Manual de Laboratorio Ctedra de Microbiologa Microbiologa para Medicina Universidad de Ciencias Mdicas

UCIMED Julio 2010

Dr Marco Luis !errera !idalgo M"C #r Cristian #nc$e% DLC

Universidad de Ciencias Mdicas UCIMED Ctedra de Microbiologa Microbiologas para Medicina Manual de Laboratorio &ersonal Docente' DLC. Cristian Snchez Dr. Marco Luis Herrera Introducci(n El laboratorio de Microbiologa y el resente !anual" son unas guas #ue le ayudar a co! render con !ayor claridad los conce tos discutidos durante las clases te$ricas. El laboratorio co!o tal" se realizar el da !artes y ser ese da cuando se e%ectuar el !onta&e de las di'ersas ruebas" realizndose la lectura de las !is!as el da &ue'es. Durante este ri!er da" ade!s" se realizar una rueba r ida (#uiz)" donde el alu!no debe de!ostrar su conoci!iento sobre lo #ue se 'a a realizar durante el laboratorio y en el cual odran tocarse te!as 'istos en las clases te$ricas. El ro!edio de los #uices realizados se to!ar en cuenta co!o un e(a!en !s del curso te$rico" or lo #ue los ) arciales !s la nota de laboratorio se ro!ediarn ara obtener la nota de a ro'echa!iento. Co!o re#uisitos ara realizar el laboratorio estn* la resentaci$n de una gabacha en buen estado" una toalla de !anos" libreta de a untes y un !arcador indeleble. Instrucciones )enerales +. El estudiante debe 'estir su gabacha durante todo el eriodo de la rctica. ,. Est total!ente rohibido co!er o %u!ar dentro del laboratorio. -. En todo !o!ento" se debe !antener el orden y la disci lina dentro del laboratorio. .. El rea de traba&o debe de estar des e&ada" or lo #ue se solicita !antener all solo lo estricta!ente necesario. ). Desin%ecte el rea de traba&o" al inicio y al %inal de cada secci$n de laboratorio. /. El !aterial conta!inado debe ser descartado en los reci ientes dis uestos ara tal %in. 0. Si e! lea el oder de in!ersi$n del !icrosco io (+11()" este debe #uedar li! io al concluir el laboratorio. 2. 3odos los !icroorganis!os e! leados en las rcticas" son at$genos hu!anos" or lo tanto" ara reducir el riesgo de una conta!inaci$n entre usted !is!o o en alguno de sus co! a4eros" estos agentes deben ser considerados co!o eligrosos y tratados co!o tal" or lo #ue las bro!as o cual#uier otra distracci$n #ue onga en eligro la seguridad general" ser ob&eto de una %uerte sanci$n. (Instructor) (Coordinador)

5. La inasistencia a un laboratorio" i! licara la no resentaci$n del #uiz" or lo #ue la nota obtenida ser un 1. 6ero si usted resenta una &usti%icaci$n ace tada or la o%icina del Dr. Casas" se le er!itir realizar el #uiz" en la r$(i!a seci$n de laboratorio.

Laboratorio 1 *+nipresencia de los +icroorganis+os , su susceptibilidad a diversos agentes -sicos Introducci(n Este laboratorio tiene or ob&eto de!ostrar" #ue los !icroorganis!os estn or do#uier" en el aire" en el a!biente" de ositados sobre !uebles" aredes" isos y rinci al!ente en nosotros !is!os" or lo #ue el e! leo de t7cnicas as7 ticas en el traba&o de laboratorio y en la rctica !7dica es i! rescindible. 6or otra arte" retende introducirlos en las !edidas de control ara los !icroorganis!os" de!ostrando #ue el la'ado de !anos es de su!a i! ortancia" ade!s de insistir en otras %or!as de control co!o es el e%ecto oligodin!ico de los !etales" la acci$n de los colorantes y la ebullici$n del agua. 6or 8lti!o" co!o un re%uerzo de lo estudiado en teora" se estudiarn los !edios de culti'o selecti'os y di%erenciales y las reacciones obser'adas ara di%erentes !icroorganis!os sobre dichos !edios de culti'o. Materiales 5 latos de agar sangre . latos de agar McCon9ey , lato de agar !anitol sal + lato de agar nutriti'o con cristal 'ioleta diluido +*+11.111 + lato de agar nutriti'o con cristal 'ioleta diluido +*+1.111 + lato de agar nutriti'o con cristal 'ioleta diluido +*+.111 + tubo de agar inclinado con una ce a de Escherichia coli (bacilo :ra! negati'o) + tubo de agar inclinado con una ce a de Klebsiella pneumoniae (bacilo :ra! negati'o) + tubo de agar inclinado con una ce a de Pseudomonas aeruginosa (bacilo :ra! negati'o) + tubo de agar inclinado con una ce a de Staphylococcus aureus (coco :ra! ositi'o en raci!os) + tubo de agar inclinado con una ce a de Staphylococcus epidermidis (coco :ra! ositi'o en raci!os) + tubo con caldo nutriti'o y una ce a de Bacillus s . (bacilo :ra! ositi'o es orulado) + tubo de agua destilada est7ril , !onedas est7riles de cobre ; licadores est7riles ;sas est7riles Mtodo +. Mo&e un a licador est7ril con al agua destilada y haga un ras ado sobre la su er%icie de la !esa de traba&o" el iso" suela de los za atos o las aredes y con 7l" raye la su er%icie de un lato de agar sangre. ,. Colo#ue su labio" su lengua o su elo sobre la su er%icie de un lato de agar sangre.

-. Con un !arcador indeleble" di'ida un lato de agar sangre y rotule a!bas secciones co!o + y ,. Sobre la secci$n rotulada co!o +" colo#ue sus dedos sobre la su er%icie del agar y luego" l'ese la !anos con agua y &ab$n. S7#uese adecuada!ente y luego" sobre la secci$n rotulada co!o ," colo#ue sus dedos la'ados. .. Con un asa est7ril" raye la !itad de cada una de los agares nutriti'os !s el cristal 'ioleta con la ce a de Escherichia coli y en la otra !itad la ce a de Staphylococcus aureus. ). <sando una asa est7ril raye la !itad de una laca de agar sangre con la ce a de Escherichia coli y la otra !itad" haga lo !is!o ero con la ce a de Staphylococcus aureus y luego colo#ue" con una inza est7ril" una !oneda de cobre en el centro de cada rayado. /. <sando el tubo con el caldo y la ce a de Bacillus s ." onga a her'ir agua y luego colo#ue el tubo dentro del agua hir'iendo" or un eriodo de +1 !inutos. Luego de en%riar el tubo" sa#ue una asada e inocule un lato de agar sangre. 0. E! leando asas est7riles" raye la su er%icie de una agar sangre" un agar McCon9ey y un agar !anitol sal con cada una de las ce as de las siguientes ce as* Escherichia coli" Klebsiella pneumoniae" Pseudomonas aeruginosa" Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis. 2. Incube todas las lacas" de todas las acti'idades" en la incubadora a -)=C or ,. horas.

E.tracci(n de /D0 Introducci(n En los tie! os resentes" los estudios de identi%icaci$n de ;D>" han cobrado una gran i! ortancia y se e! lean en la identi%icaci$n de te&idos hu!anos as co!o en la identi%icaci$n de agentes #ue ueden causar en%er!edades. 6or esta raz$n" #uere!os desarrollar una in'estigaci$n #ue retende de!ostrar #ue es relati'a!ente sencillo el aisla!iento de ;D> y #ue a artir de !ateriales de %cil ad#uisici$n" se uede aislar el ;D> de cual#uier ser 'i'o. Materiales <na cebolla" <n cuchillo <n e!budo , bea9er de ,)1 !l Sal de !esa ;lcohol de 5) en %ro Detergente ?iltro de ca%7 ;gua destilada Colorante ;zul de Metileno Cucharas lsticas Mtodo +. ;ntes de iniciar el rocedi!iento" colo#ue un oco de alcohol de 5)=C dentro del re%rigerador" ara #ue se en%re. ,. En un bea9ers" rotulado cebolla" colo#ue -1 !l de agua" agregue ) gra!os de sal de !esa y , cucharadas de detergente -. 6ese +11 gra!os de la arte central de una cebolla y haga cuadrados e#ue4os. .. Colo#ue los +11 gra!os del 'egetal en el bea9er rotulado ara tal %in. ). Haga un !acerado con todo el !aterial" rocurando no hacer !ucha es u!a /. De&e re osar or +1 !inutos 0. <sando un %iltro de ca%7" %iltre todo el !aterial anterior y rec$&alo en un segundo bea9er" a su 'ez rotulado co!o cebolla. 2. Con !ucho cuidado agregue el alcohol de 5) en %ro a cada uno de los bea9ers 5. Se 'a a %or!ar un reci itado lechoso #ue uede ser recogido con una cuchara de lstico +1. Este reci itado es el ;D> del 'egetal ++. 6ara hacerlo !s e'idente uede agregar unas gotas de azul de !etileno

Laboratorio 1 Mor-ologa de las Clulas #anguneas Introducci(n El resente laboratorio tiene co!o ob&eto realizar un re aso general sobre la !or%ologa de las c7lulas del te&ido sanguneo" tales co!o los oli!or%onucleares o neutr$%ilos" eosin$%ilos" bas$%ilos" lin%ocitos" !onocitos" eritrocitos y la#uetas. ;de!s de re asar lo discutido en las clases de teora con res ecto a la di%erenciaci$n entre un he!ogra!a de ti o 'iral" uno bacteriano y uno arasitrio. 3a!bi7n" se a ro'echa la o ortunidad ara resentar %rotis sanguneos de acientes con leuce!ia" dre anocitosis y con resencia de he!o arsitos tales co!o !alaria y chagas. Materiales + l!ina con un %rotis sanguneo nor!al + l!ina con un %rotis sanguneos de una !7dula $sea nor!al + l!ina con un %rotis sanguneo con !onocitos en%ocados + l!ina con un %rotis sanguneos con lin%ocitos en%ocados + l!ina con un %rotis sanguneos con bandas en%ocadas + l!ina con un %rotis sanguneos con des'iaci$n a la iz#uierda + l!ina con un %rotis sanguneos con neutro%lia + l!ina con un %rotis sanguneos con resencia de c7lulas in!aduras o blastos + l!ina con un %rotis sanguneos con eritroblastos o eritrocitos nucleados + l!ina con un %rotis sanguneos con Dre anocitosis + l!ina con un %rotis sanguneos con Malaria + l!ina con un %rotis sanguneos con 3ri anoso!as de la en%er!edad de Chagas @bser'e un re orte de laboratorio o histogra!a Mtodo +. <tilizando el ob&eti'o de in!ersi$n" obser'e cada una de las l!inas su!inistradas y realice dibu&os #ue le er!itan recordar cada una de ellas ,. @bser'e la !or%ologa de los eritrocitos y de las la#uetas en la l!ina nor!al -. En el histogra!a su!inistrado" obser'e co!o se realiza un re orte de un he!ogra!a" obser'e los recuentos leucocitarios" la deter!inaci$n de la he!oglobina" el he!atocrito y el clculo del CHCM" as co!o el di%erencial celular realizado.

Laboratorio 2 3eacciones de aglutinaci(n , otras reacciones de tipo in+unol(gico Introducci(n Este laboratorio tiene co!o ob&eto" de!ostrar la utilidad de los !7todos in!unol$gicos en la identi%icaci$n de los !icroorganis!os y la a licaci$n de !7todos co!o el ELIS; y la aglutinaci$n en el diagn$stico clnico de algunas en%er!edades. Se hace 7n%asis en los dos ti os de !7todos" directos en los #ue se detecta antgeno e indirectos en los #ue se detecta anticuer os Materiales <n tubo de antisuero contra Shigella sonnei + laca de agar sangre con un culti'o de Shigella sonnei y uno de Shigella flexneri + 9it de !icroelisa ara Helycobacter pilori + 9it ara diagn$stico directo contra Streptococcus pyogenes Mtodo +. <sando una laca de etri est7ril" haya dos crculos con una l iz de cera y colo#ue una e#ue4a cantidad de la ce a de Shigella sonnei en uno de los crculos. Haga lo !is!o ero con la ce a de Shigella flexneri ,. Colo#ue una gota del antisuero contra Shigella sonnei en a!bos crculos -. Con un a licador est7ril haga una e!ulsi$n de cada ce a en el antisuero .. Des u7s de , !inutos" obser'e or aglutinaci$n y realice la identi%icaci$n de la ce a de Shigella sonnei. ). @btenga - cc de sangre 'enosa de un 'oluntario" se ara el suero y rocesa a !ontar la !icroelisa buscndo anticuer os contra Helicobacter pilori. En todo !o!ento" siga la instrucciones su!inistradas or el 9it. /. Con una a licador est7ril" rocesa a recolectar secreci$n %arngea de alguno de sus co! a4eros y realice una b8s#ueda de antgeno de Streptococcus pyogenes. En todo !o!ento" siga las instrucciones su!inistradas or el 9it.

Laboratorio 4 Deter+inaci(n del grupo sanguneo Introducci(n Este laboratorio retende a! liar en el estudiante las reacciones in!unol$gicas" es ec%ica!ente las reacciones de aglutinaci$n" ade!s del estudio de los gru os sanguneos !s i! ortantes en el ho!bre. ;de!s se resenta el a'ance logrado en la in!unohe!atologa con la introducci$n al !ercado de las tar&etas con gel Materiales + 9it ara la deter!inaci$n del gru o sanguneo + ca&a de orta ob&etos ; licadores Lancetas ;lgod$n ;lcohol de 01=C 3ubos de 'idrio 3ar&etas de gru os sanguneos Mtodo +. 6ara la deter!inaci$n del gru o sanguneo" li! ie la ye!a del dedo anular con un algod$n i! regnado con alcohol ,. <na 'ez seco" e! leando una lanceta est7ril" realice una unci$n -. Aecolecte cuatro gotas de sangre sobre sendo orta ob&etos .. Colo#ue un algod$n seco sobre el sitio de la unci$n ). ;gregue una gota de cada uno de los di%erentes antisueros (;" B" ;B" Ah) /. Con un a licador est7ril" haga una !ezcla ho!og7nea y obser'e or un eriodo no !ayor de + !inuto" or una reacci$n de aglutinaci$n. 0. @btenga sangre 'enosa anticoagulada y usando tubos de 'idrio rotulados co!o ;" B" ;B" Ah" colo#ue una e#ue4a cantidad de sangre en cada uno de ellos y luego agregue una gota de cada uno de los reacti'os. Centri%ugue or -1 segundos y lea la reacci$n. La reacci$n ositi'a se 'er la %or!aci$n de gru!os" en la negati'a no 2. @bser'e reacciones de aglutinaci$n usando geles (tar&etas) de identi%icaci$n de gru os sanguneos (solo de!ostrati'o)

Laboratorio 5 3eacciones de in+uno-luorescencia para bacterias , virus Introducci(n La in!uno%luorescencia es una t7cnica de diagn$stico #ue utiliza rinci ios in!unol$gicos y consiste en unir una sustancia %luorescente (un %luorocro!o co!o aura!ina" ro&o neutro" %luorescena etc)" con una anticuer o de alta es eci%icidad dirigido contra un agente es ec%ico. Es tecnologa se e! lea en el diagn$stico y detecci$n de 'irus #ue causan in%ecciones res iratorias" los cuales son de !uy di%cil aisla!iento. ;de!s" esta t7cnica se utiliza en la detecci$n de antgenos de agentes co!o la Bordetella pertussis" Chlamydia trachomatis" Treponema pallidum y Mycobacteriu! tuberculosis. Material Microsc$ io de ?luorescencia L!inas ositi'as contra Cirus Aes iratorios (CAS" In%luenza" ;deno'irus" 6arain%luenza) L!inas ositi'as contra ycobacterium tuberculosis (aura!ina) L!inas ositi'as contra Treponema pallidum (?3;) Mtodo En este caso" el laboratorio ser de!ostrati'o" sin e!bargo obser'e" en los 'irus res iratorios" la %or!aci$n de sincicios celulares t icos del CAS" en las ruebas de aura!ina" la !or%ologa de los Mycobacteriu!" en los ?3;" la !or%ologa es irilar del los 3re one!as y or 8lti!o en los casos de Ch. trachomatis" los cuer os ele!entales caractersticos de este agente

Laboratorio 6 7o+a de +uestras clnicas Introducci(n El resente laboratorio tiene co!o ob&eto %a!iliarizar al estudiante con una to!a de !uestra" iniciando con la %leboto!a y obteniendo !uestras %arngeas y naso%arngeas. ;de!s" resentar al estudiante los di%erentes tubos #ue se e! lean en los hos itales ara la recolecci$n de !uestras clnicas" lo #ue uede ser un antecesor ara la hora de la llegada a los hos itales. Material ;lcohol" algod$n" torni#uete" agu&as y &eringas ; licadores est7riles y ba&a lenguas 3ubos con ta $n* ro&o" a!arillo" lila" 'erde y de algod$n Mtodo +. ?leboto!a a. Localice el rea a uncionar (se utiliza con !ayor %recuencia el rea del antebrazo) b. Con un algod$n con alcohol" li! ie en %or!a centr%uga" la zona a uncionar c. Colo#ue el torni#uete d. Libere la agu&a e. Introduzca la agu&a y retire lenta!ente el 7!bolo %. ;s ire tres cc de sangre g. Sa#ue la agu&a lenta!ente h. Colo#ue el algod$n sobre el sitio de la unci$n i. 6dale al aciente #ue doble el brazo y #ue er!anezca as or unos !inutos. ,. ?arngeo a. <tilice un ba&a lenguas y ba&e la lengua b. Con el a licador est7ril" to#ue la %aringe del aciente -. >aso%arngeo a. Introduzca un a licador de alginato en una de las %osas nasales" lenta!ente e! 8&elo hasta llegar a la naso%aringe .. 3ubos a. 3a $n ro&o* sin anticoagulante" uede ser est7ril o no y uede estar al 'aco o no. b. 3a $n a!arillo* anticoagulante ;CD y se e! lea en banco de sangre e in!unologa c. 3a $n lila* con ED3; y se utiliza en rocedi!ientos he!atol$gicos d. 3a $n 'erde* con he arina y se e! lea en In!unologa ara estudios de HL;" ;ntigene!ia or CMC" etc. e. 3a $n de algod$n* ara secreciones y no tiene anticoagulante

Laboratorio 8 &ruebas de #usceptibilidad /nti+icrobiana &#/ <na de las acti'idades !s i! ortantes de un laboratorio bacteriol$gico es la deter!inaci$n de la rueba de susce tibilidad y #ue se realiza contra las bacterias aisladas a artir de una !uestra clnica. Esta susce tibilidad Din 'itroE" se uede e(tra olar a Din 'i'oE y sera una gua ara el ersonal !7dico hacia la escogencia certera de un antibi$tico" #ue er!ita la ihibici$n del creci!iento bacteriano en el aciente. La t7cnica a e! lear se conoce co!o Bauer and Firby y se de%ine co!o un !7todo !anual de di%usi$n anti!icrobiana" donde" sobre un !edio de culti'o (;gar Mueller Hinton)" se coloca un in$culo estandarizado de una bacteria y se realiza una distribuci$n con%luente de la bacteria" tratando de #ue en toda la su er%icie del !edio de culti'o" se encuentre la !is!a cantidad de ellas. Luego se colocan discos de antibi$ticos" los cuales absorben l#uido del !edio y el antibi$tico di%unde en %or!a centr%uga. La %or!a de lectura de una 6S; realizada de esta !anera" es or !edio de la !edici$n del halo de inhibici$n roducido en el in$culo bacteriano" donde un zona de inhibici$n se !ide y se co! ara contra estandares internacionales (tablas) y se decide se la ce a es sensible o no. 6or otra arte no obser'ar la %or!aci$n de un halo se inter reta co!o resistencia al antibi$tico e! leado. @tra %or!a de detecci$n de la acci$n de un antibi$tico sobre una bacteria es or !edio de lo #ue se conoce co!o E silon test o EGtest" en el cual" la %or!aci$n de una eli se" concuerda con la Concentraci$n Mni!a Inhibitoria (CIM). @tra %or!a de detecci$n de la resistencia a un antibi$tico es la deter!inaci$n de la rueba de beta lacta!asa" e! leando la ce%alos orina cro!og7nica (ce%inasa) Material Culti'os %rescos en caldo de Staphylococcus aureus (:ra! ositi'o) y Escherichia coli (:ra! negati'o) 6lacas de agar Mueller Hinton (dos or estudiante) Dos tubos de caldo de culti'os est7ril ; licadores est7riles Discos de los siguientes antibi$ticos* :ra! ositi'o* 'anco!icina" o(acilina" se tran :ra! negati'o * genta!icina" a! icilina" nitro%urantona" se tran" ci ro%lo(acina 6inzas Aegla !ili!7trica 6lacas inoculadas con tiras de EGtest Discos de ce%inasa Ae irte de una 6S; lograda con un siste!a auto!atizado Mtodo +. Con un asa est7ril" reco&a un e#ue4o in$culo de la ce a de Escherichia coli y col$#uelo en uno de los tubos de caldo de culti'o est7ril. ,. Haga una buena e!ulsi%icaci$n del in$culo bacteriano. -. Introduzca una a licador est7ril dentro del caldo y eli!ine el e(ceso de l#uido en las aredes del tubo y roceda a rayar en %or!a con%luente una laca de agar Mueller Hinton.

.. <tilizando una inza est7ril" colo#ue los siguientes discos* a! icilina" se tran" ci ro%lo(acina" 'anco!icina y genta!icina. ). Haga lo !is!o con la ce a de Sta hylococcus aureus" ero colo#ue los siguientes antibi$ticos* a! icilina" o(acilina" 'anco!icina" ci ro%lo(acina y se tran /. Colo#ue a!bos latos en la incubadora a -)=C or ,. horas y des u7s de este eriodo de incubaci$n y usando una regla !ili!7trica" roceda a !edir los halos de inhibici$n. 0. Aealice una rueba de beta lacta!asa" ara lo cual colo#ue sobre el disco de ce%inasa una asada de la ce a de Staphylococcus aureus y obser'e el ca!bio de color del disco. 2. @bser'e las lacas inoculadas con las tiras de EGtest y obser'e la %or!aci$n de la eli se y deter!ine la CIM en las ce as su!inistradas. 5. Estudie el re orte de 6S; logrado con un siste!a auto!atizado" en es ecial a la ce a" los antibi$ticos y la sensibilidad o resistencia re ortada ara el agente en estudio

Laboratorio 9 7cnicas de cultivo puro , -en(+enos $e+olticos Introducci(n En el resente laboratorio" el ob&eti'o retende #ue el estudiante desarrollo la destreza necesaria ara se arar di'ersos agentes bacterianos en una !ezcla" or !edio de la t7cnica de rayado se arando colonias. 6or otra arte" a oyando la arte te$rica" estudiar los %en$!enos he!olticos resentados or las bacterias* ga!!a he!$lisis" al%a he!$lisis y beta he!$lisis" ara lo cual se tendrn ce as de Enterococcus faecalis (ga!!a he!$lisis)" Streptococcus pneumoniae (al%a he!$lisis) y Streptococcus pyogenes (beta he!$lisis). 6or otra arte" un i! ortante ob&eti'o es la obser'aci$n de la !or%ologa colonial de algunos agentes bacterianos entre ellos el Haemophilus influen!ae y su %or!a de identi%icaci$n conocida co!o satelitis!o. Material - lacas de agar sangre + laca de agar McCon9ey + laca de agar !anitol sal + tubo con una !ezcla de Escherichia coli y Staphylococcus aureus ;sas est7riles 6lacas de!ostrati'as de Enterococcus faecalis" Streptococcus pneumoniae y Streptococcus pyogenes. 6lacas de agar chocolate con ce as de Haemophilus influen!ae 6lacas de agar sangre con el %en$!eno del satelitis!o Mtodo +. E! leando asas est7riles" raye los ) latos su!inistrados con la !ezcla bacteriana ,. Sigua la instrucciones o%recidas or su instructor -. @bser'e los resultados des u7s de un eriodo de incubaci$n de ,. horas a -)=C .. @bser'e los latos inoculados con las bacterias" ga!!a" al%a y beta he!olticas" note sus di%erencias ). @bser'e la laca de agar chocolate inoculada con la ce as de Haemophilus influen!ae

Laboratorio 10 7inci(n Di-erencial de )ra+ , 7inci(n de /cido 3esistencia Introducci(n La tinci$n de :ra!" er!ite di%erenciar las bacterias" seg8n los constituyentes de la ared celular" en tres grandes gru os* :ra! ositi'o" :ra! 'ariables y :ra! negati'o. La coloraci$n di%erencial de ;cido resistencia o HiehlG>eelsen" es de gran uso en la b8s#ueda e identi%icaci$n de las bacterias de la %a!ilia Mycobacteriaceae" las cuales son ositi'as ara esta tinci$n. Materiales Culti'os %rescos de Escherichia coli y Staphylococcus aureus Aeacti'os ara la tinci$n de :ra! ; licadores est7riles 6orta ob&etos L!inas de!ostrati'as de ycobacterium s . L!inas de!ostrati'as y te4idas con la tinci$n de :ra! de Streptococcus pneumoniae" Streptococcus pyogenes" Enterococcus faecalis" Haemophilus influen!ae" Klebsiella pneumoniae, Campylobacter s . y Bacillus s . Mtodo +. 6re are %rotis sobre orta ob&etos del culti'o de Escherichia coli y Staphylococcus aureus" usando ara tal %in a licadores est7riles. ,. De&e secar. -. Cubra la re araci$n con cristal 'ioleta y d7&ela or ocos segundos y la'e sua'e con agua del tubo .. ;gregue una gotas de Lugol (yodo !s yoduro de otasio) ). La'e con agua del tubo y decolore con alcohol de 5)=" hasta #ue la re araci$n no suelte color /. La'e con agua del tubo y agregue sa%ranina or -1 segundos. 0. La'e con agua del tubo y de&e secar 2. @bser'a con el ob&eti'o de in!ersi$n. 5. @bser'e cada una de las l!inas de!ostrati'as y anote la !or%ologa obser'ada ara cada agente* a. Streptococcus pneumoniae* DC:6 b. Streptococcus pyogenes* C:6 en cadenas c. Enterococcus faecalis* C:6 en cadenas d. Haemophilus influen!ae* B:>6L e. Klebsiella pneumoniae* B:> %. Campylobacter s .*B:> es irilar g. Bacillus s .* B:6 es orulado

Laboratorio 11 Mor-ologa bacteriana :acilos )ra+ 0egativo Introducci(n Durante el resente laboratorio" se retende #ue los estudiantes se %a!iliarecen con la !or%ologa de los agentes bacterianos !s %recuentes en la rctica !7dica. Esto er!itir entender !e&or las clases te$ricas y se har 7n%asis en el creci!iento e(clusi'o en agar chocolate de los agentes %astidiosos. Se har es ecial inca i7 en #ue los estudiantes entiendan la reacci$n en el !edio de 3ri le az8car hierro (3SI) y su i! ortancia ta(on$!ica dentro de los bacilos :ra! negati'o. Materiales 6lacas de agar sangre de los siguientes agentes* Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae, Serratia marcescens, Shigella sonnei, Campylobacter s . y Haemophilus influen!ae. 6laca de agar chocolate inoculado con una ce a de Haemophilus influen!ae 3ubos de 3SI de los siguientes agentes* Salmonella s ." Shigella s ." Escherichia coli" Klebsiella s . y Pseudomonas aeruginosa 3ubos ositi'os y negati'os de urea Mtodo +. @bser'e la !or%ologa colonial de cada uno de los agentes su!inistrados" anotando el color" el olor" el ti o de he!$lisis y cual#uier otra caracterstica #ue %acilite la identi%icaci$n de estos agentes. ,. @bser'e los tubos de 3SI corres ondientes a cada agente y co! are sus reacciones -. @bser'e el color desarrollado or una bacteria urea ositi'o y una urea negati'o .. 6ara la inter retaci$n de estas reacciones escuche las e( licaciones de su instructor

Laboratorio 12 3eacciones bio;u+icas de a,uda en la identi-icaci(n de los +icroorganis+os Introducci(n Las bacterias son !uy leo!$r%icas y cada gru o re#uiere de condiciones es ec%icas ara su identi%icaci$n y es or esto #ue se han desarrollado !7todos #ue er!itan una r ida clasi%icaci$n de los agntes antes !encionados. La o(idasa es de gran ayuda en la di%erenciaci$n de los bacilos :ra! negati'o entre s. La catalasa es una rueba #ue er!ite se arar los cocos :ra! ositi'o en dos grandes gru os" la coagulasa er!ite clasi%icar lo cocos :ra! ositi'o catalasa ositi'o en dos y la rueba de indol es de gran utilidad en la identi%icaci$n de Escherichia coli. 6or otra arte" el e! leo del o tochin er!ite clasi%icar a Streptococcus pneumoniae y la bacitracina a Streptococcus pyogenes. Materiales Aeacti'os de catalasa" o(idasa" coagulasa y discos de o tochin y bacitracina 6lacas de Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Streptococcus pyogenes y Streptococcus pneumoniae. 6a el de %iltro Mtodo +. Aealice una rueba de catalasa" ara lo cual re!ue'a un oco de la colonia y colo#uela sobre un ortaob&eto y agregue una gota del reacti'o. ,. E! lee una ce a de Staphylococcus aureus co!o control ositi'o (burbu&as) y una ce a de Streptococcus pyogenes co!o control negati'o (no burbu&as) -. Aealice una rueba de o(idasa" ara lo cual re!ue'a un oco de la colonia de 6seudo!onas aeruginosa y col$#uela sobre la su er%icie de un disco de o(idasa" la ce a ositi'o 'irar el disco hacia un color azul oscuro .. Aealice una rueba de indol" ara lo cual sobre un edazo de a el de %iltro" colo#ue un oco de la ce a de Escherichia coli y agregue una gota del reacti'o de indol" la roducci$n de un color rosado indicar una rueba ositi'a. ). Aealice una rueba de coagulasa" ara lo cual utilice la ce a de Staphylococcus aureus sobre un ortaob&etos y una gota de un ool de las!a hu!ano /. 6ara la rueba de bacitracina" obser'e la ce a de Streptococcus pyogenes su!inistrada 0. 6ara la rueba de o tochin" obser'e la laca de Streptococcus pneumoniae su!inistrada

Laboratorio 11 Micologa Introducci(n Los agentes !ic$ticos resentan caractersticas !or%ol$gicas y !icrosc$ icas ro ias de cada gru o" or lo #ue su estudio" es de gran 'alor" tanto en los as ectos diagn$sticos de la !icosis co!o en as ectos ta(on$!icos. Materiales Culti'os en agar Saboureud Inclinado de los siguientes agentes* Candida albicans" "spergillus s ." icrosporum s ." #usarium s ." $eotrichum s . y Cryptococcus neoformans. L!inas re aradas en azul de lacto%enol de los agentes anteriores 6orta ob&etos ; licadores 3inta China Mtodo +. @bser'e las caractersticas 'isuales de los agentes entregados ,. En la l!ina de!ostrati'a de Candida albicans" obser'a la %or!aci$n de las blastos oras. -. En la l!ina de!ostrati'a de "spergillus s ." obser'a las estructuras re roducti'as (cabezas as ergilares) .. En las l!inas de!ostrati'as de ycrosporum s . y #usarium s ." se debe obser'an las !acroconidias caractersticas de cada uno de los agentes ). En la l!ina de!ostrati'a de $eotrichum s ." obser'a la %rag!entaci$n del !icelio #ue da origen a las artroconidias /. En un orta ob&etos li! io" colo#ue una e#ue4a asada de la ce a de Cryptococcus neoformans" y agregue una gota de tinta china y obser'e la tinci$n de c sula caracterstico de este agente.

/ne.o 1 Lavado de +anos Cuando debo lavar+e las +anos< +. ;ntes de cada co!ida ,. ;ntes de a!antar al bebe -. Des u7s de ir al sanitario o de ayudar a un ni4o a ir al sanitario .. Des u7s de ca!biarle los a4ales al bebe ). Des u7s de sonarse la nariz o li! iarle la nariz a su hi&o Co+o lavar+e las +anos< +. <tilice agua y &ab$n y recuerde #ue el agua sola no eli!ina los g7r!enes ,. M$&ese las !anos -. En&ab$nese bien y recuerde #ue no es necesario usar un &ab$n antibacteriano .. Aestri7guese las !anos or al !enos -1 segundos. Si usted es cat$lico" rece un 6adre >uestro y si no lo es" cante Cu! lea4os ?eliz or tres 'eces. ). En&uguese las !anos" al !enos" durante +1 segundos o rece un ;'e Mara /. S7#uese las !anos con una toalla li! ia ya sea de tela o 6a e 0. Eli!ine el a el en un basurero y la'e la toalla de tela de %or!a con'eniente y rutinaria