De los genes a la ingeniera gentica

Cuando los cientficos comprendieron la estructura de los genes y cmo la informacin que portaban se traduca en funciones o caractersticas, comenzaron a buscar la forma de aislarlos, analizarlos, modificarlos y hasta de transferirlos de un organismo a otro para conferirle una nueva caracterstica. Justamente, de eso se trata la ingeniera gentica, que se podra definir como unconjunto de metodologas que permite transferir genes de un organismo a otro y expresarlos (producir las protenas para las cuales estos genes codifican) en organismos diferentes al de origen. El ADN que combina fragmentos de organismos diferentes se denomina ADN recombinante. En consecuencia, las tcnicas que emplea la ingeniera gentica se denominan tcnicas de ADN recombinante. As, es posible no slo obtener protenas recombinantes de inters sino tambin mejorar cultivos y animales. Los organismos que reciben un gen que les aporta una nueva caracterstica se denominan organismos genticamente modificados (OGM) o transgnicos. A su vez, la ingeniera gentica es lo que caracteriza a la biotecnologa moderna que implementa estas tcnicas en la produccin de bienes y servicios tiles para el ser humano, el ambiente y la industria (ver Cuaderno N1) Etapas para la obtencin de un organismo transgnico La siguiente tabla resume los pasos bsicos de la ingeniera gentica empleados para transformar un organismo, y se ejemplifica con un caso concreto: Metodologa Caso: obtencin de maz Bt que produce una protena recombinante que le confiere resistencia a determinados insectos 1.Identificar un carcter deseable 1. Identificar el carcter en el organismo de origen resistencia a insectos en el organismo de origen, la bacteria del suelo Bacillusthuringiensis (Bt) 2.Encontrar el gen responsable 2. Encontrar al gen que lleva las del carcter deseado (gen de instrucciones para esta inters), aislarlo y caracterizarlo. caracterstica, aislarlo y caracterizarlo. 3.Combinar dicho gen con otros 3. Combinar este gen con otros elementos necesarios (vector) elementos genticos para que sea para que ste sea funcional en el funcional en una planta: organismo receptor especialmente una secuencia promotora (y ligarlo a un vector adecuado para transformar plantas) 4.Transferir el gen de inters, 4. Transferir este gen a clulas de previamente introducido en el maz (organismo receptor). vector adecuado, al organismo receptor. 5. Crecer y reproducir el 5. Identificar las clulas de maz que organismo receptor, ahora recibieron el gen (clulas modificado genticamente. transformadas) y regenerar, a partir de estas clulas, una planta adulta resistente a insectos. Tcnicas de Ingeniera Gentica o del ADN Recombinante La obtencin de un organismo transgnico mediante tcnicas de ingeniera gentica implica la participacin de un organismo que dona el gen de inters y un organismo receptor del gen que expresar la nueva caracterstica deseada. Por ejemplo, para el caso particular de la produccin de una variedad de maz que resista el ataque de insectos, el organismo dador es la bacteria del suelo denominada Bacillus thuringiensis (Bt) de la cual se extrae el gen que determina la sntesis de la protena insecticida, y el organismo receptor del gen es la planta de maz. Las etapas y tcnicas involucradas en este proceso seran: 1.Corroborar que existe un gen que codifica para la caracterstica de inters. Cuando se encuentra una caracterstica en un organismo que resulta interesante para transferir a otro organismo debe verificarse que es producto de un gen. Se identifica el gen de inters por medio de cruzamientos a partir de una caracterstica que se expresa, y se verifican las proporciones mendelianas (ver Cuadernos 40 y 41). Si la caracterstica se atribuye a una protena, que es producto directo de un gen, ser ms sencillo transferir esa caracterstica a un organismo que no la tiene. 2.Clonar el gen de inters. Clonar un gen significa tenerlo puro en el tubo de ensayos, o mejor an, dentro de un vector (una molcula mayor de ADN que permite guardar fragmentos de ADN en forma estable y prctica por ms tiempo). La tarea de clonar un gen involucra varias tcnicas (ver Cuaderno N 67): i) Extraccin de ADN; ii) Bsqueda de un gen entre la mezcla de genes del ADN; iii) Secuenciacin; iv) Construccin del vector recombinante. El ADN de inters se inserta en plsmidos-vectores que son molculas de ADN lineales o circulares en las cuales se puede guardar(clonar) un fragmento de ADN. Los ms usados son los

plsmidos de origen bacteriano. Los plsmidos pueden extraerse de las bacterias e incorporarse a otras, a travs del proceso de transformacin. Los plsmidos fueron modificados por los investigadores para ser empleados como vectores (vehculos). As, el gen de inters puede insertarse en el plsmido-vector e incorporarse a una nueva clula. El desarrollo de estas tcnicas fue posible en gran medida por el descubrimiento de las enzimas de restriccin (ver Cuaderno N 34 y 49). Las enzimas de restriccin reconocen secuencias determinadas en el ADN. De esta manera, conociendo la secuencia de un fragmento de ADN, es posible aislarlo del genoma original para insertarlo en otra molcula de ADN. Hay muchas enzimas de restriccin obtenidas a partir de bacterias y que sirven como herramientas para la ingeniera gentica.

Las enzimas de restriccin reconocen secuencias de 4, 6 o ms bases y cortan generando extremos romos o extremos cohesivos. Estos extremos, generados en diferentes molculas de ADN, pueden sellarse con la enzima ADN ligasa y generar as una molcula de ADN nueva, denominada recombinante. Para tener gran cantidad y fcil disponibilidad del ADN de inters, el vector se inserta dentro de bacterias (E. coli), las cuales crecen fcil y rpidamente. O sea, la bacteria se utiliza como multiplicadora del vector, y por ende del inserto de inters. Esta es una etapa de amplificacin del ADN para poder tener gran cantidad para secuenciarlo, caracterizarlo, y luego poder hacer con l ADN recombinante. En placas de Petri se cultivan las bacterias. Se originan colonias de bacterias iguales (clones). Las bacterias transformadas, que incorporaron el plsmido y el gen de inters, se seleccionan por medio de antibiticos y por reacciones con indicadores de color. 3.Caracterizar el gen de inters. A partir de conocer la secuencia del gen se puede, mediante bioinformtica, comparar esta secuencia con las de genes ya conocidos para determinar a qu gen se parece, y se le asigna una posible funcin. Una vez predicha la funcin del gen clonado por medio de anlisis informtico, se debe proceder a confirmar la funcin real in vivo, o sea corroborar que en un sistema biolgico funciona acorde a lo que se prev. Para ello se suele transferir el gen a un organismo modelo, en el cual se pueda expresar el gen y medir su funcin. En el ejemplo del maz, el gen Bt se puede transferir primero a las especies modelo Arabidopsis thaliana y Nicotiana tabacum (ver Cuaderno N 50). 4.Modificar el gen de inters. Si as se desea se puede agregar, deletar o mutar secuencias dentro de la regin codificante, y agregar secuencias (promotor, terminador, intrones) para que se pueda expresar en el sistema de inters. Por ejemplo: si se clona un gen Bt de una bacteria para luego ponerlo en maz, se debe agregar un promotor que funcione bien en plantas, es decir, que permita que las clulas vegetales expresen la protena Bt. El promotor es una regin fundamental del gen ya que determina cundo y dnde se expresar el gen.

EPGRAFE: Inserto preparado para ser transferido. Fuente: http://www.agronort.com/informacion/ abcbiotec/abcbio6.html 5. Transformacin de un organismo con el gen de inters. Una vez hecha la construccin gentica con el gen y promotor deseado, se elige el mtodo de transformacin ms indicado para el organismo que se desea hacer transgnico (para plantas ver Cuadernos N 18 y 28, para animales ver Cuaderno N 47). 6. Caracterizacin del OGM. Una vez obtenido el OGM, se lo analiza desde el punto de vista molecular y biolgico. Para el anlisis molecular se debe demostrar, entre otras cosas, si tiene una (o ms) copias del transgn, y cmo y en qu tejidos se expresa el gen. Para analizar en qu tejido, momento y cantidad se expresa el gen se analiza la presencia del ARN mensajero y de la protena recombinante codificados por el transgn (ver Cuaderno N 49 y N67). Para la caracterizacin biolgica, el OGM se analiza desde el punto de vista del objetivo (en este ejemplo, si el maz resulta efectivamente resistente a los insectos) y desde el punto de vista que sea necesario acorde al OGM en cuestin. Si ser utilizado como alimento y se lo cultivar a campo, entonces se deber hacer el anlisis de riesgo alimentario y ambiental (ver Cuadernos 62 y 60, respectivamente). Hasta el momento se ha utilizado la ingeniera gentica para producir, entre otras aplicaciones: Vacunas, por ejemplo contra la hepatitis B Frmacos, como la insulina y la hormona del crecimiento humano, tanto en clulas transformadas y crecidas in vitro como en bacterias recombinantes y animales transgnicos Enzimas para disolver manchas, como las que se usan en los detergentes en polvo, mayormente por medio de microorganismos recombinantes (transgnicos) que crecen en biorreactores. Enzimas para la industria alimenticia, como las empleadas en la elaboracin del queso y en la obtencin de jugos de fruta, entre otras. Plantas resistentes a enfermedades, entre otras caractersticas.