I.

INTRODUCCIN

Las enterobacterias, como su nombre lo indica, son un grupo de bacterias Gram negativas. Entre los principales gneros tenemos a Escherichia sp., Shigella sp., Salmonella sp., Proteus sp., Enterobacter sp., Citrobacter sp., Klebsiella sp., Yersinia sp. y Serratia sp.

Por lo general, la mayora de bacterias entricas son microorganismos patgenos tanto para animales, el ser humano y plantas. Es por ello que el estudio detallado y el aislamiento de cada uno de los gneros de esta familia son de vital importancia para el rea de la medicina. Existen tambin enterobacterias con importancia industrial, de las cuales podemos destacar a la bacteria ms estudiada y utilizada en muchos de los procesos: Escherichia coli.

Dada la necesidad de identificar rpidamente a los distintos gneros de esta familia de bacterias, sobre todo por su patogenicidad, es necesario recurrir a las diferencias en el metabolismo de las bacterias. Para ello, se cuentan con pruebas bioqumicas que nos permiten identificar, sin dejar lugar a dudas, el gnero de bacteria entrica con el cual uno se enfrenta. En la actualidad incluso existen kits de identificacin rpida para llevar a cabo este proceso. Las pruebas bioqumicas, generalmente determinan la actividad de una va metablica, partir de un sustrato que se incorpora en el medio de cultivo y que la bacteria al desarrollarse, la modifica o no.

En el presente informe se muestran los resultados de las pruebas que realizamos a una Enterobacteria para lograr identificarlo. Estas pruebas fueron la de la capacidad de utilizar citrato, la capacidad de descarboxilar lisina, la capacidad de fermentar lactato, la capacidad de producir H2S, la capacidad de producir CO2 y fermentar glucosa, la capacidad de degradar triptfano, la capacidad de degradar urea y la capacidad de reducir nitratos.

II.

MARCO TERICO

III.

PARTE EXPERIMENTAL

IV.

OBSERVACIONES Y RESULTADOS
Luego de incubar la muestra nmero de Enterobacteria 04 por 24 horas a una temperatura de 37C se observaron los cultivos en diferentes medios.

A. DEGRADACIN DE CARBOHIDRATOS A.1. Agar klingler Se observ el pico de flauta de color rojo y la profundidad color ligeramente negro.

Figura 1. Resultado de la Enterobacteria nmero 04 en agar klingler luego de incubar por 24 horas a 37C.

A.2.Agar citrato de Simmons No se observ cambio de color, pero si crecimiento de color amarillo.

Figura 2. Resultado de la Enterobacteria nmero 04 luego de incubar en agar citrato de Simmons por 24horas a 37C. B. DEGRADACIN DE AMINOCIDOS

B.1. Caldo Indol (degradacin de triptfano) Se observ un anillo color rojo fucsia luego de agregar el reactivo de Kovacs.

Figura 3. Resultado de la Enterobacteria nmero 04 en Caldo Indol luego de incubar por 24 horas a 37C y luego de agregar el reactivo de Kovacs al tubo de ensayo.

B.2. Agar lisina (descarboxilacin de lisina)

Si se observa cambio de color de amarillo a purpura

Figura 4. Resultado de la Enterobacteria nmero 04 en agar lisina luego de incubar por 24 horas a 37C. C. DEGRADACIN DE UREA

Se observ un cambio de amarillo (color inicial) a color grosella.

Figura 5. Resultado de la Enterobacteria nmero 04 en agar Urea luego de incubar por 24 horas a 37C.

D. CALDO NITRATO No se observ cambio cuando se le agreg el zinc, luego de aproximadamente 24 horas de incubacin.

Figura 6. Resultado de la Enterobacteria nmero 04 en caldo nitrato luego de incubar por 24 horas a 37C.

E. AGAR MOVILIDAD No se observ que la Enterobacteria se desplazara por el tubo de ensayo, solo se observ un crecimiento en el punto inicial de siembra.

Figura 7. Resultado de la Enterobacteria nmero 04 en agar Urea luego de incubar por 24 horas a 37C.

microorganismo: muestra numero 04 glucosa lactosa H2S gas Asimilacin de citrato Descarboxilacin de lisina Degradacin de triptfano Degradacin de la urea
color )

+ + +
+ (creo que cambio de

Reduccin del nitrato Movilidad

+ -

Cuadro 1. Resultados de las reacciones de la muestra de Enterobacteria nmero 04.

V.

DISCUSIONES
Segn los resultados obtenidos en la prueba de identificacin bioqumica de Enterobacterias, se hacen los siguientes anlisis para cada una:

A. Degradacin de Carbohidratos a.1) Agar de Kligler. Koneman (2006) nos dice que si no se presenta fermentacin de hidratos de carbono tanto el pico de flauta como la profundidad sern alcalinas, y que es caracterstico de bacterias no fermentadoras como Pseudomonas aeruginosa De igual manera, dice que si el pico es alcalino (color rojo) y la profundidad cida (color amarillo), se tratar de bacterias que slo fermentan la glucosa tales como algunas especies de Shigella.

Si el pico de flauta es alcalino (color rojo) y la profundidad cida pero negra, se tratar de bacterias que fermentan glucosa, no fermentan lactosa y producen sulfuro de hidrgeno. Caracterstico de bacterias como algunas especies de Salmonella, de Citrobacter y de Proteus. El ltimo caso sera si tanto el pico de flauta como la profundidad fueran cida-cida (todo vir color amarillo), con esto se puede afirmar que la bacteria ferment glucosa y lactosa, lo cual es

caracterstico de coliformes como Escherichia coli y las especies del complejo Klebsiella-Enterobacter.

Fermentacin de glucosa: Se determina observando el fondo del agar. De igual manera a Koneman, Prats (2005) nos dice que una reaccin positiva ser cuando el fondo presente un color amarillo, lo que se da debido a la acidificacin del medio. Tambin dice que si el fondo es de color rojo, la fermentacin ser considerada como negativa. En los resultados de la figura N tenemos que nuestra muestra de enterobacteria presenta un ligero fondo negro, por lo que no se puede apreciar todo el fondo. Sin embargo, a los alrededores se ve un color entre rojo y amarillo, lo que no permitira definir si es glucosa (+) o glucosa (-). Otra opcin sera aceptar la tercera alternativa expuesta por Koneman, que dice tener pico de flauta alcalino, profundidad cida y produccin de H2S; lo que nos llevara a pensar que nuestra bacteria es posiblemente una Salmonella, Citrobacter o Proteus. Las que seran de glucosa (+), lactosa (-) y H2S (+). Pero para esto se debe continuar con los anlisis.

Fermentacin de lactosa: Esta se determina observando la pendiente o pico de flauta del tubo. Prats afirma que una pendiente amarilla significa que la lactosa ferment, y una pendiente roja sera que no ferment. En nuestros resultados se observa un color rojizo en la parte superior, por lo que afirmaremos que es Lactosa (-). Es no fermentadora, no coliforme.

Produccin de H2S: debido al ennegrecimiento del medio, e la parte del fondo como dbilmente a lo largo de la picadura, se puede decir que la bacteria es una H2S (+). Algunos ejemplos de estos que nos da Koneman son de los gneros: Edwardsiella, Salmonella, Citrobacter, Proteus. Agregar algo del marco terico, cuando lo tenga -.-

Fermentacin de gas: Segn Prats, si el medio presenta formacin de burbujas o desprendimiento del agar de las paredes del tubo, se considerar que hubo produccin de gas. En los resultados se aprecia la ausencia tanto de las burbujas como del desprendimiento de agar, entonces la bacterias tambin es Gas (-). Quizs, tambin agregue algo del marco terico e indicar las figuras.

a.2) Agar Citrato de Simmons

Asimilacin de citrato: Segn Prats, si el microorganismo crece y alcaliniza el medio, se observar que el color vira de verde a azul; con esto se dir que es Citrato (+). De lo contrario, si no se observa crecimiento y el medio permanece verde, se tratar de una bacteria Citrato (-). En los resultados se aprecia la permanencia del color verde, y tambin la ausencia de crecimiento de microorganismos en ella. Con esto, se puede afirmar que nuestra bacteria es una Citrato (-) y que no usa citrato como fuente de carbono. Algunos ejemplos de estos Citrato (-), mencionados por Granados y col (1997) son Escherichia coli, Shigella sp y Edwardsiella sp. Mencionar el nmero de la figura del resultado

B. Degradacin de aminocidos

b.1) Caldo Indol

Degradacin del triptfano: bla blabl Tras aadir el reactivo de kovacs, se dio lugar a una coloracin roja. Se sabe que es un resultado positivo cuando se da el reactivo color rojo cereza, y ser negativo si el reactivo permanece amarillo. Entonces, la bacteria ser Indol (+). Agregar algo del marco terico. Ejemplos de bacterias Indol (+)

b.2) Agar lisina

Descarboxilacin de la lisina: bla blabl La presencia de una base y pendiente violeta indicar que se dio la produccin de lisina descarboxilasa. Adems, la formacin de un precipitado negro (fundamentalmente en la base) ser evidencia de produccin de H2S (Prats). En la figura N se observa la predominancia del color amarillo a lo largo del tubo, por lo que la bacteria se considera como una lisina descarboxilasa (-).

C. Degradacin urea Inicialmente se tuvo un color no adecuado para la muestra, ya que se supone debi ser amarilla, pero se trabaj con un caldo urea color prpura. Debido a esta variabilidad, se dio un da ms a la incubacin de la muestras. Si presentara el color rosado grosella, se dir que es Ureasa (`+). Segn lo observado, el color permaneca constante. Falta averiguar cmo qued al final, en el segundo da. Segn eso se definir si es (+) o (-)

D. Caldo nitrato Entre los resultados se tiene que un color rosado grosella indicar que es nitrato reductasa (+), mientas que si permanece de color amarillo, se hablar de un nitrato reductasa (-). Al momento de sacar las muestras para la identificacin se apreci que el caldo segua amarillo, por lo que se descartar que sea totalmente una reaccin negativa, debido a que no form el color rojo-grosella al agregar el Zn. Agregar del marco terico, y como el profe dijo que todas eran (+), entonces se tendr eso como resultado a pesar de que no lo llegamos a ver :S, o ya veremos que nos dice la tcnica.

E. Agar movilidad Prats nos menciona que la movilidad se pone en manifiesto por el crecimiento de la bacteria (enturbiamiento) desde la picadura donde se sembr a travs de todo el agar blando. De igual manera, nos dice que se tratar de una movilidad (+) si el crecimiento es por todo el agar blando, y ser movilidad (-) si el crecimiento es slo en la picadura de la inoculacin. En las figura N, se observa que el cultivo no enturbia el medio, y que adems slo crece en la picadura; con esto y lo acordado por Prats, se identifica a la bacteria como una con movilidad (-). Falta revisar con la tcnica si realmente no tuvo movilidad!

Entao, falta buscar una tabla (que ir en el marco) de la identificacin de Enterobacterias y concluir cual es nuestra muestra a partir de los datos obtenidos:

Glucosa, tentativamente (+) pero el color negro no deja apreciar la formacin del amarillo por lo que tambin podra ser glucosa (-) Lactosa (-), es la que slo se mira en la pendiente Citrato (-) H2S (+) pero dbilmente Indol (+)

Lisina descarboxilasa (-) Ureasa, lo ms probable que haya sido (-) Nitrato reductasa (+), porque el profe dijo eso para todas XD Movilidad (-), porque no hubo enturbiamiento ni desplazamiento!

VI.

CONCLUSIONES
Segn los datos obtenidos y la tabla de identificacin, se presume que la muestra de la bacteria, rotulada como nmero 4, es una ta tatatn . Shigella o Salmonella jaja XD Algunos errores de los resultados, que no permitieron definir completamente la bacteria seran aquellos errores aleatorios o sistemticos hechos por el personal.

VII.

CUESTIONARIO

VIII.

BIBLIOGRAFA KONEMAN. 2006 PRATS. 2005 GRANADOS P., R y Carmen V. P. 1997. Microbiologa, Volumen 1. 1ra edicin. Editorial THOMSON. Madrid, Espaa.

*ORGANIZACIN DE ACTIVIDADES ( no estudiar a deshoras )

*ESTUDIAR LA MATERIA DIA DIA *IR A CLASES *