Efecto de la relacin de Luz/oscuridad del fotoperiodo en el tiempo en alcanzar la densidad de cosecha de microalgas en un cultivo auxiliar semicontinuo.

Una de las aplicaciones de las microalgas en acuicultura es que constituyen la fuente de alimento para diferentes invertebrados marinos. Las microalgas ms utilizadas en cultivos masivos para la alimentacin larval de bivalvos, gastrpodos, crustceos y equinodermos son microalgas planctnicas que se encuentran suspendidas en la columna de agua como chaetoceros gracilis, C. muelleri, isochrysis galbana, dunaliella tertiolecta y tetraselmis sp. (Cartes, 2004) En el desarrollo larval de los invertebrados, es necesario para aumentar la supervivencia en la etapa de la metamorfosis, incluir un buen inductor para el asentamiento. En el caso de varios invertebrados como para el erizo de mar (lexechinus albus) y el abaln rojo (haliotis rufescens) la diatomea navicula sp, es un buen inductor del asentamiento para las larvas premetamrficas. (Cartes, 2004) Las diatomeas pertenecen a la clase bacillariophyceae de la divisin heterokontophya. A diferencia de muchas microalgas este grupo de microalgas est recubierto por revestimiento silceo llamado frostulo formado por dos valvas (tecas). (Cartes, 2004)

Sistema semicontinuo de microalgas.

Tradicionalmente se utilizan tres sistemas que tienen por objeto, ser un cultivo anexo o secundario para el caso de cultivo de organismos invertebrados o incluso peces, y abastecer a estos ltimos de alimento en forma continua, oportuna, de buena calidad y en volmenes requeridos. Estos sistemas son:

Continuo: consiste en producir microalgas en envases de volmenes segn lo requerido. Al cual se le proporciona medio de cultivo a travs de un tubo, puesto de forma permanente al cultivo y, a la vez, se le extrae parte del cultivo por otro tubo puesto tambin de forma permanente. (Kukujlan, 1995; Varas, 1999; Romo, 2002; Cartes, 2004) El proceso de adicin de medio de cultivo ocurre de forma simultnea a la cosecha, con el mismo volumen de cultivo que haya alcanzado una densidad determinada en la fase logartmica de reproduccin. De esta manera se inicia una cosecha contina. Lo importante es que los flujos que entran salen del envase de cultivo igualen la velocidad de divicion celular, con lo cual, idealmente, se mantiene una concentracin nivelada de clulas por mililitros. Discontinuo o semicontinuo: es el sistema ms usado en hatcheries comerciales. Siendo til, sin problemas, en escalas industriales. Consiste en iniciar una secuencia de volmenes ascendente, de acuerdo a los requerimientos y, una vez alcanzada la densidad adecuada en el mximo volumen programado, se realizan cosechas parciales e inmediatamente se rellena con medio de cultivo nuevo. Batch: consiste en iniciar cultivos en volmenes requeridos y cuando estos alcanzan las densidades adecuadas, se cosechan toralmente. El cultivo cosechado se reemplaza por otro y, de esta forma se dispone de cultivos siempre jvenes. Este sistema se llama tambin cerrado.

Fases de cultivo.

Los cultivos de microalgas en sistemas cerrados estn caracterizados por cinco etapas. Estas etapas se presentan independientes de la especie o del volumen al cual es inducido a crecer. (Kukujlan, 1995; Varas, 1999; Romo, 2002; Cartes, 2004)

Fase de adaptacin En donde no ocurre incremento en el nmero de clulas pudiendo incluso llegar a disminuir en nmero con respecto al inoculo inicial Fase exponencial Ya una vez adaptadas al medio de cultivo las microalgas comienzan a multiplicarse, puesto que la divisin da lugar a nuevas clulas que son capaces de dividirse, el aumento en nmero de microalgas se acelera continuamente en forma exponencial. Fase de desaceleracin o de declinacin: En este caso conforme el cultivo va creciendo, se da una disminucin de nutrientes cambios de pH y alteracin de otros factores, como consecuencia del incremento de la poblacin de ah que las microalgas disminuyan su tasa de divisin celular. Fase estacionaria: Cuando ya no se aprecia una divisin celular neta. Esto es cuando el nmero de clulas alcanzado se mantiene constante por cierto periodo de tiempo, debido al balance entre la natalidad y la mortalidad que presenta la poblacin en cultivo. Fase muerte: Las clulas pueden durar en la fase anterior semanas e incluso meses, aunque, lo ms normal es que comiencen a morir, es entonces cuando se presenta esta fase.

Requerimientos para el crecimiento.

La produccin o crecimientos de las microalgas estn dados por factores biticos y abiticos. Por lo general estos clasifican como factores o requerimientos fsicos y qumicos. Requerimientos Fsicos: Luz: la intensidad de la luz en cultivos arteriales, vara entre 40 100 mol m-2 s-1, segn el estado de la densidad de la poblacin. Para aumentar la eficiencia

fotosinttica, esta debe ser agitada frecuentemente con aire para aumentar la exposicin a la luz. (Kukujlan, 1995) Temperatura: las microalgas pueden adaptarse a una amplia variedad de valores de temperatura, existiendo un efecto interdependiente con la intensidad luminosa. La mayora de las especies de microalgas crecen entre 10 35 c, con un ptimo de 16 a 24 C. (Kukujlan, 1995; Cartagena, 1998; Romo, 2002; Cartes, 2004) Salinidad: a pesar de la amplia eurihalinidad de la mayora de las microalgas que se utilizan en acuicultura, se acostumbra a reproducirlas en salinidades de aproximadamente 30 ppm, sobre todo si se alimentan a larvas de invertebrados marinos mantenidos en aguas de 25 a 30 ppm. (Kukujlan, 1995; Carrera, 1996, Cartagena, 1998; Romo, 2002; Cartes, 2004) Aireacin y agitacin: se logra as una homogeneidad de los nutrientes, un aporte parcial de CO2 que ayuda a estabilizar el pH, se mantienen las microalgas en suspensin y el cultivo uniformemente distribuido al monumento de la cosecha. (Kukujlan, 1995; Carrera, 1996, Cartagena, 1996; Romo, 2002; Cartes, 2004) Requerimientos Qumicos. Nutrientes: los sustratos qumicos del medio, son asimilados de acuerdo con la velocidad de reaccin de la enzima especfica que participa en el proceso de transporte y sntesis, desde el medio nutritivo hasta el interior de la clula. Como la concentracin de un nutriente, afecta la tasa fotosinttica, la tasa de divisin celular y composicin celular, el crecimiento de una poblacin se hace dependiente no solo de los factores fsicos, sino adems de la presencia de compuestos qumicos orgnicos e inorgnicos, tanto a nivel traza como de macroelementos. (Macronutrientes: hidrogeno, oxigeno, nitrgeno, fosforo, azufre, potasio y magnesio; Micronutrientes: hierro, manganeso, cobre, zinc, molibdeno, vanadio, boro, cloro, cobalto, calcio y Estroncio). (Kukujlan, 1995; Carrera, 1996, Cartagena, 1996; Romo, 2002; Cartes, 2004)

Silicato: como se mencion anteriormente, las diatomeas necesitan incorporacin de silicato para su crecimiento. (Cartes, 2004; Romo, 2002) Carbono y PH: el contenido de carbono de los organismos marinos vara entre un 20 50 % y puede constituir un promedio de 41% del peso seco del fitoplancton. El carbono se asimila con la fotosntesis, a partir del CO2 disuelto en el agua. La disponibilidad de carbono en el medio acutico depende de factores como la temperatura, salinidad, pH y presin. La cantidad de CO2 adicionado debe controlarse mediante la medida del pH, ya que un exceso de CO2, provoca la disminucin de PH, que puede ser letal para el cultivo. (Kukujlan, 1995; Carrera, 1996, Cartagena, 1996; Romo, 2002; Cartes, 2004) Vitaminas: La mayora de las microalgas son auxotrficas, esto quiere decir que no son capaces de sintetizar todas las vitaminas necesarias, y tienen que asimilarlas del medio. La tiamina (B1), la cianocobalamina (B12) y la biotina (B6) son consideradas esenciales para la mayora de las microalgas, de hecho se ha estimado que cerca del 70% de todas las microalgas planctnicas requieren De cianocobalamina (B12). (Cartes, 2004).

Etapa 0

Definicin del problema a abordar.

El cultivo auxiliar de microalgas puede representar hasta el 30% del total de los gastos de un hatchery de invertebrados (Varas,1999; hofmann 1998). En cuanto a la luz, es el fator mas importante para la produccin microalgal, ya que esta permite la energa para la realizacin de la fotosntesis. Sin embargo, la intensidad

y periodo de esta debe estar dentro de un rango o podra causar efectos negativos en el cultivo en cuestin. (Kukuljan, 1995) Es por esto, que es de utilidad saber, como afecta la relacin de Luz/oscurdad del fotoperiodo. Para saber, en cuanto afecta, tambin es necesario determinar, otras variables que afecten al crecimiento, para determinar en que medida afecta la relacin en cuestin.

Definicin del sistema y su entorno.

El sistema como se mencion, est dado para la mantencin de los recipientes con las microalgas. Estas presentan un recipiente con un volumen determinado de medio enriquecido, un sistema de aireacin con un sistema de filtracin y un sistema de iluminacin. Adems debe estar en una habitacin especial, que permita controlar la temperatura.

Sistema.

Variables de entrada: Se pueden reconocer como variables de entrada; volumen del envase, densidad inicial, medio enriquecido (macronutrientes, micronutrientes, vitaminas y silicato) y su volumen inicial, salinidad, pH, temperatura, intensidad lumnica, flujo de aire y grado de agitacin. Tambin dentro de las variables de entrada estn los protocolos de medicin y de bioseguridad, curvas de crecimiento y necesidades de alimento de la especie. Variables de salida: Se pueden reconocer como variables de salida, volumen final, densidad final, etapa de crecimiento en el cual se cosecho, pH, concentraciones de nutrientes no asimilados.

Proceso: Se pueden reconocer como procesos; crecimiento, mortalidad, conversin de alimento, cambio de biomasa, fijacin de bixido de carbono, cambio de pH. Retroalimentacin: Se puede utilizar como retroalimentacin los valores de tiempo en alcanzar etapas de cultivo, tasa de crecimiento, curvas de crecimiento, perdidas del sistema, presencia de contaminantes, Distancia de los dispositivos de cultivo de la luz y flujo de aire que entra a los envases. Ambiente: Se puede reconocer como ambiente la habitacin o laboratorio con aire acondicionado en donde se encuentre el cultivo auxiliar semicontinuo de microalgas.

Caractersticas del sistema.

Teleologa: el objetivo del sistema es proporcionar una cosecha de microalgas forma continua, oportuna, de buena calidad y en volmenes requeridos. Sinergia: el sistema est pensado para cumplir a cabalidad el objetivo, puesto que de un principio los volmenes estn pensados para lograr una cosecha suficiente para suplir las necesidades de esta. La aireacin permite la agitacin de las microalgas y la adicin de CO2 para que estas las fijen por fotosntesis, con una filtracin para disminuir el riesgo de contaminacin. El medio enriquecido est pensado, para poder lograr una densidad final y una calidad de acuerdo a lo planeado. La distancia de los envases o dispositivos de cultivo de la luz, est dispuesta de tal forma de alcanzar una intensidad acorde a la especie cultivada. Homeostasis: un monitoreo continuo, permitira comparar las curvas de crecimiento obtenida con las curvas de crecimiento que se tiene por literatura, y as, prevenir posibles errores, como falta de nutrientes, de agitacin, falta o exceso de luz y/o presencia de contaminantes. Tambin el sistema, llegara a un momento

en donde las clulas dejaran de aumentar y empezaran a crecer (fase estacionaria). Recursividad: sin ir ms lejos, las microalgas por si presentan un sistema complejo, como toda clula eucarionte. Tambin los sistemas de aireacin, de iluminacin y de termorregulacin de la habitacin, son parte de otro sistema. Entropa: una vez terminada la fase estacionaria, llega la etapa de muerte en donde el cultivo se puede perder en su totalidad. Adems, el sistema siempre est bajo el peligro de la contaminacin. Neguentropia: mantener el sistema debido a los dispositivos de aireacin, iluminacin y de termorregulacin necesita un gasto energtico (elctrico), el cual si de discontinua, el cultivo se puede perder en poco tiempo. Esta energa, es la que se puede llamar neguentropia. Lmites: los lmites del sistema, son las paredes y puertas del laboratorio o sala en donde se encuentre el sistema auxiliar. Etapa1. Modelo conceptual. Se establecera una lista de variables, las cuales se vera si tiene insidencia en el crecimiento, espesificamente en el tiempo que demora en alcanzar la cocecha y la densidad. Fotoperiodo: es la variable a analizar, segn la literatura existe ciertos rangos en donde tiene un efecto positivo en el crecimiento. (hofmann. 1998; Romo 2002; Varas, 1999) Densidad inicial: aunque la densidad inicial no tiene inferencia en la densidad final, si la tiene en el tiempo que alcanza esta. Entre mayor sea esta, menor el tiempo que demora en alcanzar la etapa final. (hofmann, 1998)

Volumen: el volumen total del envase, influye directamente en el tiempo que demora en alcanzar la densidad final, entre mas es el volumen del recipiente de cultivo, mayor es el tiempo es que se demora en alcanzar la densidad de cosecha. Temperatura: no incide en el sistema, debido a que esta debe permanecer casi invariable, en el valor optimo para las especies cultivadas. Aireacin y agitacin: de esta forma se entrega la agitacin y el bixido de carbono. Sin embargo esta permanece constante una vez instalada, por lo que incide en el sistema. Intensidad de luz: segn la literatura existe ciertos rangos en donde tiene un efecto positivo en el crecimiento. Lejos de estos tiene un efecto onhibidor del crecimiento. Sin embargo una vez instalado el sistema, la intensidad de luz que llega a los recipientes (lejana o cercana a la fuente de iluminacin), permanece invariable. Salinidad: las microalgas presentan un enorme rango eurihalino, y adems, la concentracin de sales ya esta dado desde el principio, por ello no incide ni en el tiempo, ni en la densidad final del cultivo. Nutrientes: solo tendrn un papel relevante, si es que se vuelven limitante en una fase de cultivo. Tanto como para macronutrientes, como para las trazas, vitaminas y silicato en caso de las diatomeas.. (Macronutrientes: hidrogeno, oxigeno, nitrgeno, fosforo, azufre, potasio y magnesio; Micronutrientes: hierro, manganeso, cobre, zinc, molibdeno, vanadio, boro, cloro, cobalto, calcio y Estroncio). Carbono y PH: el ph tiene un carcter inihibidor en el crecimiento de microalgas, por lo que un aumento del carbono en el medio podra tener consecuencias negativas. Esto si CO2, alcanza el nivel de limitante no producira este efecto.9*

Donde: Tf-t0: tiempo final en donde se alcanza la densidad de cosecha Fp: fotoperiodo Do: densidad inicial. Lim(mn,Mn, vit): limitante entre macronutrientes, micronutrientes y/o vitaminas.