La citogentica constitucional se ocupa del anlisis de los cromosomas en clulas que representan la lnea germinal del individuo, y se llama

as para distinguirla de los estudios citgenticos sobre poblaciones celulares concretas que no representan la constitucin gentica de todo el individuo. La citogentica clsica se basa en la creacin y anlisis del cariotipo, que es la representacin ordenada de los cromosomas cuando se hacen visibles en metafase. Hasta los aos 50 se crea que los humanos tenamos 48 cromosomas y que el sexo dependa del nmero de cromosomas X, como sucede en Drosophila. En 1956, se determin el nmero exacto de cromosomas en la especie humana, y en 1959 ya se haban identificado las anomalas cromosmicas caractersticas de los Sndrome de Down, Turner y Klinefelter. Esto se debi a mejoras tcnicas que permitieron cultivar leucocitos de sangre perifrica, detener el ciclo celular especficamente en metafase (utilizando sustancias como la colchicina) y realizar tinciones especficas del ADN. En 1968 Caspersson introdujo las bandas Q, y en 1971 se introdujeron las bandas G, que es el mtodo ms utilizado para generar cariotipos. El mtodo habitual de cariotipado incluye la adicin de un mitgeno (habitualmente fitohemaglutinina) a una suspensin de linfocitos, tras lo cual se cultivan las clulas durante 48-72 horas; cuando hay suficiente nmero de clulas, se detiene el ciclo celular en mitosis utilizando colchicina, de modo que todas las clulas se habrn parado enmetafase. El tratamiento con una solucin hipotnica rompe las clulas y separa los cromosomas, tras lo cual se procede a la tincin de la muestra. A continuacin se aplican distintas tinciones, que producen patrones de bandas caractersticos en los distintos cromosomas. En el mtodo de bandas Q, el primero en aparecer histricamente, los cromosomas se tien con un colorante fluorescente con afinidad por regiones ricas en adeninas y timinas, lo cual produce unas bandas caractersticas en los cromosomas cuando se observan con luz ultravioleta. El mtodo de bandas G consiste en someter las preparaciones a una digestin suave con tripsina antes de teirlas con Giemsa, un colorante con afinidad por el ADN; cuando se analizan las preparaciones al microscopio de luz, se observan unas bandas oscuras (bandas G) separadas por unas bandas claras. Para teir los cromosomas segn el mtodo de bandas R se someten las preparaciones a un tratamiento de calor en solucin salina antes de la tincin de Giemsa, lo cual produce un patrn de bandas claras y oscuras que es justamente el inverso al que se obtiene por el mtodo de bandas G. Esto es as porque el tratamiento por calor hace que se desnaturalicen las regiones ricas en adeninas y timinas, por lo que las bandas R oscuras corresponden a las bandas G claras. El mtodo de bandas C se utiliza para teir la

heterocromatina constitutiva (centrmeros) y consiste en la tincin con Giemsa tras la desnaturalizacin en una solucin saturada de hidrxido de bario. En conjunto, utilizando estos mtodos, y otros que son menos utilizados, se pueden ver cuatro tipos principales de estructuras: Bandas de heterocromatina constitutiva (bandas C) que corresponden a las regiones que permanecen condensadas durante la intefase. Bandas de eucromatina, formando un patrn de bandas claras y oscuras alternas a lo largo de todo el cromosoma; se ven como bandas G, R o Q. Regiones organizadoras del nuclolo, correspondientes a las regiones cromosmicas donde residen los genes del ARN ribosomal; se tien con tinciones especiales de plata. Quinetocoros, las estructuras centromricas que aparecen en mitosis y meiosis a las que se unen los microtbulos del huso; se tien con tinciones especiales que usan anticuerpos especficos.

Los cromosomas (22 pares de autosomas ms los cromosomas sexuales) se ordenan en parejas de cromosomas homlogos, cada uno de los cuales tiene a su vez las dos cromtidas que resultan de la replicacin del ADN en la fase S previa, aunque en ocasiones las dos cromtidas estn pegadas y no se distinguen al microscopio. La forma de ordenar los cromosomas responden a un convenio y se lleva a cabo teniendo en cuenta el tamao del cromosoma y la posicin del centrmero, asignando a cada uno un brazo corto (p) y un brazo largo (q). As se pueden distinguir cromosomas metacntricos (ambos brazos de la misma longitud), submetacntricos (brazo p ms corto que el brazo q) o acrocntricos (brazo corto formado por ADN satlite con ADN ribosomal en el centro). Adems de las tcnicas de bandeo convencionales, hoy contamos con una serie de tcnicas que se engloban bajo una nueva disciplina llamada Citogentica Molecular, que combina la citogentica clsica con la hibridacin especfica de sondas marcadas con fluorocromos (FISH). La tcnica de FISH, muy utilizada hoy en da, consiste en la hibridacin de sondas especficas con cromosomas metafsicos, que previamente han desnaturalizado como en cualquier reaccin de hibridacin. Aunque inicialmente se utilizaban preparaciones de metafase, tambin se puede hacer FISH directamente en ncleos interfsicos, lo que permite detectar anomalas numricas o estructurales especficas incluso en poblaciones celulares que

no pueden dividirse o que no producen buenas metafases. Algunas variantes de la tcnica FISH incluyen el llamado pintado cromosmico (painting), que permite resaltar un cromosoma concreto, incluyendo los fragmentos del mismo que se hayan translocado a otras posiciones. Igualmente, la tcnica de SKY (Spectral Karyotyping) consiste en el pintado de cada cromosoma con un color distinto, gracias a combinaciones de fluorocromos y tcnicas interferomtricas en la deteccin de la fluorescencia emitida. A pesar de su complejidad y alto coste, el SKY-FISH es una tcnica valiossima para detectar pequeas alteraciones cromosmicas que, de otra forma, pasaran totalmente desapercibidas. Otra variante de la tcnica de CGH (Comparative Genomic Hybridisation), que permite detectar ganancias o prdidas de material gentico en un ADN prueba cuando se compara con un ADN de referencia, y es muy utilizada en la bsqueda de regiones cromosmicas amplificadas o delecionadas en tumores. El ISCN tambin es responsable de unificar la nomenclatura para la descripcin de cariotipos normales o alterados. Las reglas bsicas ms importantes que hay que conocer son: Se especifica en primer lugar el nmero total de cromosomas, seguido de los cromosomas sexuales y, si las hay, las alteraciones que se encuentren. Estos datos van separados por comas, sin espacios antes ni despus de la coma. Por ejemplo, el cariotipo de un varn normal se expresara como 46,XY. Los individuos denominados mosaicos constitucin cromosmica por una barra /. Las alteraciones se describen utilizando abreviaturas apropiadas. Ejemplos: del significa delecin; dup es duplicacin; inv es inversin, t translocacin. Despus de cada una de estas alteraciones se indican los cromosomas implicados (entre parntesis) y a continuacin las regiones implicadas (en otro parntesis distinto). Las ganancias o prdidas de cromosomas completos se indican con el signo + o antes del nmero correspondiente al cromosoma implicado. se describen separando cada

Anomalas del nmero de cromosomas

Las anomalas cromosmicas, tambin llamadas cromosomopatas, son un tipo muy importante de patologas genticas. Los fenotipos provocados por las anomalas cromosmicas

son muy variables, pero podemos describir algunas caractersticas generales que se cumplen en casi todos:

Se asocian a retraso en el desarrollo y retraso mental, frecuentemente con talla baja. Se asocian con alteraciones faciales y otras anomalas menores de cabeza y cuello. Se asocian a determinadas malformaciones congnitas que suelen seguir un patrn especfico de cada sndrome.

Clsicamente, las anomalas cromosmicas se dividen en dos grandes grupos: aquellas debidas a un nmero anormal de cromosomas (anomalas numricas) y las debidas a alteraciones en la estructura de los cromosomas (anomalas estructurales). Por lo que respecta a las anomalas numricas, en conjunto tienen una frecuencia en torno al 0,5 por ciento de nacidos vivos (1/200).