L'ECHOGRAPHIE DE L'APPAREIL GENITAL DE LA VACHE

Juin 2000 N. HAGEN V. GAYRARD P.L. TOUTAIN

SOMMAIRE I. GENERALITES.................................................................................................4
1. RAPPELS HISTORIQUES SUR LA TECHNIQUE.......................................................................................................4 2. LES RALISATIONS POSSIBLES PAR UN EXAMEN CHOGRAPHIQUE EN PHYSIOLOGIE DE LA REPRODUCTION ...4 3. PALPATION RECTALE ET CHOGRAPHIE.............................................................................................................5 4. L'CHOGRAPHIE EST UNE TECHNIQUE EXIGEANTE SUR LE PLAN INTELLECTUEL...............................................6 5. SCURIT ET UTILISATION DE L'CHOGRAPHIE..................................................................................................6

II. Principes gnraux de lchographie................................................................6

1. NATURE PHYSIQUE DES ULTRASONS..................................................................................................................6 2. PROPRITS PHYSIQUES DES ULTRASONS..........................................................................................................8 3. INTERACTIONS DES ULTRASONS AVEC LES MILIEUX BIOLOGIQUES : LA GENSE DES CHOS............................9 3.1. La rflexion..............................................................................................................................................10 3.2. La rfraction............................................................................................................................................11 3.3. La diffusion..............................................................................................................................................12 3.4. Labsorption.............................................................................................................................................12 4. LMISSION DES ULTRASONS : LA PRODUCTION DE SALVES............................................................................12 5. LA RCEPTION DES ULTRASONS : LA FORMATION DES IMAGES (FIGURE 4).....................................................13 6. INTERPRTATION DES IMAGES.........................................................................................................................15 6.1. Les rflexions spculaires (de miroitement) (figure 6)............................................................................15 6.2. Rflexion non spculaire (figure 7)..........................................................................................................16 6.3. Les ombres artefactuelles........................................................................................................................16 Les artefacts par augmentation (figure 9)......................................................................................................17 Les artefacts de rverbration (figure 10)......................................................................................................17 6.4. Rverbration d'chos diffuss (figure 11)..............................................................................................18 6.5. Artefacts dus la largeur du faisceau (Beam-width artifacts)................................................................18 7. LES QUIPEMENTS............................................................................................................................................19 7.1. Les sondes................................................................................................................................................19 7.2. Frquence de la sonde, rsolution et profondeur de pntration (figure 13)..........................................20 7.3. Les rglages, annotations........................................................................................................................21 7.4. Inversion de l'image (figure 14)...............................................................................................................21 7.5. Rglage du gain (figure 15).....................................................................................................................21 7.6. Fixation de l'image..................................................................................................................................21

III. Dveloppement embryonnaire et application de l'chographie au diagnostic prcoce de gestation chez les bovins...................................................................22
1- ELMENTS DANATOMIE ET DE TOPOGRAPHIE DE LAPPAREIL GNITAL DE LA VACHE (FIGURE 16)..............22 2. TECHNIQUE DEXAMEN CHOGRAPHIQUE DE LUTRUS..................................................................................23 3. LE DVELOPPEMENT DE LEMBRYON ET DU FTUS BOVIN.............................................................................27 4. LE DIAGNOSTIC PRCOCE DE GESTATION PAR CHOGRAPHIE..........................................................................28

IV. Application de lchographie au suivi ovarien au cours du cycle oestral chez la vache................................................................................................................31
1. INTRODUCTION................................................................................................................................................31 2. RAPPELS SUR LE CYCLE OESTRAL ET SUR LA DYNAMIQUE DES VAGUES FOLLICULAIRES...............................32 2.1. Le cycle oestral (Figure 22).....................................................................................................................32 2.2. Les vagues folliculaires (Figure 22)........................................................................................................32 2.3. Les organites ovariens.............................................................................................................................33 3. ECHOGRAPHIE DES OVAIRES ...........................................................................................................................33 3.1. Comment chographier les ovaires ?......................................................................................................33 3.2. Images chographiques des ovaires........................................................................................................34 3.3. Comparaison de lvaluation des structures ovariennes par palpation transrectale, par chotomographie et par les concentrations plasmatiques de progestrone...................................................35 3.4. Evolution des organites ovariens au cours du cycle oestral....................................................................36

I. GENERALITES L'chographie est une technique d'imagerie mdicale base sur l'utilisation d'ondes ultrasonores. Elle permet de visualiser de faon non-invasive les organes gnitaux, cette visualisation se faisant dans la masse mme des structures (anatomie interne). L'chographie est la technique qui, avec la radio-immunologie, le plus contribu la progression des connaissances en physiologie et physiopathologie de la reproduction. 1. Rappels historiques sur la technique 1952: Premires tentatives d'examens des tissus biologiques par une mthode chographique ultrasonore (Howery et Wild) 1970: Premires chographies balayage mcanique sur lesquels les mouvements rapides de la sonde commande par un moteur permettent d'obtenir plusieurs images par secondes et d'observer en temps rel des tissus en mouvement. Annes 70: L'chostructure devient visible grce l'emploi de convertisseurs d'images donnant des images en chelle de gris. 1980 : En France, premire image chographique transrectale des organes gnitaux de la jument (Palmer et Driancourt). Annes 80 : Amlioration de la qualit des images par l'introduction des sondes ultrasoniques barrettes qui permettent la focalisation d'un faisceau ultrasonore plusieurs profondeurs. Annes 90 : Miniaturisation des sondes et fonctionnement haute frquence (meilleure rsolution). Dveloppement de l'endosonographie. 2. Les ralisations possibles par un examen chographique en physiologie de la reproduction 1. Dterminer le statut saisonnier des ovaires 2. Dterminer si une femelle a atteint le stade de pubert

3. Monitorer les follicules ovariens pour raliser un diagnostic ou valuer un traitement (ex: superovulation) 4. Reprer l'ovulation (ou son chec) 5. Monitorer le corps jaune 6. Etablir le stade du cycle oestral 7. Diffrencier un corps jaune persistant d'un tat anovulatoire 8. Evaluer le degr de l'imprgnation oestrognique de l'endomtre 9. Evaluer le temps et le caractre appropri de l'insmination 10. Dtecter la semence dans l'utrus 11. Collecter des ovocytes folliculaires par aspiration transvaginale 12. Evaluer la capacit d'une femelle servir de rceptrice pour le transfert embryonnaire. 13. Dtecter et tudier prcocement un embryon 14. Dtecter des embryons jumeaux chez la jument et liminer l'un des embryons manuellement. 15. Diagnostiquer une gmellit (membrane double) un stade avanc de la gestation 16. Dterminer le sexe du foetus 17. Dterminer la vitalit foetale et la position prepartum 18. Evaluer l'involution utrine post-partum 19. Diagnostic prcoce du temps de la mort embryonnaire (absence de battements cardiaques) 20 Diagnostiquer des ovaires pathologiques (kystes lutaux, folliculaires,...) tumeurs ovariennes. 21 Diagnostic de pathologie des pyomtres, hydrosalpynx etc. 3. Palpation rectale et chographie Pendant longtemps la palpation transrectale a t la seule technique pour "explorer" les organes gnitaux des grandes femelles domestiques.

La palpation transrectale reste une technique matriser mais la valeur informative de l'chographie est trs suprieure celle de la palpation transrectale l'exception des informations relatives la consistance et la sensibilit des organes. 4. L'chographie est une technique exigeante sur le plan intellectuel La ralisation de l'interprtation rationnelle des informations issues d'un examen chographique ncessite de matriser un ensemble de connaissances biologiques (anatomie, physiologie, pathologie) et biophysiques (physique des ultrasons, formation de l'image, gense des artefacts...). 5. Scurit et utilisation de l'chographie La technique d'chographie est normalement sans danger. La rponse des tissus aux ultrasons (vibration des molcules tissulaires et absorption de la chaleur) sont sans consquence (l'lvation de temprature ne peut pas dpasser 1C). L'nergie minimum pour produire des lsions est de 100 mWatt/cm 2, les ultrasons de l'chographe n'mettant que de 1 10 mWatt/cm 2.

II. PRINCIPES GNRAUX DE LCHOGRAPHIE Lchographie utilise des sons haute frquence pour produire des images des tissus mous et des organes internes. 1. Nature physique des ultrasons En physique, il existe deux types donde : les ondes mcaniques qui ncessitent un milieu physique pour se propager et les ondes lectromagntiques qui peuvent se propager dans le vide. Les ultrasons sont des ondes ou vibrations mcaniques de mme nature que les sons mais leur frquence est trop leve pour que loreille humaine puisse les dtecter. Les ultrasons sont caractriss par des ondes sonores qui ont une frquence suprieure la frquence maximale des sons audibles par lhomme (20 kHz). Un cycle par seconde reprsente 1 Hz ; 1000 et 1 million de cycles par seconde correspondent respectivement 1kHz et 1 MHz. La frquence des ultrasons utiliss en imagerie mdicale varie entre 2 et 10 MHz.

Lorigine des ondes ultrasonores produites par une sonde chographique est similaire celle des ondes sonores audibles produites par un tambour (figure 1). Pour un son audible, ltat de repos, les molcules dair de part et dautre de la membrane du tambour sont rparties de faon homogne selon les lois de la physique. De la mme faon, les molcules des cristaux pizo-lectriques de la sonde chographique et les molcules tissulaires avec lesquelles la sonde est en contact sont ltat dquilibre. Lorsque la membrane du tambour est frappe, les molcules dair situes de part et dautre de la membrane sont branles par les vibrations et soumises des cycles de compression-dcompression. Les vibrations longitudinales des molcules dair donnent naissance un son. Il convient de remarquer que cest lbranlement qui est propag et non les molcules dair elles-mmes. En effet, une molcule dans un milieu a une position de repos. Si elle est dplace de sa position de repos, le dplacement gnre une force proportionnelle de retour car le milieu est lastique. Les molcules dans le milieu ne sont pas isoles mais couples lastiquement aux molcules voisines. Par consquent, le mouvement dune molcule peut se propager aux molcules adjacentes selon un processus dbranlement en chane. Les cristaux de la sonde de lchographe ont des proprits pizo-lectriques. Le terme pizo-lectrique vient du grec piezein voulant dire presser . Les cristaux pizo-lectriques de la sonde sont dforms lorsquon leur applique un courant lectrique alternatif de haute tension. Loscillation mcanique des cristaux comparable la vibration de la membrane du tambour rsulte de la succession dexpansion et contraction des cristaux selon la polarit alternative du courant. Lexpansion des cristaux va entraner une compression des molcules tissulaires adjacentes et la contraction successive des cristaux va induire une dcompression de ces mmes molcules. Lultrason correspond des ondes ou vagues de pressions mcaniques qui sont propages de proche en proche dans les tissus par le cycle de dformation des cristaux. Les ondes de compression-dcompression des molcules sont reprsentes de faon conventionnelle sous la forme dune sinusode. Le pic de londe correspond la zone de compression des molcules alors que la valle correspond la zone adjacente o les molcules sont

dcomprimes. Les effets pizo-lectriques sont obtenus avec des cramiques polycristallines. 2. Proprits physiques des ultrasons Les proprits dune onde sont caractrises par diffrents paramtres : lamplitude, lintensit, la frquence et la longueur. Lamplitude de londe est proportionnelle lintensit du courant appliqu aux cristaux. Lamplitude de la vibration dune particule va dterminer sa vitesse maximale (Vo) et donc lnergie stocke par la particule (E) dfinie par lquation 1.
2 E = M V0 /2

Equation 1

avec M, la masse de la particule. Lamplitude de loscillation va dterminer lnergie totale (E) de toutes les particules et pour une unit de volume, E est la densit nergtique de londe dfinie par lquation 2.
2 E = V0 /2

Equation 2

avec , la densit du tissu. Lintensit de londe correspond au dbit dnergie qui est dfini par lquation 3
2 I = E x C = CV0 /2

Equation 3 avec E, la densit nergtique de londe et C, sa vitesse de propagation. Lintensit acoustique sexprime en Watt par cm (W/cm). La frquence est dfinie comme le nombre de vibrations de la source mettrice (cristaux) par unit de temps. Elle est donc identique au nombre de cycles qui passent par un point donn du milieu par unit de temps et donc au nombre de fois que vibre par unit de temps une molcule. Lunit de mesure de la frquence est le Hertz (Hz) ou nombre de cycles par seconde. La frquence dpend des caractristiques des cristaux pizo-lectriques, elle correspond la frquence de rsonance du cristal, cest--dire la frquence pour laquelle lamplitude des oscillations du cristal et donc lamplitude des ultrasons est maximale.

La longueur donde ( ), caractristique la fois de londe et du milieu de propagation mesure ltendue spatiale dun cycle de vibration. Elle correspond la distance parcourue par londe au cours dun cycle de vibration. La frquence et la longueur donde sont relies par lquation suivante :

=C

Equation 4

avec C, la clrit ou vitesse de londe, f, la frquence de londe. La frquence et la longueur donde varient de faon inversement proportionnelle si la vitesse de propagation de lultrason dans un milieu est constante. Pour les milieux biologiques sauf pour los (4080 m/s) et les poumons (600 m/s cause delair), la vitesse moyenne de propagation des ultrasons est de 1540 m/s (tableau 1), cela signifie quun ultrason se propage dans les tissus sur une distance de 1.5 mm en
6 s. 10

Comme la vitesse de propagation des ultrasons est indpendante de la frquence et est peu prs constante dans les tissus mous (1540 m/s), la slection dune sonde haute frquence va se traduire par une diminution de la longueur donde du son mis. Les longueurs donde correspondant aux frquences des ultrasons habituellement utilises peuvent tre calcules partir de lquation 4 (en considrant que la vitesse de propagation des ultrasons est de 1540m/s, tableau 1). Ainsi, la longueur donde de 1.5 mm pour une frquence de 1 MHz devient gale 0.15 mm lorsque la frquence atteint 10 MHz. 3. Interactions des ultrasons avec les milieux biologiques : la gense des chos La figure 2 illustre lanalogie entre lmission et la rception dun son avec lmission et la rception dun ultrason. Lorsquun son audible rencontre un obstacle sa propagation, il est rflchi et une onde de retour de mme frquence revient sous la forme dun cho. Cet cho sera peru par le systme acoustique de loreille ou tympan. La distance qui spare la source mettrice du son (membrane du tambour) de lobstacle peut tre dtermine partir de la vitesse de propagation du son audible dans lair (330 m/s). De faon analogue, lorsquun ultrason qui se propage dans un tissu rencontre une interface tissulaire, une partie de lultrason est rflchie

et retourne aux cristaux de la sonde. Les cristaux dforms par lcho ont la proprit de gnrer un courant qui sera enregistr. Le cristal est donc la fois lmetteur et le rcepteur . Le dlai entre la propagation de lultrason et la rception de son cho va permettre de dterminer la distance entre les cristaux et la surface rflchissante. Lanalyse des ultrasons modifis aprs leur passage dans un milieu permet den extrapoler la structure, do lintrt de comprendre le comportement des ultrasons la traverse des tissus. 3.1. La rflexion Le phnomne de rflexion ncessite une prsentation de la notion dimpdance acoustique. Limpdance acoustique (z) dun tissu est dfinie comme le produit de la densit du milieu par la vitesse de propagation des ultrasons. Ce paramtre acoustique caractrise la proprit de ce milieu propager vs rflchir londe ultrasonore. Une interface tissulaire existe lorsque deux tissus dimpdance acoustique diffrente sont en contact. Lorsquune onde rencontre une interface tissulaire, une partie de lnergie incidente est rflchie. La proportion dnergie rflchie linterface de deux milieux dimpdances acoustiques respectives z 1 et z2 est donne par lquation 5.

(z - z )2 I = 1 2 I 0 ( z1 + z 2 ) 2

Equation 5

Limportance de la rflexion dpend donc de la diffrence dimpdance acoustique entre les deux milieux. Ainsi, linterface graisse (z=1.33 106)-muscle (z=1.7 106), seulement 1.5 % de lnergie incidente sera rflchie. Les chos gnrs cette interface sont cependant damplitude suffisante pour tre dtects. Les interfaces les plus intressantes correspondent une faible diffrence dimpdance acoustique (1% ou moins). La plus grande partie de lnergie incidente est transmise travers linterface tissulaire et peut explorer les tissus sous-jacents. Cependant, lorsque londe ultrasonore rencontre son trajet des milieux dimpdance acoustique trs diffrente de celle des tissus mous comme le tissu osseux ou des gaz, la majeure partie de londe est rflchie (plus de 99%). Cette forte rflexion de londe ultrasonore rsulte de la combinaison dun changement abrupt de vitesse de

propagation des ultrasons et de densit du milieu aux interfaces tissu mou-os ou tissu mou/air. Cest la raison pour laquelle les os et les gaz constituent un obstacle la propagation des ultrasons . Ce phnomne est frquent lors de lexploration transrectale lorsquil y a des poches dair ou de gaz dans lintestin. De mme, pour une chographie transcutane, il est ncessaire de couper les poils et davoir recours un gel pour minimiser les pochettes dair entre la sonde et les tissus examins. La rflexion est la base de la formation de limage chographique. Au fur et mesure que le faisceau est lobjet du phnomne de rflexion, lintensit de londe ultrasonore diminue exponentiellement avec la profondeur de pntration dans le tissu (p) selon lquation 6.
I =I 0 e -(f)p

Equation 6 o (f) est un coefficient dattnuation qui dpend de la frquence. I 0 et I reprsentent les intensits respectives du faisceau incident et du faisceau transmis. Lattnuation correspond la diminution de lintensit de londe au fur et mesure quelle progresse dans les tissus, ce qui va limiter la profondeur des tissus explors. Dans les tissus mous, lattnuation augmente la fois avec la frquence du signal et la profondeur de pntration. A valeur dattnuation gale, la profondeur de pntration des ultrasons est dautant plus faible que la frquence est leve. Lattnuation de londe est mesure en Bel et Dcibel (1dB=0.1 Bel) et correspond 10Log(I0/I). Le tableau 2 donne les coefficients dabsorption de diffrents milieux exprims en dB par MHz et par cm. Les mcanismes attnuateurs sont multiples: ce sont les intractions au cours desquelles lnergie est prleve du faisceau incident pour tre r-mise dans des directions diffrentes: la rfraction et la diffusion. Labsorption de lnergie et sa transformation en chaleur participent galement au phnomne dattnuation. 3.2. La rfraction La rfraction correspond une dviation de londe ultrasonore lorsquelle traverse un tissu ayant des proprits acoustiques diffrentes. La rfraction survient seulement si linterface nest pas perpendiculaire londe. Ce phnomne

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est comparable la dviation de la lumire par un prisme. Cette incurvation du faisceau est lorigine de la non rception de lcho par la sonde et contribue ainsi lattnuation. Ce phnomne est frquent lors de lexamen de lappareil gnital cause de la prsence de structures sphriques (follicules, vsicules embryonnaires, kystes). Le phnomne de rfraction est lorigine dimages artfactuelles avec lapparition dune ombre au dessous du bord de la structure contenant le liquide. 3.3. La diffusion Lorsque les dimensions de linterface rencontre sont petites en comparaison avec la longueur donde, londe ultrasonore est absorbe puis r-mise dans toutes les directions. Llment en question se comporte alors comme une source mettrice selon le mme phnomne en optique du faisceau lumineux qui traverse une atmosphre poussireuse. Lchostructure des parenchymes est due aux chos diffuss par les multiples htrognits diffusantes de petite taille telles que les capillaires, tissus conjonctifs. 3.4. Labsorption Labsorption correspond la transformation de lnergie en chaleur. Ce phnomne est minime avec les ultrasons. Labsorption est le seul processus qui diminue directement lnergie de londe ultrasonore. Les autres processus (rflexion, rfraction, diffusion) redirigent londe en partie ou totalement. 4. Lmission des ultrasons : la production de salves Les ultrasons ne sont pas mis de faon continue mais sous la forme de salves ou sries de 3 cycles environ. Le cristal est soumis une srie de courtes impulsions lectriques qui sont lorigine dune courte srie de vibrations appele impulsions ou salves. Limage est forme par les chos qui reviennent la sonde aprs chaque salve. Un temps adquat est ncessaire pour que tous les chos reviennent la sonde avant que la sonde nmette nouveau. De faon gnrale, les ultrasons ne sont mis que pendant 1% du temps alors que la sonde joue le rle de rcepteur des chos pendant 99% du temps. Ainsi, dans la sonde, le mme cristal est metteur pendant un temps trs court de lordre de 2 s et ensuite rcepteur pendant 998 s, le cycle durant 1 milliseconde. Mille impulsions de 3 4 cycles peuvent tre mises par seconde malgr les pauses qui sintercalent entre

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chaque salve. La collection des chos demande environ 0.25 ms donc 4000 impulsions ou lignes dchos peuvent tre collectes par seconde. Par consquent, si 100 lignes dcho sont ncessaires pour former une image, 40 images seront gnres par seconde. Chaque pulse correspond une srie de 2 3 vibrations, par consquent, la longueur dun pulse est quivalente 2-3 fois la longueur donde. Les sondes de haute frquence mettent des pulses de plus courte dure que les sondes basse frquence (figure 3). La longueur de la salve va dterminer la rsolution axiale. La rsolution axiale est dfinie comme la capacit diffrencier des objets le long du trajet de londe . Le nombre dondes par impulsion est identique quelle que soit la frquence de la sonde. Par contre, la longueur de la salve gnre diminue lorsque la frquence augmente et que la longueur donde diminue. Plus la longueur donde est courte, meilleure est la rsolution axiale. La rsolution latrale caractrise la capacit de discriminer deux rflecteurs adjacents mais situs la mme profondeur. Elle dpend du diamtre du faisceau dultrasons qui varie avec la frquence de la sonde et la distance qui spare les points visualiser de la sonde. Dans les zones o le faisceau est focalis, la diamtre du faisceau est rduit. La distance entre la sonde et la zone focale est la distance focale. Une rsolution latrale acceptable est obtenue pour une courte distance (quelques cm) le long de laxe du faisceau de chaque ct du point focal et dans la zone focale. 5. La rception des ultrasons : la formation des images (figure 4) Les cristaux pizo-lectriques de la sonde sont soumis des sries de courtes impulsions lectriques qui entranent des courtes sries de vibrations ou salves. Les ultrasons propags dans les tissus sous-jacents sont rflchis linterface de 2 milieux qui prsentent une diffrence dimpdance acoustique. Londe rflchie ou cho capte par la sonde dforme les cristaux. Cette nergie mcanique est convertie en un signal lectrique proportionnel lintensit de lcho avec un dlai realtif sa distance parcourue. Les chographes sont calibrs pour une vitesse de propagation constante de 1540 m/s (vitesse moyenne de propagation des ultrasons dans les tissus mous) bien que de faibles diffrences

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existent. La latence qui spare le moment de lmission dune salve de vibrations et le retour de lcho correspondant est dtermine, cette latence qui reflte la profondeur de linterface qui a produit lcho est calcule. Les signaux lectriques gnrs par lcho sont amplifis, convertis numriquement et stocks. Linformation ainsi stocke est reprsente sur lcran de lchographe (tube cathodique). Un point lumineux reprsentant chaque cho est plac sur lcran vido une profondeur approprie en fonction du temps de retour de lcho ; les appareils sont calibrs et ils traduisent le temps de retour de lcho en chelle de profondeur. La brillance du point lumineux varie en fonction de lintensit de londe rflchie (chographie en mode B). Le terme B se rfre la modulation en "brillance" de la reprsentation de l'cho. Chaque point (pixel) reprsent sur l'cran correspond un rflecteur. La brillance du pixel correspond l'amplitude de l'cho. La brillance est reprsente par une chelle de gris (du blanc (trs chogne), au noir (absence d'cho). Il existe une autre modalit chographique dite de type A (A: amplitude). Ce mode chographique reprsente l'amplitude du signal en ordonne en fonction du temps port en abscisse, et il indique la profondeur laquelle se trouve la structure rflchissante. Le mode A n'est utilis que lorsque l'on veut faire des mesures trs prcises de distances (ex: mesure de l'paisseur du lard dorsal chez le porc). Comme les ultrasons suivent un trajet rectiligne, une image en 2 dimensions peut tre produite partir dun grand nombre de cristaux aligns (cas de la sonde linaire). Limage obtenue reprsente une interprtation des signaux ultrasonores renvoys. Lintensit de londe ultrasonore rflchie dpend dun certain nombre de facteurs, mais les principaux facteurs sont la diffrence dimpdance acoustique des tissus rencontrs sur son trajet, langle quil forme avec la limite du tissu et la distance parcourue. Malgr le caractre identique de deux rflecteurs, lcho venant dun rflecteur en profondeur est infrieur au premier cho parce quune partie de lnergie a t perdue sur le premier rflecteur. Lamplification consiste augmenter lamplitude des chos de faon balance pour avoir une bonne image en corrigeant lattnuation lie la distance parcourue. Ce rglage est manuel et il est ralis par loprateur en regardant limage. Le bon rglage des gains consisterait obtenir la mme amplitude

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pour 2 rflecteurs identiques. En pratique, on rgle 3 gains : un gain pour lensemble de limage, un gain pour le champ rapproch et un gain pour le champ loign. La distance de pntration des ultrasons dans les tissus mous dpend de la frquence utilise. Les sons de haute frquence sont plus rapidement attnus que les sons basse frquence. Cela signifie que les tentative damlioration de la rsolution axiale par laugmentation de la frquence va se traduire par une rduction de la profondeur de tissu explor. La frquence doit donc tre choisie en fonction de la profondeur des structures visualiser. Le manipulateur de lchographe doit slectionner la sonde de la plus haute frquence qui va permettre datteindre la profondeur dsire. La figure 5 rcapitule les lments essentiels connatre pour comprendre la gense dune image. 6. Interprtation des images L'interprtation des images ncessite des connaissances de physiologie ainsi que des bases de physique. L'une des difficults est de reconnatre les images artefactuelles. Ces artefacts sont frquents dans l'inspection des organes gnitaux car il y a de nombreuses poches de gaz ou liquidiennes. A titre d'exemple, dans les annes 80 l'cho spculaire d'une vsicule embryonnaire a t catalogu de faon errone comme le disque embryonnaire. 6.1. Les rflexions spculaires (de miroitement) (figure 6) Une rflexion spculaire survient lorsque le faisceau tombe sur une interface lisse, plus large que le faisceau et parallle la sonde. Gnralement, seule une fraction de l'impulsion est rflchie , la majorit de l'impulsion continuant son chemin. Seule une impulsion qui frappe un rflecteur spculaire angle droit sera enregistre comme un cho sur l'cran. Cela veut dire que l'amplitude de l'cho dpendra non seulement de la diffrence d'impdance acoustique entre les 2 tissus formant l'interface mais aussi de l'angle d'impact. Une impulsion qui frappe une interface avec un angle va tre rflchie avec le mme angle et l'interface ne sera pas dtect. Les rflexions spculaires sont trs frquentes au niveau de l'appareil reproducteur avec la surface lisse de l'utrus, les plis endomtraux, la vsicule embryonnaire,... qui forment des rflecteurs spculaires. Trs souvent, la lumire utrine est vue

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comme une ligne trs chogne lorsque l'utrus est inspect de faon longitudinale. Cela est d la rflexion spculaire de la surface des plis utrins. 6.2. Rflexion non spculaire (figure 7) Les rflexions non spculaires (encore dites diffuses) ont pour origine des rflexions sur des surfaces rugueuses ou des surfaces qui sont plus troites que le faisceau. A la diffrence des rflexions spculaires, l'amplitude de l'cho pour les rflecteurs non spculaires ne dpend pas de l'angle d'incidence du faisceau . L'impulsion ultrasonique dans la zone focale ayant une dimension de 2-3 mm, des interfaces plus petites que cette dimension donnent des images non-spculaires. De mme, lorsque le faisceau arrive sur une surface rugueuse, l'interface effective sera plus troite que la largeur du faisceau. La diffusion est dfinie comme une rflexion dans toutes les directions. Une petit partie du faisceau revient vers la sonde (1/1000 de l'amplitude d'un cho spculaire). Grce la nuance de gris, ces chos diffuss vont permettre de reconnatre les tissus. Il doit tre bien compris que ce pattern mouchet reprsente une chostructure. Etant donn que l'amplitude est indpendante de l'incidence, la nuance de gris de telles structures est relativement constante quelque soit l'orientation de la sonde. La diffusion donne la majorit des chos permettant d'identifier les structures. Le corps jaune est l'origine d'chos non spculaires. De mme, si on agite le contenu de la vessie d'un cheval, on peut crer des images nonspculaires. 6.3. Les ombres artefactuelles Sur une image normale, une zone noire correspond une absence de rflecteur (ex: liquide folliculaire). Or des zones apparaissant en noir l'cran peuvent tre d'origine artefactuelle. La figure 8. montre les origines possibles de ces ombres artefactuelles. Une ombre est cause par le blocage ou la dviation du faisceau. L'ombre est comparable celle que la lumire produit derrire une barrire. La zone du sonogramme dans laquelle le son est bloqu apparat en noir. Ce type de blocage exige une grande impdance acoustique (ex: gaz et tissu mou, tissu mou et os...). L'ombre peut rsulter du phnomne de rflexion du faisceau partir du ct d'une structure incurve (surface externe de l'ovaire, ct incurv de l'utrus...). Il y aura

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rflexion si la vitesse de l'ultrason est la mme dans les 2 tissus formant la courbure. Si ce n'est pas le cas, on aura un phnomne de rfraction. Cela survient avec les structures cavitaires remplies de liquide (follicules,...). Le phnomne d'ombre sera plus prononc en zone focale. C'est ainsi qu'une petite structure (ex: 4 mm de diamtre) peut bloquer le faisceau en zone focale. Les artefacts par augmentation (figure 9) Les artefacts par augmentation sont frquents cause des structures cavitaires remplies de liquide. Lors de la traverse d'une cavit, le faisceau n'est pas attnu et son amplitude pour une profondeur donne est plus grande lorsqu'il a eu traverser une structure liquidienne. Ce type d'augmentation permet de reprer une zone liquidienne. Cependant, il ne faut pas interprter cela comme une structure chogne. Ce type d'artefact est compliqu lorsque la paroi produit un cho spculaire. Les ombres et les phnomnes d'amplification sont les deux principales causes d'artefact pour l'appareil gnital. Si l'amplification gne l'inspection de la structure, on rduira le gain. Les artefacts de rverbration (figure 10) La figure 10 montre la gense des artefacts de rverbration entre une poche de gaz et la paroi rectale. La rverbration est due au rebondissement de l'cho entre 2 structures et cela jusqu' l'puisement de l'cho par attnuation. Cela peut se produire l'interface gaz-tissu mou ou a l'interface paroi rectale-sonde. Cela donne naissance un empilement d'chos sur l'cran. Le premier est lgitime alors que les autres sont des rverbrations, ces dernires s'affaiblissant progressivement et apparaissant de plus en plus bas sur l'cran. Compte tenu de la force dcroissante des chos rverbrs on parle d'artefacts en queue de comte. Pour bien reprer ces artefacts on a 3 caractristiques : ils sont quidistants ils diminuent progressivement d'amplitude ils sont orients de faon parallle la paroi de rflexion.

Si une surface trs rflchissante est implique (ex: interface gaz-tissu mou), il n'y aura pas de transmission en-dessous d'o la cration une zone d'ombre. En consquence, l'cho rverbr peut se trouver localis ("tre vu") dans la zone d'ombre. Si une partie du faisceau est transmise (ex: interface tissu-liquide) on peut

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se retrouver avec des zones de rverbration dans un liquide qui normalement est non chogne. Lorsque l'interface est proche de la sonde, l'attnuation est minimale, et le nombre de rverbration augmente. Les rverbrations sont bien identifies lorsqu'elles s'expriment dans une zone nonchogne. En revanche, elles peuvent induire en erreur lorsqu'elles apparaissent dans une zone normalement chogne. Les rverbrations sont trs frquentes en zone pelvienne cause des poches de gaz et dans les zones contenant des vsicules. Les rverbrations dans une vsicule peuvent faire croire la prsence d'une structure interne. Des chos peuvent tre gnrs par des zones plus profondes que la zone normalement explore (ex: poche de gaz) et l'cho ainsi renvoy va fusionner avec les chos rsultants de tirs postrieurs. Ici, l'origine des rverbrations n'est pas vidente. L'amplitude des rverbrations dpend du gain qui doit tre ajust. Les rverbrations peuvent tre supprimes par rorientation de la sonde ou en vidant bien le rectum. 6.4. Rverbration d'chos diffuss (figure 11) Des chos diffuss apparaissent souvent comme tant au-del des surfaces hautement rflchissantes (c'est--dire entre le premier rflecteur et la premire rverbration) ou entre 2 rverbrations. Le mcanisme en est le suivant : un faisceau incident rencontre d'abord un tissu capable de diffuser le faisceau. Cela va donner naissance des chos non spculaires qui remontent vers la sonde. Ensuite, le faisceau atteint une interface forte impdance acoustique. Cela donne un cho rflchi spculaire qui remonte plus vite et on aura ainsi une image qui sera audessus de la zone de diffusion (alors qu'elle devrait tre en-dessous). 6.5. Artefacts dus la largeur du faisceau (Beam-width artifacts) La priphrie d'une large poche de liquide ou de gaz ou encore la totalit du volume d'une petite vsicule apparassent de faon chagrine cause du remplissage de la zone non-chogne (liquide) par des spots chognes d'origine artefactuelle (figure 12). Cela est d un problme de rsolution latrale pour la portion du faisceau qui explore simultanment le fluide et la paroi une profondeur donne. Lorsque 2 chos arrivent ensemble sur la sonde, ils sont traits comme tant uniques et

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donnent un seul signal. Etant donn que le faisceau diverge au-del de la zone focale, ces artefacts apparaissent plutt dans les structures profondes comme les larges follicules provulatoires de l'ovaire de jument. Ces artefacts ont une forme de mnisque rsultant du changement du rapport solide/liquide au fur et mesure que le faisceau descent le long de l'lment linaire. Les artefacts peuvent suggrer des projections solides et des dsorganisations de la paroi (risque de croire une atrsie, une mort embryonnaire,...). L'origine de tels artefacts peut tre reconnue en tapotant la structure. Un vritable rflecteur doit rpondre en flottant. Puisque l'artefact est fonction de la largeur du faisceau, cet artefact peut tre rduit en utilisant un faisceau plus troit dans la zone d'intrt. Comme cela a dj t vu, la largeur du faisceau contribue l'ombrage et aux artefacts de renforcement postrieur. En zone focale, le faisceau est moins large et l'intensit de l'impulsion plus grande et des structures solides (os) en regard de liquide produisent des artefacts plus intenses. De plus, de petites structures parasites peuvent impliquer plus srement la totalit de la largeur du faisceau en zone focale. Occasionnellement, un artefact en bandeau d'une chognicit plus importante est observ en zone focale lorsque l'on scanne des structures solides qui sont larges. 7. Les quipements 7.1. Les sondes L'image deux dimensions qui rsulte de l'exploration d'un champ est un rectangle. Ce champ est orient par l'oprateur soit longitudinalement soit transversalement par rapport l'animal. La sonde (transducteur) a une forme approprie pour tre place dans le rectum. Il existe deux types de sondes : les sondes linaires et les sondes sectorielles. Les sondes linaires explorent un champ en forme de rectangle alors que les sondes sectorielles explorent un champ en forme de "part de camembert". La largeur de la porte d'accs de l'image est appele "empreinte" . Elle est typiquement de 50 mm pour une sonde linaire et de 15 mm pour une sonde sectorielle. Les sondes sectorielles sont particulirement utiles lorsque le faisceau ultrasonore doit passer par un passage troit (ex: entre 2 ctes). Avec la sonde sectorielle, le

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faisceau s'largit en entonnoir aprs tre pass par le passage troit. Un miroir oscillant balaye le rayon sur la zone d'intrt. La sonde linaire produit une image "temps rel" par la mise en jeu squentielle des lments sans le recours une partie mobile. La sonde linaire est faite par un alignement de cristaux de quartz rectangulaires. Les sondes doivent tre faciles introduire et sans risque pour l'animal. La forme linaire (prsence d'une gouttire) permet de les tenir longtemps, dans le bon sens, sans se fatiguer. Les sondes sont impermables et rsistantes la corrosion. Les sondes qui ncessitent d'tre enveloppes dans un sac plastique ne sont pas retenir. En cas de choc, la sonde peut ne plus tre impermable l'eau et on risque des chocs lectriques. La sonde ne se retire pas en tirant sur le cble. Aprs son usage il faut protger la sonde dans de la mousse (bote, fourreau). La sonde doit tre nettoye et sche avant d'tre range. Le gel de contact sera enlev l'aide d'un papier absorbant. Il ne faut pas nettoyer une sonde avec des produits potentiellement corrosifs, ne pas la chauffer, etc. 7.2. Frquence de la sonde, rsolution et profondeur de pntration (figure 13) Les sondes de haute frquence ont une excellente rsolution mais pntrent moins profondment. La sonde de 3.5 MHz a du mal dfinir des structures de 5 mm ou moins et ne peut pas dtecter des structures de 2 mm. La sonde de 5 MHz voit des structures de 5 mm et a des difficults en dessous de 2 mm. La sonde de 7.5 MHz dfini relativement bien des structures de 2 mm. La profondeur explore est plus grande avec la sonde de basse frquence. C'est ainsi que des structures de 20 mm sont bien vues 8 cm de profondeur avec une sonde de 3.5 MHz mais difficilement visibles avec les autres sondes. Une structure de 10 mm est plus distincte 8 cm qu' 4 cm de profondeur avec la sonde de 3.5 MHz. L'apparence trouble 4 cm est due l'artefact de largeur du faisceau avec cette sonde parce que la zone focale est au-del de cet objet. Les zones focales des sondes de 5 et 3.5 MHz sont donc 4 et 8 cm de profondeur. La distance de la sonde au centre des ovaires ou de la lumire de l'utrus non-gravide est de l'ordre de quelques centimtres. En consquence, il faut des sondes frquence leve dont la zone focales est environ 3-4 cm. Pour examiner l'utrus en cours de gestation, il faudra des sondes plus pntrantes (3.5 MHz).

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7.3. Les rglages, annotations Au repos, l'cran est vierge d'chos. La brillance contrle la quantit de lumire associe un cho. On doit contrler la brillance de telle faon que la lumire apparaisse tout juste sur l'cran. Le contraste est ajust de faon voir toute la palette des nuances de gris. Il existe un pied coulisse lectronique. Sa prcision est excellente et on peut effectuer des mesures avec une erreur infrieure 5%. Les hauteurs sont plus fiables que les largeurs. La hauteur correspond des images spculaires alors que les images latrales sont moins nettes cause des artefacts. 7.4. Inversion de l'image (figure 14) L'image peut tre forme de gauche droite ou de droite gauche. Cela permet d'avoir la gauche de l'image de l'image correspondant la tte de l'animal lorsque l'chographe est droite de l'oprateur. En revanche, on permute l'image lorsque l'chographe est gauche de l'oprateur c'est--dire que la partie antrieure de l'animal est reprsente droite de l'image. Pour savoir si la gauche ou la droite de l'image correspond la partie antrieure de l'animal, on passe le doigt sur la sonde. 7.5. Rglage du gain (figure 15) Le rglage du gain est dterminant. Il va permettre d'galiser des signaux issus de profondeurs diffrentes. Il y a un gain gnral et des gains proximaux et distaux. On peut avoir une procdure de rglage (Tableau 3). 7.6. Fixation de l'image Pour mieux tudier une image on peut la geler (freeze control). On peut partager l'image en 2 ce qui permet de photographier une structure trop large pour un seul cran.

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III. DVELOPPEMENT EMBRYONNAIRE ET APPLICATION DE L'CHOGRAPHIE AU DIAGNOSTIC PRCOCE DE GESTATION CHEZ LES BOVINS

1- Elments danatomie et de topographie de lappareil gnital de la vache (figure 16) Lappareil gnital de la vache comprend Deux ovaires qui assurent les fonctions germinales (production dovocytes) et endocrines (scrtions doestrognes, progestrone, ocytocine). Les ovaires de vache ont une forme en amande, leur poids varie de 10 20 g en fonction du stade sexuel. Ils sont placs en dedans du bord antrieur des ligaments larges et sont incompltement contenus dans une sorte de cupule sreuse largement ouverte. Deux oviductes qui constituent la partie initiale des voies gnitales de la femelle. Les oviductes sont 2 organes tubulaires contourns et relativement longs (25 cm) qui vont de lutrus aux ovaires. Chaque oviducte comprend le pavillon ou infundibulum (qui coiffe lovaire et capte les ovocytes mis au moment de lovulation), lampoule (site de la fcondation) et listhme (long conduit troit aux parois musculeuses assurant le transfert des ufs vers lutrus). La paroi de loviducte comprend une muqueuse fortement plisse (4 plis primaires et plusieurs plis secondaires et une musculeuse paisse. Un utrus qui est lorgane de la gestation, compos de 2 cornes (bicornu). Les 2 cornes utrines dont la longueur varie de 35 40 cm fusionnent dans leur partie terminale pour former un corps utrin (2-4 cm) dont la lumire se prolonge par un canal cervical qui dbouche dans le vagin. La portion caudale des cornes est enveloppe par une sreuse commune et unie par deux ligaments intercornuaux. Les parois de lutrus sont constitues dune tunique muqueuse riche en glandes (endomtre) et dune tunique musculeuse puissante (myomtre, sige des contractions utrines). Lpaisseur de la paroi des cornes varie comme leur diamtre. De 1 cm dpaisseur pour un diamtre de 2.5 4 cm caudalement, elles seffilent progressivement jusqu 2 mm dpaisseur pour un diamtre de 56 mm. La surface interne de lutrus des ruminants prsente des excroissances

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discodes ou ellipsodes, jauntres et non glandulaires : les caroncules (70-120 caroncules de 15 mm de diamtre disposs en 4 ranges chez la vache non gestante). Un col utrin ou cervix (de 8 10 cm de long chez la vache) qui spare lutrus du vagin et isole ainsi en permanence la cavit utrine de la cavit vaginale. Le col utrin est constitu par un trs fort paississement de la paroi du tractus gnital entre le corps de lutrus et le vagin. Sa paroi ferme et compacte dlimite une trs troite cavit, le canal cervical. Le canal cervical est tapiss par une muqueuse moins paisse et plus ferme que celle du corps et des cornes ; celle-ci est finement plisse en long. Ces plis longitudinaux sont fragments chez les ruminants par des sillons circulaires entre lesquels ils spaississent, de faon se compliquer de quatre gros plis circulaires qui sont lorigine de laspect de fleur panouie dans le fond du vagin. Un vagin long dune trentaine de centimtres prsente des parois musculeuses et paisses mais trs dilatables et dans la partie la plus externe, un vestibule (10-12 cm) parfois spar du vagin par lhymen, situ lgrement en amont du mat urtral. Les glandes de Bartholin scrtent un fluide visqueux qui facilite la copulation. Lorifice vulvaire est protg par les grandes et petites lvres. Le clitoris, petit organe situ la commissure ventrale des lvres est lquivalent embryologique du pnis. Lappareil gnital est appendu dans la cavit abdominale par le ligament suspenseur qui se divise en 3 parties : le mesovarium retient les ovaires, le mesosalpynx entoure les oviductes et le mesometrium ou ligament large auquel sont rattaches les cornes utrines et le cervix. Lattachement du ligament suspenseur tant dorsolatral, les cornes utrines pendent vers le bas et les ovaires se retrouvent prs du pelvis. Chez les gnisses, lutrus trs petit est contenu dans la cavit pelvienne lentre du bassin. Chez les vaches adultes, les cornes utrines ont tendance plonger dans la cavit abdominale en avant du bord antrieur du pubis en raison du relchement des ligaments larges qui rsulte des gestations successives. 2. Technique dexamen chographique de lutrus

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La contention des animaux doit tre efficace, les animaux peuvent tre en stabulation entrave ou introduits un un dans un couloir de contention. Lorsque les animaux sont lattache, lappareil doit tre mobile, il est soit plac sur un chariot, une brouette ou une table roulante. Si les animaux sont intraduits dans une cage de contention, lappareil doit tre fixe. Lexamen doit tre effectu lombre, les appareils peuvent tre quips dun pare-soleil lorsque le soleil gne la lecture de lcran cathodique. Chez la vache, la profondeur des organes gnitaux (30-40 cm) ne permet pas leur visualisation de lextrieur par chographie car les ondes ultrasonores ont un faible pouvoir de pntration (de lordre de 8-10 cm pour une frquence de 5 MHz). En revanche, en introduisant une sonde dans le rectum, on approche suffisamment lappareil gnital situ juste au-dessous de la paroi rectale (figure 17). Lexamen chographique de la vache vise surtout visualiser des structures trs fines comme lembryon et la vsicule embryonnaire, des collections liquides utrines peu importantes, les follicules et les corps jaunes. Les ultrasons 5 MHZ sont utiliss pour examiner lutrus, ils ont un pouvoir de rsolution permettant de reconnatre des formations vsiculeuses partir dun diamtre de 3-5 mm. Une exploration transrectale prliminaire permet de reprer la position de lappareil gnital et de noter dventuelles modifications anatomiques. Pour cela, la main et le bras sont recouverts dun gant protecteur soigneusement lubrifi. La main gante dilate progressivement le sphincter anal et vide le plus compltement possible le rectum des fces quil contient. Tout dabord, le balayage de lentre du bassin avec la main ouverte permet de localiser le col de lutrus. Aprs avoir localis le col, dans son prolongement, la bifurcation des cornes utrines est dtecte. La sonde tanche est enveloppe dune gaine sanitaire plastique enduite de gel sur la face appose aux cristaux. La main gante lubrifie introduit la sonde dans le rectum et la maintient pose sur la muqueuse du plancher du rectum. Il faut veiller ce que la sonde soit en contact permanent avec la muqueuse rectale. Des artefacts sous la forme de zones dombre peuvent rsulter dun mauvais contact de la sonde avec la muqueuse. Dans ce cas, il faut retirer la sonde, vidanger nouveau lampoule rectale, effacer la contraction en saisissant londe de muqueuse et en la tirant vers lanus.

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La progression de la sonde dans lampoule rectale permet de visualiser les organes sous-jacents. Il est ncessaire de procder de faon systmatique dans la progression et le droulement de lexamen chographique. La vessie est le premier organe repr (figure 18A). Sa forme est caractristique, oblongue ou circulaire, de mme que labsence de zone chogne dans sa cavit. La vessie prsente limage typique dun organe creux rempli de liquide et anchogne. Sous la vessie, les constituants osseux du bassin apparaissent comme une structure trs chogne de quelques millimtres dpaisseur . Le cervix est facile localiser en raison de la rponse chogne intense des plis circulaires et du fort cho linaire horizontal au centre du col (canal cervical, figure 18B). Le corps utrin et les cornes utrines se voient immdiatement en avant gnralement sur la ligne mdiane. Une sonde linaire applique dorsalement sur lutrus et mettant un faisceau dultrasons dorso-ventral donne une coupe longitudinale de lutrus (figure 19A). En faisant osciller la sonde vers la droite et la gauche, on dcouvre les deux cornes utrines.

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La bordure des cornes apparat comme une troite ligne peu chogne sparant la paroi utrine de son entourage un peu plus chogne. La section de la paroi utrine apparat en tons gris et avec une structure granuleuse variable. Au centre, la muqueuse endomtriale troitement accole forme une ligne claire. Selon la phase du cycle, des zones anchognes de quelques millimtres peuvent tre observes dans la lumire utrine (figure 19B). Ces zones anchognes correspondent laccumulation de mucus au moment de lstrus. Le fait que lon puisse observer des liquides dans lutrus non gravide est dune grande importance pour le diagnostic chographique prcoce de la gestation. Il ne faut pas considrer les collections liquides intra-utrines comme un signe certain de gestation. Cela nest autoris que si lon peut identifier fiablement des structures embryonnaires . Une stratification (htrognit) de la paroi utrine avec une zone proche de la lumire utrine moins chogne et une zone priphrique plus chogne est observe pendant les phases de proestrus, strus et metoestrus. Ldme des couches superficielles de tissus et laccumulation de scrtions diminuent lchognicit de la portion interne de la paroi utrine et sont responsables de lhtrognit de la structure de la paroi utrine. Dans un plan de coupe, plusieurs sections de corne utrine peuvent tre observs en raison de lenroulement de la corne sur elle-mme. Des examens chographiques de lutrus au cours du cycle oestral ont mis en vidence une variation du nombre de sections transversales de cornes utrines observes simultanment dans un plan de coupe (Pierson et Ginther, 1988. Theriogenology 29 : 21-37). Selon ces auteurs, le nombre diminue avant lovulation et augmente entre le jour de lovulation et le 6 me jour du cycle puis reste peu prs constant jusquau 1617me jour du cycle. Laugmentation du nombre de sections transversales des cornes utrines sur un plan de coupe aprs lovulation traduit les modifications de la morphologie des cornes qui sont droules pendant loestrus et trs enroules pendant le dioestrus sous imprgnation progestronique. A ce titre, limage chographique des cornes utrines peut tre utilise comme un indicateur biologique de la nature oestrognique ou progestronique de lexposition hormonale du tractus gnital.

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3. Le dveloppement de lembryon et du ftus bovin Le tableau 4 illustre la chronologie du dveloppement de lembryon bovin. La fcondation marque le dbut de la priode embryonnaire caractrise, avant que ne dbute limplantation, par une succession de divisions cellulaires et lapparition des premires diffrenciations qui vont conduire au stade blastocyste : stade auquel limplantation a lieu. Le zygote arrive la jonction tubo-utrine 24-48 h aprs la fcondation, il est alors gnralement au stade de 8 blastomres. Au quatrime jour qui suit la fcondation, il est au stade morula et environ 6 jours aprs la fcondation, cest un blastocyste typique sphrode de 0.20 mm de diamtre. Le stade dit blastocyste est dfini par la prsence dune cavit centrale, le blastocle, compltement entour par une assise cellulaire appele trophectoderme ou trophoblaste et un petit groupe de cellules situ sous le trophectoderme : masse cellulaire interne ou disque embryonnaire. Le trophoblaste form dune seule couche de cellules trs minces et noyau petit est troitement appliqu contre la membrane vitelline et la zone pellucide commence samincir. Au 9me jour aprs la fcondation, la membrane vitelline disparat, le blastocyste perd sa forme sphrode ; il mesure environ 0.40 mm sur 0.25 mm. Au 11me jour, il est long de 2 3 mm et le disque embryonnaire est constitu. Ds lors, la croissance est dune extraordinaire rapidit et les parties extraembryonnaires sallongent de faon considrable (figure 20). Pendant toute cette priode qui prcde limplantation, le blastocyste envahit la cavit utrine. Encore log dans lextrmit ovarique de la corne vers le 10 me jour, il occupe les deux tiers de la longueur de celle-ci vers le 16 me jour et sa totalit vers le 18 me jour o il atteint une quarantaine de centimtres. Au dbut de la 4 me semaine, il a envahi la cavit du corps utrin et quelques jours aprs, son extrmit atteint la jonction tubo-utrine de la corne oppose. Cest alors un trs long cordon creux dont la longueur dpasse 1 mtre. Il est pourvu vers son milieu, situ la base de la corne gravide, dun renflement ovalaire dune vingtaine de mm de longueur correspondant lamnios, o est log lembryon. Ds le 18me jour commence se manifester une dgnrescence des extrmits du conceptus qui se ncrosent. Ce processus samplifie et raccourcit rapidement le

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conceptus vers la fin de la 4me semaine. Il sarrte vers le 35me jour en regard des extrmits de lallantode. Cest au 30me jour quapparaissent les premires bauches de villosits placentaires. Trs vite, elles couvrent de faon diffuse la totalit du chorion, mais ds le 33me jour, les bouquets de villosits situs en regard des caroncules utrines deviennent plus importants, sengrnent dans les cryptes des caroncules et bauchent les cotyldons. La dure moyenne de la gestation est denviron 9 mois et demi (275-290 jours chez la vache). Lembryon se dlimite vers 18 jours et les premiers somites se forment vers le 19me jour. A cette date, lembryon est long de 3-4 mm, la fermeture du tube neural est dj commence. Le cur commence battre. A 22 jours, se forment les vsicules optiques. Le 24 me jour, se montrent les bourgeons des membres thoraciques, et le lendemain, ceux des membres pelviens. A 26 jours, lembryon trs fortement incurv sur lui-mme mesure 8-9 mm de long. Vers 30 jours, la longueur de lembryon atteint 12 mm, les yeux sont saillants et dpourvus de paupires. Vers 35 jours, la longueur directe atteint 14-15 mm, lil est bord de minces replis qui annoncent la formation des paupires. Le cou est nettement dvelopp. Les doigts sont bien reconnaissables aux 4 membres. La priode ftale commence dans les jours suivants. Le tableau 5 illustre les stades caractristiques du dveloppement du ftus bovin. 4. Le diagnostic prcoce de gestation par chographie Ltablissement dun diagnostic de gestation par chographie est bas sur la dtection de la prsence du conceptus. Cette technique permet galement dapprcier la vitalit de lembryon par la mise en vidence des battements cardiaques ou des mouvements du foetus. De nombreuses tudes ont montr quun diagnostic de gestation par chographie ne pouvait pas tre ralis en routine avant le stade 20 jours de gestation. En effet, avant le 20me jour de gestation, le diamtre maximal de la vsicule embryonnaire nexcde pas 2-3 mm, soit la limite de la rsolution des chographes. Les collections liquides anchognes ne peuvent pas tre distingues des images semblables observes lstrus. Vers le 22 me jour, le diamtre de la

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vsicule embryonnaire est de 3-5 mm au niveau de lamnios et sa longueur de 1 cm (tableau 6). La plus grande collection liquide se voit gnralement dabord dans la partie libre enroule des cornes utrines. Cet endroit est celui o on voit habituellement lembryon. Lembryon est difficile distinguer avant le 25 me jour de gestation (5 mm de long entre J21-24). On peut parfois confirmer labsence de gestation entre J20-23 quand le diagnostic de non gestation est bas sur la prsence dun petit corps jaune (taille<20mm) et labsence de liquide dans la lumire utrine. Dans les diagnostics de gestation les plus prcoces, il faut s'assurer que la collection de liquide observe se trouve lintrieur de lutrus. On risque de confondre des vaisseaux sanguins courant la surface de lutrus avec des liquides se trouvant lintrieur de lutrus. Le diamtre transversal de lallantochorion et de la vsicule amniotique sont trop rduits jusquau 25me jour de gestation pour que lon puisse dceler la vsicule embryonnaire remplie de liquide A partir de ce stade, le contenu liquide des enveloppes augmente rapidement et le diamtre de la vsicule allantochoriale saccrot considrablement (tableau). Le 25 me jour de gestation, la vsicule embryonnaire a un diamtre de 10 mm, ce diamtre atteint 18-20mm le 30 me jour et on peut la suivre dans la corne oppose. A ce niveau elle est cependant nettement plus mince (4-8 mm). Le faisceau dultrasons coupe la vsicule embryonnaire replie sur elle-mme sur plusieurs sections. On ne parvient gnralement pas obtenir un plan de coupe faisant apparatre simultanment la vsicule embryonnaire dans lensemble de la corne utrine. Le plus souvent, on ne peut visualiser que diffrentes portions de la vsicule. Les plis de la paroi utrine faisant saillie dans la lumire utrine interrompent la ligne gnrale de la vsicule embryonnaire et lui donnent un aspect pseudo-ampullaire. Entre le 25me et le 30me jour, lembryon est visualis sous forme dune petite tche claire dans une poche liquidienne (figure 21A). Lembryon au 25me jour de gestation est troitement appliqu sur la membrane utrine. Il forme une saillie chogne dans la lumire utrine anchogne. A partir de J30, lembryon est entour de toutes parts de liquide embryonnaire (figure 21B). Lbauche cardiaque commence se contracter vers le 20 me jour de gestation. La longueur tte-croupe de lembryon est de 12 mm J30, 15 mm J35 et 22 mm J40.

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La vsicule amniotique est visible partir du 35 me jour, elle entoure lembryon en formant un arc quelques millimtres de distance et apparat sur lcran comme une ligne fortement chogne. Les premiers cotyldons (placentation pithliochoriale cotyldonnaire) sont observs entre vers le 45 me jour, les mouvements du ftus sont dtects. Du moment o il devient visible et jusquau 50 jour de gestation, lembryon crot denviron 1mm/jour. Sa longueur tte-croupe atteint alors 35 mm. A partir de du 40 me jour on voit le profil de lembryon, le cordon ombilical. A ce stade se produit le passage de la forme rudimentaire de lembryon la forme diffrencie caractristique du ftus. A cette priode, on remarque galement les premiers centres dossification au niveau des vertbres, ctes, os du bassin, du crne En pratique, le diagnostic de gestation peut tre aisment ralis partir du 28me jour de gestation. La vsicule embryonnaire apparat anchogne, oblongue ou circulaire, dont le plus grand diamtre vertical est de 20 mm. Cette image est intra-utrine contours nets. Au stade J28, si lexamen est douteux, il est prudent de le rpter au bout dune semaine. Il est parfois possible de diagnostiquer une rsorption embryonnaire entre les 30me et 40me jours de gestation : la taille de la vsicule embryonnaire est infrieure la moyenne dcrite ce stade. Au bout de quelques jours, plusieurs petites vsicules apparaissent, comme si la vsicule mre avait clat et finalement, elles disparaissent. A partir du 35me jour, lexamen est plus facile et on visualise lembryon sous forme dune petite tche claire dans une poche liquidienne. Le diamtre de la cavit extra-embryonnaire est alors de 30 mm. La gemellit peut tre diagnostique au stade J35. Au 50me jour, le diamtre de la vsicule embryonnaire est de 42 mm. Lchographie trouve galement une application fondamentale chez les bovins dans le diagnostic de mort embryonnaire et le suivi des vnements qui prcdent et suivent la mort embryonnaire. Cette dtection est base sur lobservation des battements cardiaques qui peuvent tre dtects partir du stade J20.

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IV. APPLICATION DE LCHOGRAPHIE AU SUIVI OVARIEN AU COURS DU CYCLE OESTRAL CHEZ LA VACHE

1. Introduction Le dveloppement de lchographie a permis de nouvelles approches diagnostiques dans les diffrents tats physiologiques et pathologiques de lappareil gnital. Lchographie constitue lavance technologique la plus dterminante dans les domaines de la recherche et de la reproduction clinique chez les grands animaux, depuis lintroduction de la palpation transrectale et des dosages radioimmunologiques des hormones circulantes , Ginther, 1986. En effet, pendant longtemps, la palpation transrectale a t la seule technique pour explorer les organes gnitaux des grandes femelles domestiques . En particulier, le dveloppement de lchographie a permis lexploration de la dynamique folliculaire dans les annes 80. Lchographie est exigeante sur le plan intellectuel et ncessite de bonnes connaissances de physiologie et danatomie. La valeur informative de lchographie est suprieure celle de la palpation transrectale lexception des informations relatives la consistance et la sensibilit des organes. Lapprciation des formations ovariennes par palpation transrectale est dlicate car la confirmation des diagnostics labattoir rvle environ 20% derreurs. Lapport de lchographie permet damliorer linterprtation des organites ovariens aprs leur palpation et de donner des informations complmentaires sur la taille et lchognicit des organites ovariens. Lenregistrement des images permet de garder la mmoire un jour J des organites ovariens et de leur emplacement sur lovaire pour mieux analyser leur volution. Ce suivi ovarien est intressant dans le cadre de la transplantation embryonnaire pour valuer la rponse dune donneuse au traitement de superovulation avant la collecte.

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Lchographie du tractus gnital pour un suivi ovarien ou pour la recherche danomalies chez une vache infertile exige un examen mthodique pour explorer la totalit du tractus gnital, col, corps et cornes utrines, oviductes et ovaires.

2. Rappels sur le cycle oestral et sur la dynamique des vagues folliculaires 2.1. Le cycle oestral (Figure 22) La dure du cycle oestral est de 18 24 jours, en moyenne de 21 jours. Classiquement le cycle est divis en 4 phases : Le proestrus est la priode qui prcde loestrus et qui correspond la croissance terminale des follicules. Elle dure 3 jours. Loestrus dure 12 24 heures chez la vache. Il correspond la priode dacceptation du mle. Lovulation a lieu 12 15 heures aprs la fin des chaleurs. Le mtoestrus dure 2 jours et correspond la mise en place du corps jaune partir du follicule qui a ovul. Le dioestrus dure 15 jours, cest la priode de maturation et de rgression du corps jaune. Ainsi, le cycle oestral comprend 2 phases, une phase folliculaire (proestrus et oestrus) correspondant la fin de la croissance du follicule provulatoire jusqu lovulation et une phase lutale (mtoestrus et dioestrus) qui dbute par la mise en place du corps jaune et sachve avec sa rgression. 2.2. Les vagues folliculaires (Figure 22) Les follicules se dveloppent par vague chez la vache. 2 ou 3 vagues de croissance folliculaire sont observes au cours du cycle chez la vache. Le dveloppement de la vague folliculaire dure 7-10 jours, comprenant diffrentes phases : recrutement, slection, dominance et enfin atrsie ou ovulation. Pour les cycles 3 vagues, les priodes de croissance folliculaire ont lieu de J3 J9, de J10 J16 et de J17 J21. Ces vagues folliculaires peuvent tre mises en vidence par chographie , lmergence dune vague, concomitante dune augmentation des concentrations de FSH, correspondant la dtection dune cohorte de follicules de 4 6 mm de diamtre, parmi lesquels un follicule sera slectionn (J2-3 de la vague) pour continuer son dveloppement et devenir le follicule dominant J4-5 de la vague. Les follicules subordonns satrsient pendant la phase de dominance correspondant des concentrations faibles en FSH. Au mme moment, le follicule dominant continue

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crotre et son devenir, atrsie ou ovulation, est dtermin par la frquence des pulses de LH. Une faible pulsatilit de LH, en phase lutale, entrane une perte de la dominance. Cette perte de la dominance concide avec lmergence dune nouvelle vague folliculaire qui est nouveau prcde par une augmentation transitoire de FSH. 2.3. Les organites ovariens Les ovaires prsentent leur surface 2 types dorganites : le corps jaune fait saillie la surface de l'ovaire, il a la forme dun bouchon de champagne, prsentant le plus souvent un sillon caractristique la surface de lovaire. Les corps jaunes matures (7me- 18me jour du cycle) prsentent un diamtre de 2 3 cm. Le corps jaune hmorragique est prsent sur l'ovaire du 2me au 4me jour aprs l'ovulation. Il est difficilement palpable car il est trs mou, petit et dprim en son centre. Le corps jaune en rgression est palpable du 17me au 21me jour et prsente un diamtre de 1 cm en moyenne . Il diminue rapidement de volume, devient ferme et sclreux (corps blanc). les follicules sont des formations liquidiennes de 1.5 2.5 cm de diamtre la surface de lovaire. En dbut dvolution, ils sont dpressibles paroi lisse, leur paroi devient plus tendue prte se rompre avant lovulation. Il faut souligner que lon peut observer des follicules dominants de 1 1.5 cm de diamtre sur lovaire pendant le dioestrus ou en dbut de gestation. 3. Echographie des ovaires 3.1. Comment chographier les ovaires ? La sonde chographique est place par voie transrectale au niveau de la bifurcation des cornes utrines puis, elle est dvie dans son axe longitudinal, latralement en direction de la branche montante de lilium . Les ovaires sont gnralement visualiss dans cette direction. Cependant, les ovaires chez la vache sont relativement mobiles et ne sont pas toujours visibles dans langle de la sonde. Dans ce cas, la technique consiste tenir la sonde dans le creux de la main palper et saisir lovaire par lextrmit des doigts. Lovaire sera alors plaqu contre la branche montante de lilium et la sonde chographique sera dispose par-dessus. Une dernire technique consiste saisir lovaire dans le creux de la main et maintenir la sonde avec les doigts opposs au pouce . Elle prsente linconvnient de dformer un peu les organites prsents la surface de lovaire.
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Il faut souligner que lchographie des ovaires ne se limite pas une coupe mais est une vue dynamique des organites ovariens . Les diffrents organites, en particulier les follicules pourront tre diffrencier en faisant varier langle dincidence du train dondes mises par la sonde.

La frquence des ondes ultrasonores gnralement utilise est de 5MHz, son pouvoir de rsolution permet de visualiser des organites ovariens partir de 4-5 mm de diamtre. Lchographie permet de mesurer les organites ovariens soit par comparaison avec lchelle ou par dplacement des calipers sur lcran.

Un examen chographique complet des ovaires dure en moyenne 2 5 minutes , tandis que celui de lutrus dure 20 60 secondes (except le diagnostic du sexe).

3.2. Images chographiques des ovaires Le stroma ovarien est un tissu dense qui est caractris par une chostructure htrogne en raison de la prsence de petits follicules intraovariens ou de vaisseaux sanguins apparaissant comme des tches noires de 2 4 mm de diamtre. La zone mdullaire dpourvue de follicules en croissance apparat globalement plus chogne que les structures environnantes. La prsence dorganite, en particulier du corps jaune rend difficile lapprciation du stroma ovarien car il envahit une grande partie de lovaire. Les follicules sont des structures sphriques anchognes , apparaissant en noir sur lcran, contour bien dlimit chogne (Figure 23). Leur taille varie de quelques mm 2 cm en fonction de leur stade de dveloppement et du cycle sexuel. On ne peut que rarement reconnatre la paroi du follicule de 1 2 mm dpaisseur incluse dans le stroma ovarien chogne. Le pouvoir de rsolution dune sonde de 5MHz permet de visualiser des follicules de taille suprieure 3-4 mm de diamtre, cet examen dpend cependant de la qualit de limage et de lexprience de loprateur. Les follicules de diamtre suprieur 1 cm prsentent souvent lchographie un renforcement de lcho dans leur rgion distale, qui apparat sur lcran comme une plage blanche. Les follicules peuvent tre confondus avec des vaisseaux sanguins, ces derniers prsentent gnralement une forme moins rgulire. Le balayage de la structure en modifiant langle de la sonde permet de reconnatre le follicule grce sa forme sphrique. La forme sphrique du follicule est modifi lorsquil est compress par un autre follicule ou un corps

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jaune adjacent. La paroi du follicule est fine ce qui permet de les diffrencier des kystes lutiniss ou des corps jaunes cavitaires. Le corps jaune est une structure chogne granuleuse circonscrite, apparaissant gris homogne lcran et moins rfringente que le stroma ovarien (Figure 24). Leur forme est gnralement oblongue. Environ un tiers des corps jaunes sont cavitaires et prsentent en leur centre une cavit remplie de liquide, noire lcran ; lpaisseur de la paroi lutale mesure de 3 8 mm. A noter que certains corps jaunes quasiment intraovariens et difficiles mettre en vidence par palpation transrectale pourront tre visualiss par chographie. Le corps blanc ou corps jaune cicatriciel apparat comme un point trs rfringent de petite taille, infrieure 5 mm la surface de lovaire. 3.3. Comparaison de lvaluation des structures ovariennes par palpation transrectale, par chotomographie et par les concentrations plasmatiques de progestrone Lvaluation des organites ovariens par palpation et par chographie dpendent largement de la technicit de loprateur et de la qualit de lchographe. Le tableau ci-dessous prsente la sensibilit, la spcificit et la valeur prdictive positive de lchographie et de la palpation transrectale pour dtecter un corps jaune mature sur 68 vaches (Ribadu et al., 1994, Veterinary Record 135 : 452-457).

sensibilit Palpation transrectale Echographie 95 % 85 %

spcificit 96 % 100 %

Valeur prdictive positive 90 % 100 %

La mme tude montre que la palpation transrectale permet de dtecter seulement 7 follicules sur 25 de taille suprieure 10 mm de diamtre alors que lchographie permet didentifier 19 de ces 25 follicules caractriss aprs dissection. Une autre tude montre des rsultats diffrents avec une sensibilit de 71 et 95 % pour la dtection de follicules de taille suprieure 10 mm, respectivement par palpation et par chographie.

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Il existe une bonne corrlation entre les concentrations plasmatiques de progestrone et la mise en vidence par chographie. Cependant, en fin de cycle, la diminution rapide des concentrations de progestrone est accompagne par une diminution plus lente du diamtre du corps jaune.

En dfinitive, ces diffrentes tudes montrent que lchographie est plus sensible que la palpation transrectale pour dtecter des organites ovariens physiologiques. 3.4. Evolution des organites ovariens au cours du cycle oestral Les follicules Dans la pratique, il est difficile de dterminer la phase du cycle en fonction de lexamen des follicules. En effet, comme nous lavons vu prcdemment, pendant le cycle oestral et en dbut de gestation, il existe des vagues de croissance folliculaire et il est frquent dobserver des follicules de 10 mm de diamtre. En effet, le follicule provulatoire prsente un diamtre suprieur de 6% seulement celui du diamtre des follicules dominants des diffrentes vagues folliculaires observs au cours du dioestrus (15.4 0.3 contre 16.3 0.3 mm, Pierson et Ginther, 1988, Theriogenology 29 : 21-37). Ainsi, il est difficile partir dun seul examen des ovaires de dterminer le stade du cycle oestral et le devenir du plus gros follicule vers lovulation ou latrsie. Lchographie permet de caractriser le follicule provulatoire sans le saisir et sans risquer de provoquer une ovulation prcoce ou dans la cavit pritonale comme cest parfois le cas aprs palpation transrectale. Lchographie permettra de dterminer le diamtre du follicule provulatoire qui mesure en moyenne 16.3 0.3 mm de diamtre (de 13 20 mm) (Pierson et Ginther, 1988, Theriogenology 29 : 21-37). Paroi folliculaire comprise, le follicule prt ovuler a un diamtre moyen de 18 mm. Lovulation est difficile prvoir chez la vache contrairement la jument. Souvent, lovulation ne peut tre mise en vidence que par la disparition du follicule mature, exceptionnellement, on peut constater une diminution du diamtre du follicule correspondant la contraction de la paroi folliculaire prcdant lovulation. Aprs lovulation, le follicule contient une structure anchogne correspondant la prsence du caillot sanguin. La corrlation entre lvaluation par chographie et aprs dissection de la taille du plus gros follicule est de 0.98 (Quirk et al., 1986, Journal of Reproduction and

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Fertility 77 : 211-219). Il existe une diffrence entre les 2 mesures correspondant essentiellement lpaisseur de la paroi du follicule, en effet par chographie, on mesure la cavit antrale du follicule. La mesure du diamtre du follicule provulatoire, value par chotomographie, en fonction du stade du cycle varie de la manire suivante (Quirk et al., 1986, Journal of Reproduction and Fertility 77 : 211-219) : Aprs administration de PGF2alpha : J-3 : 2.3 1.3 cm J-2 : 1.5 1.8 cm J-1 : 0.8 0.8 cm Et sur chaleurs naturelles : J-3 : 1.4 1.3 cm J-2 : 2.1 0.8 cm J-1 : 1.7 1.1 cm

Le corps jaune Le corps jaune est visible pendant toute la dure de la phase lutale, en gnral partir du 3me jour du cycle et jusqu lovulation suivante . Le corps jaune nouvellement form est moins chogne par rapport au corps jaune mature, il est gris centre noir et ne doit pas tre confondu avec un follicule. Il a une largeur moyenne de 14 mm et une longueur de 18 21 mm (Pierson et Ginther, 1984, Theriogenology 21 : 495-504). Le corps mature (J6-J16) est gris homogne, circulaire, dun diamtre moyen de 2 3 cm. Un tiers des corps jaunes environ prsentent en leur centre une zone anchogne correspondant une cavit liquidienne. La taille de cette cavit diminue gnralement partir du 10 me jour du cycle et se transforme en un corps fibreux dense. Le corps jaune en rgression est en gnral visible 3 jours aprs lovulation . Chez des gnisses traites avec la PGF2 , la taille du corps jaune diminue de 16.5 1.9 x 26.0 1.8 mm avant ladministration de PGF2 13.7 2.9 x 22.3 et 12.2 3.1 x 20.0 2.8 mm, respectivement 2 jours et 1 jour avant loestrus (Quirk et al., 1986, Journal of Reproduction and Fertility 77 : 211-219). La rgression du corps jaune est caractrise par une diminution de son chognicit associe une diminution de taille.

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Cependant, les variations de l'chognicit du corps jaune au cours du cycle ont t montr par analyse d'images et sont difficilement utilisables en pratique. En outre, les caractristiques de taille ou dchognicit ne permettent pas de distinguer les corps jaunes gestatifs des corps jaunes priodiques.

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