Departamento de Biologa Molecular

PRACTICAS DE GENETICA HUMANA

Curso 2007-2008
Profesora responsable: Mara Victoria Mendiola

Alumno: Grupo:

Las Prcticas de Gentica Humana son de realizacin obligatoria para todos los alumnos de la asignatura. Se controlar la asistencia y se corregir el cuaderno de prcticas. Por otra parte, los contenidos tericos de estas prcticas sern tambin material de los exmenes tericos de Junio y Septiembre.

Se realizar un total de seis prcticas que tendrn una duracin de 5 das, con el siguiente plan de trabajo:

Da 1. Da 2.

Prctica 1. Prctica 2.

Indice
Prctica 1. El cariotipo humano ............................................
2 p p p 23 p 31

Prctica 4. Herencia polignica ............................................

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Prctica 5. Anlisis de polimorfismos .................................... Prctica 6. Gentica de poblaciones ....................................

PRACTICA 1 EL CARIOTIPO HUMANO Cariotipo normal y de individuos con alteraciones cromosmicas

Objetivo y material
El objetivo de esta prctica es el estudio del cariotipo humano. Se pretende que el alumno aprenda a elaborar cariogramas y a distinguir el cariotipo normal de cariotipos que reflejan alteraciones cromosmicas, obtenidos de individuos que presenten diferentes sndromes. Para ello se utilizar un programa de ordenador en el que se muestran los cromosomas metafsicos teidos pertenecientes a diversos individuos. El alumno deber ordenar el cariograma y determinar si existen anomalas cromosmicas en cada individuo.

Introduccin
El cariotipo es el complemento cromosmico particular de un individuo y viene definido por el nmero y morfologa de los cromosomas en la metafase mittica. En la especie humana la dotacin cromosmica es de 2n = 46 (22 pares de autosomas y un par de cromosomas sexuales). Utilizando tcnicas de tincin estndar los cromosomas aparecen uniformemente teidos en metafase y se clasifican en 7 grupos de la A a la G atendiendo a su longitud relativa y a la posicin del centrmero que define su morfologa. Los autosomas se numeran del 1 al 22 ordenados por tamaos decrecientes y por la posicin del centrmero. Los cromosomas sexuales X e Y constituyen un par aparte, independientemente del resto (por su tamao, el cromosoma X se incluira en el grupo C, y el Y, en el grupo G). De esta forma el cariotipo humano queda constituido as: Grupo A B C D E F G X, Y Pares cromosmicos 1, 2 y 3 4y5 6, 7, 8, 9, 10, 11 y 12 13, 14 y 15 16, 17 y 18 19 y 20 21 y 22 Caractersticas Cr. muy grandes casi metacntricos (1 y 3 metacntricos, pero 2 submetacntrico) Cr. grandes y submetacntricos, con dos brazos muy diferentes en tamao Cr. medianos submetacntricos Cr. medianos acrocntricos con satlites Cr. pequeos, metacntrico el 16 y submetacntricos 17, 18 Cr. pequeos y metacntricos Cr. pequeos y acrocntricos, con satlites. El cr. X es parecido al 6. El Y, al grupo G, pero sin satlites.

(Todos los cromosomas autosmicos estn ordenados en orden decreciente de tamao, excepto el cromosoma 21 que ahora se sabe que es ms pequeo que el 22) Sin embargo, atendiendo solamente a estos parmetros no es posible identificar inequvocamente cada par de cromosomas. Para ello es necesario utilizar diferentes tcnicas de bandeo cromosmico. Los distintos patrones de bandas que se consiguen son constantes y
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especficos de cada tcnica y determinan la distribucin de regiones cromosmicas que se revelan positiva o negativamente segn el mtodo utilizado.

Clasificacin de los cromosomas

A
1 2 3 4 5

C
6 7 8 9 10 11 12

D
13 14 15 16 17 18

E
Crs. sexuales

19

20

21

22

F
Citogentica clnica

En 1956, Tijo y Levan determinaran el complemento cromosmico diploide del hombre (2n = 46). En 1959 Lejeune describi la primera cromosomopata o enfermedad originada por una alteracin cromosmica, el sndrome de Down producido por una trisoma del cromosoma 21. Desde entonces, la Citogentica Humana ha ido desarrollndose como una ciencia mdica. Hay dos tipos fundamentales de cromosomopatas: - Variaciones cromosmicas estructurales: afectan a la estructura del cromosoma en cuanto a la ordenacin lineal de los genes. Aqu se incluyen deleciones, duplicaciones, inversiones y translocaciones.
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- Variaciones cromosmicas numricas: afectan al nmero de cromosomas. Incluyen las poliploidas (triploida: 3n; tetraploida: 4n) y los diversos tipos de aneuploida (trisomas: 2n+1; monosomas: 2n-1). Por otra parte, las anomalas cromosmicas pueden afectar a los autosomas o a los cromosomas sexuales. Las alteraciones cromosmicas ms frecuentes en humanos son: Anomalas autosmicas: Sndrome de Down, por trisoma del cromosoma 21, translocacin 21/21 o translocacin 14/21. Sndrome de Patau, por trisoma del par 13. Sndrome de Edwards, por trisoma del par 18. Sndrome Cri du Chat, por delecin parcial del brazo corto del cromosoma 5 (5p). Sndrome de DiGeorge, por delecin parcial del brazo largo del cromosoma 22 (22q11). Cromosoma Filadelfia, formado por una translocacin entre los cromosomas 9 y 22. Anomalas de los cromosomas sexuales: Sndrome de Klinefelter, por una constitucin XXY, XXXY, XXXXY. Sndrome XYY, cromosoma Y extra en varones. Sndrome de Turner, constitucin X0. Sndrome XXX, cromosoma X extra en mujeres. Actualmente se ha llegado a profundizar bastante en el conocimiento del cariotipo humano y se sabe que es relativamente frecuente la aparicin de anomalas cromosmicas. Por ejemplo, cerca de un 25% de los abortos ocurridos antes de la octava semana de gestacin tienen cariotipos anormales y un 0,5% de los recin nacidos presentan aneuploidas. Estas alteraciones no slo pueden producir anomalas en el propio individuo portador sino que, por tratarse de anomalas genticas, pueden transmitirse a la descendencia en el caso de que afecten a las clulas germinales. La deteccin anticipada de anomalas cromosmicas permite dictaminar las posibilidades de que la descendencia de una pareja portadora de una de ellas pueda presentarla o no. Para ello es preciso conocer el cariotipo de cada progenitor, lo que permite emitir un diagnstico de su posible descendencia, con lo que el individuo ser consciente de sus posibilidades. El estudio del cariotipo tiene tambin su aplicacin en el diagnstico prenatal. Es posible determinar la constitucin cromosmica del feto antes de su nacimiento pudiendo as observarse si presenta alguna anomala cromosmica detectable. Hoy en da, el diagnstico prenatal se practica a posteriori del inicio de la gestacin y los resultados positivos suelen plantear conflictos ticos y emocionales. Si bien, en muchos casos este tipo de diagnstico es el nico posible, como cuando la anomala cromosmica se produce en las clulas germinales de uno de los progenitores.

Protocolo
En la pantalla se presentarn los cromosomas desordenados sobre la plantilla donde hay que ordenar el cariograma. Pinchando con el ratn y arrastrndolos, se irn colocando sobre la casilla correspondiente. Habr que ordenarlos por parejas segn su tamao, la posicin del centrmero y las bandas, teniendo en cuenta las siguientes reglas: - pinchando en align all, todos los cromosomas se colocarn en posicin vertical, facilitando su ordenacin. - el brazo largo de cada cromosoma se sita hacia abajo. Para dar la vuelta a un cromosoma, pinchar dos veces sobre el mismo. - los autosomas se disponen en orden decreciente de tamaos mientras que los cromosomas sexuales deben ir por separado. - hay en total 5 cariotipos distintos (5 muestras o samples). Se recomienda empezar por la primera y hacer como mnimo las muestras 1, 2 y 3. Siguiendo estas instrucciones generales, proceder de la siguiente manera: 1. Contar los cromosomas y apuntar el nmero. 2. Buscar y colocar los cromosomas ms pequeos y acrocntricos que corresponden al grupo G y, cuando est presente, al cromosoma Y que ser el ms largo de los anteriores. En total sern 5 si es XY o 4 si es XX. 3. Buscar otros 6 cromosomas acrocntricos pero ms grandes que los anteriores y que constituyen el grupo D. Colocarlos emparejados. 4. Buscar los 4 cromosomas ms pequeos que nos quedan, que son metacntricos. Colocarlos en el grupo F. 5. Buscar los cromosomas del grupo E que son 6, algo mayores que los F. Dos de las parejas, la 17 y 18, son submetacntricos y la 16 metacntricos. 6. Buscar los 6 cromosomas del grupo A. Son los mayores. Los pares 1 y 3 son metacntricos (el 1 mayor que el 3) y el 2 submetacntrico. 7. Buscar los 4 cromosomas del grupo B que son los submetacntricos de mayor tamao. 8. Buscar los 14 cromosomas del grupo C. Encontraremos ms de 14 cromosomas, ya que el cromosoma X es idntico a los que constituyen el par 12. Para diferenciarlo hay que recurrir al estudio de las bandas lo mismo que, en general, para numerar las parejas dentro de cada grupo. En el caso de que haya ms de 46 cromosomas, buscar a qu grupo pertenece el sobrante, colocarlo all y sealar el sndrome a que da lugar esta anomala. En caso de que el nmero de cromosomas sea inferior a 46 sealar el cromosoma que falta as como el sndrome a que da lugar esta anomala. Si el nmero de cromosomas es de 46, estudiar cada cromosoma para comprobar si hay algn tipo de alteracin estructural (deleciones, translocaciones...). Cuando hayamos terminado, pinchando en Verify el programa nos indicar si los cromosomas estn colocados correctamente. Sobre los que no aparezca la marca roja, es que estn mal colocados. A veces simplemente hay que colocar bien el cromosoma dentro de su casilla, si no no se detecta. Por ltimo, hay que hacer el diagnstico del cariotipo obtenido. Pinchando en diagnosis saldrn varias opciones; se elegir la que se estime oportuna, y el programa nos dir si hemos acertado. Si el diagnstico no es correcto, vuelve a observar el cariograma detenidamente. Si lo es, puedes pasar a la siguiente muestra.

Preguntas de la prctica:
1.- Qu caractersticas permiten diferenciar, en general, unos cromosomas de otros? 2.- Qu clulas del organismo llevan el cariotipo diploide completo? 3.- Qu mecanismos cromosmicos producen anomalas del cariotipo humano? 4.- Se manifiestan siempre las alteraciones cromosmicas en el fenotipo del individuo que las transmite? Explica tu respuesta.

Respuestas:

PRACTICA 4 ESTUDIO DE LA HERENCIA POLIGNICA Recuento de las lneas de las huellas dactilares
Objetivo y material
1.- Recogida de un juego completo de huellas dactilares propias. 2.- Clasificar las huellas de acuerdo a su morfologa. 3.- Determinar el recuento total de lneas (TRC) de un juego completo de huellas. 4.- Construr un histograma de la distribucin de frecuencias con los datos obtenidos del grupo de prcticas. 5.- Discutir las caractersticas de la herencia polignica y el por qu de su difcil anlisis.

Introduccin
La herencia polignica no se puede analizar empleando pedigres ni estudiando los cromosomas (de no ser que se estudie una aberracin cromosmica en concreto). Un rasgo polignico es el fenotipo resultante de la accin de dos o ms genes. Estos tienen unas caractersticas comunes: 1.- los rasgos se cuantifican midindose, 2.-los rasgos son controlados por 2 o ms genes resultando en un efecto aditivo, 3.- los rasgos son controlados por efecto de alelos mltiples, 4.- los fenotipos de los rasgos polignicos y multifactoriales varan de expresin por efecto de los factores ambientales. Existen numerosos ejemplos de este tipo de herencia por ejemplo la estatura, el peso, la inteligencia, el color de la piel, etc. Demostrar y estudiar la herencia de los rasgos polignicos no es fcil. El ejemplo que a continuacin te proponemos estudiar explorar cmo los rasgos de la herencia de las huellas dactilares son modelos de herencia polignicas. Recogeris las huellas dactilares vuestras y prepararis un perfil de las mismas. En 1890, Francis Galton sugiri que las huellas dactilares seran una buena manera de identificacin para humanos. Durante los ltimos aos de hecho, tanto los dibujos de las huellas dactilares (de las manos y pies) y de las huellas de las palmas de las manos y pies han sido de gran inters para numerosos estudios especializados. Un ejemplo de su utilidad es el estudio de la huella del recin nacido para el diagnstico precoz de anormalidades cromosmicas. La herencia de las huellas dactilares, al igual que los dems caracteres de herencia polignica, tambin se ve influda por factores ambientales aunque, debido a la precocidad y rapidez del desarrollo de stas, el fenotipo no cambiar tras el nacimiento. Las huellas dactilares se pueden detectar a partir de la 6 semana de desarrollo fetal, llegando a su mayor desarrollo hacia la semana 12-13. Posteriormente regresarn hasta adquirir la morfologa final que ya no se ver alterada durante el restante desarrollo prenatal y postnatal.

ARCOS

LAZOS

ESPIRALES

Clasificacin de las huellas Los patrones de los dibujos de las huellas se pueden clasificas en tres grupos principalmente: arcos, lazos y espirales. El arco es el patrn ms simple y menos frecuente. En las huellas donde aparecen lazos, las lneas aparecen en tres direcciones, encontrndose en un punto intermedio (el trirradio) con ngulos de unos 120 grados. En el centro del punto de encuentro se forma un tringulo. Los lazos pueden denominarse radiales o cubitales, dependiendo de hacia dnde estn inclinados; por ejemplo, un dedo meique presentar un lazo radial si su trirradio se abre hacia el pulgar de su misma mano. Un lazo cubital ser aquel que del pulgar se abra hacia el meique de la misma mano. El patrn espiral presenta dos trirradios (formndose dos tringulos). Las frecuencias de estros tres patrones en la poblacin son de 5,0% para el arco, 5,4% para el lazo radial, 63,5% para el lazo cubital, y 26,1% para el espiral. Estudio de las huellas dactilares: recuento de las lneas El objetivo de este estudio ser el estudio del total de las lneas de la huella (en ingls: total ridge count o TRC). Holt en 1968 determin que para varones la media es de 145 y para mujeres de 126. Las lneas se han de contar desde el triradio al centro de la huella (ver la lnea blanca de las imgenes de las huellas de arriba), es decir, las huellas que presentan el patrn del arco tienen un recuento de cero (no hay triradio). En los espirales el recuento ha de efectuarse desde cada triradio al centro de la huella. Una vez contadas todas las lneas de todas las huella por persona se sumarn para obtener el TRC. A continuacin se examinar cmo el TRC apoya el modelo de herencia polignica. Caractersticas de algunos sndromes comunes: - Trisoma 21: dedos con lazos cubitales generalmente, lazos radiales en dedos 4 y 5. - Trisoma 18: lneas poco desarrolladas, gran frecuencia de arcos (media de 7-8 con al menos un arco). En los pulgares sin arcos, con lazos radiales, recuentos TRC bajos. - Sndrome de Turner (45,X): alto recuento TRC sin aumento de espirales. Relacin entre la media de TRC y el nmero de cromosomas X e Y 45, X 46, XY 46, XX 47, XXY 165 145 126 114 47, XYY 48, XXYY 48, XYYY 49, XXXXX 103 88 83 17

Recogida de datos individuales

(pegar aqu la cinta adhesiva con las huellas en cada casilla)
pulgar derecho (I) ndice derecho (II) corazn dcho (III) anular derecho (VI) meique dcho(V)

pulgar izquierdo (I)

ndice izquierdo (II)

corazn izdo (III)

anular izdo (IV)

meique izdo (V)

mano derecha
pulgar patrn obtenido: recuento parcial:
____________ ____________

ndice
____________ ____________

corazn
____________ ____________

anular
____________ ____________

meique
____________ ____________

recuento total = ____________ mano dcha _

mano izquierda
pulgar patrn obtenido: recuento parcial:
____________ ____________

ndice
____________ ____________

corazn
____________ ____________

anular
____________ ____________

meique
____________ ____________

recuento total = ____________ _ mano izda

Recuento total dos manos:

TRC= ___________

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Recogida de datos del grupo de prcticas

estudiante 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 % del total: media del TRC: media TRC mujeres: media TRC varones:
(*) poner el nmero de dedos

sexo V/M

TRC

lazos*

espirales*

arcos*

______ ________ ________ ________

______

______

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Histograma de la distribucin de frecuencias

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n alumnos

valores del TRC

Preguntas de la prctica:
1.- Cul es la media TRC para la clase? Existen diferencias en las TRC medias para los varones y mujeres? 2.- Cul puede ser la causa de esta diferencia? Razona tu respuesta. 3.- Compara tu TRC con la media total y con la de tu sexo. 4.- Resume y razona los resultados obtenidos en el histograma. 5.- De haber recogido datos de una poblacin mucho mayor crees que el grfico presentara otro aspecto? Razona tu respuesta.

Respuestas:

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