BIOCHIMIE Medicina Dentara

Luciana Dobjanschi

I. Introducere Scopul principal al biochimiei de astzi este s determine cum interacioneaz grupele de molecule nevii din organismele vii pentru a constitui, menine i perpetua starea vie. Biochimia este o tiin foarte tnr. Pn acum cteva zeci de ani puine universiti o recunoteau ca tiin n toate drepturile ei. Exist dou izvoare distincte n genealogia biochimiei actuale. Unul provine din medicin i fiziologie i este rezultatul unor vechi preocupri de a cunoate compoziia chimic a sngelui, a urinii, i a esuturilor, precum i modificrile acestora n stare normal i patologic. Cellalt deriv din chimia organic, din vechi studii asupra compuilor organici naturali. Mult vreme, biochimia a fost privit pur i simplu, fie ca o ramur a fiziologiei, fie ca o ramur a chimiei. Pn la nceputul ultimului sfert de secol, ea nu a fost o tiin bine conturat, de sine stttoare, cu o solid metodologie experimental i cu posibilitatea de aprofundare a fenomenelor biologice. Dou descoperiri mai nsemnate au contribuit la schimbarea situaiei. Una a fost recunoterea sistemelor multienzimatice ca uniti catalitice pentru majoritatea cilor metabolice i dezvoltarea unei ipoteze unitare pentru transferul de energie n celula vie. Cealalt, a avut o inflen mult mai adnc i mai puternic, a fost recunoaterea faptului c ereditatea, unul din aspectele cele mai importante ale biologiei, are o baz real, molecular. Biochimia de astzi face investigaii spectaculoase ntr-o serie de ramuri fundamentale ale biologiei diferenierea celulelor i a organismelor, originea vieii i evoluia, comportamentul i memoria, patologia uman cercetri ce au demonstrat c aceste probleme fundamentale pot fi eficient abordate prin metode biochimice. ntr-adevr, succesul biochimiei n explicarea multor procese celulare a fost att de mare nct muli oameni de tiin au ajuns la concluzia c biologia este chimie. Unii biologi nu accept acest punct de vedere, ei susin c esena sau caracterul complex al organismelor vii nu poate fi redus, acum i niciodat, la nivelul moleculelor sau al interaciilor moleculare. Astzi este probabil mai logic s presupunem, ca o filozofie curent, c toate fenomenele biologice au n cele din urm o baz molecular i s abandonm aceast idee numai atunci cnd nu va mai fi util pentru proiectarea experimentelor cheie sau pentru explicarea datelor experimentale. Nu trebuie totui s privim biologia numai ca pe o ramur a chimiei clasice, cum este chimia organic, chimia fizic sau chimia 3

Luciana Dobjanschi

anorganic. Dac biologia este chimie, ea este un fel de suprachimie care include, dar n acelai timp depete chimia clasic. Aceasta deoarece moleculele din organismele vii nu numai c se supun principiilor fizice i chimice obinuite, care guverneaz comportarea tuturor moleculelor, dar interacioneaz i ntre ele conform altui grup de principii pe care l vom numi logica molecular a strii vii. Aceste principii nu includ n mod necesar fore sau legi fizice noi, nedescoperite nc. Mai curnd ele trebuie privite ca un grup de reguli fundamentale care guverneaz natura, funcia i interaciile tipurilor specifice de molecule din organismele vii, proprieti ce confer acestora capacitatea de a se autoorganiza i autoreplica. Pn n prezent nu au fost identificate nc toate principiile cuprinse n logica molecular a strii vii, iar unele dintre ele sunt vag nelese. De fapt, este probabil mult mai potrivit s considerm aceste principii ca axiome, deoarece unele dintre ele sunt intuitive i nu pot fi demonstrate nc. Biochimia studiaz procesele chimice care condiioneaz viaa i structurile ce i corespund. Biochimia apare i dezvolt ca tiin de grani ntre chimie i biologie, fr a se putea realiza ns o demarcaie net ntre cele dou. nceputurile Biochimiei ca tiin dateaz din sec.XVIII, dar empiric unele procese biochimice se cunosc cu mult timp nainte. Contibuii din domeniul chimiei, biologiei i medicinei se afl ntr-o relaie de reciprocitate cu dezvoltarea biochimiei. Astfel a aprut biochimia modern care studiaz procesele biochimice care se desfoar la nivel celular i molecular. n ceea ce privete profesia de farmacist, Biochimia este o disciplin indispensabil, deoarece ea ne ofer bazele moleculare pentru studiul medicamentului n ceea ce privete aciunea principal, efectele secundare, biotransformarea medicamentului i toxicitatea sa. Deasemenea n terapie sunt cunoscute un numr mare de produi biologici cum ar fi: vitaminele, hormonii, enzimele, aminoacizii, glucidele, compuii purinici i pirimidinici precum i derivaii lor de sintez. Prin inginerie genetic se obin : hormoni, enzime, anticorpi, inetrferon, antitripsina. Deci, se poate concluziona c Biochimia studiaz totalitatea proceselor biochimice din organism (procese catabolice i anabolice), precum i procesele de biotransformare a medicamentelor ajunse n organism.

II. Compoziia chimic a organismului uman 1. Compoziia elementar a organismului uman Au fost identificate un numr de peste 60 de elemente care intr n compoziia chimic a organismului uman. Acestea au fost clasificate n funcie de proporia n care se gasesc n organism. Dintre acestea majoritatea se gsesc n urme. Astfel ele au fost clasificate n: macroelemente, oligoelemente i microelemente. Repartiia elementelor n organismul uman. Element carbon oxigen hidrogen azot calciu fosfor Procent ( %) 50 20 10 8,5 4 1 Element sulf sodiu clor magneziu fier iod Procent (%) 0,8 0,4 0,4 0,1 0,01 0,00005

Dintre acestea primele patru ( C,O, H i N) reprezint peste 95% i sunt considerate macroelemente. Ele sunt principalele bioelemente ale majoritii biomoleculelor datorit tendinei lor mrite de a forma legturi covalente. Oligoelementele se gsesc n proporie mai mic n organism i la fel ca i macroelementele intr n structura biomoleculelor. Microelementele se gsesc n urme, dar cu toate astea ele au un rol esenial pentru via. 2. Compoziia fundamental a organismului uman Bioelementele enumerate mai sus se gsesc n organism grupate n categorii de componeni i anume: componeni organici i componeni minerali. Componenii organici care intr n compoziia organismului uman sunt: proteinele, glucidele, lipidele i acizii nucleici. Aceti compui sunt molecule complexe, care sunt alctuite din molecule simple. Astfel, proteinele se formeaz prin policondensarea aminoacizilor, glucidele sunt formate din monozaharide, lipidele sunt formate din acizi grai i ali componeni, iar acizii nucleici sunt formai din ribonucleotide i dezoxiribonucleotide.

. Principalele biomolecule din organismul uman 5

Luciana Dobjanschi

Biomolecula ADN ARN proteine glucide lipide

Uniti strucurale dezoxiribonucleotide ribonucleotide aminoacizi monozaharide Acizi grai componeni

Funcii Material genetic Model pentru sinteza proteinelor Funcii multiple Rezerv de energie ali Funcii multiple

Componenii minerali prezeni n organismul uman sunt apa i electroliii. Apa este constituientul major al tuturor organismelor vii. Organismul uman conine ntre 58 i 66% ap. O influen remarcabil asupra coninutului de ap al organismului o are vrsta. Coninutul de ap variaz i n funcie de sex, astfel femeile au un coninut de ap mai redus n comparaie cu brbaii. Apa din organism este repartizat n vasele sanguine i limfatice, spaiile intercelulare i celule nsi. Apa din organism se gsete repartizat n dou compartimente i anume: compartimentul extracelular, care reprezint aproximativ 50% din greutatea corpului i compartimentul intracelular, care reprezint aproximativ 20% din greutatea corporal.

Electroliii sunt reprezentai de cationi i anioni. Ei ndeplinesc n organism rol fizico- chimic, structural i catalitic. Distribuia cationilor n compartimentele intra i extracelulare este diferit.

Distribuia cationilor intra- i extracelular n mEg/l. 7

Luciana Dobjanschi

Cationi Na+ K+ Ca+2 Mg+2

intracelular 10 150 2 15

extracelular 145 5 2 2

O clas diferit de biocompui sunt vitaminele care sunt indispensabile pentru funciile lor biologice, dar pe care organismul nu le poate sintetiza.Ele reprezint componenii nutritivi eseniali. Hormonii sunt o alt clas de biomolecule cu rol major n procesele endocrine, care au loc n organism.

III. Nucleotide i structura covalent a acizilor nucleici Acidul dezoxiribonucleic (ADN) i ribonucleic (ARN) sunt macromolecule tip lan, care au funcia de a depozita i transmite informaia genetic. Acetia sunt componente majore n toate celulele, reprezentnd 5-15% din masa uscat a acestora. Acizii nucleici se gsesc i n virusuri, care sunt complexe infecioase protein-acid nucleic, capabile s se autoreplice n celula gazd. Dei denumirea acizilor nucleici vine de la faptul c ADN a fost izolat prima dat din nucleii celulari, ei se gsesc totui i n alte compartimente ale celulei. La fel cum aminoacizii sunt elementele constitutive ale proteinelor, aa nucleotidele sunt componenii de baz a acizilor nucleici. Structura general a nucleotidelor Unitile monomere ale ADN se numesc dezoxiribonucleotide, iar cele ale ARN se numesc ribonucleotide. Nucleotidele sunt formate din 3 componente caracteristice i anume: o baz azotat, o pentoz i molecul de acid fosforic. Bazele azotate care intr n structura nucleotidelor sunt de dou tipuri: baze purinice i baze pirimidinice. Bazele purinice prezint un nucleu de baz numit purina, de la care deriv cele dou baze purinice: adenina i guanina.

N N

N N H bazpurinic O

NH2 N N
adenina

N N H

N N

N N H

H 2N
guanina

Bazele pirimidinice prezint un nucleu de baz numit pirimidina, de la care deriv 3 baze pirimidinice, care int n structura acizilo nucleici, i anume: citozina, uracilul i timina. 9

Luciana Dobjanschi

N N bazpirimidinic O
H N N H
uracilul

NH2 N O N H
citozina

O H O N N H
timina

CH3

Pe lng bazele obinuite, descrise mai sus, n acizii nucleici se mai gsesc n cantiti mici i alte baze, numite baze rare sau minore. A doua component care intr n structura nucleotidei este reprezentat de pentoz. Aceasta poate s fie D - riboza sau 2 dezoxi D riboza.

H O

H C 2 H

O HH

H OH

H O

H C 2 H

H O HH

OH

OH OH
D riboza

OH H
2 dezoxi D riboza

Prin ataarea unei pentoze la baza azotat rezult o nucleozid, care n funcie de natura pentozei poate s fie ribonucleozid sau dezoxiribonucleozid.

10

N H2 N N H2 C H N N O H H H OH H
2 dezoxiadenozina

N H2 N N H2 C H N N O H H H OH OH
adenozina

HO

HO

Prin ataarea unei molecule de acid fosforic la structura unei nucleozide se formeaz un nucleotid.

NH 2 N OH H O P O O OH P O O OH P O O N H 2C H N N O HH H OH H AMP ADP ATP

Componentele majore ale ADN sunt 4 dezoxiribonucleotide, care se deosebesc ntre ele prin baza azotat, care le d i numele. Cele 4 baze specifice dezoxiribonucleotidelor din ADN sunt: adenina i guanina (baze purinice) i citozina i timina 11

Luciana Dobjanschi

(baze pirimidinice). Similar, pentru ribonucleotide, care sunt componente fundamentale pentru acizii ribonucletidici (ARN), bazele azotate care intr n compoziia lor sunt: adenina i guanina (baze purinice), citozina i uracilul (baze pirimidinice). Deci, timina se gsete numai n ADN, nu i n ARN, iar uracilul se gsete numai n ARN i nu i n ADN. O alt diferen ntre compziiile celor dou tipuri de acizi nucleici este dat de pentoza din structura nucleotidului: - dezoxiribonucleotidele conin: 2 dezoxi D riboza - ribonucleotidele conin: D riboza.

O H H O P O H C 2 O H H O H b a z a a z o t a t

O H H
dezoxiribonucleotid

O H H O P O H C 2 O H H O H b a z a a z o t a t

O H O H
ribonucleotid Nucleozidtrifosfaii prezint o serie de funcii importante. ATP este un transportor de grupri fosfat i pirofosfat n cteva recii enzimatice implicate n transferal energiei chimice. ADP ul rezultat prin defosforilarea ATP ului este refosforilat la ATP n procesul respiraiei. Sistemul ATP ADP este sistemul principal pentru transferul gruprilor fosfat n celul, dar i ceilali nucleozidtrifosfai, i anume: GTP, UTP i CTP au rolul de a canaliza energia chimic pe anumite biosinteze specifice. 12

A doua funcie major a NTP i NDP este cea de transportori de energie, energie pe care o nmagazineaz sub form de legturi macroergice. NTP i d NTP sunt precursori bogai n energie n procesul de biosintez enzimatic a ADN i ARN. n acest proces NTP i d- NTP i pierd gruprile pirofosfat terminale, transformndu se n resturi de nucleozid monofosfai, care sunt elemente constitutive ale acizilor nucleici. O alt funcie major a NTP i NDP este cea de transportori energizani de tip coenzim ai anumitor elemente constitutive. De exemplu: UDP este un transportor pentru glucide n procesul de biosintez a polizaharidelor. ADN ul este format din lanuri de dezoxiribonucleotide legate covalent, iar ARN ul este compus din lanuri de ribonucleotide. Acizii dezoxiribonucleici i acizii ribonucleici prezint o serie de propriti fizice i chimice commune, ntruct n ambele molecule, nucleotidele succesive sunt legate covalent prin puni fosfodiesterice ntre gruparea 5 hidroxil a unei nucleotide i gruparea 3 hidroxil a urmtoarei nucleotide. Astfel catena principal a ADN i ARN const n grupri fosforice alternnd cu radicali de pentoz, legtura fosfodiesteric asigurnd continuitatea covalent. Bazele purinice i pirimidinice din unitile nucleotidice nu fac parte din catena principal, ele formeaz catene distincte n acelai mod n care radicalii R ai aminoacizilor sunt catenele laterale distinctive ale polipeptidelor. Acidul dezoxiribonucleic (ADN) a fost izolat pentru prima dat din celulele i sperma de somon de ctre Friedrich Miesscher (1869). El a denumit produsul izolat nuclein, dat fiind prezena lui n nucleii celulari. De atunci au trecut peste 70 de ani de cercetri pn la definirea complet a elementelor constitutive i a structurii catenei principale a acizilor nucleici. Moleculele de ADN din diferite celule i virusuri se deosebesc prin raportul dintre cele 4 tipuri de monomeri nucleotidici, prin secvena nucleotidelor i prin masa molecular. Pe lng cele 4 tipuri de baze majore, n anumite tipuri de ADN, n deosebi de origine viral se gsesc cantiti mici de derivai metilai ai acestor baze. Acizii dezoxiribonucleici izolai din diferite organisme i virusuri au dou lanuri dispuse ntr-un aranjament complementar dublu elicoidal. n majoritatea celulelor moleculele de ADN sunt att de mari, nct este greu s le izolm sub form intact. n celulele procariote, care conin un singur cromozom, ntreaga cantitate de ADN este prezent ca unic macromolecul, o singur elice dubl, cu masa molecular de peste 2 x 109. n celulele eucariote, ce conin 13

Luciana Dobjanschi

mai muli cromozomi, exist mai multe molecule de ADN. n bacterii, molecula de ADN care reprezint 1% din greutatea celulei se afl zona nuclear; de obicei ea este ataat printr-un singur punct de un pliu al membranei celulare, numit mezozom. Uneori, n citoplasma celulelor bacteriene se gsesc molecule mici de ADN extramitocondrial; aceste molecule de ADN, care poart doar cteva gene, se numesc plasmide sau epizomi, n funcie de relaia lor genetic cu ADN -ul cromozomial. n celulele eucariote diploide, aproape ntreaga cantitate de ADN se gsete n nucleu, combinat prin legturi ionice cu proteine bazice, numite histone. Pe lng ADN ul din nucleu n celulele eucariote diploide mai gsim cantiti foarte mici de ADN n mitocondrii, care difer de ADN ul nuclear prin bazele coninute i prin masa molecular. Acizii ribonucleici Cele 3 tipuri majore de acizi ribonucleici din celule sunt: ARNm, ARNr i ARNt. Toate cele 3 tipuri de ARN sunt lanuri monocatenare poliribonucleotidice, dar se deosebesc ntre ele prin domenii caracteristice de mase moleculare i de coeficieni de sedimentare. Fiecare dintre cele 3 tipuri majore de ARN exist n forme moleculare multiple. ARNr exist n cel puin 3 forme majore, ARNt exist n 60 de forme, iar ARNm exist n sute i poate mii de forme distincte. Majoritatea celulelor conin de 2- 8 ori mai mult ARN dect ADN. n celulele bacteriene, cea mai mare parte a ARN se afl n citoplasm, dar o anumit cantitate este ataat necovalent de ADN, pe msur ce se formeaz n procesul de transcripie. n celulele eucariote diferitele forme de ARN au o distribuie intracelular distinct. ARNm conine doar cele 4 baze majore. El se sintetizeaz n nucleu n procesul de transcripie, prin care secvena bazelor dintr-un lan de ADN cromozomial este copiat enzimatic n lanul de ARNm. O anumit cantitate de ARNm se sintetizeaz i n mitocondrii. Secvena bazelor din lanul de ARNm este complementar celei din lanul de ADN ce se transcrie. Dup transcripie, ARNm trece n citoplasm i apoi la ribozomi, unde servete ca matri pentru ordonarea secvenial a aminoacizilor n procesul de biosintez a proteinelor. ARN ul mitocondrial reprezint doar o mic parte din ARN ul total din celul, dar el se afl n foarte multe forme distincte, care se deosebesc prin masa molecular i secvena bazelor azotate. Fiecare din miile de proteine diferite sintetizate n celula este codificat de ctre un ARNm. 14

ARNm din celulele eucariote se caracterizeaz prin prezena la captul 3 terminal a unei secvene lungi de cca 200 de radicali adenilici, care pare s aib un rol n prelucrarea sau transportul ARNm de la nucleu la ribozomi. ARNt sunt molecule relativ mici, care funcioneaz ca transportori specifici ai cte unei molecule de aminoacizi n procesul de biosintez a proteinelor pe ribozomi. Ei au o mas molecular de 23000 28000 i un coeficient de sedimentare de 4S. Ei conin 75 90 de nucleotide. Fiecare dintre cei 20 de aminoacizi din proteine are cel puin un ARNt coerspunztor, iar unii au chiar mai muli ARNt. De exemplu: n celulele de Escherichia coli exist 5 ARNt diferi pentru transferul leucinei. Mai mult, n celulele eucariote unui anumit aminoacid i corespund ARNt mitocondriali diferii de ARNt citoplasmatici. Moleculele de ARNt prezint cteva trsturi comune. Toate tipurile de ARNt au la un capt al lanului polinucleotidic un acid guanilic terminal, iar la cellalt capt secvena terminal citidil citidil adenil (CCA). Gruparea 5 hidroxil a acidului adenilic terminal este legat de gruparea 3 hidroxil a acidului citidilic precedent print-o punte fosfodiesteric. Gruaprea hidroxil liber din acidul adenilic terminal este acilat enzimatic cu -aminoacidul specific, formnd aminoacil ARNt. Acest aminoacid este transferat enzimatic la captul lanului polipeptidic n curs de formare pe suprafaa ribozomilor, n procesul de biosintez proteic. ARNr reprezint 65% din masa ribozomilor. El se poate obine din ribozomii de E.coli ca molecule lineare, monocatenare, prezente n 3 forme caracteristice, cu coeficienii de sedimentare de 23S, 16S i respectiv 5S. Aceste 3 forme se deosebesc prin secvena i raportul bazelor. n celulele eucariote, care au ribozomi mai mari dect celulele procariote, exist 4 tipuri de ARNr: 5S, 7S, 18S i 28S. Dei ARNr reprezint o mare parte din ARN celular total, funcia lui n ribozomi nu este nc, bine elucidat. Implicaiile terapeutice ale nucleotidice Unele nucleotide naturale, precum i derivaii lor obinui prin sintez pot fi utilizate n terapie, fiind utilizate n: chimioterapia bolii maligne, tratamentul hiperuricemiei i gutei, n afeciuni virale, n hipertiroidism sau ca ageni imunosupresori, hipogliceminai, antifungici i antiparazitari. Mecanismul lor de aciune este variat: - nhib enzimele implicate n biosinteza acizilor nucleici, blocnd procesul - nhib enzimele care catalizeaz conversia xantinei n acid uric. 15

Luciana Dobjanschi

IV.Proteine Proteinele sunt compui macromoleculari, respectiv biopolimeri rezultai din policondensarea aminoacizilor legai ntre ei prin legturi peptidice. Diferena ntre proteine i polipeptide se face pe baza dimensiunii moleculare, limita de delimitare fiind stabilit arbitrar la o greutate molecular de 8 x 10 Kd. Lanurile de peptide alctuite din sub 10 resturi de aminoacizi se numesc oligopeptide, iar cele de pn la 50 60 de resturi de aminoacizi se numesc polipeptide. Proteinele sunt formate din sute de resturi de aminoacizi, iar masa lor molecular poate urca la sute de mii de daltoni. IV.1. Aminoacizii Aminoacizii sunt unitile structurale de baz din molecula proteinelor. Aminoacizii conin dou grupri funcionale comune tuturor aminoacizilor: o grupare aminic i o grupare carboxilic. Capacitatea unui aminoacid de a se condensa cu ali aminoacizi pentru a forma peptide este dependent de propritile chimice ale acestor dou grupri funcionale. Cea mai important proprietate a aminoacizilor este aceea de a servi ca subuniti monomerice pentru proteine, dar ei prezint i alte roluri importante pentru celul. De exemplu, glutationul este o tripeptid cu funcii importante, alte peptide mici au funcii de hormoni, sau n unele organisme au rol de antibiotice. Acidul glutamic are rol de neuro transmitor. Aminoacizii sunt precursorii unei variti de biomolecule (de exemplu: hitidina pentru histamin). Unii aminacizi sunt metabolizai i utilizai pentru producerea de glucoz (gluconeogenez). Deoarece nu exist rezerve de aminoacizi, cu excepia celor implicai n structura proteinelor, atunci cnd gluconeogeneza are nevoie de aminoacizi, acetia sunt eliberai prin decompunerea proteinelor. Structura aminoacizilor n proteinele tuturor speciilor procariote i eucariote a fost identificat un set de cca 20 de aminoacizi, marea majoritate aprinnd seriei sterice L. Toi aminoacizii, cu excepia prolinei, prezint aceeai strucutur general n sensul c atomul de carbon este legat de o grupare COOH, de una NH2 i de un rest R rspunztor de proprietile diferite ale diferiilor aminoacizi. Formula general a unui aminoacid:

16

CH COO-

NH3+ n toi - aminoacizii, cu excepia glicinei, carbonul este optic activ. Izomerii posibili aparin seriei D sau L. S-a constatat c toi izomerii existeni n mod natural n constituia proteinelor aparin seriei sterice L. Sarcinile aprute n formulele aminoacizilor sunt cele care apar la pH 6-7. Ca urmare, la pH 6-7, un aminoacid poate s aib caracter acid sau bazic. Clasificare aminoacizilor Din punct de vedere structural aminoacizii se pot clasifica astfel: - aminoacizi alifatici
HC 2 COOH

H3C CH

COOH

NH2 glicina ( glicocol, Gly)

NH 2 alanina (Ala)

H C H C H C C O O H 3 H C H 2 3 N

H C H CC H H C O O H 3 2 C C H 3
valina (val)
H H CC H C H C O O H 3 2 C H C H 2 3 N Izoleucina (ile)

N H 2
leucina (leu)

aminoacizi hidroxilai

17

Luciana Dobjanschi

H H O C 2

C H C O O H N H 2

H C H C C H C O O H 3 O H N H 2

serina (ser) - aminoacizi cu sulf H S C H H C 2 C O O H

treonina (thr)

N H 2
H CS C H H HC 3 O O H 2 C 2 C N H 2

cisteina (cys) aminoacizii dicarboxilici i amidele lor

metionina (met)

H O O C C H H C O O H 2 C
acidaspartic(asp) H NC OC H HC O O H 2 2 C

N H 2

N H 2
asparagina ( asn)

H O O C C HC H H O O H 2 C 2 C N H 2
acid glutamic (glu)

H N C O C H H HC O O H 2 C 2 C 2 N H 2
glutamina (gln)

18

aminoacizi cu dou grupri bazice

H N C H H H H HC O O H 2 2C 2 C 2C 2 C N H 2
lisina (lys)
H N CN H C H H H H C O O H 2 2C 2 C 2 C N H N H 2

arginina (arg)
C H 2 N N H C H C O O H N H 2

histidina (his) aminoacizi aromatici

C H H C O O H 2 C N H 2
fenilalanina (phe)

H O

C H HC O O H 2 C N H 2

tirozina (tyr)

19

Luciana Dobjanschi

C H O O H H C 2 C N H triptofan (trp) N H 2

COOH N H prolina (pro)

n funcie de polaritatea radicalului, aminoacizii se clasific, astfel: - aminoacizi neutri: Gly,Ala, Ser, Cys, Thr, Asn, Gln care au radicalul polar, dar lipsit de sarcin electric la pH=7. - aminoacizi hidrofili, cu caracter acid: Asp, Glu, Tyr care sunt aminoacizi ncrcai negative la pH fiziologic. - aminoacizi hidrofili cu caracter bazic: Arg, Lys, His aminoacizi care la pH fiziologic sunt ncrcai cu sarcin pozitiv. - aminoacizi hidrofobi: Val, Leu, Ile, Met, Pro, Phe, Trp. Exist proteine care pe lng aceti 20 de aminoacizi eseniali sau de baz, conin i ali aminoacizi. Acetia pot s ia natere prin modificri ulterioare sintezei lanului polipeptidic, determinnd astfel caracteristici noi ale activitii biologice. Exemplu: - acetilarea captului N-terminal, crete rezistena la degradare - prin hidroxilarea resturilor de prolin i lizin se formreaz: hidroxiprolina i hidroxilizina, cu rol n stabilizarea fibrei de colagen - carboxiglutamatul are legtur cu aciunea vitaminei K - fosforilarea resturilor de: Ser, Thr, Tzr, se folosete ca mecanism de reglare a multor procese celulare. o Ali aminoacizi modificai se ntlnesc n structura unor peptide biologic active. Pe lng aminoacizii prezeni n proteine, exist aminoacizi, care liberi sau n combinaii ndeplinesc funcii importante n metabolism. De exemplu: - alanina, din stuctura coenzimei A i a unor peptide - homoserina i homocisteina sunt intermediari metabolici - citrulina i ornitina apar n biosinteza ureei 20

- acidul - aminobutiric (GABA) este un mediator chimic nervos - 3,4 dioxifenilalanina (DOPA) este precursor al adrenalinei - acidul p- aminobenzoic intr n structura acidului folic. Proprietile aminoacizilor Aminoacizii sunt substane solide, cristaline i au puncte de topire sau de descompunere peste 2000C. Ei sunt mult mai solubili n ap dect n solveni nepolari. n reeaua cristalin, moleculele de aminoacizi sunt atrase prin fore electrostatice. Dac aminoacizii ar cristaliza ntr-o form neionic, datorit atraciei Van der Waals, atunci ar avea puncte de topire mult mai sczute. Toate acestea duc la concluzia c aminoacizii se gsesc n soluii apoase i n reeaua cristalin sub form de ioni dipolari sau amfioni.
H N R C O O H 2
O O H NR C 3 +

Datorit caracterului lor amfoter, aminoacizii formeaz sruri att cu acizii ct i cu bazele.
+ + O O H H NR C +

H NR C O O H 3
H N H O + C O O R 2 2

O O H N RC H O + 2 3

Deci, n mediu acid, aminoacizii se comport ca baze, iar n mediu bazic se comport ca acizi. Datorit faptului c aminoacizii posed grupri carboxilice i grupri bazice, ei prezint proprieti datorate gruprilor carboxil i proprieti datorate gruprii aminice precum i proprieti determinate de ambele grupri.

21

Luciana Dobjanschi

IV.3. PROTEINE Proteinele i funciile lor biologice. Proteinele sunt cele mai rspndite molecule organice din celul. Masa molecular a proteinelor este foarte mare, dar prin hidroliz acid toate se transform n compui organici simpli, i anume L-aminoacizi. Proteinele se mpart, n funcie de compoziia lor n dou clase principale: - proteine simple - proteine conjugate Proteinele simple sunt acelea care prin hidroliz formeaz numai aminoacizi i nici un alt compus organic sau anorganic. Proteinele conjugate sunt acelea care prin hidroliz pun n libertate pe lng aminoacizi i ali compui organici sau anorganici. Partea conjugat a proteinei, care nu este aminoacid se numete grupare prostetic. n funcie de natura gruprii prostetice, proteinele conjugate se mpart n: Tipul proteinei care se gsesc - nucleoproteine mozaicului tutunului - lipoproteine lipoproteinele plasmatice - glicoproteine globuline Gruparea prostetic acizi nucleici: - ADN - ARN fosfolipide lipide membranare glucide: - hexozamine - galactoz - manoza - acid sialic fosfai esterificai cu radicali ai sernei hem Locul n ribozomi virusul

- fosfoproteine - hemoproteine hemoglobina citocromul C - flavoproteine dehidrogenaza - metaloproteine 22

cazeina

FAD metale

succinat feritina

Masa molecular a proteinelor se poate determina prin metode fizice i poate fi cuprins ntre 5000 i cteva milioane. Exemplu: - insulina: greutatea molecular de 5700 daltoni - virusul mozaicului tutunului: greutatea molecular de 40000000 de daltoni. Diversitatea funcional a proteinelor Proteinele ndeplinesc n organism multiple funcii, dintre care amintim urmtoarele: 1. Enzimele sunt proteine ce catalizeaz diverse reacii biochimice. Exemplu: hexokinaza, lactat dehidrogenaza 2. Proteinele de rezerv Exemplu: - ovalbumina proteina din albuul de ou - cazeina proteina din lapte - feritina proteina de depozitare a Fe n splin - zeina proteina din semine de porumb - gliadina proteina din gru 3. Proteine de transport Exemplu: - hemoglobina proteina ce transport oxigenul n sngele vertebratelor - hemocianina proteina ce transport oxigenul din sngele nevertebratelor - mioglobina proteina ce transport oxigenul n celulele musculare - albumina seric proteina ce transport acizii grai n snge - 1-lipoproteina proteina ce transport lipidele n snge - ceruloplasmina proteina ce transport cuprul n snge Aceste proteine sunt capabile s lege i s transporte pe calea sngelui anumite tipuri de molecule. 4. Proteinele contractile sunt proteine cu rol esenial n fenomenul de contracie i n micare. Exemplu: - actina filamentele subiri din miofibrile - miozina filamentele groase din miofibrile - dineina proteinele din cili i flageli.

23

Luciana Dobjanschi

n muchi, actina i miozina sunt aezate n iruri paralele, alunecnd unele pe lng altele n timpul contraciei. 5. Proteinele cu rol de protecie n sngele vertebratelor Exemplu: - anticorpii formeaz compleci cu proteinele strine - sistemul complement formeaz complexe cu anumite sisteme antigen-anticorp. - Fibrinogenul precursor al fibrinei n coagularea sngelui - Trombina particip la procesul de coagulare. Unele proteine au rol de aprare sau de protecie. Proteinele sanguine (trombina i fibrinogenul) particip la coagularea sngelui oprind astfel pierderile de snge n sistemul vascular al vertebratelor. Cele mai importante proteine cu rol de aprare a organismului sunt anticorpii sau globulinele imune, care se combin cu proteinele strine sau cu alte substane strine intrate ntmpltor n organism, neutralizndu-le. 6. Toxinele Exemplu: - toxina din Clostridium botulinum - toxina difteriei - veninul de arpe - ricinul - gossipina Toxinele sunt substane foarte toxice pentru organismul animalelor superioare, chiar i n cantiti foarte mici. 7. Hormoni Exist proteine care funcionez ca i hormoni. Exemplu: - insulina este secretat de anumite celule specializate din pancreas i regleaz metabolismul glucozei. - Hormonul adrenocorticotrop: hormonul de cetere sau somatotropina este un hormon al glandei hipofizare anterioare, care regleaz sinteza corticosteroizilor. 8. Proteinele structurale Exist o clas de proteine care servesc ca i elemente structurale. Exemplu: - proteinele din nveliul viral - glicoproteinele - - keratina - sclerotina 24

fibroina colagenul elastina mucoproteinele.

Structura proteinelor Lanurile polipeptidice ale proteinelor se pliaz n diferite moduri, att n cadrul propriului lan, dar i ntre lanurile vecine, adic intracatenar i intercatenar. Acest mod de pliere este esenial pentru activitatea biologic a proteinelor i aceast organizare complicat este cea care trebuie conservat pe parcursul procedurilor implicate n purificarea proteinelor. Dei mult timp s-a considerat c modurile de pliere ale lanurilor polipeptidice sunt determinate numai de secvena aminoacizilor din lan, astzi s-a stabilit c proteinele avnd aceeai secven a aminoacizilor pot exista n forme diferite de mpachetare i c astfel de plieri pot fi influenate de prezena altor proteine. Structura proteinelor a fost imaginat ca avnd 4 nivele de organizare, i anume: structura primar, secundar, teriar i cuaternar.

25

Luciana Dobjanschi

Structurile proteice sunt stabilizate de dou tipuri de legturi puternice: legtura peptidic i puntea disulfidic, precum i de trei tipuri de legturi slabe. Legtura disulfidic se stabilete ntre dou resturi de cistein, aparinnd sau nu aceluiai lan polipeptidic i este la fel de rezistent ca i legtura peptidic la aciunea agenilor denaturani uzuali ai proteinelor. Aceast legtur poate fi distrus prin oxidare cu acid performic sau prin reducere cu betamercatoetanol. Legturile disulfidice sunt prezente de obicei n proteinele extracelulare i aproape c lipsesc din cele intracelulare. Legturile slabe sunt reprezentate n general de legturile necovalente, i anume: legturi de hidrogen, ionice i hidrofobe. Legturile de hidrogen se stabilesc ntre grupri CO i NH aparinnd unitilor peptidice diferite, aflate n poziie adecvat.

26

R C C H N O H l e g t u r d eh i d r o g e n H O

N C H C R Forele electrostatice se formeaz prin atracia gruprilor cu sarcin opus ce aparin aminoacizilor ionizai. Exemplu: - ntre un aminoacid dicarboxilic i gruparea aminic a lizinei. Un rol semnificativ n meninerea structuri l au deasemeni interaciunile hidrofobe prin care radicalii nepolari ai aminoacizilor hidrofobi tind s se asocieze. Proteinele n stare natural au o structur tridimensional unic, ce se exprim prin conformaia, care i determin de astfel i funcia.
Structura primar n structura oricrei proteine sau peptide se distinge un element comun, reprezentat de axul covalent, care se formeaz prin repetarea gruprii peptidice i o parte a variabilei reprezentat de radicalii aminoacizilor constituieni.

. . . . . . . H N C H C O N H C H C O N H C H C O O H 2 R 1 R 2 R n

Structura primar este definit ca secvena resturilor de aminoacizi ce deriv din policondensarea lor prin legturi - peptidice. Cunoaterea structurii primare a proteinei const n stabilirea naturii radicalilor, n ordinea nlnuirii i localizarea eventualelor puni disulfidice i stabilirea tuturor conexiunilor dintr-un lan polipeptidic. Semnificaia structurii primare Prima protein a crei structur primar a fost identificat este insulina. S-a dovedit c structura primar a proteinelor este determinat

27

Luciana Dobjanschi

genetic i c proteinele din toate organismele sunt sintetizate printr-un mecanism comun. Structura secundar a proteinelor Structura secundar a proteinelor se refer la dispunerea spaial a resturilor de aminoacizi nvecinai n secvena liniar, ce poate fi ordonat sau dimpotriv cu puine neregulariti. Structura secundar prezint 2 modele, i anume: modelul -helix i foaie pliat. Modelul -helix Modelul -helix reprezint un tip de structur secundar ce presupune ca lanul s se nfoare strns pe o direcie spiralat, formnd un cilindru cu interiorul aproape plin, din care radicalii aminoacizilor apar nt-o dispunere helicoidal.

Ca sens de rsucire n proteine a fost identificat -helix pe dreapta. Stabilitatea -helixului este meninut prin legturi de H ce se formeaz ntre gruprile carbonil i aminice din lanul spiralat aflate fa n fa la o distan adecvat. La -helix fiecare aminoacid avanseaz spirala cu 1,5A0 la o rotire de 1000, pe fiecare spiral existnd 3,6 resturi, deci pasul spiralei este de 5,4A0. Aceste

28

dimensiuni arat formarea legturii de H ntre gruprile CO i NH din cadrul lanului polipeptidic. Exist unii aminoacizi care sunt nefavorabili structurii de helix. Acetia sunt aminoacizi ce stabilizeaz structura de -helix. Exemplu: - prolina poate s rup spirala. Aminoacizii cu resturi laterale voluminoase (arg, ile, lys, asp, glu) destabilizeaz helixul prin interferne fizice sau electrostatice. Coninutul de -helix n proteine cu structur spaial este variabil. Lungimea i repartizarea segmentelor de -helix depinde de distribuia resturilor favorabile sau destabilizatoare n lungul lanurilor. n mioglobin i hemoglobin apare ca motiv structural major, iar n altele lipsete chimotripsina. La majoritatea proteinelor se gsete ca helix singular pe distane scurte (40 A0), rar pe zone extinse de 1000A0. Dou sau cteva -helixuri se pot mpleti ca uviele unui nur, aa cum apar n proteinele fibroase: -keratina din pr, miozina, fibroina, care ndeplinesc un rol mecanic de formare a mnunchiurilor rezistente de fibre. Moelul sau foia pliat Structura de foaie pliat a fost studiat tot de Pauling i Corey, curnd dup -helix, de aceea au numit-o structura . Cele 2 modele difer n primul rnd prin faptul c lanul polipeptidic n conformaia este mai relaxat, fiind aproape complet extins. Distana axial ntre dou resturi succesive este de 3,5A0 fa de 1,5A0 n -helix, cu o periodicitate decorespunznd la cca 7A0. Lanurile polipeptidice sunt aezate n foi pliate, care sunt legate ntre ele prin legturi de hidrogen. Radicalii aminoacizilor se situeaz deasupra i dedesubtul planului foii. Dac sensul de desfurare a lanului n poriunile adiacente coincide, foaia este numit paralel. Aranjamentul alternativ n foaia antiparalel este favorabil, succesiunea gruprilor CO i NH fiind complementare.

29

Luciana Dobjanschi

Aminoacizi mici: gly, ala, avantajeaz foaia pliat, iar cei cu radical mare sau cu sarcin stnjenesc aranjamentul. Ca i modelul de -helix, structura se ntlnete n multe proteine globulare sau fibroase. Asocieri de lanuri paralele apar n fibroina (mtase) i antiparalele apar n -keratina. Un exemplu de protein fibrilar prezent la animlaele superioare este colagenul din esutul conjunctiv, fiind cea mai rspndit protein dintre proteinele vertebratelor superioare. Cu ct un animal este mai mare i mai greu, cu att proporia de colagen este mai mare. Fibrele de colagen sunt aranjate n moduri diferite, depinznd de sarcina biologic pe care o are de ndeplinit proteina. Structura teriar a proteinelor Structura teriar a proteinelor reprezint aranjamentul spaial general al moleculei, rezultat prin asocierea dintre diferite regiuni ale aceluiai lan, a cror structur secundar poate sau nu varia. Aranjamentul spaial al proteinelor s-a studiat cu raze X. Printre proteinele globulare ale cror structur teriar este binecunoscut sunt: mioglobina, hemoglobina, lizozomii, ribonucleaza, citocromul c, lactat dehidrogenaza. Reprezentantul clasic al structurii teriare este mioglobina. Mioglobina este o protein globular relativ mic, care conine un singur lan polipeptidic format din 153 resturi de aminoacizi, a cror secven nc nu se cunoate. Mioglobina conine o feroprotein, sau hem, grupare identic cu cea a hemoglobinei, fiind i ea capabil s se oxigeneze i s se deoxigeneze. Mioglobina se gsete n celulele muchilor scheletici i este deosebit de abundent la mamiferele acvatice, cum ar fi: balena, foca sau morsa, a cror muchi sunt att de bogai n mioglobin nct sunt colorai n brun nchis. Scheletul moleculei de mioglobin este format din opt segmente aproximativ drepte, unite prin poriuni curbate. Fiecare segment drept este un -helix, cel mai lung fiind constituit din 23 de aminoacizi, iar cel mai scurt este format din numai 7 aminoacizi i toi au sensul de rsucire spre dreapta. Aceste regiuni - helicoidale reprezint 70% din aminoacizii din molecul. Dei structura mioglobinei pare neregulat i asimetric, ea nu este deloc ntmpltoare. Toate moleculele de mioglobin au aceeai configuraie.

30

Alte aspecte structurale legate de structura mioglobinei sunt urmtoarele: 1. Molecula este foarte compact, n interiorul ei rmne spaiu pentru patru molecule de ap. 2. Toate gruprile R polare ale resturilor de aminoacizi sunt localizate pe suprafaa extern a moleculei i sunt hidratate. 3. Aproape toate gruprile R nepolare sau hidrofobe se afl n interiorul moleculei, ferite de expunerea la ap. 4. Resturile de prolin se gsesc numai n zonele de curbur, care conin, deasemenea aminoacizi care nu formeaz cu uurin helix, de exemplu: izoleucina i serina. 5. Conformaia de ansamblu a lanului polipeptidic este aparent aceeai la mioglobina tuturor speciilor speciilor studiate, dei ele difer oarecum n compoziia de aminoacizi. Astfel, resturile constante de secven pot fi implicate n determinarea poziiei curburilor i a direciei segmentelor drepte. Ribonucleaza, este o enzim pancreatic ce depolimerizeaz molecula de ARN i exemplific un model diferit de mpachetare tridimensional a lanului. Catena ei este format din 124 de aminoacizi i este organizat n proporie de 40% ca foaie pliat antiparalel, 15% n -helix, restul lanului gsindu-se sub form de bucle. n structura teriar forma general a moleculei amintete de cochilia unui melc, la a crei stabilitate contribuie i 4 puni disulfidice.

31

Luciana Dobjanschi

Structura cuaternar Structura cuaternar apare la proteinele alctuite din dou sau mai multe lanuri polipeptidice care se asociaz formnd o unitate de sine stttoare, cu form spaial bine definit i posednd o anumit activitate biologic. Structura cuaternar se refer la felul, numrul i aranjamentul lanurilor polipeptidice ncluznd i natura contactelor dintre ele. Cele mai multe proteine oligomer sunt formate dintr-un numr mic i par de lanuri, care se numesc subuniti sau protomeri. Subunitile identice sau diferite au fiecare structura sa spaial; ele se pot aeza succesiv pe direcie liniar, circular sau mai compact suprapuse n forme geometrice diferite. Aceste posibiliti de aranjare se refer la protomeri identici sau foarte puin diferii. Ansamblul prezint simetrie, suprafeele de contact sunt complementare, sugernd gradul nalt de specificitate al structurii cuaternare. Monomerii realizeaz interaciuni slabe: (legturi saline, legturi de hidrogen, fore Wan der Waals, legturi hidrofobe), proteina putnd astfel disocia reversibil. Lanurile izolate sunt lipsite de activitate, funcia fiind rezultatul ansamblului cu structur cuaternar. Exemple de proteine cu structur cuaternar: - creatin kinaza, lactat dehidrogenaza, glutamat dehidrogenaza, enzime, proteine neenzimatice: hemoglobina , imunoglobulina G. Alte exemple de proteine cu structur cuaternar sunt enzimele allosterice. Noiunea de structur cuaternar se poate extinde i la unele heteroproteine. Printre cele mai simple proteine oligomere este hemoglobina, care este format din 4 lanuri polipetidice. Hemoglobina conine 2 lanuri formate din 141 de resturi de aminoacizi i 2 lanuri formate din 146 de resturi de aminoacizi; fiecare dintre acestea avnd ataat printr-o legtur necovalent cte un radical hem. Molecula a fost studiat n forma sa oxigenat, care are o structur sferic, compact, cu dimensiuni de: 6,4/5,5/5,0mm. n hemoglobin, ntre cele 2 lanuri , ca i ntre cele dou lanuri exist foarte puine contacte, n schimb, numeroase grupri R fac legtura ntre perechile de lanuri care nu sunt asemenea.

32

Un inters deosebit l prezint aezarea pe fiecare subunitate a cte uneia dintre cele 4 grupri hem, care leag cele 4 molecule de oxigen. Aceste grupri hem, molecule plane, n care atomii de fier formeaz compleci de coordinare plan-ptrai, sunt destul de ndeprtate ntre ele i sunt situate la anumite ungliuri unele de altele. n molecula hemoglobinei rmne o cavitate cental, mrginit de grupri cu radical R polare.

33

Luciana Dobjanschi

Denaturarea proteinelor Denaturarea proteinelor reprezint perturbarea structurii lor native, nalt organizate, trecerea la o form ntmpltoare cu creterea entalpiei sistemului, astfel c activitatea biologic este compromis. Denaturarea proteinelor are loc sub aciunea unor ageni denaturani. Agenii denaturani sunt: temperatura, acizii, bazele, oxidanii, unele metale, ureea, guanidina, solvenii organici. Agenii denaturani acioneaz distrugnd legturile ce dau stabilitate structurii tridimensionale. Fenomenul de denaturare privete nivelele de structur secundar, teriar i cuaternar, meninute prin legturi slabe, fr afectarea structurii primare. Procesul de denaturare poate s fie pn la un punct reversibil. ns, dac agentul denaturant acioneaz mai energic, proteina se denatureaz ireversibil. n cazul unui proces reversibil, dup ndeprtarea agentului cauzant, proteina se renatureaz, redobndind structura nativ. Aceasta se explic prin dependena structurii spaiale de cea primar.

34

Proteinele denaturate i schimb proprietile fizice, cum ar fi: activitatea optic i vscozitatea. Deasemenea solubilitatea n ap scade producnd precipitarea lor. Acest fenomen de precipitare este exploatat n biochimia analitic la cercetarea proteinelor din lichidele biologice n scopul deproteinizrii. Alte aplicaii ale fenomenului de denaturare sunt: procedeele de purificare a proteinelor i operaia de sterilizare.

35

Luciana Dobjanschi

V. VITAMINE Vitaminele sunt biomolecule indispensabile vieuitoarelor pentru creterea, ntreinerea troficitii i funciei esuturilor. Organismul uman nu le poate sintetiza sau produce n cantiti insuficiente. Vitaminele sunt necesare organismului n cantiti mici de ordinul miligramelor sau mai puin, cu excepia vitaminei C care este necesar n cantiti de aproximativ 75 mg pe zi. Deci, vitaminele pot fi considerate factori eseniali. Carena unei vitamine genereaz stri patologice, cu manifestri specifice. Deficienele vitaminice reflect dezechilibru dintre aport i necesiti. Ele sunt cauzate: Primar : - prin lipsa de aport alimentar - de afeciuni digestive ce se repercut asupra absorbiei - datorit disbiozei pentru vitaminele ce sunt produse de flora intestinal, aceasta este afectat prin administrarea oral de antibiotice sau sulfamide. Secundar : - datorit cerinelor crescute ce apar n anumite stri. Necesarul pentru o vitamin sau alta depinde de: - vrst - de starea fiziologic, de exemplu: sarcina - de starea de sntate - efortul fizic - temperatura ambiant - administrarea unor medicamente. Strile careniale sunt numite avitaminoze (apar astzi la populaia malnutrit din rile subdezvoltate) i hipovitaminoze, cu manifestri policareniale. Unele vitamine au provitamine, care sunt compui nrudii structural, inactivi sau slab activi, pe care organismul i transfer n forma activ n forma activ de vitamin. Au mai fost identificai i ali compui numii antivitamine, care sunt capabili s-i diminuie sau s-i suprime activitatea unei anumite vitamine. Unele antivitamine au utilizri terapeutice, dar prezin dezavantajul de a induce simptome careniale. Clasificarea vitaminelor Exist o clasificare care are la baz criteriul solubilitii n ap sau solveni nepolari. Astfel vitaminele se mpart n: - vitamine hidrosolubile: B1, B2, B6, B12, PP, acid folic, C, biotina, acidul pantotenic. 36

vitamine liposolubile: A,D,E,K. Unii autori admit i o categorie de pseudovitamine care cuprind compui care au parial trsturi de vitamine (vitaminoide). De exemplu: - flavonoizii numii i vitamina P - acizii grai eseniali sau vitamina F - mezoinozitolul - colina

Mecanismul de aciune al vitaminelor Multe vitamine acioneaz dup o prealabil biotransformare, iar altele rmn nemodificate i funcioneaz ca i coenzime, participnd la o multitudine de procese biochimice. Alte vitamine ca de exemplu vitaminele A sau D folosesc ci de aciune ce amintesc de mecanismele hormonale. Vitaminele E sau tocoferolii funcioneaz ca sisteme antioxidante fa de agresiunea peroxidic. Exist, deasemenea i modaliti particulare de aciune, cum ar fi de exemplu: retinalul i acidul retinoic. n general vitaminele prezint i un important rol catalitic. Implicaii terapeutice n terapie, vitaminele sunt utile ca medicaie specific pentru combaterea sau profilaxia strilor careniale. Preparatele pot s conin o singur vitamin sau asocieri de vitamine. n doze terapeutice vitaminele sunt n general bine tolerate. Supradozarea poate provoca tulburri grave, numite hipervitaminoze, mai ales la vitaminele liposolubile, care sunt mai greu eliminabile. Exemplu: - n literatur se semnaleaz c vitamina A ar prezenta risc teratogen, fiind astfel contraindicat n primele luni de sarcin. n terapie se folosesc unii derivai vitaminici ca sruri, esteri, reprezentnd forme optimizate sub raportul eficacitii sau al posibilitii de adminidtrare.

37

Luciana Dobjanschi

V.1. Vitaminele liposolubile Vitaminele liposolubile sunt molecule apolare derivate din izopren. Ele sunt relativ stabile la temperatura operaiilor culinare, dar uor inactivate de radiaiile UV i substanele oxidante. Digestia i absorbia lor decurge n condiii proprii lipidelor, cu participarea enzimelor specifice i a bilei. Ficatul poate depozita vitaminele A,D,K, iar vitamina E se acumuleaz mai ales n esutul adipos. n circulaia sanguin vitaminele liposolubile sunt vehiculate de ctre proteinele plasmatice. Vitaminele liposolubile se elimin n bil, urmeaz un circuit enterohepatic i se excret n fecale. Unii metabolii pot s treac n urin. Vitaminele A Vitaminele A mai sunt cunoscute i sub denumirea de retinoide. Surse de Vitamina A Vitamina A se gsete n alimenia carnal ca atare sau n produsele vegetale sub form de provitamine. Organismul uman nu poate sintetiza vitamina A, dar are capacitatea de a transforma provitaminele n forme active. Provitaminele A sunt pigmeni de culoare galben-portocalie sau roie. Structur Pigmenii vegetali au o structur polizoprenic format din 40 de atomi de carbon i au nite inele ciclohexenil (cicluri iononice). n grupa provitaminelor A intr hidrocarburi (caroteni) i derivaii lor oxigenai (xantofile, carotenoide). Condiia structural obligatorie este prezena a cel puin a unui nucleu -iononic. Exemplu:

- caroten 38

 caroten n mucoasa intestinal, - carotenul sufer o scindare oxidativ a legturii duble din poziia 15 (proces enzymatic) n urma creia se formeaz vitamina A1 (retinalul).
O 2 d i o x i g e n a z a

C H O

vitamina A1 (retinalul) Tot n mucoasa intestinal mai au loc dou transformri i anume: - reducerea gruprii carbonilice la grupare alcoolic n prezena enzimei alcool dehidrogenazei sau retinol dehidrogenazei.

39

Luciana Dobjanschi

C H O

a l c o o l d e h i d r o g e n a z a C H O H 2

retinol

oxidarea gruprii aldehidice la acid carboxilic, n prezena aldehid dehidrogenazei, cu formare de acid retinoic.

C H O

a l d e h i d d e h i d r o g e n a z a C O O H

acid retinoic

Forma alcolic i cea de aldehid reprezint formele de absorbie intestinal. Dup absorbie vitamina A se esterific cu acizii grai (acid palmitic) i se depoziteaz n ficat. De acolo se mobilizeaz dup necesiti. Vitamina A este transportat de o protein plasmatic specific la esuturile int. Majoritatea esuturilor au capacitatea de a realiza conversia: 40

o l

a l

o i c

Se mai cunosc i alte vitamine A, i anume. A2, A3.

C H O

vitamina A2 (3-dehidroretinal) Vitamina A2 se gsete sub 3 forme, i anume: 3- dehidroretinal , -ol i oic i se gsete n ficatul petilor. C H 2
C H O

Vitamina A3 n cazul vitaminei A3 are loc deplasarea legturii duble din poziia 13-14 n poziia 13-20. Toate cele trei forme ale vitaminei A1 (retinol, retinal i acid retinoic) sunt active biologic, dar sunt inechivalente ca aciune. Acidul retinoic Acidul retinoic este capabil s ntrein dezvoltarea i diferenierea diferitelor esuturi. Acidul retinoic particip n biosinteza glicoproteinelor, datorit capacitii sale de a proteja pielea i mucoasele (aciune epitelotrop) i mrete rezistena organismului la infecii. Retinolul n celula int retinolul este captat de o protein specific citoplasmei, diferit de cea seric i l transloc n nucleul celulei, unde este preluat de o protein nuclear. Se presupune c vitamina A sub forma alcoolic acioneaz asemntor hormonilor. Retinolul influeneaz funcia de reproducere, acionnd asupra hormonilor. 41

Luciana Dobjanschi

Retinalul Retinalul particip direct n procesul vederii, fiind elementul cromofor al tuturor pigmenilor vizuali coninui n celulele fotoreceptoare din retin. Celulele fotoreceptoare din retin conin dou tipuri de celule ca form: bastonae i conuri. Pigmenii vizuali sunt instrumente moleculare ale vederii. Ca structur sunt cromoproteine, proteine complexe formate din proteina propriu-zis plus o grupare micromolecular colorat. Celula bastona este implicat n procesul vederii i este format din dou segmente, i anume unul extern i unul intern. Segmentul extern este format din aproximativ 1000 de discuri ce conin pigmeni vizuali de tipul rodopsinei. Rodopsina este o cromoprotein format din dou componente: o parte proteic, numit opsina i cromoforul, care este izomer al vitaminei A: 11- cis retinalul. Cele dou componente sunt legate printr-o legtur de tip baz Schiff ce se realizeaz ntre funcia carbonil a cromoforului i funcia aminic a unui rest de lizin din structura opsinei.
N H +( RC H C H ) N H 2 4 C C O H
1 1 c r o m o f o r ( c i s r e t i n a l ) -

o p s i n a

Rodopsina are capacitate mare de a absorbi lumina, ceea ce face ca celula bastona s fie un receptor foarte sensibil, fiind necesar energia unui singur foton pentru a fi fotoexcitat. Rodopsina face parte dintr-un sistem senzor. Fenomenul primar al procesului de excitare vizual este izomerizarea 11-cis retinalului din structura rodopsinei, consecutiv absorbiei luminii.

42

iz o m e r iz a r e C H p s in a N H o
1 1c isr e tin a l +

lu m in a

p s in a H o C H N

a ll tr a n sr e tin a l
Prin izomerizare se schimb geometria structurii polienice a rodopsinei, are loc o deplasare a legturii aldiminice cu 5A0 n raport cu inelul - iononic. Aceast deplasare va antrena structura proteinei i apar astfel modificri constante ale opsinei, modificri ce duc la desprinderea cromoforului de opsin. Procesul de fotoliz a pigmentului are loc n etape care se succed cu vitez foarte mare. Rodopsina activat va declana o serie de interaciuni n cascad care explic fenomenul de excitaie vizual.
R l u m i n a i n tu n e r i c

* R ( r o d o p s i n af o to e x c i ta t a )

a l l tr a n sr e ti n a l i z o m e r a z a d e h i d r o g e n a z a a l l tr a n sr e ti n o l i sr e ti n a l 1 1c

o p s i n a

43

Luciana Dobjanschi

Procesul de excitare vizual. Carena de viatmina A mbrac diverse forme. La nivelul ochilor: - se instaleaz tulburri funcionale, scderea acomodrii n lumin crepuscular, apar dificulti n vedere. - Pot s apar leziuni ale conjunctivei (xeroftalmie) - Obstrucia canalelor vasculare, cheratomalacie, suprainfectare cu Bacillus xerosus La nivelul pielii: - apar leziuni trofice ale epidermei i mucoasei Tot n caren de vitamina A pot s apar tulburri ale creterii i sterilitate. Supradozarea cu vitamina A duce la hipervitaminoz, care se manifest prin creterea tensiunii intracraniene, cefalee, prurit, hepato-splenomegalie, descuamare cutanat, anorexie, iritabilitate. n condiii obinuite necesarul zilnic de vitamina A este de 1,7mg pentru adult i 1 mg pentru copii. El poate s creasc n sarcin, lactie, pneumonie, nefrit. Indicaii Vitamina A este indicat n special n: oftalmologie, dermatologie, dar i n boli infecioase febrile, boli renale, ciroze hepatice, hipertiroidism, diabet i n pediatrie. n scop terapeutic se folosesc esterii de retinol i anume: acetatul i palmitatul. Vitaminele D ( calciferolii) Prin origine, structur i mod de aciune vitaminele D se apropie mult de hormonii steroizi. Necesarul n raia alimentar este evaluat n jur de 150 UI la adult, ntre 300- 500UI la copil, cu condiia unui aport adecvat da Ca i P. Necesitile de aport exogen crescut sunt reclamate n sarcin, alptare, la sugari i la persoanele private constant de lumina solar. Surse de vitamina D: - din alimente sub form de provitamine - endogen prin biosintez - suplimentar sub form de medicamente n caz de sarcin, la sugari, persoanele ce triesc i lucreaz mult n ntuneric Provitaminele D sunt compui sterolici cu 19 atomi da carbon n structura tetraciclic de baz. Conversia provitaminelor D n vitamine D este un proces fotochimic ce are loc sub influana radiaiilor UV. Procesul are loc n etape cu deschiderea inelului B. 44

Se cunosc 6 vitamine D, care se noteaz de la D2 la D7. D1 este considerat preparat impur de D2.

l u m i n a

H O

H O

7- dehidrocolesterol (D3)

colecalciferol

l u m i n a

H O

H O

ergosterol (D2)

ergocalciferol

Provitamina D2 se ntlnete n sclerotul de secar, S.cereviceae, esuturi animale.

45

Luciana Dobjanschi

Sursa endogen de vitamina D

sinteza endogena

alim ente

colesterol m ucoasa intestinala

7

dehidrocolestrol lum ina

HO colecalciferol
Prin aciunea radiaiilor UV 7-dehidrocolesterolul format n mucoasa intestinal i depozitat n piele sufer un process de fotoliz neenzimatic, trecnd n precolecalciferol, care se izomerizeaz spontan n colecalciferol. Transformarea este direct proporional cu intensitatea expunerii i invers proprional cu gradul de pigmentare a epidermei. Procesul de conversie se diminu cu vrsta. Calciferolii se absorb din intestinul subire proximal. Metabolismul vitaminei D Vitamina D sufer un proces de hidroxilare la fel ca i hormonii. Au fost pui n eviden cca 20 de derivai hidroxilai. Astfel, n microzomii hepatici o hidroxilaz specific introduce gruparea hidroxil n poziia 25. 25- hidroxicalciferolul sub aciunea unui complex de trei enzime duce la hidroxilarea n poziia 1, cu formare de 1, 25 calciferol sau calcitriolul, care este metabolitul cel mai activ, fiind considerat i hormonul D. Perturbarea procesului de obinere a calcitriolilor duce la cauzele de producere a carenei de vitamina D. Astfel, medicaia antiepileptic (fenobarbital, fenitoina) administrat timp ndelungat 46

induce enzime capabile s produc produi hidroxilai preponderent inactivi.

c a l c i f e r o l h i d r o x i l a z a O H
2 5 h i d r o x i c a l c i f e r o l

O H

, c a l c i f e r o l 1 2 5 ( c a l c i t r i o l )

, c a l c i f e r o l 2 4 2 5

H O c a l c i t r i o l

, , c a l c i f e r o l 1 2 4 2 5

47

Luciana Dobjanschi

Rolul biochimic al vitaminei D Vitamina D alturi de hormonul paratiroidian intervine n metabolismul Ca i al fosfailor. Astfel, reacia de hidroxilare a calcifediolului este stimulat direct de scderea fosfatului i indirect de scderea calciului.

hipofosfate mie

hipocalce mie
+

PT H
+

calcife diol

calcitriol

Calcitriolul i stopeaz propria sintez prin mechanism feedback. Calcifediolul s-a putut localiza n intestine, n esutul renal, osos; acestea find deci principalele esuturi int a hormonului D. Aciunea biologic principal a hormonului D este de a facilita absorbia intestinal de Ca i fosfat. La nivelul tubilor renali produce retenie de fosfai i crete sinergic cu PTH reabsorbia Ca. n corelaie cu PTH asigur concentraiile sanguine optime de Ca i fosfai, n vederea mineralizrii normale a osului. Dup unele preri, calcitriolul ar stimula sinteza de osteocalcin, o protein transportoare de Ca, a crei formare depinde i de vitamina K. Aciunea parathormonului i a hormonului D este de a ridica nivelul de Ca n fluidul extracelular i de a menine sau scdea concentraia de fosfat. Cnd exist un deficit de Ca n os, creterea calcemiei sub influena vitaminei D va produce inhibiie feed-back a secreiei PTH, permind mineralizarea. Dozele mari de vitamina D stimuleaz osteoclatii i mobilizeaz Ca din oase. Aceste micri ale Ca pot fi puse n legtur cu proteinele transportoare din celulele respective.

48

n concluzie, hormonul D este produs printr-o serie complex de reacii enzimatice i neenzimatice, ce implic transportul moleculelor precursor la esuturi. n organele int hormonul D acioneaz dup modelul hormonilor steroizi, interceptnd n final un numr de procese biologice. Hormonul D are o contribuie esenial la homeostazia calciului. Acest bioelement este important nu numai n metabolismul osos, ci i n excitabilitatea neuromuscular, stimuleaz producerea unor hormoni i neurotransmitori, intervine i n procesul de coagulare. Carena de vitamina D Carena de vitamina D se manifest n primul rnd prin tulburri n metabolismul osos. La adult, demineralizarea osului provoac osteoporoza, care evolueaz spre osteomalacie. La copii, carena de vitamina D duce la apariia rahitismului. Semnele biuochimice sunt creterea fosfatazei alcaline serice, hipocalcemia i hipofosfatemia. Tabloul clinic al rahitismului include: deformri ale scheletului, modificri osoase vizibile radiologic, hipotonie muscular i ligamentar, uneori spasmofilie. Deformrile osului se instaleaz n primii ani de via. Exemplu: - fontanela defectuos suturat, craniu ovalar, dentiie ntrziat, toracele cu sternul proiectat nainte, bazin strmtat. La maturitate apare bazin distocic, membrele inferioare se curbeaz, iar abdomenul devine voluminos. Indicaii n terapie se utilizeaz vitaminele D2 i D3, calcifediolul i calcitriolul asociate cu preparate de Ca i fosfat. La sugari se face profilaxie cu vitamina D. Exist forme de rahitism, numite rahitism pseudocarenial, rezistente la vitamina D. Aceste boli sunt congenitale, datorate incapacitii transformrii vitaminei D n calcitriol i a absenei receptorului pentru hormonul D. Toate preparatele cu vitamina D sunt toxice prin supradozare, provocnd mobilizarea Ca din os, osteoporoza, hipercalcemia, depuneri n esutul renal ducnd la calculoza renal. La administrarea prelungit a vitaminei D se recomand controlul nivelului de Ca i fosfat din snge. A fost obinut un analog sintetic al vitaminei D , compusul dihidrotachisterolul ( AT10, tachystin), prin hidrogenarea parial a tachisterolului, unul din produii secundari din procesul de fotoliz a provitaminei D. Acest compus este folosit la combaterea de urgen a tetaniei paratireoprive, datorit efectului rapid de corectare a hipocalcemiei. 49

Luciana Dobjanschi

Vitamina E (tocoferolii) Vitamina E este cunoscut sub denumirea de vitamina antisterlitii, deoarece este necesar pentru fertilitate la unele mamifere i psri. Denumirea de tocoferol vine din limba greac *tokos = a nate, pherein = a purta*. Vitamina E se gsete exclusiv exogen n plantele verzi, uleiuri vegetale, alimente de origine animal, mai ales viscere. Structura vitaminei E Tocoferolii sunt derivai metilai ai nucleului, numit tocol. Se cunosc 4 tocoferoli naturali notai: -, -, -, - tocoferol. Compusul posed activitatea vitaminic cea mai marcat i este cel mai larg rspndit.

H O C H 3 O
tocol tocoferol: 5,7,8 trimetiltocol tocoferol: 5,8 dimetiltocol tocoferol: 7,8 dimetiltocol tocoferol: 8 metiltocol Metaboliii acestei vitamine nu se cunosc, neidentificndu-se nici un metabolit activ. Rolul biologic al vitaminei E Vitamina E prezint dou funcii biochimice: - una legat de calitatea sa puternic antioxidant - cealalt privind metabolismul Se. Vitamina E este un puternic antioxidant n vivo sau n vitro. Vitamina E este activ la presiuni mari de oxygen i protejeaz astfel acizii grai nesaturai, vitamina A, carotenii i gruprile tiolice ale enzimelor. Vitamina E este bine distribuit n membranele eritrocitelor i ale celulelor din teritoriul arborelui respirator. n vivo joac un rol important n protecia fosfolipidelor membranare, contribuind astfel la conservarea structurii celulare, fa de agresiunea peroxidic a diverilor ageni.

C H 3

C H 3

C H 3 C H 3

50

Relaia vitamina E Se este una de reciprocitate. Rolul legat de Se este specific i insuficient precizat. n ce privete Se, se arat c el este necesar pentru funcionarea normal a pancreasului (digestia lipidelor i deci a vitaminei E). Se contribuie la reinerea vitaminei E n lipoproteinele plasmatice. Se are o aciune sinergic antioxidant ca i component al unei enzime numite glutation peroxidaz.
2 G

S H

H O 2 2 g l u t a t i o n p e r o x i d a z a

GS S G

2 H O 2

Necesarul de viatamina E este de 10 mg /zi, iar n sarcin i alptare ajunge la 15 mg/zi. Carena de vitamina E Stri de caren E se pot instala n cadrul sindromului de malabsobie lipidic, cauzate de disfuncia pancreatic, colecistopatii, boli inflamatorii intestinale, cnd se produce steatoree (pierderea de lipde n scaun). Pn n prezent lipsesc dovezi sigure c vitamina E ar fi necesar funciei reproductive la om. Carena se manifest prin tulburri neurovegetative, apariia de edeme, fragilitate eritrocitar, anemia hemolitic, care apare n special la nou-nscuii prematur. Vitamina E se indic n sarcin i alptare, la prematuri, la vrstnicii cu tulburri de circulaie periferic. n avort, sterilitate i distrofii musculare eficiena este ndoielnic.

51

Luciana Dobjanschi

Vitamina K Vitaminele K naturale se gsesc n diferite alimente, ca: lapte, ou, uleiuri vegetale. Sursa major de vitamina K este flora saprofit intestinal (B.coli), astfel c n mod obinuit nu este necesar aportul exogen. Vitaminele K sunt derivai de 2- metal- 1,4-naftochinona. Compusul printe este considerat vitamina K3, numit i menadiona.

O CH 3

O vitamina K3 , menadiona
Se cunosc 7 vitamine K, dintre care: K1K3 sunt liposolubile (vitamine naturale), iar K4..K7 sunt hidrosolubile (vitamine de sintez).

O C H 3 C H 3 C H 3

H C H C C H C H H C H C H 2C 2 2C 2 2H 3

fitomenadiona , vitamina K1

O C H 3 C H 3

H CC C H H 2 C 2 H n

vitamina K2 ( n= 6,7,8) 52

OH CH 3

OH

vitamina K4

NH Cl 2H CH 3

OH
vitamina K5

NH Cl 2H CH 3

NH Cl 2H
vitaminaK6 OH

CH 3

NH Cl 2H
vitamina K7

Biotransformarea vitaminei K are loc n microzomii hepatici. Metabolitul cel mai activ al vitaminei K este derivatul hidrochinonic. 53

Luciana Dobjanschi

Acesta sufer un proces de glicuronoconjugare, iar produii rezultai se elimin pe cale biliar i renal.

Acid glutamic

acid carbox iglutamic CO2 monoox igenaza O2

OH CH 3 R OH

O CH 3 O R O O CH 3 R O

epox id reductaza

Acidul -carboxi- glutamic fixeaz calciul cu afinitate mare pentru glutamat, care este un chelator slab, permind interaciunea specific protein Ca+2 fosfolipide, esenial pentru procesul de coagulare. Rolul biologic al vitaminei K Vitamina K are rol n procesul de coagulare a sngelui. Vitamina K este esenial pentru asigurarea nivelului optim pentru 4 din factorii coagulrii sngelui: II, VII, IX, X. Aceti factori sunt proteine care se sintetizeaz i se elibereaz n circulaie sub form de precursori inactivi: zimogeni (precursori enzimatici). Conversia zimogenilor la forme active este un proces vitamino K dependent. Rolul biochimic al vitaminei K a fost pus n eviden prin experiene cu antivitamine K. Astfel, s-a demonstrat c dicumarolul 54

introdus n alimentaia animalelor produce hemoragii letale, deoarece sngele acestor animale conine o protrombin anormal, incapabil s lege calciu, ntruct ea nu conine resturi de acid carboxiglutamic. Compuii de tip cumarinic sunt folosii n terapia anticoagulant, pentru tratamentul i profilaxia afeciunilor tromboembolice, acionnd asupra epoxid reductazei pe care o nhib. Carena de vitamina K Deficitul de vitamina K se poate instala n sindromul malabsorbiei lipidice, n boli hepatice, prin disbioza intestinal indus de antibiotice sau sulfamide, abuz de laxative, tratament cu anticoagulante cumarinice, supradozare cu vitamina A. Carena de vitamina K duce la hemoragii, epistaxis, hemoragii subcutane, digestive, hematurie. Deasemenea carena de vitamina K poate s mai apar n boala hemoragic a sugarului, la care intestinul este relativ steril, sistemul de sintez hepatic a factorilor de coagulare este imatur, iar bariera placentar este greu accesibil la vitamina K. Terapia cu vitamina K Vitamina K face parte dintre hemostaticele folosite sistemic n hemoragii de diverse etiologii. Preparatele farmaceutice de vitamina K sunt: fitomenadiona, menadiona solubil i derivaii si hidrosolubili, menadion sodiu sulfat i menadiol sodiu fosfat. Fitomenadiona este lipsit de toxicitate, celelate fiind contraindicate la nou-nscui i sugari putnd provoca anemie hemolitic i hiperbilirubinemie. Dozele terapeutice sunt mai mari dect cerina fiziologic, care este apreciat la 2 mg/zi.

55

Luciana Dobjanschi

V.2. Vitaminele hidrosolubile Vitaminele hidrosolubile sunt molecule polare cu structur chimic foarte variat. Ele se ntlnesc asociate n produse naturale ca: drojdia de bere, cortexul gramineelor, ficat. Din aceast cauz lipsa de aport prin alimentaie provoac stri de policaren i nu o hipovitaminoz anume. De exemplu: alcoolismul cronic produce policarena vitaminic B, cu preponderen a carenei de vitamina B1. Vitaminele hidrosolubile se absorb n circulaia portal, se stocheaz n cantiti mici, eliminndu-se cu uurin pe cale renal. Vitamina B1 Vitamina B1 se mai numete tiamina sau aneurina i apare larg rspndit n esuturile vegetale i animale, n drojdia de bere. Necesarul zilnic pentru un adult sntos este de cca 2 mg/zi. Necesiti crescute pot s apar n sarcin i alptare, n cretere i n stri patologice ca boli nervoase, alcoolism, boli infecioase. Structura n structura moleculei de tiamin intr 2 nuclee heterociclice: unul pirimidinic i unul tiazolic. Cele dou nuclee sunt unite print-o punte metilenic.
N H C N 3 C H 2 + N S C H 3 H H C H 2 O 2 C

Vitamina B1 este uor absorbit din intestine, n esuturi unde este fosforilat i transformat n tiaminpirofosfat (TPP), care apoi poate fi hidrolizat cu eliminarea gruprii pirofosforice.

56

A T P

A M P

T P P T ia m in a p ir o fo s fa ttr a n s fe r a z a p ir o fo s fa ta z a P P H O 2

N H CN 3

C H 2+ N C H 3

H O HO

P O H H P O H 2O S C 2C O
TPP

TPP (cocarboxilaza) este forma metabolic activ, care servete drept coenzim n reacii ce transfer uniti de aldehid activat. Asemenea transferuri au loc n reacia de decarboxilare oxidativ a - cetoacizilor i n reacia de transcetolare. Ambele tipuri de reacii sunt ntlnite n cadrul metabolismului glucidic. n aceste reacii de transfer, rolul propriu-zis al coenzimei TPP este de a servi la eliberarea din anumite molecule a unitilor aldehidice care urmeaz a fi transferate pe alte molecule. Carena Carena de tiamin apare atunci cnd cresc necesitile. Sindromul tipic pentru carena de tiamin este cunoscut sub numele de boala beri-beri. Sindromul beri-beri prezint 3 forme: - Beri-beri uscat (paralitic), se manifest prin atonie muscular, caecsie, polinevrit periferic degenerativ. - Beri-beri edematos (umed), care se manifest prin tahicardie, cardiomegalie, dispnee, edem generalizat - Beri-beri difuz , ce se manifest cu dureri musculare de tip reumatismal, astenie. Sindromul beri-beri rmne cauza esenial a mortalitii neonatale n Asia de S-E. O alt form de hipovitaminoz este sindromul Wernicke, care se manifest cu fenomene de encefalopatie (afeciune a sistemului nervos). 57

Luciana Dobjanschi

La alcoolici carena apare frecvent evolund cu polinevrita, crampe dureroase ale membrelor inferioare, tulburri senzitive, apoi motorii. Indicaii Vitamina B1 este indicat n tratamentul strilor careniale, n neurologie, reumatologie, alcoolism, boli infecioase, diabet zaharat.

Vitamina B2 Vitamina B2 sau riboflavina este sintetizat de plante i microorganisme. Ea se gsete n cantiti mari n: lapte, ou, ficat, legume verzi. Este relativ termostabil, dar se descompune n prezena luminii. Structura Riboflavina este reprezentat de nucleul izoaloxazinic substituit cu doi radicali metil n poziiile 6 i 7, i cu un rest ribitil n poziia 9.

H O H C H H H 2 C 2 O 3C H C 3 N N N O

N H O

H C 3

Riboflavina la nivelul mucoasei intestinale este fosforilat cu ajutorul mATP rezultnd o structur ce amintete e un nucleotid, i anume: FMN. FMN reprezint forma de absorbie intestinal. n diferite esuturi, FMN este nglobat ntr-o structur mai complex, prin legare de un rest de AMP, transferat de pe o molecul de ATP cu formare de FAD.

58

C H 2 H C 3 N N

C H O H3 C H 2 OH N O
+

N H O

A T P

fla v o k in a z a
+ 2 M g

H C 3

C H 2 H C 3 N N

C H OH3 C H 2 O N O N H O

P O H 3 2

H C 3

FMN

H O H C H H P O H 2 C 2 O 3 2 3C H C 3 N N O N O
+

N H

A T P

f l a v o k i n a z a
+ 2 M g

H C 3

N H 2 O H O H N N N

H C 3

H O H C H H H 2 C 2 O PO POC 2 3C N O N N O O O N O
FAD

N H H H OO

H C 3

Dintre aceste dou forme FAD reprezint 80%, FMN 20%, iar riboflavina liber rmne ntr-o proporie neglijabil.

59

Luciana Dobjanschi

Rol biochimic Ambele flavin-nucleotide (FMN, FAD) sunt coenzime care fac parte din sisteme enzimatice implicate n diverse procese de oxido-reducere din organism. Datorit structurii coenzimelor respective, aceste enzime se mai numesc flavoenzime sau flavoproteine. n structura lor se remarc o legtur strns (necovalent) ntre coenzim i partea proteic. Deasemenea, majoritatea flavoproteinelor conin metale cu rol de cofactori adiionali, de aceea enzimele respective sunt cunoscute i sub numele de metaloflavoproteine. n reaciile de oxido-reducere catalizate de flavoproteinele active, participantele directe la procesele redox sunt tocmai coenzimele constituente, FMN sau FAD. Astfel, ciclul izoaloxazinic poate suferi reduceri reversibile prin fixarea temporar la atomii de azot din poziiile 1 i 10 a doi atomi de hidrogen preluai de la substratele cu care intr n reacie i care se oxideaz. R

H C 3

N N

O
+

N H O R

S H 2

H C 3

H C 3

N N H

H N

O
+ S o x

H C 3

N H O

n acest fel, FMN sau FAD trec din formele lor oxidate n formele reduse FMNH2 sau FADH2 . Formele oxidate sunt pigmeni galbeni, fluoresceni, iar cele reduse apar ca leucoderivai. Aceste flavoproteine pot fi utilizate n oxidarea unor substrate ca: aminoacizi, amine, glucoza, etc. Necesarul de vitamina B2 este de aproximativ 1,5 mg n 24 de ore i este acoperit din alimente i prin aportul florei intestinale, astfel c o caren de B2 este destul de rar ntlnit. 60

Carena Cnd aportul de riboflavin este insuficient apar simptomele avitaminozei i anume: ragade la colurile gurii, leziuni ale buzelor, colorarea n rou intens a limbii, oboseal ocular, dilatarea pupilei, sensibilitatea ochiului la lumin, modificri ale vascularizaiei la nivelul corneei, tremurturi, tulburri digestive, dificulti la urinare. Toate aceste simptome dispar prin includerea sistematic n alimentaie a unor alimente bogate n vitamina B2 sau prin administrarea de produse farmaceutice ce conin riboflavin. Indicaii Vitamina B2 este indicat n dermatologie, oftalmologie i neurologie. Ea se administreaz n asociaie cu alte vitamine din grupul B.

Vitamina PP

Vitamina PP (niacina, nicotinamida, vitamina B3 ) este vitamina antipelagroas. Vitamina PP se sintetizeaz n plantele verzi i la animale pornind de la triptofan. Ea se gsete n cantiti mari n: carne, legume i cereale. Necesarul zilnic de vitamina PP este de cca 15 mg /zi. Din punct de vedere structural vitamina PP este acidul nicotinic.
COOH N N CONH2

acid nicotinic

nicotinamida

Vitamina PP este constituientul a 2 nuleotide ce reprezint formele sale biologic active: NAD+ i NADP+.

61

Luciana Dobjanschi

N H 2 C O N H 2 O N + O N N N

N H C H 2 2 O P O P O C O O H O H O

O H O H O H OR
R: H = NAD PO3H2 = NADP n celulele animale NAD+ este prezent n cantiti mult mai mari dect NADP. Coninutul de NADP+ al esuturilor este proporional cu activitatea lor biosintetic. NAD+ i NADP+ au rol de coenzime i servesc unor enzime de oxido-reducere, numite dehidrogenaze. Astfel NAD+ este considerat principalul colector de hidrogen al substratelor.

A H 2
+ A +H

H C O N H 2 N +
+ (N A D )

C O N H 2

N R (N A D H)

+ B +H

B H 2

62

Aceste reacii implic transferal reversibil de perechi de atomi de H. Rolul dehidrogenazelor piridinice: - transfer de H i electroni ntre substrate fie n reacii cuplate aparinnd aceleai ci metabolice, fie ntre ci metabolice diferite. - NADH ofer hidrogen n etapa final a oxidrii celulare reprezentat de lanul respirator mitochondrial - NAD+ este principalul colector de H a substratelor. El funcioneaz mai cu seam n cile metabolice oxidative. Enzimele NAD dependente se mai numesc reductaze i servesc n procese de hidroxilare ce privesc substane endogene i xenobiotice. Carena de vitamina PP provoac pelagra. Timp ndelungat pelagra a fost considerat ca o form tipic de caren PP. Ulterior s-a constatat c pelagra este o stare policarenial cauzat prin absena aportului de viatamina PP i B6, precum i de triptofan. Ea apare la populaii malnutrite, mai ales consumatoare de porumb, din care lipsete triptofanul i proteinele cu valoare biologic ridicat. Pelagra mai poate s apar i secundar n cazul sindromului de malabsorbie, al sindromului carcinoid, cnd o cantitate mare de triptofan este sustras biosintezei de acid nicotinic, la alcoolici, n aminoacidurii (ca boala Hartnup) i sub tratament cu izoniazid. Pelagra se manifest printr-o erupie caracteristic pe pielea expus soarelui, care devine atrofic, aspr i fisurat, prin inflamaia mucoaselor digestive (stomatite, glosite, enterite). Simptomelor dermice li se asociaz i tulburrile de tranzit, diaree apoas, uneori sanguinolent, tulburri ale SNC, insomnie, confuzie, delir, com, tulburri hematologice i de circulaie periferic. Utilizarea n terapeutic Preparatele cu vitamina PP corecteaz eficient o bun parte din simptome, ncepnd cu cele digestive i mai trziu cu dermatita. Pentru administrare se prefer nicotinamida. Acidul nicotinic poate s produc fenomene adverse chiar i n doze terapeutice. Administrarea cantitilor mai mari de niacin (pn la 100mg /zi) nu determin fenomene de toxicitate. Cantitile excesive provoac ns prurit, roirea pielii i, n general, modificri circulatorii deoarece vitamina PP determin dilatarea lumenului vaselor sanguine.

63

Luciana Dobjanschi

Vitamina B6 Vitamina B6 , numit i piridoxina sau adermina, apare sub trei forme biologic active interconvertibile. Vitamina B6 se gsete n principal n grne, ficat, drojdie, legume verzi i n cantiti mici n lapte i ou. Din punct de vedere structural are la baz nucleul piridinic, substituit.

C H O H 2 H O O C H O H H 2 N H C 3

C H O C H O H 2 N

H C 3
piridoxina

piridoxal

C H H 2 N 2 H O C H O H 2 N

H C 3

piridoxamina Piridoxina i analogii si se absorb din intestine. n citoplasma celulelor derivaii vitaminei B6 sunt fosforilai la gruparea alcoolic din poziia 5, rezultnd piridoxal-fosfatul (PALPO).

64

C H O H O C H O H 2 p i r i d o x a lk i n a z a N A T P A D P H O

C H O

O C H H 2 P O O H

H C 3

H C 3

P A L P O

C H N H 2 2 H O N

C H H 2 P O O H

H C 3

P M P

PALPO i PMP (piridoxaminfosfat) sunt formele active ale vitaminei B6. Ele funcioneaz ca i coenzime n metabolismul aminoacizilor. PALPO intervine n procesul de transaminare a aminoacizilor.
+ C E C O O H C H O R 1 H

H O 2 R E C H N C H 1 C O O H b a z a S c h i f f I

R C N C H E 1 2 C O O H b a z a S c h i f f I I

N H 2

+ H O 2 + R C C O O H E C H N H 1 2 2

R C C O O H E C H N H + 2 2 2 O
+ H O 2

H O 2 R C C O O H 2 N C H E 2 b a z a S c h i f f I I I

R H C O O H 2C C H E N b a z a S c h i f f I V

+ R C H E C H O C O O H 2

N H 2

65

Luciana Dobjanschi

Deci, ntr- un proces de transaminare are loc transferul funciei aminice de pe un aminoacid pe un alfa- cetoacid acceptor, astfel c aminoacidul donor devine alfa- cetoacid, iar alfa-cetoacidul acceptor devine aminoacid.. n cursul procesului catalitic are loc transformarea reversibil a PLP n PMP. Vitamina B6 este foarte bine rspndit n rndul produilor alimentari, astfel c o alimentaie normal i aportul florei intestinale acoper necesitile de vitamina B6 n condiii obinuite. Astfel strile careniale de vitamina B6 de origine nutriional apar foarte rar la om. Principalele manifestri ale carenei de vitamina B6 sunt dermatita seboreic, polinevrita, apariia de convulsii (n special la sugari), anemia. Anemia apare ca urmare a perturbrii etapelor iniiale din biosinteza hemului. Alte posibiliti de instalare a deficienei de vitamina B6 sunt: alcoolismul cronic, sarcina, insuficiena renal i unele boli genetice. Deasemenea, unele medicamente, ca: izoniazida (HIN), cicloserina, penicilamina, contraceptivele orale, administrate timp ndelungat pot s induc carena de vitamina B6. Necesarul de vitamina B6 este n jur de 2 mg/zi la adult. Aportul excesiv poate determina efecte toxice pe sistemul nervos. Acidul pantotenic (vitamina B5 ) Acidul pantotenic poart acest nume pentru c este foarte mult rspndit n esuturile vegetale i animale. El este vitamin pentru om, dar i factor de cretere pentru microorganisme. Cele mai bogate surse de acid pantotenic sunt: drojdia de bere, boabele cerealelor, glbenuul de ou, carnea. n organism acidul pantotenic provine i prin sintetizarea sa de ctre flora bacterian intestinal. n structura acidului pantotenic intr acidul pantoic i alanina legate printr-o legtur amidic.

C H 3 H OC H HC ON HC H H O O H 2 CC 2C 2 C C H O H 3 a c i d p a n t o i c
66

b e t a a l a n i n a

Acid pantoic este absorbit uor n intestine, i apoi fosforilat n poziia a acidului pantoic, urmnd astfel o cale metabolic prin care este transformat n 2 cofactori enzimatici : fosfopantoteina i coenzima A.
O C H 3

H O P O C H C C H C O N H C H C H C O N H C H C H S H 2 2 2 2 2 H O C H O H 3

fosfopanteina
O C H 3

H O P OC H H C O N H C H H ON H C H H H 2 C C 2 C 2 C 2 C 2 S O O P O C H 2 O H C H H 3O N H 2 N N N

O N

OO H O P O H O H

Coenzima A Dup cum se observ coenzima A are o structur nucleotidic ce include fosfopantoteina de care este legat un rest adenilic fosforilat n poziia 3 a ribozei. Fosfopantoteina servete ca grupare prostetic transportoare de radicali acil, numit Acyl carrier Protein (ACP). ACP face parte dintr-un system multienzimativ implicat n procesul de biosintez a acizilor grai. Coenzima A este deasemenea implicat n diverse reacii enzimatice din diferite ci degradative sau biosintetice cum ar fi: 67

Luciana Dobjanschi

oxidarea acizilor grai, decarboxilarea oxidativ a alfa- cetoacizilor, degradarea aminoacizilor, n procesul de iniiere a ciclului Krebs, n biosinteza diferitelor lipide, precum i n procesele de acetilare a unor compui endogeni sau xenobiotici ( de ex. acetilarea HIN). Coenzima A se leag de resturile acil prin intermediul funciei tiolice, formnd astfel tioesteri macroergici de tipul : R- CO- SCoA. Formarea legturilor macroergice presupune consum de energie, care poate s fie cedat de ATP. Alimentele pot s ofere cantiti mari de acid pantotenic, astfel nct nu a fost semnalat carena spontan. Deficiena specific s-a putut induce experimental prin administrare de antagoniti. Simptomele sunt variate: digestive, predispoziie la infecii, crampe musculare, modificri cutanate, hipoglicemie, depresii nervoase. Deficitul de pantotenat alturi de cel al vitaminei B6, acizilor grai eseniali i de proteine contribuie la instalarea steatozei hepatice. Acidul pantotenic este indicat n stri de policaren B.

Biotina (Vitamina H) Biotina este un derivat imidazolic cu structur biciclic care conine ca lan lateral un rest de acid valerianic la -biotina sau izovalerianic la -biotina.

O H N N H

C H OOH 24 C

n natur, biotina se gsete liber sau combinat fie cu lisina (biocitina), fie cu proteine. n intestin biotina este eliberat de biotinaz pancreatic i absorbit printr-un proces activ Nadependent. Biotina funcioneaz ca grupare prostetic pentru enzimele ce catalizeaz reaciile de carboxilare, servind astfel drept cru pentr u CO2 activat. 68

B i o t i n e n z i m a + H C O + A T P 3

C O i o t i n e n z i m a + A D P + P 2 b a

s u b s t r a t

s u b s t r a t c a r b o x i l a t

Astfel, biotin-enzima ncarc gruparea carboxil pe biotin rezultnd carboxi-biotin-enzima, care transport gruparea carboxil pe un substrat acceptor. Exemle de enzime biotin-dependente: - piruvat carboxilaza, care catalizeaz carboxilarea piruvatului la oxalil-acetat. - acetil- CoA carboxilaza, care catalizeaz formarea malonil- CoA. La om necesarul de biotin este de 150- 300 g pe zi i este n mare msur asigurat de flora intestinal. Cantiti suficiente se gsesc alimentaia carnat, glbenu, cereale i legume. Carena provocat experimental se manifest prin dermatit seboreic, anorexie, oboseal, insomnii, parestezii. Stri careniale se cunosc la sugarii cu deficit genetic privind enzima responsabil de ataarea biotinei la componenta carboxilazic. Semnele clinice sunt:cetoza metabolic, cu creterea lactocidemiei i o eliminare anormal de acid propionic n urin. n terapie, biotina este de obicei inclus n preparatele polivitaminice.

Acidul folic (folacina) La fel ca i alte vitamine din complexul B, acidul folic este factor de cretere pentru microorganisme. Denumirea de acid folic se datoreaz faptului c prima substan descoperit din acest grup de vitamine a fost izolat din frunze de spanac i s-a dovedit c are caracter acid.

69

Luciana Dobjanschi

Din punct de vedere structural acidul folic conine n structura sa acid pteroic i un lan -glutamil peptidic.
O H N H N C H 2 N C O O H C ON HC H C H 2 H N N N 2 C H 2 C O C O O H N HC H C H 2 C H 2 C O O H

Acizii folici pot s fie: - acizi pteroil monoglutamic - acizi pteroil poliglutamici La plantele exist sub form de complex heptaglutamic, iar n ficat predomin conjugatul pentaglutamic. Spre deosebire de plante i microorganisme, organismul animal este incapabil s sintetizeze acid pteroilmonoglutamic. n intestine acizii pteroil poliglutamici sunt hidrolizai cu enzime specifice rezultnd derivatul monoglutamic, care se absorbe n circulaia mezenteric. n celulele intestinale acidul folic este n mare parte redus la THF (FH4). Aproximativ 2/3 din folatul absorbit se leag de proteinele plasmatice. Hidrogenarea acidului folic sub aciunea folat-reductazei NADPHdependente are loc n 2 etape, intermediar formndu-se DHF.

70

O H N HR N C H 2 N f o l a tr e d u c t a z a

O H N HR N C H 2 N f o l a tr e d u c t a z a

H N N N 2

+ + + A D P H H N A D P H N N N H N + + N + 2 N A D P H H A D P

H O HH H HR N C H 2 N N H N N N H 2 H T H F D H F

THF reprezint metabolitul activ i servete drept coenzim n reaciile de transfer sau interconversiunea gruprilor cu un C, numite i fragmente C1 active. Donorii de grupri C1 active sunt: serina, histidina, acidul formic. Acidul folic particip la biosinteza nucleotidelor i a acizilor nucleici, care au un rol important n biosinteza proteinelor. Deasemenea acizii folici controleaz procesul de cretere i hematopoeza. Organismul uman este dependent de aportul de folat furnizat de legumele cu frunze i carne. Acidul folic nu rezist la temperatura de preparare culinar. Necesarul zilnic este de 400 g, care crete n sarcin i alptare, n sindroame de malabsorbie intestinal la alcoolici, la bolnavii cu anemie hemolitic sau cancer cu evoluie rapid. Carena poate fi indus medicamentos prin administrare de antifolice sau la tratament ndelungat cu: fenobarbital, fenitoina, primidona, care cresc nevoia de folat. Deficiena folic acut cuprinde manifestri digestive i dermice. Carena cronic se caracterizeaz prin tulburri de cretere, dereglri de hematopeoz ce conduc la anemia megaloblastic, leucopenie, trombocitopenie. Acidul folic se administreaz ca biostimulator general, ca factor antianemic n diferite forme de anemie, mai ales macrocitar, n leucopenia secundar, chimio- sau radioterapia bolii maligne. Acidul folic este contraindicat persoanelor peste 60 de ani deoarece poate stimula un process neoplazic latent. Uneori acidul folic se asociaz cu vitamina B12 sau cu preparate pe baz de fier.

71

Luciana Dobjanschi

Antifolice ( Antagoniti folici) Antifolicele sunt substane care se aseamn structural cu acidul folc i sunt inhibitori ai unor enzime implicate n biosintez. Multe antifolice i-au gsit aplicabilitate terapeutic. Exemple: - Sulfamidele i sulfonele sunt utilizate ca antibacteriene i interfereaz inserarea PAB n structura acidului folic, acionnd asupra dihidropteroat sintetazei, care catalizeaz etapa intermediar n sinteza de folat. - Trimetoprimul este inhibitor al folat reductazei - Metotrexatul este folosit n leucemie i psoroazis. n tratamentul ndelungat cu antifolice apare o caren folic. Carena poate fi compensat prin administrare de acid folinic, care se administreaz oral sau parenteral sub form de folinat de Ca. Vitamina B12 Vitamina B12 sau ciancobalamina ndeplinete rol de vitamin pentru om i este factor de cretere pentru microorganisme. Poart indicele 12 deoarece este al 12-lea compus izolat din complexul B. Din punct de vedere structural vitamina B12 are o structur foarte complex. Asfel, ea conine o parte intern,reprezentat de un schelet tetrapirolic numit corrina. Nucleul corinic din partea central difer de cel al hemului prin urmtoarele elemente: n centru se afl ionul Co+ - sistemul tetrapirolic este mai saturat - dou nuclee pirolice sunt unite direct ntre ele - are un numr mai mare de substituieni, majoritatea lor cu grupri amidice. Deasemenea vitamina B12 mai conine i o parte extern reprezentat de un nucleotid cu riboz. El este unit prin dou legturi cu regiunea central: una direct ntre unul din atomii de N ai benzimidazolului i ionul monovalent de cobalt, iar a doua legtur se realizeaz prin intermediul restului de acid fosforic al nucleotidului cu riboz i o caten ataat la unul din cele patru nuclee pirolice.

72

R
R :C N ,O H ,C H 3

N N + C o N N

n u c le o tid
Vitamina B12 este sintetizat exclusiv de ctre bacterii anaerobe, dar se gsete i n esuturile animale, mai ales n ficat. Absorbia ei este mediat de receptori specifici din ileum, dup prealabila cuplare cu un factor intrinsec (CASTLE). Acesta este o glicoprotein cu specificitate absolut pentru vitamina B12, secretat de celulele parietale din mucoasa gastric. Dup desprindere de factorul intrinsic cobalamina trece n circulaia portal, unde se leag de o protein plasmatic transportoare, numit trancobalamina II. n esuturi se elibereaz ca hidroxicobalamina, fiind apoi transformat n metilcobalamin. Ficatul stocheaz cantiti de ordinul mg, pentru lungi perioade, graie legrii de o alt protein, numit transcobalamina I. Funciile biochimice ale vitaminei B12 Enzimele cobalaminice funcioneaz n metabolimul gruprilor cu un C, fiind ntlnite n 3 tipuri de reacii: 1. reacii de rearanjament intramolecular 2. reacii de metilare 3. reacii de reducere a ribonucleotidelor la dezoxiribonucleotide. n esutul mamiferelor se cunosc dou procese dependente de cobalamine: - izomerizarea metal-malonil CoA la succinil CoA

73

Luciana Dobjanschi

C O O H C H H 2C m u t a z a C H H O O H 2 C 2 C C O S C o A

OS C o A H C

transformarea homocisteinei n metionin

H C H 3 2 S C N m e t i lT H F
5

C H 2 H O C b l H C H N 2 C O O H

m e t i o n i n a

T H F

M e C b l

C H H 2 S C H 2 C H N H 2 C O O H h o m o c i s t e i n a

Deficitul de cobalamin se repercut negativ asupra sintezei de metionin, cu consecine privind biosinteza proteic i regenerarea de THF. Vitamina B12 este esenial alturi de folat, pentru creterea i maturarea celulelor, mai cu seam a celor cu ritm intens de proliferare. Deasemenea cobalamina este necesar pentru funcia mduvei hematogene, a aparatului digestiv i a sistemului nervos. Prin participarea la sistemul metioninei este un factor lipotrop, protejnd ficatul de ncrcarea cu grsimi. Carena cobalaminic apare rar, deoarece alimentaia carnal ofer necesarul (cca 10 mg/zi), existnd avantajul termostabilitii. Cauza principal este absena factorului intrinsec datorit incapacitii mucoasei gastrice de a-l produce n afeciuni gastrice, rezecii sau constituional prin defect genetic de sintez, ori prin mecanism autoimun. Carena este rar provocat prin lips de aport, n regim exclusiv vegetarian prelungit, n sindrom de malabsorbie intestinal, dup 74

tratament cu neomicin, metformin, antiepileptice, n disbioz intestinal. Maladia produs n carena de vitamina B12 este anemia pernicioas (anemia Biermer). Clinic aceasta se manifest prin: paloare, astenie (sindrom anemic), inapeten, grea, emez, balonri, tulburri de transit (sindrom de transit), neuropatie. Anemia biermerian face parte dintre anemiile megaloblastice, majoritatea cauzate prin deficiena vitaminei B12 i/sau a acidului folic, ce determin perturbri n sinteza acizilor nucleici, implicnd suferina tuturor sistemelor celulare. Apare astfel hematopoeza ineficient cu deviaie megaloblastic, consecina fiind producerea insuficient a elementelor liniilor celulare ale sngelui i n special a seriei roii. Astfel n sngele periferic se evideniaz: pancitopenia, megalocitoza, magaloblastoza, celule cu alte modificri morfologice, fragile. Diagnosticul diferenial n anemia megaloblastic se face prin dozarea cobalaminei n plasm, prin testarea absorbiei intestinale, administrarea de vitamina B12 marcat i msurarea radioactivitii n urin. n anemia pernicioas tratamentul ncepe cu doze de atac de vitamina B12, parenteral, care pe msura ameliorrii simptomelor se reduce la doze de ntreinere administrate cu intermiten toat viaa. Alte indicaii ale viatminei B12 sunt n : neuropatii, ciroz, hepatite, stri de malnutriie. n terapie se folosesc ciancobalamina i hidroxicobalamina. Vitamina C Vitamina C poart i numele de acid ascorbic deoarece este o substan cu caracter acid, iar carena sa n organism provoac scorbut. Din punct de vedere structural vitamina C este numit i lactona acidului 2,3-dienol- L- gulonic. Structura sa este extrem de labil prin expunere la aer, iar n soluii alcaline trece n acid dehidroascorbic. Ambele forme sunt active i apar n esuturi.

75

Luciana Dobjanschi

O C H O H O H C C C H H O C H OH 2 a c id L a s c o rb ic O O O H

O C C C C C H O

H O C

C H OH 2 a c id L d e h id ro a s c o rb ic

Transformarea acidului L-ascorbic n acid L-dehidroascorbic poate fi efectuat de L-ascorbat oxidaza, enzim ce conine Cu. Vitamina C este una din cele mai rspndite vitamine, fiind sintetizat de majoritatea speciilor vegetale i animale din glucoz. Excepie sunt primatele, cobaiul i alte cteva specii, posesori ai unor enzimopatii genetice, fiind incapabili s efectueze etapa final din lanul metabolic de biosintez, adic conversia L-gulono-lactonei n acid ascorbic. Acizii ascorbic i dehidroascorbic se absorb aproape n totalitate n intestin i se distribuie extra- i intracelular. La un aport adecvat rezervele satisfac necesitile cteva luni consecutive lipsei de alimentaie. Dozele foarte mari de vitamina C satureaz depozitele i depete pragul renal de eliminare. Deci dozele mari de vitamina C sunt excretate urinar, astfel c administrarea excesiv este inutil. n esuturi vitamina C este transformat n mic msur prin oxidare.

76

O C H OC H OC HC H OC H C H O H 2 a c i d L a s c o r b i c O

O C O CO OC HC H OC H

O C O O H C O H CO CO HCO H H OCH C H O H 2 H O CH C H O H 2 a c i d L t r e o n i c
+ 2 C a

C O O H O o x a l a t d e C a CO H H CO H

C H O H 2 a c i d L d e h i d r o a s c o r b i ca c i d 2 , 3 d i c e t o g u l o n i c

Vitamina C se elimin urinar, n proporie mare netransformat, cantitatea de acid ascorbic excretat normal fiind pn la 1%. Oxalatul de calciu poate ns precipita n cile renale cauznd litiaza oxalic. Rolul vitaminei C Acidul ascorbic are un potenial reductor destul de mare, fiind astfel capabil s reduc oxigenul molecular, nitraii, citocromii a i c, methemoglobina. Cuplul ascorbat-dehidroascorbat funcioneaz ca sistem redox activ ntr-o serie de procese biochimice. Exemplu: - n reaciile de hidroxilare din: - metabolismul aminoacizilor aromatici o metabolismul prolinei, lisinei o biosinteza noradrenalnei o biotransformarea medicamentelor Dozele mari de vitamina C stimuleaz absorbia Fe, reducndu-l la ion feros, forma favorabil absorbiei, iar concentraiile fiziologice cresc ncorporarea Fe n feritina. Se consider c acidul ascorbic este necesar procesului de cretere, pentru integritatea tegumentelor, n buna funcionare a aparatului cardiovascular. De asemenea i se atribuie un rol n procesul de aprare imunitar, n mrirea rezistenei la efort, n hematopeoz. Necesarul de vitamina C este de 1mg/kgcorp/zi la adultul sntos i este asigurat n primul rnd de vegetalele proaspete, crude. Cerinele sunt crescute n sarcin, alptare, frig, condiii de munc grea, boli infecioase, cancer i dependent de vrst. Carena este reprezentat de scorbut. Pot s apar stri de subcaren, n special la sfritul iernii. Se manifest prin: tendina la 77

Luciana Dobjanschi

hemoragii, n special gingivale, echimoze, hiperkeratoza folicular, dureri articulare (osteoporoza), anorexie, tulburri de tranzit intestinal, anemie, astenie. Acidul ascorbic este necesar formelor active ale unor enzime (dioxigenaze cu enzime), acionnd probabil prin meninerea metalului la valena sa inferioar. Indicaiile vitaminei C sunt profilactice i de corectare a simptomelor careniale, n boli infecioase, n pediatrie, n methemoglobinemie, astenie, asociat preparatelor cu Fe. Nu se cunosc efecte toxice, dar n caz de supradozare poate fi duntoare la subiecii cu predispoziie la oxaloz sau deranjeaz absorbia unor vitamine ca: B12 sau a altor medicamente simultan ingerate.

78

VI. Enzime Enzimele sunt proteine ce posed o funcie nalt specializat i anume aceea de biocataliz i se deosebesc de catalizatorii din lumea nevie prin cteva proprieti care le definesc. Enzimele se caracterizeaz prin urmtoarele proprieti: - capacitatea catalitic mare, eficiena catalitic crete cu un factor de 106 1012 fa de reacia necatalizat. - Specificitatea superioar de reacie elimin formarea de produi secundari - Activitile catalitice enzimatice sunt reglate prin mecanisme diferite, care privesc fie aciunea lor, fie cantitatea de enzim sintetizat. Controlul enzimatic are semnificaie major pentru reglarea metabolismului celular. - Enzimele acioneaz n condiii foarte blnde i anume la temperatura celulelor vii, la pH aproape neutru i la presiune atmosferic. Nomenclatur i clasificare Mult vreme enzimele au fost denumite prin adugarea sufixului aza la numele substratului. Ex. Amilaza, ureeza, alcool dehidrogenaza. Unele denumiri ns nu includeau nici substratul, nici reacia catalizat. Ex. Tripsina, pepsina, catalaza. Datorit faptului c numrul de enzime este n continu cretere, nomenclatura veche crea confuzii, astfel c s-a impus introducerea unei terminologii unitare i a unei clasificri adecvate. n 1961, Comisia de Enzime a Uniunii Internaionale de Biochimie, adopt o claisficare i o nomenclatur sistematic, bazat pe natura reaciei chimice catalizate. Astfel, enzimele au fost clasificate n 6 clase, fiecare cuprinznd un numr de subclase i, respectiv subsubclase. 1. Oxidoreductaze enzime ce catalizeaz reaciile de oxidoreducere. 2. Transferaze enzime ce catalizeaz reaciile de transfer de grupri funcionale. 3. Hidrolaze enzime ce catalizeaz reaciile de hidroliz. 4. Liaze enzime ce catalizeaz reaciile de descompunere a substratului prin alte mecanisme dect cele de oxidare i hidroliz. 79

Luciana Dobjanschi

5. Izomeraze enzime ce catalizeaz reacii de interconversiune a izomerilor. 6. Ligaze enzime ce catalizeaz reacii de formare a legturii C-O, C-C, C-S, C-N, cuplat cu scindarea unui compus macroergic (ATP). Pentru a defini o enzim, fiecruia i se atribuie un numr sistematic format din numele substratelor, urmat de cuvntul ce indic tipul de reacie catalizat, la care adaug sufixul aza. Deasemenea, fiecrei enzime i se atribuie un cod determinat de poziia pe care enzima o ocup n sistemul zecimal. Exemplu: Acest numr de clasificare este alctuit din iniialele EC (Comisia de enzime) i 4 cifre. Prima cifr indic clasa din care face parte enzima, a doua indic subclasa, determinat de felul gruprii implicate n reacie, a treia cifr reprezint subsubclasa , adic natura particular a substratelor din grupul respectiv, iar a patra cifr reprezint poziia ocupat de enzim n subsubclas. - alcool dehidrogenaza: E.C. 1.1.1.1. - glucozooxidaza: E.C. 1.1.3.4. Structura enzimelor n cea mai mare parte, enzimele sunt proteine globulare. Excepie face ribonucleaza P. O mic proporie de enzime sunt proteine simple (pepsina, chimotripsina, lizozim), iar celelalte sunt heteroproteine (metaloenzime, dehidrogenaze piridinice). Unele enzime sunt alctuite sunt alctuite dintr-un singur lan polipeptidic (ribonucleaza), altele din mai multe lanuri identice sau diferite. Masa molecular a enzimelor este extrem de variabil datorit lungimii lanurilor polipeptidicre componente, ct i datorit asocierii unui numr diferit de subuniti, ca n cazul enzimelor oligomer. Pe lng aceste aspecte legate de structur, la enzime mai apar anumite caracteristici specifice lor: - identificarea centrului catalitic, i, la enzimele allosterice i a centrilor allosterici. - Cunoaterea cofactorilor enzimatici ct i locul lor n ansamblul structural enzimatic. Cofactorii enzimatici sunt componente micromoleculare indispensabile activitii unui numr mare de enzime. 80

Cofactorul poate s fie un ion metalic sau o molecul organic specific, uneori sunt cerui ambii i foarte rar cofactorul este un anion anorganic. 1. Metalele n cataliza enzimatic Un numr mare de enzime cer pentru a-i manifesta activitatea ioni metalici.Zn+2 , Mn+2 , Mo+2 , Co+3 , Fe+3 , Cu+2 , Mg+2 , K+ , Na+ , Ca+2 . Unele enzime care conin o cantitate definit de ion metalic funcional, fiind strns legat n structura lor se numesc metalo-enzime, iar altele care leag slab metalu se numesc enzime metalo-activate. Exemple: anhidraza carbonic: Zn+2 enzimele heminice: Fe+3 piruvat kinaza : Mg+2 , K+ 2.Cofactorii de natur organic sunt sisteme conjugate n care mobilitatea electronic este foarte mare, ceea ce explic puterea lor catalitic. Cofactorii slab legai de enzim sau ataai temporar se numesc coenzime. Exemplu: acid lipoic, coenzima Q, biopterinele, NAD+, NADP+, FAD, CoA. Centrul activ al enzimei ( centrul catalitic) Centrul activ al enzimei este o zon restrns din structura enzimei responsabil direct de funcia ei catalitic, aceea de legare i transformare a substratului. Aceast regiune reprezint la majoritatea enzimelor cca 5% din total. Ca entitate tridimensional centrul activ poate cuprinde o poriune sau mai multe din acelai lan, ori din lanuri diferite, apropiate spaial. Exemplu: Din centrul activ al ribonucleazei fac parte: His12, His119, Lys41. Aceti aminoacizi dei sunt situai la distan n structura liniar, sunt apropiai n structura teriar, datorit plierii lanului. Centrii activi conin resturi de aminoacizi i eventual cofactori cu rol de a recunoate i lega substratul sau care particip n transformarea lor chimic, uneori aceti aminoacizi ndeplinind ambele funcii. Ali aminoacizi aflai la distane variabile de centrul activ contribuie la stabilitatea structurii proteice, sunt resturi structurale, considerate alturi de resturile catalitice i de legare ca eseniale pentru activitatea enzimei.

81

Luciana Dobjanschi

De fapt, n procesul catalitic particip indirect ntreaga molecul. Activitatea este condiionat de existena conformaiei native a structurii enzimatice. Aminoacizii care nu particip n nici un fel la actul catalitic sunt numii resturi neeseniale, ele conferind moleculei anumite proprieti fizico- chimice. Factorii care influeneaz activitatea enzimatic n reaciile enzimatice viteza de reacie se msoar fie prin cantitatea de substrat transformat, fie prin cantitatea de produs format, exprimat n molaritate, iar timpul se exprim n minute. Viteza unei reacii enzimatice poate fi influenat de un numr de factori, dintre care amintim: concentraia de enzim, concentraia de substrat, temperatura, pH, inhibitori. 1. Influena concentraiei de enzim Viteza unei reacii enzimatice arat o dependen liniar de concentraia enzimei, n condiiile n care concentraia de substrat este fix.

[ E] Dependena vitezei de reacie de concentraia de enzim

82

Abaterile de la liniaritate se datoreaz erorilor tehnice sau existenei unui inhibitor ce acioneaz numai la o anumit concentraie.

2. Influena concentraiei de substrat.teoria Michaelis-Menten De exemplu s presupunem urmtoarea reacie catalizat de enzim:
k 1 E + S k 2 E S k 3 E + P

Pentru enzimele michaeliene, dependena vitezei de reacie de concentraia de substrat este descris ca o hiperbol, la o concentraie de enzim constant. 3. Inhibitorii enzimelor Inhibiia reprezint scderea parial sau pierderea activitii enzimatice ca urmare a legrii de enzim a unui compus numit inhibitor. Inhibiia poate s fie un proces reversibil sau ireversibil. a. Inhibiia reversibil n cazul inhibiiei reversibile inhibitorul se combin cu enzima sau cu complexul ES, iar prin ndeprtarea inhibitorului activitatea enzimei se restabilete.
E + I k 1 k 2 E S + I K i E S I E I [ E ] [ I ] K i= [ E I ]

Eficiena unui inhibitor se msoar prin Ki. Cu ct valoarea Ki este mai mic cu att inhibitorul este mai efficient. Inhibiia reversibil este de dou tipuri competitiv i necompetitiv. Inhibiia competitiv 83

Luciana Dobjanschi

n cazul inhibiiei competitive inhibitorul intr n competiie cu substratul pentru acelai loc de legare la situsul activ al enzimei.

E + S E + I

E S E I

E + P E + P

[ E ] [ I ] K i = [ E I ]

n cazul inhibiiei competitive inhibitorul este un analog structural al substratului. Exemplu:

C H O O H 2 C C H O O H 2 C

F A D

O O H H CC H O O CC H

F A D H 2

Enzima succinat dehidrogenaza, care catalizeaz aceast reacie, este inhibat competitiv de analogi structurali, ca de exemplu: acid malonic, acid oxalilacetic, acid oxalic. Aceti acizi dicarboxilici se pot lega de centrul activ al enzimei la fel ca i succinatul. Inhibiia necompetitiv are loc prin legarea inhibitorului la un loc diferit de centrul activ al enzimei, rezultnd un complex ternar ESI. Inhibitorul poate interaciona fie cu enzima liber, fie cu complexul ES.

E + S + I K i E I + S
84

E S + I K i E S I

E + P

V m a x V ' m a x = 1 + [ I ] / K i

Un alt tip de inhibiie reversibil este inhibiia necompetitiv (incompetitiv ), care are loc atunci cnd se formeaz complexul ternar ESI, ca urmare a interaciunii I cu complexul ES, cnd are loc scderea valorii Km i Vmax. b. Inhibiia ireversibil Inhibiia ireversibil este consecina legrii covalente a inhibitorului de enzim sau de complexul ES, el neputnd fi ndeprtat. E +P E S E +S

+ I

+ I

E I inactivi

E S I

Capacitatea inhibitorului ireversibil este msurat printr-o constant de vitez care exprim fraciunea de enzim inhibat ntr-o perioad definit de timp la o anumit concentraie de inhibitor. Inhibitorii ireversibili sunt toxici, fiind numii i otrvuri enzimatice. Exemplu: metalele grele, agenii oxidani, organofosforicele, compui ai arseniului. Semnificaia i importana practic a inhibiiei enzimatice 1. Inhibiia enzimatic este o modalitate important de control metabolic. 2. Unele toxice i exercit aciunea datorit calitii lor de inhibitori enzimatici ireversibili. Exemplu: insecticidele 3. Inhibitorii enzimatici au aplicabilitate n toxicologia clinic, servind ca antidoturi. Exemplu: etanolul este folosit ca antidot n intoxicaiile cu metanol i etilenglicol. 85

Luciana Dobjanschi

4. Utilizarea inhibitorilor n enzimologie pentru identificarea mecanismului de aciune i a centrilor activi. 5. Inhibiia enzimatic este un instrument terapeutic polivalent. Exemplu: agenii chimioterapici, antiinflamatoarele nesteroidiene. 4. Influena temperaturii asupra activitii enzimatice Viteza reaciei enzimatice crete odat cu temperatura, n intervalul n care enzima respectiv este stabil, datorit creterii energiei cinetice a reactanilor. n multe procese biologice o cretere a temperaturii cu 100 C duce la dublarea sau triplarea vitezei de reacie. Temperatura optim pentru majoritatea enzimelor este temperatura celulelor n care acestea se gsesc. Peste temperatura de 50 600 C majoritatea enzimelor sunt inactive. Excepie fac unele microorganisme termofile ale cror enzime sunt active i la 800C. 5. Efectul pH-ului asupra activitii enzimatice. Enzimele sunt stabile ntr-un domeniu relativ ngust de pH, domeniu n care se gsete o valoare, numit pH optim, pentru care activitatea unei enzime este maxim. Majoritatea enzimelor au pH-ul optim n jurul pH-ului fiziologic de 7,4. Excepii fac enzimele digestive pentru care pH-ul optim este cel acid, monoaminooxidazele din membrana mitocondrial extern care au pH optim aproximativ 10. Exist unele enzime a cror activitate este independent de pH ( pepsina ).

86

VII. METABOLISM Metabolismul reprezint totalitatea transformrilor de substan, energie i informaie, care au loc ntr-un organism viu. Metabolismul general prezint dou aspecte eseniale: catabolismul i anabolismul. Catabolismul reprezint totalitatea reaciilor de degradare din organism, iar aceste reacii sunt frecvent procese de oxido-reducere, care au loc cu eliberare de energie. Energia eliberat este conservat sub forma legturilor macroergice din ATP. Energia nmagazinat n ATP este utilizat n procese de biosintez a biomoleculelor, care sunt substane cu molecul mare. Cu mare specificitate i cu nivel nalt de organizare. Totalitatea proceselor de biosintez din organism constituie anabolismul. Spre deosebire de procesele catabolice, procesele anabolice decurg cu consum de energie, fiind endergonice. Energia necesar proceselor de biosintez este asigurat de hidroliza legturii macroergice din ATP. Pe lng procesul cu caracter catabolic sau anabolic, n celule mai au loc transformri ale constituenilor si, care au concomitent att caracter catabolic ct i anabolic. Acestea se numesc procese amfibolice. n cadrul acestor procese pot rezulta compui care pot fi catabolizai sau care pot fi utilizai n procese de biosintez. Totalitatea transformrilor pe care le sufer anumii compui de la ingestia sau biosinteza lor pn eliminarea lor din organism se numete metabolism intermediar. Degradarea constituenilor organici fundamentali ai celulei vii (proteine, glucide i lipide) se desfoar n mai multe stadii: Moleculele mari a acestor compui sunt degradate cu eliberarea unitilor lor structurale fundamentale; II. Produii rezultai n primul stadiu sunt transformai pe ci specifice ntr-un numr mic de molecule simple, printre care predomin acetil-CoA; III. Compuii rezultai n al doilea stadiu sunt transformai n dioxid de carbon i ap pe o cale numit ciclul citratului; IV. Echivalenii de hidrogen preluai de la metaboliii din stadiile anterioare sunt oxidai cu formare de ap prin intermediul lanului respirator. Stadiile I i II sunt specifice pentru fiecare categorie de compui, iar stadiile III i IV sunt caracteristice transformrii glucidelor, lipidelor i proteinelor. I.

87

Luciana Dobjanschi

Cea mai important cale de formare de dioxid de carbon n celul este ciclul citric sau ciclul acizilor tricarboxilici sau ciclul lui Krebs.
I proteine polizaharide lipide

aminoaacizi

monozaharide

acizi grasi glicerina

II acetil-CoA

III

CAT
CO2 2H 2H 2H

2H IV O2 lantul respirator H 2O

oxidare biologica

CO2

88

VIII. CICLUL ACIZILOR TRICARBOXILICI Respiraia este procesul prin care celula aerob obine energie n urma oxidrii moleculelor de combustibil de ctre oxigenul molecular. Ciclul acizilor tricarboxilici este calea metabolic central cea mai obinuit pentru degradarea resturilor de acetil-CoA rezultate prin catabolizarea glucidelor, acizilor grai i aminoacizilor. Ciclul acizilor tricarboxilici este o secven ciclic, care are loc n toate celulele aerobe. Se mai numete i ciclul acidului citric sau ciclul lui Krebs. Aceast secven de reacii este catalizat de un sistem multienzimatic care primete gruparea acetil de la acetil-CoA drept combustibil i o descompune n dioxid de carbon i echivaleni reductori. Acetia sunt apoi condui printr-un lan de proteine transportoare de electroni la oxigen, care este redus pentru a forma ap. Din schema prezentat mai sus se constat c acetil-CoA rezultat n urma procesului de catabolizare a principalelor biomolecule, intr n ciclul acizilor tricarboxilici. n unele cazuri, ns, n urma procesului de catabolizare a acestor biomolecule nu rezult acetil-CoA, ci piruvat. Piruvatul ca s poat intra n ciclul acizilor tricarboxilici trebuie s se transforme, n prealabil, n acetil-CoA.

89

Luciana Dobjanschi
a m in o a c iz i g lu c o z a a c iz i g r a s i

p ir u v a t CO 2H a c e til-C o A o x a lila c e ta t c itr a t

2

m a la t

[c is -a c o n ita t]

fu m a r a t

iz o c itr a t CO

s u c c in a t s u c c in il-C o A

-c e to g lu ta r a t CO 2H
2

2H

2H

2H

NAD

fla v o p r o te in e

ADP + P ATP

c o e n z im a Q

c ito c r o m b tr a n sp o r tu l d e e si fo s fo r ila r e a o x id a tiv a d in la n tu l r e s p ir a to r c ito c r o m c ADP + P c ito c r o m a 3 ATP

-

ADP + P ATP

2H

+ 1 /2 O

H 2O

90

Reaciile ciclului tricarboxilic. La nceput ciclul acizilor tricarboxilici reprezenta o simpl schem. Aceast schem a fost completat cu detalii privind enzimele care catalizeaz reaciile, ct i stereochimia reaciilor din ciclu. 1. Acidul citric este primul intermediar al ciclului acizilor tricarboxilici se formeaz prin condensarea acetil-CoA cu oxalilacetat.
C O C o A C H 2 C o A S O C C H + O = C C O O H 3
a c e t i l C o A c i t r a t s i n t e t a z a

H O 2

C O O H C H 2 C H 2 C O O H
a c i d c i t r i c

H O C C O O H C H 2

H O C C O O H

C H 2 C O O H
o x a l i l a c e t a t

C O O HC o A S H
c i t r o i l C o A

Aceast reacie este catalizat de citrat sintetaz, enzim ce determin formarea intermediar a citroil-CoA, care ulterior trece n acid citric. Citrat sintetaza are rol de enzim reglatoare, deoarece este inhibat de ATP i (NADH + H+), produsul final al fosforilrii oxidative. 2. A doua reacie a ciclului acizilor tricarboxilici este reprezentat de trecerea citratului n izocitrat, printr-un intermediar denumit acid cis-aconitic.
C O O H C H 2 H O C C O O H C H 2 C O O H
a c i d c i t r i c

C O O H H O 2 C H
2

C O O H H O 2 C H 2 C H C O O H H O C H C O O H
a c i d i z o c i t r i c

C C O O H C H C O O H
a c i d c i s a c o n i t i c

Enzima care catalizeaz aceast reacie se numete aconitaz, care este activat i stabilizat de Fe+2 i de cistein. Aceast reacie este stereospecific, adiia apei la cis-aconitat este o trans adiie. 3. Oxidarea izocitratului la -cetoglutarat este o reacie care are loc n prezen de izocitrat dehidrogenaz care necesit prezen de NAD+ sau NADP+.

91

Luciana Dobjanschi

C O O H C H 2 C H C O O H H O C H C O O H
a c i d i z o c i t r i c i z o c i t r a t d e h i d r o g e n a z a

C O O H C O 2 C H 2 C H 2 C = O N A D
+ +

N A D H + H

a c i d c e t o g l u t a r i c

C O O H

Izocitrat dehidrogenaza NAD dependent din mitocondrie necesit prezena ionilor de magneziu, este o enzim alosteric reglat de ADP, ca i activator specific i Mg+2. 4. A patra etap o constituie oxidarea -cetoglutaratului la succinil-CoA n prezena -cetoglutarat dehidrogenazei.
C O O H C H 2 C = O
a c i d c e t o g l u t a r i c
+ C H N A D + C o A 2 +

c e t o g l u t a r a t d e h i d r o g e n a z a

C O O H C H 2 + + C O + N A D H + H 2 C H 2 C O C o A
s u c c i n i l C o A

C O O H

Reacia este analoag oxidrii piruvatului la acetil-CoA i dioxid de carbon i are loc prin acelai mecanism, cu participarea tiamin-pirofosfatului, a acidului lipoic, a coenzimei A, FAD-ului i NAD-ului drept coenzime. 5. n etapa a cincea succinil-CoA sufer o pierdere a gruprii CoA, nu printr-o simpl reacie de hidroliz ci printr-o reacie conservatoare de energie. Reacia are loc n prezena succinil-CoA sintetazei, ca enzim, care provoac formarea legturii macroergice a GTP-ului, gin GDP i fosfat anorganic, pe seama legturii macroergice din succinil-CoA.
C O O H C H 2 C H 2 C O C o A
s u c c i n i l C o A s u c c i n i l C o A s i n t e t a z a

C O O H C H 2 C H 2 + G T P + C o A S H

+ P + G D P a

C O O H
A c i d s u c c i n i c

G D P+P a
92

G T P

s u c c i n i l C o A + P E a+

E s u c c f o s f a t+ C o A

E s u c c . f o s f a t
o s f a t +G D P E f

o s f a t+ s u c c i n a t Ef
E +G T P

6. n etapa urmtoare succinatul este oxidat la fumarat de flavoproteina succinat dehidrogenaza, care conine FAD legat covalent.

C O O H C H 2 C H 2

s u c c i n a t d e h i d r o g e n a z a

C O O H C H H C + F A D H 2

+ F A D

C O O H
A c i d s u c c i n i c

C O O H
A c i d f u m a r i c

Enzima este activat de succinat, fosfat, ATP i coenzima Q redus i inhibat de concentraii mici de oxalilacetat. Reacia este stereospecific, dehidrogenaza ndeprteaz atomii de hidrogen din poziia trans de la atomii de carbon metilenici ai succinatului. 7. Succinatul rezultat este apoi hidratat la L-malat n prezena enzimei fumarat dehidrogenaz sau fumaraz.
C O O H C H H C + H O 2
f u m a r a z a

C O O H H O C H C H 2 C O O H
A c i d m a l i c

C O O H
A c i d f u m a r i c

Fumaraza acioneaz stereospecific, deoarece ea formeaz numai stereoizomerul L al malatului. 8. n ultima reacie a ciclului L-malatul este oxidat la oxalilacetat n prezen de L-malat dehidrogenaz NAD dependent.

93

Luciana Dobjanschi

C O O H H O C H C H 2 C O O H
A c i d m a l i c
+ + N A D

C O O H O = C C H 2 C O O H
A c i d o x a l i l a c e t i c

+ N A D H + H

Reacie este strict stereospecific pentru stereoizomerul L al acidului malic. Oxalilacetatul rezultat poate reintra ntr-un nou ciclu condensndu-se cu acetil-CoA. Dac facem un bilan al ciclului se constat c pentru fiecare grupare acetil intrat n ciclu doi atomi de carbon formeaz dou molecule de dioxid de carbon, iar prin reacia de dehidrogenare enzimatic, care au loc, rezult patru perechi de atomi de hidrogen: trei dintre ele au fost utilizate la reducerea NAD+ i una la reducerea FAD. Aceste patru perechi de atomi de hidrogen vor ceda electronii, n cursul lanului respirator, oxigenului. Ecuaia global se poate scrie astfel:
A c C o A + 3 N A D + F A D + 2 H O + G D P + P 2 a 2 C O + C o A S H + 3 N A D H + 3 H + F A D H + G T P 2 2
+ +

Localizarea intracelular a enzimelor ciclului Cercetrile efectuate de Kennedy i Lehninger au demonstrat c mitocondriile izolate prin ultracentrifugare omogenatelor de esut hepatic, asigur transformarea tuturor intermediarilor ciclului citric, deci conin toate enzimele necesare acestui ciclu. Pe de alt parte nucleele, fraciunea microzomal i fraciunea solubil a citoplasmei erau inactive. Deci, mitocondriile hepatice conin toate enzimele necesare ciclului citric i enzimele necesare transportului de electroni. Deci, se constat c la toate animalele i plantele studiate pn n prezent, sediul desfurrii ciclului Krebs ce reprezint mitocondriile. X. METABOLISMUL GLUCIDIC Generaliti. Glucidele sau zaharurile sunt compui polihidroxicarbonilici (aldoze i cetoze). n funcie de capacitatea de a hidroliza glucidele se pot clasifica n monozaharide (zaharuri simple nehidrolizabile), 94

oligozaharide (formate din 2 10 resturi de monozaharide, legate prin intermediul legturilor glicozidice i care prin hidroliz elibereaz monozaharidele constituente) i polizaharide (formate din lanuri lungi, liniare sau ramificate de monozaharide, ce pot fi eliberate prin hidroliz. O categorie aparte o constituie glucidele conjugate glicoproteinele, glicolipidele (care prin hidroliz pun n libertate pe lng componenta glucidic i o component neglucidic numit aglicon). Rolul glucidelor n organism. Glucidele ndeplinesc n organism funcii variate. a. Glucidele sunt surse nemijlocite de energie. Astfel n toate organismele vii, sursa imediat de energie o constituie oxidarea glucozei. De exemplu, celulele nervoase sunt dependente de glucoz ca i surs de energie. b. Glucidele au rol de substane de rezerv. n organismele animale superioare i ale omului, glucoza poate constitui depozite de energie sub form de glicogen hepatic i muscular. La plante, substana major de rezerv glucidic este amidonul. c. Glucidele ndeplinesc roluri de substane structurale i de susinere. La animale, polizaharidele intr n structura esuturilor conective ale matricei osoase. d. Glucidele sunt substane cu funcii specifice. Mucopolizaharidele intr n structura substanelor de grup sangvin, particip la procesele imunitare, intr n structura heparinei, substan cu aciune anticoagulant. Digestia i absorbia glucidelor. n organismul animal, glucidele pot fi de origine exogen, introduse n organism sub form de alimente sau de origine endogen, rezultate n urma unor procese de biogenez. Cea mai mare parte din glucidele din organismul animalelor superioare i al omului este de origine exogen. Glucidele alimentare pot fi, la rndul lor, de natur vegetal sau animal. principala glucid de origine animal este glicogenul, ns cea mai mare parte a glucidelor alimentare const din amidon, glucid de origine vegetal, mai ales sub form de pine. n cantiti mai mici alimentele mai conin dizaharide ca zaharoza, lactoza, maltoza sau monozaharide ca glucoza sau fructoza. Pentru a putea fi utilizate de ctre organism, glucidele alimentare sunt n prealabil unui proces de digestie, urmat de un proces de absorbie. Digestia polizaharidelor ncepe n cavitatea 95

Luciana Dobjanschi

bucal sub aciunea amilazei salivare, care este o enzim hidrolitic secretat de glandele salivare. Sub aciunea acestei enzime, amidonul alimentar este hidrolizat sub form cu formare de dextrine, eventual maltoz. Aciunea acestei enzime este limitat timpul de contact pentru c alimentele rmn n gur un timp relativ scurt. n continuare, la nivelul stomacului sub aciunea sucului gastric asupra bolului alimentar, amilaza salivar este inactivat de aciditatea sucului gastric. La nivelul intestinului, glucidele alimentare sunt hidrolizate sub aciunea enzimelor pancreatice i a celor intestinale. Astfel, amilaza pancreatic acioneaz asupra amidonului i a glicogenului alimentar, pe care le hidrolizeaz cu formare intermediar de dextrine, pn la stadiul de maltoz. Asupra maltozei, precum i asupra altor dizaharide, acioneaz enzime coninute n sucul gastric. O serie de polizaharide, cum ar fi celuloza, nu sunt transformate n tubul digestiv al omului, care nu conine enzimele necesare acestor procese. Aceti compui trec, ca atare, n intestinul gros, unde sunt degradai n mic msur sub aciunea florei intestinale i sunt apoi eliminai prin fecale. Aadar, aceste polizaharide nu au rol n nutriie, cu sunt utile pentru digestie, deoarece regleaz peristaltismul intestinal. Ca rezultat al digestiei zaharurilor, n intestinul subire rezult o serie de monozaharide, printre care predomin glucoza, galactoza, fructoza, manoza precum i unele pentoze. Absorbia glucidelor are loc la nivelul intestinului subire sub form de monozaharide. Viteza de absorbie depinde de mai mui factori, printre care regiunea i starea de funcionare a intestinului, prezena unor anumite coenzime (tiamin, acid pantotenic) i hormoni (tiroxin). Absorbia monozaharidelor se pate face prin mecanisme fizice sau prin mecanisme biochimice. Monozaharidele provenite din absorbia intestinal ajung prin vena port la ficat, unde pot fi temporar depozitate sub form de glicogen, apoi trec n circulaia general ajungnd pe calea sangvin n toate celulele diferitelor organe i esuturi. n celule, glucidele pot suferi diferite transformri, care pot fi anabolice (n cadrul crora au loc sinteze de glucide din ali compui glucidici i neglucidici) i catabolice (n cadrul crora moleculele glucidice sunt degradate cu eliberare de energie).

96

Catabolismul glucidic Glucidele care servesc cel mai frecvent substrate al transformrilor catabolice la animale, plante i microorganisme este glucoza Schema metabolizrii glucozei
4

1 2

G -6 -P
3 6

o z e (3 -7 c ) +N A D P H+ H

p ir u v a t C O a 22 a c etil-C o A 2 C O 2
2 c

G -1 -P
7

9 8

g lic o g en

la c ta t + en er g ie

a c idg lu c u r o n ic

C A T
2 b

r ea c tii d ec o n j u g a r e v ita m in aC

la n tr esp ir a to r

H O + en er g ie 2

1 - fosforilarea glucozei, 2 glicoliza, 2a decarboxilarea oxidativ a piruvatului, 2b ciclul Krebs i lanul respirator, 2c, 3, 4 gluconeogeneza, 5 calea pentozofosfatului, 6 calea de interconversie n cei doi esteri ai glucozei, 7 gliconeogeneza, 9 glicogenoliza. Ficatul utilizeaz glucoza astfel: - o parte o utilizeaz pentru necesiti proprii; - o parte o depoziteaz sub form de glicogen; - cea mai mare parte este repus n circulaie pentru a servi altor esuturi. Glucoza i fructoza sunt transformate n ficat n glucoz, care reprezint forma principal de utilizare de ctre organismul animal. 97

Luciana Dobjanschi

n ficat: 25% din glucoz se transform pe calea 2; 2% din glucoz se transform pe calea 5; 18% din glucoz se transform pe calea 8; 55% din glucoz este repus n circulaie graie cii nr. 4, catalizat de ctre glucozo-6-fosfataz. Aceast cale este prezent n rinichi, intestin, lipsete din muchi, creier, esut adipos. Eritrocitele folosesc 90% din glucoz pe calea 2; 10% din glucoz pe calea 5. Creierul Nu face depozit de glicogen; Cnd nu primete glucoz pe cale sangvin rmne fr substrat glucidic, astfel c n caz de hipoglicemie, se ajunge uor la lipotimie. Calea nr. 1 - cale obligatorie pentru intrarea glucozei n transformri metabolice.
G + A T P
+ 2 M g

g l u c o k i n a z a h e x o k i n a z a

G 6 P+ A D P

procesul de fosforilare este endergo-dependent ireversibil; procesul are loc cu scderea entalpiei libere; enzime: glucokinaza (enzim specific) hexokinaza (enzim nespecific). Ambele enzime au rol cheie n metabolismul glucozei.

98

X.1. Glicoliza Calea nr. 2 ciclul Embden Meyerhof Parnas (glicoliza) procesul de degradare a glucozei pn la piruvat sau lactat; procesul are loc cu producere de energie; se desfoar n faza solubil a celulei (citoplasm), deoarece acolo se gsete ntregul set de enzime necesare desfurrii procesului.

Etapele glicolizei I degradarea glucozei pn la trioze (proces consumator de energie); II descompunerea glicerinaldehid-3-fosfatului pn la piruvat (proces n care se produce energie) I.
C H O H 2 O O H H O O H O H
A T P

g l u c o k i n a z a

C H O P 2 O O H H O

g l u c o z o 6 f o s f a t i z o m e r a z a

A D P

O H O H

C H O P 2 H O H 2 O C H O O H O H

C H O P 2 C = O
f o s f o f r u c t o k i n a z a

C H O P 2 H O P 2 O C H O O H O H

C H O H 2
f o s f o t r i o z o i z o m e r a z a

C H = O H C O H C H O P 2

II.
O C H = O g l i c e r i n a l d e h i d 3 f o s f a t H C O H C H O P 2
d e h i d r o g e n a z a

O O H o s f o g l i c e r o i l C Pf C O k i n a z a H C O H H C O H C H O P 2
A D P A T P

C H O P 2

+ N A D

N A D H + H

99

Luciana Dobjanschi
f o s f o g l i c e r a t m u t a z a

C O O H H C O P
e n o l a z a

C O O H
P C O p i r u v a t k i n a z a

C O O H C O H C H 2
A T P

C H 2 C H O H H 2 O A D P 2

C O O H C = O C H 3
l a c t a t d e h i d r o g e n a z a

C O O H H C O H C H 3
+ N A D

+ N A D H + H

Importana glicolizei - glicoliza este o etap obligatorie n procesul de degradare a glucozei, ca substrat energetic pn la dioxid de carbon i ap; - este cea mai important cale sub aspect cantitativ de degradare a glucozei; Bilanul energetic al glicolizei I - consum 2 ATP (reaciile 1 i 3) II - ctig 4 ATP (reaciile 7 i 10) 2 ATP Glicoliza este: - un proces metabolic cu bilan exergonic; - o important surs de energie att pentru esuturile ce lucreaz anaerob, ct i pentru cele ce lucreaz aerob. Fermentaia alcoolic Unele microorganisme (drojdia de bere) au capacitatea de a transforma glucoza n etanol cu eliberare de dioxid de carbon. Procesul se numete fermentaie alcoolic, i are un mers asemntor cu glicoliza pn la formare de acid piruvic. De aici, fermentaia alcoolic i are mersul su caracteristic. Astfel, ntr-o prim etap, acidul piruvic este decarboxilat, sub aciunea piruvat decarboxilazei.
p i r u v a t d e c a r b o x i l a z a H C C O C O O H 3 + 2 ( T P P , M g )

H C C H = O + C O 3 2

Acetaldehida rezultat este redus la alcool etilic, sub aciunea alcool dehidogenazei, care necesit prezena coenzimei NADH. 100

a l c o o l d e h i d r o g e n a z a + + H C C H O H + N A D H C C H = O + N A D H + H 3 2 3

Ecuaia global este:

g l u c o z a + 2 P + 2 A D P a

2 C H C H O H + 2 C O + 2 A T P + 2 H O 3 2 2 2

Procesul prezint importan industrial deosebit, deoarece st la baza fabricrii buturilor alcoolice de fermentaie. n fermentaia acetic, acetaldehida sub aciunea alcool dehidrogenazei, care are ca i coenzim NAD+, se transform n acid acetic.
H C C H = O + H O 3 2
+ N A D

H C C O O H 3
+ N A D H + H

Patologia metabolismului glucidic Desfurarea normal a metabolismului glucidic este controlat att la nivel molecular prin intermediul enzimelor reglatoare, ct i la nivel superior, de factorii de reglare cum sunt: hormonii, sistemul nervos. Starea de echilibru a metabolismului glucidic este indicat de glicemie, care reprezint concentraia glucozei din snge. n condiii fiziologie, la 12 ore de la ultima ingestie alimentar glicemia este cuprins ntre 80 i 120 mg%. Tulburprile metabolismului glucidic, mecanism deosebit de complex, se poate manifesta prin hiperglicemii, iar n form mai avansat prin glicozurie (apariia glucozei n urin) este diabetul zaharat, care const ntr-o alterare complex a ntregului metabolism intermediar, ndeosebi a celui glucidic n corelare cu cel lipidic. Diabetul zaharat implic i tulburri endocrine grave, mai ales a secreiei insulinei din pancreas. O alt categorie de tulburri ale metabolismului normal al glucidelor o constituie sindroamele hipoglicemice, care au la baz modificri patologice ale activitii principalilor factori de reglare i 101

Luciana Dobjanschi

control care intervin n metabolismul glucidic, respectiv hormonii pancreatici, insulina i glucagonul. n patologia metabolismului glucidic sunt ntlnite i boli de depozitare ale glicogenului, numite glicogenoze. Acestea sunt boli congenitale i familiale rare i sunt caracterizate prin depunerea n diverse esuturi i organe a unor cantiti neobinuite de glicogen.

XI. Metabolismul lipidic Lipidele sunt biomolecule organice, insolubile n ap ce se pot extrage din celule i esuturi cu solveni organici nepolari. Lipidele au cteva funcii biologice importante, servind drept: - componente structurale ale membranelor - forme de depozitare i de transport al combustibililor - nveli protector al multor organe - drept componente ale suprafeei celulare implicate n recunoaterea celular, n specificitatea de specie i imunitatea tisular. Unele substane din clasa lipidelor, cum sunt unele vitamine i hormoni au o important activitate biologic. Clasificarea lipidelor Din punct de vedere structural lipidele se mpart n: - I. Lipide simple : esteri ai acizilor grai cu glicerina (triacilgliceroli) - esteri ai acizilor grai cu alcooli superiori monocarboxilici (ceruri) - II. Lipide complexe: - glicerofosfolipide: esteri ai glicerinei cu acizi grai, compui azotai i un rest de acid fosforic - sfingolipide: conin un alcool (sfingozina), acizi grai, compui azotai i un rest de acid fosforic Exemple: - fosfolipide - glicolipide - sulfatide - aminolipide - lipoproteine 102

III. Derivai ai lipidelor sunt compui rezutai prin hidroliza lipidelor simple i complexe.

Exemple: - acizii grai: - saturai - nesaturai - glicerina - steroizi - aldehide grase - corpi cetonici Din punct de vedere funcional lipidele se mpart n : - I. Lipide de rezerv. Acestea sunt localizate n esutul adipos i sunt constituite n special din trigliceride de provenien exogen (alimentar) - II. Lipidele citoplasmatice sunt lipide complexe care alctuiesc elementul constant care variaz numai n funcie de natura esutului. XI.1. Structura i proprietile acizilor grai saturai Acizii grai sunt elemente constitutive ale diferitelor clase de lipide. n stare liber acizii grai se ntlnesc n cantiti mici n celule i esuturi. Acizii grai conin un lan de hidrocarbur saturat sau nesaturat i o grupare carboxilic terminal. Acizii grai din lipidele plantelor i animalelor superioare cuprind un numr par de atomi de C, n majoritate lanuri formate din 14-22 atomi de carbon. Acizii grai saturai pot exista ntr-un numr infinit de conformaii datorit faptului c legatura simpl permite rptaia liber a atomilor de carbon. Forma cea mai probabil este cea extins, cu un coninut minim de energie. Acizii grai nesaturai prezint conformaia cis. n cazul acizilor polinesaturai dublele legturi nu sunt niciodat conjugate. Acizii grai sunt insolubili n ap, dar solubili n solveni nepolari, de asemenea ei se solubilizeaz n NaOH i KOH cu formare de sruri numite spunuri. Acizii grai saturai sau nesaturai nu absorb lumina nici n vizibil nici n UV. Prin ncalzire cu KOH acizii grai polinesaturai pot fi izomerizai n acizi grai cu duble legturi conjugate, form sub care absorb lumina UV ntre 230-260 nm. Acizii grai nesaturai dau reacii de adiie la legtura dubl. Adiia de halogeni (iod) are utilitate practic n determinarea numrului de duble legturi din acizii grai liberi sau din acizii grai care alctuiesc lipidele. 103

Luciana Dobjanschi

Exemple de acizi grai saturai:

H C ( C H ) O O H a c i d b u t i r i c 3 2 2 C
H C( C H ) O O Ha c i d c a p r o n i c 3 2 4 C

H C( C H ) O O H 3 2 6 C

a c i d c a p r i l i c

H C( C H ) O O H a c i d c a p r i n i c 3 2 8 C H C( C H ) O O Ha c i d l a u r i c 3 2 1 0C

O O Ha c i d m i r i s t i c H C( C H ) 3 2 1 2 C H C ( C H ) O O H a c i d p a l m i t i c 3 2 1 4 C
H C( C H ) O O Ha c i d s t e a r i c 3 2 1 6 C H C( C H ) O O Ha c i d a r a h i d i c 3 2 1 8 C

H C( C H ) O O H a c i d l i g n o c e r i c 3 2 2 2 C

Acizii grai nesaturai se clasific n: - acizi monoenoici H C C H ( C H ) C O O H a c i d p a l m i t o l e i c ( C H ) H 3 2 7 2 5C

H C ( C H ) H C H ( C H ) O O H a c i d o l e i c 3 2 7C 2 7C - Acizi polienoici

H C ( C H ) C H C H ( C H ) C O O H a c i d l i n o l e i c C H C H C H 3 2 4 2 7 2
H C C H C H C H C H C H C H C H C H C H ( C H ) C O O H a c i d l i n o l e n i c 3 2 2 2 2 7

H C ( C H ) C H C H C H C H ( C H ) C O O H a c i d a r a h i d o n i c C H C H C H C H C H C H C H 3 2 4 2 2 3 2 2

Acizii linoleic, linolenic i arahidonic sun acizi grai eseniali.

104

XI.2. Metabolismul acizilor grai saturai Catabolismul acizilor grai Acizii grai se degradeaz prin cedarea succesiv a unor fragmente de 2 atomi de C, n urma unui proces de oxidare ce ar avea loc la nivelul carbonului din poziia n raport cu gruparea carboxil. Catabolismul acizilor grai presupune activarea i transportul acizilor grai saturai n mitocondrie unde are loc oxidarea propri-zis (-oxidarea). Activarea acizilor grai se face cu consum de ATP i participarea CoA cu formare de tioesteri, ce nu penetreaz membrana intern. Pentru traversarea barierei are loc o transesterificare de pe CoA pe o molecul carrier numit carnitin.
+ C H H ( C H ) N C H O O H c a r n i t i n a 2C 3 3 2C

O H
Activarea i transportul acizilor grai saturai Pentru activarea i transportul acizilor grai saturai sunt necesare anumite enzime: tiokinaze (acil CoA -sintetaze) i acil CoAtransferaze. Aceste enzime se gsesc n membrana mitocondrial extern, intramitocondrial precum i n microzomi. Activarea acizilor grai se realizeaz n membrana mitocondrial extern, dup care are loc transferul acidului gras activat cu ajutorul canitinei n mitocondrie, unde pune n libertate carnitina i acidul gras intr n procesul de -oxidare propriu-zis.
R C O O H A T P C o A S H + +

t i o k i n a z a
R C O S C o A a c i l t r a n s f e r a z a

c a r n i t i n a

c a r n i t i n a R C O S C o A

P P A M P +

a c i l t r a n s f e r a z a
a c i l c a r n i t i n a
o x i d a r e a a c i l c a r n i t i n a C o A S H

C o A

m e m b r a n a m i t o c o n d r i a l a e x t e r n a

m e m b r a n a m i t o c o n d r i a l am i t o c o n d r i e i n t e r n a

105

Luciana Dobjanschi

Oxidarea propriu-zis (- oxidarea) Procesul de -oxidare sau ciclul lui Lynen se desfoar n mitocondrie. Etapele procesului de -oxidare sunt urmtoarele: - dehidrogenarea de tip - - aditia stereospecific a moleculei de ap - dehidrogenare - clivare - (tioliz)
R C H H O S C o A 2 C 2 C
+ N A D a c il_ C o A _ d e h id ro g e n a z a + N A D H H +

L R

T P 3A

C H C H C O H O 2

S C o A

C H C H 2 O H

C O F A D

S C o A

d e h id ro g e n a z a F A D H 2 R C C H 2 O C O

L R

A T P 2

S C o A

C o A S H T C A+ L R

tio laza
H C C O S C o A 3 R C O S C o A T P 1 2A

Degradarea acizilor gra prin -oxidare are loc pe o cale alctuit di 2 reacii de dehidrogenare, ntrerupte de o hidratare i o scindare prin tioliz, cnd se pierd 2 atomi de C sub form de acetilCoA. Restul obinut, mai scurt cu e atomi de C repet calea pn este integral degradat la acetil- CoA. Acidul gras se oxideaz total pn la CO2, ap i energie.

106

Exemplu: Pentru oxidarea acidului palmitic care este format din 16 atomi de C, acesta trece de 7 ori prin procesul de -oxidare propriuzis, rezultnd la final 7 molecule de acetil-CoA. Bilanul energetic pentru oxidarea aciduli palmitic este urmtorul: Din cele 8 Ac-CoA ----- 8 x 12 ATP = 96 ATP n fiecare tur de -oxidare se formeaz 5 ATP---- 7 x 5ATP = 35 ATP n procesul de acticare se consum 1 ATP Total: 130 ATP / molecul de acid palmitic oxidat. Pe lng procesul de -oxidare se mai cunosc i alte procese de oxidare a acizilor grai cum ar fi: -oxidarea i - oxidarea. Catabolismul acizilor grai cu numr impar de atomi de carbon Oxidarea acizilor grai cu numr impar de atomi de carbon se realizeaz dup acelai model ca i -oxidarea i presupune aceleai etape: activarea, transportul n mitocondrie, integrarea n -oxidare. n final se ajunge la un rest cu 5 atomi de carbon. Acesta se scindeaz la acetil CoA i propionil-CoA. Propionil-CoA se transform n succinil-CoA, care intr n TCA.
C H C O O H 2 C O O H T C A H C C H 3 C H C O S C o A 2 p r o p i o n i l m u t a z a C O S C o A C O S C o A c a r b o x i l a z a C H 2 C H 3 C O 2

107

Luciana Dobjanschi

XII. Metabolismul proteinelor XII.1. Digestia i absorbia proteinelor Majoritatea compuilor cu azot ingerai de om sunt proteine. Deci, atunci cnd discutm digestia proteinelor, implicit discutm i digestia compuilor cu azot. Moleculele proteice intacte nu pot fi absorbite ca atare prin tractul gastro-intestinal la animalele adulte, dect n cazuri excepionale i foarte rare. Pentru a putea fi absorbite proteinele sunt hidrolizate la structuri cu molecule mai mici de aminoacizi sau peptide mici. Cu toate c proteinele au structuri complexe, ele sunt formate de un numr redus de aminoacizi (cca. 20) diferii, legai ntre ei prin legturi peptidice. Legtura peptidic se rupe uor conducnd la un amestec de aminoacizi liberi. Teoretic, o singur enzim specific poate asigura scindarea legturilor peptidice i deci digestia proteinelor. n realitate situaia este mai complex, deoarece enzimele digestive prezint a mare specificitate pentru localizarea respectivei polipeptide, localizarea punctului de hidroliz i natura aminoacizilor, care intervin n legtura peptidic respectiv. Cu toate c n alimentaie exist n mod obinuit milioane de proteine, el pot fi digerate de un numr redus de enzime proteolitice, ce pot fi clasificate n 2 mari grupe: exopeptidaze i endopeptidaze. Exopeptidazele au rolul de a ndeprta un aminoacid de la captul lanului prin hidroliza unei legturi peptidice cu obinerea unui aminoacid i a unei polipeptide cu un aminoacid mai puin n molecul. De exemplu: carboxipeptidaza, aminopeptidaza, dipeptidaza, tripeptidaza. Endopeptidazele au rolul de a hidroliza n general legturi peptidice din interiorul lanului, dnd natere unor lanuri polipeptidice mai mici. De exemplu: pepsina, tripsina, chimotripsina, elastina. Proteinele ptrunse n tractul digestiv sufer aciunea diferitelor enzime degradndu-se pn la stadiul de aminoacizi, care la rndul lor sunt apoi catabolizai pe ci diferite. O enzim deosebit de important pentru laboratorul clinic, din categoria N-aminoacidpetidazelor este LAP (leucinaminopeptidaza). Nivelul acestei enzime crete mult i specific n afeciunile cilor biliare, dar rmne nemodificatn leziunile parenchimului hepatic. Deasemenea are valoare n diagnosticul diferenial al icterului 108

mecanic fa de cel hepatocelular i cel hemolitic. n ultimele 2 forme de icter, nivelul rmne cel normal. Schema degradrii proteinelor
P r o t e i n ea l i m e n t a r e e n d o p e p t i d a z e :p e p s i n a ,t r i p s i n a ,c h i m o t r i p s i n a o l i g o p e t i d e e x o p e p t i d a z e :N a m i n o a c i d p e p t i d a z a ,C a m i n o a c i d p e p t i d a z a a m i n o a c i z is io l i g o p e p t i d e c a t a b o l i z a t i F i c a t i n t e s t i ns u b t i r e u n d es u n t u t i l i z a t ii nb i o s i n t e z ap r o t e i n e l o r

c a t a b o l i z a t i t e s u te n t e r o h e p a t i ca m i n o a c i z i i u t i l i z a t ii nb i o s i n t e z ap r o t e i n e l o r

109

Luciana Dobjanschi

. Ciclul ureogenetic

n cursul reaciilor ce alctuiesc un ciclu complet dintr-un mol de amoniac rezult un mol de uree i se consum 3 moli de ATP. Reaciile succesive sunt catalizate de 5 enzime. Carbamoil sintetaza prezent n mitocondriile hepatice ale organismelor ureotelice, inclusiv organismul uman, catlizeaz sinteza carbamoilfosfatului cu consum de 2 moli de ATP.
2 Mg+

O P O C NH2 OH O
+

NH3 + CO 2

2ATP HO carbamoil sintetaza

Pa 2ADP +

Ornitincarbamoilaza se gsete n mitocondriile hepatice i catalizeaz reacia de sintez a citrulinei, pentru care are o mare specificitate.
CH2 CH2 CH2 CH NH2 COOH ornitina
+

NH2 HO

CH2 P O C NH2 CH2 ornitin carbamoilaza OH O CH NH2 COOH citrulina

CH2

NH C O

NH2
+

H3PO 4

n continuare citrulina n prezen de arginino-succinatsintetaza formeaz arginino-succinatul.

COOH CH2 CH2 CH2 CH NH2 COOH citrulina NH C O NH2 H2N
+

COOH CH CH2 ATP

AMP + PP

CH2 CH2

NH C N CH NH2 CH2 COOH

CH2 H2O arginino_succinat CH NH2 COOH sintetaza COOH acid aspartic argininosuccinat

110

Mai departe, argininosuccinaza, prezent n esutul hepatic i renal al mamiferelor catalizeaz reacia de scindare a argininosuccinatului n arginin i acid fumaric, care intr n ciclul citric.
COOH CH2 CH2 CH2 CH NH2 COOH argininosuccinat NH C N CH NH2 CH2 COOH arginino succinaza CH2 CH2 CH2 CH NH2 COOH arginina acid fumaric NH C NH NH2
+

HOOC CH HC COOH

n continuare acidul fumaric intr n ciclul citric i va suferi o transformare obinuit, adic n prezen de fumaraz trece n acid malic, care la rndul su sub aciunea malatdehidrogenazei trece n oxalilacetat. Oxalilacetatul intr ntr-o reacie de transaminare la care particip acidul glutamic i transaminaza glutamicooxalacetic(GOT), formnd acidul aspartic.
COOH H C COOH HOOC C H fumaraza H2O CH CH2 COOH acid fumaric acid malic malat OH dehidrogenaza NAD+ NADH+ H+ COOH C O CH2 COOH acid oxalilacetic

COOH C O CH2 COOH

+

COOH CH2 CH2 CH NH2 COOH GOT

COOH C NH2 CH2 COOH

+

COOH CH2 CH2 C O COOH

Deasemenea arginina format este scindat de arginaz (enzim prezent n ficatul tuturor organismelor ureotelice) la ornitin i uree. Arginaza se gsete n cantiti mici i n rinichi, creier, glanda mamar, esut testicular i piele. Emzima poate fi nhibat competitiv de ornitin i lizin.

111

Luciana Dobjanschi
CH2 CH2 CH2 CH NH2 COOH arginina H2O NH C NH NH2 arginaza CH2 CH2 CH2 CH NH2 COOH ornitina uree
+

NH2 H2N C NH2 O

Ornitina rezultat poate s reia un nou ciclu, iar ureea format este excretat urinar. Deci, ciclul ureogenetic este o cale metabolic foarte costisitoare pentru organism, deoarece pentru fiecare molecul de uree ce se formeaz se consum 3 legturi macroergice. Cantitatea de uree excretat de un adult normal prin urin este de 25-30g n 24 de ore. Aceast cantitate reprezint 90% din substanele azotate i variaz proporional cu cantitatea de protein ingerat. n condiii normale excreia de amoniac reprezint numai de 2,5-4,5% din totalul azotului urinar. Excreia amoniacului reprezint o funcie important n meninerea balanei acido-bazice. Amoniacul se formeaz la nivelul rinichilor unde se combin cu ionii de hidrogen formnd ioni de amoniu. Coninutul su crete n acidoz i scade n alcaloz. Ureogeneza este un proces semiciclic deoarece ornitina consumat n reacia 2 este regsit n ultima reacie. Boli metabolice legate de dereglri aprute n ciclul ureogenetic Lipsa uneia dintre enzimele care intervin n ciclul ureogenetic determin apariia unor afeciuni, care toate sunt cauzate de intoxicaia cu amoniac. Acesta nu se mai poate transforma n uree, produs netoxic care se elimin. Deficitul de carbamoilfosfatsintetaz este probabil ereditar i cauzeaz hiperamoniemia de tip 1. Deficitul de transcarbamoilaz duce la apariia enzimopatiilor congenitale. Boala se numete hiperamoniemie de tip II. n aceste cazuri n snge, lichid cerebrospinal i urin s-au gsit cantiti mari de glutamin, iar n esuturi cantiti mari de amoniac. Lipsa activitii argininosuccinat-sintetazei duce la citrilinemie, o boal foarte rar. n sngele i n lichidul cerebrospinal

112

al pacienilor se gsesc cantiti mari de citrulin, iar n urin eliminarea este masiv (1-2g citrulin/24 de ore). Absena argininosuccinazei duce la argininosuccinurie. Enzima este absent n creier, ficat, rinichi, eritrocite i fibroblastele din piele. Absena arginazei conduce la hiperargininemie. Aceasta se caracterizeaz prin creterea nivelului de arginin n snge i n lichid cerebrospinal. Arginaza cerebrospinal nu este ntotdeauna absent, uneori este mai sczut.

113

Luciana Dobjanschi

114

115

Luciana Dobjanschi

116

XV. Bibliografie 1. Barrett A.J., Cantor C. R., Enzyme nomenclature, Academic Press, 1992 2. Bedeleanu D., Manta I., Biochimie medical i farmaceutic, Ed.Dacia Cluj-Napoca, 1985 3. Cristea-Popa E., Popescu A., Truia E., Dinu V., Tratat de Biochimie Medical, Ed. Medical-Bucureti, 1991. 4. Champe Pamela C., Harwey A. Richard, Biochemistry, J.B. Lippincott Company, 1994 5. Cplna S., Tnsescu D., Truia E., Biochimie medical, Ed.Didactic i Pedagogic Bucureti, 1977 6. Felszeghy E., Abraham A., Biochimie, Ed. Didactic i Pedagogic Bucureti, 1972 7. Lehninger A.L. Biochimie, Ed.Tehnic Bucureti, 1987 8. Gilu D., Antonescu A., Dobjanschi L., Gilu R.D., Gilu L., Compendiu de Biochimie medical, Ed. Imprimeriei de Vest Oradea, 2002. 9. Gilu L. Proinov I., Biochimie, Ed. Universitii din Oradea, 1999 10. Murean Mariana, Biochimie medical, Ed. Universitii din Oradea 2003 11. Mihele D., Biochimie clinic, Ed.Medical Bucureti, 2001. 12. Rosetti-Coloiu Matilda, Mitrea Niculina, Biochimie, Ed. Didactic i Pedagogic, Bucureti, 1985 13. Thierry Grisar, Elements de biochimie humaine normale et pathologique, partium I, Les Editions de lUniverite de Liege, 2004 14. rmure Cornelia, Biochimie structural i metabolic vol.I, Ed.Dacia Cluj-Napoca, 1996 15. Vrana K.E., Biochemistry, Lippincott Williams Wilkins, Philadelphia,1999.

117