2, as como se muestra en la figura N 20 y la figura N 21 respectivamente, adems se puede observar ambas figuras que no todos los medios se comportaron de forma similar. El tratamiento T4 en ambos entomopatgenos tuv un RPC mayor sin embargo form menor nmero de conidias por cm2, esto posiblemente puede deberse a que existe competencia entre ellos por espacio, alimento, oxigeno, etc. o puede ser que los entomopatgenos en estudio al llegar a su mxima colonizacin ya no desarrolle y por ende ya no forman mas conidias, mientras que los tratamiento T5 y T6 son los que presentaron un menor RPC y nmero de conidias por cm2 en ambos entomopatgenos tal como se observa en la figura 20 y la figura 21.

1.00E+08 9.00E+07 8.00E+07 7.00E+07 6.00E+07 5.00E+07 4.00E+07 3.00E+07 2.00E+07 1.00E+07 0.00E+00

N de Conidias/cm2

y = 1x107 X + 1x107 R = 0.533

RPC
T1 T2 T3 Figura 20. : Agar Papa Dextrosa : Agar Papa Dextrosa+ Levadura de cerveza : Agar Chino Papa Azcar Rubia
2

T4 T5 T6

: Agar Chino Papa Azcar Blanca : Flan Papa Azcar Rubia : Flan Papa Azcar Blanca

Relacin de Nmero de conidias/cm con el Ritmo Promedio de Crecimiento (RPC) de M. anisopliae 302 en los diferentes medios de cultivos.

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8.00E+07
N de Conidias/cm2 7.00E+07 6.00E+07 5.00E+07 4.00E+07 3.00E+07 2.00E+07 1.00E+07 0.00E+00 y = 7x106 X + 1x107 R = 0.207

RPC

T1 T2 T3 Figura 21.

: Agar Papa Dextrosa : Agar Papa Dextrosa+ Levadura de cerveza : Agar Chino Papa Azcar Rubia
2

T4 T5 T6

: Agar Chino Papa Azcar Blanca : Flan Papa Azcar Rubia : Flan Papa Azcar Blanca

Relacin de Nmero de conidias/cm con el Ritmo Promedio de Crecimiento (RPC) de M. anisopliae 319 en los diferentes medios de cultivos.

Informaciones sobre el nmero de conidias/cm2 de Metarhizium anisopliae, es muy escasa, sin embargo es necesario conocer estos valores que contribuyen a la seleccin de microorganismos eficientes en la produccin de conidias en medio de cultivo, para una mejor seleccin de estos en programas de control biolgico, la necesidad de tener entomopatgenos con una mayor produccin de conidias/cm2 radica en el hecho de una mayor colonizacin del medio, por consiguiente tendr condiciones necesarias para un mejor desarrollo en los sustratos y patogenecidad de los insectos.

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E. Conteo de conidias de B. bassiana y M. anisopliae en cinco sustratos diferentes 1. Conteo de conidias de B. bassiana TM Para pasar a realizar el conteo de conidias en los sustratos en estudio se seleccion a aquel que tuvo mayor nmero de conidias en los diferentes medios de cultivo. Para este ensayo se trabaj con B. bassiana TM porque el mayor nmeros de conidias se encontr en esta cepa que es nativo de la zona de Tingo Mara puede ser debido a esto que se encontr mayor nmero de conidias en esta cepa del hongo ya que dicho hongo est en sus condiciones adecuadas y/o aclimatadas. Y se eligi a los tres mejores medios en las que se encontr mayor nmero de conidias por ml. Por lo tanto se trabaj con PDAMERK + LC, PArAChino y PAbAChino realizndose tres repeticiones por cada sustrato en estudio de las cuales se obtuvo los siguientes resultados. (Cuadro 36 y Figura 22)

Para la concentracin de conidias en cada uno de los tratamientos se encontr que el nmero de conidias por mililitro (conidias/ml) el que obtuvo el mayor nmero de conidias fue en el morn como sustrato del medio proveniente o hecho a base de PAbAChino con 5.78x108 conidias/ml seguidamente el arroz con 3.55x108 conidias/ml, el trigo 2.34x108 conidias/ml, el garbanzo 6.25x107 conidias/ml y la cebada 8.95x106 conidias/ml, siendo como el sustrato que menor nmero de conidia/ml. Adems con el medio de cultivo PArAChino que fue llevado a sustratos se obtuvo los siguientes resultados: el sustrato que obtuvo mayor nmero de conidias por mililitro es el arroz (2.38x108conidias/ml), seguidamente el morn (3.17 x108conidias/ml), el trigo (2.12x108conidias/ml), garbanzo (7.25 x107conidias/ml) y cebada (1.69 x107conidias/ml) respectivamente; coincidiendo tambin que la cebada produce menor nmero de conidias por mililitro a comparacin de los dems sustratos y con el medio de cultivo PDAMERK + LC son los siguientes resultados: en el arroz (3.37 x108 conidias/ml) de all siguindole trigo (2.24 x108 conidias/ml), morn (2.20 x108 conidias/ml), garbanzo (5.43 x107 conidias/ml) y cebada (1.53 x107 conidias/ml). que en los tres casos el entomopatgeno se desarrolla mejor en morn, arroz y trigo obtenindose mayor nmero de conidias que en los sustratos de garbanzo y cebada.

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Segn los resultados obtenidos la concentracin de conidias llevados es el esperado, esto coincide con MONSON (2001) en donde indica que el rendimiento est determinado por la cepa y por el estado de la misma y vara desde 5x103hasta 2.5x1011 conidias/g de polvo, generalmente las cepas de B. bassiana tiene mejor rendimiento que las de M. anisopliae y entre las cepas de una misma especie tambin existen diferencias de rendimiento. As mismo estaramos dentro del control de calidad deseado, segn GOMEZ et al., (2002) indica que la concentracin de conidias para que el biopreparado se considere de buena calidad, debe tener una concentracin mayor o igual a 108 conidias por gramo o mililitro. En tal sentido el aislamiento de B. bassiana TM de los diferentes medios propagado en arroz, trigo y morn presentar concentraciones deseadas para una produccin de calidad, mas no se recomienda garbanzo ni cebada porque estos sustratos no cumplen con la produccin de calidad.

Con respecto al nmero de conidias por mililitro (conidias/ml), en tal sentido al producir B. bassiana TM utilizando los sustratos de arroz o trigo o morn, se obtendr la misma concentracin de conidias/ml. Esto coincide con MONZON (2001) que manifiesta que la produccin de hongos entomopatgenos hasta la fecha se han evaluado diferentes tipos de sustratos naturales, principalmente arroz, trigo, maz, frijol y soya, pero lo ms utilizados son arroz y trigo. En los ensayos realizados tanto el arroz y el trigo tuvieron estadsticamente un comportamiento similar al igual que el morn, sustrato que MONZON (2001) no lo reporta como insumo para la produccin de B. bassiana. Estas diferencias pueden deberse que el hongo se desarroll fcilmente en la superficie de los sustratos de los tratamientos arroz, trigo y morn porque no posean una barrera para que el hongo puede colonizar y alimentarse de su materia orgnica, es decir una cubierta propia del cereal, esto se debe a los tratamientos poscosecha que permite obtener el morn, trigo y arroz sin ninguna cubierta vegetal de sus semillas, sin embargo en el caso del cebada y garbanzo el desarrollo micelial fue menor esto se debe a que la cebada posea una cubierta vegetal y posiblemente esto impidi a B. bassiana TM colonizar, alimentarse y desarrollarse fcilmente, al igual que en el garbanzo se observ que el crecimiento del hongo era muy lentamente.

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Cuadro 36. Nmero de conidias por mililitro de suspensin de B. bassiana TM por gramo de sustrato (Arroz, morn, trigo, cebada y garbanzo).
Repeticin Tratamientos PDAMERK + LC
C A B A B A B A B A B A B A B A B A B A B A B A B A B A B A B r1 1294 1317 1797 1892 1905 1951 1147 1132 1750 1748 3315 3287 1207 1198 1117 1104 1254 1263 235 324 438 414 89 383 75 37 96 74 42 43 G. A. 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 r2 1222 1207 1614 1729 1985 1833 1217 1153 1694 1711 2987 2914 1223 1214 1149 1137 1258 1254 247 234 318 407 387 394 118 94 87 92 51 41 G. A. 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 r3 1286 1343 1816 1773 1818 1994 1168 1296 1698 1684 3224 2987 1202 1214 1152 1196 1278 1264 317 403 394 378 384 389 74 97 102 98 62 51 G. A. 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27

Repeticin 0.1
Promedio Conidias/cc r1 479.26 487.78 665.56 700.74 705.56 722.59 424.81 419.26 648.15 647.41 1227.78 1217.41 447.04 443.70 413.70 408.89 464.44 467.78 87.04 120.00 162.22 153.33 32.96 141.85 27.78 13.70 35.56 27.41 15.56 15.93 r2 452.59 447.04 597.78 640.37 735.19 678.89 450.74 427.04 627.41 633.70 1106.30 1079.26 452.96 449.63 425.56 421.11 465.93 464.44 91.48 86.67 117.78 150.74 143.33 145.93 43.70 34.81 32.22 34.07 18.89 15.19 r3 476.30 497.41 672.59 656.67 673.33 738.52 432.59 480.00 628.89 623.70 1194.07 1106.30 445.19 449.63 426.67 442.96 473.33 468.15 117.41 149.26 145.93 140.00 142.22 144.07 27.41 35.93 37.78 36.30 22.96 18.89 473.40 655.62 709.01 439.07 634.88 1155.19 448.02 423.15 467.35 108.64 145.00 125.06 30.56 33.89 17.90 2.37 x 107 3.28 x 107 3.55 x 107 2.20 x 107 3.17 x 107 5.78 x 107 2.24 x 107 2.12 x 107 2.34 x 107 5.43 x 106 7.25 x 106 6.25 x 106 1.53 x 106 1.69 x 106 8.95 x 105

S. O. 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10

g 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00

Conidias/g 2.37x 108 3.28x 108 3.55x 108 2.20x 108 3.17x 108 5.78x 108 2.24x 108 2.12x 108 2.34x 108 5.43x 107 7.25 x 107 6.25 x 107 1.53 x 107 1.69 x 107 8.95 x 106

T1

PArAChino PAbAChino PDAMERK + LC

T2

PArAChino PAbAChino PDAMERK + LC

T3

PArAChino PAbAChino PDAMERK + LC

T4

PArAChino PAbAChino PDAMERK + LC

T5

PArAChino PAbAChino

T1 T2 T3

: Arroz : Morn : Trigo

T4 T5

: Garbanzo : Cebada

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7.00E+08 6.00E+08

5.00E+08
4.00E+08 3.00E+08 2.00E+08 1.00E+08 0.00E+00
PArAChino PArAChino PArAChino PArAChino PDAMERK + LC PDAMERK + LC PDAMERK + LC PDAMERK + LC PDAMERK + LC PAbAChino PAbAChino PAbAChino PAbAChino PArAChino PAbAChino

ARROZ

MORON

TRIGO

GARBANZO

CEBADA

T1 : Arroz T2 : Morn T3 : Trigo

Figura 22.

T4 : Garbanzo T5 : Cebada

Nmero de conidias por mililitro de suspensin de B. bassiana TM en los diferentes sustratos (arroz, morn, trigo, garbanzo y cebada).

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2. Conteo de conidias de M. anisopliae 302 Para pasar a realizar el conteo de conidias en los sustratos en estudio se seleccion a aquel que tuvo mayor nmero de conidias al igual como se realiz para el conteo de conidias por mililitro. Por lo tanto se trabaj con PDAMERK, PDAMERK + LC, y PArAChino realizndose tres repeticiones por cada sustrato en estudio de las cuales se obtuvo los siguientes resultados. (Cuadro 37 y Figura 23)

Para la concentracin de conidias en cada uno de los tratamientos se encontr que el nmero de conidias por mililitro (conidias/ml) el que obtuvo el mayor nmero de conidias el hongos del PDAMERK en arroz (4.92x108 conidias/ml), el morn (1.03 x108 conidias/ml), en trigo (4.03 x108 conidias/ml), en garbanzo (1.64 x108 conidias/ml)y en cebada (1.93 x107 conidias/ml), siendo como el sustrato que menor nmero de conidia/ml. Adems el hongo proveniente del medio de cultivo PDAMERK + LC que fue pasado a sustratos se obtuvo los siguientes resultado: el sustrato que obtuvo mayor nmero de conidias por mililitro es el morn (8.28x108 conidias/ml),siguindole el arroz (3.50 x108 conidias/ml), trigo (2.97x108 conidias/ml), garbanzo (1.73 x108conidias/ml) y cebada (1.80 x107conidias/ml) respectivamente; coincidiendo tambin que la cebada produce menor nmero de conidias por mililitro a comparacin de los dems sustratos y con el medio de cultivo PArAChino se obtuvo con mayor nmero de conidias presentados es en el morn(8.26 x108 conidias/ml) de all siguindole el arroz (4.24 x108 conidias/ml), el trigo(2.63 x108 conidias/ml), garbanzo (1.96 x108 conidias/ml) y cebada (2.48 x107 conidias/ml). que en los tres casos el entomopatgeno se desarrolla mejor en morn, arroz, trigo y garbanzo obtenindose mayor nmero de conidias que en el sustrato probado con cebada.

Segn los resultados obtenidos la concentracin de conidias llevados es el esperado, esto coincide con MONSON (2001) en donde indica que el rendimiento est determinado por la cepa y por el estado de la misma y vara desde 5x103hasta 2.5x1011 conidias/g de polvo, generalmente las cepas de B. bassiana tiene mejor rendimiento que las de M. anisopliae y entre las cepas de una misma especie tambin existen diferencias de rendimiento.

81

Con respecto al nmero de conidias por mililitro (conidias/ml), en tal sentido al producir M. anisopliae 302 utilizando los sustratos de arroz o trigo o morn o garbanzo, se obtendr la misma concentracin de conidias/ml. Esto coincide con MONZON (2001) que manifiesta que la produccin de hongos entomopatgenos hasta la fecha se han evaluado diferentes tipos de sustratos naturales, principalmente arroz, trigo, maz, frijol y soya, pero lo ms utilizados son arroz y trigo. En los ensayos realizados tanto el arroz y el trigo tuvieron un comportamiento similar al igual que el morn y garbanzo, sustrato que MONZON (2001) no lo reporta como insumo para la produccin de M. anisopliae 302.

Estas diferencias pueden deberse que el hongo se desarroll fcilmente en la superficie de los sustratos de los tratamientos arroz, trigo y morn porque no posean una barrera para que el hongo puede colonizar y alimentarse de su materia orgnica, es decir no posean una cubierta propia del cereal, esto se debe a los tratamientos poscosecha que permite obtener el morn, trigo y arroz sin ninguna cubierta vegetal de sus semillas, sin embargo en el caso del cebada el desarrollo micelial fue menor esto se debe a que la cebada posea una cubierta vegetal y posiblemente esto impidi a M. anisopliae 302 colonizar, adems cabe mencionar que el garbanzo posee una cubierta vegetal delgada lo cual le permiti al entomopatgeno alimentarse y desarrollarse pero no fcilmente como lo hizo con arroz, morn o trigo ni menos que la cebada (posee una cubierta dura).

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Cuadro 37. Nmero de conidias por mililitro de suspensin de M. anisopliae 302 por gramo de sustrato (Arroz, morn, trigo, cebada y garbanzo).
TRATAMIENTOS C
PDAMERK A B A B A B A B A B A B A B A B A B A B A B A B A B A B A B

Repeticin
r1 2875 2723 1984 1873 2314 2210 4757 5237 4674 4096 4582 5110 1950 2259 1637 1880 1260 1268 235 324 987 953 1002 1115 109 93 100 132 134 111 G. A. 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 2617 2875 1817 1846 2204 2502 5275 6614 4398 4347 5027 4780 2141 2087 1500 1616 1384 1492 1287 1293 912 894 1017 1008 103 108 84 92 109 114 r2 G. A. 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 2148 2713 1912 1923 2199 2308 5060 6518 4435 4868 3573 3681 2357 2263 1384 1591 1637 1496 1117 1204 896 947 1109 1105 104 108 73 103 194 140 r3 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 G. A. 1064.81 1008.52 734.81 693.70 857.04 818.52 1761.85 1939.63 1731.11 1517.04 1697.04 1892.59 722.22 836.67 606.30 696.30 466.67 469.63 87.04 120.00 365.56 352.96 371.11 412.96 40.37 34.44 37.04 48.89 49.63 41.11 r1

Repeticin 0.1
r2 969.26 1064.81 672.96 683.70 816.30 926.67 1953.70 2449.63 1628.89 1610.00 1861.85 1770.37 792.96 772.96 555.56 598.52 512.59 552.59 476.67 478.89 337.78 331.11 376.67 373.33 38.15 40.00 31.11 34.07 40.37 42.22 795.56 1004.81 708.15 712.22 814.44 854.81 1874.07 2414.07 1642.59 1802.96 1323.33 1363.33 872.96 838.15 512.59 589.26 606.30 554.07 413.70 445.93 331.85 350.74 410.74 409.26 38.52 40.00 27.04 38.15 71.85 51.85 r3

Promedio

Conidias/cc 4.92 x 107 3.50 x 107 4.24 x 107 1.03 x 108 8.28 x 107 8.26 x 107 4.03 x 107 2.97 x 107 2.63 x 107 1.69 x 107 1.73 x 107 1.96 x 107 1.93x 106 1.80x 106 2.48x 106

S.O gramo

Conidias/g 4.92 108 x

984.63 700.93 847.96 2065.49 1655.43 1651.42 805.99 593.09 526.98 337.04 345.00 392.35 38.58 36.05 49.51

10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10

1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00

T1

PDAMERK LC PArAChino PDAMERK

3.50x 108 4.24x 108 1.03x 109 8.28x 108 8.26x 108 4.03x 108 2.97x 108 2.63x 108 1.69x 108 1.73 108 x

T2

PDAMERK LC PArAChino PDAMERK

T3

PDAMERK LC PArAChino PDAMERK

T4

PDAMERK LC PArAChino PDAMERK

1.96x 108 1.93 107 x

T5

PDAMERK LC PArAChino

1.80x 107 2.48 107 x

T1 T2 T3

: Arroz : Morn : Trigo

T4 T5

: Garbanzo : Cebada

83

1.20E+09 1.00E+09 8.00E+08 6.00E+08 4.00E+08 2.00E+08 0.00E+00

PDAMERK

PDAMERK

PDAMERK

PDAMERK

PDAMERK + LC

PDAMERK + LC

PDAMERK + LC

PDAMERK + LC

PDAMERK

PDAMERK + LC CEBADA

PArAChino

PArAChino

PArAChino

PArAChino

ARROZ T1 : Arroz T2 : Morn T3 : Trigo

Figura 23.

MORON

TRIGO T4 : Garbanzo T5 : Cebada

GARBANZO

Nmero de conidias por mililitro de suspensin de M. anisopliae 302 por gramo de sustratos (arroz, morn, trigo, garbanzo y cebada)

PArAChino

84

V.

CONCLUSIN

1. Que el RPC de B. bassiana aislamiento TM y B. bassiana aislamiento SENASA CCB-LE265 en el T4 (PAbAchino) = 0.38 cm/da y T3 (PArAchino) = 0.39 cm/da respectivamente, fueron numricamente superior al resto de los tratamientos, siendo el menor valor del RPC los tratamientos T6 (PFAb = 0.27 cm/da) y T5 (PFAr = 0.24 cm/da) respectivamente en cada aislamiento y para M. anisopliae aislamiento302 y M. anisopliae aislamiento 319 el T4(PAbA chino) en ambos ensayos fueron numricamente superior al resto de tratamientos con 0.36 cm/da y 0.31 cm/da respectivamente, siendo el menor valor del RPC los tratamientos T6 (PFAb = 0.27 cm/da) y T5 (PFAr = 0.24 cm/da) respectivamente en cada aislamiento. 2. La relacin de Ritmo Promedio de Crecimiento (RPC) y el conidias por cm2 es directa, es decir a mayor RPC mayor nmero de conidias por cm2. 3. Que la concentracin de conidias/cm2 de B. bassiana TM y B. bassiana 265 en los tratamientos T1 (PDAMERK), T2 (PDAMERK + LC), T3(PArAchino)yT4(PAbAchino),son considerados de buena calidad en ambos aislamientos, no habiendo diferencias estadsticas entre ellos y para M. anisopliae de la cepa 302 destacaron los tratamientos T3 (PArAchino), T1 (PDAMERK), T2 (PDAMERK + LC) con (8.86 x 107, 8.76 x 107, 8.58 x 107 conidias/cm2) respectivamente no habiendo diferencias estadsticas entre ellos, y en M. anisopliae de la cepa 319 fueron los tratamientos T2 (PDAMERK + LC), T1 (PDAMERK)con con (7.35 x 107 y 7.03 x 107 conidias/cm2) respectivamenteno habiendo diferencias estadsticas entre ellos.

4. Que en produccin de conidias/g en B. bassiana TM y M. anisopliae en aislamiento 302 se desarrollaron mejor en arroz, morn y trigo en el ensayo. Y la mayor concentracin de conidias de B. bassiana TM result del medio PAbAChino con 3.55 x 108 (arroz), 5.78 x 108 (morn), 2.43 x 108(trigo) y para M. anisopliae resulto del medio PDAMERKcon 4.92 x 108 (arroz), 1.03 x 109 (morn), 4.03 x 108 (trigo).

85

VI.

RECOMENDACIN

1. Se recomienda probar la eficiencia de los medios de cultivos probados en el crecimiento micelial de otros entomopatgenos.

2. Se recomienda realizar el conteo de conidias en medios de cultivo en diferentes das (5, 7, y 10 das).

3. No usar el medio de cultivo hecho a base de flan para la produccin de B. bassiana y M. anisopliae.

4. Evaluar el pH de los medios de cultivos a ensayar.

5. No usar como sustrato cebada y garbanzo para la produccin de B. bassiana y M. anisopliae.

6. Se recomienda buscar otros sustratos para la produccin de B. bassiana y M. anisopliae.

86

VII.

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90

VIII. ANEXO

91

Cuadro 38. Nmero de cuadrculas contadas de B. bassiana TM en el tratamiento T1 = Agar Papa Dextrosa (PDAMERK) en los diferentes das con sus respectivas repeticiones. T1 = Agar Papa Dextrosa (PDAMERK) Evaluacin Fecha 05-sept 08-sept 11-sept Das 5 7 10 r1 304 441 529 r2 260 437 452 Repeticiones Promedio r3 210 398 425 r4 240 536 562 r5 207 404 553 244.2 443.2 504.2

Cuadro 39. Nmero de cuadrculas contadas de B. bassiana TM en el tratamiento T2 =Agar Papa Glucosa+ Levadura de cerveza (PDAMERK + LC) en los diferentes das con sus respectivas repeticiones. T2 =Agar Papa Glucosa+ Levadura de cerveza(PDAMERK + LC) Evaluacin Fecha 05-sept 08-sept 11-sept Das 5 7 10 r1 214 478 528 Repeticiones Promedio r2 409 729 744 r3 182 353 372 r4 126 335 371 r5 313 537 571 248.8 486.4 517.2

Cuadro 40. Nmero de cuadrculas contadas de B. bassiana TM en el tratamiento T3 =Agar Chino + Papa Azcar Rubia (PArAchino) en los diferentes das con sus respectivas repeticiones T3 =Agar Chino + Papa Azcar Rubia (PArAchino) Evaluacin Fecha 05-sept 08-sept 11-sept Das 5 7 10 r1 212 434 476 Repeticiones Promedio r2 302 775 846 r3 71 396 487 r4 245 581 667 r5 221 535 680 210.2 544.2 631.2

92

Cuadro 41. Nmero de cuadrculas contadas de B. bassiana TM en el tratamiento T4 = Agar Chino + Papa Azcar Blanca (PAbAchino) en los diferentes das con sus respectivas repeticiones. T4 = Agar Chino + Papa Azcar Blanca (PAbAchino) Evaluacin Fecha 05-sept 08-sept 11-sept Das 5 7 10 r1 338 594 713 r2 156 441 643 Repeticiones r3 389 676 827 r4 383 735 858 r5 445 572 674 342.2 603.6 743 Promedio

Cuadro 42. Nmero de cuadrculas contadas de B. bassiana TM en el tratamiento T5 = Flan + Papa Azcar Rubia (PFAr) en los diferentes das con sus respectivas repeticiones. T5 = Flan + Papa Azcar Rubia (PFAr) Evaluacin Fecha 05-sept 08-sept 11-sept Das 5 7 10 r1 71 308 413 r2 53 179 211 Repeticiones r3 98 422 604 r4 311 601 739 r5 298 553 680 166.2 412.6 529.4 Promedio

Cuadro 43. Nmero de cuadrculas contadas de B. bassiana TM en el tratamiento T6 = Flan + Papa Azcar Blanca (PFAb) en los diferentes das con sus respectivas repeticiones. T6 = Flan + Papa Azcar Blanca (PFAb) Evaluacin Fecha 05-sept 08-sept 11-sept Das 5 7 10 r1 83 205.3 384.7 Repeticiones r2 81 247 413 r3 12 48 95 r4 53 152 402 r5 184 416 657 82.6 213.7 390.3 Promedio

93

Cuadro 44. Ritmo Promedio de Crecimiento (RPC) de B. bassiana TM en el tratamiento T1 = Agar Papa Dextrosa (PDAMERK) en los diferentes das con sus respectivas repeticiones.
T1 = Agar Papa Dextrosa (PDAMERK) Repeticiones Valores estadsticos r2 r3 r4 r5 X 2.274 2.044 2.185 2.029 2.198 0.031604453 2.949 2.814 3.265 2.835 2.965 0.032575200 2.999 2.908 3.344 3.317 3.162 0.038762770 0.300 0.291 0.334 0.332 0.316 0.000387628 0.703 0.736 0.701 0.934 0.800 0.000387628

Das 5 7 10 RPC R2

r1 2.459 2.962 3.244 0.324 0.926

RPC 0.43968 0.42357 0.31622

Cuadro 45. Ritmo Promedio de Crecimiento (RPC) de B. bassiana TM en el tratamiento T2 =Agar Papa Glucosa+ Levadura de cerveza (PDAMERK + LC) en los diferentes das con sus respectivas repeticiones.
T2 =Agar Papa Glucosa+ Levadura de cerveza (PDAMERK + LC) Repeticiones Valores estadsticos r1 r2 r3 r4 r5 X 2.063 2.853 1.903 1.583 2.495 2.179 0.249566242 3.084 3.808 2.650 2.582 3.269 3.078 0.249802643 3.241 3.847 2.720 2.717 3.370 3.179 0.227752159 0.324 0.385 0.272 0.272 0.337 0.318 0.002277522 0.757 0.677 0.717 0.745 0.743 0.728 0.002277522

Das 5 7 10 RPC R2

RPC 0.43589 0.43978 0.31792

Cuadro 46. Ritmo Promedio de Crecimiento (RPC) de B. bassiana TM en el tratamiento T3 =Agar Chino + Papa Azcar Rubia (PArAchino) en los diferentes das con sus respectivas repeticiones.
T3 =Agar Chino + Papa Azcar Rubia (PArAchino) Repeticiones Valores estadsticos r2 r3 r4 r5 X 2.451 1.188 2.208 2.097 2.000 0.229373185 3.927 2.807 3.400 3.262 3.267 0.193119193 4.103 3.113 3.643 3.678 3.523 0.185316749 0.410 0.311 0.364 0.368 0.352 0.001853167 0.734 0.778 0.787 0.861 0.784 0.001853167

Das 5 7 10 RPC R2

r1 2.054 2.938 3.077 0.308 0.759

RPC 0.39991 0.46669 0.35226

94

Cuadro 47. Ritmo Promedio de Crecimiento (RPC) de B. bassiana TM en el tratamiento T4 = Agar Chino + Papa Azcar Blanca (PAbAchino) en los diferentes das con sus respectivas repeticiones.
T4 = Agar Chino + Papa Azcar Blanca (PAbA chino) Repeticiones Valores estadsticos r2 r3 r4 r5 X 1.762 2.782 2.760 2.975 2.574 0.224822364 2.962 3.667 3.824 3.373 3.453 0.107784920 3.577 4.056 4.132 3.662 3.838 0.059568134 0.358 0.406 0.413 0.366 0.384 0.000595681 0.913 0.891 0.831 0.958 0.893 0.000595681

Das 5 7 10 RPC R2

r1 2.593 3.438 3.766 0.377 0.874

RPC 0.51490 0.49326 0.38385

Cuadro 48. Ritmo Promedio de Crecimiento (RPC) de B. bassiana TM en el tratamiento T5 = Flan + Papa Azcar Rubia (PFAr) en los diferentes das con sus respectivas repeticiones.
T5 = Flan + Papa Azcar Rubia (PFAr) Repeticiones Valores estadsticos r2 r3 r4 r5 X 1.027 1.396 2.487 2.435 1.707 0.491699672 1.887 2.897 3.458 3.317 2.807 0.411982669 2.049 3.466 3.834 3.678 3.179 0.534025058 0.205 0.347 0.383 0.368 0.318 0.005340251 0.778 0.870 0.873 0.881 0.848 0.005340251

Das 5 7 10 RPC R2

r1 1.188 2.475 2.866 0.287 0.838

RPC 0.34135 0.40099 0.31788

Cuadro 49. Ritmo Promedio de Crecimiento (RPC) de B. bassiana TM en el tratamiento T6 = Flan + Papa Azcar Blanca (PFAb) en los diferentes das con sus respectivas repeticiones.
T6 = Flan + Papa Azcar Blanca (PFAb) Repeticiones Valores estadsticos r2 r3 r4 r5 X 1.269 0.489 1.027 1.913 1.197 0.264199133 2.217 0.977 1.739 2.877 1.966 0.481187906 2.866 1.375 2.828 3.615 2.690 0.660519649 0.287 0.137 0.283 0.362 0.269 0.006605196 0.951 0.970 1.000 0.964 0.975 0.006605196

Das 5 7 10 RPC R2

r1 1.285 2.021 2.766 0.277 0.988

RPC 0.23933 0.28088 0.26902

95

Cuadro 50. Nmero de cuadrculas contadas de B. bassiana 265 en el tratamiento T1 = Agar Papa Dextrosa (PDAMERK) en los diferentes das con sus respectivas repeticiones. T1 = Agar Papa Dextrosa (PDAMERK) Evaluacin Fecha 05-sept 08-sept 11-sept Das 5 7 10 r1 196 357 530 Repeticiones Promedio r2 94 349 502 r3 59 139 196 r4 354 591 627 r5 268 537 565 194.20 394.60 484.00

Cuadro 51. Nmero de cuadrculas contadas de B. bassiana 265 en el tratamiento T2 =Agar Papa Glucosa+ Levadura de cerveza (PDAMERK + LC) en los diferentes das con sus respectivas repeticiones. T2 =Agar Papa Glucosa+ Levadura de cerveza(PDAMERK + LC) Evaluacin Fecha 05-sept 08-sept 11-sept Das 5 7 10 r1 669 772 868 Repeticiones Promedio r2 110 240 346 r3 179 246 391 r4 664 703 777 r5 166 303 522 357.60 452.80 580.80

Cuadro 52. Nmero de cuadrculas contadas de B. bassiana 265 en el tratamiento T3 =Agar Chino + Papa Azcar Rubia (PArAchino) en los diferentes das con sus respectivas repeticiones T3 =Agar Chino + Papa Azcar Rubia (PArAchino) Evaluacin Fecha 05-sept 08-sept 11-sept Das 5 7 10 r1 428 228 625 r2 446 514 610 Repeticiones Promedio r3 706 785 855 r4 381 548 614 r5 910 1094 1114 574.20 633.80 763.60

96

Cuadro 53. Nmero de cuadrculas contadas de B. bassiana 265 en el tratamiento T4 = Agar Chino + Papa Azcar Blanca (PAbAchino) en los diferentes das con sus respectivas repeticiones. T4 = Agar Chino + Papa Azcar Blanca (PAbAchino) Evaluacin Fecha 05-sept 08-sept 11-sept Das 5 7 10 r1 207 473 596 Repeticiones r2 96 341 414 r3 378 644 690 r4 201 439 513 r5 433 580 615 263.00 495.40 565.60 Promedio

Cuadro 54. Nmero de cuadrculas contadas de B. bassiana 265 en el tratamiento T5 = Flan + Papa Azcar Rubia (PFAr) en los diferentes das con sus respectivas repeticiones. T5 = Flan + Papa Azcar Rubia (PFAr) Evaluacin Fecha 05-sept 08-sept 11-sept Das 5 7 10 r1 46 101 174 Repeticiones r2 52 160 286 r3 199 207 324 r4 214 300 384 r5 224 305 346 Promedio 147.00 214.60 302.80

Cuadro 55. Nmero de cuadrculas contadas de B. bassiana 265 en el tratamiento T6 = Flan + Papa Azcar Blanca (PFAb) en los diferentes das con sus respectivas repeticiones. T6 = Flan + Papa Azcar Blanca (PFAb) Evaluacin Fecha 05-sept 08-sept 11-sept Das 5 7 10 r1 257 362 495 Repeticiones Promedio r2 86 344 429 r3 227 289 323 r4 157 310 537 r5 294 421 496 204.20 345.20 456.00

97

Cuadro 56. Ritmo Promedio de Crecimiento (RPC) de B. bassiana 265 en el tratamiento T1 = Agar Papa Dextrosa (PDAMERK) en los diferentes das con sus respectivas repeticiones.
T1 = Agar Papa Dextrosa (PDAMERK) Repeticiones Valores estadsticos r2 r3 r4 r5 X 1.368 1.083 2.654 2.309 1.878 0.422244052 2.635 1.663 3.429 3.269 2.732 0.482598495 3.160 1.975 3.532 3.353 3.053 0.382765756 0.316 0.197 0.353 0.335 0.305 0.003827658 0.883 0.920 0.743 0.712 0.846 0.003827658

Das 5 7 10 RPC R2

r1 1.975 2.665 3.247 0.325 0.973

RPC 0.37554 0.39030 0.30533

Cuadro 57. Ritmo Promedio de Crecimiento (RPC) de B. bassiana 265 en el tratamiento T2 =Agar Papa Glucosa+ Levadura de cerveza (PDAMERK + LC) en los diferentes das con sus respectivas repeticiones.
T2 =Agar Papa Glucosa+ Levadura de cerveza (PDAMERK + LC) Repeticiones Valores estadsticos r1 r2 r3 r4 r5 X 3.648 1.479 1.887 3.635 1.817 2.493 1.122217678 3.919 2.185 2.212 3.740 2.455 2.902 0.731357487 4.156 2.624 2.789 3.932 3.223 3.344 0.461389929 0.416 0.262 0.279 0.393 0.322 0.334 0.004613899 0.976 0.939 0.998 0.997 0.996 0.981 0.004613899

Das 5 7 10 RPC R2

RPC 0.49866 0.41461 0.33445

Cuadro 58. Ritmo Promedio de Crecimiento (RPC) de B. bassiana 265 en el tratamiento T3 =Agar Chino + Papa Azcar Rubia (PArAchino) en los diferentes das con sus respectivas repeticiones.
T3 =Agar Chino + Papa Azcar Rubia (PArAchino) Repeticiones Valores estadsticos r2 r3 r4 r5 X 2.979 3.748 2.753 4.255 3.330 0.413938396 3.198 3.952 3.302 4.665 3.449 0.889306033 3.484 4.124 3.495 4.708 3.867 0.293614333 0.348 0.412 0.350 0.471 0.387 0.002936143 0.999 0.974 0.859 0.724 0.768 0.002936143

Das 5 7 10 RPC R2

r1 2.918 2.130 3.526 0.353 0.286

RPC 0.66610 0.49276 0.38674

98

Cuadro 59. Ritmo Promedio de Crecimiento (RPC) de B. bassiana 265 en el tratamiento T4 = Agar Chino + Papa Azcar Blanca (PAbAchino) en los diferentes das con sus respectivas repeticiones.
T4 = Agar Chino + Papa Azcar Blanca (PAbA chino) Repeticiones Valores estadsticos r2 r3 r4 r5 X 1.382 2.742 2.000 2.935 2.218 0.392787960 2.605 3.579 2.955 3.397 3.121 0.145799554 2.870 3.705 3.195 3.498 3.342 0.102737876 0.287 0.371 0.319 0.350 0.334 0.001027379 0.794 0.755 0.812 0.795 0.804 0.001027379

Das 5 7 10 RPC R2

r1 2.029 3.068 3.443 0.344 0.863

RPC 0.44353 0.44582 0.33422

Cuadro 60. Ritmo Promedio de Crecimiento (RPC) de B. bassiana 265 en el tratamiento T5 = Flan + Papa Azcar Rubia (PFAr) en los diferentes das con sus respectivas repeticiones.
T5 = Flan + Papa Azcar Rubia (PFAr) Repeticiones Valores estadsticos r2 r3 r4 r5 X 1.017 1.990 2.063 2.111 1.628 0.344395593 1.784 2.029 2.443 2.463 2.027 0.198470856 2.385 2.539 2.764 2.624 2.434 0.121760955 0.239 0.254 0.276 0.262 0.243 0.001217610 0.966 0.886 0.974 0.896 0.941 0.001217610

Das 5 7 10 RPC R2

r1 0.957 1.418 1.861 0.186 0.984

RPC 0.32551 0.28964 0.24345

Cuadro 61. Ritmo Promedio de Crecimiento (RPC) de B. bassiana 265 en el tratamiento T6 = Flan + Papa Azcar Blanca (PFAb) en los diferentes das con sus respectivas repeticiones.
T6 = Flan + Papa Azcar Blanca (PFAb) Repeticiones Valores estadsticos r2 r3 r4 r5 X 1.308 2.125 1.767 2.418 1.976 0.197264919 2.616 2.398 2.483 2.894 2.615 0.036767580 2.921 2.535 3.269 3.141 3.001 0.083399518 0.292 0.253 0.327 0.314 0.300 0.000833995 0.803 0.911 0.992 0.915 0.923 0.000833995

Das 5 7 10 RPC R2

r1 2.261 2.684 3.138 0.314 0.991

RPC 0.39520 0.37357 0.30008

99

Cuadro 62. Nmero de cuadrculas contadas de M. anisopliae 302 en el tratamiento T1

=

Agar Papa Dextrosa (PDAMERK) en los diferentes das con sus

respectivas repeticiones. T1 = Agar Papa Dextrosa (PDAMERK) Evaluacin Fecha 03-oct 05-oct 08-oct Das 5 7 10 r1 107 396 482 Repeticiones Promedio r2 298 518 696 r3 312 582 659 r4 202 459 596 r5 297 502 630 243.2 491.4 612.6

Cuadro 63. Nmero de cuadrculas contadas de M. anisopliae 302 en el tratamiento T2 =Agar Papa Glucosa+ Levadura de cerveza (PDAMERK + LC)en los diferentes das con sus respectivas repeticiones. T2 =Agar Papa Glucosa+ Levadura de cerveza(PDAMERK + LC) Evaluacin Fecha 03-oct 05-oct 08-oct Das 5 7 10 r1 357 550 569 r2 402 674 628 Repeticiones Promedio r3 279 513 652 r4 487 784 710 r5 311 465 527 367.2 597.2 617.2

Cuadro 64. Nmero de cuadrculas contadas de M. anisopliae 302 en el tratamiento T3 =Agar Chino + Papa Azcar Rubia (PArAchino) en los diferentes das con sus respectivas repeticiones. T3 =Agar Chino + Papa Azcar Rubia (PArAchino) Evaluacin Fecha 03-oct 05-oct 08-oct Das 5 7 10 r1 440 507 616 Repeticiones Promedio r2 254 311 523 r3 210 390 684 r4 274 286 457 r5 146 205 316 264.8 339.8 519.2

100

Cuadro 65. Nmero de cuadrculas contadas de M. anisopliae

302 en el

tratamiento T4 = Agar Chino + Papa Azcar Blanca (PAbAchino) en los diferentes das con sus respectivas repeticiones. T4 = Agar Chino + Papa Azcar Blanca (PAbAchino) Evaluacin Fecha 03-oct 05-oct 08-oct Das 5 7 10 r1 383 416 492 Repeticiones Promedio r2 513 568 687 r3 725 816 972 r4 372 443 584 r5 467 519 613 492 552.4 669.6

Cuadro 66. Nmero de cuadrculas contadas de M. anisopliae 302 en el tratamiento T5 = Flan + Papa Azcar Rubia (PFAr) en los diferentes das con sus respectivas repeticiones. T5 = Flan + Papa Azcar Rubia (PFAr) Evaluacin Fecha 03-oct 05-oct 08-oct Das 5 7 10 r1 66 132 486 r2 56 72 96 Repeticiones Promedio r3 118 123 186 r4 73.5 99.75 215 r5 54 72 92 73.5 99.75 215

Cuadro 67. Nmero de cuadrculas contadas de M. anisopliae 302 en el tratamiento T6 = Flan + Papa Azcar Blanca (PFAb) en los diferentes das con sus respectivas repeticiones. T6 = Flan + Papa Azcar Blanca (PFAb) Evaluacin Fecha 03-oct 05-oct 08-oct Das 5 7 10 r1 40 82 146 r2 74 104 217 Repeticiones Promedio r3 163 273 648 r4 127 142 245 r5 101 150.3 314 101 150.25 314

101

Cuadro 68. Ritmo Promedio de Crecimiento (RPC) de M. anisopliae 302 en el tratamiento T1 = Agar Papa Dextrosa (PDAMERK) en los diferentes das con sus respectivas repeticiones.
T1 = Agar Papa Dextrosa (PDAMERK) Repeticiones Valores estadsticos r2 r3 r4 r5 X 2.435 2.491 2.005 2.431 2.164 0.193529577 3.210 3.403 3.022 3.160 3.120 0.049351631 3.721 3.621 3.443 3.540 3.484 0.057450654 0.372 0.362 0.344 0.354 0.348 0.000574507 0.947 0.806 0.883 0.916 0.869 0.000574507

Das 5 7 10 RPC R2

r1 1.459 2.807 3.097 0.310 0.793

RPC 0.43283 0.44576 0.34844

uadro 69.

Ritmo Promedio de Crecimiento (RPC) de M. anisopliae 302 en el tratamiento T2 =Agar Papa Glucosa+ Levadura de cerveza(PDAMERK + LC)en los diferentes das con sus respectivas repeticiones.
T2 = Agar Papa Glucosa + Levadura de cerveza (PDAMERK + LC) Repeticiones Valores estadsticos r1 r2 r3 r4 r5 X 2.665 2.828 2.356 3.113 2.487 2.690 0.087731648 3.308 3.662 3.195 3.949 3.042 3.431 0.136161566 3.365 3.535 3.602 3.758 3.238 3.499 0.041317120 0.336 0.353 0.360 0.376 0.324 0.350 0.000413171 0.713 0.505 0.905 0.428 0.860 0.682 0.000413171

Das 5 7 10 RPC R2

RPC 0.53796 0.49015 0.34994

Cuadro 70. Ritmo Promedio de Crecimiento (RPC) de M. anisopliae 302 en el tratamiento T3 =Agar Chino + Papa Azcar Rubia (PArAchino)en los diferentes das con sus respectivas repeticiones.
T3 =Agar Chino + Papa Azcar Rubia(PArAchino) Repeticiones Valores estadsticos r2 r3 r4 r5 X 2.248 2.044 2.335 1.704 2.258 0.212322868 2.487 2.785 2.385 2.019 2.571 0.189385281 3.226 3.689 3.015 2.507 3.188 0.210810966 0.323 0.369 0.302 0.251 0.319 0.002108110 0.971 0.997 0.888 1.000 0.971 0.002108110

Das 5 7 10 RPC R2

r1 2.959 3.176 3.501 0.350 1.000

RPC 0.45158 0.36725 0.31876

102

Cuadro 71. Ritmo Promedio de Crecimiento (RPC) de M. anisopliae 302 en el tratamiento T4 = Agar Chino + Papa Azcar Blanca (PAbAchino) en los diferentes das con sus respectivas repeticiones.
T4 = Agar Chino + Papa Azcar Blanca (PAbA chino) Repeticiones Valores estadsticos r2 r3 r4 r5 X 3.195 3.798 2.720 3.048 3.104 0.189488136 3.362 4.029 2.969 3.213 3.290 0.207813585 3.697 4.397 3.409 3.492 3.625 0.228182360 0.370 0.440 0.341 0.349 0.362 0.002281824 0.994 1.000 0.998 0.999 0.996 0.002281824

Das 5 7 10 RPC R2

r1 2.760 2.877 3.129 0.313 0.991

RPC 0.62085 0.46998 0.36247

Cuadro 72. Ritmo Promedio de Crecimiento (RPC) de M. anisopliae 302 en el tratamiento T5 = Flan + Papa Azcar Rubia (PFAr) en los diferentes das con sus respectivas repeticiones.
T5 = Flan + Papa Azcar Rubia (PFAr) Repeticiones Valores estadsticos r2 r3 r4 r5 X 1.056 1.532 1.209 1.036 1.196 0.040220202 1.197 1.564 1.409 1.197 1.397 0.039554508 1.382 1.924 2.068 1.353 1.967 0.509173066 0.138 0.192 0.207 0.135 0.197 0.005091731 0.999 0.892 0.966 0.985 0.962 0.005091731

Das 5 7 10 RPC R2

r1 1.146 1.621 3.109 0.311 0.970

RPC 0.23917 0.19963 0.19672

Cuadro 73. Ritmo Promedio de Crecimiento (RPC) de M. anisopliae 302 en el tratamiento T6 = Flan + Papa Azcar Blanca (PFAb) en los diferentes das con sus respectivas repeticiones.
T6 = Flan + Papa Azcar Blanca (PFAb) Repeticiones Valores estadsticos r2 r3 r4 r5 X 1.213 1.801 1.590 1.418 1.383 0.122045255 1.438 2.330 1.681 1.729 1.691 0.161370902 2.078 3.590 2.208 2.499 2.416 0.512667858 0.208 0.359 0.221 0.250 0.242 0.005126679 0.976 0.987 0.928 0.984 0.974 0.005126679

Das 5 7 10 RPC R2

r1 0.892 1.277 1.704 0.170 0.993

RPC 0.27653 0.24159 0.24159

103

Cuadro 74. Nmero de cuadrculas contadas de M. anisopliae 319 en el tratamiento T1

=

Agar Papa Dextrosa (PDAMERK) en los diferentes das con sus

respectivas repeticiones. T1 = Agar Papa Dextrosa (PDAMERK) Evaluacin Fecha 03-oct 05-oct 08-oct Das 5 7 10 r1 104 359 465 Repeticiones r2 187 406 550 r3 154 352 417 r4 97 210 370 r5 102 202 322 Promedio 128.8 305.8 424.8

Cuadro 75. Nmero de cuadrculas contadas de M. anisopliae 319 en el tratamiento T2 =Agar Papa Glucosa+ Levadura de cerveza (PDAMERK + LC)en los diferentes das con sus respectivas repeticiones. T2 =Agar Papa Glucosa+ Levadura de cerveza(PDAMERK + LC) Evaluacin Fecha 03-oct 05-oct 08-oct Das 5 7 10 r1 117 302 461 Repeticiones Promedio r2 102 288 374 r3 84 106 166 r4 114 247 347 r5 153 292 387 114 247 347

Cuadro 76. Nmero de cuadrculas contadas de M. anisopliae 319 en el tratamiento T3 =Agar Chino + Papa Azcar Rubia (PArAchino) en los diferentes das con sus respectivas repeticiones. T3 =Agar Chino + Papa Azcar Rubia (PArAchino) Evaluacin Fecha 03-oct 05-oct 08-oct Das 5 7 10 r1 298 341 494 Repeticiones Promedio r2 285 317 432 r3 234 296 327 r4 184 103 233 r5 198 179 288 239.8 247.2 354.8

104

Cuadro 77. Nmero de cuadrculas contadas de M. anisopliae 319 en el tratamiento T4 = Agar Chino + Papa Azcar Blanca (PAbAchino) en los diferentes das con sus respectivas repeticiones. T4 = Agar Chino + Papa Azcar Blanca (PAbAchino) Evaluacin Fecha 03-oct 05-oct 08-oct Das 5 7 10 r1 235 304 407 r2 259 343 480 Repeticiones Promedio r3 363 497 509 r4 214 283 484 r5 225 286 517 259.2 342.6 479.4

Cuadro 78. Nmero de cuadrculas contadas de M. anisopliae 319 en el tratamiento T5 = Flan + Papa Azcar Rubia (PFAr) en los diferentes das con sus respectivas repeticiones. T5 = Flan + Papa Azcar Rubia (PFAr) Evaluacin Fecha 03-oct 05-oct 08-oct Das 5 7 10 r1 51 72 134 Repeticiones Promedio r2 60 104 243 r3 77 92 112 r4 55 84 192 r5 66 111 516 61.8 92.6 239.4

Cuadro 79. Nmero de cuadrculas contadas de M. anisopliae 319 en el tratamiento T6 = Flan + Papa Azcar Blanca (PFAb) en los diferentes das con sus respectivas repeticiones. T6 = Flan + Papa Azcar Blanca (PFAb) Evaluacin Fecha 03-oct 05-oct 08-oct Das 5 7 10 r1 142 164 217 r2 46 205 496 Repeticiones Promedio r3 64 89 113 r4 157 248 517 r5 112 124 278 104.2 166 324.2

105

Cuadro 80. Ritmo Promedio de Crecimiento (RPC) de M. anisopliae 319 en el tratamiento T1 = Agar Papa Dextrosa (PDAMERK) en los diferentes das con sus respectivas repeticiones.
T1 = Agar Papa Dextrosa (PDAMERK) Repeticiones Valores estadsticos r2 r3 r4 r5 X 1.929 1.750 1.389 1.425 1.586 0.057782348 2.842 2.646 2.044 2.005 2.442 0.151139881 3.308 2.880 2.713 2.531 2.895 0.089428587 0.331 0.288 0.271 0.253 0.289 0.000894286 0.913 0.818 0.988 0.980 0.907 0.000894286

Das 5 7 10 RPC R2

r1 1.438 2.672 3.042 0.304 0.836

RPC 0.31724834 0.34883981 0.28947478

Cuadro 81. Ritmo Promedio de Crecimiento (RPC) de M. anisopliae 319 en el tratamiento T2 =Agar Papa Glucosa+ Levadura de cerveza (PDAMERK + LC)en los diferentes das con sus respectivas repeticiones.
T2 =Agar Papa Glucosa+ Levadura de cerveza (PDAMERK + LC) Repeticiones Valores estadsticos RPC r1 r2 r3 r4 r5 X 0.29974063 1.526 1.425 1.293 1.506 1.745 1.499 0.027301904 0.31211165 2.451 2.394 1.452 2.217 2.410 2.185 0.175783505 0.25951094 3.028 2.728 1.817 2.627 2.775 2.595 0.210920910 0.303 0.273 0.182 0.263 0.277 0.260 0.002109209 0.940 0.856 0.988 0.930 0.922 0.927 0.002109209

Das 5 7 10 RPC R2

Cuadro 82. Ritmo Promedio de Crecimiento (RPC) de M. anisopliae 319 en el tratamiento T3 =Agar Chino + Papa Azcar Rubia (PArAchino) en los diferentes das con sus respectivas repeticiones.
T3 =Agar Chino + Papa Azcar Rubia (PArAchino) Das 5 7 10 RPC R2 Repeticiones r1 2.435 2.605 3.135 0.313 0.970 r2 2.381 2.511 2.932 0.293 0.968 r3 2.158 2.427 2.551 0.255 0.898 r4 1.913 1.431 2.153 0.215 0.187 r5 1.985 1.887 2.394 0.239 0.689 Valores estadsticos X 2.174 2.172 2.633 0.263 0.742 0.053760269 0.249166770 0.158898107 0.001588981 RPC 0.4348632 0.31031724 0.26327527

0.001588981

106

Cuadro83.

Ritmo Promedio de Crecimiento (RPC) de M. anisopliae 319 en el tratamiento T4 = Agar Chino + Papa Azcar Blanca (PAbAchino) en los diferentes das con sus respectivas repeticiones.
T4 = Agar Chino + Papa Azcar Blanca (PAbA chino) Repeticiones Valores estadsticos r2 r3 r4 r5 X 2.270 2.687 2.063 2.116 2.260 0.062937260 2.612 3.144 2.373 2.385 2.595 0.103487817 3.090 3.182 3.103 3.207 3.086 0.020511635 0.309 0.318 0.310 0.321 0.309 0.000205116 1.000 0.709 0.987 0.972 0.933 0.000205116

Das 5 7 10 RPC R2

r1 2.162 2.459 2.846 0.285 0.998

RPC 0.45194063 0.37068619 0.30856002

Cuadro 84. Ritmo Promedio de Crecimiento (RPC) de M. anisopliae 319 en el tratamiento T5 = Flan + Papa Azcar Rubia (PFAr) en los diferentes das con sus respectivas repeticiones.
T5 = Flan + Papa Azcar Rubia (PFAr) Repeticiones Valores estadsticos r2 r3 r4 r5 X 1.093 1.238 1.046 1.146 1.106 0.008113337 1.438 1.353 1.293 1.486 1.353 0.013253308 2.199 1.493 1.954 3.204 2.097 0.459196560 0.220 0.149 0.195 0.320 0.210 0.004591966 0.990 0.996 0.980 0.937 0.978 0.004591966

Das 5 7 10 RPC R2

r1 1.007 1.197 1.633 0.163 0.988

RPC 0.22117671 0.19333863 0.20965074

Cuadro 85. Ritmo Promedio de Crecimiento (RPC) de M. anisopliae 319 en el tratamiento T6 = Flan + Papa Azcar Blanca (PFAb) en los diferentes das con sus respectivas repeticiones.
T6 = Flan + Papa Azcar Blanca (PFAb) Das 5 7 10 RPC R2 r1 1.681 1.806 2.078 0.208 0.991 Repeticiones r2 r3 r4 0.957 1.128 1.767 2.019 1.331 2.221 3.141 1.499 3.207 0.314 0.150 0.321 0.990 0.972 0.991 0.005257081 r5 1.493 1.571 2.352 0.235 0.897 Valores estadsticos X 1.405 0.123142938 1.790 0.124502648 2.455 0.525708074 0.246 0.005257081 0.968 RPC 0.28103195 0.25566461 0.24554373

107

Cuadro 86. Conteo de conidias de B. bassiana TM en los diferentes medios de cultivo en estudio.
Repeticin TRAT. C r1 T1 T2 PDAMERK PDAMERK + LC A B A B A B A B A B A B 780 804 954 862 1014 995 974 933 234 223 366 395
G.A 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27

Repeticin 0.1 r3 982 954 952 894 1007 987 897 945 189 214 296 373
G.A 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27

Promedio r3 PG 338.02 347.90 416.42 348.15 74.88 132.22 r1 r2 r3 r1

Conidias/cc r2 r3

r2 1004 952 1010 964 1317 1426 987 904 204 149 336 376

G.A 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27

r1 288.89 297.78 353.33 319.26 375.56 368.52 360.74 345.56 86.67 82.59 135.56

r2 371.85 352.59 374.07 357.04 487.78 528.15 365.56 334.81 75.56 55.19 124.44

S. O 20 20 20 20 20 20

Conidias/cm2 rea r1 2.01 2.01 2.01 2.01 2.01 2.01 r2 r3

T3 PArAChino T4 PAbAChino T5 T6 PFAr PFAb

363.70 353.33 352.59 331.11 372.96 365.56 332.22 350.00 70.00 79.26 109.63

293.33 362.22 358.52 336.30 365.56 341.85 372.04 507.96 369.26 353.15 350.19 341.11 84.63 65.37 74.63

1.47x 107 1.81 x107 1.79 x107 1.68 x107 1.83 x107 1.71 x107 1.86 x107 2.54 x107 1.85 x107 1.77 x107 1.75 x107 1.71 x107 4.23 x106 3.27 x106 3.73 x106 7.05 x106 6.59 x106 6.19 x106

1.46 x108 1.80 x108 1.78 x108 1.67 x108 1.82 x108 1.70 x108 1.85 x108 2.53 x108 1.84 x108 1.76 x108 1.74 x108 1.70 x108 4.21 x107 3.25 x107 3.71 x107 7.01 x107 6.56 x107 6.16 x107

146.30 139.26 138.15

140.93 131.85 123.89

Cuadro 87. Conteo de conidias de B. bassiana 265 en los diferentes medios de cultivo en estudio.
TRAT. C A B A B A B A B A B A B r1 938 847 773 751 614 661 988 896 284 316 342 438 G.A. 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 Repeticin r2 948 885 796 832 817 738 872 817 219 261 412 422 G.A. 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 r3 897 758 854 789 698 726 769 804 300 214 383 377 G.A. 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 Repeticin 0.1 1 347.41 313.70 286.30 278.15 227.41 244.81 365.93 331.85 105.19 117.04 126.67 162.22 2 351.11 327.78 294.81 308.15 302.59 273.33 322.96 302.59 81.11 96.67 152.59 156.30 3 332.22 280.74 316.30 292.22 258.52 268.89 284.81 297.78 111.11 79.26 141.85 139.63 r1 330.56 282.22 236.11 348.89 111.11 144.44 Promedio r2 339.44 301.48 287.96 312.78 88.89 154.44 r3 306.48 304.26 263.70 291.30 95.19 140.74 r1 1.65 x10
7

Conidias/cc r2 1.70 x10

7

S. O r3 1.53 x10
7

Conidias/cm2 rea r1 r2
8

r3
8

T1

PDAMERK

20 20 20 20 20 20

2.01 2.01 2.01 2.01 2.01 2.01

1.64 x10

1.69 x10

1.52 x108 1.51 x108 1.31 x108 1.45 x108 4.73 x107 7.00 x107

T2 PDAMERK + LC T3 T4 T5 T6 PArAChino PAbAChino PFAr PFAb

1.41 x107 1.18 x107 1.74 x107 5.56 x106 7.22 x106

1.51 x107 1.44 x107 1.56 x107 4.44 x106 7.72 x106

1.52 x107 1.32 x107 1.46 x107 4.76 x106 7.04 x106

1.40 x108 1.17 x108 1.74 x108 5.53 x107 7.18 x107

1.50 x108 1.43 x108 1.56 x108 4.42 x107 7.68 x107

108

Cuadro 88. Conteo de conidias de M. anisopliae 302 en los diferentes medios de cultivo en estudio.
TRAT. T1 PDAMERK PDAMERK + T2 LC T3 PArAChino T4 PAbAChino T5 PFAr T6 PFAb C A B A B A B A B A B A B r1 975 980 1075 902 831 1087 755 680 140 85 163 285 G.A. 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 Repeticin r2 G.A. 910 960 0.27 765 850 0.27 960 892 0.27 840 790 0.27 185 107 0.27 257 314 0.27 r3 984 897 994 1005 1012 987 784 640 97 103 214 198 G.A. 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 Repeticin 0.1 1 2 3 361.11 337.04 364.44 362.96 355.56 332.22 398.15 283.33 368.15 334.07 314.81 372.22 307.78 355.56 374.81 402.59 330.37 365.56 279.63 311.11 290.37 251.85 292.59 237.04 51.85 68.52 35.93 31.48 39.63 38.15 60.37 95.19 79.26 105.56 116.30 73.33 r1 Promedio r2 r3 r1 Conidias/cc r2 r3 S. O 10 10 10 10 10 10 rea 2.01 2.01 2.01 2.01 2.01 2.01 r1 Conidias/cm2 r2 r3

362.04 346.30 348.33 366.11 299.07 370.19 355.19 342.96 370.19 265.74 301.85 263.70 41.67 54.07 37.04 76.30

1.81 x107 1.73 x107 1.74 x107 1.83 x107 1.50 x107 1.85 x107 1.78 x107 1.71 x107 1.85 x107 1.33 x107 1.51 x107 1.32 x107 2.08 x106 2.70 x106 1.85 x106 4.15 x106 5.29 x106 3.81 x106

9.00 x107 8.61 x107 8.66 x107 9.10 x107 7.44 x107 9.21 x107 8.83 x107 8.53 x107 9.21 x107 6.61 x107 7.51 x107 6.56 x107 1.04 x107 1.34 x107 9.21 x106 2.06 x107 2.63 x107 1.90 x107

82.96 105.74

Cuadro 89. Conteo de conidias de M. anisopliae 319 en los diferentes medios de cultivo en estudio.
TRAT. T1 T2 T3 PDAMERK PDAMERK + LC PArAChino C A B A B A B A B A B A B r1 585 730 807 780 380 310 285 340 75 85 94 155 G.A. 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 Repeticin r2 G.A. 825 0.27 855 802 0.27 816 520 0.27 400 317 0.27 280 80 0.27 60 87 0.27 105 r3 784 803 784 798 412 323 293 285 82 89 98 109 G.A. 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 Repeticin 0.1 1 2 3 216.67 305.56 290.37 270.37 316.67 297.41 298.89 297.04 290.37 288.89 302.22 295.56 140.74 192.59 152.59 114.81 148.15 119.63 105.56 117.41 108.52 125.93 103.70 105.56 27.78 29.63 30.37 31.48 22.22 32.96 34.81 32.22 36.30 57.41 38.89 40.37 r1 Promedio r2 r3 r1 Conidias/cc r2 r3 S. O 10 10 10 10 10 10 rea 2.01 2.01 2.01 2.01 2.01 2.01 r1 Conidias/cm2 r2 r3

243.52 311.11 293.89 293.89 299.63 292.96 127.78 170.37 136.11 115.74 110.56 107.04 29.63 46.11 25.93 35.56 31.67 38.33

1.22 x107 1.56 x107 1.47 x107 1.47 x107 1.50 x107 1.46 x107 6.39 x106 8.52 x106 6.81 x106 5.79 x106 5.53 x106 5.35 x106 1.48 x106 1.30 x106 1.58 x106 2.31 x106 1.78 x106 1.92 x106

6.06 x107 7.74 x107 7.31 x107 7.31 x107 7.45 x107 7.29 x107 3.18 x107 4.24 x107 3.38 x107 2.88 x107 2.75 x107 2.66 x107 7.37 x106 6.45 x106 7.87 x106 1.15 x107 8.84 x106 9.53 x106

T4 PAbAChino T5 T6 PFAr PFAb