Raquel de los A.

Junco Daz
Carlos M. Rodrguez Prez
INTRODUCCIN
La gentica es la ciencia que define y analiza la herencia o la constancia y cambio de las
funciones fisiolgicas que constituyen las propiedades de los organismos. La unidad de la
herencia es el gen, segmento de ADN que contiene en su secuencia de nucletidos, informa-
cin para una propiedad bioqumica o fisiolgica especfica. Las dos funciones esenciales
del material gentico son la replicacin y la expresin. El material gentico debe replicarse de
una forma perfecta, de manera que la progenie herede todos los determinantes genticos
especficos (el genotipo) de los progenitores. La expresin del material gentico especfico
bajo un conjunto particular de condiciones de crecimiento determina las caractersticas
observables (fenotipo) del organismo. El fenotipo est constituido por las propiedades
estructurales y fisiolgicas colectivas de una clula o de un organismo. La base qumica para
la variacin en el fenotipo es un cambio en el genotipo, o una alteracin en la secuencia del
ADN dentro de un gen, o en la organizacin de los genes.
La gentica microbiana tradicional se apoya, en gran parte, en la observacin del creci-
miento microbiano. Las bacterias tienen pocos rasgos estructurales o de desarrollo que
puedan ser observados fcilmente, pero poseen una vasta disposicin de capacidades
bioqumicas y patrones de susceptibilidad a los agentes antimicrobianos o a los bacterifagos.
La variacin fenotpica se ha estudiado basada en la capacidad de un gen para permitir
la proliferacin en condiciones de seleccin; por ejemplo, una bacteria que contiene un gen
que le confiere resistencia a la ampicilina, puede distinguirse de una bacteria que carece del
gen, por su crecimiento en presencia del antibitico, el cual sirve como agente de seleccin.
Ntese que la seleccin del gen requiere su expresin, la cual, en condiciones apropiadas,
puede ser observada a nivel de fenotipo.
La gentica microbiana ha descubierto que los genes estn constituidos por ADN,
observacin en la que descansa la biologa molecular. Investigaciones subsecuentes sobre
las bacterias, revelaron la presencia de enzimas de restriccin que rompen el ADN en sitios
especficos, dando origen a fragmentos de restriccin de ADN. Se han identificado plsmidos
como elementos genticos pequeos con capacidad de replicacin independiente en bacte-
rias y en levaduras.
Gentica microbiana
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ORGANIZACIN DEL GENOMA
El cromosoma bacteriano es una molcula circular de ADN que funciona como un
elemento gentico autorreplicable (replicn). En algunas cepas de Escherichia coli, el
cromosoma es solamente el replicn presente en la clula. Otras cepas bacterianas tienen
replicones adicionales, tales como plsmidos y bacterifagos, los cuales a menudo determi-
nan resistencia a agentes antimicrobianos, produccin de factores de virulencia u otras
funciones. El cromosoma se replica semiconservativamente; cada banda de ADN sirve como
molde para la sntesis de su banda complementaria.
ESTRUCTURA DEL CIDO NUCLEICO
Los cidos nucleicos son grandes polmeros constituidos por unidades nucletidas
que se repiten. Cada nucletido contiene un grupo fosfato, un azcar que puede ser pentosa
o desoxipentosa y un par de bases pricas o pirimidnicas. La informacin gentica se
almacena como una secuencia de bases en el cido desoxirribonucleico (ADN). En la mayo-
ra de los organismos, la informacin gentica est codificada en el ADN, pero en algunos
virus se encuentra en el ARN. Los virus bacterianos (bacterifagos o fagos) tienen como
material gentico ADN o ARN.
El ADN (Fig. 8.1) contiene el azcar D-2-desoxirribosa, las bases pricas son adenina
(A) y guanina (G), y las bases pirimidnicas son timina (T) y citosina (C). La mayor parte de las
molculas de ADN son de doble tira, helicoidales y las dos bandas en la hlice son
antiparalelas y complementarias. La doble hlice est estabilizada por puentes de hidrgeno,
en el centro de la molcula, entre las bases pricas y pirimidnicas sobre la banda complemen-
taria. En cada posicin, el par de bases A por dos enlaces de hidrgeno con T (A = T) en la
banda complementaria o los pares G por tres enlaces de hidrgeno con C(G C). Debido a su
complementaridad, la doble cadena de ADN contiene cantidades equimolares de purinas
(A + G) y pirimidinas (T + C), con igual cantidad de A y T, y G igual que C, pero la fraccin
molar de G + C en el ADN vara ampliamente entre los diferentes microorganismos. La
extensin de la secuencia homloga entre los ADN de diversos microorganismos es el
criterio ms exacto para determinar cmo ellos estn estrechamente relacionados.
El ARN se encuentra con ms frecuencia en forma de una tira sencilla. El azcar que
posee es la D-ribosa y la base uracilo (U) remplaza a la timina del ADN. La forma global de las
molculas de tira sencilla del ARN, se define por hibridizacin entre secuencias de bases que
forman asas o lazos, de manera que las tiras sencillas de ARN asumen una estructura com-
pacta, capaz de expresar la informacin gentica contenida en el ADN. La actividad ms
general del ARN es comunicar la secuencia de genes del ADN, en la forma de ARN mensa-
jero (ARNm), a los ribosomas. Dentro de los ribosomas, que contienen ARN ribosmico
(ARNr), los mensajes son traducidos con ayuda del ARN de transferencia (ARNt), en se-
cuencias de aminocidos que constituyen las protenas.
GENOMA EUCARITICO
En el genoma se encuentra la totalidad de la informacin gentica de un organismo. Casi
todo el genoma eucaritico est contenido en dos cromosomas lineales, separados del
citoplasma por la membrana nuclear.
En las clulas eucariticas diploides, con frecuencia no pueden detectarse mutaciones
o cambios genticos, debido a que la contribucin de una copia gentica compensa los
cambios en la funcin de su homloga. Un gen que no logra la expresin fenotpica en
presencia de su homlogo, es recesivo; en tanto que un gen que supera el efecto de su
homlogo es dominante. Los efectos de las mutaciones pueden discernirse con facilidad en
las clulas haploides, las cuales portan una copia simple de la mayor parte de los genes. Las
clulas de levaduras suelen usarse en investigaciones, ya que pueden conservarse y anali-
zarse en el estado haploide.
Las clulas eucariticas contienen mitocondrias y, en algunos casos, cloroplastos, en
cuyo interior hay una molcula circular de ADN constituida por unos cuantos genes, cuya
T = A
T = A
T = A
A = T
A = T
A = T
A = T
A = T
3
3
5
5
G C
=
=
C G
=
=
C G
=
=
C G
=
=
C G
=
=
G C
=
=
Fig. 8.1. Estructura de doble hlice del
ADN.
Gentica microbiana Gentica microbiana Gentica microbiana Gentica microbiana Gentica microbiana
57 57 57 57 57
funcin se relaciona con esos organelos en particular. No obstante, la mayor parte de los
genes necesarios para la actividad de estos organelos se encuentra en los cromosomas
eucariticos.
Muchas levaduras contienen un elemento gentico adicional que se replica de manera
independiente. Esos crculos pequeos de ADN, llamados plsmidos, se hallan frecuente-
mente en los procariotes.
A diferencia del ADN procaritico, el ADN eucaritico posee grandes cantidades de
material repetido que no codifica funcin alguna.
GENOMA PROCARITICO
El genoma bacteriano vara en tamao, algunos de los ms pequeos pertenecen a
parsitos obligados (Mycoplasma) y los ms grandes, a bacterias capaces de una diferencia-
cin compleja, tal como Mixococcus.
En los procariotes no hay membranas que separen los genes del citoplasma como ocurre
en los eucariotes y la mayor parte de los genes se encuentran en el cromosoma bacteriano.
Con pocas excepciones, los genes bacterianos son haploides y presentan un cromosoma
nico constituido por una molcula circular de ADN de doble cadena. Sin embargo, han sido
hallados cromosomas lineales en bacterias grampositivas como Borrelia y Streptomyces
sp., y un cromosoma lineal y otro circular est presente en la bacteria gramnegativa
Agrobacterium tumefaciens.
El cromosoma de E. coli tiene un largo aproximado de 1,35 mm, cientos de veces ms
largo que la clula bacteriana, pero el ADN est apretadamente empaquetado en el nucleoide
bacteriano. El tiempo requerido para la replicacin del cromosoma entero es cercano a los 40
minutos, lo cual es aproximadamente el doble del tiempo ms corto de divisin para esta
bacteria. La replicacin del ADN tiene que ser iniciada tan frecuente como la clula se divide;
as, en bacterias que crecen rpido un nuevo ciclo de replicacin cromosmica comienza
antes de que el ciclo anterior se haya completado. A este ritmo rpido de crecimiento pueden
haber cuatro cromosomas replicndose para formar ocho en el momento de la divisin celu-
lar, lo cual est acoplado con el completamiento de un ciclo de replicacin cromosmica. De
esta forma, el cromosoma de las bacterias que crecen rpidamente se replica en ms de un
punto. La replicacin del ADN cromosmico en las bacterias es complejo e involucra muchas
protenas diferentes.
Muchas bacterias contienen genes adicionales en los plsmidos. Los crculos de ADN
(cromosoma y plsmidos), que contienen informacin gentica necesaria para su propia
replicacin, se denominan replicones.
Los genes esenciales para la proliferacin bacteriana estn contenidos en el cromosoma,
y los plsmidos portan genes relacionados con funciones especializadas, por ejemplo, la
resistencia a antibiticos transmitidas por los plsmidos.
Los transposones son elementos genticos que contienen la informacin necesaria
para su emigracin de un locus gentico a otro. Los transposones simples slo contienen
informacin gentica para insertacin y los transposones complejos poseen genes para
funciones especializadas, como la resistencia a los antibiticos, y estn flanqueados por
secuencias para insercin. Al contrario de los plsmidos, los transposones no contienen la
informacin gentica necesaria para su propia replicacin. La seleccin de transposones
depende de su replicacin como parte de un replicn. La identificacin o la exploracin
gentica de los transposones se logra por seleccin de la informacin gentica especializada
(normalmente, resistencia a un antibitico) que ellos poseen.
GENOMA VIRAL
Los virus son parsitos obligados intracelulares capaces de sobrevivir, pero no de
proliferar, en ausencia de una clula husped. La replicacin del genoma viral depende de la
energa metablica y de la maquinaria sintetizadora de macromolculas del hospedero. Con
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frecuencia esta modalidad de parasitismo gentico causa debilitamiento o muerte de la clula
hospedera. Por tanto, la propagacin con xito del virus requiere:
1. Una forma estable que le permita sobrevivir en ausencia de su hospedero.
2. Un mecanismo para invadir las clulas.
3. La informacin gentica necesaria para la replicacin de componentes virales dentro de la
clula.
4. La informacin adicional para el ensamblaje de los componentes virales y la liberacin de
los virus formados, al exterior celular.
Por lo comn, se hacen distinciones entre los virus relacionados con los eucariotes y
aquellos que infectan a los procariotes; estos ltimos virus se denominan bacterifagos.
La molcula del cido nucleico del bacterifago est rodeada por una cubierta de prote-
nas. El cido nucleico del fago muestra una variabilidad considerable. Muchos de los fagos
contienen ADN de doble tira, otros ARN de tira sencilla y algunos ms poseen ADN de tira
sencilla. Muchos fagos contienen estructuras especializadas tipo jeringuilla, que se adhie-
ren a receptores de la superficie celular e inyectan el cido nucleico del fago a la clula
hospedera (Fig. 8.2).
REPLICACIN DEL ADN
Durante la replicacin cada banda helicoidal del ADN sirve como un molde para la
sntesis de una nueva banda complementaria. Cada molcula de doble cadena de ADN hija
contiene una banda de polinucletido vieja y una banda nueva sintetizada. Este tipo de
replicacin del ADN se denomina semiconservativo.
ADN EUCARITICO
La replicacin del ADN en los eucariotes comienza en varios puntos de crecimiento a lo
largo del cromosoma lineal. La replicacin exacta de los extremos del cromosoma lineal,
requiere actividades enzimticas diferentes de las funciones normales relacionadas con la
replicacin del ADN. Los eucariotes han desarrollado una maquinaria especializada, conoci-
da como huso, que atrae a los cromosomas hijos para formar ncleos nuevos, separados por
el proceso de mitosis. Una divisin ms extensa de los ncleos por meiosis, divide en dos el
nmero cromosmico de las clulas diploides para formar clulas haploides. La agregacin
apropiada de cromosomas durante las divisiones reductivas de la meiosis es un factor impor-
tante en el mantenimiento de la estructura cromosmica dentro de una especie. Con frecuen-
cia, las clulas haploides son gametos. La formacin de gametos seguida por su fusin para
formar cigotos diploides, es el origen primario de la variabilidad gentica por recombinacin
en los eucariotes.
Ca b eza ( ci d o n ucl ei co
en el i n te ri o r)
Ce n tr o h uec o
Vai n a
P la ca de l a ba s e
M emb ra n a va c a
Vai n a
(Co n tra d a )
F ibr as
d e l a co l a
(e x te nd i d a)
FAGO T 2
Fig. 8.2. Diagramas del fago T2 basa-
dos en observaciones de microfoto-
grafa electrnica.
Gentica microbiana Gentica microbiana Gentica microbiana Gentica microbiana Gentica microbiana
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ADN BACTERIANO
La replicacin del ADN cromosmico en las bacterias comienza en un sitio especfico
del cromosoma llamado locus ori, una regin del ADN que se plantea est unida a la membra-
na celular y procede bidireccionalmente desde el punto de origen hasta que el proceso se
completa. Cuando la bacteria se divide por fisin binaria despus de completada la replicacin
del ADN, los cromosomas replicados se dividen en cada una de las clulas hijas. Esas
caractersticas de la replicacin del ADN durante el crecimiento bacteriano cumple los reque-
rimientos del material gentico para ser reproducido perfectamente y ser heredado por cada
clula hija en el momento de la divisin celular.
TRANSPOSONES
Son segmentos de ADN que pueden moverse de un sitio a otro en una molcula de ADN
o a una molcula diferente de ADN. El proceso se denomina transposicin y ocurre por un
mecanismo que es independiente de la recombinacin generalizada. Los transposones son
elementos genticos importantes ya que ellos causan mutaciones, mediadas por
reordenamiento genmico, las cuales funcionan como regiones porttiles de homologa
gentica y adquieren nuevos genes, as como contribuyen a su diseminacin en las pobla-
ciones bacterianas. La insercin de un transposn a menudo interrumpe la secuencia lineal
de un gen y lo inactiva. Los transposones desempean su mayor rol causando supresiones,
duplicaciones e inversiones de segmentos de ADN, as como fusiones entre los replicones.
Los transposones no son elementos genticos autorreplicables; sin embargo, deben inte-
grarse en otro replicn para mantener la estabilidad en los genomas bacterianos.
La mayora de los transposones comparten un nmero de rasgos comunes. Cada
transposn codifica las funciones necesarias para su transposicin, incluyendo la enzima
transposasa que interacta con secuencias especficas al final del transposn. Durante la
transposicin se duplica una secuencia corta del ADN blanco y el transposn se inserta
directamente entre la secuencia repetida. La longitud de esta duplicacin corta vara, pero es
caracterstica para cada transposn. Se han reconocido dos tipos de transposicin. La excisin
de un transposn a partir de un sitio donante seguido por su insercin en un sitio blanco, se
denomina transposicin no replicativa. Si el transposn se replica en un sitio donante y una
copia se inserta en el sitio blanco, el proceso se nombra transposicin replicativa. El proce-
so de transposicin replicativa puede involucrar la formacin de una simple y cointegrada
molcula circular de ADN que consta de dos replicones unidos con copias del transposn
en una secuencia alternativa.
La mayora de los transposones en las bacterias pueden ser separados dentro de tres
clases principales. Secuencias de insercin y transposones afines relacionados comprenden
la primera clase. Las secuencias de insercin son las ms simples en estructura y codifican
solamente las funciones necesarias para la transposicin. La segunda clase de transposn
comprende de la gran familia homloga TnA. Todos los miembros de la familia codifican
tanto para las funciones transposasa y resolvasa. Ejemplos bien conocidos de esta familia
incluyen el transposn de resistencia a la ampicilina Tn3 y Tn1000 encontrados en el plsmido F.
La familia TnA tiene un lugar importante en la historia de la microbiologa mdica. El desarro-
llo de resistencia de alto nivel a la ampicilina en Haemophilus influenzae y Neisseria
gonorrhoeae durante la dcada de 1970, limit severamente la utilidad de la ampicilina para
el tratamiento de la gonorrea y las infecciones por Haemophilus en reas donde tales cepas
se convirtieron en prevalentes, lo que fue causado por la diseminacin de los determinantes
de resistencia a la ampicilina de los transposones TnA en plsmidos de Enterobacteriaceae
a plsmidos de Haemophilus y Neisseria.
La tercera clase de transposn consiste del bacterifago Mu y fagos moderados relacio-
nados. El genoma completo del fago funciona como un transposn y la replicacin del ADN
del fago ocurre por transposicin vegetativa durante el crecimiento vegetativo. La integra-
cin del profago puede ocurrir en diferentes sitios en el cromosoma bacteriano y a menudo
causa mutaciones. Por esta razn Mu y otros fagos relacionados son llamados, en ocasio-
nes, fagos mutantes.
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Una cuarta clase de transposones, descubiertos en bacterias grampositivas y represen-
tados por Tn917, consta de transposones conjugativos y que son completamente diferentes
de los anteriormente descritos. Estos transposones no generan una duplicacin de la se-
cuencia blanco en la cual se insertan, y en las bacterias grampositivas, la cepa hospedero
que porta el transposn puede actuar como un donante conjugante. La bacteria receptora no
necesita estar estrechamente relacionada con la bacteria donadora. El transposn es extrado
desde el cromosoma del donante y transmitido por conjugacin al receptor, mientras se
integra fortuitamente en el cromosoma. Tn917 codifica resistencia a la tetraciclina, pero otros
transposones conjugativos mayores pueden codificar resistencia antibitica adicional. Los
transposones conjugativos parecen ser una de las mayores causas de diseminacin de la
resistencia a antibiticos en las bacterias grampositivas.
Las bacterias coleccionadas durante la era preantibitica contenan muchos plsmidos,
pero usualmente carecan de determinantes de resistencia. Muchos de los plsmidos R de
aislamientos clnicos comunes pertenecen a los mismos grupos de incompatibilidad de los
plsmidos encontrados previamente; pero ellos, adems, determinan resistencia a mltiples
antibiticos. La estrecha relacin entre sus replicones proveen una fuerte evidencia de que
muchos plsmidos R comunes evolucionaron de plsmidos viejos por adquisicin de deter-
minantes de resistencia. Algunos de los plsmidos de resistencia a mltiples antibiticos
tienen transposones individuales con diferentes determinantes de resistencia; otros poseen
transposones de resistencia mltiple situados en sitios separados y otros contienen
transposones complejos de resistencia hbrida formados por integracin de un transposn
en otro.
El uso teraputico de antibiticos y su incorporacin en la alimentacin animal propor-
ciona ventajas selectivas para las bacterias con plsmidos R, mientras que la conjugacin, la
transformacin y la transduccin facilitan la va para la diseminacin de los plsmidos R en
y entre las especies bacterianas. Despus que un plsmido que porta un transposn es
introducido en una nueva bacteria hospedera, el transposn y sus determinantes pueden
saltar dentro del cromosoma o plsmidos nativos del nuevo hospedero. Por lo tanto, la
estabilidad de la movilizacin del plsmido en un nuevo hospedero bacteriano no es esencial
para la persistencia de los determinantes genticos situados en un transposn.
PLSMIDOS
Los plsmidos son replicones que se mantienen como elementos genticos distintos,
extracromosmicos en las bacterias. Por lo general, son mucho ms pequeos que el
cromosoma bacteriano, codifican rasgos que no son esenciales para la viabilidad bacteriana
y se replican independientemente del cromosoma. La mayora son molculas de doble cade-
na de ADN, circular, aunque se han demostrado plsmidos lineales en Borrelia y Streptomyces.
Los plsmidos estrechamente relacionados o idnticos han demostrado incompatibilidad;
no pueden mantenerse de forma estable en la misma bacteria hospedero. La clasificacin de
los plsmidos est basada en la incompatibilidad o en el uso de ensayos especficos de ADN
en pruebas de hibridizacin para identificar secuencias de nucletidos que son caractersti-
cos de replicones especficos de plsmidos. Algunos plsmidos hibridizados contienen ms
de un replicn.
Los plsmidos conjugativos codifican funciones que promueven la transferencia del
plsmido de una bacteria donante a otra receptora, pero los plsmidos no conjugativos no lo
hacen. Los plsmidos conjugativos que adems promueven la transferencia del cromosoma
bacteriano de una bacteria donante a otra receptora, se denominan plsmidos frtiles. Los
grandes plsmidos (ms de 40 kilobases de pares) son a menudo conjugativos, tienen un
pequeo nmero de copias (de una a varias por cromosoma), codifican para todas las funcio-
nes requeridas para su replicacin y se reparten por s mismos entre las clulas hijas durante
la divisin celular de la misma forma que el cromosoma bacteriano. Los plsmidos ms
pequeos que 7,5 kilobases de pares son usualmente no conjugativos, tienen un alto
nmero de copias (tpicamente 10-20 por cromosoma), cuentan con su hospedero bacteriano
y suministran algunas funciones requeridas para su replicacin, adems, son distribuidos al
azar entre las clulas hijas durante la divisin celular.
Gentica microbiana Gentica microbiana Gentica microbiana Gentica microbiana Gentica microbiana
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Muchos plsmidos controlan propiedades mdicamente importantes de bacterias
patognicas, incluyendo la resistencia a uno o varios antibiticos, produccin de toxinas y
sntesis de estructuras de la superficie celular requeridas para la adherencia o colonizacin.
Los plsmidos que determinan resistencia a los antibiticos son a menudo llamados plsmidos R
(o factores R). Ejemplos de toxinas codificadas por plsmidos incluyen: las enterotoxinas
termolbiles y termoestables de E. coli, la toxina exfoliativa de Staphylococcus aureus y la
toxina tetnica de Clostridium tetani. Algunos plsmidos estn ocultos y no tienen efectos
reconocibles sobre las clulas bacterianas que los hospedan. La comparacin de perfiles de
plsmidos es un mtodo til para medir la posible relacin de aislamientos clnicos individua-
les de una especie bacteriana particular para estudios epidemiolgicos.
BACTERIFAGOS
Los bacterifagos (virus bacterianos, fagos) son agentes infecciosos que se replican
como parsitos obligados intracelulares en las bacterias. Las partculas de fago extracelulares
son metablicamente inertes y consisten, sobre todo, de protenas ms cido nucleico (ADN
o ARN, pero no ambos). Las protenas de la partcula del fago forman una capa protectora
(cpside) que rodea el cido nucleico del genoma apretadamente empaquetado. El genoma
del fago consta de ADN de doble cadena o ADN o ARN de una sola cadena, y al igual que
en los plsmidos, codifica las funciones requeridas para su replicacin en la bacteria; pero a
diferencia de los plsmidos codifica, adems, las protenas de la cpside y protenas no
estructurales que requiere para su ensamblaje. Se han descrito diferentes tipos
morfolgicamente distintos de fagos, que incluyen: polidricos, filamentosos y complejos.
Los fagos complejos tienen una cabeza polidrica unida a una estructura proteica helicoidal
(la cola), cuyo conjunto le hace adoptar una forma que recuerda al espermatozoide humano.
La infeccin se inicia por la adsorcin del fago a los receptores especficos sobre la
superficie de la bacteria hospedero susceptible. Las cpsides permanecen en la superficie
celular, y el genoma ADN o ARN penetra en la clula. A causa de que la infectividad del ADN
o ARN genmico es mucho menor que la del virus maduro, hay un tiempo inmediatamente
despus de la infeccin que se llama perodo de eclipse, durante el cual el fago infeccioso
intracelular no puede ser detectado. Los fagos infectantes ARN o ADN se replican para
producir nuevas copias de genomas del fago, y se producen las protenas especficas. En la
mayora de los fagos el ensamblaje de la progenie ocurre en el citoplasma, y la salida ocurre
por lisis celular. En contraste, los fagos filamentosos se forman en la envoltura celular y son
liberados sin la muerte de la clula hospedero. El perodo de eclipse finaliza cuando la proge-
nie infecciosa intracelular aparece.
Los fagos se clasifican en dos grandes grupos: virulentos y temperantes. El crecimiento
de los fagos virulentos en una bacteria susceptible destruye las clulas hospederas. La
infeccin de una bacteria susceptible por fagos temperantes puede tener dos desenlaces:
crecimiento ltico o lisogenia. El crecimiento ltico de los bacterifagos virulentos y
temperantes es similar, conduciendo a la produccin de una progenie de fagos y muerte de la
bacteria hospedera. La lisogenia es un tipo especfico de infeccin viral latente, en la cual el
genoma del fago se replica como un profago en la clula bacteriana. En la mayora de las
bacterias lisognicas los genes que se requieren para el desarrollo de un fago ltico no estn
expresados y no ocurre la produccin de fagos infecciosos. Adems, las clulas lisognicas
son inmunes a la superinfeccin por el tipo de virus que hospedan como profago. El estado
fsico del profago no es idntico para todos los virus temperantes. Por ejemplo, el profago del
bacterifago l en E. coli est integrado en un sitio especfico dentro del cromosoma bacteriano
y se replica junto a l; mientras que el profago del bacterifago Pl de E. coli se replica como
un plsmido extracromosmico.
Algunos fagos temperantes contienen genes para caractersticas bacterianas que no
estn relacionadas con el desarrollo de fagos lticos o estado lisognico, y la expresin de
tales genes se denomina fago conversin (o conversin lisognica). Ejemplos de fago con-
versin que son importantes para la virulencia microbiana incluyen: la produccin de la
toxina diftrica por Corynebacterium diphtheriae, la toxina eritrognica por Streptococcus
pyogenes (estreptococo b hemoltico del grupo A), la toxina botulnica por Clostridium
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botulinum y toxinas similares a la de Shiga por E. coli. En cada uno de estos ejemplos, el gen
que codifica la toxina bacteriana est presente en el genoma del fago temperante. La especi-
ficidad de los antgenos O en Salmonella puede, adems,estar controlada por fago conver-
sin. La fagotipia es un mtodo particular de medir la susceptibilidad de cepas bacterianas a
bacterifagos especficos. Los patrones de susceptibilidad a un grupo de fagos proporciona
informacin acerca de la posible relacin de aislamientos clnicos individuales. Esta informa-
cin es particularmente til en investigaciones epidemiolgicas.
EXPRESIN DEL GEN
La informacin gentica codificada en el ADN es expresada por la sntesis de ARNs
especfico y protenas, y la informacin fluye desde el ADN al ARN a la protena. La sntesis
del ARN dirigido por el ADN se llama transcripcin. Ya que las bandas de doble hlice del
ADN son antiparalelas y complementarias, slo una de las dos bandas puede servir como
molde para la sntesis de una molcula especfica de ARN mensajero. Los ARN mensajeros
(mARNs) transmiten informacin desde el ADN y cada ARN mensajero funciona como un
molde para la sntesis de una o ms protenas especficas. El proceso por el cual la secuencia
de nucletidos de una molcula de ARN mensajero determina la secuencia primaria de los
aminocidos de una protena se llama traslacin. Los ribosomas, complejo de ARNs ribosomal
(rARNs) y diferentes protenas ribosmicas, trasladan cada ARN mensajero en la secuencia
polipeptdica correspondiente con la ayuda del ARN especfico de transferencia (tARNs),
las sintetasas aminoacdicas de transferencia y factores de iniciacin y de elongacin.
La expresin de los determinantes genticos en las bacterias involucran un flujo
unidireccional de informacin desde el ADN hasta el ARN a la protena. En los bacterifagos
tanto el ADN como el ARN pueden servir como material gentico. Durante la infeccin de la
bacteria por bacterifagos ARN, las molculas ARN sirven como molde para la replicacin
del ARN y como ARN especfico mensajero. Estudios realizados con retrovirus, grupo de
virus animal, revela que la molcula de ADN puede ser sintetizada a partir del molde ARN por
enzimas designadas como polimerasa del ADN dependiente del ARN (transcriptasa inver-
sa). Esta reversin de la direccin usual del flujo de la informacin gentica, desde el ARN al
ADN en lugar del ADN al ARN, es un mecanismo importante para facilitar la informacin de
los retrovirus para ser codificada en el ADN y volverse incorporado dentro de los genomas
de las clulas animales.
REGULACIN DE LA EXPRESIN DEL GEN
Las propiedades fenotpicas de las bacterias estn determinadas por sus genotipos y
sus condiciones de crecimiento. Para las bacterias en cultivo puro, los cambios en las condi-
ciones de crecimiento a menudo resultan en adaptaciones fisiolgicas predecibles en todos
los miembros de la poblacin. Tpicamente, los productos esenciales del gen son elaborados
en cantidades que permiten el crecimiento ms rpido en un ambiente dado, mientras que los
productos necesarios en circunstancias especiales son elaborados solamente cuando se
requieran.
Las adaptaciones fisiolgicas se asocian casi siempre con cambios en las actividades
metablicas. El flujo de metabolitos a travs de vas bioqumicas particulares puede ser
controlado, tanto por la regulacin de la sntesis de enzimas especficas, como por la altera-
cin de las actividades de las enzimas existentes.
La regulacin especfica implica a un gen o grupo de genes involucrados en un proceso
metablico particular. La induccin y la represin le facilita a las bacterias controlar la pro-
duccin de productos especficos del gen en respuesta a signos apropiados. Generalmente
las enzimas catablicas son inducidas cuando el sustrato para una va determinada est
presente en el medio de crecimiento obtenido, mientras que las enzimas biosintticas son
reprimidas. Las enzimas que participan en una nica va bioqumica, a menudo ocupan
posiciones adyacentes sobre el cromosoma bacteriano y son inducidas o reprimidas de
forma coordinada. Ellas forman un opern, un grupo de genes contiguos que son transcriptos
como una unidad nica y trasladados para producir los correspondientes productos del gen.
Gentica microbiana Gentica microbiana Gentica microbiana Gentica microbiana Gentica microbiana
63 63 63 63 63
La organizacin dentro de un opern es una estrategia importante para la regulacin coordi-
nada de la expresin de los genes en las bacterias. Los operones que pueden ser inducidos
o reprimidos son controlados por la unin de protenas regulatorias especficas con secuen-
cias particulares de nucletidos que funcionan como sitios regulatorios en el opern. La
comparacin de las secuencias de aminocidos de muchas de esas protenas regulatorias
diferentes, mostr que pueden ser agrupadas juntas en familias de reguladores (ejemplo: la
familia de protenas lysR) que quiz se han desarrollado a partir de genes antepasados
comunes. Los miembros de la familia lysR incluyen reguladores de fenmenos diversos,
tales como: el metabolismo de la lisina, la cistena y la metionina en E. Coli, y la represin del
hierro en V. cholerae.
Simultneamente, la regulacin global altera la expresin de un grupo de genes y operones,
llamados colectivamente un reguln, que estn controlados por el mismo signo regulatorio.
La regulacin global determina la respuesta de la bacteria a nutrientes bsicos, como son:
carbn, nitrgeno o fosfato, reacciones de tensin, tales como el dao del ADN o choque
trmico y sntesis de factores de virulencia especficos por los patgenos, durante el creci-
miento en sus animales hospederos.
La cantidad de una protena especfica en una clula bacteriana puede variar desde
ninguna hasta miles de molculas. Este amplio rango est determinado, a menudo, por la
accin combinada de diferentes mecanismos regulatorios que afectan la expresin del gen
estructural correspondiente. La regulacin es alcanzada determinando con qu frecuencia
un gen es transcripto a un ARN mensajero funcional, con qu eficiencia el ARN mensajero es
trasladado a una protena y cun rpidamente el ARN mensajero es degradado, cun rpida-
mente la protena se transfiere, y si la actividad de la protena puede ser alterada por efectos
alostricos o modificaciones covalentes.
MUTACIN Y SELECCIN
Las mutaciones son cambios hereditarios en el genoma. Las mutaciones espontneas
en las bacterias individuales son raras y, por lo general, ocurren con una frecuencia de 10
-8
a
10
-6
. Algunas mutaciones causan cambios en las caractersticas fenotpicas; la ocurrencia de
tales mutaciones puede ser inferida de los efectos que ellas producen. En gentica microbiana
los organismos de referencia especficos son designados como cepas tipo salvaje, y las
descendientes que tienen mutaciones en sus genomas se llaman mutantes. Por lo tanto, las
mutantes estn caracterizadas por las diferencias heredadas entre ellas y sus cepas tipo
salvaje progenitoras.
Las mutaciones pueden ocurrir por sustituciones, supresiones, inserciones y
reordenamientos de bases. Las sustituciones de bases pueden ser causadas por aparea-
miento errneo entre bases complementarias durante la replicacin.
Muchas sustituciones de bases escapan a la deteccin a nivel fenotpico, debido a que
no alteran en forma significativa la funcin del producto gentico. Por ejemplo, las mutacio-
nes que sustituyen un aminocido por otro, pueden ocurrir sin efecto fenotpico discernible.
Las consecuencias de las mutaciones por supresin o insercin son graves debido a
que pueden alterar de modo drstico la secuencia de aminocidos de los productos genticos.
La insercin o la supresin de un nucletido, interrumpen el orden de traduccin y, por tanto,
se introduce una secuencia protenica enteramente diferente, distal al aminocido del codn
alterado por la mutacin.
Otras mutaciones pueden invertir secuencias prolongadas de ADN o transponer tales
secuencias a nuevos locus. La comparacin de mapas genticos de cepas bacterianas rela-
cionadas, ha mostrado que tales reordenamientos pueden ser constantes en las poblaciones
naturales.
DETECCIN DE MUTANTES FENOTPICAS
Los medios de cultivo diferenciales y selectivos son tiles para el aislamiento de mutantes
bacterianas. Algunos medios selectivos permiten el crecimiento de mutantes particulares,
pero no dejan crecer a cepas tipo salvaje. Las mutantes raras pueden ser aisladas usando
Micr Micr Micr Micr Microbiologa y P obiologa y P obiologa y P obiologa y P obiologa y Par ar ar ar arasitologa Mdicas asitologa Mdicas asitologa Mdicas asitologa Mdicas asitologa Mdicas
64 64 64 64 64
tales medios selectivos. Los medios diferenciales le permiten a las bacterias mutantes y tipo
salvaje crecer y formar colonias que difieren en apariencia. La deteccin de mutantes raras
sobre medios diferenciales est limitada por el nmero total de colonias que pueden ser
observadas.
Las mutaciones que inactivan genes esenciales en organismos haploides son, por lo
comn, letales; pero tales mutaciones potencialmente letales pueden, a menudo, ser estudia-
das si su expresin est controlada por manipulacin de las condiciones experimentales. Por
ejemplo, una mutacin que incrementa la termolabilidad de un producto esencial del gen
puede prevenir el crecimiento bacteriano a 42 C, aunque la bacteria mutante pueda todava
crecer a 25 C. Inversamente, las mutantes sensibles al fro expresan el fenotipo mutante a
bajas temperaturas, pero no a altas temperaturas. Las mutaciones sensibles a la temperatura
y sensibles al fro son ejemplos de mutaciones condicionales. Una condicional fenotpica
letal indica que el gen mutante es esencial para la viabilidad.
MUTACIONES ESPONTNEAS E INDUCIDAS
La proporcin de mutaciones en las bacterias est determinada por la exactitud de la
replicacin del ADN, la ocurrencia de dao del ADN y la efectividad de los mecanismos para
reparar el ADN daado.
Para una cepa bacteriana particular bajo condiciones de crecimiento definidas, la pro-
porcin de mutaciones para cualquier gen especfico es constante y est expresada como la
probabilidad de mutacin por divisin celular. En una poblacin de bacterias desarrolladas a
partir de un pequeo inculo, la proporcin de mutantes y el tamao de la poblacin
bacteriana aumentan progresivamente. Las mutaciones en las bacterias pueden ocurrir es-
pontnea e independientemente de los mtodos experimentales usados para detectarlas.
Los factores ambientales y genticos afectan la proporcin de mutaciones. La exposi-
cin de bacterias a agentes mutagnicos causa una proporcin de mutaciones que se
incrementa, en ocasiones, a diferentes rdenes de magnitud. Muchos agentes fsicos y
qumicos, incluyendo los rayos X y la luz ultravioleta, tienen actividad mutagnica. Los
agentes qumicos que son carcinognicos para los animales, con frecuencia son mutagnicos
para las bacterias, o pueden ser convertidos por los tejidos animales en metabolitos que son
mutagnicos para las bacterias. Las pruebas estandarizadas para detectar mutagenicidad en
las bacterias son usadas como procedimientos de seleccin para identificar agentes ambien-
tales que pueden ser carcinognicos para los humanos.
La mayora de las mutaciones son dainas, y el riesgo de mutaciones adversas para las
bacterias individuales debe ser balanceado contra el valor positivo de mutabilidad como un
mecanismo para la adaptacin de las poblaciones bacterianas a las condiciones ambientales
cambiantes.
BASE MOLECULAR DE LAS MUTACIONES
Las mutaciones son clasificadas sobre la base de los cambios estructurales que ocurren
en el ADN. Algunas mutaciones estn localizadas en segmentos cortos del ADN (por ejem-
plo, sustituciones de nucletidos, microsupresiones y microinserciones). Otras mutaciones
involucran regiones grandes del ADN e incluyen supresiones, inserciones o reordenamientos
de segmentos del ADN.
PRUEBAS DE COMPLEMENTACIN
Para determinar si las mutaciones estn localizadas en el mismo gen o en genes diferen-
tes, se llevan a cabo las pruebas de complementacin con cepas bacterianas parcialmente
diploides. Estas pruebas fueron originalmente llamadas pruebas cis-trans, y el trmino
cistrn es empleado algunas veces como sinnimo de gen. Las pruebas de complementacin
pueden llevarse a cabo e interpretarse aunque las funciones bioqumicas especficas de los
productos del gen sean desconocidos.
Gentica microbiana Gentica microbiana Gentica microbiana Gentica microbiana Gentica microbiana
65 65 65 65 65
REVERSIN Y SUPRESIN
La recuperacin de una actividad perdida como consecuencia de una mutacin se deno-
mina reversin fenotpica, lo cual puede resultar o no de la restitucin de la secuencia
original del ADN (reversin genotpica).
Las mutaciones supresoras son aquellas que no restauran la secuencia exacta de
nucletidos y pueden ser intragnicas o extragnicas. En la supresin intragnica, despus
que una mutacin primaria ha cambiado la estructura de una enzima, de modo que su activi-
dad se ha perdido, una segunda mutacin, en un sitio diferente en el gen de la enzima,
restablece la estructura requerida para la actividad. La supresin extragnica es causada
por una segunda mutacin que ocurre fuera del gen afectado en un principio.
Algunos supresores extragnicos son especficos para genes particulares, otros son
especficos para codones y algunos tienen otros patrones de especificidad. Los supresores
extragnicos que revierten los efectos fenotpicos de los codones en la cadena terminal han
sido bien caracterizados y se ha encontrado que alteran la estructura del ARN de trans-
ferencia.
RECOMBINACIN DE LAS BACTERIAS
Se define por recombinacin al proceso en que tenga lugar la formacin de un nuevo
ADN a partir de molculas destruidas, de manera que la informacin gentica procedente de
cada molcula de ADN original estar presente en las nuevas. Es un proceso celular esencial,
catalizado por enzimas que la clula codifica y regula con un propsito.
La recombinacin constituye:
1. Fuente de variabilidad gentica.
2. Intercambio fsico de segmentos.
3. Valor regulatorio: puede tener como resultado la activacin o inactivacin de los genes.
4. Una va de reparacin.
En el caso de las bacterias son tres los procesos conocidos que conducen a la formacin
de un nuevo ADN. En orden cronolgico de su descubrimiento, estos procesos son:
1. Transformacin.
2. Conjugacin.
3. Transduccin.
En los organismos eucariticos, la clula diploide formada por la fusin de dos clulas
sensibles haploides (gametos) se denomina cigoto. En las bacterias pueden formarse tam-
bin cigotos, slo que no existe fusin de clulas sin transferencia de parte del material
gentico de una clula donadora a otra aceptora, aportndole a esta ltima un estado
diploide parcial (formacin de un gameto parcial denominado merocigoto).
El genoma original de la clula receptora se conoce como endogenote y el fragmento de
ADN introducido en ella, exogenote. El exogenote y endogenote generalmente se aparean
(mecanismo parasexual) y recombinan de inmediato despus de la transferencia, formndose
un ADN recombinante por la integracin parcial o total del exogenote; si esto no ocurriera, el
exogenote puede persistir y replicarse si dispone de los elementos genticos necesarios para
su propia replicacin, de manera que los merocigotos den lugar a un clon de clulas parcial-
mente diploides; si carece de esos elementos, persiste, pero no se replica; este fenmeno se
ha observado solamente en la transduccin y se conoce con el nombre de transduccin
abortiva. Finalmente, el exogenote puede ser degradado por procesos enzimticos (restric-
cin del hospedador) (Fig. 8.3).
Micr Micr Micr Micr Microbiologa y P obiologa y P obiologa y P obiologa y P obiologa y Par ar ar ar arasitologa Mdicas asitologa Mdicas asitologa Mdicas asitologa Mdicas asitologa Mdicas
66 66 66 66 66
RESTRICCIN Y MODIFICACIN
Ls restriccin fue descubierta en infecciones bacteriofgicas de E. coli K12 y E. coli
cepa B. La partcula fgica que infecta a la primera y establece una infeccin productiva, lo
hace porque su ADN se ha producido en ese tipo de clulas. Si ese primer fago infecta a la
segunda, el ADN de este resulta extrao y no se produce la infeccin productiva; ello se
debe a la existencia en la clula hospedera de una endonucleasa especfica que degrada al
ADN extrao. El fenmeno se conoce como restriccin y la endonucleasa como enzima de
restriccin. Por lo tanto inferimos que el ADN fgico producido en una clula determinada
deja de ser un sustrato para la enzima de restriccin, es modificado enzimticamente y queda
protegido contra la restriccin. La modificacin es un proceso de metilacin de bases en
sitios altamente especficos del ADN y que constituyen los puntos de ataque de la enzima de
restriccin.
INTEGRACIN DEL EXOGENOTE Y EL ENDOGENOTE
La recombinacin entre exogenote y endogenote ocurre por un proceso de rotura y
reunin de las molculas del ADN paternas. Lo ms importante de este proceso, y esencial
para su xito, es la conservacin de la secuencia de pares de bases.
TRANSFORMACIN
La transformacin gentica es la transferencia de un fragmento de ADN de un genoma
donador a travs de la membrana celular receptora y la incorporacin de este fragmento en
el genoma de esta clula. Puede ser:
1. Homloga: transferencia o transformacin de material gentico de la misma especie.
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3 3
3
3
3
3
a
a
b
b
c
c
c
A
A
A
A
A
N u e va s nt es i s
y ci e rre
B
B
B
B
B
D
D
D
D
D
C
C
C
C
C
E
E
E
E
E
(e x og e no te )
Ro tu ra
5
5
5
5
5
5
5
5
5 5
5
5
a )
b )
c )
d )
e )
(e n do g en o te )
D
ig
e
s
ti
n

D
ig
e
s
t i
n

Fig. 8.3. Integracin de un exogenote
unicatenario o un endogenote bica-
tenario9 (ABCDE). a) rotura; b) apa-
reamiento; c) y d) digestin de los ex-
tremos por exonucleasas; e) sntesis por
polimerasas y cierre por polinucle-
tido ligasa con formacin de una mo-
lcula recombinante (ABCDE).
Gentica microbiana Gentica microbiana Gentica microbiana Gentica microbiana Gentica microbiana
67 67 67 67 67
2. Heterloga: transferencia o transformacin de material gentico en especies diferentes.
3. Horizontal: transformacin heterloga que ocurre en ambientes naturales.
Este mecanismo de recombinacin gentica fue descubierto en el Streptococcus
pneumoniae. Este microorganismo produce colonias lisas (L) (capsuladas y virulentas) que
en repetidos subcultivos se tornan rugosas (R) (no capsuladas y no virulentas). Griffith, en
1928, observ que cuando se inoculaban a un ratn clulas R provenientes de un cultivo liso
tipo I junto con clulas L provenientes de un cultivo tipo II y muertas por el calor, el ratn
mora en pocos das y de la sangre de los mismos slo se poda aislar clulas lisas tipo II. Se
comprob tambin que esa propiedad transferida era hereditaria y se denomin principio
transformador, que en 1944 fue identificado como ADN por O.T. Avery y otros.
El factor limitante en la produccin de transformantes es la competencia de la poblacin
celular receptora para incorporar ADN transformante.
Estado de competencia natural. Es el estado donde la clula tiene la habilidad de unir e
interanalizar ADN exgeno.
Factores crticos que determinan la frecuencia
de transformacin
1. Tamao de los fragmentos de ADN.
2. Estado fisiolgico de la bacteria receptora.
3. Concentracin de ADN.
Se conoce que las clulas competentes producen una protena susceptible de ser aisla-
da del medio y utilizada para conferir competencia a otras clulas, y pudiera ser un compo-
nente de la membrana que cataliza la incorporacin del ADN a una enzima que degrada algn
componente de la superficie celular desenmascarando el receptor para el ADN.
Este mecanismo de recombinacin ha sido estudiado en: Streptococcus pneumoniae,
Haemophilus influenzae, Neisseria spp., Bacillus spp. y Escherichia coli (con altas con-
centraciones de ion calcio), en los cuales el estado de competencia es regulado en respuesta
a seales clula-clula y(o) condiciones nutricionales.
Barreras naturales que inciden en la transformacin
1. Sistemas de metilacin (modificacin)-restriccin de clulas.
2. Superficie celular.
3. Condiciones ambientales.
Existen evidencias experimentales de que tanto el ADN cromosomal como el plasmdico
estn sujetos a intercambio gentico mediante la transformacin, y existen estudios desde
1989, basados en la hiptesis de que la transformacin puede ser un poderoso mecanismo de
transferencia horizontal de genes dentro de las poblaciones naturales y en la especiacin y
evolucin bacteriana.
CONJUGACIN
Es la transferencia de material gentico en una sola direccin. Implica la unin de dos
estirpes bacterianas diferenciadas sexualmente. El elemento gentico que dirige la propiedad
hereditaria de ser donador se denomina factor o plsmido F (de fertilidad). La transferencia
del genoma bacteriano es una consecuencia secundaria de la transferencia plasmdica y
depende de la integracin del genoma y el plsmido en la clula donadora.
Micr Micr Micr Micr Microbiologa y P obiologa y P obiologa y P obiologa y P obiologa y Par ar ar ar arasitologa Mdicas asitologa Mdicas asitologa Mdicas asitologa Mdicas asitologa Mdicas
68 68 68 68 68
Plsmidos
Elementos genticos (ADN) extracromosmicos, circulares, de doble cadena, con peso
molecular entre 3 10
6
y 1 10
8
.

Pueden contener hasta 100 genes. El contenido en G + C
flucta entre 44 y 50 %.
Se replican siempre que se encuentren en su forma circular, son sensibles a los coloran-
tes de acridina y a la luz ultravioleta.
Proceso de la conjugacin
El proceso de conjugar y transferir una molcula de ADN plasmdico a su pareja de
conjugacin ocurre en dos etapas:
1. Formacin de un puente de conjugacin.
2. Paso del ADN plasmdico a travs del puente.
Ello se debe a la presencia de unos apndices especiales llamados fimbrias conjugativas
(o sexuales) en las clulas donadoras y a receptores especficos en las receptoras. El paso
intercelular de ADN es muy especfico y la transferencia de otro material es escasa o nula.
El contacto entre la fimbria de conjugacin y el receptor pone en marcha el proceso. Se
rompe una cadena de ADN plasmdico y penetra en la cadena receptora, la ADN polimerasa
sintetiza una rplica del mismo en la receptora, mientras que la otra permanece en la donadora;
a partir de este momento, la cepa receptora adquiere la capacidad de donar el ADN.
Las clulas que albergan un plsmido F se denominan F
+
y F
-
a las que carecen de l.
Cuando este plsmido se integra al genoma bacteriano, los clones sucesivos son denomina-
dos HFr (alta frecuencia de recombinacin); este ltimo proceso es reversible.
Cuando se mezclan clulas HFr con F
-
ocurre transferencia de ADN, pero esta vez, como
el plsmido y el genoma estn unidos (un solo replicn), a la clula receptora pasa el ADN del
plsmido y del genoma celular. Los marcadores del genoma transferidos estn en dependen-
cia del sitio de insercin del plsmido en el mismo.
La clula que recibe un plsmido con segmento de ADN genmico se denomina F y si
incluye genes de funciones indispensables, su prdida produce muerte celular (Figs. 8.4 y 8.5).
Principales grupos de plsmidos
1. Plsmidos R: comprende dos segmentos:
a) Factor de transferencia de resistencia.
b)Determinantes de resistencia.
Confieren resistencia a diferentes agentes antimicrobianos.
- Factores colicinognicos: genes que ordenan la sntesis de colicinas; toxinas letales
para las bacterias coliformes.
- Factores sexuales: son los mediadores de la transferencia, el ms estudiado es el F.
- Plsmidos penicilinasa de Staphylococcus aureus: poseen genes que implican la
produccin de una penicilinasa potente que provoca resistencia a las penicilinas.
Difieren de los R en que no se transfieren por conjugacin, sino por transduccin
mediada por fagos.
- Plsmidos degradantes de Pseudomonas: genes plasmdicos los cuales ordenan la
sntesis de enzimas que actan sobre alguna ruta metablica especial utilizada por
estos microorganismos; ejemplos: plsmido del alcanfor, octano, salicilato; son trans-
feribles entre especies de Pseudomonas por conjugacin.
- Plsmidos ocultos: molculas circulares de ADN presentes en casi todas las especies
bacterianas que no llevan genes que puedan ser detectados, por ahora,
fenotpicamente.
Conjugacin en los diferentes grupos bacterianos
Se ha observado este proceso en:
Bacterias gramnegativas: E. coli, Shigella spp., Salmonella spp., Proteus spp. y
Pseudomonas aeruginosa.
Gentica microbiana Gentica microbiana Gentica microbiana Gentica microbiana Gentica microbiana
69 69 69 69 69
F
+
F
+
p ro
p ro
la c
H fr
la c
F
F
F
F
H fr
P ili
F
P oli m er as a
F F
5
F
+
F
+
F
+
F
-
Fig. 8.4. Conjugacin: formacin de
una clula Hfr y Fa partir de una clu-
la F
+
.
Bacterias grampositivas: miembros del gnero Streptomyces.
Aplicaciones prcticas de la conjugacin
1. Construccin de cepas mutantes.
2. Mapeo de mutaciones.
Fig. 8.5. Recombinacin en bacterias:
mecanismo de conjugacin.
Micr Micr Micr Micr Microbiologa y P obiologa y P obiologa y P obiologa y P obiologa y Par ar ar ar arasitologa Mdicas asitologa Mdicas asitologa Mdicas asitologa Mdicas asitologa Mdicas
70 70 70 70 70
3. Localizacin de genes.
4. Estudio de evolucin gentica: relacin filogentica entre especies microbianas.
5. Estudios poblacionales: relaciones entre los microorganismos de diferentes especies en
ambientes naturales.
TRANSDUCCIN
Es el mecanismo gentico mediante el cual un fragmento del genoma bacteriano se
incorpora a un virin en formacin (fago temperante), de manera que cuando esta partcula
viral infecta a otra clula, le inocula parte del material gentico del hospedero anterior.
Tipos de transduccin
1. Generalizada: es aquella en que cualquiera de los genes del genoma bacteriano tiene
probabilidades de ser transportado por el fago.
2. Restringida: slo se incorporan los genes contiguos al lugar de insercin del profago.
Fago temperante: es aquel bacterifago que habitualmente no realiza un ciclo ltico, se
reproduce en sincrona con el hospedero y produce clonos celulares infectados. Este
estado conferido a una clula se denomina lisogenia y el genoma viral presente en ellas se
denomina profago.
3. De alta frecuencia: ocurre cuando la clula recibe un fago restringido y uno normal, de
manera que el resultado de la maduracin de ambos determina que el 50 % sea capaz de
transducir una propiedad gentica.
4. Abortiva: tiene lugar cuando existe un fracaso en la integracin del exogenote al genoma
bacteriano, este persiste pero sin replicarse, de manera que slo una de las clulas hijas
lo recibe.
En la transduccin abortiva de una bacteria his (-) por un gen his (+), el exogenote his
(+) produce enzimas para la sntesis de la histidina. Si sembramos esta bacteria en un medio
carente de histidina, el cigote crece y se divide, pero el exogenote no se replica, por lo que
una de las hijas no recibir el gen his (+) y continuar dividindose mientras le queden
enzimas; en cambio, la otra que s recibe el his (+) seguir fabricando enzimas; en la siguiente
divisin ocurre el mismo fenmeno. El resultado es la formacin de colonias diminutas de
crecimiento lento por las his (-) y colonias grandes por las his (+), las primeras son represen-
tativas de una transduccin abortiva (Fig. 8.6).
En z im a
S m bo lo s :
Cu b ie rta d e l fa g o
Ex o ge n o te (n o a utorre p ro du c tiv o )
Fig. 8.6. Transduccin abortiva: en
cada divisin, slo una de las clulas
recibe el gen activo. La otra contina
en unas cuantas divisiones celulares
hasta que el producto de gen activo
(por ejemplo, enzima) es diluido. La
siembra de un gen transductantes abor-
tivo produce una colonia diminuta, en
la cual solamente una clula es capaz
de ulterior crecimiento y divisin. To-
mado de: Jawetz E y cols. Manual de
Microbiologa Mdica 14ta ed., 1981.
Gentica microbiana Gentica microbiana Gentica microbiana Gentica microbiana Gentica microbiana
71 71 71 71 71
Conversin fgica. Propiedades importantes de muchas bacterias son reguladas por
genes fgicos y se manifiestan en aquellas que se encuentran en estado de lisogenia o
infectados por estos fagos, a esto se denomina conversin fgica; ejemplo: produccin de
toxinas por el Corynebacterium diphteriae, presencia de ciertos componentes antignicos
de la pared de Salmonella. Las partculas fgicas que determinan la conversin son defectivas
por haber perdido algunos genes propios del fago debido al intercambio gnico. La conver-
sin fgica y la transduccin de alta frecuencia son semejantes.
La transduccin puede observarse en: enterobacterias, Pseudomonas spp.,
Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae y Bacillus.
Recombinacin en virus bacterianos. Una clula bacteriana puede ser infectada por dos
fagos diferentes muy relacionados y que difieran en varios marcadores genticos. Al finali-
zar el proceso encontraremos fagos idnticos a los paternos y diversos tipos de recombinacin
gentica.
FUNDAMENTO DE LA INGENIERA GENTICA
La recombinacin de fragmentos de ADN ocurridos por transformacin, conjugacin o
transduccin, exige homologa de las secuencias entre las bases que conforman las zonas
que van a ser intercambiadas, para asegurar que la molcula resultante no se vea alterada. El
uso de marcadores detecta la recombinacin al ser sustituido un gen salvaje por un mutante
o viceversa.
Este intercambio de zonas de ADN homlogas est catalizado por enzimas que depen-
den del gen Rec A, por ello, aunque es posible el intercambio de genes de forma mecnica por
conjugacin o transformacin en microorganismos de diferentes especies, la aparicin de
recombinantes slo ocurre entre donadores y receptores homoespecficos, es decir, entre
organismos relacionados, con la excepcin de plsmidos o bacterifagos integrados a un
genoma heteroespecfico.
Artificialmente, tras el descubrimiento de las desoxiendonucleasas de restriccin y el
amplio desarrollo de la tecnologa bioqumica, se llev a cabo la recombinacin in vitro de
molculas de ADN no homlogas, procedentes de microorganismos alejados
filogenticamente, incluso entre procariotas y eucariotas o sintetizados de forma artificial.
Todo esto ha trado como consecuencia la creacin de organismos nuevos desde el
punto de vista gentico y que conservan las caractersticas propias codificadas en cada
regin provenientes de sus ADN integrantes.
Esta tecnologa ha dado en llamarse ingeniera gentica o ADN recombinante, ofrecien-
do perspectivas muy prometedoras en el campo de la industria y de la teraputica.
El rpido avance de la tecnologa del ADN recombinante se ha debido con mucho al
empleo de las enzimas de restriccin; ellas son las responsables de la degradacin del ADN
extrao que penetra. Se conocen varios tipos de las mismas; sealaremos algunas:
1. Tipo I: producen ruptura endonucleoltica en lugares indiscriminados de la doble cadena
de ADN.
2. Tipo II: producen roturas en lugares especficos con secuencias concretas de 4-6 pares
de nucletidos. Su especificidad es muy elevada y la digestin del ADN por ella permite
prever a priori el nmero y tipo de fragmentos que se van a obtener.
Cada especie bacteriana, e incluso cada cepa, tiene su sistema de restriccin particular
y con especificaciones diferentes a las de otras cepas.
El cortar molculas en sitios especficos del ADN y poder unirlos a otros, permite
seleccionar genes aislados con propiedades que pueden resultar muy interesantes, ya que
permitir destacar una caracterstica especfica que se encontraba dispersa en organismos
distintos.
Las tcnicas de ADN recombinante permiten seleccionar la regin del ADN que conten-
ga un gen del cual se desee estudiar su secuencia o producto proteico elaborado y construir
un hbrido con un sistema gnico que confiera capacidad de replicacin y estabilidad al
conjunto en el interior de una clula viva. La obtencin de un gran nmero de copias de una
Micr Micr Micr Micr Microbiologa y P obiologa y P obiologa y P obiologa y P obiologa y Par ar ar ar arasitologa Mdicas asitologa Mdicas asitologa Mdicas asitologa Mdicas asitologa Mdicas
72 72 72 72 72
determinada regin del ADN a partir de una copia original se denomina clonacin molecular,
y los genes utilizados para transportar el fragmento a clonar son llamados vectores.
Los vectores ms utilizados son los virus y los plsmidos, fundamentalmente los lti-
mos por su capacidad de ser transmitidos por transformacin, ser replicones autnomos,
muy estables y ser amplificables por antibiticos como el cloranfenicol.
De forma general, la molcula recombinante entre el vector y el ADN pasajero (fragmen-
to obtenido por digestin del genoma en el cual se encontraba anteriormente), se construye
aislando el ADN pasajero en geles de agarosa y combinndolo in vitro con el vector previa-
mente purificado y linearizado por enzimas de restriccin. Esta molcula recombinante es
seleccionada despus en geles de agarosa para verificar la correcta unin y finalmente es
introducida en la clula receptora por transformacin.
PERSPECTIVAS DEL USO DE ADN RECOMBINANTE
1. Permite conocer los sistemas de regulacin, secuencias y regiones clonadas en los genes.
2. Obtencin de protenas biolgicas con propiedades especficas a una alta concentracin
y bajo costo.
3. Obtencin de antgenos vricos o bacterianos para elaborar vacunas, enzimas, hormonas,
etctera, en grandes cantidades mediante cultivos industriales.
4. Introducir en organismos superiores genes que aportarn caractersticas que hasta ahora
faltaban, como: supresin de anomalas genticas en mamferos, fijacin del nitrgeno
por plantas que adolecan de esta caracterstica, y otras.
RESUMEN
Se presenta una introduccin al tema definiendo los conceptos de gentica, genotipo y
fenotipo. Se describe la estructura del cido nucleico, tanto del ADN como del ARN; as
como las caractersticas ms importantes y distintivas entre los genomas eucaritico,
procaritico y viral.
Se brindan algunos detalles de la replicacin del ADN eucaritico y bacteriano. Ade-
ms, se describen los aspectos ms sobresalientes relativos a los transposones, los plsmidos
y los bacterifagos.
Teniendo en cuenta que la expresin del gen es una funcin esencial del material gentico,
se aborda en sntesis cmo la informacin gentica codificada en el ADN se expresa normal-
mente y cmo ocurre su regulacin.
Las mutaciones son cambios hereditarios en el genoma y aunque en las bacterias son
raras las mutaciones espontneas, se explican algunos aspectos generales.
La transferencia de material gentico en las bacterias se conoce como recombinacin,
proceso en el que coexisten una clula donadora (F
+
) y una aceptora (F
-
), la cual adquiere
caractersticas nuevas provenientes de la primera. Los mecanismos de recombinacin son tres:
1. Transformacin.
2. Conjugacin (mediada por plsmidos).
3. Transduccin (mediada por fagos).
Se explican los tres mecanismos y los microorganismos en los cuales ocurre cada uno de
ellos. Se detalla el concepto, caractersticas y tipo de plsmidos que se conocen en la actua-
lidad y los fundamentos de la ingeniera gentica (ADN recombinante).
BIBLIOGRAFA
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