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Fiche technique n22

LE MILIEU HAJNA-KLIGER
1. Intrt Ce milieu didentification permet de mettre en vidence : la fermentation du glucose avec ou sans production de gaz la dgradation du lactose la production de H2S Il permet aussi la recherche de la -galactosidase en 2me jour. 2. Composition
Composant Extrait de viande de buf, de levures, peptones Chlorure de sodium Thiosulfate de sodium Citrate ferrique Lactose Glucose Rouge de phnol Agar pH Quantit (g/L) 15 5 0,3 0,2 10 1 0,0024 11 7,1 Rle Apport de facteur de croissance, source dN, de C. Maintien de lisotonie Lecture dun caractre biochimique Lecture dun caractre biochimique Lecture dun caractre biochimique Indicateur de pH glifiant

3. Principe Mise en vidence de la dgradation du glucose et du lactose Ce milieu contient deux glucides, le glucose et le lactose prsents des concentrations diffrentes : [glucose] < [lactose] le glucose est toujours utilis en premier par la bactrie, jusqu puisement car le glucose inhibe les enzymes ncessaires lutilisation du lactose. On distingue deux zones dans le milieu : dans le culot, en anarobiose, le glucose, en faible concentration, est dgrad par la bactrie par voie fermentative. Sa dgradation entrane la formation de produits acides. Lacidification au niveau du culot est rvle par le virage de lindicateur color (le rouge de phnol) sa teinte acide (jaune).

Il y a ventuellement production de gaz (H 2 ou CO2) plus ou moins abondants formant des bulles ou dcollant la glose.
sur la pente, en arobiose, le glucose est dgrad par voie oxydative. Lacidification produite sera donc faible, dautant que la quantit de glucose prsente est faible. Deux cas peuvent alors se prsenter : o la bactrie ne peut pas dgrader le lactose : lorsque le glucose est puis, elle dgrade alors les peptones entranant la formation de produits basiques. Lalcalinisation est rvle par le virage de lindicateur color (le rouge de phnol) sa teinte basique (rouge). o la bactrie peut utiliser le lactose : aprs puisement du glucose, elle dgrade le lactose, entranant ainsi la formation de produits acides en grande quantit. Dans ce cas, lindicateur de pH reste sa teinte acide au niveau de la pente. Remarque : une bactrie glucose est forcment lactose -.

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Fiche technique n22

Mise en vidence de la production de H2S La prsence de thiosulfate de sodium dans le milieu et de fer III permet galement dapprcier la capacit des bactries produire de lH 2S partir du thiosulfate. le H2S forme un prcipit noir avec le Fer III. 4. Technique densemencement A partir dune suspension bactrienne, ensemencer laide dune pipette Pasteur ferme: o la pente par stries serres o le culot par piqre centrale Incuber 24 heures 37C, bouchon dviss 5. Lecture et interprtations
Zone du tube Caractre recherch Observation Culot jaune Culot Glucose Culot couleur inchange Le glucose na pas t utilis. Absence dacidification La bactrie est dite glucose Interprtation Conclusion Le glucose a t utilis par voie fermentative. La bactrie est dite glucose +

Acidification du culot

(anarobiose)

Pente rouge Pente Lactose Pente jaune

Absence dacidification (la bactrie utilise les peptones avec alcalinisation du milieu)

Le lactose na pas t utilis. La bactrie est dite lactose-

(arobiose)

Le lactose a t utilis. Acidification de la pente La bactrie est dite lactose + La bactrie produit du gaz en fermentant le glucose, elle est dite gaz + La bactrie est dite gaz La bactrie est dite H2S +

Production de gaz Culot ou jonction pente culot

Prsence de bulles Absence de bulle Prsence dun prcipit noir Absence de prcipit noir

Production de gaz Pas de production de gaz La bactrie a rduit le thiosulfate de sodium en H2S qui a form un prcipit noir avec le fer III La bactrie na pas rduit le thiosulfate de sodium en H2S

Production dH2S

La bactrie est dite H2S -