Cilia and Flagella: Structure and Movement

Swimming is the major form of movement exhibited by sperm and by many protozoans. Some cells are propelled at velocities approaching 1 mm/s by the beating of cilia and flagella, flexible membrane extensions of the cell. Cilia and flagella range in length from a few microns to more than 2 mm in the case of some insect sperm flagella. Although cilia and flagella are the same, they were given different names before their structures were studied. Typically, cells possess one or two long flagella, whereas ciliated cells have many short cilia. For example, the mammalian spermatozoon has a single flagellum, the unicellular green alga Chlamydomonas has two flagella, and the unicellular protozoan Paramecium is covered with a few thousand cilia, which are used both to move and to bring in food particles. In mammals, many epithelial cells are ciliated in order to sweep materials across the tissue surface. For instance, huge numbers of cilia (more than 107/mm2) cover the surfaces of mammalian respiratory passages (the nose, pharynx, and trachea), where they dislodge and expel particulate matter that collects in the mucus secretions of these tissues. Ciliary and flagellar beating is characterized by a series of bends, originating at the base of the structure and propagated toward the tip. High-speed strobe microscopy allows the waveform of the beat to be seen (Figure 19-27). Beating can be planar or three-dimensional; like waves that you have studied in physics, it can be described by its amplitude, wavelength, and frequency. The bends push against the surrounding fluid, propelling the cell forward or moving the fluid across a fixed epithelium.

Figure 19-27 Flagellar motions in sperm and Chlamydomonas. In both cases, the cells are moving to the left. (a) In the typical sperm flagellum, successive waves of bending originate at the base and are propagated (more...) Go to:

All Eukaryotic Cilia and Flagella Contain Bundles of Doublet Microtubules

Virtually all eukaryotic cilia and flagella are remarkably similar in their organization, possessing a central bundle of microtubules, called the axoneme, in which nine outer doublet microtubules surround a central pair of singlet microtubules (Figure 19-28). This characteristic 9 + 2 arrangement of microtubules is seen when the axoneme is viewed in cross section with the electron microscope. As shown in Figure 19-3, each doublet microtubule consists of A and B tubules, or subfibers: the A tubule is a complete microtubule with 13 protofilaments, while the B tubule contains 10 protofilaments. The bundle of microtubules comprising the axoneme is

surrounded by the plasma membrane. Regardless of the organism or cell type, the axoneme is about 0.25 m in diameter, but it varies greatly in length, from a few microns to more than 2 mm.

Figure 19-28 Structure of ciliary and flagellar axonemes. (a) Cross-sectional diagram of a typical flagellum showing its major structures. The dynein arms and radial spokes with attached heads occur only (more...) At its point of attachment to the cell, the axoneme connects with the basal body (Figure 19-29). Like centrioles, basal bodies are cylindrical structures, about 0.4 m long and 0.2 m wide, which contain nine triplet microtubules. Each triplet contains one complete 13-protofilament microtubule, the A tubule, fused to the incomplete B tubule, which in turn is fused to the incomplete C tubule (see Figure 19-3). The A and B tubules of basal bodies continue into the axonemal shaft, whereas the C tubule terminates within the transition zone between the basal body and the shaft. The two central tubules in a flagellum or a cilium also end in the transition zone, above the basal body. As we will see later, the basal body plays an important role in initiating the growth of the axoneme.

Figure 19-29 Electron micrograph of the basal regions of the two flagella in Chlamydomonas reinhardtii. The bundles of microtubules and some fibers connecting them are visible in the flagella (FL). (more...) Within the axoneme, the two central singlet and nine outer doublet microtubules are continuous for the entire length of the structure. Doublet microtubules, which represent a specialized

polymer of tubulin, are found only in the axoneme. Permanently attached to the A tubule of each doublet microtubule is an inner and an outer row of dynein arms (see Figure 19-28a). These dyneins reach out to the B tubule of the neighboring doublet. The junction between A and B tubules of one doublet is probably strengthened by the protein tektin, a highly -helical protein that is similar in structure to intermediate-filament proteins. Each tektin filament, which is 2 nm in diameter and approximately 48 nm long, runs longitudinally along the wall of the outer doublet where the A tubule is joined to the B tubule. The axoneme is held together by three sets of protein cross-links (see Figure 19-28a). The central pair of singlet microtubules are connected by periodic bridges, like rungs on a ladder, and are surrounded by a fibrous structure termed the inner sheath. A second set of linkers, composed of the protein nexin, joins adjacent outer doublet microtubules. Spaced every 86 nm along the axoneme, nexin is proposed to be part of a dynein regulatory complex. Radial spokes, which radiate from the central singlets to each A tubule of the outer doublets, form the third linkage system. The biflagellated, unicellular alga Chlamydomonas reinhardtii has proved especially amenable to biochemical and genetic studies on the function, structure, and assembly of flagella. A population of cells, shorn of their flagella by mechanical or chemical methods, provide flagella in good purity and high yield, and the deflagellated cells quickly regenerate new flagella. Analysis of the sheared flagella by two-dimensional gel electrophoresis reveals approximately 250 discrete polypeptides, in addition to - and -tubulin. The functions of these polypeptides have been assessed by analysis of flagella from Chlamydomonas mutants that are nonmotile or otherwise defective in flagellar function. Some nonmotile mutants, for example, lack an entire substructure, such as the radial spokes or central-pair microtubules. Many mutants that are missing a particular flagellar substructure also have been found to lack certain specific proteins, thus permitting these proteins to be assigned to a specific substructure and associated with specific genes. Such studies have identified 17 polypeptides that are components of the radial spokes and spoke heads. The components of the inner and outer dynein arms, the central-pair microtubules, and other axonemal structures have been similarly identified. Although the 9 + 2 pattern is the fundamental pattern of virtually all cilia and flagella, the axonemes of certain protozoans and some insect sperm show some interesting variations. The simplest such axoneme, containing three doublet microtubules and no central singlets (3 + 0) is found in Daplius, a parasitic protozoan. Its flagellum beats slowly (1.5 beats/s) in a helical pattern. Other axonemes consist of 6 + 0 or 9 + 0 arrangements of microtubules. These atypical cilia and flagella, which are all motile, show that the central pair of singlet microtubules is not necessary for axonemal beating and that fewer than nine outer doublets can sustain motility, but at a lower frequency. Go to:

Ciliary and Flagellar Beating Are Produced by Controlled Sliding of Outer Doublet Microtubules

Having examined the complex structure of cilia and flagella, we now discuss how the various components contribute to their characteristic motions. Cilia and flagella, from which the plasma membrane has been removed by nonionic detergents, can beat when ATP is added; this in vitro movement can be indistinguishable from that observed in living cells. Thus the forces that generate movement must reside within the axoneme and are not located in the plasma membrane or elsewhere in the cell body. As in the movement of muscle during contraction, the basis for axonemal movement is the sliding of protein filaments relative to one another. In cilia and flagella, the filaments are the doublet microtubules, all of which are arranged with their (+) end at the outer tip of the axoneme. Axonemal bending is produced by forces that cause sliding between pairs of doublet microtubules. The active sliding occurs all along the axoneme, so that the resulting bends can be propagated without damping. Sliding was seen in an activation-type experiment. Demembranated axonemes were briefly treated with proteolytic enzymes such as trypsin or elastase to digest the structural linkages and the radial spokes. Upon addition of ATP, the digested axonemes telescoped apart, but no bending was observed (Figure 19-30). The sliding was often nearly complete, so that the resulting structure was greater than five times longer than the original length of the axoneme. Clearly then, the ATP-dependent movement of outer doublets must be restricted by cross-linkage proteins in order for sliding to be converted into bending of an axoneme.

Figure 19-30 Electron micrograph of two doublet microtubules in a protease-treated axoneme incubated with ATP. In the absence of cross-linking proteins, which are removed by protease, excessive sliding (more...) Go to:

Dynein Arms Generate the Sliding Forces in Axonemes

Once it was clear that the doublet microtubules in axonemes slide past each other, researchers sought to identify the force-generating proteins responsible for this movement. The inner- and outer-arm dyneins, which bridge between the doublet microtubules, were the best candidates. The identity of dynein as the motor protein in axonemes is supported by various findings. For instance, cilia and flagella possess an active ATPase that is associated with the dynein arms. In addition, removal of outer-arm dyneins by treatment with high-salt solutions reduces the rate of ATP hydrolysis, microtubule sliding, and beat frequency of isolated axonemes by 50 percent. When the extracted outer-arm dyneins are added back to salt-stripped axonemes, both the ATPase activity and the beat frequency are restored, and electron microscopy reveals that the outer arms have reattached to the proper places.

Based on the polarity and direction of sliding of the doublet microtubules, we can propose a model in which the dynein arms on the A tubule of one doublet walk along the adjacent doublets B tubule toward its base, the () end (Figure 19-31). The force producing active sliding requires ATP and is caused by successive formation and breakage of cross-bridges between the dynein arm and the B tubule. Successive binding and hydrolysis of ATP causes the dynein arms to successively release from and attach to the adjacent doublet. Although this general model most likely is correct, many important details such as the mechanism of force transduction by dynein are still unknown.

Figure 19-31 Model for dynein-mediated sliding of axonemal outer doublet microtubules. The dynein arms attached to the A subfiber of one microtubule walk along the B subfiber of the adjacent doublet toward (more...) Go to:

Axonemal Dyneins Are Multiheaded Motor Proteins

Axonemal dyneins are complex multimers of heavy chains, intermediate chains, and light chains. Isolated axonemal dyneins, when slightly denatured and spread out on an electron microscope grid, are seen as a bouquet of two or three blossoms (Figure 19-32a). Each blossom consists of a large globular domain attached to a small globular domain (the head) through a short stalk; another stalk connects one or more blossoms to a common base (Figure 19-32b). The base is thought to be the site where the dynein arm attaches to the A tubule, while the small globular heads bind to the adjacent B tubule (Figure 19-32c).

Figure 19-32 Structure of axonemal dynein. (a) Electron micrograph of freeze-etched outer-arm dynein from Tetrahymena cilia reveal three globular blossoms connected by stems to a (more...) Each globular head and its stalk is formed from a single dynein heavy chain. The dynein heavy chain is enormous, approximately 4,500 amino acids in length with a molecular weight exceeding 540,000. Each heavy chain is capable of hydrolyzing ATP, and on the basis of sequences commonly found at the ATP-binding sites in other proteins, the ATP-binding domain of axonemal dynein is predicted to lie in the globular head portion of the heavy chain. The intermediate and light chains, thought to form the base of the dynein arm, help mediate attachment of the dynein arm to the A tubule and may also participate in regulating dynein activity. These base proteins thus are analogous to the MBP complexes associated with cytosolic dynein.

Axonemes contain at least eight or nine different dynein heavy chains. All inner dynein arms are two-headed structures, containing two heavy chains. The outer dynein arms have two heavy chains (e.g., in a sea urchin sperm flagellum) or three heavy chains (e.g., in Chlamydomonas flagella). Go to:

Conversion of Microtubule Sliding into Axonemal Bending Depends on Inner-Arm Dyneins

As we saw earlier, flagellar and ciliary beating is characterized by the propagation of bends that originate from the base of the axoneme (see Figure 19-27). On the other hand, the active sliding of microtubules relative to each other is a linear phenomenon (see Figure 19-31). How, then, is microtubule sliding converted to bending of a cilium or flagellum? A bend is formed between a region of sliding and a region that resists sliding. Bending is regulated by controlling the regions where dynein is active along and around the axoneme. A close examination of the axoneme cross-section reveals that the nine outer doublets and their dynein arms are arranged in a circle so that, when viewed from the base of the axoneme, the arms all point clockwise. Since the dynein arms walk in only one direction, toward the () end, and each doublet slides down only one of its two neighboring doublets, active sliding in one half of the axoneme produces bending toward one side and active sliding in the other half produces bending toward the opposite side (see Figure 19-27a). By regulating the timing and location in which dynein arms are active, the axoneme can propagate bends in both directions from base to tip. Genetic studies of mutant Chlamydomonas with abnormal motility reveal that the inner- and outer-arm dyneins contribute differently to the waveform and beat frequency of an axoneme. For example, the absence of one set of inner arms affects the waveform of flagellar beating. In contrast, mutant flagella lacking outer arms have normal waveform but slower beat frequencies. Thus the outer-arm dyneins accelerate active sliding of the outer doublets but do not contribute to bending. In contrast, the inner-arm dyneins are responsible for producing the sliding forces that are converted to bending; this suggests that inner-arm dyneins are essential for bending. Go to:

Proteins Associated with Radial Spokes May Control Flagellar Beat

Several lines of evidence indicate that the radial spokes and central-pair microtubules play a critical role in controlling the bending of a flagellum. First, mutant flagella lacking radial spokes are paralyzed. Further, a dynein regulatory complex, located at the junction between the radial spokes and inner dynein arms, has recently been identified by genetic suppressor studies. One hypothesis is that phosphorylation of the inner dynein arm inactivates it, while

dephosphorylation activates it to cause sliding between outer doublet microtubules. A bend is propagated when inner-arm dynein is inactivated in one region and activated in a neighboring region. Go to:

Axonemal Microtubules Are Dynamic and Stable

For axonemes to participate in movement, they must be stable structures anchored by at least one end. As noted already, a cilium or flagellum is anchored at its cytosolic end to a basal body. In addition to its anchoring role, the basal body serves as a nucleus for the assembly of flagellar microtubules. Recall that the basal body has nine triplet microtubules. The nine A and B tubules of these triplets appear to initiate assembly of the nine outer doublet microtubules of the cilium or flagellum by growing outward from the basal body during elongation of the axonemal shaft. Studies on the assembly of flagella and cilia provided the first evidence that a microtubule elongates by incorporating tubulin subunits at its tip. This model was originally proved by autoradiography of cells that were regenerating their flagella in the presence of radioactive tubulin subunits (and other axonemal components). More recent studies using a recombinant Chlamydomonas cell have confirmed that addition of tubulin subunits and incorporation of other axonemal components occur at the distal end of a flagellum (Figure 19-33). In these experiments, a Chlamydomonas cell expressing an epitope-tagged tubulin subunit was mated with a wild-type cell whose flagella had been amputated. After mating, which involves fusion of the two cells and mixing of their cytoplasms, the diploid cell regenerated full-length flagella by incorporating the tagged tubulin subunits. Antibodies to the epitope tag showed that the recombinant tubulin was localized within the distal tips of the regenerated flagella. This pattern could arise only if elongation occurs at the tip and not the base.

Figure 19-33 Assembly of flagellar microtubules. (a) Schematic diagram of an experiment in which two Chlamydomonas cells were mated. One cell has had its flagella amputated and is regenerating them, (more...) Go to:

SUMMARY

Flagellar beating propels cells forward, and ciliary beating sweeps materials across tissues. Despite their different names, flagella and cilia have the same axoneme structure, including nine doublet microtubules arranged in a circle around two central singlet microtubules (see Figure 19-28). Walking of dynein arms extending from one doublet toward the () end of a neighboring doublet generates a sliding force in the axoneme (see Figure 19-31). This force is converted into a bend by regions that resist sliding. Axonemal dynein is larger and more complex than cytosolic dynein. Instead of the vesicle cargo transported by cytosolic dynein, axonemal dynein moves one microtubule across the surface of its neighboring microtubule (see Figure 19-32c). The () ends of the microtubules in a cilium or flagellum are anchored in the basal body and are extensions of microtubules located there. Elongation of cilia and flagella occurs by addition of -tubulin subunits to the distal (+) end of axonemal microtubules.

Silia dan Flagella : Struktur dan Gerakan Berenang adalah bentuk utama gerakan dipamerkan oleh sperma dan oleh banyak protozoa . Beberapa sel yang didorong dengan kecepatan mendekati 1 mm / s dengan pemukulan silia dan flagela , ekstensi membran fleksibel sel . Silia dan flagela kisaran panjang dari beberapa mikron sampai lebih dari 2 mm dalam kasus beberapa flagela sperma serangga . Meskipun silia dan flagela adalah sama , mereka diberi nama yang berbeda sebelum strukturnya dipelajari . Biasanya , sel-sel memiliki satu atau dua flagella panjang , sedangkan sel-sel bersilia memiliki banyak silia pendek. Misalnya, spermatozoon mamalia memiliki flagela tunggal, Chlamydomonas alga hijau uniseluler memiliki dua flagela , dan protozoa uniseluler Paramecium ditutupi dengan seribu silia beberapa , yang digunakan baik untuk bergerak dan membawa partikel makanan . Pada mamalia , sel epitel banyak yang bersilia agar tidak menjalar ke material di permukaan jaringan . Misalnya , sejumlah besar silia ( lebih dari 107/mm2 ) menutupi permukaan saluran pernapasan mamalia ( hidung , faring , trakea dan ) , di mana mereka mengusir dan mengusir partikel yang terkumpul dalam sekresi lendir dari jaringan ini . Pemukulan silia dan flagellar ditandai oleh serangkaian tikungan , yang berasal di dasar struktur dan disebarkan ke arah ujung. High-speed strobe mikroskop memungkinkan gelombang dari mengalahkan untuk dilihat (Gambar 19-27 ) . Mengalahkan bisa planar atau tiga - dimensi; seperti ombak yang telah dipelajari dalam fisika , dapat dijelaskan oleh amplitudo , panjang gelombang , dan frekuensi . Tikungan mendorong terhadap cairan sekitarnya , mendorong sel maju atau bergerak cairan melintasi epitel tetap. Gambar 19-27 . Gerakan flagellar dalam sperma dan Chlamydomonas . Gambar 19-27 Gerakan flagellar dalam sperma dan Chlamydomonas . Dalam kedua kasus , sel-sel bergerak ke kiri . ( a) Dalam flagela sperma yang khas , gelombang berturut lentur berasal di dasar dan disebarkan ( more. .. )

Pergi ke : Semua Cilia eukariotik dan Flagella Mengandung Kumpulan Doublet Mikrotubulus Hampir semua silia dan flagela eukariotik yang sangat mirip dalam organisasi mereka , yang memiliki bundel pusat mikrotubulus , disebut axoneme tersebut , di mana sembilan mikrotubulus doublet luar mengelilingi sepasang pusat mikrotubulus singlet ( Gambar 19-28 ) . Karakteristik ini " 9 + 2 " susunan mikrotubulus terlihat ketika axoneme tersebut dilihat secara cross section dengan mikroskop elektron . Seperti ditunjukkan dalam Gambar 19-3 , masing-masing mikrotubulus doublet terdiri dari A dan B tubulus , atau subfibers : tubulus adalah sebuah mikrotubulus lengkap dengan 13 protofilaments , sedangkan tubulus B berisi 10 protofilaments . Bundel mikrotubulus yang terdiri axoneme ini dikelilingi oleh membran plasma . Terlepas dari organisme atau tipe sel , axoneme adalah sekitar 0,25 m dengan diameter , namun sangat bervariasi panjang , dari beberapa mikron sampai lebih dari 2 mm . Gambar 19-28 . Struktur axonemes ciliary dan flagellar . Gambar 19-28 Struktur axonemes ciliary dan flagellar . (a ) diagram penampang flagela khas menunjukkan struktur utama . Lengan dynein dan jari-jari radial dengan kepala terpasang hanya terjadi ( more. .. ) Pada titik lampiran ke sel , axoneme menghubungkan dengan tubuh basal ( Gambar 19-29 ) . Seperti sentriol , badan basal adalah struktur silinder , sekitar 0,4 m panjang dan 0,2 m lebar, yang mengandung sembilan mikrotubulus triplet . Setiap triplet berisi satu lengkap 13 - protofilament mikrotubulus , tubulus A , menyatu ke tubulus B lengkap , yang pada gilirannya menyatu ke C tubulus lengkap ( lihat Gambar 19-3 ) . A dan B tubulus tubuh basal melanjutkan ke poros axonemal , sedangkan tubulus C berakhir dalam zona transisi antara tubuh basal dan poros. Kedua tubulus sentral dalam flagela atau silia juga berakhir di zona transisi , di atas tubuh basal . Seperti yang akan kita lihat nanti , tubuh basal memainkan peran penting dalam memulai pertumbuhan axoneme tersebut . Gambar 19-29 . Mikrograf elektron dari daerah basal dari dua flagella di Chlamydomonas reinhardtii . Gambar 19-29 Mikrograf elektron dari daerah basal dari dua flagella di Chlamydomonas reinhardtii . Bundel mikrotubulus dan beberapa serat menghubungkan mereka terlihat di flagela ( FL ) . ( more. .. ) Dalam axoneme , dua singlet pusat dan sembilan mikrotubulus doublet luar yang terus menerus untuk seluruh panjang struktur. Doublet mikrotubulus , yang merupakan polimer khusus tubulin , yang hanya ditemukan di axoneme tersebut . Permanen melekat pada tubulus A masing-masing mikrotubulus doublet adalah batin dan baris luar dynein lengan ( lihat Gambar 19 - 28a ) . Ini dyneins menjangkau tubulus B dari doublet tetangga . Persimpangan antara A dan B tubulus satu doublet mungkin diperkuat oleh tektin protein , protein yang sangat - heliks yang mirip dengan struktur protein menengah filamen . Setiap filamen tektin , yaitu 2 nm diameter sekitar 48 nm dan panjang , berjalan membujur sepanjang dinding doublet luar di mana tubulus A bergabung ke tubulus B . Axoneme ini diselenggarakan bersama oleh tiga set protein cross-link ( lihat Gambar 19 - 28a ) .

Pasangan tengah singlet mikrotubulus dihubungkan oleh jembatan periodik , seperti anak tangga di tangga , dan dikelilingi oleh struktur berserat disebut selubung batin. Set kedua linker , terdiri dari nexin protein , bergabung berdekatan mikrotubulus doublet luar. Spasi setiap 86 nm sepanjang axoneme tersebut , nexin diusulkan menjadi bagian dari peraturan yang kompleks dynein . Kisi radial yang memancar dari singlet pusat ke masing-masing A tubulus dari doublet luar, membentuk sistem keterkaitan ketiga. The biflagellated , uniseluler alga Chlamydomonas reinhardtii telah terbukti sangat setuju dengan studi biokimia dan genetik pada fungsi , struktur , dan perakitan flagela . Sebuah populasi sel , dicukur dari flagela mereka dengan metode mekanik atau kimia, memberikan flagela dalam kemurnian yang baik dan hasil tinggi , dan sel-sel deflagellated cepat regenerasi flagela baru. Analisis flagella dicukur dengan elektroforesis gel dua dimensi mengungkapkan sekitar 250 polipeptida diskrit , selain - - tubulin dan . Fungsi polipeptida ini telah dinilai oleh analisis flagela dari Chlamydomonas mutan yang nonmotile atau cacat dalam fungsi flagellar . Beberapa mutan nonmotile , misalnya, tidak memiliki seluruh substruktur , seperti jari-jari radial atau pusat -pair mikrotubulus . Banyak mutan yang hilang substruktur flagellar tertentu juga telah ditemukan kekurangan protein spesifik tertentu , sehingga memungkinkan protein ini akan ditugaskan ke substruktur spesifik dan berhubungan dengan gen tertentu . Studi semacam telah mengidentifikasi 17 polipeptida yang merupakan komponen dari jari-jari radial dan berbicara kepala . Komponen lengan dalam dan luar dynein , mikrotubulus pusat -pair , dan struktur axonemal lainnya telah diidentifikasi sama . Meskipun 9 + 2 pola adalah pola dasar hampir semua silia dan flagela , yang axonemes protozoa tertentu dan beberapa sperma serangga menunjukkan beberapa variasi yang menarik . Yang paling sederhana axoneme tersebut , mengandung tiga mikrotubulus doublet dan tidak ada singlet pusat ( 3 + 0 ) ditemukan dalam Daplius , protozoa parasit . Flagela yang mengalahkan lambat ( 1,5 denyut / s ) dalam pola heliks . Axonemes lainnya terdiri dari 6 + 0 + 0 atau 9 pengaturan mikrotubulus . Ini atipikal silia dan flagela , yang semuanya motil , menunjukkan bahwa pasangan tengah singlet mikrotubulus tidak diperlukan untuk pemukulan axonemal dan bahwa kurang dari sembilan doublet luar dapat mempertahankan motilitas , tetapi pada frekuensi yang lebih rendah . Pergi ke : Ciliary dan flagellar Pemukulan Apakah Diproduksi oleh Sliding Terkendali Mikrotubulus Doublet Outer Telah memeriksa struktur kompleks silia dan flagela , sekarang kita membahas bagaimana berbagai komponen berkontribusi terhadap gerakan karakteristik mereka . Silia dan flagela , dari mana membran plasma telah dihapus oleh deterjen nonionik , bisa mengalahkan ketika ATP ditambahkan , ini dalam gerakan vitro dapat dibedakan dari yang diamati pada sel-sel hidup . Dengan demikian kekuatankekuatan yang menghasilkan gerakan harus berada dalam axoneme dan tidak terletak di membran plasma atau di tempat lain dalam sel tubuh . Seperti dalam gerakan otot selama kontraksi , dasar untuk gerakan axonemal adalah sliding filamen protein relatif terhadap satu sama lain . Dalam silia dan flagela , filamen adalah mikrotubulus doublet , yang semuanya diatur dengan mereka ( + ) berakhir di ujung luar axoneme tersebut . Axonemal bending

diproduksi oleh kekuatan yang menyebabkan geser antara pasang mikrotubulus doublet . The geser aktif terjadi sepanjang axoneme , sehingga yang dihasilkan tikungan dapat diperbanyak tanpa redaman . Sliding terlihat dalam percobaan aktivasi -jenis . Axonemes Demembranated secara singkat diobati dengan enzim proteolitik seperti tripsin atau elastase untuk mencerna hubungan struktural dan jari-jari radial . Setelah penambahan ATP, axonemes dicerna meneropong terpisah , tapi tidak ada bending diamati ( Gambar 19-30 ) . Geser itu sering hampir selesai , sehingga struktur yang dihasilkan lebih besar dari lima kali lebih lama dari panjang asli axoneme tersebut . Jelas kemudian , gerakan ATP-dependent dari doublet luar harus dibatasi oleh protein cross - linkage agar geser untuk dikonversi menjadi lentur dari axoneme . Gambar 19-30 . Mikrograf elektron dari dua mikrotubulus doublet dalam axoneme protease yang diobati diinkubasi dengan ATP . Gambar 19-30 Mikrograf elektron dari dua mikrotubulus doublet dalam axoneme protease yang diobati diinkubasi dengan ATP . Dengan tidak adanya silang protein , yang dihapus oleh protease , sliding berlebihan ( more. .. ) Pergi ke : Dynein Senjata Menghasilkan Angkatan Sliding di Axonemes Setelah jelas bahwa mikrotubulus doublet di axonemes geser melewati satu sama lain , para peneliti berusaha untuk mengidentifikasi protein yang menghasilkan kekuatan yang bertanggung jawab untuk gerakan ini . -Batin dan luar lengan dyneins , yang menjembatani antara mikrotubulus doublet , adalah kandidat terbaik . Identitas dynein sebagai protein motor axonemes didukung oleh berbagai temuan . Misalnya , silia dan flagela memiliki sebuah ATPase aktif yang terkait dengan lengan dynein . Selain itu, penghapusan dyneins luar lengan oleh pengobatan dengan larutan garam tinggi mengurangi laju hidrolisis ATP , mikrotubulus geser , dan mengalahkan frekuensi axonemes terisolasi sebesar 50 persen . Ketika diekstrak dyneins luar lengan ditambahkan kembali untuk garam - dilucuti axonemes , baik aktivitas ATPase dan frekuensi beat dikembalikan , dan mikroskop elektron menunjukkan bahwa senjata luar telah disambungkan ke tempat-tempat yang tepat . Berdasarkan polaritas dan arah geser dari mikrotubulus doublet , kita dapat mengusulkan suatu model di mana lengan dynein pada A tubulus satu doublet " berjalan " di sepanjang tubulus doublet yang berdekatan B ke basis , yang ( - ) akhir (Gambar 19-31 ) . Kekuatan memproduksi sliding aktif membutuhkan ATP dan disebabkan oleh pembentukan berturut-turut dan kerusakan lintas jembatan antara lengan dynein dan tubulus B . Mengikat berturut-turut dan hidrolisis ATP menyebabkan lengan dynein untuk turut melepaskan dari dan melekat pada doublet berdekatan. Meskipun model ini umumnya paling mungkin benar , banyak rincian penting seperti mekanisme kekuatan transduksi oleh dynein masih belum diketahui . Gambar 19-31 . Model untuk dynein - dimediasi geser axonemal mikrotubulus doublet luar. Gambar 19-31

Model untuk dynein - dimediasi geser axonemal mikrotubulus doublet luar. Lengan dynein yang melekat pada A subfiber satu mikrotubulus berjalan kaki sepanjang subfiber B dari doublet berdekatan arah ( more. .. ) Pergi ke : Dyneins Axonemal Apakah Multiheaded Protein motor Dyneins Axonemal adalah multimers kompleks rantai berat , rantai menengah, dan rantai ringan . Dyneins axonemal Terisolasi , ketika sedikit terdenaturasi dan menyebar pada mikroskop elektron jaringan , dipandang sebagai karangan dua atau tiga " bunga " ( Gambar 19 - 32a ) . Setiap bunga terdiri dari domain globular besar yang melekat pada domain globular kecil ( "head " ) melalui tangkai pendek, tangkai lain menghubungkan satu atau lebih bunga ke dasar umum ( Gambar 19 - 32b ) . Dasar dianggap situs di mana lengan dynein menempel pada tubulus A , sedangkan kepala globular kecil mengikat ke tubulus B yang berdekatan ( Gambar 19 - 32c ) . Gambar 19-32 . Struktur dynein axonemal . Gambar 19-32 Struktur dynein axonemal . ( a) Elektron mikrograf beku- tergores dynein luar lengan dari Tetrahymena silia mengungkapkan tiga globular " bunga " dihubungkan oleh batang ke ( more. .. ) Setiap kepala bulat dan tangkainya dibentuk dari rantai berat dynein tunggal. Rantai berat dynein sangat besar , sekitar 4.500 asam amino panjang dengan berat molekul melebihi 540,000 . Setiap rantai berat mampu menghidrolisis ATP , dan atas dasar urutan umum ditemukan di situs ATP - mengikat protein lain , domain ATP - mengikat axonemal dynein diperkirakan terletak pada bagian kepala bulat dari rantai berat. Rantai menengah dan ringan , berpikir untuk membentuk dasar lengan dynein , membantu memediasi perlekatan lengan dynein pada tubulus A dan juga dapat berpartisipasi dalam mengatur aktivitas dynein . Protein dasar demikian analog dengan kompleks MBP terkait dengan dynein sitosol . Axonemes mengandung setidaknya delapan atau sembilan rantai berat dynein yang berbeda . Semua lengan dynein batin struktur berkepala dua , yang berisi dua rantai berat . Bagian luar lengan dynein memiliki dua rantai berat ( misalnya , dalam landak laut sperma flagela) atau tiga rantai berat ( misalnya, dalam Chlamydomonas flagela ) . Pergi ke : Konversi mikrotubulus Meluncur ke Axonemal Bending Tergantung pada Dyneins batin - Arm Seperti yang kita lihat sebelumnya , pemukulan flagellar dan silia ditandai oleh penyebaran tikungan yang berasal dari dasar axoneme ( lihat Gambar 19-27 ) . Di sisi lain, geser aktif mikrotubulus relatif satu sama lain adalah fenomena linear ( lihat Gambar 19-31 ) . Bagaimana , kemudian, adalah mikrotubulus geser dikonversi ke lentur dari silia atau flagela ? Sebuah tikungan terbentuk antara wilayah geser dan wilayah yang tahan geser. Bending diatur dengan mengontrol wilayah mana dynein aktif di sepanjang dan sekitar axoneme tersebut . Sebuah pemeriksaan dekat axoneme penampang mengungkapkan bahwa sembilan doublet luar dan lengan dynein mereka

disusun dalam lingkaran sehingga , bila dilihat dari dasar axoneme tersebut , lengan semua titik searah jarum jam . Karena lengan dynein berjalan hanya dalam satu arah , menuju ( - ) akhir , dan setiap doublet meluncur ke bawah hanya satu dari dua doublet tetangga , aktif geser dalam satu setengah axoneme yang menghasilkan membungkuk ke satu sisi dan aktif meluncur di setengah lainnya menghasilkan membungkuk ke arah sisi yang berlawanan ( lihat Gambar 19 - 27a ) . Dengan mengatur waktu dan lokasi di mana dynein lengan aktif , axoneme dapat menyebarkan tikungan di kedua arah dari dasar ke ujung . Studi genetik Chlamydomonas mutan dengan motilitas normal mengungkapkan bahwa dyneins batin dan luar lengan berkontribusi berbeda dengan bentuk gelombang dan frekuensi beat dari axoneme . Misalnya, tidak adanya satu set lengan batin mempengaruhi gelombang pemukulan flagellar . Sebaliknya , flagela mutan kekurangan lengan luar memiliki gelombang normal tetapi frekuensi beat lambat . Jadi dyneins luar lengan mempercepat aktif geser doublet luar tetapi tidak memberikan kontribusi terhadap lentur . Sebaliknya, para dyneins - lengan bagian bertanggung jawab untuk memproduksi kekuatan geser yang dikonversi ke lentur , hal ini menunjukkan bahwa dyneins -lengan batin sangat penting untuk membungkuk . Pergi ke : Protein Terkait dengan Spokes Radial Mei Kontrol Mengalahkan flagellar Beberapa bukti menunjukkan bahwa jari-jari radial dan tengah -pair mikrotubulus memainkan peran penting dalam mengendalikan pembengkokan flagel . Pertama , flagela mutan kekurangan jari radial yang lumpuh . Selanjutnya , kompleks peraturan dynein , terletak di persimpangan antara jari-jari dan lengan radial dynein batin, baru-baru ini telah diidentifikasi oleh penelitian genetik penekan . Satu hipotesis adalah bahwa fosforilasi lengan dynein dalam menginaktivasi , sementara defosforilasi mengaktifkan itu menyebabkan geser antara mikrotubulus doublet luar. Tikungan Sebuah disebarkan ketika dynein -lengan batin tidak aktif dalam satu wilayah dan diaktifkan di wilayah tetangga . Pergi ke : Mikrotubulus Axonemal Apakah Dinamis dan Stabil Untuk axonemes untuk berpartisipasi dalam gerakan , mereka harus struktur yang stabil berlabuh oleh setidaknya salah satu ujungnya . Seperti disebutkan sudah, silia atau flagela yang berlabuh di akhir sitosol untuk tubuh basal . Selain perannya penahan, tubuh basal berfungsi sebagai inti untuk perakitan mikrotubulus flagellar . Ingat bahwa tubuh basal memiliki sembilan mikrotubulus triplet . Tubulus sembilan A dan B dari kembar tiga ini muncul untuk memulai perakitan dari sembilan mikrotubulus doublet luar silia atau flagela dengan menumbuhkan keluar dari tubuh basal selama pemanjangan batang axonemal . Studi pada perakitan flagella dan silia memberikan bukti pertama bahwa mikrotubulus yang memanjang dengan memasukkan subunit tubulin di ujungnya . Model ini awalnya dibuktikan dengan autoradiografi sel yang regenerasi flagela mereka di hadapan subunit tubulin radioaktif ( dan komponen axonemal lainnya ) . Penelitian yang lebih baru menggunakan sel Chlamydomonas rekombinan telah mengkonfirmasi bahwa penambahan subunit tubulin dan penggabungan komponen axonemal lainnya

terjadi pada ujung distal dari flagela ( Gambar 19-33 ) . Dalam eksperimen ini , sel Chlamydomonas mengekspresikan tubulin subunit epitop - tag dikawinkan dengan sel tipe liar yang flagela telah diamputasi . Setelah kawin , yang melibatkan fusi dari dua sel dan sitoplasma pencampuran mereka , sel diploid regenerasi full-length flagela dengan memasukkan subunit tubulin tag . Antibodi terhadap epitop tag menunjukkan bahwa tubulin rekombinan lokal dalam tips distal flagela regenerasi . Pola ini bisa muncul hanya jika perpanjangan terjadi pada ujung dan tidak dasar . Gambar 19-33 . Majelis mikrotubulus flagellar . Gambar 19-33 Majelis mikrotubulus flagellar . ( a) Diagram skematis percobaan di mana sel-sel dua Chlamydomonas dikawinkan . Satu sel memiliki flagela yang diamputasi dan regenerasi mereka , ( more. .. ) Pergi ke : RINGKASAN Flagellar mengalahkan sel-sel mendorong maju , dan pemukulan silia menyapu bahan di jaringan . Meskipun nama mereka berbeda, flagela dan silia memiliki struktur axoneme sama , termasuk sembilan mikrotubulus doublet diatur dalam lingkaran sekitar dua singlet mikrotubulus pusat ( lihat Gambar 19-28 ) . Berjalan dari dynein lengan membentang dari satu doublet terhadap ( - ) akhir doublet tetangga menghasilkan kekuatan geser di axoneme ( lihat Gambar 19-31 ) . Gaya ini diubah menjadi sebuah tikungan oleh daerah yang menolak geser. Axonemal dynein lebih besar dan lebih kompleks daripada dynein sitosol . Alih-alih kargo vesikel diangkut oleh sitosolik dynein , axonemal dynein bergerak satu mikrotubulus di permukaan mikrotubulus tetangganya ( lihat Gambar 19 - 32c ) . The ( - ) ujung mikrotubulus dalam silia atau flagela yang berlabuh di tubuh basal dan ekstensi dari mikrotubulus yang terletak di sana . Pemanjangan silia dan flagela terjadi dengan penambahan subunit - tubulin ke distal ( + ) akhir mikrotubulus axonemal .

NCBI

Section 34.4A Rotary Motor Drives Bacterial Motion

In one second, a motile bacterium can move approximately 25 m, or about 10 body lengths. A human being sprinting at a proportional rate would complete the 100-meter dash in slightly more than 5 seconds. The motors that power this impressive motion are strikingly different from the eukaryotic motors that we have seen so far. In the bacterial motor, an element spins around a central axis rather than moving along a polymeric track. The direction of rotation can change rapidly, a feature that is central to chemotaxis, the process by which bacteria swim preferentially toward an increasing concentration of certain useful compounds and away from potentially harmful ones. Go to:

34.4.1 Bacteria Swim by Rotating Their Flagella

Bacteria such as Eschericia coli and Salmonella typhimurium swim by rotating flagella that lie on their surfaces (Figure 34.28). When the flagella rotate in a counterclockwise direction (viewed from outside the bacterium), the separate flagella form a bundle that very efficiently propels the bacterium through solution.

Figure 34.28 Bacterial Flagella. Electron micrograph of S. typhimurium shows flagella in a bundle. [Courtesy of Dr. Daniel Koshland, Jr.]

Bacterial flagella are polymers approximately 15 nm in diameter and as much as 15 m in length, composed of 53-kd subunits of a protein called flagellin (Figure 34.29). These subunits associate into a helical structure that has 5.5 subunits per turn, giving the appearance of 11 protofilaments. Each flagellum has a hollow core. Remarkably, flagella form not by growing at the base adjacent to the cell body but, instead, by the addition of new subunits that pass through the hollow core and add to the free end. Each flagellum is intrinsically twisted in a left-handed sense. At its base, each flagellum has a rotory motor.

Figure 34.29 Structure of Flagellin. Go to: A bacterial flagellum is a helical polymer of the protein flagellin.

34.4.2 Proton Flow Drives Bacterial Flagellar Rotation

Early experiments by Julius Adler demonstrated that ATP is not required for flagellar motion. What powers these rotary motors? The necessary free energy is derived from the proton gradient that exists across the plasma membrane. The flagellar motor is quite complex, containing as many as 40 distinct proteins (Figure 34.30). Five components particularly crucial to motor function have been identified through genetic studies. MotA is a membrane protein that appears to have four transmembrane helices as well as a cytoplasmic domain. MotB is another membrane protein with a single transmembrane helix and a large periplasmic domain. Approximately 11 MotA - MotB pairs form a ring around the base of the flagellum. The proteins FliG, FliM, and FliN are part of a disc-like structure called the MS (membrane and supramembrane) ring, with approximately 30 FliG subunits coming together to form the ring. The three-dimensional structure of the carboxyl-terminal half of FliG reveals a wedge-shaped domain with a set of charged amino acids, conserved among many species, lying along the thick edge of the wedge (Figure 34.31).

Figure 34.30 Flagellar Motor. A schematic view of the flagellar motor, a complex structure containing as many as 40 distinct types of protein. The approximate positions of the proteins MotA and MotB (red), FliG (orange), FliN (yellow), and FliM (green) are shown. (more...)

Figure 34.31 Flagellar Motor Components. Approximately 30 subunits of FliG assemble to form part of the MS ring. The ring is surrounded by approximately 11 structures consisting of MotA and MotB. The carboxyl-terminal domain of FliG includes a ridge lined with charged (more...) The MotA - MotB pair and FliG combine to create a proton channel that drives rotation of the flagellum. How can proton flow across a membrane drive mechanical rotation? We have seen such a process earlier in regard to ATP synthase (Section 18.4.4). Recall that the key to driving the rotation of the subunit of ATP synthase is the a subunit of the F0 fragment. This subunit appears to have two half-channels; protons can move across the membrane only by moving into the half-channel from the side of the membrane with the higher local proton concentration, binding to a disc-like structure formed by the c subunits, riding on this structure as it rotates to the opening of the other half-channel, and exiting to the side with the lower local proton concentration. Could a similar mechanism apply to flagellar rotation? Indeed, such a mechanism was first proposed by Howard Berg to explain flagellar rotation before the rotary mechanism of ATP synthase was elucidated. Each MotA - MotB pair is conjectured to form a structure that has two half-channels; FliG serves as the rotating proton carrier, perhaps with the participation of some of the charged resides identified in crystallographic studies (Figure 34.32). In this scenario, a proton from the periplasmic space passes into the outer half-channel and is transferred to an FliG subunit. The MS ring rotates, rotating the flagellum with it and allowing the proton to pass into the inner half-channel and into the cell. Ongoing structural and mutagenesis studies are testing and refining this hypothesis.

Figure 34.32 Proton Transport-Coupled Rotation of the Flagellum. (A) MotA-MotB may form a structure having two half-channels. (B) One model for the mechanism of coupling rotation to a proton gradient requires protons to be taken up into the outer half-channel and (more...)

Go to:

34.4.3 Bacterial Chemotaxis Depends on Reversal of the Direction of Flagellar Rotation

Many species of bacteria respond to changes in their environments by adjusting their swimming behavior. Examination of the paths taken is highly revealing (Figure 34.33). The bacteria swim in one direction for some length of time (typically about a second), tumble briefly, and then set off in a new direction. The tumbling is caused by a brief reversal in the direction of the flagellar motor. When the flagella rotate counterclockwise, the helical filaments form a coherent bundle favored by the intrinsic shape of each filament, and the bacterium swims smoothly. When the rotation reverses, the bundle flies apart because the screw sense of the helical flagella does not match the direction of rotation (Figure 34.34). Each flagellum then pulls in a different direction and the cell tumbles.

Figure 34.33 Charting a Course. This projection of the track of an E. coli bacterium was obtained with a microscope that automatically follows bacterial motion in three dimensions. The points show the locations of the bacterium at 80-ms intervals. [After H. C. Berg. (more...)

Figure 34.34 Changing Direction. Tumbling is caused by an abrupt reversal of the flagellar motor, which disperses the flagellar bundle. A second reversal of the motor restores smooth swimming, almost always in a different direction. [After a drawing kindly provided (more...) In the presence of a gradient of certain substances such as glucose, bacteria swim preferentially toward the direction of the higher concentration of the substance. Such compounds are referred to as chemoattractants. Bacteria also swim preferentially away from potentially harmful compounds such as phenol, a chemorepellant. The process of moving in specific directions in response to environmental cues is called chemotaxis. In the presence of a gradient of a chemoattractant, bacteria swim for longer periods of time without tumbling when moving toward higher concentrations of chemoattractant. In contrast, they tumble more frequently when moving toward lower concentrations of chemoattractant. This behavior is reversed for chemorepellants.

The result of these actions is a biased random walk that facilitates net motion toward conditions more favorable to the bacterium. Chemotaxis depends on a signaling pathway that terminates at the flagellar motor. The signaling pathway begins with the binding of molecules to receptors in the plasma membrane (Figure 34.35). In their unoccupied forms, these receptors initiate a pathway leading eventually to the phosphorylation of a specific aspartate residue on a soluble protein called CheY. In its phosphorylated form, CheY binds to the base on the flagellar motor. When bound to phosphorylated CheY, the flagellar motor rotates in a clockwise rather than a counterclockwise direction, causing tumbling.

Figure 34.35 Chemotaxis Signaling Pathway. Receptors in the plasma membrane initiate a signaling pathway leading to the phosphorylation of the CheY protein. Phosphorylated CheY binds to the flagellar motor and favors clockwise rotation. When an attractant binds to (more...) The binding of a chemoattractant to a surface receptor blocks the signaling pathway leading to CheY phosphorylation. Phosphorylated CheY spontaneously hydrolyzes and releases its phosphate group in a process accelerated by another protein, CheZ. The concentration of phosphorylated CheY drops, and the flagella are less likely to rotate in a clockwise direction. Under these conditions, bacteria swim smoothly without tumbling. Thus, the reversible rotary flagellar motor and a phosphorylation-based signaling pathway work together to generate an effective means for responding to environmental conditions. Bacteria sense spatial gradients of chemoattractants by measurements separated in time. A bacterium sets off in a random direction and, if the concentration of the chemoattractant has increased after the bacterium has been swimming for a period of time, the likelihood of tumbling decreases and the bacterium continues in roughly the same direction. If the concentration has decreased, the tumbling frequency increases and the bacterium tests other random directions. The success of this mechanism once again reveals the power of evolutionary problem solving many possible solutions are tried at random, and those that are beneficial are selected and exploited.
Bagian 34.4A Rotary motor Drives Gerak Bakteri Dalam satu detik , bakteri motil dapat bergerak sekitar 25 m, atau sekitar 10 panjang tubuh . Seorang manusia yang berlari pada tingkat proporsional akan menyelesaikan lari 100 meter sedikit lebih dari 5 detik . Motor yang daya gerak ini mengesankan adalah sangat berbeda dari motor eukariotik yang telah kita lihat sejauh ini. Pada motor bakteri , elemen berputar di sekitar poros tengah daripada bergerak sepanjang jalur polimer . Arah rotasi dapat berubah dengan cepat , fitur yang merupakan pusat

kemotaksis , proses dimana bakteri berenang istimewa terhadap peningkatan konsentrasi senyawa yang berguna tertentu dan jauh dari orang-orang yang berpotensi membahayakan . Pergi ke : 34.4.1 Bakteri Berenang dengan Rotating Flagella mereka Bakteri Eschericia coli seperti Salmonella typhimurium dan berenang dengan memutar flagela yang terletak pada permukaan mereka ( Gambar 34.28 ) . Ketika flagela berputar dalam arah berlawanan ( dilihat dari luar bakteri ) , flagela terpisah membentuk bundel yang sangat efisien mendorong bakteri melalui solusi . Gambar 34.28 . Flagella bakteri . Gambar 34.28 Flagella bakteri . Elektron mikrograf S. typhimurium menunjukkan flagela dalam sebuah kemasan. [ Courtesy of Dr Daniel Koshland , Jr ] Flagela bakteri adalah polimer sekitar 15 nm diameter dan sebanyak 15 pM panjang , terdiri dari subunit 53 - kd dari protein yang disebut flagellin ( Gambar 34.29 ) . Ini subunit berasosiasi menjadi struktur heliks yang memiliki 5,5 subunit per giliran , memberikan penampilan 11 protofilaments . Setiap flagela memiliki inti berongga . Hebatnya , bentuk flagela tidak dengan tumbuh di dasar berdekatan dengan sel tubuh tetapi, sebaliknya , dengan penambahan subunit baru yang melewati hollow core dan menambah ujung bebas . Setiap flagela secara intrinsik dipelintir dalam arti kidal . Pada dasarnya , setiap flagela memiliki motor rotory . Gambar 34.29 . Struktur flagellin . Gambar 34.29 Struktur flagellin . Gambar mouse.jpg Sebuah flagela bakteri merupakan polimer heliks dari flagellin protein . Pergi ke : 34.4.2 Proton Arus Drives Rotasi flagellar Bakteri Percobaan awal oleh Julius Adler menunjukkan bahwa ATP tidak diperlukan untuk gerak flagellar . Apa kekuatan motor tersebut rotary ? Yang diperlukan energi bebas berasal dari gradien proton yang ada di membran plasma . Motor flagellar cukup kompleks , yang mengandung sebanyak 40 protein yang berbeda ( Gambar 34.30 ) . Lima komponen khususnya sangat penting untuk fungsi motorik telah diidentifikasi melalui studi genetik . Mota adalah protein membran yang tampaknya memiliki empat heliks transmembran serta domain sitoplasmik . MotB adalah protein membran lain dengan heliks transmembran tunggal dan domain periplasmic besar . Sekitar 11 Mota - MotB pasangan membentuk sebuah cincin di sekeliling dasar flagela . Protein FliG , flim , dan Flin adalah bagian dari struktur seperti cakram disebut MS ( membran dan supramembrane ) cincin , dengan sekitar 30 subunit FliG datang bersama-sama untuk membentuk cincin . Struktur tiga - dimensi dari setengah karboksil - terminal FliG mengungkapkan domain berbentuk baji dengan satu set asam amino dibebankan , dilestarikan di antara banyak spesies , berbaring sepanjang tepi tebal baji (Gambar 34.31 ) .

Gambar 34.30 . Motor flagellar . Gambar 34.30 Motor flagellar . Sebuah pandangan skematis dari motor flagellar , struktur kompleks yang mengandung sebanyak 40 jenis yang berbeda dari protein . Posisi perkiraan protein Mota dan MotB (merah ) , FliG ( oranye ) , Flin ( kuning) , dan flim ( hijau) yang akan ditampilkan. ( more. .. ) Gambar 34.31 . Flagellar Komponen motor . Gambar 34.31 Flagellar Komponen motor . Gambar mouse.jpg Sekitar 30 subunit FliG berkumpul untuk membentuk bagian dari cincin MS . Cincin ini dikelilingi oleh sekitar 11 struktur yang terdiri dari Mota dan MotB . The karboksil - terminal domain FliG termasuk ridge dilapisi dengan bermuatan ( more. .. ) The Mota - Pasangan MotB dan FliG bergabung untuk membuat saluran proton yang mendorong rotasi flagela . Bagaimana proton dapat mengalir melintasi membran berkendara rotasi mekanik ? Kita telah melihat proses tersebut sebelumnya dalam hal ATP synthase ( Bagian 18.4.4 ) . Ingat bahwa kunci untuk mendorong rotasi subunit ATP sintase adalah subunit dari F0 fragmen . Subunit ini tampaknya memiliki dua setengah - saluran, proton dapat bergerak melintasi membran hanya dengan pindah ke babak channel dari sisi membran dengan tinggi konsentrasi proton lokal , mengikat struktur seperti cakram dibentuk oleh subunit c , naik pada struktur ini seperti berputar pada pembukaan setengah lainnya channel , dan keluar ke samping dengan rendah konsentrasi proton lokal. Bisa mekanisme yang serupa berlaku untuk rotasi flagellar ? Memang , mekanisme tersebut pertama kali diusulkan oleh Howard Berg menjelaskan rotasi flagellar sebelum mekanisme putar ATP sintase dielusidasi . Setiap Mota - pair MotB yang menduga untuk membentuk struktur yang memiliki dua setengah - saluran, FliG berfungsi sebagai pembawa proton berputar , mungkin dengan partisipasi dari beberapa dibebankan berada diidentifikasi dalam studi kristalografi ( Gambar 34.32 ) . Dalam skenario ini , proton dari ruang periplasmic melewati ke luar setengah -channel dan ditransfer ke subunit FliG . MS cincin berputar , berputar flagela dengan itu dan memungkinkan proton untuk masuk ke bagian dalam setengah - saluran dan ke dalam sel . Studi struktural dan mutagenesis yang sedang berlangsung pengujian dan pemurnian hipotesis ini . Gambar 34.32 . Proton Transport - Coupled Rotasi Flagela tersebut . Gambar 34.32 Proton Transport - Coupled Rotasi Flagela tersebut . ( A ) Mota - MotB dapat membentuk struktur yang memiliki dua setengah - saluran . ( B ) Salah satu model untuk mekanisme rotasi sambungan ke gradien proton memerlukan proton yang akan diambil sampai ke luar setengah - saluran dan ( more. .. ) Pergi ke : 34.4.3 Chemotaxis bakteri Tergantung pada Pembalikan Arah Rotasi flagellar Banyak spesies bakteri merespon perubahan dalam lingkungan mereka dengan menyesuaikan perilaku mereka berenang . Pemeriksaan jalur yang diambil sangat mengungkapkan ( Gambar 34,33 ) . Bakteri berenang di satu arah untuk beberapa jangka waktu ( biasanya sekitar satu detik ) , jatuh sebentar , dan kemudian berangkat ke arah yang baru . Yang jatuh disebabkan oleh pembalikan singkat ke arah motor

flagellar . Ketika flagela yang memutar berlawanan , filamen heliks membentuk bundel koheren disukai oleh bentuk intrinsik setiap filamen , dan bakteri berenang lancar . Ketika rotasi berbalik , bundel lalat terpisah karena rasa sekrup dari flagela heliks tidak sesuai dengan arah rotasi (Gambar 34.34 ) . Setiap flagela kemudian menarik dalam arah yang berbeda dan sel terjatuh . Gambar 34,33 . Charting Kursus a . Gambar 34,33 Charting Kursus a . Ini proyeksi trek dari bakteri E. coli diperoleh dengan mikroskop yang secara otomatis mengikuti gerak bakteri dalam tiga dimensi . Titik-titik menunjukkan lokasi dari bakteri pada interval 80 ms . [ Setelah H. C. Berg . ( more. .. ) Gambar 34.34 . Mengubah Arah . Gambar 34.34 Mengubah Arah . Tumbling disebabkan oleh pembalikan tiba-tiba motor flagellar , yang menyebar bundel flagellar . Sebuah pembalikan kedua motor mengembalikan renang halus, hampir selalu dalam arah yang berbeda . [ Setelah gambar ramah disediakan ( more. .. ) Di hadapan gradien zat tertentu seperti glukosa , bakteri berenang istimewa menuju arah konsentrasi yang lebih tinggi dari substansi . Senyawa-senyawa tersebut disebut sebagai chemoattractants . Bakteri juga berenang istimewa jauh dari senyawa yang berpotensi berbahaya seperti fenol , chemorepellant a . Proses bergerak dalam arah tertentu dalam menanggapi isyarat lingkungan disebut kemotaksis . Di hadapan gradien kemoatraktan sebuah , bakteri berenang untuk waktu yang cukup lama tanpa jatuh ketika bergerak ke arah konsentrasi yang lebih tinggi kemoatraktan . Sebaliknya , mereka lebih sering jatuh saat bergerak menuju konsentrasi yang lebih rendah dari kemoatraktan . Perilaku ini dibalik untuk chemorepellants . Hasil dari tindakan ini adalah random walk bias yang memfasilitasi gerakan bersih terhadap kondisi yang lebih menguntungkan bagi bakteri . Kemotaksis tergantung pada jalur sinyal yang berakhir pada motor flagellar . Jalur sinyal dimulai dengan pengikatan molekul reseptor di membran plasma ( Gambar 34.35 ) . Dalam bentuk kosong mereka, reseptor ini memulai jalur yang akhirnya mengakibatkan fosforilasi residu aspartat spesifik pada protein larut yang disebut Chey . Dalam bentuk terfosforilasi nya , Chey mengikat dasar pada motor flagellar . Ketika terikat terfosforilasi Chey , motor flagellar berputar searah jarum jam dalam daripada arah yang berlawanan , menyebabkan jatuh . Gambar 34.35 . Kemotaksis Signaling Pathway . Gambar 34.35 Kemotaksis Signaling Pathway . Reseptor di membran plasma memulai jalur sinyal yang mengarah ke fosforilasi protein Chey . Terfosforilasi Chey mengikat motor flagellar dan nikmat rotasi searah jarum jam . Ketika atraktan mengikat ( more. .. ) Pengikatan kemoatraktan ke sebuah reseptor permukaan blok jalur sinyal yang mengarah ke fosforilasi Chey . Terfosforilasi Chey spontan menghidrolisis dan melepaskan gugus fosfat dalam proses dipercepat

oleh protein lain , Chez . Konsentrasi Chey tetes terfosforilasi , dan flagela yang cenderung untuk memutar searah jarum jam . Dengan kondisi tersebut , bakteri berenang lancar tanpa jatuh . Dengan demikian, reversibel rotary flagellar bermotor dan jalur sinyal berbasis fosforilasi bekerja sama untuk menghasilkan cara yang efektif untuk menanggapi kondisi lingkungan . Bakteri merasakan gradien spasial chemoattractants oleh pengukuran dipisahkan dalam waktu . Sebuah bakteri set off dalam arah acak dan , jika konsentrasi chemoattractant telah meningkat setelah bakteri telah berenang selama periode waktu , kemungkinan jatuh menurun dan bakteri terus di sekitar arah yang sama . Jika konsentrasi menurun , frekuensi meningkat jatuh dan bakteri tes arah acak lainnya . Keberhasilan mekanisme ini sekali lagi mengungkapkan kekuatan evolusioner pemecahan masalah banyak solusi yang mungkin dicoba secara acak , dan orang-orang yang bermanfaat dipilih dan dieksploitasi .

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK22489/

structure of flagelin

Figure 34.30Flagellar Motor

A schematic view of the flagellar motor, a complex structure containing as many as 40 distinct types of protein. The approximate positions of the proteins MotA and MotB (red), FliG (orange), FliN (yellow), and FliM (green) are shown.

Figure 34.31Flagellar Motor Components

Approximately 30 subunits of FliG assemble to form part of the MS ring. The ring is surrounded by approximately 11 structures consisting of MotA and MotB. The carboxyl-terminal domain of FliG includes a ridge lined with charged residues that may participate in proton transport.

Figure 34.35Chemotaxis Signaling Pathway

Receptors in the plasma membrane initiate a signaling pathway leading to the phosphorylation of the CheY protein. Phosphorylated CheY binds to the flagellar motor and favors clockwise rotation. When an attractant binds to the receptor, this pathway is blocked, and counterclockwise flagellar rotation and, hence, smooth swimming results. When a repellant binds, the pathway is stimulated, leading to an increased concentration of phosphoylated CheY and, hence, more frequent clockwise rotation and tumbling.