INDICE DE CONTENIDO INTRODUCCIN ............................................................................................................... 4 OBJETIVOS ...................................................................................................................... 5 GENERAL ......................................................................................................................... 5 ESPECFICOS .................................................................................................................. 5 CAPITULO I....................................................................................................................... 6 CONCEPTO PREVIOS...................................................................................................... 6 1.

1 Clasificacin ........................................................................................................ 7 Por su origen: ............................................................................................... 7 Por sus aplicaciones: .................................................................................... 7 Por su accin intrnseca: .............................................................................. 7 Por su accin biolgica o bioqumica: ........................................................... 7 Por su reactividad metablica: ...................................................................... 8 Por su naturaleza: ........................................................................................ 8

1.2.1 1.2.2 1.2.3 1.2.4 1.2.5 1.2.6

CAPITULO II...................................................................................................................... 9 BIOTRANSFORMACIONES DE LOS COMPUESTOS XENOBIOTICOS .......................... 9 2.1 METABOLISMO Y BIOTRANSFORMACION ........................................................... 9 2.1.1 BIOTRANSFORMACIN ................................................................................ 10 2.1.2. BIODEGRADACIN ....................................................................................... 10 2.2. BIOACUMULACIN: COMPUESTOS BIODEGRADABLES Y NO ....................... 10 DEGRADABLES O PERSISTENTES. .......................................................................... 10 2.3. BIOTRANSFORMACIONES Y ACCIN TXICA ................................................. 11 2.3.1. DETOXICACIN ............................................................................................ 11 2.3.2 BIOACTIVACIONES ........................................................................................ 12 2.4. PRINCIPALES RUTAS PARA LA BIOTRANSFORMACIN DE ........................... 12 XENOBIOTICOS .......................................................................................................... 12 2.4.1 FASE I (oxidaciones, reducciones e hidrlisis)................................................. 12 2.4.2. FASE II ........................................................................................................... 13 3. CAPITULO III ............................................................................................................... 16 3.1 ABSORCIN DE XENOBIOTICOS ...................................................................... 16 Rutas exposicin y vas de entrada de los xenobioticos ................................. 16

3.1.1

3.1.2

Membranas biolgicas ................................................................................... 17 Mecanismos de transporte a travs de membrana .................................. 18 Factores que afectan al paso de compuestos a travs de membranas ... 19 Velocidad y extensin de la absorcin .................................................... 21 Biodisponibilidad (velocidad y extensin de la absorcin) ....................... 23 Principales vas de entradas de los xenobioticos .................................... 23

3.1.2.1 3.1.2.2 3.1.2.3 3.1.2.4 3.1.2.5

4. CAPITULO IV .............................................................................................................. 28 4.1 BIODEGRADACIN DE COMPUESTOS XENOBITICOS .............................. 28 Biodegradacin de compuestos aromticos clorados ................................. 28 Biodegradacin de dioxinas y furanos clorados .......................................... 29 Biodegradacin de los policlorobifenilos (PCB) .......................................... 31 Las bacterias como ingenieros metablicos ............................................... 32

4.1.1 4.1.2 4.1.3 4.1.4 4.2

Biodegradacin de compuestos nitroaromticos................................................ 33 Transformaciones bioqumicas de los compuestos nitroaromticos............ 35 Metabolismo del 2, 4,6-Trinitotolueno (TNT) ............................................... 39 Metabolismo de hidrocarburos nitroaromticos........................................... 42

4.2.1 4.2.2 4.2.3

INDICE DE ILUSTRACIONES Ilustracin 1. Nmero de membranas encontradas por un xenobotico en los procesos de absorcin y distribucin por el organismo. ....................................................................... 16 Ilustracin 2. Se observan las principales rutas de entrada de los xenobiticos en los organismos. ..................................................................................................................... 17 Ilustracin 3. Diagrama esquemtico de la membrana biolgica, (modelo de mosaico fluido segn Singer y Nicolson, 1972) .............................................................................. 18 Ilustracin 4. Efecto del pH sobre la ionizacin de compuestos Absorcin intestinal de cidos y bases dbiles en funcin del pH. ....................................................................... 20 Ilustracin 5. Las mayores tasas de bioacumulacin se producen para valores de 3 <log Kow< 6 ............................................................................................................................ 21 Ilustracin 6. Curvas de penetracin de los xenobiticos atreves de la piel. .................... 22 Ilustracin 7. Principales vas de entradas de los xenobioticos. ....................................... 24 Ilustracin 8. Semejanza estructural de algunas hormonas animales con compuestos Xenobiticos clorados. ..................................................................................................... 28 Ilustracin 9.Esquema representando la convergencia en clorocatecoles de las rutas de degradacin de dioxinas cloradas, clorodibenzofuranos y policlorobifenilos(PCB). .......... 29 Ilustracin 10.Conversin de dioxina y bibenzofurano en derivados dihidroxilados por Sphingomonas sp. RW1. ................................................................................................. 30 Ilustracin 11.Estructura general de los PCB ................................................................... 31 Ilustracin 12. Esquema general de la ruta degradativa de bifenilo por bacterias. ........... 33

Ilustracin 13. La susceptibilidad del ataque reductivo aumenta con el n de grupos nitro (N) dependiendo del resto de sustituyentes. Cuando N=3 el ataque es normalmente reductivo. ......................................................................................................................... 35 Ilustracin 14. Relaciones entre el cometabolismo del dinitrofenol y la fijacion de nitrgeno atravez del control por balance C/N. NCR(sistema de reprecion por catabolito nitrogenado); DNP ;ANP;N2 asa; ferredoxina reducida;NPR. .......................................... 38 Ilustracin 15. Foto reduccin de cido pcrico (Izquierda) a cido pricramico(derecha). . 39 Ilustracin 16. Mineralizacion de Acido pcrico y 2-CLdinitrofenol va 2.4 binitrofenol. ..... 39 Ilustracin 17. Potencial de los grupos-NO2 del TNT (E4>e2=E6) ................................... 40 Ilustracin 18. Biodegradacin de TNT;DNT;MNT;NTPR;ATT; Aerbico; Anaerbico. .... 40 Ilustracin 19. Metabolitos anaerobios del TNT en bacterias. El TAT se puede metabolizar a tolueno, p-cresol y metilfloroglucinol. ............................................................................ 42 Ilustracin 20. hidrocarburos aromticos poli cclicos nitrados. ........................................ 43 Ilustracin 21.Degradacion de Nitro-PAH por el hongo Cunninghamella elegans.(Amarillo aromtico); Cit P-450; Glucosa; GU(glucuronato) ............................................................ 43

INTRODUCCIN

Se puede definir a un compuesto xenobitico como aquel compuesto extrao que al contrario de los compuestos naturales en su mayora presentan mayor resistencia a la degradacin, debido a su gran toxicidad y capacidad acumulativa es perjudicial para todos los organismos vivos y a su medio. Es necesario conocer sobre estos compuestos con el fin de intentar darle una solucin al impacto que estos generan, en el ambiente en el cual interactan. Para la redaccin de este trabajo se sintetiz la informacin obtenida de fuentes fsicas y digitales. La monografa se divide en cuatro captulos: el primero tratara conceptos previos para el reconocimiento y clasificacin de xenobioticos segn su medio, el segundo est basado en la biotransformacin de compuestos xenobioticos , la tercera parte est basado en la biotransformacin de compuestos xenobioticos en animales y plantas y el cuarto sobre biodegradacin de xenobiticos. Estos compuestos sintticos son poco peculiares pero necesarios en la vida cotidiana de los seres humanos pero al mismo tiempo muy toxico para nosotros, la flora, fauna y todo el medio ambiente que nos rodea, comportndose de distinta forma, dependiendo del medio donde se encuentren. Entre los obstculos para la realizacin del trabajo se destaca la falta de coordinacin del tiempo entre los integrantes.

OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL Identificar los organismos y procesos que biotransforman los xenobiticos. OBJRTIVOS ESPECFICOS Determinar los organismos que intervienen en la biotransformacin de los xenobiticos Determinar el impacto ambiental de los xenobiticos en los diversos tipos de ecosistemas. Determinar las reacciones presentes en la biodegradacin de los xenobiticos. Determinar los organismos ms efectivos para la biotransformacin de los diversos xenobiticos.

CAPITULO I

CONCEPTO PREVIOS

Qu es un xenobitico? Son compuestos qumicos que no forman parte de la composicin de los seres vivos, ni tampoco son producto del metabolismo de los organismos. Son creados por el hombre mediante sntesis qumica y que contienen estructuras que no estn presentes (o son muy raras) en la naturaleza (especialmente grupos Cl-, SO4 -2 y NO3-). Suelen ser productos contaminantes (an ms si su concentracin es mayor) de determinados tipos de ecosistemas y generalmente ejercen algn tipo de efecto sobre los seres vivos, aunque no tengan toxicidad aguda. Se ha dicho que pueden llegar a tener efectos cancergenos, mutagnicos, inhibidores de los procesos metablicos, etc.; pero tambin son usados como frmacos en algunas ocasiones dependiendo de su actividad biolgica, como es el caso de los fungicidas. Al mismo tiempo son usados para el control de plagas por sus propiedades insecticidas y fumigantes, pero como poseen grados de bioacumulacin, estos son transportados a los organismos consumidores secundarios y terciarios y as mismo sus efectos nocivos. Se podra decir que el efecto de los xenobiticos en los organismos vivos depende de: Variabilidad metablica del organismo que lo asimila Concentracin del xenobitico Tiempo de vida del organismo asimilador Condicin fisiolgica e inmune del organismo Tiempo de expulsin del sistema del organismo del xenobitico (depende de las enzimas del organismo generalmente) Clase de xenobitico (origen, toxicidad, naturaleza, etc.) Predisposicin gentica del organismo asimilador.

NO TODA SUSTANCIA TXICA ES UN XENOBITICO Puesto que los seres vivos tambin producen sustancias txicas denominadas toxinas. Pero probablemente no exista xenobitico que no sea txico y carezca de un grado de bioacumulacin. Para que un xenobitico pueda eliminarse y/o neutralizarse debe ser metabolizado. Algunos autores indican que estos compuestos pueden ser excretados sin cambio alguno, pero sostienen que esto no significa necesariamente que no queden trazas acumuladas en el organismo que no puedan ser eliminadas por completo. Para la eliminacin de un xenobitico del organismo se distinguen dos fases importantes: Fase I: Donde la reaccin ms comn es la hidroxilacin por enzimas monoxigenasas (citocromo P450) y la hidrlisis (por ejemplo, la catlisis por parte de las esterasas)

 Fase II: Los productos de la fase I son convertidos a metabolitos ms polares por accin de enzimas especficas, por conjugacin con cido glucurnico, sulfato, acetato, glutatin o ciertos aminocidos o por metilacin. El propsito global de ambas fases es incrementar su solubilidad en agua al aumentar la polaridad. Pero en algunas ocasiones las reacciones metablicas convierten a los xenobiticos inactivos en compuestos biolgicamente activos. 1.1 Clasificacin

Se puede abordar desde diferentes puntos de vista: 1.2.1 Por su origen: Intencionado o casual: Deshechos urbanos, desechos industriales, mixtos, explotaciones mineras, explotaciones agrcolas. De procedencia variada: tabaco, conservantes, plaguicidas, estabilizantes, plastificantes, aditivos, inductores del crecimiento, toxinas bacterianas. Accidentes industriales: factoras, transporte, etc. 1.2.2 Por sus aplicaciones: Medicamentos. Productos de uso domstico. Productos de usos industriales. Productos de usos agrcolas. Productos de locomocin. Por su accin intrnseca: Frmacos: Antibiticos, antineoplsicos (metotrexato, agentes quimioteraputicos y citostticos, agentes alquitrantes, vinblastina, etc.)plaguicidas, sustancias de abuso o drogas, etc. Txicos de accin local: custicos, corrosivos o vesicantes: cidos, lejas, NO2, SO3, disolventes, cromatos, alquitranes. Destruyen clulas de la piel, mucosas, rbol respiratorio. Dermatitis, bronquitis, conjuntivitis, quemaduras, reacciones alrgicas. Txicos de accin sistmica: Aditivos, Edulcorantes, Conservantes, Plaguicidas. 1.2.4 Por su accin biolgica o bioqumica: Biosidas. Muta gnicos.

1.2.3

 1.2.5

Carcinognicos, Teratognicos; Inhibidores, activadores e inductores de enzimas Agentes desacoplantes, etc.

Por su reactividad metablica: Biodegradables o persistentes: Bioacumulativos, bioactivables. Por su naturaleza: De Naturaleza fsica: Color tintes (naturaleza qumica). Turbidez minas e industria. Calor centrales nucleares y trmicas. Radiaciones en la naturaleza (rocas y csmica), uso de la energa nuclear (investigacin, medicina, industria). Ruido o Contaminacin por olores.- Sustancias voltiles olorosas: alcanfor, almizcle, floral, mentolado, ter, agrios, ftidos. De Naturaleza biolgica: Seres vivos o compuestos procedentes de ellos: bacterias, virus, hongos, protozoos, materia orgnica, residuos: vegetales, urbanos, fecales, de mataderos, etc. De naturaleza qumica: Orgnicos e inorgnicos.

1.2.6

CAPITULO II

BIOTRANSFORMACIONES DE LOS COMPUESTOS XENOBIOTICOS Los organismos estn expuestos a un gran nmero de diferentes sustancias qumicas xenobiticas, que, una vez absorbidas por el organismo, se acumulan en l y pueden amenazar su equilibrio funcional. Si la concentracin de cualquier xenobitico en el organismo es excesiva, inevitablemente comportar un riesgo para las funciones de las biomolculas que acten en su entorno, pudiendo alterar el correcto funcionamiento de un rgano, tejido, sistema, etc, interfiriendo en las reacciones bioqumicas. Al igual que la absorcin y la distribucin, dos procesos de transferencia, la Biotransformacin tambin se lleva a cabo utilizando los mecanismos existentes en los tejidos, para ello se usa la misma maquinaria bioqumica con la que se metabolizan los compuestos endgenos, a veces de estructura qumica similar. Al conjunto de reacciones metablicas por medio de las cuales los organismos modifican la estructura qumica de un XB se le denomina BIOTRANSFORMACIN. Podemos predecir que la biotransformacin de un XB consiste fundamentalmente en incrementar su polaridad para posibilitar su eliminacin, en convertir un compuesto no polar en uno soluble en agua. Este es el mecanismo ms comn que usan los organismos para transformar y eliminar los XBs ambientales. Un XB en el interior del organismo puede seguir muchas opciones, pero simplificando: a) Puede ser excretado sin que haya sufrido modificacin alguna, con su estructura original. b) Puede sufrir reacciones de transformacin metablica, biotransformaciones. Cuando stas se producen, los compuestos sonbiodegradables. Existe un conjunto de enzimas en los organismos que es ms responsable de las biotransformaciones de XBs.

2.1 METABOLISMO Y BIOTRANSFORMACION (Jos, 2006) El metabolismo de un organismo es el conjunto de reacciones enzimticas organizadas en rutas bioqumicas que sirven para mantener la funcionalidad de las clulas con las caractersticas estructurales y funcionales propias. Cuando las reacciones enzimticas operan sobre componentes endgenos nos estamos refiriendo al metabolismo propiamente dicho y cuando las reacciones enzimticas operan sobre los xenobiticos nos referimos a las reacciones de biotransformacin. Ambos trminos metabolismo y biotransformacin se usan a veces como sinnimos, particularmente cuando se refiere al campo de los xenobiticos o de "drugs". Por ejemplo, las enzimas biotransformadoras de xenobiticos son frecuentemente llamadas enzimas metabolizantes de drogas. Cualquier enzima puede operar sobre su sustrato natural o sobre un compuesto XB, sea frmaco, contaminante, etc.

enzima Sustrato --------------------------- Producto o metabolito Cofactor

El trmino enzimas bitransformadoras de xenobiticos sera mas apropiado, aunque el trmino enmascarara el hecho de que varios compuestos endgenos, como los esteroides, puedan ser sustratos de estas mismas enzimas. Aplicar el trmino metabolismo a la biotransformacin de xenobiticos, as como el trmino de metabolito a los derivados metablicos de aquellos no parece muy adecuado, pero suele ser generalizado. Igualmente cuando se habla de individuos metabolizadores pobres, aquellos con alguna deficiencia enzimtica y que tienen menor capacidad de biotransformar los XBs., o el trmino metabolizadores extensivos para aquellos individuos con fenotipo normal. Podra resultar conveniente aplicar el trmino de sistemas biotransformadores, aunque no es usual. 2.1.1 BIOTRANSFORMACIN Cualquier reaccin bioqumica que opere sobre un XB a cargo de los sistemas enzimticos de un organismo. Se entender como BIODEGRADACIN el conjunto de transformaciones metablicas que sufra un XB a lo largo de su paso por un organismo, especialmente cuando el XB se degrade y ha sido el proceso ms estudiado para muchos xenobiticos en muchos tipos diferentes de organismos (fundamentalmente organismos). 2.1.2. BIODEGRADACIN El resultado de todas las biotransformaciones de un XB en un entorno concreto, a cargo de los diferentes organismos que operen en l. La capacidad biotransformadora de los organismos es muy diferente y est relacionada, adems, con su grado de exposicin a XBs. Por ejemplo, los insectos, que se alimentan de una amplia variedad de plantas, tienen una mayor capacidad para biotransformar XBs que aquellos insectos que se alimentan de un nmero limitado de plantas. Comparados con los mamferos, los peces tienen una ostensible menor capacidad de biotransformar XBs, porque ellos pueden eliminar ms fcilmente los XBs no transformados a travs de las branquias. Por otra parte, las diferencias especficas en la capacidad de biotransformar XBs entre los mamferos no refleja simplemente unas diferencias en su exposicin a contaminantes, sino otros muchos factores.

2.2. BIOACUMULACIN: COMPUESTOS BIODEGRADABLES Y NO DEGRADABLES O PERSISTENTES. Los xenobiticos despus de ser absorbidos, dependiendo de sus propiedades fsico-qumicas, se acumulan en los organismos, especialmente los compuestos con caractersticas lipoflicas o que son fuertemente liposolubles. Otros compuestos se

acumulan porque emulan comportamientos de anlogos biolgicos o porque interaccionan con algunas biomolculas. Por ejemplo el Pb es transportado en sangre dentro de los eritrocitos, como el Fe2+ y se acumula en los huesos al igual que el Ca2+ .El Cd2+ interacciona con las enzimas que dependen de Zn2+ (carboxipeptidasas). El comportamiento bioacumulador se basa tambin en las funciones de los rganos excretores (rin, pulmn, etc.), que generalmente se deshacen de las sustancias en contacto con lquidos o con gases, donde estn en contacto con los conductos de estos rganos. El rin excreta sustancias (hidrosolubles) a travs del filtrado glomerular de la sangre, envindolas por los tbulos renales a la vejiga. Desde los tbulos renales muchas sustancias son reabsorbidas hasta la circulacin, bien de forma activa (agua, sales,glucosa) o bien de forma pasiva (sustancias lipoflicas). La reabsorcin pasiva de las sustancias lipoflicas se produce porque dichas sustancias tienden a disolverse en los lpidos de las membranas de las clulas epiteliales. Puesto que en ellas pueden unirse despus a protenas o lipoprotenas de la sangre, as se genera un transporte neto desde el filtrado glomerular hacia la sangre. Este fenmeno explica que la concentracin de sustancias lipoflicas en el organismo pueda ir en aumento y se produzca su bioacumulacin, primordialmente en los tejidos con alto contenido lipdico (adiposo, hgado, mamas, etc).

2.3. BIOTRANSFORMACIONES Y ACCIN TXICA Desactivacin o detoxicacin y bioactivacin o activacin. Los organismos contienen un nmero de sistemas enzimticos capaces de biotransformar compuestos XBs, al igual que metabolizan los compuestos endgenos para convertirlos en desechables, para transformarlos en otros ms hidrosolubles, que sean ms fcilmente excretables. Las biotransformaciones pueden inducir considerables cambios en la actividad biolgica de los XBs. Si esta actividad decrece, el proceso se denomina de bioinactivacin (detoxicacin) y si aumenta se denomina bioactivacin (activacin). As pues, los efectos txicos de los compuestos exgenos, frecuentemente no provienen de los compuestos patrn sino de los metabolitos reactivos formados a partir de ellos dentro de las clulas. Estas biotransformaciones de compuestos relativamente inertes a metabolitos muy reactivos con una toxicidad intrnseca mayor que la de los compuestos originales se denomina activacion metabolica , bioactivacion o toxificacin.

2.3.1. DETOXICACIN La actividad biolgica (incluida la txica) de las sustancias frecuentemente desciende con las biotransformaciones, pero no siempre La biotransformacin suele producir un aumento de hidrosolubilidad de una molcula y as mejora su excreccin. Habr menos acumulacin de la sustancia en el organismo, su nivel descender y puesto que hay una relacin general (dosis-respuesta) entre la concentracin de sustancia y la intensidad de su efecto txico, este tipo de

biotransformaciones significan un descenso de la intensidad de la accin biolgica original y se puede definir como bioinactivacin o detoxicacin. 2.3.2 BIOACTIVACIONES Producen un aumento de la reactividad del XB; generalmente conllevan la formacin de: Formacin de electrfilos, de radicales libres, de nuclefilos o de reactivos red-ox. Estas reacciones aumentan la polaridad de los XBs y la introduccin de grupos polares en una molcula no solo aumenta su reactividad para someterse a posteriores reacciones de destoxicacin y aumenta su reactividad hacia otras muchas molculas, incluidas las biolgicas. Si un XB puede reaccionar con un componente de un sistema biolgico (proteina, DNA, etc, o cualquier metabolito del metabolismo celular) hay una posibilidad razonable de que la clula se vea afectada por l. Si esta influencia es adversa, significa que el XB mostrar un efecto txico. 2.4. PRINCIPALES RUTAS PARA LA BIOTRANSFORMACIN DE XENOBIOTICOS Las reacciones de biotransformacion son conversiones enzimticas de sustancias xenobiticas lipoflicas hacia productos hidroflicos, generalmente, mas eliminables o excretables. El conjunto de reacciones de biotransformacin de XB suele agruparse en dos fases: I y II. Aunque la degradacin completa de un XB requiere de muchas reacciones, el ataque incial suele ser mediante las reacciones de fase I. Un primer conjunto de reacciones, en las que la biotransformacin es la conversin de compuestos lipoflicos (no polares) en compuestos ms polares y por lo tanto algo ms solubles en agua, mediante las reacciones llamadas de 2.4.1 FASE I (oxidaciones, reducciones e hidrlisis). Muchas de estas reacciones tienen lugar bajo la catlisis de enzimas componentes de los sistemas llamados oxidasas de funcin mixta (OFM), distribuida principalmente en hepatocitos. Estas reacciones producen compuestos que pueden ser ms, igual o menos txicos que sus predecesores, aunque si es frecuente que sean ms reactivos, lo que suele con llevar una mayor capacidad txica. 2.4.1.1. OXIDACION Aunque la degradacin completa de un XB requiere de muchas reacciones, el ataque inicial suele ser mediante las reacciones de fase I: oxidaciones o reducciones. Las oxidaciones incluyen todas las monooxigenasas dependientes del Cit P-450

Para hacer este trabajo las clulas cuentan con dos sistemas de enzimas, que tienen la funcin de introducir en el substrato un tomo de oxgeno proveniente del oxgeno molecular (oxigenasas de funcin mixta). Estos dos sistemas son las amino-oxigenasas y los Citocromos P-450. Ambos sistemas se encuentran localizados en el retculo endoplsmico. Los Citocromos P-450 estn formados por dos protenas diferentes, una tiene funcin de reductasa y la otra es una hemoprotena con actividad de oxigenasa. La oxigenasa es una protena, que en estado reducido y monoxicarbonada, presenta un pico de absorcin a 450 nm. Que es lo que le da el nombre a esta familia de enzimas).

2.4.1.2. REDUCCION Los Citocromos P-450 estn formados por dos protenas diferentes, una tiene funcin de reductasa y la otra es una hemoprotena con actividad de oxigenasa. La oxigenasa es una protena, que en estado reducido y monoxicarbonada, presenta un pico de absorcin a 450 nm. Que es lo que le da el nombre a esta familia de enzimas).

2.4.1.3. HIDRLISIS Literalmente significa rotura del agua. El resultado neto de la hidrlisis es que tanto la molcula del contaminante como la del agua se rompen y los dos fragmentos de la molcula de agua se unen a los dos fragmentos de la molcula del contaminante para dar lugar a nuevos compuestos. La hidrlisis es un tipo de transformacin de compuestos orgnicos que, a diferencia de la biodegradacin, no requiere ser catalizada por microorganismos.

2.4.2. FASE II Son reacciones de conjugacin (glucuronidacin, sulfonacin y formacin de Ac. mercaptrico), donde los XBs polares en origen y los XBs que se han convertido en polares por haber soportado reacciones tipo fase I, son conjugados (ac. glucurnico, sulfato, glutation) con sustancias endgenas hidroflicas. Son reacciones de conjugacin. Se unen covalentemente a compuestos sulfatos,glutation, AA, o acetatos. endgenos: cido glucurnico,

Los conjugados son compuestos polares generalmente inactivos y eliminables. Estas reacciones enzimticas estn encaminadas a aumentar an ms la hidrosolubilidad de sus sustratos y por lo tanto hacerlos ms fcilmente excretables por el organismo. Adems la mayor parte de los derivados conjugados tienen muy baja actividad biolgica, por lo tanto muchas reacciones de la fase II son reacciones de bioinactivacin en procesos de detoxicacin. Aunque no siempre. Tal como se mencion anteriormente, consiste en reacciones de conjugacin, catalizadas por un conjunto de enzimas, la mayora de ellas localizadas en el citosol. El resultado que se logra con estas reacciones es un gran incremento de la solubilidad en agua del xenobitico. 2.4.2.1. GLUCURONIDACIN La reaccin consiste en agregar un grupo glucuronil en un grupo hidroxilo, amino o sulfhidrilo del txico. La enzima que cataliza la reaccin es la UDP glucuronil transferasa y el donador del grupo polar es el cido UDP glucurnico. La enzima se encuentra localizada en el retculo endoplsmico, a diferencia de las otras enzimas de la Fase II que se localizan en el citosol. Los compuestos glucuronidados son muy solubles en agua y aparecen en la orina y en la bilis.

2.4.2.2. SULFATACIN O SULFACIN La reaccin consiste en la transferencia de un grupo sulfato de PAPS (3fosfoadenosil-5-fosfosulfato) a un grupo hidroxilo o amino en el xenobitico. La reaccin es catalizada por sulfotransferasas, enzimas solubles localizadas en el citosol. El producto de la reaccin es un sulfato orgnico ionizado, muy soluble en agua que se excreta en la orina.

2.4.2.3. AMINOACIDACIN La reaccin consiste en la formacin de una unin peptdica entre el grupo amino de un aminocido, normalmente glicina, y un carboxilo en el xenobitico.

 Para que esta reaccin se pueda dar es indispensable que el xenobitico tenga un grupo carboxilo. Estos conjugados son eliminados en la orina debido a que el sistema de transporte del rin reconoce al aminocido. 2.4.2.4. GLUTATIONIZACIN La glutationizacin consiste en la adicin de glutatin (GSH), a travs de su grupo sulfhidrilo (nucleoflico), con un carbn electroflico del xenobitico. La reaccin es catalizada por la glutatin-S-transferasa y el glutatin mismo es el cofactor de alta energa. El glutatin es un tripptido, Glu-Gli-Cis. El compuesto que se forma se rompe en el rin produciendo el Cis-derivado, que se acetila para producir un conjugado del cido mercaptrico, el cual se excreta en la orina. 2.4.2.5. METILACIN La metilacin juega un papel menor en la biotransformacin de xenobiticos, excepto en la destoxificacin de arsnico. La metilacin es importante en la transformacin de compuestos endgenos y forma parte en la biosntesis de varios aminocidos y esteroides, as como en la metilacin del ADN.

3. CAPITULO III

3.1 ABSORCIN DE XENOBIOTICOS

Absorcin es el proceso por el cual un compuesto penetra dentro del torrente circulatorio de un organismo desde el entorno ambiental en el que se mantiene dicho organismo, despus podr llegar hasta el medio celular (rgano, tejido, etc.) La transferencia hasta el interior de un orgnulo subcelular, aislado por membranas, puede ser necesaria para que el txico pueda ejercer la interaccin molecular con la macromolcula correspondiente.

Ilustracin 1. Nmero de membranas encontradas por un xenobotico en los procesos de absorcin y distribucin por el organismo. 3.1.1 Rutas exposicin y vas de entrada de los xenobioticos (Collin, 2004) Exposicin: manera cmo el organismo se pone en contacto con los txicos. Vas de absorcin: mayoritarias (inhalatoria, cutnea, digestiva) y minoritarias (placentaria, leche materna y parenteral).

Ilustracin 2. Se observan las principales rutas de entrada de los xenobiticos en los organismos.

3.1.2 Membranas biolgicas Sea cual fuere la va de entrada de los xenobiticos: ruta drmica, oral o por inhalacin, las membranas son la primera estructura biolgica con la que se encuentran. Las membranas biolgicas estn compuestas por fosfolpidos, colesterol y protenas. El modelo bsico, postulado por Davson and Danielli (1935), es todava vlido para describir la estructura de las membranas celulares y una montaa de datos (microscpicos, bioqumicos) han confirmado esta hiptesis con relativamente pocas modificaciones. Diagrama esquemtico de la membrana biolgica, (modelo de mosaico fluido segn Singer y Nicolson, 1972) Componentes: Protenas y Lpidos: Colesterol, fosfolpidos y glicolpidos. Lpidos: Fosfolpidos, protena / lpido= 5 en mielina Glicolpidos= 1 en membrana externa mitocondrial

Protena integral Protena perifrica

Ilustracin 3. Diagrama esquemtico de la membrana biolgica, (modelo de mosaico fluido segn Singer y Nicolson, 1972)

3.1.2.1 Mecanismos de transporte a travs de membrana Los mecanismos primarios de transporte de compuestos a travs de las membranas biolgicas son bsicamente 4: Filtracin: La filtracin a travs de los poros es un posible canal para molculas de tamao relativamente pequeo (MW 100), pero las molculas grandes son excluidas. La filtracin es considerada como importante en los mecanismos de eliminacin ms que en los de absorcin. iones, algunos necesitan transporte activo

Difusin pasiva o simple: Parece ser el primer mecanismo en la entrada de txicos. El compuesto se mueve a travs de las membranas por simple difusin y un coeficiente de reparto adecuado entre las fases agua: lpidos son los parmetros ms responsables de la velocidad de movimiento. formas elementales de metales o compuestos inorgnicos

Transporte facilitado: Algunos exgenos pueden ser absorbidos por sistemas especficos (protenas) del transporte de compuestos endgenos a travs de membrana. Algunos sistemas de transporte no requieren energa con lo que son incapaces de mover compuestos frente a gradientes de concentracin, solo actan a favor de gradiente (difusin facilitada o mediada). Otros requieren energa y transportan los compuestos contra un gradiente de concentracin (transporte activo). No para XBs. Iones unidos a ligandos, aminocidos, protenas. Depender de: Membrana celular y Naturaleza de los compuestos.

Endocitosis: La pinocitosis y la fagocitosis son procesos especializados en los que las membranas celulares se invaginan o fluyen alrededor de un txico y lo engullen; as son capaces de transferirlo a su interior, sin atravesar estrictamente la membrana. compuestos unidos a partculas.

3.1.2.2 Factores que afectan al paso de compuestos a travs de membranas Propiedades fsico-qumicas de los xbs Grado de ionizacin, pKa, y Coeficiente de particin, Tamao, Solubilidad en medios acuosos y en medios lipdicos. Ionizacin de los compuestos: La naturaleza anfiptica de las membranas crea una barrera para los iones, compuestos altamente polares, aunque no los excluye completamente. Con los alcaloides se demostr que las membranas eran ms permeables a los compuestos no inicos que para los inicos. Los alcaloides en el medio cido del estmago son difcilmente absorbidos y la toxicidad sistmica no se ve alterada. Si el medio estomacal se hace ms alcalino, los compuestos se hacen no inicos y son absorbidos y por lo tanto ejercen su toxicidad. Luego la absorcin de xenobiticos por va estomacal est muy afectada por las condiciones de pH. La cantidad de txico en forma ionizada y no ionizada depende del pKa del txico y del pH del medio; cuando el pH del medio sea igual al pKa del compuesto disuelto, el 50 % de compuesto estar en forma ionizada y el 50 %

en forma no ionizada. La relacin vendr dada por la ecuacin de HendersonHasselbalch.

Forma no ionizada: Son compuestos cidos muy ionizados a pH > 6, poco absorbibles, poco ionizados a pH < 6, muy absorbibles.

Forma ionizada: Son compuestos bsicos muy ionizados a pH < 6, poco absorbibles, poco ionizados a pH > 6, muy absorbibles.

Ilustracin 4. Efecto del pH sobre la ionizacin de compuestos Absorcin intestinal de cidos y bases dbiles en funcin del pH.

Puesto que la forma lpido-soluble (no ionizada) de un electrolito dbil es el constituyente difundible, los cidos orgnicos dbiles difunden ms fcilmente en un ambiente cido y las bases orgnicas dbiles en ambientes bsicos (ver Tabla). La absorcin de un compuesto resulta muy afectada por el pH del medio y su eliminacin por el pH de la orina. Coeficiente de particin o de reparto Puesto que despus de atravesar la bicapa lipdica los XB pasan a la fase acuosa, ha habido estudios que correlacionan el coeficiente de particin (solubilidad en fase orgnica/solubilidad en agua) de los txicos con la tasa de penetracin a travs de las membranas. Los compuestos liposolubles atraviesan mejor las membranas biolgicas. Muchos estudios con series de compuestos homlogos muestran una buena correlacin entre coeficiente de particin y tasa de penetracin. En este parmetro se incluyen las propiedades de tamao y de solubilidad. Kow es el coeficiente de particin entre octanol / agua Kow alto, alta afinidad por lpidos = lipoflico Kow bajo, baja afinidad por lpidos = hidroflico

Ilustracin 5. Las mayores tasas de bioacumulacin se producen para valores de 3 <log Kow< 6 3.1.2.3 Velocidad y extensin de la absorcin El movimiento de xenobiticos no polares a travs de las membranas puede ser predicho por la ley de Fick`s que rige el fenmeno de la difusin. Igualmente puede servir para grupos polares o electrolitos de bajo peso molecular.

<> Ka [C1-C2] para un supuesto concreto. La velocidad de difusin es relativa al gradiente de concentracin a travs de membrana (C1-C2), del rea superficial disponible para la transferencia (A), del espesor de la membrana (d) y de la constante de difusin (K). Para una situacin concreta, Ka ser constante y representa la velocidad de penetracin, ser la pendiente de la recta si la relacin es lineal. La representacin del logaritmo de la cantidad remanente, que no ha entrado, frente el tiempo, puede ser lineal. La curva puede ser: recta, monofsica, que indica una velocidad constante de penetracin. de apariencia curva con dos fases, lo que demuestra que el compuesto penetra con dos velocidades diferentes, una fase rpida y otra fase lenta.

Ilustracin 6. Curvas de penetracin de los xenobiticos atreves de la piel.

La determinacin de la vida media de penetracin, si el proceso es de primer orden y la representacin es lineal es un clculo fcil; T1/2 (vida media de penetracin) que es un parmetro til para la comparacin del comportamiento de txicos. La T1/2 es el tiempo que tarda en entrar el 50% de la cantidad total de compuesto que finalmente penetra a travs de la membrana. (A) Monofsica, (B) bifsica y (C) multifsica. (Se representa el compuesto no absorbido frente al tiempo) 3.1.2.4 Biodisponibilidad (velocidad y extensin de la absorcin) El efecto teraputico de un frmaco o txico de un xenobiticos depender de su velocidad de entrada (K) y de la extensin de la absorcin (F). F es el total de la fraccin de droga absorbida. Ambos parmetros son importantes para definir la cantidad de xenobiticos disponible para un rgano o tejido, parmetro que se denomina con el trmino biodisponibilidad. Ambos factores afectan a la correlacin entre la dosis administrada de un frmaco o de la exposicin a un contaminante y su concentracin en el organismo, as como de su respuesta toxicolgica, en funcin de la relacin dosisrespuesta. La velocidad de absorcin depende de los siguientes factores: La concentracin del txico. La magnitud y localizacin en el cuerpo del rea expuesta. La hidratacin, quemaduras y ciertas enfermedades incrementan la permeabilidad. La velocidad de flujo sanguneo. Temperatura y humedad ambiental. La interaccin con otras substancias que puedan modificar la permeabilidad de la piel.

3.1.2.5 Principales vas de entradas de los xenobioticos

Ilustracin 7. Principales vas de entradas de los xenobioticos.

Absorcin cutnea (a travs de la piel) La absorcin a travs de la piel es un tema complejo, por la propia estructura de la piel. Esta se considera una buena barrera de proteccin (100 micras), por lo tanto, es bastante impermeable a soluciones acuosas y a iones; es permeable a muchos tipos de xenobiticos fundamentalmente por su carcter lipoflico. Es importante en especies acuticas (peces). Para humanos es importante en casos de exposicin en ambientes de fabricacin o manipulacin. Txicos que pueden absorberse por piel y causar intoxicacin aguda: Organofosforados Anilinas Derivados halogenados de los hidrocarburos. Derivados nitrados del benceno Sales de talio

Por contacto drmico suelen entrar: Medicamentos y contaminantes.

Factores que afectan al proceso: Biotransformacin cutnea, puede alterar la absorcin. Diferentes velocidades de absorcin segn regin anatmica: escroto, axila, espalda, abdomen. Efectos de surfactantes y disolventes que acompaan a los xenobiticos. Para metales slo se absorben los derivados orgnicos. Diferencias importantes entre especies, grosor, pelo, etc. El cerdo y los primates sirven para el modelo humano. Los steres penetran mejor que las drogas libres. Las esterasas (que hidrolizan steres) de la piel liberan la droga activa.

Ingestin (absorcin intestinal-gastrointestinal) Ruta ms frecuente en las intoxicaciones accidentales o con fines suicidas. Diversos compartimentos con particulares caractersticas histolgicas, bioqumicas y fsico qumicas. Cuando el txico se ingiere, entra al Tracto Gastro Intestinal (TGI), la mayor cantidad se absorbe en el estmago y en los intestinos aunque tambin puede haber absorcin en cualquier lugar del TGI, incluyendo las absorciones sublingual y rectal. La gran rea de absorcin del intestino y los largos tiempos de residencia, dependiendo de la movilidad intestinal, permiten que se tengan absorciones considerables aunque el flujo, cantidad transportada por unidad de rea y de tiempo, sea pequeo. Es la va ms importante para la entrada de txicos en el organismo. El tracto intestinal est muy capilarizado y una vez que los compuestos han atravesado el epitelio entran en la circulacin sistmica a travs de los capilares. Se ha estimado que la alimentacin con leche materna puede llegar a aportar 100 pg. iTEQ/kg peso/da. El sitio de absorcin depende en parte del estado de ionizacin del compuesto. Los cidos dbiles es ms probable que se absorban en el estmago, donde hay un pH bajo, mientras que las bases dbiles, que estn menos ionizadas a pH alto, se absorben mejor en el intestino donde existen estas condiciones

El lugar de absorcin ms importante es el estmago e intestino delgado. Gran superficie por el nmero de microvellosidades (120 m2). Presencia de alimentos. Peristaltismo intestinal y Velocidad de evacuacin gstrica. Concentracin, rapidez de disolucin, coeficiente de particin (liposolubilidad).

La absorcin de los xenobiticos usa los mismos mecanismos que tiene el TGI para absorber los nutrimentos. Por ejemplo, el plomo se absorbe en el intestino usando el sistema de transporte del calcio. Para que un compuesto ingerido pueda alcanzar la circulacin general, acceder al resto del organismo y tener la posibilidad de causar un dao, debe primero ser capaz de resistir: La accin de las enzimas digestivas, El pH del estmago, La biodegradacin por la flora intestinal. La biotransformacin por las enzimas hepticas.

La absortividad del txico ingerido depende de sus propiedades fisicoqumicas. Los compuestos liposolubles de bajo peso molecular y los compuestos no ionizados se absorben mejor. Factores que modulan la absorcin gastrointestinal: pH. la dieta. la motilidad intestinal. Biotransformacin. Por la flora microbiana y las enzimas liberadas desde el epitelio.

Absorcin respiratoria (a travs del sistema respiratorio) Es la tercera ruta mayoritaria. La inhalacin es la va de exposicin a gases, vapores de lquidos voltiles, aerosoles y partculas suspendidas en el aire (CO, NO2,

benceno, formaldehido, CCl4, Pb, silica, asbestos, etc.). Los sitios de absorcin son la nariz y los pulmones. La nariz acta como un limpiador o trampa para los gases solubles en agua y los muy reactivos as como, para retener las partculas grandes. La absorcin de gases que llegan al pulmn usa el mecanismo del intercambio de oxgeno y bixido de carbono. La velocidad de difusin de los gases en el pulmn es muy grande, debido a que la barrera es escasa, el flujo sanguneo es muy alto y el rea de transferencia es muy grande. Lo anterior produce que la velocidad de absorcin en el pulmn sea alta, independientemente de la naturaleza qumica del agente. Las substancias ionizadas, que son las de ms lenta absorcin, normalmente no son voltiles, por lo que es poco probable que se encuentren en el aire como vapores o gases, aunque pueden llegar hasta los alvolos si estn absorbidas a las partculas. Vapores y gases La velocidad de entrada vendr definida por la concentracin del compuesto, el tiempo de inhalacin, la solubilidad del mismo en la sangre. Interior de edificios con conservantes de madera (clorofenoles). Aerosoles y partculas La entrada de aerosoles y partculas depender en gran medida del efecto de filtro que ejerzan las vas respiratorias. Es una va importante de entrada de contaminantes ambiental.

4. CAPITULO IV 4.1 BIODEGRADACIN DE COMPUESTOS XENOBITICOS (Rodrigues, 2005)

Adems de los compuestos naturales susceptibles de biodegradacin, la industria sintetiza miles de compuestos qumicos, denominados xenobiticos, que poseen una gran cantidad de contaminacin ambiental ya que al contrario de los compuestos naturales poseen mayor o menor resistencia a la biodegradacin. Entre los compuestos xenobiticos, los ms importantes desde el punto de vista cuantitativo son los derivados aromticos clorados y los nitrados, ya que son base de las industrias de fabricacin de productos manufacturados de inters industrial. 4.1.1 Biodegradacin de compuestos aromticos clorados La biodegradacin de compuestos aromticos clorados ha recibido gran atencin debido a su especial toxicidad, debido a que adems de sus efectos directos deletreos sobre las estructuras biolgicas, algunos actan como hormonas (xenohormonas), esto ha hecho que estos compuestos aromticos clorados se tomen en prioridad. As los policlorobifenilos (PCB) se han relacionados con problemas de infertilidad, con el Como puede observarse en la ilustracin 8 , los PCB ,las Dioxinas y furanos clorados tienen cierta semejanza con algunas hormonas como el estadiol, pero en la mayora de

Ilustracin 8. Semejanza estructural de algunas hormonas animales con compuestos Xenobiticos clorados.

los casos no se conoce exactamente a qu nivel actan. Cabe destacar que las rutas degradativas aerbicas de todos estos compuestos formen un embudo metablico que converge en los clorocatecoles. Ilustracin 9

Ilustracin 10.Esquema representando la convergencia en clorocatecoles de las rutas de degradacin de dioxinas cloradas, clorodibenzofuranos y policlorobifenilos(PCB). Debido a que los PCB se produjeron intencionadamente por sus aplicaciones industriales, tanto dioxinas como dibenzofuranos clorados se generan accidental mente. Los PCB se tratan al final junto con la degradacin de clorocatecoles, mientras que la degradacin de dioxinas y dibenzofuranos clorados se trata de manera conjunta. 4.1.2 Biodegradacin de dioxinas y furanos clorados Las dioxinas y furanos clorados son muy recalcitrantes a la biodegradacin y debido a su hidrofobicidad se acumulan en la cadena trfica, La primera bacteria que puede usar dioxina como fuente de carbono es la Sphingomonas sp. RW1, por ende cabe indicar que hay bacterias que son capaces de degradar esta molcula. La degradacin de dioxinas comienza con el ataque del oxgeno molecular a la posicin angular de la molcula catalizando por una dioxigenasa. Cabe destacar que los genes de las dos subunidades terminales de la dioxigenasa no se encuentran ubicados en un opern con los genes de las dos subunidades que le transfieren los electrones. Adems, el resto de los genes necesarios para la transformacin de la molcula en catecol tampoco se encuentran agrupados. Estos hechos se han relacionado con una mayor versatilidad metablica de la bacteria, pero tambin son indicativos que se trata de una ruta metablica poco evolucionada y, por lo tanto sugiere que se trata de un grupo de molculas relativa mente recientes en la biosfera. El paso 2 est catalizado por una dioxigenasa que rompe en meta el anillo ms oxidado para rendir un intermediario que

es sustrato de una hidrolasa. En ambos casos se genera un metabolito de 5 6 tomos de carbono que es fcilmente asimilado por la bacteria. En el caso de la dioxina la hidrlisis rinde adems catecol, mientras que en el caso del bibenzofurano se forma silicato. Este ltimo se puede degradar tanto va gentisato como a travs de catecol, las dos reacciones necesitan de oxgeno molecular y en las se forma un derivado dihidroxilado susceptible de seguir oxidndose.

Ilustracin 11.Conversin de dioxina y bibenzofurano en derivados dihidroxilados por Sphingomonas sp. RW1. Influencia de los cloros en la biodegradabilidad. Deshalorrespiracin

La presencia de cloros en la molcula la hace ms recalcitrante, hasta el punto que no sea en aerobiosis. Los estudios en anaerobiosis son escasos, pero desde hace tiempo se sabe que existen microorganismos que catalizan la eliminacin de cloro en anaerobiosis. Muy reciente mente se han aislado bacterias que utilizan compuestos orgnicos clorados como oxidantes y por tanto se trata de un proceso respiratorio que se ha denominado deshalorrespiracin.este proceso podra ser el primer paso de un proceso biotecnolgico para la biodegradacin de dioxinas muy cloradas, siendo el segundo la degradacin aerbica que es mucho ms rpida.

Para molculas poco cloradas existe cierta preferencia de la primera dioxigenasa por el anillo no clorado o menos clorado por lo que se generan con preferencia clorocatecoles y clorosalicilatos. A continuacin se estudia en detalle la degradacin de PCB y de los productos comunes de todas las rutas, los clorocatecoles. 4.1.3 Biodegradacin de los policlorobifenilos (PCB) Los bifenilos policlorados son compuestos qumicos con la estructura gentica representada en la Ilustracin 11.

Ilustracin 12.Estructura general de los PCB Hay 5 posibles posiciones de sustitucin de cloro en cada anillo aromtico del bifenilo, y por lo tanto, existen tericamente 209 posibles congnes. Los PCB se introdujeron en el mercado rpidamente alcanzaron una gran aceptacin debido a su uso en la fabricacin de cosmticos, barnices, papel de calco sin carbn, material ignigungo y como aceite en los transformadores elctricos. La razn principal de la sntesis a gran escala de PCB se debe a su uso en los transformadores elctricos. Para el fin , los PCB resultan ideales debido a su estabilidad a altas temperaturas y su capacidad delctrica. A pesar de los indudables beneficios de los PCB para la sociedad, con el paso del tiempo se han ido acumulando pruebas de su inconveniencia. La primera es su persistencia en el medio ambiente. La recalcitrancia de los PCB en la bisfera es una consecuencia directa de su composicin. Se sintetisaron precisamente para perdurar , y adems se trata de mezclas de compuestos xenobioticos alta mente clorados. La segunda es su bioacumulacin. Los PCB son poco solubles en el agua y muy solubles en la grasa. Sia ello unimos que se degradan muy lenta mente, el resultado es que se van acumulando a lo largo de la cadena trfica. As, se ha encontrado en la gaviota Argenta del lago Ontario una concentracin de PCB 25 millones de veces superior a la detectada en el agua. Tambin se han encontrado concentraciones muy elevadas de PCB en grasa de ballenas, focas, pinginos, etc. Ello demuestra claramente que la contaminacin viaja a travs de la cadena alimenticia y se acumula en los superpredadpres. Todo lo anterior mencionado no pasara de ser preocupante si los PCB no fuesen txicos. La exposicin a PCB provoca cuadros de toxicidad aguda que afectan principal mente al sistema nervioso central, rin e hgado aunque el efecto ms llamativo es su interferencia con el sistema endocrino, tal y como se indic al principio del captulo. Por lo

anterior mente dicho , la fabricacin de PCB est prohibida en la mayora de los pases desarrollados . en la CE no solo est prohibida su fabricacin , sino que los PCB inventariados deben ser eliminados antes del ao 2010 . Incineracin Los PCB pueden ser incinerados, pero en instalaciones especialmente equipadas para que la temperatura sea de 1200C y con un tiempo de residencia de, al menos, 2 segundos. Ello hace que la eliminacin de los PCB de os transformadores en desuso sea un proceso relativamente costoso. Biodegradacin Se han descrito gran variedad de microorganismos capaces de degradar PCB. Sin embargo, no se sabe de ningn proceso que concluya con su mineralizacin total. Entre los microorganismos han recibido especial inters las bacterias, ya que degradan una gran variedad de congnes y son susceptibles de ser manipuladas genticamente con mayor facilidad que los eucariotas. Tambin se han descrito hongos que transforman PCB. 4.1.4 Las bacterias como ingenieros metablicos Biodegradacin de PCB por bacterias Las contaminaciones accidentales del medio ambiente con PCB han permitido detectar la presencia de micro organismos, fundamental mente bacterias, capaces de biodegradarlos. La estrategia comn para el aislamiento de bacterias capaces de degradar PCB conciste en el enriquecimiento bacteriano a partir de suelos contaminados usando bifenilo, un sustrato natural anlogo no toxico, como nica fuente de carbono y energa. Ello a permitido el aislamiento de gran variedad de bacterias capaces de degradar PCB. Hay que adelantar que hasta el momento , no se ha encontrado una bacteria capas de mineralizar todos los tipos de PCB . para comprender donde se encuentran los pasos limitantes que impiden su mineralizacin veace la ruta metabolica por la cual las bacterias degradan el bifenilo.

Ilustracin 13. Esquema general de la ruta degradativa de bifenilo por bacterias. 4.2 Biodegradacin de compuestos nitroaromticos

Gran parte de los compuesto xenobiticos poseen un anillo aromtico, que les confiere una gran estabilidad sobre todo si poseen sustituyentes que extraen carga electrnica del anillo. Este es el caso de los compuestos nitroaromticos, que en una inmensa mayora tienen un origen humano derivado de las industrias de explosivos (TNT), cido pcrisol, colorantes, plaguicidas (paration), disolventes, herbicidas (dinoseb) y frmacos. La falta

de estabilidad de estos compuestos les hace especialmente persistentes en el medio ambiente, donde pueden permanecer prcticamente inalterados durante siglos. Los compuestos nitroaromticos y sus productos de condensacin se pueden absorber a la superficie de las fases inorgnica y orgnica (humus) del suelo, bien mediante enlaces dbiles (puente de hidrgeno, fuerza de wan der Waals e interacciones hidrofbicas) o por enlaces covalentes. Posiblemente, este sumidero a contribuido a piliar la contaminacin ambiental por nitroderivados, pero el consumo humano de estos complejos rgano nitrados puede resultar muy peligroso por la alta toxicidad de los nitroaromticos (el de2.4 dinitrofenol es un desacoplante y los nitrotoluenos causan anemia y hepatitis) o la mutagenicidad de sus derivados aminoaromticos, como el 2 nitro 4 aminofenol y la 5 nitro o toluidina, que son carcinognicos. Algunos compuestos nitroaromticos no son txicos per se, sino sus productos de biotransformacin La carga positiva sobre los N del grupo NO2 extrae carga electrnica del anillo aromtico, que resulte cargado positivamente, tanto ms cuando mayor sea el nmero de grupos nitro. La carga positiva del anillo nitroaromtico queda adems influenciada por la presencia de sustituyentes como el CH3 (Nitrotoluenos), - OH (Nitrofenoles), - COO(Nitrobenzoatos), - NH2 (aminoaromticos), que pueden aumentar an ms la carga positiva del anillo (halgeno, CN, SO3H, N = N R2, COO-), o a disminuirla (- CH3, NH2, - OH). Por ejemplo el grupo COO- disminuye la carga (-) del anillo en 0.06 unidades. La presencia de grupos nitro estabiliza a los compuestos nitroaromticos con relacin al ataque electroflico del dioxgeno, principal agente ambiental activo en los procesos de demolicin de compuestos aromticos naturales o xenobiticos. En su lugar, los seres vivos han desarrollado estrategias de ataque reductivo, bien sobre el propio anillo (derivados Meisenheiner) o sobre los grupos NO2 (derivados aminoaromticos), mucho ms susceptibles al ataque electroflico convencional por oxigenasas. Dado que los compuesto nitroaromticos son muy resistentes a la degradacin tanto por agente biticos como abiticos, la eliminacin de los excedentes (por ejemplo de explosivos) por incineracin es muy costosa y se imponen tcnicas de biorremediacin in situ (mediante acumulacin de bacterias auttrofas) o ex situ (mediante biorreactores).

4.2.1 Transformaciones bioqumicas de los compuestos nitroaromticos

La presencia de N grupos nitros dificulta el ataque oxidativo y favorece el reductivo.

Ilustracin 14. La susceptibilidad del ataque reductivo aumenta con el n de grupos nitro (N) dependiendo del resto de sustituyentes. Cuando N=3 el ataque es normalmente reductivo. Los microorganismos llevan a cabo el ataque oxidativo mediante oxigenasas, que insertan tomos de oxgeno en el anillo, y el reductivo mediante reductasas que transfieren iones hidruros N- bien al anillo nitroaromtico o al grupo nitro. El ataque oxidativo siempre se lleva a cabo en aerobiosis, mientras que el reductivo puede tener lugar en aerobiosis y anaerobiosis. Rutas aerbicas oxidativas del anillo aromtico Monooxigenasas. Liberan el grupo nitrofenlico directamente como nitrito o insertan un grupo OH previamente a la liberacin de nitrito Como se sabe el catecol es un intermediario en la degradacin del anillo aromtico de origen biolgico y se mineraliza a CO2 y H2O mediante ruptura de orto o meta. Dioxigenasas. Producen nitrito a partir de grupos nitrotolueno.

El p nitrofenol es muy abundante en la naturaleza como resultado de la degradacin del plaguicida paratin, muy utilizado en el pasado, y de la sntesis de explosivos. Algunos estirpes de Flavobacterium y Pseudonomas diminuta poseen paratin hidrolasa y pueden degradar este compuesto xenobitico va nitrocatecol. El nitrito producido en la oxidacin del anillo nitroaromtico puede ser incorporado al material celular en las bacterias asimiladoras de nitrato mediante su reduccin a amonio por la nitro reductasa:

Rutas aerbicas reductivas del anillo aromtico Los sustratos de estas rutas son normalmente polinitroaromticos, estables frente al ataque del O2, pero susceptibles de ataques nucleoflicos por parte de iones H- tanto al grupo NO2 como el anillo. Reduccin del grupo nitroaromtico: nitrorreductasas. La nitrorreductasas son un grupo de enzimas ampliamente distribuidas entre las bacterias y eucariotas, que normalmente utilizan NAD(P)H como dador de electrones. Dada la baja densidad electrnica del anillo nitroaromtico existen numerosas enzimas con actividad nitrorreductasa inespecfica, incluso en los cloroplastos. Las nitrorreductasas bacterianas son de dos tipos: Nitrorreductasas del tipo I, insensibles al O2, que reducen al grupo NO2 en etapas sucesivas de 3 pares de e- formndose los intermediarios nitroso e hidroxilamino.

Ar-NO_2 ((2 e^- ) ) Ar-N=O ((2 e^- ) ) Ar-HNOH ((2 e^- ) ) Ar-NH_2 Reduccin secuencial del grupo-NO_2.Ar (Anillo aromtico) Nitrorreductasas del tipo II: catalizan la transferencia de 1 e- al grupo nitro con produccin de un radical libre aninico, que reacciona con el O2 dando Ar No2 y anin superxido O2-.

Algunas enzimas bacterianas poseen actividad nitrorreductasa, como la hidrogenasa y la piruvato: ferredoxina xidorreductasa (PFOR) de Desulfovibrio, que reducen el 4,6 diamino 2 nitrotolueno a 2,4,6 triaminotolueno. Por su parte, la CO deshidrogenasa de la misma bacteria lo reduce solo parcialmente a 2,4 diamino 2 hidroxilaminotolueno. La nitrorreductasa de las bacterias entricas se ha relacionado con el cncer de colon por la produccin de aminas aromticas mutagnicas a partir de nitrofenoles contaminantes de los alimentos.

Las bacterias entricas reducen entre otros los nitrofuranos (bactericidas usados desde hace 50 aos) a aminofuranos, siendo las estirpes mutantes carentes de nitrorreductasa especialmente resistentes a la mutagnesis por aminoarenos (Ar NH2). La reduccin del grupo Ar NO2 a Ar NH2 restaura en parte la densidad electrnica del anillo y lo desestabiliza propiciando la liberacin de amonio y el ataque de las oxigenasas. En otras ocasiones, el grupo hidroxilamino sufre una reordenacin a aminofenol. Los derivados aminoaromticos se pueden mineralizar por varias vas que implican al catecol o a compuestos aminoalifticos. Reduccin del anillo: Hidruro transferasas El anillo nitroaromtico polinitrado (trinitrolueno, cido pcrico, dinotrofenol) debe sufrir una degradacin reductiva mediante la transferencia de iones hidruro (H-) a regiones del anillo que poseen densidad de carga positiva (especialmente en la posicin orto (2) respecto al grupo nitrol, debido a la capacidad de ste para retirar e- del anillo. Por esta razn, el 2 nitrofenol y el 4 nitrofenol son mas cidos que el 3 nitrofenol. A continuacin se muestran las diferentes especies resonantes del trinitrotolueno que, como se observa, es muy susceptible al ataque reductivo mediante un agente nucleoflico (H-) a las posiciones m y p. Las bacterias de Gram positivas del gnero Rhodococcus mineralizan los polinitrofenoles (cido pcrico, 2,4 dinitrofenol) a travs de intermediarios como los derivados no aromticos reductivos del anillo (complejos Meisenheimer) y derivados nitroalifticos. En Rhodococcus sp RB1, la ruta del 2,4 dinitrofenol tiene dos fases: a) Transferencia de hidruros y formacin de derivados hidruro Meisenheimer (HM): el grupo OH no atrae e- del anillo aromtico, pero s los grupos NO, y aparecen cargas + en meta (m). En la ruta del cido pcrico se han identificado los genes de las reductasas I y II que utilizan F420 como cofactor rdox, un gen que codifica la tautomerasa del HM y un gen regulador. b) Liberacin de NO2- y degradacin del anillo. Rutas anaerbicas

Los microorganismos anaerbicos metabolizan el anillo nitroaromtico reduciendo los grupos NO2 a NH2 mediante nitrorreductasas que actan de forma secuencial (a travs de intermediarios nitroso e hidroxilamino) o directa (transferencia de 6 e- y formacin del producto Ar NH2). Este proceso transcurre a bajas concentraciones de O2, como la reduccin de TNT a triaminotolueno, que requiere condiciones de estricta anaerobiosis (E < - 0.2V).

Cometabolismo del 2,4 dinitrofenol en bacterias fototrficas

Rhodobacter capsulatus es una bacteria de fija el N2 en luz y anaerobiosis, proceso que consume gran cantidad de energa, muy sensible a los desacoplanes como el 2,4 dinitrofenol. En presencia de este compuesto xenobitico, R capsulatus introduce una nitrorreductasa que reduce el grupo 2 nitro a 2 amino formando el derivado 2 amino 4 nitrofenol que ya no es desacoplante, pero s genotxico. Para evitar daos al ADN, la bacteria bombea al medio el 2 amino 4 nitrofenol, con una cintica de produccin equimolecular con la del consumo del 2,4 dinitrofenol. Una vez que la mayor parte del 2,4 dinitrofenol se ha reducido a 2 amino 4 nitrofenol, la bacteria reanuda el crecimiento por fijacin del N2 presente en el medio. La nitrorreductasa es una NADPH flavoprotena de 27 kDa, introducible por 2,4 dinitrofenol y cido pcrico, y que se inactiva por luz azul en ausencia del reductor o del sustrato.Este proceso es un caso claro de cometabolismo pero que presenta conexiones con el metabolismo del N2, aunque la nitrorreductasa no pertenece al sistema enzimtico de la nitrogenasa, enzima que cataliza la fijacin de N2. El consumo de nitrofenoles y la fijacin de N2 se bloquean en presencia de amonio, una fuente de nitrgeno reducido que disminuye el balance C/N. Por su parte, las mutaciones que afectan a genes implicados en la transferencia de e- a la nitrogenasa (que codifican el complejo Rnf de la membrana celular), dificultan l a fotorreduccin del cometabolismo del dinitrofenol con la fijacin del N2.

Ilustracin 15. Relaciones entre el cometabolismo del dinitrofenol y la fijacion de nitrgeno atravez del control por balance C/N. NCR(sistema de reprecion por catabolito nitrogenado); DNP ;ANP;N2 asa; ferredoxina reducida;NPR.

La nitrorreductasa de R capsulatus puede utilizar diferentes sutratos, como el cido pcrico (2,4,6 trinitrofenol), al que reduce a cido picrmico (2 amino 4,6 dinitrofenol), que posteriormente se degrada con liberacin del nitrito.

Ilustracin 16. Foto reduccin de cido pcrico (Izquierda) a cido pricramico(derecha).

Rhodobacter capsulatus puede tambin utilizar mononitrofenoles como el p nitrofenol en condiciones de fotosntesis microaerbica, produciendo nitrocatecol como intermediario. 4.2.2 Metabolismo del 2, 4,6-Trinitotolueno (TNT) El TNT es el explosivo por excelencia, tanto de uso civil como militar, que genera en su fabricacin residuos difciles de eliminar y que por s mismo constituye un problema madiambiental dado que se caducidad lo hace altamente peligroso. Adems, su recalcitrancia lo hace muy persistente en reas donde se dispersa TNT, como en los polgonos de tiro, maniobras militares o zonas en guerra. La biodegradacin del TNT y compuestos relacionados como el cido pcrico puede utilizarse para el diseo de tecnologas de biorremediacin in situ (para paliar la contaminacin ambiental) y ex situ (para eliminar los excedentes mediante biorreactores). Catabolismo del TNT

Como se ha dicho anteriormente, el TNT posee un anillo aromtico altamente desactivado con relacin al ataque de las oxigenasas y solo puede ser objeto de ataques reductivos biolgicos o abiticos. Catabolismo aerbico, similar al propuesto para la mineralizacin de cido pcrico y 2 Cl 4,6 dinitrofenol en clulas de Rhodococcus erythropolis. Catabolismo anaerbico, catalizado por nitrorreductasas que producen derivados parcial o totalmente reducidos (triaminotolueno) capaces de sufrir una oxidacin posterior con liberacin de NH3 y ruptura del anillo. Tambin puede ocurrir una reduccin abitica, a partir de donadores orgnicos, azufrados o ferrosos.

Los grupos NO2 del TNT difieren por su capacidad atrayente de electrones y la reduccin de primer grupo (normalmente en la posicin 4) tiene lugar con mucha ms facilidad que la del grupo 2 Nitro y la del 6 nitro: el primer grupo NH2 formado disminuye la densidad de carga positiva del anillo al dejar atraer ya los electrones e- . El potencial negativo de los grupos nitro del TNT en las posiciones 2, 4 y 6 se ordena de la siguiente manera:

Ilustracin 18. Potencial de los grupos-NO2 del TNT (E4>e2=E6)

La reduccin de los grupos nitro del TNT puede originar 38 productos parcialmente reducidos ( - NO, - NHOH, 1 2 NH2) y un producto totalmente reducido (3 NH2). Los derivados NO y NHOH se combinan entre s, dando lugar a polimerizaciones del anillo de tipo azoxi:

La biodegradacin del TNT podra llevarse a cabo tanto aerbica como anaerbicamente.

Ilustracin 19. Biodegradacin de TNT;DNT;MNT;NTPR;ATT; Aerbico; Anaerbico.

Degradacin del TNT en el suelo

El TNT y sus derivados parcialmente reducidos se pueden reducir totalmente a triaminotolueno (TAT) en suelo muy anaerbicos. Los microorganismos aerbicos poseen una capacidad limitada para reducir los grupos Ar NO2 y solamente los aerobios pueden generar TAT:

El TAT se une con gran afinidad a las frases polianinicas hidratadas del suelo (silicatos de aluminio y magnesio), intercalndose entre ellas a travs de sus grupos Ar NH3-. Esta capacidad de fijacin de TAT se incrementa si el suelo contiene una fase orgnica cida (humus) capaz de atraer molculas bsicas, como el TAT, sobre todo teniendo en cuenta la capacidad polimerizante de ste en presencia de O2, cuyo ataque se facilita por la alta densidad electrnica de anillo poliaminoaromtico.

O en presencia de compuestos fenlicos:

En este proceso de humificacin es aplicable, aunque es ms lento, a los diaminotoluenos y las toluidinas procedentes de los dinitro y mononitrotoluenos. La biodegradacin (mineralizacin) de los compuestos aminoarompaticos transcurre por desaminacin reductiva, para lo cual el compuesto debe ser previamente activado reduciendo la densidad electrnica del anillo.

Reduccin enzimtica de nitrotoluenos.

Se desconoce la naturaleza de las enzimas reductoras de TNT aunque podran estar implicadas la hidrogenasas y las ferredoxinas. La etapa limitante en la reduccin de TNT a TAT es la reduccin del 2,4 diamino 6 nitrotolueno, DANT. En Clostridium pasteurianum y C. thermoacetium se transfieren 4 e- a partir del CO H2 y los dos erestantes quiz por el sulfito reductasa:

1. Asimilacin anaerbica de nitrotoluenos. La estirpe JLR11 de Pseudomonas degrada TNT anaerbicamente por una ruta que asimila el 85% del nitrgeno nitroaromtico. La transferencia de electrones al TNT tiene lugar mediante una enzima de membrana y genera fuerza motriz de protones y ATP. La degradacin anaerbica del TNT tiene varias ramas, en una de las cuales el grupo metilo se oxida a COOH, formndose 2 nitro 4 hidroxibenzoato y p hidroxibenzoato.

Ilustracin 20. Metabolitos anaerobios del TNT en bacterias. El TAT se puede metabolizar a tolueno, p-cresol y metilfloroglucinol. 4.2.3 Metabolismo de hidrocarburos nitroaromticos Los hidrocarburos policclicos aromticos nitrados , se producen al reaccionar los PAHs con xidos de nitrgeno y por combustin incompleta de combustibles fsiles , estando presentes en el carbn, aceite de pescado, humo de tabaco y tinta de fotocopiadoras.

Ilustracin 21. hidrocarburos aromticos poli cclicos nitrados. La biodegradacin de los Nitro-PAH se lleva a cabo de forma similar a la de los nitroaromticos monocclicos , bien a travs de nitrorreductasas bacterianas de monooxigenasas que producen xidos de nitroareno y derivados fenlicos y de dioxigenasas, que producen dihidrodioles.

Ilustracin 22.Degradacion de Nitro-PAH por el hongo Cunninghamella elegans.(Amarillo aromtico); Cit P-450; Glucosa; GU(glucuronato) CONCLUSIONES Estos compuestos sintticos son poco peculiares pero necesarios en la vida cotidiana de los seres humanos pero al mismo tiempo muy toxico para nosotros, la flora, fauna y todo el medio ambiente que nos rodea, comportndose de distinta forma, dependiendo del medio donde se encuentren. Los xenobiticos se dispersan de diversa manera en los diversos ecosistemas (terrestre, areo y acutico) de acuerdo a su concentracin y fase (gaseoso, slido o lquido). Aparte de su conducta deleterea sobre las estructura s , algunos de ellos actuan como hormnas, convirtiendose en un granproblema. El anillo aromtico que poseen los compuestos xenobioticos les confieren gran estabilidad, sobre todo si poseen sustituyentes que extraen carga del anillo. Los compuestos xenobiticos son absorbidos al organismo principalmente por tres formas (drmica o mediante la piel, gastrintestinal o sistema gstrico y respiratorio o pulmonar). La biotransformacin es importante porque todos los organismos se encuentran constantemente expuestos a compuestos y elementos qumicos que no pueden utilizar como alimento y seran dainos si se acumularan en sus clulas.

Bibliografa
Collin. (2004). Qumica ambiental. Barcelona: REVERT. Jos, X. y. (2006). Qumica ambental de Sistemas Terrestres. Barcelona: Revert. Rodrigues, F. c. (2005). Biotecnologa ambiental. Madrid: EDITORIAL TBAR.