Efeitos de Tratamento Da Semente e Aplicacao de Fungicidas Cupricos No Controle Da Podridao Negra No Repolho

Universidade Eduardo Mondlane
Faculdade de Agronomia e Engenharia Florestal

Departamento de Produo e Proteco Vegetal
Trabalho de Licenciatura
Efeitos de Tratamento da semente e de aplicao de fungicidas no controle de Podrido Negra (Xanthomonas campestris pv. campestris) no Repolho
Trabalho submetido ao Departamento de Produo e Proteco Vegetal da Faculdade de Agronomia e Engenharia Florestal na Universidade Eduardo Mondlane, como requisito parcial para a obteno do grau da licenciatura em Engenharia Agronmica
Autor: Pinto Jorge Mabunda Supervisor: Engo Agro Joo Bila (MSc) Co-Supervisora: Profa Doutora Ana Mondjana (PhD)
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Maputo, Agosto de 2009
Deus que me deu a oportunidade de viver e aprender, que sempre iluminou os meus caminhos para a concretizao dos meus sonhos e que sempre deixa em mim a fora de vontade para o alcance dos meus objectivos.
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minha famlia que sempre esteve ao meu lado, apoiando as minhas decises e incentivando me no alcance dos meus objectivos. Dedico AGRADECIMENTOS Deus, fonte de vida, amor e sabedoria. Foi ELE que me fez chegar aqui onde estou. Ao meu supervisor Engo Agro Joo Bila e minha co-supervisora Prof a Doutora Ana Mondjana pelo acompanhamento, disponibilidade, pacincia, e confiana depositada em mim durante a realizao deste trabalho. Aos pesquisadores Prof. Doutor Said Massomo (pesquisador de Sokoine University of Agriculture Tanzania, de Danish Government of Seed Pathology for Developing Countries Denmark e de Royal Veterinary and agricultural University - Denmark), Profa Doutora Joana Vicente (pesquisadora de HRI WellesbourneInglaterra e de Universidade Tcnica de LisboaPortugal) e Prof. Doutor Jos Ivo Ribeiro Jnior (pesquisador de Universidade Federal de ViosaBrasil), que apesar da distncia, ajudaram me moralmente e materialmente na realizao deste trabalho. associao Massacre de Mbuzini, particularmente na pessoa de Toms Rafael, presidente da associao, por ceder o espao para a montagem de ensaio e por ter ajudado na manuteno de ensaio. Aos meus amigos e colegas Gonalves Mandlate, Czar Dzeco, Arsnio Lhamine, Arsnio Jorge, Rafael Muchanga, Leonel Alberto, Adlio Mussalama, Carlos Jairoce, Jaime Truzo, Domingos Sbado, Pita Dola, Arigo saraiva e Moiss Antnio pela boa convivncia, companheirismo e amizade demonstrado durante a minha formao. minha famlia, pela compreenso, apoio, incentivo e formao que sempre me deu. faculdade de Agronomia e Engenharia Florestal (FAEF), que deu me uma oportunidade de dar um importante rumo ao crescimento cientfico e profissional (Bem haja FAEF!). Aos tcnicos de laboratrios de fisiologia vegetal do departamento das cincias biolgicas (DCB) e de Proteco vegetal da FAEF da UEM, pela ajuda tcnica e competncia em executar suas funes.
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Ao Governo moambicano, por ter financiado a minha formao acadmica atravs de bolsa de estudo, isto porque se no fosse a bolsa no sei se conseguiria fazer este curso. todos que duma forma directa ou indirecta contriburam para o sucesso da minha formao e deste trabalho.
TODOS, DIGO MUITO OBRIGADO DO FUNDO DO MEU CORAO!
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No que se refere ao combate s doenas, para alguns microorganismos como por exemplo vrus e algumas bactrias, no h remdio para o seu controle. Para control-los preciso a preveno. Guia Rural: HORTA
Efeitos de Tratamento da semente e da aplicao de fungicidas no controle de Podrido Negra (Xanthomonas campestris pv. campestris) no Repolho NDICE CONTEDO ........................................................................................................................Pgina NDICE ..........................................................................................................................................v Lista de Abreviaturas ....................................................................................................................vii Lista de Figuras ...........................................................................................................................viii Lista de Tabelas ...........................................................................................................................viii Lista de Anexos............................................................................................................................viii RESUMO ......................................................................................................................................ix I.INTRODUO ..........................................................................................................................1 1.1. Generalidades ...........................................................................................................................1 1.2. Problema de Estudo e justificao............................................................................................2 1.3. Objectivos ................................................................................................................................4 1.3.1. Geral ......................................................................................................................................4 1.3.2. Especficos ............................................................................................................................4 II. REVISO BIBLIOGRFICA ...............................................................................................5 2.1. Origem e importncia de Repolho............................................................................................5 2.2. Produo de repolho em Moambique e no Mundo.................................................................5 2.3. Podrido negra (Xanthomonas campestris pv. campestris)............................................................6 2.3.1. Histria, ocorrncia e Importncia de Podrido Negra........................................................6 2.3.2. Descrio e classificao de Xanthomonas campestris pv. campestris.................................7 2.3.3. Sintomatologia de podrido negra.........................................................................................7 2.3.4. Biologia de Xanthomonas campestris pv. campestris...........................................................7 2.3.5. Ciclo da doena e epidemiologia...........................................................................................8 2.3.6. Factores que favorecem a doena........................................................................................10 2.3.7. Mtodos de controle de Xcc11 Autor: Pinto Jorge Mabunda Trabalho de licenciatura vi
Efeitos de Tratamento da semente e da aplicao de fungicidas no controle de Podrido Negra (Xanthomonas campestris pv. campestris) no Repolho III. MATERIAIS E MTODOS ................................................................................................16 3.1. Metodologia ...........................................................................................................................16 3.1.1. Caracterizao da rea experimental...................................................................................16 3.1.2. Tratamento trmico da semente...........................................................................................16 3.1.3. Operaes culturais..............................................................................................................17 3.1.4. Controle qumico.17 3.1.5. Descrio do ensaio.18 3.1.6. Preparao do inoculo e inoculao no campo....................................................................18 3.1.7. Amostragem e Perodo de avaliao....................................................................................19 3.2. Parmetros a medir.................................................................................................................20 3.2.1. Incidncia de doena20 3.2.2. Severidade de sintomas20 3.2.3. rea abaixo da curva de progresso de doena.....................................................................22 3.2.4. Rendimento..22 3.2.5. Danos..22 3.3. Anlise de Dados23 IV. RESULTADOS E DISCUSSES .......................................................................................24 4.1. Severidade e incidncia...........................................................................................................24 4.2. rea Abaixo da Curva Progresso de doena...........................................................................25 4.3. Rendimento.............................................................................................................................26 4.4. Danos......................................................................................................................................28 V. CONCLUSES E RECOMENDAES ............................................................................30 5.1. Concluses..............................................................................................................................30 5.2. Recomendaes.......................................................................................................................30 VI. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ...............................................................................32
LISTA DE ABREVIATURAS Autor: Pinto Jorge Mabunda Trabalho de licenciatura vii
Efeitos de Tratamento da semente e da aplicao de fungicidas no controle de Podrido Negra (Xanthomonas campestris pv. campestris) no Repolho ANOVA - Anlise de Varincia % - Percentagem Cf. - confira DBCC - Delineamento de Blocos Completos Casualisados DCB - Departamento das Cincias Biolgicas EBRI - ndice externo de podrido negra FAEF - Faculdade de Agronomia e Engenharia Florestal Gl - grau de liberdade Ha - hectare IBRI - ndice interno de podrido negra INE - Instituto Nacional de Estatstica Kg - kilograma m - metro min.- minuito ml - mililitro Mt - meticais NA - gar-nutriente
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C - Graus Celsius
pv. - patovar SAEG - Sistemas de Anlises Estatsticas e Genticas da Universidade Federal de Viosa Sc. - sculo Ton - tonelada UEM - Universidade Eduardo Mondlane UFC - unidade formadora da colnia Xcc - Xanthomonas campestris pv. campestris
LISTA DE FIGURAS Autor: Pinto Jorge Mabunda Trabalho de licenciatura viii
Efeitos de Tratamento da semente e da aplicao de fungicidas no controle de Podrido Negra (Xanthomonas campestris pv. campestris) no Repolho Fig. 1: Ciclo da Podrido Negra das Cruciferas .............................................................................8 Fig. 2: Precipitao e temperaturas mdias mximas e mnimas em Mahotas (Maputo) durante a realizao do experimento ....16 Fig. 3: Severidade de Podrido Negra...........................................................................................24 Fig. 4: Incidncia de Podrido Negra............................................................................................25 Fig. 5: rea abaixo da curva de doena com base na incidncia..................................................26 Fig. 6: rea abaixo da curva de doena com base na severidade externa.....................................26 Fig. 7: Efeitos de tratamentos no rendimento ...............................................................................28 LISTA DE TABELAS Tabela 1: Efeitos da interaco do tratamento trmico da semente e aplicao de fungicidas na severidade interna da doena ........................................................................................................25 Tabela 2: Efeitos de tratamento trmico no rendimento de repolho.............................................27 Tabela 3: Efeitos de aplicao de fungicidas cpricos no rendimento de repolho.......................27 Tabela 4 : Clculo de custos totais de aquisio e aplicao de fungicidas.................................29 Tabela 5: Ganhos de rendimento e perdas monetrias em relao ao tratamento controle..........29
LISTA DE ANEXOS Anexo 1: Esboo de experimento..................................................................................................38 Anexo 2: Rendimento observado em Ton/ha...............................................................................39 Anexo 3: Imagens ilustrativas da escala de severidade externa de Podrido Negra.....................40 Anexo 4: Imagens ilustrativas da escala de severidade Interna da Podrido negra......................41 Anexo 5: Ficha usada para o levantamento da severidade externa...............................................42 Anexo 6: Ficha usada para o levantamento da severidade interna................................................42 Anexo 7: Ficha usada para o levantamento da incidncia.............................................................42
Autor: Pinto Jorge Mabunda
Trabalho de licenciatura ix
Efeitos de Tratamento da semente e da aplicao de fungicidas no controle de Podrido Negra (Xanthomonas campestris pv. campestris) no Repolho RESUMO A podrido negra, doena causada por Xanthomonas campestris pv. Campestris, considerada a mais importante nas brssicas por causar mais danos em relao a outras doenas (danos que em alguns casos chegam atingir 100%). Fez-se um estudo em Mahotas (Maputo) e teve como objectivo avaliar os efeitos de tratamento trmico da semente e da aplicao de fungicidas cpricos como forma de controle preventivo da podrido negra no repolho. Para tal combinou-se o tratamento trmico da semente (semente tratada e semente no tratada) e aplicao de fungicidas (sem aplicao de fungicidas, aplicao de sulfato de cobre, aplicao de oxicloreto de cobre e aplicao de hidrxido de cobre), o que resultou em oito tratamentos: t 0f0 (semente no tratada, sem aplicao de fungicidas), t0f1 (semente no tratada, sulfato de cobre), t0f2 (semente no tratada, hidrxido de cobre), t 0f3 (semente no tratada, oxicloreto de cobre), t1f0 (semente tratada, sem aplicao de fungicidas), t1f1 (semente tratada, sulfato de cobre), t1f2 (semente tratada, hidrxido de cobre) e t1f3 (semente tratada, oxicloreto de cobre). Estes tratamentos foram alocados em delineamento de blocos casualizados (DBCC), com trs repeties (correspondentes aos blocos) em parcelas de 60 x 40 cm. Avaliou-se a incidncia, a severidade (externa e interna), o rendimento e os danos (perdas de rendimento e monetria). Os valores de incidncia e severidade foram submetidos ao clculo da rea abaixo da curva de progresso de doena (AACPD). Os dados observados dos parmetros medidos foram submetidos anlise de varincia com recurso ao pacote estatstico SAEG verso 5.0 (Sistemas de Anlises estatsticas e genticas de Centro de Cincias Exactas do Departamento de Informtica da Universidade Federal da Viosa, Ivo Ribeiro Jr.). Verificou-se que a combinao de tratamento trmico e fungicidas controla preventivamente a podrido negra resultando em rendimentos altos, baixos prejuzos e danos, severidade e incidncia baixas. Os dados da AACPD demonstraram que a intensidade da doena nos tratamentos com tratamento trmico e aplicaes de fungicidas foi baixa. O tratamento t0f0 foi mais susceptvel podrido negra enquanto t1f1, t1f2 e t1f3 foram mais tolerantes. No foram detectadas diferenas significativas nos parmetros para estes trs ltimos tratamentos. Palavras-chave : podrido negra, Xanthomonas campestris pv. campestris, tratamento trmico, fungicidas, repolho Autor: Pinto Jorge Mabunda Trabalho de licenciatura
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Efeitos de Tratamento da semente e da aplicao de fungicidas no controle de Podrido Negra (Xanthomonas campestris pv. campestris) no Repolho
Trabalho de licenciatura 11
Efeitos de Tratamento da semente e da aplicao de fungicidas no controle de Podrido Negra (Xanthomonas campestris pv. campestris) no Repolho I. INTRODUO 1.1. Generalidades O repolho (Brassica oleracea var. capitata) de grande importncia no s como alimento mas tambm como produto comercial. Ela fornece uma parte significativa de minerais, vitaminas e protenas. Economicamente um dos produtos mais rentveis e pode gerar indstrias secundrias criando deste modo empregos e divisas onde existem boas oportunidades de venda (Rulkens, 1996). O repolho pertence a famlia das brssicas que a mais numerosa das hortcolas e a mais cultivada em todo Mundo (Gremo, 1999 e de Sousa et. al. 2003). Em Moambique as brssicas so produzidas pelo sector familiar nas zonas baixas ou em sistemas de regadio na sua maioria e esses tm como finalidade o consumo e venda nos mercados locais. Mas tambm so produzidas pelo sector comercial (a minoria) com a finalidade de venda (Leo, 2006). A produo de brssicas em Moambique tem sido ameaada por vrios factores tanto biticos (pragas, doenas, infestantes) assim como abiticos (temperatura, humidade, solos) causando perdas sendo em alguns casos at 100% (Gremo, 1999 & Leo, 2006); A podrido negra, doena causada pela bactria Xanthomonas campestris pv. campestris (Pammel) Dowson, surge como a doena que considerada a mais importante das brssicas em relao a outras (podrido mole, mildio, Murchido-das-plntulas), podendo causar srios prejuzos econmicos. Um dos principais problemas desta doena reside facto de seu agente patognico ser de difcil combate, o que obriga combinao de vrios mtodos (Vicente, 2004; Beriam, 2007; Michereff, 2007 e Chiconela et. al.; 1999). Vicente (2004) acrescenta que esta combinao de carcter preventivo e no curativo e consiste no uso de fungicidas cpricos, material saudvel (semente, plntula) e prticas culturais que limitam a propagao da doena.
Efeitos de Tratamento da semente e da aplicao de fungicidas no controle de Podrido Negra (Xanthomonas campestris pv. campestris) no Repolho 1.2. Problema de Estudo e justificao ...o objectivo mais perseguido pelo ser humano sempre foi e continua a ser conhecer a realidade/conhecer a verdade. Gilberto de Andrade Martins, 2007. A podrido negra das cruciferas causada pela bactria Xanthomonas campestris pv. campestris (Pammel) Dowson, considerada a doena mais importante das brssicas a nvel mundial e uma ameaa constante para estas culturas (Vicente, 2004; Massomo et al.; 2003; de Souza et al.; 2003; Snowdon, 1991 e Galli et al., 2001). Esta doena tem causado baixos rendimentos que se resume em perdas que at atingem 100% em alguns casos (Vicente, 2004). A Xanthomonas campestris pv. campestris (Pammel) Dowson ataca diversas espcies de famlia Brassicaceae (Brassica oleracea, B. juncea, B. napus, B. nigra, B. rapa, B. caricanta) e espcies de outras famlias (com caractersticas similares as de cruciferas) como: Raphanus sativus, Sinapis alba, Arabidopsis thaliana (Vicente, 2004) e sobrevive em sementes, plntulas, infestantes, solo e resduos de culturas. A preveno importante para o controle de Xcc, pois quando a doena for verificado no campo, o seu controle difcil por se tratar duma doena sistmica, que distribui-se por todo sistema da planta (Vicente, 2004). A semente um meio mais importante na disseminao da doena e como forma de reduzir a disperso de sementes infectadas passa pela certificao das sementes no pas de origem e caso se detectar a presena de Xcc nas sementes, estas devem ser tratadas. O mesmo deve ser feito mesmo para sementes produzidas em pequenas quantidades para autoconsumo ou para os produtores de uma dada regio (Vicente, 2004). Alm de semente livre de patgeno, antes da sementeira deve-se seleccionar as sementes com um bom vigor, secas e no danificadas, pois sementes com baixo vigor ficam predispostas ao ataque dos agentes patognicos e consequentemente proporcionam um baixo desempenho das plantas (Galli et.al., 2001). A semente fonte de inculo e meio de disseminao a longas distncias (Vicente, 2004). Um pequeno nmero de sementes infectadas capaz de fornecer inculo suficiente para provocar uma epidemia mais tarde. A tolerncia de contaminao aceitvel por Xcc de 1 em cada 10000 sementes de repolho. Autor: Pinto Jorge Mabunda Trabalho de licenciatura 13
Efeitos de Tratamento da semente e da aplicao de fungicidas no controle de Podrido Negra (Xanthomonas campestris pv. campestris) no Repolho A testagem de lotes de sementes e o rigoroso controle de sementes e plantas so essenciais para reduo dos prejuzos causados pela podrido negra. A semente pode apresentar contaminao externa e infeco interna pela bactria Xanthomonas campestris pv. campestris que neste ultimo caso normalmente penetra na planta hospedeira via hidatdios e coloniza o sistema vascular (Galli et.al.; 2001 e Sousa et. al. 2003) Segundo Galli et.al. (2001), os patgenos que infectam as sementes provocam danos durante a germinao e o estabelecimento das plntulas ou posteriormente durante o desenvolvimento da cultura. Esses patgenos influenciam o desenvolvimento fisiolgico da semente, produzindo plntulas deformadas no teste de germinao. Para se evitar todos esses danos provocados pela bactria, trata-se a semente para que esta fique livre de patgenos. A outra forma de preveno contra a bactria Xanthomonas campestris pv. Campestris consiste no uso de fungicidas cpricos que formam uma camada nas plantas e esta impede a penetrao da bactria (Michereff, 2007). Diversos factores ambientais, que no favorecem a infeco e o desenvolvimento da doena, podem influenciar a reaco das plantas no campo levando a no aparecimento da doena (Desease escape). A expresso de sintomas est altamente dependente do nmero de bactrias presentes. O crescimento de bactrias, por seu turno, tambm depende dos factores climticos. Se a densidade de bactrias no for suficiente, as plantas podem manter-se sem sintomas. O estudo enquadra-se na procura de medidas de controle capazes de combater a podrido negra nas crucifras e assim minimizar os danos causados pela doena.
Efeitos de Tratamento da semente e da aplicao de fungicidas no controle de Podrido Negra (Xanthomonas campestris pv. campestris) no Repolho 1.3. Objectivos 1.3.1. Geral Avaliar os efeitos de tratamento trmico da semente e do tratamento qumico no controle da podrido negra no repolho. 1.3.2. Especficos Avaliar os efeitos de tratamento trmico da semente no controle de podrido negra no repolho. Avaliar os efeitos de fungicidas cpricos (sulfato de cobre, hidrxido de cobre e oxicloreto de cobre) no controle de podrido negra no repolho no campo.
Efeitos de Tratamento da semente e da aplicao de fungicidas no controle de Podrido Negra (Xanthomonas campestris pv. campestris) no Repolho II. REVISO BIBLIOGRFICA Citar um autor plgio; Citar muitos fazer investigao; No citar ningum objecto de cime e maledicncia. Armando Jorge Lopes, 2004. 2.1. Origem e importncia de Repolho Esta cultura originria do sul da Europa e nas regies mediterrneas (Zonas Temperadas). Esta razo que explica porque cultivares de repolho produzem melhor em condies de clima frio temperado, suportando at geadas leves, embora existam cultivares e hbridos que resistem ao calor de at 28oC (Viso Mundial, Sem data; Tindall, 1983 e Rulkens, 1996). Gard e Gard (Sem Data) e Gremo (1999) avanam que o repolho de grande importncia no s como alimento mas tambm como produto comercial. Tem uma elevada composio em elementos nutritivos (vitaminas, minerais e protenas) balanceando assim a dieta. Os mesmos autores acrescentam que o repolho consumido em cru e cozido. Em cru aproveitada em saladas e em cozido, como condimento em algumas sopas e comidas. Tambm se pode usar como matria prima na indstria de conservas (Tindall, 1983). 2.2. Produo de repolho em Moambique e no Mundo Segundo Gremo (1999), Moambique possui, pelas suas condies climticas e pela diversidade dos solos, ambiente propcio para produo de hortcolas. Alberto (2008), Bila (2008) e Gremo (1999) afirmam que as regies potenciais mais destacadas na produo de hortcolas em Moambique so: os vales dos rios Incomti, Umbelzi e Limpopo (no Sul do Pas) e as regies planlticas de Manica na provncia de Manica, o planalto de Angnia na provncia de Tete, o planalto de Lichinga na provncia de Niassa e a regio de Lioma na provncia de Zambzia (no Centro e Norte do Pas). Segundo Viso Mundial (sem data) nas Zonas Verdes e em Moambique, o repolho praticado durante todo ano, onde escolhe-se a cultivar de acordo com as condies de clima do local, ou seja, planta-se cultivares de Inverno nas pocas amenas, e de Vero nas pocas quentes, sendo a poca fresca, a mais apropriada para o cultivo de repolho (Alberto, 2008; Bila, 2008 e Gremo, 1999 citando Tembe, 1990). Autor: Pinto Jorge Mabunda Trabalho de licenciatura 16
Efeitos de Tratamento da semente e da aplicao de fungicidas no controle de Podrido Negra (Xanthomonas campestris pv. campestris) no Repolho De 1979 a 1988 depois do tomate, o repolho era a cultura hortcola mais produzida no mundo. A maior parte da produo do repolho produzida nas zonas temperadas. Desde 1995 a 1997, cerca de 60% da produo mundial do repolho era proveniente de sete pases nomeadamente: China, ndia, Coreia do Sul, Japo, USA, Polnia e Indonsia (Tindall, 1983 e Rulkens, 1996).
2.3. Podrido negra (Xanthomonas campestris pv. campestris) 2.3.1. Histria, ocorrncia e Importncia de Podrido Negra Esta doena foi identificada pela primeira vez nos EUA nos finais do sc. XIX onde causava prejuzos at 100%. No final de sc. XIX e inicio XX, a doena foi observada em todo mundo, por ex. foi identificada pela primeira vez na Holanda em 1900, no Japo em 1909, na ndia em 1928. E neste tempo (incio do sc. XX), a doena era bem conhecida em toda Europa e nas ilhas de Cuba, Porto Rico, Nova Zelndia e Filipinas. O Commonwealth Mycological Institute (CMI, 1987) citado por Vicente (2004) apresentou uma lista de pases nas quais foi observada a doena. Esta lista incluia 16 pases de frica ( entre os quais Moambique, Angola, Tanznia, Zmbia, Zimbabwe, frica do Sul, Kenya, Malawi e muitos outros), 19 pases de sia, a Austrlia e 10 grupos de ilhas de Pacfico, 20 pases da Europa (entre os quais Inglaterra, Portugal e muitos outros), 4 pases de merica do Norte, 19 pases de Amrica Central e Antilhas e 5 pases de merica do Sul (dos quais Brasil faz parte). Esta doena tem uma ocorrncia mundial, isto , geral, mas a sua importncia evidente nas zonas tropicais, subtropicais e regies continentais hmidas (Agrios, 1988; 2004 e Snowdon 1991). A podrido negra considerada a mais sria doena das brssicas, podendo causar srios prejuzos nesta famlia. Esta bactria predispe ao ataque secundrio de podrido mole. A sua importncia reside tambm no facto de causar uma alta incidncia e severidade em culturas de valor econmico, na sua facilidade com que se dissemina e nas dificuldades encontradas para o seu controle (Tindall, 1983 e Michereff, 2007).
2.3.2. Descrio e classificao de Xanthomonas campestris pv. campestris Autor: Pinto Jorge Mabunda Trabalho de licenciatura 17
Efeitos de Tratamento da semente e da aplicao de fungicidas no controle de Podrido Negra (Xanthomonas campestris pv. campestris) no Repolho A Xanthomonas campestris pv. Campestris (Xcc) uma bactria gram-negativa, aerbica com formato de bastonete, uniflagelado, sem endosporo. Esta bactria tem pigmentos amarelos e as suas colnias so fluidas e brilhantes. A bactria Xcc est inserida no Reino Procaryotae (Do Carmo, 2006 & Vicente, 2004), filo Proteobactria (Do Carmo, 2006) ou Protophyta/Gracilicutes (Vicente, 2004), classe Schizomycetes (Vicente, 2004), ordem Pseudomonadales (Vicente, 2004) ou Xathomonadales (Do Carmo, 2006), famlia Pseudomonadaceae (Vicente, 2004) ou Xathomonadacea (Do Carmo, 2006), gnero Xanthomonas (Do Carmo, 2006 e Vicente, 2004), espcie Xanthomonas campestris pv campestris (Do Carmo, 2006 e Vicente, 2004) 2.3.3. Sintomatologia de podrido negra Os sintomas podem aparecer em qualquer estgio de desenvolvimento da planta. Um dos sintomas comuns o aparecimento de cloroses em forma de V, com o vrtice voltado para o centro da folha. Com o desenvolvimento da doena, as folhas tornam-se amarelas e podem apresentar murcha, necrose, queda prematura e apodrecimento das plantas afectadas. Vasos de folhas, ramos e razes podem apresentar-se negros devido a um polissacardeo produzido pelo patgeno. Com o prosseguimento da doena, os vasos tornam-se enegrecidos, dando origem ao nome podrido negra (Luz, 2000; Rulkens, 1996; Segeren et al,1994 e Vicente, 2004).
2.3.4. Biologia de Xanthomonas campestris pv. campestris A bactria sobrevive nos restos da planta no solo e em novas reas onde introduzida por sementes contaminadas (Snowdon, 1991). No solo a bactria invade as razes, especialmente se a planta apresentar ferimentos, por exemplo provocados por insectos. A bactria distribuda por tecidos condutores, o que chamado de infeco sistmica. A doena passa facilmente de uma planta para outra outra por meio de pingos de chuvas, equipamentos agrcolas. A doena favorecida por ambientes quentes e hmidos (Galli et.al., 1980; Luz, 2000; Segeren et.al., 1994 e Snowdon, 1991). A planta atacada por esta doena fica predisposta ao ataque secundrio de podrido mole (Galli et.al., 1980; Segeren et.al.,1994; Snowdon, 1991 e Tindall, 1983). Trabalho de licenciatura 18
Efeitos de Tratamento da semente e da aplicao de fungicidas no controle de Podrido Negra (Xanthomonas campestris pv. campestris) no Repolho 2.3.5. Ciclo da doena e epidemiologia Ciclo da doena uma srie de fases ou eventos sucessivos e ordenados que conduzem ocorrncia da doena nas plantas, ou que permite o desenvolvimento delas (Michereff, 2007). O ciclo da doena est representado na fig.1 e imediatamente depois desta faz-se a descrio do mesmo (Galli et.al., 1980; Segeren et.al.,1994; Snowdon, 1991; Tindall, 1983 e Vicente, 2004).
Fig. 1: Ciclo da Podrido Negra das Cruciferas (Fonte: Vicente; 2004)
Fontes de inculo Fontes de inculo: sementes, plantas provenientes dos viveiros, o solo contaminado, os residuos das culturas, infestantes, plantas hospedeiras e plantas no hospedeiras ( Xcc pode sobreviver e multiplicar externamente na superfcie de plantas durante vrias semanas em condies favorveis).
Penetrao A Xcc no possui mecanismos capazes de ultrapassar a barreira protectora das plantas. Ela consegue penetrar na planta atravs de aberturas naturais (estomas e hidtodos das folhas) e ferimentos (causados por insectos, outros animais, gua de chuva, rega, granizo, vento, maquinaria e alfaias agrcolas). Autor: Pinto Jorge Mabunda Trabalho de licenciatura 19
Colonizao Aps penetrao na planta, Xcc multiplica-se e forma microcolnias na superfcie de mesfilo. As clulas da planta em contacto com as bactrias, afastam-se, o seu citoplasma sofre plasmlise, os nucleolos deixam de ser visveis, o ncleo e os plastdeos sofrem colapso junto a parede celular e mais tarde a lamina mdia destruda, as clulas envaginam-se e d-se o colapso das paredes celulares. Formam-se assim cavidades aps ocupao dos espaos intracelulares pelas bactrias (Smith, 1903 citado por Vicente, 2004). As bactrias vo disseminando desde os espaos intracelulares, por baixo dos hidtodo, at os traquedos. Ao atingir um vaso de xilema, disseminam em ambas direces, mantendo-se confinadas aos vasos nos estgios iniciais da infeco. E a medida que as bactrias vo se multiplicando e disseminando, acumula-se o material que entope os vasos de xilema. Aps o entupimento dos vasos, as paredes e o parnquima de xilema comeam a separar-se e a desorganizar-se e os espessamentos das paredes em espiral dos vasos de xilema separam-se das paredes dos vasos. Aparece ento o primeiro sintoma visvel da doena, o escurecimento das nervuras, causado pela acumulao da melina nos espaos intracelulares e as clulas que rodeiam que rodeiam os vasos do xilema sofrem colapso formando-se cavidades no mesfilo adjacente aos vasos (Vicente, 2004). Nos cotildones, as bactrias invadem normalmente um grande nmero de estomas e colonizam as cavidades e o parnquima que os rodeia. Os vasos de caule so frequentemente entupidos pela bactria e observa-se uma mxima destruio perto da juno com os cotildones (Vicente, 2004). Disseminao As sementes contaminadas constituem um meio de disperso a longas distncias. Tambm pode ser disseminada a longa distncia por meio de plantas jovens contaminadas (Vicente, 2004). A distncias mais curtas, a doena pode ser disseminada por meios mecnicos, vento, insectos, aerosis e principalmente pela gua de rega ou chuva. O contacto directo entre folhas de plantas ss e plantas infectadas e o aparecimento de infestantes so outras formas de disperso a curtas distncias (Vicente, 2004). Autor: Pinto Jorge Mabunda Trabalho de licenciatura 20
2.3.6. Factores que favorecem a doena As condies ambientais tm uma grande influncia no desenvolvimento e disseminao da doena. A temperatura influencia directamente o crescimento da bactria: a Xcc no cresce abaixo de 5o C nem acima de 40o C tendo uma taxa de crescimento mxima entre os 25 e os 30 o C. A humidade tambm influencia na sobrevivncia, disseminao, penetrao das bactrias e no crescimento de hospedeiros. Altas humidades favorecem o desenvolvimento da doena, o que no acontece com baixas humidades (de Melo el. al., 2008 e Galli et. al. 1980). O fotoperodo e a intensidade luminosa tambm favorecem o crescimento da doena. Uma luz contnua favorece o crescimento da doena. A baixa intensidade luminosa quebra a resistncia das plantas e estas tornam-se susceptveis a doena. Plantas menos ensombrados apresentem uma maior incidncia de sintomas em relao a plantas mais ensombrados. Alm dos factores ambientais, a doena pode ser favorecida pelo gentipo das plantas. A progresso e disperso da doena no campo a partir de um foco de infeco inicial so influenciadas pela cultivar. A poca da plantao tambm pode influenciar a disseminao da doena. Sementeiras feitas cedo ou tarde da poca apropriada para o repolho, tornam-o resistente a doena em relao as feitas no perodo intermedirio da poca apropriada. O tipo de solo e fertilizao tambm influenciam a incidncia da doena. Solos situados a baixa altitude, com baixo teor de matria org6anica, baixa capacidade de reteno de gua, baixo teor de clcio e baixo PH favorecem a incidncia da doena. A aplicao de estrume e alta fertilizao azotada torna as plantas mais susceptveis a doena. A cobertura do solo tambm pode influenciar a incidncia da doena ao provocar uma alterao do microclima do solo e ao reduzir o efeito de salpico de gotas de agua (Vicente, 2004). 2.3.7. Mtodos de controle de Xcc A preveno importante para o controle de Xcc, pois quando a doena for verificado no campo, o seu controle difcil por se tratar duma doena sistmica, que distribui-se por todo sistema da planta (Vicente, 2004; 2008). Trabalho de licenciatura 21
Efeitos de Tratamento da semente e da aplicao de fungicidas no controle de Podrido Negra (Xanthomonas campestris pv. campestris) no Repolho A testagem dos lotes de sementes pelos seus produtores e o rigoroso controle das sementes e plantas que entram em cada pas so essenciais para reduo dos prejuzos causados pela podrido negra das cruciferas. Nos viveiros e nos campos de cultura, as prticas culturais devem ser revistas de forma a reduzir o risco de disseminao da doena e no caso de se verificar a existncia de focos de infeco, devem ser imediatamente eliminados (Vicente, 2004). Testagem de sementes e controle de material importado A melhor forma de reduzir a disperso de sementes infectadas passa pela certificao das sementes no pas de origem e caso se detectar a presena de Xcc nas sementes, estas devem ser tratadas. O mesmo deve ser feito mesmo para sementes produzidas em pequenas quantidades para autoconsumo ou para os produtores de uma dada regio (Vicente, 2004). Para a certificao da semente, deve ser dada mais ateno `a testagem das sementes do que as inspeces do campo de cultura, uma vez que os sintomas podem no ser detectveis em plantas contaminadas. portanto importante dispor de um mtodo de deteco de Xcc e existem vrios mtodos. Srinivasan et al. (1973) citados por Vicente (2004) propuseram um mtodo baseado na observao de sintomas em plntulas germinadas s escuras em placas de Petri mas este mtodo moroso pois observa um grande nmero de plntulas e h necessidade de fazer isolamento para se confirmar a presena de Xcc uma vez que outras bactrias podem causar sintomas semelhantes as de Xcc. A International Seed Testing Association (ISTA) e a International Seed Health Initiative for Vegetables (ISHI-Veg) recomendam mtodos que so tidos como eficientes e que consistem na colocao directa de sementes em meios semi-selectivos ou na lavagem de sementes e cultura de soluo nesses meios. Posteriormente faz-se a identificao de Xcc que pode ser feita de vrias maneiras incluindo a observao de caractersticas morfolgicas, testes bioqumicos, testes serolgicos e inoculao em plantas susceptveis (Vicente, 2004). Alm de controle feito pelos produtores de sementes, cada pas deve controlar os lotes de sementes e plantas que importa. Factores como a presena ou ausncia do patgeno no pas, o potencial do patgeno para causar epidemia, a distribuio local de cada doena e a sua importncia econmica devem determinar as medidas aplicar para controlar a entrada de material (Vicente, 2004). Autor: Pinto Jorge Mabunda Trabalho de licenciatura 22
Tratamento da semente Os lotes de sementes podem ser sujeitos a diversos tratamentos, mas estes no eliminam totalmente a bactria. O tratamento trmico da semente consiste na introduo desta na gua quente 50 C ou 52 C durante 25 min. ou 30 min. (Vicente, 2004). O outro mtodo consiste na desinfeco de sementes com o ar quente a 75 C ou 70 C durante seis ou sete dias (Vicente, 2004). Os produtos base de mercrio so usados para o tratamento da semente: o cloreto de mercrio, o tratamento da semente com Hg (CN)2 a 0.1% durante uma hora, o bicloreto de mercrio so usados neste grupo (Vicente, 2004). Outros produtos qumicos como a lexvia, o acetaldido, o acetato de cobre, o hipocloreto de clcio e hipocloreto de sdio so usados no tratamento da semente. Antibiticos como aureomicina, agrimicina, estreptomicina, oxitetraciclina, plantomicina e fungicidas e suas combinaes tambm so usados no tratamento da semente. Mtodos culturais A Produo de sementes deve ser feita em regies desfavorveis ao desenvolvimento de Xcc. Os viveiros e os campos de cultura devem ser instalados em reas onde nunca foi observada a doena, se possvel em terrenos que no tenham sido cultivados recentemente com cruciferas e o mais afastado possvel de terrenos nestas condies (Vicente, 2004). Deve ser usados solos com uma boa drenagem e deve-se evitar no mximo acumulao de gua (Segeren et.al., 1994; Snowdon, 1991 & Vicente, 2004). As infestantes que podem ser hospedeiras da bactria devem ser eliminadas mesmo que no apresentem sintomas da doena. Os equipamentos agrcolas devem ser regularmente limpados e desinfectados especialmente quando so usados em diferentes viveiros e campos. As operaes culturais devem ser feitas quando as plantas se encontrarem secas (Alves e Del Ponte, 2007 & Vicente, 2004). A rega por asperso deve ser evitada e a cultura no deve receber gua de rega proveniente de outros campos (Luz , 2000; Galli et.al. , 1980; Tindall , 1983 & Vicente, 2004). Trabalho de licenciatura 23
Efeitos de Tratamento da semente e da aplicao de fungicidas no controle de Podrido Negra (Xanthomonas campestris pv. campestris) no Repolho Aconselha-se o uso de fertilizantes e no de estrumes, pois estes ltimos podem ser contaminados com os resduos das culturas anteriores. Os resduos das culturas devem ser retirados dos campos e se possvel queimados (Vicente, 2004). aconselhvel a rotao de culturas de dois em dois anos ( Vicente, 2004). A inspeco dos viveiros e campos deve ser feita frequentemente e caso se verificar plantas com sintomas da doena, devem ser eliminadas e queimadas (Vicente, 2004). Tratamento qumico O controle da podrido negra no campo muito difcil porque quando os sintomas aparecem, as plantas j esto frequentemente infectadas em todo o sistema circulatrio (Vicente, 2004; 2008). O solo deve ser desinfectado com produtos como formaldedo ou vapor, lixvia a 10 ou 12.5 Kg/ha, o metamesdio a 17 ml/Kg Os produtos cpricos (hidrxido de cobre, calda bordalesa, oxicloreto de cobre, xido cuproso, fosetil) podem ajudar a proteger as plantas, mas no tm efeito curativo, pois esses quando aplicados nas partes susceptveis do hospedeiro e formam uma camada superficial protectora antes da deposio do inculo (Michereff , 2007 e Vicente, 2004). Os antibiticos como terramicina, estreptomicina, aeromicina, agrimicina, tetraciclina tambm so usados no controle de Xcc (Segeren et.al. 1994; Galli et.al.1980 e Vicente, 2004).
Fungicidas cpricos So fungicidas protectores, uma vez que formam uma camada superficial protectora nas plantas antes de deposio do inoculo quando aplicados nas plantas susceptiveis ao hospedeiro (Michereff, 2007). Estes fungicidas no so absorvidos pelas plantas devido a sua relativa insolubilidade em gua e sua dificuldade de penetrao nas plantas. um grupo de fungicidas com largo espectro de aco antibacteriana e antifungicida. Possuim baixa toxidade aos animais e ao Homem. Descrio de fungicidas usadas no experimento (Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria, 2009) Autor: Pinto Jorge Mabunda Trabalho de licenciatura 24
Efeitos de Tratamento da semente e da aplicao de fungicidas no controle de Podrido Negra (Xanthomonas campestris pv. campestris) no Repolho Hidrxido de Cobre Ingrediente activo ou nome comum: Hidrxido de cobre (copper hydroxide) Outra designao: Copper dihydroxide Nome qumico: cupric hydroxide ou copper(II) hydroxide Frmula bruta: CuH2O2 ou Cu(OH)2 Frmula estrutural:
Grupo qumico: Inorgnico Classe: Fungicida e bactericida Grupo qumico: Inorgnico Oxicloreto de cobre Ingrediente activo ou nome comum: Oxicloreto de cobre (copper oxychloride) Outras designaes: Basic copper chloride, Basic cupric chloride, Copper chloride, Copper chloride oxide Nome qumico: dicopper chloride trihydroxide Frmula bruta: Cu2Cl(OH)3 ou ClCu2H3O3 Grupo qumico: Inorgnico Classe: Fungicida e bactericida
Sulfato de cobre Ingrediente activo ou nome comum: Sulfato de cobre (copper sulfate) Outras designaes: Sulfuric Acid, Sulfato Bsico de Cobre, Sulfato Tribsico de Cobre Nome qumico: cupric sulfate ou copper(II) tetraoxosulfate Frmula bruta: CuO4S ou CuSO4 Frmula estrutural: Autor: Pinto Jorge Mabunda Trabalho de licenciatura 25
Grupo qumico: Inorgnico Classe: Fungicida e bactericida Controle biolgico O controle biolgico de Xcc assim como de outras bactrias e pestes consiste no uso de microrganismos especficos que limitam o crescimento e actividade destas. Vrios bacterifagos tm sido usados no controle de Xcc. Os principais organismos utilizados para tratamento de sementes para o controle de Xanthomonas campestris pv. Campestris so estirpes do gnero Bacillus (Bacillus subtilis, Bacillus polymyxa) e Pseudomonas sp (Vicente, 2004 e Massomo et al., Sem Data). Controle gentico O uso de cultivares ou hbridos resistentes controla doena reduzindo assim as perdas causadas pela bactria e ao mesmo tempo reduz aplicao de pesticidas e diminui os riscos da sade humana e ambiente (Vicente, 2004)
III. MATERIAIS E MTODOS 3.1. Metodologia 3.1.1. Caracterizao da rea experimental O experimento foi instalado no campo agrcola da Associao Massacre de Mbuzini, MahotasMaputo. O solo da rea experimental franco-argiloso com uma topografia relativamente plana e bem drenado. O clima da regio segundo a classificao de Koppen Cwa, tropical com Inverno seco. Segundo Instituto Nacional de Estatstica (INE) em 2009, a precipitao mdia anual de 100 mm e a do ms mais seco de 0 mm. A temperatura mdia anual de 25 C.
90 tem(oC), precip e Hr (%) 80 70 60 50 40 30 20 10 0 F M A Meses M J J Tmx. Tmn. HR PREC
Fig. 2: Situao climtica de Mahotas durante o experimento 3.1.2. Tratamento trmico da semente Para o tratamento trmico da semente, baseou-se em passos recomendados por Annimo (2000), que so seguintes: Colocou-se as sementes, com uma pedrinha (para afundar), em um pano ralo para fazer um embrulho, e que pudesse passar pela boca de uma garrafa trmica; Aqueceu-se a gua em chaleira at 60 C; Seguidamente foi-se despejar a gua quente em uma garrafa trmica de 1 litro, preenchendo de volume total; Deixou-se a garrafa trmica aberta. Acompanhou-se a diminuio da temperatura da gua at 51C ; Mergulhou-se o embrulho dentro da garrafa trmica e e esta ficou fechada; Deixou-se o embrulho na garrafa trmica por 30 min. e durante este tempo, movimentou-se de vez em quando a garrafa; Passado esse tempo, abriu-se a garrafa, retirou-se o embrulho e esfriou-se as sementes em gua em temperatura ambiente; Espalhou-se as sementes sobre jornal, sombra, para enxug-las durante 30 min; Semeou-se aps o enxugamento (depois de 30 min. de secagem). Autor: Pinto Jorge Mabunda Trabalho de licenciatura 27
Efeitos de Tratamento da semente e da aplicao de fungicidas no controle de Podrido Negra (Xanthomonas campestris pv. campestris) no Repolho 3.1.3. Operaes culturais Os viveiros foram montados em bandejas de isopor contendo o substrato e eram regados todos dias. Fez se transplante 30 dias depois da sementeira nos viveiros. Fez se a adubao de cobertura com NPK (12:24:12) na quantia de 300 kg/ha 60 dias depois de transplante. Para o tratamento fitossanitrio, para alm de tratamento trmico da semente, aplicaes de sulfato de cobre, hidrxido de cobre e oxicloreto de cobre que eram tratamentos dirigidos a podrido negra, aplicou-se Lambda-cialotrina (marca comercial Karate 5% EC) tanto no viveiro como no campo definitivo para o controle de traa de couve. As aplicaes de sulfato de cobre, hidrxido de cobre e oxicloreto de cobre que eram tratamentos dirigidos a podrido negra eram feitas de sete em sete dias. 3.1.4. Controle qumico Para o controle qumico no campo, foram feitas aplicaes de sete em sete dias com fungicidas cpricos (sulfato de cobre, hidrxido de cobre e oxicloreto de cobre). As aplicaes de fungicidas comearam dez dias depois de inoculao quando comearam a surgir sintomas da doena. 3.1.5. Descrio do ensaio Foi instalado um ensaio de campo para estudar os efeitos de dois factores (tratamento trmico da semente e fungicidas) e como havia esperana de que os dois factores no operavam independentemente, decidiu-se o uso de experimentos factoriais baseado no delineamento dos blocos completamente casualizados (DBCC). Esse facto relatado por Banzatto e Kronka (2006) que avanam que quando se monta um experimento no campo, h factores no controlados e por isso deve-se recorrer este tipo delineamento. Os nveis dos dois factores so: Tratamento trmico da semente: t0 - semente tratada termicamente e t1 - semente no tratada e Fungicidas (F): f0 - sem aplicao de fungicidas, f1 - aplicaes de sulfato de cobre, f2 aplicaes de hidrxido de cobre e f3- aplicaes de oxicloreto de cobre. Autor: Pinto Jorge Mabunda Trabalho de licenciatura 28
Efeitos de Tratamento da semente e da aplicao de fungicidas no controle de Podrido Negra (Xanthomonas campestris pv. campestris) no Repolho O ensaio foi montado numa rea de 196,84 m2 e teve 24 parcelas de 7.2 m2 cada. Cada parcela tinha 44 plantas com um compasso de 60x40 cm e para cada parcela. As parcelas dentro do bloco estavam separadas entre elas por uma distncia de 0.2 m. O ensaio teve trs blocos de 63.08 m 2 cada e separados entre eles por uma distncia de 1 m. O ensaio teve oito tratamentos (resultantes da combinao dos nveis de variveis) nomeadamente: t0f0 tratamento sem semente tratada e nem aplicao de fungicidas; t0f1- tratamento sem semente tratada com aplicao de sulfato de cobre; t0f2 - tratamento sem semente tratada com aplicao de hidrxido de cobre; t0f3 tratamento sem semente tratada com aplicao de oxicloreto de cobre; t1f0 - tratamento com semente tratada e sem aplicao de fungicidas; t1f1- tratamento com semente tratada e com aplicao de sulfato de cobre; t1f2 - tratamento com semente tratada e com aplicao de hidrxido de cobre; t1f3 - tratamento com semente tratada e com aplicao de oxicloreto de cobre. O viveiro foi montado no campo em bandejas com substrato (turfa) e esta foi dividida em duas partes: uma com a semente tratada com gua quente a 50C durante 30 min. e a outra com sementes no tratadas. 3.1.6. Preparao do inoculo e inoculao no campo O isolado de Xcc usado para inoculao foi obtido nas plantas jovens severamente atacadas por podrido negra e colhido nos campos da associao Joaquim Chissano em Mahotas, sita na cintura verde da cidade de Maputo. Para evitar a perda de viabilidade de inculo e para aumentar as probabilidades de inocular a bactria, as plantas foram colhidas no campo e transportadas para o laboratrio numa colma que tinha gelo. Procedeu a purificao da bactria que consistiu no corte nas folhas atacadas de pedaos com uma parte viva e uma parte morta (como garantia de que esses pedaos tero bactria) e estes foram postos em lamelas com Nacl 0.85% para se proceder com a observao da bactria no microscpio. Depois de se purificar a bactria, cortou-se ainda pedaos com uma parte viva e uma parte morta (como garantia de que esses pedaos tero bactria) e estes foram postos numa soluo de Nacl a 0.85% durante 10 min., para depois se tirar na soluo algumas gotas e cultivar-se em meio de NA. Fez se a incubao no laboratrio por 48 h (Segundo Romeiro, 2008). Autor: Pinto Jorge Mabunda Trabalho de licenciatura 29
Efeitos de Tratamento da semente e da aplicao de fungicidas no controle de Podrido Negra (Xanthomonas campestris pv. campestris) no Repolho Passados 48 h, fez se a repicagem da bactria para novas placas de NA como forma de revitalizla. Primeiro para se confirmar que a bactria que se pretendia, fez-se a repicagem para lamelas com KOH e esfregou-se a bactria sobre essas lamelas. A bactria apresentou-se em forma de um fio transparente e brilhante e ai ficou-se com a certeza de que era a bactria Xanthomonas campestris pv. campestris, porque a mesma se comporta desta maneira em lamelas com KOH. Usou-se a absorvncia de 550 nm ajustada a 0.3 que corresponde a uma concentrao de 10 8 UFC/ml para a suspenso bacteriana. A inoculao foi feita das 17 at 18 h, trs semanas depois de transplante nas folhas pelo mtodo de presso por meio de pulverizador manual de compresso (Massomo et al.; 2003, Romeiro, 2008 e Vicente, 2008). 3.1.7. Amostragem e Perodo de avaliao O rendimento e avaliao de danos foram medidos em todas plantas de cada parcela. A severidade interna foi medida atravs da seleco aleatria de 10 plantas em cada parcela. Para a severidade externa, foram seleccionadas aleatoriamente 10 plantas por parcela e em cada planta foram seleccionadas tambm aleatoriamente 10 folhas. A observao de incidncia e severidade externa de sintomas foi feita sete em sete dias e em cada parcela foram observadas 10 plantas duma forma aleatria, onde foi usado o mtodo de diagonal para recolha de amostras por a indicao de Segeren (1996). Foram feitas 10 observaes de incidncia e severidade externa de sintomas. O rendimento, os danos (perda de rendimento e perda monetria) e a severidade interna foram observados no fim do ciclo da cultura.
3.2. Parmetros a medir 3.2.1. Incidncia de doena Incidncia de doenas a percentagem de plantas doentes ou partes de plantas doentes em uma amostra ou populao. Esta calculada de acordo com a presena ou ausncia de sintomas (Moraes, 2007; Michereff, 2007 e Segeren, 1996). A formula para a sua determinao : Autor: Pinto Jorge Mabunda Trabalho de licenciatura 30
Efeitos de Tratamento da semente e da aplicao de fungicidas no controle de Podrido Negra (Xanthomonas campestris pv. campestris) no Repolho Incidncia da doena = nps/ntpo* 100%, onde: nps o nmero de plantas com sintomas e ntpo nmero total das plantas observadas. Este parmetro foi medido de sete em sete dias, a partir de 10 o dia depois da inoculao, momento em que houve o aparecimento de sintomas da doena.
3.2.2. Severidade de sintomas

Severidade de sintomas a percentagem da rea ou do volume de tecido coberto por sintomas. A severidade de sintomas causada por podrido negra foi avaliada com base no nmero de plantas que apresentavam sintomas (Moraes, 2007). Foi medido dois tipos de severidade e cada tipo teve a sua escala de medio segundo Massomo et al. (2003): a severidade externa (EBRI) e a severidade interna (IBRI). Para cada tipo de severidade houve uma escala especfica e um momento para a sua medio. Assim para severidade externa (EBRI) houve uma escala de de 1- 6 (adaptao da escala usada por Massomo et al., 2003 que tambm foi usada por Alberto, 2008 e Bila, 2008) de acordo com os sintomas. Essa escala foi a seguinte: 1- Planta s; 2- Leses diminutas nos hidtodos evidenciando painis necrticos marginais com bordas negras; 3- Pequenas leses em forma de V, estreitas e com 2 cm, as vezes com painis necrticos com margens clorticas difusas; 4- Pequenas a mdias leses em forma de V, com centros necrticos, margens clorticas difusas, nervuras denegridas interna e externamente e as leses raramente progridem at a nervura principal; 5- A leso em forma de V progride e atinge a nervura principal; as nervuras tornam-se enegrecidas; 6- As leses marginais tm tendncia a coalescer, dando a folha uma aparncia seca; ocorre uma invaso sistmica acompanhada uma murcha severa e morte da planta. A severidade externa ( EBRI) foi dada com a frmula (Massomo, 2008): Autor: Pinto Jorge Mabunda Trabalho de licenciatura 31
Efeitos de Tratamento da semente e da aplicao de fungicidas no controle de Podrido Negra (Xanthomonas campestris pv. campestris) no Repolho EBRI = [(classe *frequncia)/(np *em)]*100%, onde np - nmero total de plantas avaliadas e em - nota mxima da escala. Esta severidade foi medida de sete em sete dias, a partir de 10 o dia depois da inoculao, momento em que houve o aparecimento de sintomas da doena. A medio consistiu na observao de plantas com sintomas (mtodo visual) e posterior classificao de acordo com a escala de classificao de sintomas aqui presente. Para a severidade interna (IBRI) usou-se a mesma formula de EBRI mas houve uma outra escala de 1-5 (adaptao da escala usada por Massomo et al.;2003). A escala de IBRI usada foi a seguinte: 1 - Ausncia de descolorao vascular no caule 2 - Descolorao vascular progride at menos da metade da haste, sem sintomas nas folhas internas 3 - Descolorao vascular progride at mais da metade da haste, sem sintomas nas folhas internas 4 - Descolorao vascular progride at mais da metade da haste, 1-3 folhas com sintomas de Podrido Negra 5 - Descolorao vascular progride at mais da metade da haste e mais de 3 folhas com sintomas da Podrido Negra. 3.2.3. rea abaixo da curva de progresso de doena Segundo Bergamim Filho e Amorim (1996) citados por Krieger (2006), a curva de progresso da doena expressa a proporo de doena em funo de tempo e constitui a melhor representao de uma epidemia. Atravs dela, pode se caracterizar interaces entre patgeno, hospedeiro e ambiente, avaliar estratgias de controle, prever nveis futuros de doenas e pode se verificar simulaes. Os mesmos autores avanam ainda que curvas de progresso da doena podem ser construdas para qualquer patossistema. Independente da situao considerada, os parmetros importantes, como a poca de incio da epidemia, a quantidade de inculo, a taxa de aumento da doena, a forma da curva de progresso da doena, a rea sob esta curva, as quantidades mximas e final de doena e a durao da epidemia, podem ser caracterizados. A frmula para o clculo dessa rea : Autor: Pinto Jorge Mabunda Trabalho de licenciatura 32
em que n o numero de avaliaes; y a intensidade da doena e t o tempo quando da avaliao da intensidade da doena. 3.2.4. Rendimento Rendimento a quantidade de colheita de uma cultura, em campos tratados e no tratados, isto , produto mensurvel de valor econmico de uma plantao (Krieger, 2006 e Moraes, 2007); Foi medido pesando as cabeas de repolho em cada parcela e foi dado por Kg/ha Este parmetro foi medido no fim do ciclo da cultura.
3.2.5. Danos
Foram avaliados a reduo de quantidade e qualidade de repolho atravs da comparao de rendimentos obtidos e rendimentos esperados, atravs da frmula: % de perda de rendimento = (rt-rnt)/rt; onde: rt rendimento das parcelas tratadas e rnt rendimento das parcelas no tratadas Foram avaliados ainda as perdas econmicas devido ao controle, atravs da frmula: Perda monetria = cc(Mt/ha)/vp(Mt/kg); onde cc custo de controle e vp valor de produo Este parmetro foi medido no fim do ciclo da cultura. 3.3. Anlise de Dados Os dados obtidos do experimento foram submetidos as anlises estatsticas com o auxilio do SAEG verso 5.0 (Sistemas de Anlises estatsticas e genticas de Centro de Cincias Exactas no Departamento de Informtica da Universidade Federal da Viosa, Ivo Ribeiro Jr., 1999). Os valores de rendimento, incidncia e severidade (interna e externa) foram submetidos a anlise de varincia (ANOVA). Transformou-se os dados originais de incidncia e severidades em ARSEN
x / 100
onde x
dado original de cada parmetro, isto porque eles no seguiam uma distribuio normal e a transformao era uma forma para ver se conseguia uma distribuio aproximadamente normal. Todavia no se conseguiu uma transformao adequada, por isso mesmo usou-se testes no paramtricos (indicao de Ribeiro Jr., 1999). Autor: Pinto Jorge Mabunda Trabalho de licenciatura 33
Efeitos de Tratamento da semente e da aplicao de fungicidas no controle de Podrido Negra (Xanthomonas campestris pv. campestris) no Repolho Mdias de tratamentos foram comparadas usando teste de Tukey para rendimento e severidade interna e teste de Wilcoxon e Kruskal- Wallis para severidade externa e incidncia 5 % de significncia.
IV. RESULTADOS E DISCUSSES Feita a sementeira no dia 21/02/2009, a emergncia comeou no 3 dia depois da sementeira. Uma vez que as bandejas de isopor onde foram montados os viveiros foram postas a sombra para no se prejudicar a germinao devido a altas temperaturas que se faziam sentir durante o momento de preparao de viveiros, algumas plntulas morreram no viveiro devido s altas temperaturas. Houve ataque de traa de couve tanto no viveiro assim como no campo definitivo e que a mesma foi controlada com sucessos com a aplicao de Lambda-cialotrina (marca comercial Karate 5% EC). Depois da inoculao, os sintomas comearam aparecer no 10 dia. 4.1. Severidade e incidncia No houve diferenas significativas de severidade interna e incidncia nos 10, 27 e 34 depois da inoculao. Facto que provavelmente pode ser explicado por as plantas apresentarem um crescimento similar nos primeiros estgios e por reagirem da mesma maneira a diferentes a diferentes perturbaes ambientais. Trabalho de licenciatura 34
Efeitos de Tratamento da semente e da aplicao de fungicidas no controle de Podrido Negra (Xanthomonas campestris pv. campestris) no Repolho A severidade (interna e externa) e a incidncia foram altas em t 0f0 em relao a todos tratamentos e foram mais baixas nos tratamentos t1f1, t1f2 e t1f3. Facto causado por tratamento trmico e aplicao de fungicidas cpricos que controlam de forma preventiva a podrido negra (Michereff, 2007 e Vicente, 2004).
45 Severidade externa (%) 40 35 30 25 20 15 10 5 0 10 17 24 31 38 45 52 59 66 73
tofo tof1 tof2 tof3 t1fo t1f1 t1f2 t1f3
Dias apos inoculacao
Fig. 3: Severidade de Podrido Negra
Fig. 4: Incidncia de Podrido Negra Para a severidade interna, houve interaco significativa entre tratamento da semente e aplicao de fungicidas. A severidade interna baixa foi verificada na combinao da semente tratada com qualquer fungicida e a mais alta na combinao de semente no tratada e sem aplicao de fungicidas, facto que explicado por tratamento da semente e aplicao de fungicidas reduzirem a disseminao e penetrao da bactria nas plantas (Michereff, 2007 e Vicente, 2004). Autor: Pinto Jorge Mabunda Trabalho de licenciatura 35
Tabela 1: Efeitos da interaco do tratamento trmico da semente e aplicao de fungicidas na severidade interna da doena
Tratamento Fungicidas da semente 1 1 25.2333Aa* 2 18.9667Ba
2 19.7000Ab 9.0000 Bb
3 17.700 0 Ab 9.1333 Bc
4 18.6333Ab 11.300 Bc
* Medias seguidas de letras maisculas dentro da coluna no se diferem entre si e medias seguidas de letras minsculas dentro da linha coluna no se diferem entre si pelo teste de Tukey a 5% de significancia
4.2. rea Abaixo da Curva Progresso de doena A partir dos valores de incidncia e severidade, foi calculada rea Abaixo da Curva Progresso de doena (AACPD). Quando maior for AACPD, maior a intensidade da doena. Comparando os tratamentos com base tanto na incidncia assim como severidade, viu-se que o tratamento tofo apresentou maior AACPD indicando maior susceptibilidade podrido negra. Os tratamentos t1f1, t1f2 e t1f3 apresentaram menor AACPD indicando menor susceptibilidade. Esse facto, segundo Krieger (2006), devido a combinao de tratamento da semente e aplicao de fungicidas nos tratamentos que apresentaram menor AACPD e sua ausncia no tratamento que apresentou maior AACPD.
AACPD
3000 2500 2000 1500 1000 500 0 tofo tof1 tof2 tof3 t1fo t1f1 t1f2 t1f3 AACP D
Fig. 5: rea abaixo da curva de doena com base na incidncia
AACPD
3500 3000 2500 2000 1500 1000 500 0 tofo tof1 tof2 tof3 t1fo t1f1 t1f2 t1f3 AACP D
Fig. 6: rea abaixo da curva de doena com base na severidade externa
4.3. Rendimento Viu-se que a interaco entre o tratamento trmico e aplicao de fungicidas no era significativa na obteno de rendimento, por isso estudou-se cada factor isoladamente. Para o tratamento trmico, parcelas com semente tratada apresenta diferenas significativas em relao a parcelas com semente no tratada em termos de rendimento, facto que explicado por Michereff (2007) e Vicente (2004) que afirmam que o tratamento trmico da semente reduz a disseminao da bactria resultando em menores danos causados por esta bactria embora no elimine a bactria na sua totalidade.
Tabela 2: Efeitos de tratamento trmico no rendimento de repolho Tratamento trmico Dados Mdias Comparaes* 2 12 15.1954 A 1 12 13.7014 B 1-semente no tratada termicamente e 2-semente tratada termicamente; *Mdias seguidas da mesma letra no diferem entre si pelo teste de Tukey a 5% de significncia
Para aplicao de fungicidas no campo, os tratamentos com sulfato de cobre, hidrxido de cobre e oxicloreto de cobre no apresentam diferenas significativas entre si em termos de rendimentos mas diferem significativamente com tratamentos sem aplicao de fungicidas, facto que provavelmente explicado por fungicidas cpricos formarem uma camada protectora sobre as
Efeitos de Tratamento da semente e da aplicao de fungicidas no controle de Podrido Negra (Xanthomonas campestris pv. campestris) no Repolho plantas que impede a penetrao e disseminao da bactria resultando em menores danos causados por esta bactria segundo Michereff (2007).
Tabela 3: Efeitos de aplicao de fungicidas cpricos no rendimento de repolho
Fungicida 4 2 3 1
Dados 6 6 6 6
Mdias 15.3352 14.7917 14.5000 13.1667
Comparaes* A A AB B
1-tratamento sem aplicao de fungicidas, 2- tratamento com aplicao de sulfato de cobre, 3- tratamento com aplicao de hidrxido de cobre e 4- tratamento com aplicao de oxicloreto de cobre; *Mdias seguidas da mesma letra no diferem entre si pelo teste de Tukey a 5% de significncia
Rend (Ton/ha) 18,0 16,0 14,0 12,0 10,0 8,0 6,0 4,0 2,0 0,0 tofo tof1 tof2 tof3 t1fo t1f1 t1f2 t1f3 Rend (Ton/ha)
Fig. 7: Efeitos de tratamentos no rendimento Os tratamentos t1f1, t1f2 e t1f3 apresentaram melhores rendimentos e entre eles no h diferenas significativas e isso deve-se a combinao de tratamento trmico que segundo Vicente (2004; 2008) elimina a bactria que infecta externamente a semente apesar de ter a desvantagem de quebrar o poder germinativo da semente e aplicao de fungicidas cpricos que segundo Michereff (2007) e Vicente (2004, 2008) reduz a disseminao da bactria mas no porque tem efeito curativo mas porque protege as plantas cria uma camada nas plantas que dificulta a penetrao da bactria. O tratamento t0f0 teve rendimento baixo devido a falta de preveno da doena.
Efeitos de Tratamento da semente e da aplicao de fungicidas no controle de Podrido Negra (Xanthomonas campestris pv. campestris) no Repolho 4.4. Danos A aplicao preventiva de fungicidas na cultura de repolho feijoeiro leva ao aumento do custo de produo. O lucro depende principalmente do rendimento obtido e dos custos de controle. Uma aplicao de fungicida envolve o custo do produto e os custos relacionados com tcnica de aplicao. A ltima depende principalmente do tipo de equipamento disponvel para que o produto seja aplicado e do pessoal que aplica. Na tabela 2, constam os custos dos trs fungicidas utilizados neste trabalho (A) e custos fixos em cada fungicida (B).
Tabela 4 : Calculo de custos totais de aquisio e aplicao de fungicidas
custo por Kg A- Custos de Fungicidas (Mt) Sulfato de cobre 285 Hidroxido de cobre 492 Oxicloreto de cobre 270 B- Custos fixos* (Mt) Sulfato de cobre 100 Custos totais (A+B) (Mt) Sulfato de cobre 157
pesticidas.
dose total para o ensaio (g) 200 200 130 Hidrxido de cobre 100 Hidrxido de cobre 198.4
custo total de fungicida usada (Mt) 57 98.4 35.1 Oxicloreto de cobre 100 Oxicloreto de cobre 135.1
* Os custos fixos incluem as tcnicas usadas na aplicao e o pagamento de trabalhadores que aplicavam os
Tabela 5: Ganhos de rendimento e perdas monetrias em relao ao tratamento controle Tratamentos Rendimento Ganho de rendimento (%) Valor de produo (Mt) CC* (Mt) Perda monetria (%) t0f0 12.4 0.00 311.1 0 0.0 t0f1 13.6 8.26 339.1 78.5 23.1 t0f2 14.0 10.99 349.5 99.2 28.4 t0f3 14.8 16.00 370.4 67.55 18.2 t1f0 13.9 10.40 347.2 0 0.0 t1f1 16.0 22.31 400.5 78.5 19.6 t1f2 15.0 17.14 375.5 99.2 26.4 t1f3 15.9 21.51 396.4 67.55 17.0 * CC so custos devido ao controle da doena e s existem onde se faz controle
Segundo as tabelas acima (tabelas 3 e 4), pode-se verificar que o tratamento t 1f1 tem mais ganhos de rendimentos em relao ao tratamento controle e o seu ganho compensa as perdas monetrias Autor: Pinto Jorge Mabunda Trabalho de licenciatura 39
Efeitos de Tratamento da semente e da aplicao de fungicidas no controle de Podrido Negra (Xanthomonas campestris pv. campestris) no Repolho e por sua vez o tratamento t0f1 tem menos ganhos de rendimentos em relao ao tratamento controle e este ganho no compensa as perdas monetrias. Nas mesmas tabelas ainda se pode verificar que t0f2 tem maiores perdas monetrias e o tratamento t 1f3 teve mais custos monetrios em relao aos tratamentos t1f1 e t1f2 mas em termos de rendimentos no houve diferenas significativas entre esses trs tratamentos.
V. CONCLUSES E RECOMENDAES 5.1. Concluses O tratamento trmico da semente e aplicao de fungicidas cpricos controlam podrido negra individualmente ou quando combinados mas h maior controle quando combinados. O tratamento trmico da semente e aplicao de fungicidas cpricos tm menor eficincia no controle de podrido negra quando actuam individualmente e s h maior eficincia quando so combinados. O uso de fungicidas cpricos no controle de podrido negra no repolho leva ao aumento do custo de produo. O lucro depende principalmente do potencial de produtividade da cultura e dos gastos com o controle. Aplicaes preventivas de fungicidas cpricos no repolho por calendrio fixo aumentaram significativamente o rendimento da cultura e reduziram a intensidade de podrido negra, levando ao aumento do custo de produo e de lucro. A podrido negra foi detectada em todos tratamentos mas a sua intensidade foi governada por tratamento da semente e por aplicao de fungicidas cpricos.
5.2. Recomendaes Chegado ao fim do estudo e alcanados os resultados, urge a necessidade de deixar recomendaes que so dirigidas aos que lidam directa ou indirectamente com a agricultura. Eis a seguir recomendaes por grupos de interesse: Autor: Pinto Jorge Mabunda Trabalho de licenciatura 40
Efeitos de Tratamento da semente e da aplicao de fungicidas no controle de Podrido Negra (Xanthomonas campestris pv. campestris) no Repolho Aos Investigadores Que experimente pesticidas botnicos no combate de Podrido Negra, ex. Plantas com efeito pesticida: Que repita este ensaio em diferentes climas e microclimas. Que combine o tratamento trmico da semente com outros fungicidas diferentes destes que foram usados neste estudo Aos camponeses e associaes Que adoptem o uso de sulfato de cobre, oxicloreto de cobre e hidrxido de cobre no controle de podrido negra das brssicas. Que participem na disseminao de uso destes fungicidas aos outros camponeses e associaes. Que participem na definio de agenda de investigao e posterior avaliao e validao de tecnologias, sempre que houver programas de investigao. Ao Ministrio de Agricultura e a FAEF Que coordenem a difuso de uso de sulfato de cobre, oxicloreto de cobre e hidrxido de cobre no controle de podrido negra das brssicas e depois se integrem na superviso, monitoria e controle da qualidade de servios prestados. Que assegurem a transferncia e uso de sulfato de cobre, oxicloreto de cobre e hidrxido de cobre no controle de podrido negra das brssicas. Especificamente ao Ministrio, que coloque em quarentena as sementes importadas, pois existe um risco de introduo e disseminao da podrido negra em locais onde no existia antes. Especificamente a FAEF, que divulgue os resultados aos camponeses do local onde foi feito o estudo e para os camponeses de outros locais onde os resultados obtidos nesta experincia podem ter efeitos.
VI. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

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No deixe de citar a fonte. Diga no ao plgio. Ricardo Schtz, 2009.
ANEXOS (Cf no outro documento em anexo)

Efeitos de Tratamento Da Semente e Aplicacao de Fungicidas Cupricos No Controle Da Podridao Negra No Repolho

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Efeitos de Tratamento Da Semente e Aplicacao de Fungicidas Cupricos No Controle Da Podridao Negra No Repolho

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Universidade Eduardo Mondlane

Faculdade de Agronomia e Engenharia Florestal

Maputo, Agosto de 2009

LISTA DE ABREVIATURAS Autor: Pinto Jorge Mabunda Trabalho de licenciatura vii

LISTA DE FIGURAS Autor: Pinto Jorge Mabunda Trabalho de licenciatura viii

Autor: Pinto Jorge Mabunda

Autor: Pinto Jorge Mabunda

Autor: Pinto Jorge Mabunda

Autor: Pinto Jorge Mabunda

Autor: Pinto Jorge Mabunda

Autor: Pinto Jorge Mabunda

Fig. 1: Ciclo da Podrido Negra das Cruciferas (Fonte: Vicente; 2004)

Autor: Pinto Jorge Mabunda

Autor: Pinto Jorge Mabunda

Autor: Pinto Jorge Mabunda

3.2.2. Severidade de sintomas

Autor: Pinto Jorge Mabunda

Dias apos inoculacao

Fig. 3: Severidade de Podrido Negra

Tratamento Fungicidas da semente 1 1 25.2333Aa* 2 18.9667Ba

Fig. 5: rea abaixo da curva de doena com base na incidncia

Autor: Pinto Jorge Mabunda

Fig. 6: rea abaixo da curva de doena com base na severidade externa

Autor: Pinto Jorge Mabunda

Mdias 15.3352 14.7917 14.5000 13.1667

Autor: Pinto Jorge Mabunda

Autor: Pinto Jorge Mabunda

VI. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

Autor: Pinto Jorge Mabunda

Autor: Pinto Jorge Mabunda

No deixe de citar a fonte. Diga no ao plgio. Ricardo Schtz, 2009.

Autor: Pinto Jorge Mabunda

ANEXOS (Cf no outro documento em anexo)

Autor: Pinto Jorge Mabunda

Autor: Pinto Jorge Mabunda

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