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Comit Mixte de Coopration Universitaire

Rapport final
(2000-2002)

Projet 00F0909:
Identification des mcanismes dvelopps par la symbiose Rhizobium-lgumineuses pour une interaction optimale sous contraintes environnementales mod!le Medicago truncatula-Rhizobium associs"

Responsable #unisien $%U$&I Mo'amed (larbi I&R)#*+,-. 20.0 /ammam 0if Responsable 1ran2ais /U3U(# #'ierry C&R)-I&R$* UMR24. +,25* 64627 Castanet #olosan cede8

)ommaire

Introduction 99999999999999999999999999999"6 Caractrisation des sites" (n:u;tes de nodulation" (tablissement des collections de M.truncatula et des r'i<obiums associs 9999999999""7 $nalyse de la diversit des populations vgtales 9999999999999942 $nalyse de la diversit des populations bactriennes nodulant les populations naturelles tunisiennes de M.truncatula9999999999999"4= ,olymorp'isme symbioti:ue* d>assimilation d>a<ote et de tolrance ? la salinit 9999999999999999999999999999992. (8priences en cours 9999999999999999999999"999""@6 Conclusions et perspectives 99999999999999999999999@@

Introduction
Medicago truncatula est une espce modle autour de laquelle se focalisent les efforts de recherche de nombreuses quipes scientifiques dans le monde !n effet" c#est une plante diplo$de" auto%ame et & petit %nome 'es caractristiques font d#elle une plante trs accessible pour des travaux de %ntique molculaire !n plus" c#est une plante fixatrice d#a(ote en s)mbiose avec certaines espces de bactries rhi(obiennes 'ette proprit lui confre de %rands intr*ts dans la recherche sur le dterminisme des mcanismes responsables des interactions plantes micro or%anismes et en particulier celles impliques dans le processus s)mbiotique !n +unisie M. truncatula est une espce endmique prsente dans tous les ta%es bioclimatiques et adapte & toutes les conditions daphiques ,l a t dmontr que les populations de cette l%umineuse ori%inaire du bassin mditerranen montrent une %rande variation phnot)pique pour plusieurs caractres dont particulirement la spcificit s)mbiotique L'objectif majeur du prsent projet tait d'analyser la diversit des populations naturelles autochtones de M. truncatula et des populations rhizobiennes natives associes. Le matriel caractris devait tre exploit pour l tude du dterminisme de cette symbiose et pour l identification de mar!ueurs impli!us dans la tolrance " la salinit. -es objectifs spcifiques identifis pour ce projet taient : 4)(tablissement d>une collection de Medicago truncatula et des r'i<obiums associs et analyse de la diversit des partenaires et de la symbiose" 'et objectif tant ralis en rapport avec un certain nombre de taches: a-Prospection du territoire national et localisation des populations de Medicago truncatula & considrer dans ce projet Au cours de la ralisation de ces taches, le travail a t conduit au del des prvisions du projet. Le nombre de populations a t largi dix, le doublage du nombre de sites a tudier tait destin inclure les conditions daphiques et bioclimatiques. En raison de lintr t des conditions cologiques nous avons pens quil !audrait les caractriser au moins en partie. "n relev des esp#ces dominantes de la ph$tocnose, en particulier les esp#ces de Medicago, ainsi quune description de ltat de la nodulation in situ de la population de Medicago truncatula et son dveloppement vgtati! ont t !aits.

b-'onstitution de la collection de plantes par rcolte de %ousses et cration de li%nes par autofcondations successives et tablissement d/une collection de bactries par isolement des rhi(obiums associs forms in situ ou par pi%ea%e c-'aractrisation ph)sicochimique des sols des diffrents sites prospects et valuation de la densit des rhi(obiums nodulants par dtermination du nombre le plus probable d-0nal)se de la diversit des populations de M. truncatula par utilisation de marqueurs molculaires et par anal)se de leur tolrance & la salinit Lanal$se de la diversit gntique a t tendue au pol$morphisme phnot$pique aux niveaux quantitati!s et qualitati!s. Les caract#res lis la croissance, au dveloppement et la reproduction ont t tudis. e-0nal)se de la diversit des rhi(obiums nodulant in situ et au laboratoire par utilisation de marqueurs molculaires et par anal)se de leur tolrance & la salinit Lanal$se molculaire limite au dbut la dtermination spci!ique a t tendue ensuite une tude de la diversit intra spci!ique. Lanal$se de la diversit bactrienne pour la tolrance la salinit a t conduite en rapport avec la diversit molculaire et la diversit au niveau e!!icacit !ixatrice f-1escription phnot)pique et caractrisation ph)siolo%ique de la s)mbiose che( des li%nes discriminantes en condition de stress salin 2)Initier une tude de l>analyse du dterminisme gnti:ue de caract!res ? intr;ts -a ralisation de cet objectif exi%e de raliser les taches suivantes : a-,dentification d/associations s)mbiotiques contrastantes pour la tolrance de la fixation sous stress salin Ltude a t tendue galement la recherche dassociations contrastantes pour le!!icacit dassimilation et sa tolrance la salinit. b-!tablissement d/une %nration F1 par croisement de plantes contrastantes pour la tolrance de la fixation en condition de stress salin %lusieurs croisements ont t raliss en incluant en plus le!!icacit dassimilation et sa tolrance pour la salinit c-0nal)se de la s%r%ation F2 pour la tolrance de la fixation au stress salin En raison de ltendue des taches accomplir pralablement &assimilation, !ixation'.( et limpossibilit de raliser plus de deux gnrations par an en raison des conditions de culture cette tape na pu tre atteinte. Elle sera poursuivie. 6)(valuation d>associations contrastantes reconstitues ? partir de matriels slectionns ,l tait convenu que l/valuation d/associations prslectionnes devrait *tre faite en chambre

de culture" sur carottes de sols ou en parcelles d/observation 'ette anal)se s/est trouve limite aux conditions de culture h)droaroponique -e passa%e & des conditions plus proches de la nature mritait encore plus de vrifications -a ralisation de la plupart des objectifs fixs devrait *tre faite & travers la prparation de 1!0 et de thses -es trois premiers tudis en%a%s dans le projet ont arr*t leurs expriences au bout d/une anne" car ils taient recruts pour travailler comme professeurs de l/ensei%nement secondaire ,ls ont ensuite juste russi & rdi%er leur mmoire et les soutenir '/tait avec les tudiants suivants que nous avions pu avoir une continuit dans le travail -/ensemble de rsultats obtenus seront prsents dans 2 parties : A'aractrisation des sites" !nqu*tes nodulation" !tablissement des collections de M.truncatula et des rhi(obiums associs A0nal)se de la diversit des populations v%tales A0nal)se de la diversit des populations bactriennes rhi(obiennes nodulant les populations naturelles tunisiennes de M. truncatula. APol)morphisme s)mbiotique" d/assimilation d/a(ote et de tolrance & la salinit

Caractrisation des sites* (n:u;tes nodulation* (tablissement des collections de M.truncatula et des r'i<obiums associs
4) Bescription des sites
4uite & quelques sorties sur l/ensemble du territoire national 10 sites o5 poussent des populations de M.truncatula ont t retenus 6Fi%ure 17
;:! 9: 10: 11:! 8

"
40

10

#unis

.=:8

$ 0 3 ( R I (

8
.9:

7
600 mm 400 mm 200 mm

1 2

5 3 4

.3: CerDenna'

Eerba 100 mm

.2:

..: )a'ara

30 <m

4-(nfid'a 2-Eelma 6-$mra @-Begac'e .-MaFel +el$bbes 7-#'ala 5-(lDef =-)oliman --+ulla Regia 40-R'ayet

.2:

.1:8

1igure 4

-es populations qui ) poussent sont dnommes +81" +82 & +810 et sont issues de pratiquement tous les ta%es bioclimatiques -es sols de ces diffrentes localits prsentent des caractristiques daphiques variables & l/chelle ph)sique et chimique 6+ableau 17 -a ph)tocnause d/accompa%nement est diversifie et la prsence de populations d/autres espces de Medicago est not -a vocation des sols est variable : certains sont mar%inaux" d/autres sont des terrains s)lvicoles" d/autres enfin correspondent & des terres a%ricoles -/anal)se du nombre le plus probable de rhi(obium montre %alement une %rande variabilit

Population !nfidha +81 Delma +82 0mra +8. 1e%ache +82 Aejel Fel 0bbs +83 +hala +89 !l <ef +8= 4oliman +8; Fulla Ge%ia +89 Gha)et +810

0ltitude 6m7 2 .00 200 23 300 ;00 300 2 200 200

texture -imono sableuse -imono sableuse -imono sableuse 4ablo limoneuse 4ablo limoneuse -imono sableuse limoneuse -imon fin limoneuse -imon fin

P? 1@ 2 3 = 90>= 9; ; 1;>; 2. ; 2;>; .2 = 99>; .9 ; 20>; 29 ; 10>; 29 ; 00>; 21 ; 10>; 29 = ;.>; 10 = 39>; 00

Aatire or% 6B7 0 31>1 30 0 ;2>1 19 0 39>0 93 0 1=>0 2= 0 .=>0 21 0 19>2 30 2 00>1 =0 1 99>1 30 0 2.>2 20 1 =0>2 90

4alinit 6%@l7 ; 93>2= 9 0 33>0 ;0 0 30>0 23 2 93>12 00 0 23>0 23 0 93>0 33 0 93>0 23 2 20>2 =0 0 93>0 33 0 ;0>1 00

Cta%e bioclimatique 4emi aride infrieur 0ride suprieur 0ride infrieur 4aharien suprieur 0ride suprieur 4emi 0ride suprieur 4emi aride suprieur 4emi aride suprieur 4ub humide 4ub humide

Pluviomtrie annuelle .00>200 200>.00 100>200 E100 200>.00 .00>200 200>300 300>=00 300>=00 300>=00

#ableau 4 'aractrisation des sols et des conditions climatiques pour les localits tudies 1es sorties faites & des priodes diffrentes de l/anne ont permis de dfinir le de%r d/abondance des populations v%tales en conditions naturelles et d/valuer la contribution de la population dans la production du couvert v%tal -/tat de nodulation a %alement t enre%istr -es plantes qui poussent en condition naturelle ont montr en %nral une nodulation efficiente et abondante 0u cours de la priode mi>0vril o5 les %ousses sont prsentes et permettent d/identifier les plantes" la plupart des nodules sont en d%nrescence -es isolements ne pourront se faire dans ces conditions qu/& partir des nodules jeunes forms tardivement -es nodules taient de taille variable et sont forms & diffrents niveaux de l#appareil racinaire ,ls semblent avoir t initis au cours de priodes successives du dveloppement de la plante

4
;

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40

,lanc'e Photos des sites prospects -es numros correspondent aux populations indiques & la Fi%ure 1 - Hones sales dans le semi>aride suprieur 6; :4oliman7 et infrieur 61 :!nfidha7 - Hones monta%neuses dans le semi>aride suprieur 6= : !lIhef7 et 69 : +hala7 - Hones de patura%es dans l/aride suprieur 62 : Delma7 et 63 : AajelFelabbes7 et dans l/aride infrieur 6. : 0mra7

2) Constitution de la collection des plantes


-a collecte des %ousses est effectu au cours de la priode Duillet>0out dans un espace de . hectares de faJon & reprsenter la diversit du terrain prospect et des plantes chantillones 1es %raines provenant de la m*me %ousse sont semes aprs scarification en pots sur un mlan%e sol a%ricole @ terreau aux proportions respectives 2@. -es plantes sont arroses avec l#eau de robinet et laisses pousser sous serre vitre & 23@13:' 6jour@nuit7" avec une humidit relative de 30@;0 B et une photopriode dpendante de la saison avec parfois un supplment de lumire artificielle de manire & totaliser ; 000 & 10 000 -ux Pour lutter contre des attaques de parasites" des traitements ph)tosanitaires au +opa(e et au Gubi%an ont t faits contre l#K$dium" au Fiomat 20 contre la mouche blanche et au -annate pour la lutte contre la noctuelle 'es traitements se sont avrs efficaces et ont t retenus pour les essais suivants Par ailleurs" un traitement au soufre est assur pour les jeunes plantules en vue de leur assurer une vi%ueur utile pour le dmarra%e des cultures -#essai a permis de comparer les plantes issues de la m*me %ousse ainsi que les plantes issues de %ousses diffrentes 'ette tude a permis d#apprcier la variabilit intra et inter population existant en conditions naturelles ainsi que la puret des %raines formes en conditions naturelle -es plantes qui ont pouss ainsi donnent lieu en cas de fructification & des %ousses contenant des %raines de premire %nration d#autofcondation sure par enveloppement avec de la %a(e et loi%nement des autres plantes !lles ont t laisses pousser jusqu#& fructification et ont

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servi pour rcolte de la premire %nration de li%nes -es li%nes de puret plus pousse sont obtenues par d/autres autofcondations & travers les %nrations suivantes -a numrotation des li%nes en cration a t prcde par +8 pour si%naler leur ori%ine tunisienne -e numro si%nale la r%ion d/ori%ine comme +81 pour !nfidha -e numro suivant si%nale le numro de la %ousse 0u total nous disposons actuellement de 1.3 li%nes -eur autofcondation sera poursuivie au moins une anne supplmentaire pour assurer la complte homo()%otie 'ertaines li%nes de M. truncatula sont utilises comme rfrence -a li%ne Demalon% est la premire li%ne de rfrence adopte par les divers laboratoires travaillant sur M. truncatula 1ans ce travail nous avons utilis %alement les li%nes F;.003 3 et F;.003 9 d/ori%ine FranJaise" 1H0.13 19 et 1H023 3 d/ori%ine al%rienne obtenues par D A Prosperi 6,8G0" Aau%uio" Aontpellier7 et utilises dans des pro%rammes de carto%raphie %ntique de M. truncatula par l/quipe de +hierr) ?u%uet 6-FAGPA" ,8G0>'8G4" +oulouse7 -/ensemble de la collection en %raines ou en %ousses est conserv & la temprature ambiante

6) Constitution de la collection des bactries nodulant les populations naturelles tunisiennes de M. truncatula
-es isolements des bactries sont faits dans deux conditions 4)-es plantes qui poussent au champ sont identifies & l#aide de leur %ousses et dterres leurs nodules sont prlevs et mis en tubes sur 'a'l2 pour dessiccation et ramens au laboratoire puis conservs jusqu#& utilisation 2)-es sols sont ramens au moment de la collecte des %ousses du m*me site 1es chantillons de 3 & 9 I% de sol dans l/hori(on 0>.0 cm prlevs de plusieurs points du site ont t ramens au laboratoire 'es sols sont ramens dans des sachets de poubelle au laboratoire et conservs & 2 :' jusqu#& utilisation pour des essais de pi%ea%e -es %raines d/une %ousse issue d/une population bien dfinie sont scarifies et cultives sur le sol d#ori%ine dans des pots de 0 3 l & raison de 3 & 9 %raines prleves au hasard par pot 0prs %ermination trois plantes sont laisses pousser jusqu#& 2 mois" priode au cours de laquelle les isolements sont effectus les plantes des diffrentes populations de M. truncatula taient nodules -es souches sont numrotes de manire & comprendre d/abord la 1 re lettre de la localit" le numro en chiffre romain de la plante" le numro du nodule en chiffre arabe et enfin des lettres diffrentes si des isolats diffrents ont t obtenus du m*me nodule

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-#isolement a t effectu sur milieu L!A0>G' 6)east extract mannitol a%ar> rou%e con%o7 & partir des nodules frais ou conservs soumis & une strilisation superficielle et plusieurs rinJa%es ,l a t %uid en se basant sur les caractristiques morpholo%iques des colonies et la dominance du t)pe microbien dans la culture -a confirmation de l#identification a t obtenue par test de nodulation pour des chantillons choisis -#ensemble des bactries ainsi identifies forme la collection qui est conserve sur L!A0 & 2 :' et sur Ml)crol & > ;0:'

$nalyse de la diversit des populations vgtales


-a diversit des populations est anal)se au niveau phnot)pique & travers le comportement des li%nes 'ette tude concerne des caractres qualitatifs et quantitatifs -/anal)se du pol)mophisme est %alement mene & l/chelle molculaire" par utilisation de microsatellites

4) ,olymorp'isme p'notypi:ue
la caractrisation morpholo%ique a t initie ds le dbut & la fois pour vrifier la puret des li%nes en cration et pour dcrire leur pol)morphisme 4"4),olymorp'isme :ualitatif 0u cours du dveloppement des plantes" les caractres

morpholo%iques ont t relevs & diffrents stades du c)cle v%tatif ,ls concernent la forme" la couleur et l/emplacement des marques foliaires 6Fi%ure 27N le port et la vi%ueur de la plante 6Fi%ure .7N le cranta%e et la forme des feuilles et enfin l/enroulement des %ousses et leur forme 'es caractres & contrOle %ntique peu complexe sont peu affects par la priode de l/essai et le support de culture et restent relativement stables au cours des %nrations 'es critres ont permis d/enre%istrer une variabilit importante et de dcrire le pol)morphisme intra et inter populations -es populations montrent pour certains de ces caractres un %rand pol)morphisme entre li%nes -es comparaisons morpholo%iques ont montr que les plantes issues de la m*me %ousse sont identiques" ce qui tmoi%ne de l/existence d/un de%r trs avanc de puret des plantes en conditions naturelles -a comparaison du port des plantes montre %lobalement une dominance des rameaux ri%s che( la plupart des populations -e port rampant est dominant parmi les li%nes issues des populations de +hala et 1e%ache Kn a pu dia%nostiquer che( la premire population = li%nes & port rampant parmi 11 cultives Par contre" la population de 4oliman montre une seule li%ne & port rampant" la +8; 29

1.

!n ce qui concerne les marques foliaires" elles sont prsentes che( toutes les populations avec une variabilit entre les li%nes 6Fi%ure 27 0u sein de la population +83 de Aajel Fel 0bbes toutes les li%nes prsentent des marques de forme et de couleur variable '/est la population la plus pol)morphe pour ce caractre -a population +8= d#!l<ef par contre" montre des marques homo%nes che( toutes les li%nes !lles se prsentent en taches rou%es parses -a population +89 de Fulla Ge%ia comprend 3 li%nes sans marques foliaires ,l semblerait que ces taches soient plus frquentes che( les li%nes issues des populations du centre et du sud que celles du nord du pa)s -es populations +83 de Aajel Fel0bbes et +8. de 0mra se distin%uent des autres populations par la prsence des taches rou%es distales et blanches parses

a7+82

6b7 Demalon%

6c7 +810 19

6d7 +89 13

6e7 +8; 2. 6f7 +81 21 6% 7+81 1; 6h7+8. 21 1igure 2 Pol)morphisme des marques foliaires pour les li%nes de M. truncatula :
> 0bsence de marques foliaires avec une li%ne de la population +82 de Delma 6a7 > Prsence de tPche rou%e centrale de forme allon%e paisse comme Demalon% 6b7" allon%e et fine comme +810 19 de Gha)et 6c7 ou en points comme +89 13 de +hala 6d7 > Prsence de tPches blanches allon%es ou centrales comme +8; 2. de 4oliman 6e7 ou losan%ique en continuit avec le ptiole comme +81 21 d/!nfidha 6f7 > Prsence de tPches blanches parses comme +81 1; d/!nfidha 6%7 - Prsence de tPches rou%es distale et blanches parses comme +8. 21 de 0mra 6h7 -

-e cranta%e fort des feuilles semble *tre un caractre discriminant 6Fi%ure 27 ,l est trs frquent au sein des populations +83 et +8. et rare che( les populations +8; et +81 'he( cette dernire il n/est prsent que che( une seule li%ne -es feuilles se prsentent en trois

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formes" losan%e" ventail et trian%le !lles ont t prsentes che( toutes les populations avec une dominance du t)pe en losan%e 'oncernant les %ousses" il apparaQt que dans les populations du nord 6!nfidha" 4oliman" !l<ef" Fulla Ge%ia et Gha)et7 prdomine le t)pe & %rand nombre de tours de spire 'he( celles du centre 6Aajel Fel0bbes et 0mra7 prdomine la prsence d/pines lon%ues -es deux t)pes d/enroulement dextre et snestre existent che( toutes les populations

1igure 6 Pol)morphisme du port pour les li%nes de M. truncatula >port ri% 6li%ne +8= 13 d/!l<ef7 rpandu dans l/ensemble des populations >port rampant" moins frquent" & rameaux courts re%roups 6li%ne +82 19 de 1e%ache7" & rameaux lon%s tendus 6li%ne +89 19 de +hala7 4"2),olymorp'isme :uantitatif -/tude & ce niveau implique au moins dix li%nes

appartenant & chacune des dix populations collectes Rne culture sous serre vitre dans les m*mes conditions exprimentales a t conduite et les caractres morpholo%iques v%tatifs et reproducteurs ont t mesurs ,ls concernent le nombre et la lon%ueur des axes orthotropes et pla%iotropes" la prcocit de la floraison et son importance" le nombre de %ousses formes et leur poids -/anal)se de variance a montr une diffrence si%nificative entre populations pour l/ensemble des traits mesurs 1es corrlations si%nificatives positives entre le dveloppement v%tatif et les traits reproducteurs particulirement la floraison sont enre%istres -a prcocit de floraison des populations distin%ue nettement leurs ori%ines bioclimatiques -es

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populations des r%ions semi>arides et arides sont les plus prcoces -/anal)se en composantes principales complte par l/tablissement des dendro%rammes d/apparentement a rvl que l/or%anisation de la variabilit morpholo%ique concorde avec l/ori%ine %o%raphique

2),olymorp'isme molculaire
l/anal)se molculaire tait initie ds la premire anne 0u cours du dveloppement de la plante" trois feuilles sont prleves" dcoupes en folioles" et sches & 93:' durant 2; h !lles sont ensuite bro)es et leur 018 extrait" puis l/amplification est faite pour 19 microsatellites -es microsatellites utiliss avaient montr dans des tudes conduites dans d/autres laboratoires leur utilit dans la rvlation du pol)morphisme au sein de M. truncatula 6Fi%ure 97 'es microsatellites sont diversifis 'ertains sont impliqus dans des fonctions connues comme la nodulation pour !8K120 et A+823 ou la s)nthse du saccharose comme 4R'41 ou l/activit 0+Pase comme 0+Pase239 et ?01 -es autres microsatellites sont neutres ,l s/a%it de DF20" +P'9.0" F22,11002" F1982." F12M13023" 8F02=?114+" A+F0 et A+403 ,ls sont localiss sur les diffrents %roupes de liaison 6+ableau 27 Microsatellite 3roupe de liaison Microsatellite 3roupe de liaison F1982. 1 A+,'29; 9 FA+11 1 A+,'22. 9 F21!1. 2 A+,'129 9 A+,'19= 2 +PM20' = At823 . +PM;3' = A+,'12; . +403 = 0+Pase239 2 00.F1 ; A+,'29= 2 A+,'.0; ; DF20 3 8F S +409 3 #ableau 2" Gpartition des microsatellites selon les %roupes de liaison de M.truncatula -a P'G est faite dans 23 Tl de milieu ractionnel" & 13 2 Tl d#eau distille strile" on ajoute 2 3 Tl de tampon P'G Mibco10 x 6200 mA +ris" p?; 2N 300 mA <'l7" 2 Tl de d8+P 61 2 mA7" 1 Tl de chaque amorce 6-eft et Gi%ht7 dilue & partir de la solution mre concentre" 0 . Tl de +aq pol)mrase correspondant & 1 3 units et enfin 1Tl d#018 dilu est ajout -#incubation est ralise sous le pro%ramme suivant: 92 :' 62 mn7" 20 U92 :' 6.0##7" 33 :' 6.0##7" =2 :' 6.0##7V" =2 :' 69 mn7 -#amplification est vrifie sur un %el hori(ontal avec

19

a%arose & ."3B -a mi%ration est effectue & 100 volts pendant quatre heures -e tampon des %els et des mi%rations est du +0! 0 3 x -es %els sont colors au F!+ et visualiss sous ultraviolet" puis photo%raphis -#ensemble des rsultats montre que les plantes issues d#une m*me %ousse ont le m*me %not)pe -/int%ration des rsultats obtenus sur toutes les li%nes avec l/ensemble des microsatellites montre qu/il est possible de discriminer entre li%nes de la m*me population ,l a t alors observ presque autant de %not)pes multilocus que de li%nes anal)ses -es rsultats obtenus avec l/ensemble des microsatellites permettent de dcrire la diversit des populations tudies -e microsatellite A+403 se montre plus pol)morphe que les autres !n effet" il permet de distin%uer le plus %rand nombre d/allles che( les populations +81 d/!nfidha" +8. de 0mra et +83 de Aajel Fel0bbes

+8 1

+8 2

+8 .

1igure 7 Pol)morphisme pour le microsatellite 0+Pase 239 che( des li%nes issues des populations de !nfidha 6+817" Delma 6+827 et 0mra 6+8.7 en prsence des 3 li%nes de rfrence Demalon%" F;.003 3 et F;.003 9 d/ori%ine franJaise" 1H0.13 19 et 1H023 3 d/ori%ine al%rienne -e pol)morphisme mis en vidence par le nombre de bandes est bas sur les diffrences entre elles dues & la taille -es anal)ses tant faites sur 0%arose" certaines bandes diffrentes mais a)ant des tailles proches ne peuvent *tre distin%ues -/utilisation de la sparation sur acr)lamide s/est avre en effet plus rsolutive !lle a permis de visualiser pour le microsatellite AtF009F10F1 des allles qui correspondent pourtant & des bandes proches

1=

-es microsatellites tudis se sont montrs d/un intr*t variable 0lors que certains montrent un pol)morphisme important et peuvent *tre trs utiles" d/autres devraient *tre dlaisss au profit de nouveaux microsatellites plus pol)morphes 6+ableau .7 -/utilisation de 19 de ces marqueurs a permis de raliser un arbre ph)lo%ntique des populations tunisiennes de M. truncatula 6Fi%ure =7 Mlobalement elles se re%roupent en rapport avec leur proximit
1.1 1.4 1.11 1.5 1.15 1.16 9.4 1.12 1.13 1.14 9.3 10.16 10.20 10.22 10.18 10.3 10.4 10.15 10.23 10.17 10.21 10.19 10.24 10.1 1.17 9.1 8.3 8.23 8.21 8.5 8.25 8.27 8.24 8.29 8.4 8.22 8.28 8.15 7.1 7.2 7.4 7.11 7.16 7.21 7.19 7.5 7.20 7.18 7.22 7.15 7.23 7.17 8.20 9.5 9.12 9.19 9.20 9.22 45.5 9.15 9.17 9.18 9.21 9.24 2.1 2.3 2.4 2.5 2.18 2.11 2.15 2.14 2.20 2.21 2.13 2.16 2.17 2.12 83005.5 83005.9 3.4 3.5 3.15 3.18 3.22 3.11 3.17 3.16 3.19 3.21 3.23 4.12 4.16 4.22 4.20 5.22 4.19 4.21 4.14 4.18 4.13 4.17 5.5 5.1 5.2 5.15 5.13 5.12 5.16 5.19 5.3 5.4 5.20 5.21 6.1 6.4 6.18 6.11 6.12 6.14 6.17 6.19 6.15 6.5 6.16 6.22 1.18 1.19 1.20 1.21 6.2 6.21 6.23 315.16 3.3 3.13 5.14 5.18 6.3 6 0 1 2 3 4 5

%o%raphique 1igure 5 1endro%ramme des li%nes +unisiennes 6distances euclidiennes RPMA07

1;

Locus
Jf20 N! #TPase456 $T&#5 $'N25 "19N23 #03(09!1 TPG20

Nbre d'allles
4 2 7 5 6 4 7 7

Locus
TPG 85 TP36" $T% 268 $T% 243 "21(13 $T% 67 $T% 297 $T% 308

Nbre d'allles
7 7 2 3 15 11 12 4

#ableau 6 1iversit alllique des microsatellites 61.3 li%nes7

$nalyse de la diversit des populations bactriennes r'i<obiennes nodulant les populations naturelles tunisiennes de M. truncatula
-a caractrisation base sur la morpholo%ie de la colonie et confirme par le test de nodulation a permis d#tablir une collection dfinitive compose d#un total de plus de 200 isolats reprsentatifs des diffrentes localits

4) Bistribution spcifi:ue ? l>c'elle rgionale des #inorhizobium nodulant les populations de M.truncatula de m;me origine
!lle est ralise par P'G@GF-P de l#018 194 ou du %ne de structure de la nitro%nase ni!? 6i7la premire amplification est faite par une paires d#amorces chromosomiques 6f11: 3#> 0%0%+++%0+''+%%'+'0%>.#" r11: 3#>00%%0%%+%0+''0%''>.#7 flanquant de part et d#autre le %ne codant pour l#0G8r 194" 6ii7la deuxime amplification utilise une paire d#amorces flanquant le %ne s)mbiotique ni!? 6)i!?,: 3#>0%'0+%+'L+'40%L+'8+''0> .#" )i!?F: 3#>+0'%%800G%%4%%80+'%%'00>.#7 -#amplification est faite dans un thermoc)cleur 6Fiometra" +G,K>thermoblocI7" avec un pro%ramme comprenant les tapes suivantes: 93 :' 6. mn7" .3 U92 :' 61 mn7" 33 :' 61 mn7" =2 :' 62 mn7V" =2 :' 6. mn7 -a vrification de l#amplification est ralise par lectrophorse hori(ontale en %el d#a%arose 0 9 B 6t)pe ,,7" -a mi%ration est conduite pendant .0 minutes & 100 volts

19

1 9.9 pb 1 01; pb 31= pb

1igure = 0mplification du %ne de l#018r 194 de 3 souches locales <,=" !10" +,,=" D2" 0. -#amplifiat a une taille approximative de 1 300 pb

1000 pb 900 pb .00 pb

100 pb

*ae,,,

Msp,

)de,,

+sa,

1igure - Ai%ration des produits de la di%estion de l#amplifiat du %ne de l#018r 194 -es di%estions sont effectues avec les en()mes & 2 bases *ae,,," Msp," )de,," +sa, -es souches tudies sont: 1: <,=" 2: !10" .: +,,=" 2: D2" 3: 0. et 9: <,,,2a

?ae,,,

Asp,

8de,,

Gsa,

20

-#amplification du %ne codant pour l#0G8r 194 a donn une bande unique de taille approximative de 1300 pb 6Fi%ure ;7 qui correspond bien & la taille attendue pour l#018r 194 des bactries 'ependant" nous avons constat que la visualisation de la bande tait parfois faible dans les m*mes conditions pour toutes les souches Pour pallier & ceci et en vue de bien russir la di%estion par les en()mes de restriction nous avons doubl la quantit d#018 dans la raction d#amplification -a di%estion des produits d#amplification est faite en prsence d#un excs d#en()me 63 & 10 units par volume ractionnel de 20Tl7 -es en()mes +sa," *ae,,," Msp, et )de,, 6Fi%ure 97 sont utilises dans des di%estions ralises & .= :' pendant une nuit -a sparation des fra%ments d#018 di%rs par lectrophorse hori(ontale est faite en %el d#a%arose 2 B 6Wide Gan%e@+)pe ,,: .@17 -a mi%ration est maintenue & 100 volts pendant trois heures -e tampon des %els et des mi%rations est du +0! -es %els sont colors au F!+ et visualiss sous ultraviolet" puis photo%raphis -es fra%ments de restriction de taille infrieure & 90 pb %nrs par la di%estion n#taient pas toujours visualiss sur les %els Par consquent" la taille du %ne 194 estime & partir de la somme des tailles des fra%ments de restriction tait infrieure & la taille de l#amplifiat -#amplification du %ne ni!? a donn une bande unique d#environ =90pb 6Fi%ure 107 !lle correspond & la taille attendue -a di%estion de cet amplifiat par les en()mes +sa," *ae,,, 6Fi%ure 117 a permis de confirmer la rpartition des isolats caractriss par P'G@GF-P 194 sur les deux espces dtermins de ,inorhi-obium 'hacune des deux en()mes donne deux profils distincts pour les deux espces -/tude de l/ensemble des souches bactriennes de la collection montre que les populations de M. truncatula pi%ent des proportions diffrentes des deux espces de ,inorhi-obium 6+ableau 27 -es populations de Delma" 0mra" Aajel Fel0bbes et +hala ne pi%ent que des ,. meliloti -es populations d/!nfidha" !lIef et Fulla Ge%ia sont nodules par les deux espces" ,. meliloti et ,. medicae en proportions variables -a population de Gha)et pi%e surtout ,. meliloti -es souches de ,. medicae sont prsentes quoi qu/en faible proportion 63B7 -a population de 4oliman ne pi%e que les ,. medicae

21

1 9.9 pb 1 01; pb 31= pb

1igure 40 0mplification du %ne de structure de la nitro%nase ni! ? de . souches locales !10" D2" 0. -#amplifiat a une taille approximative de =90 pb

1000 pb 900 pb

.00 pb

100 pb

*ae,,,

+sa,

1igure 44 Ai%ration des produits de la di%estion de l#amplifiat du %ne de structure de la nitro%nase ni! ? -es di%estions sont effectues avec les en()mes & 2 bases *ae,,," et +sa, -es souches tudies sont: 1: 2011" 2: +,,=" .: <,,,2a" 2: !9" 3: A,,10" 9: 4,,2" =: <,,2a et ;: <,,,2b

22

#ableau @ Gpartition des souches isoles des nodules des diffrentes populations cultives sur leur sol d/ori%ine parmi les deux espces de ,inorhi-obium
Populations tudies +81 +82 +8. +83 +89 +8= +8; +89 +810 !nfidha Delma 0mra AF +hala !l<ef 4oliman Fulla Ge%ia Gha)et 8ombre de 4ouches anal)sesX219 9 12 = .= 29 .3 2. 29 .; B ,. meliloti parmi les souches tudies 22 100 100 100 100 9; 0 20 93 B,. medicae parmi les souches tudies 39 0 0 0 0 .2 100 90 3

-/appartenance spcifique des souches anal)ses montre une diffrence de frquence des deux espces dans l/ensemble de la collection ainsi qu/une diffrence dans leur rpartition dans les nodules des diffrentes populations La nodulation des plantes reflte-t-elle une slectivit des populations vgtales vis--vis des bactries ou une composition relle en espces de Sinorhizobium dans le sol? Dans cette dernire situation la distribution bactrienne serait-elle en rapport avec les conditions climatiques, daphiques ou biotiques?

2)Bistribution des esp!ces de #inorhizobium et rapport avec les facteurs sol et partenaire vgtal
!n vue d/anal)ser l/implication des facteurs sol et population v%tale dans la distribution spcifique des ,inorhi-obium" les populations Fulla G%ia" Gha)et" 0mra et 4oliman a)ant montr des comportements diffrents sur leur sol d/ori%ine sont cultives sur les deux sols de Fulla G%ia et Gha)et qui hber%ent des populations rhi(obiennes & caractristiques diffrentes -a caractrisation spcifique des bactries rhi(obiennes formes montre une diffrence dans le comportement des populations 6+ableau 27 ,l ressort des rsultats obtenus que sur son sol d/ori%ine 6+ableaux 2 et 37 et sur celui de Fulla G%ia" la population 0mra est nodule uniquement avec ,.meliloti Par contre les populations Fulla G%ia" 4oliman et Gha)et sont nodules de manire quivalente par ,.meliloti et ,.medicae 6+ableau 27 -a population de 0mra semble possder sur les sols tests une slectivit pour ,.meliloti

2.

#ableau . 8odulation des populations de M. truncatula ori%inaires de Fulla Ge%ia et Gha)et 4oliman et 0mra cultives sur sols de Fulla Ge%ia et Gha)et Populations Fulla Ge%ia soils ,. mel Fulla Ge%ia Gha)et soil 29 19 ,. med .1 1 ,. mel 20 .9 ,. med 2. 2 ,. mel 19 1; ,. med 20 0 ,. mel 101 21 ,. med 0 0 Gha)et 4oliman 0mra

-e sol semble impliqu %alement dans la prsence de populations bactriennes bien dfinies '/est ainsi que la population de 4oliman capable de noduler indistinctement avec les deux espces de ,inorhi-obium quand elles coexistent 6+ableau 37 n/est nodule que par ,.medicae sur sol de 4oliman car dans ce sol seule cette espce semble exister 6+ableau 27

6)Caractrisation de la diversit intra spcifi:ue


-a diversit intra spcifique est anal)se par utilisation de squences rptitives situes sur tout le %nome bactrien -/tude a port sur un chantillon de plus de 200 souches -es deux amorces utilises sont : G!P1G>,:./>'%%,'+0',%',%',,,,>3/ et G!P2> ,:3/>,'%,'++0+',%%''+0'>./ -e pro%ramme d/amplification est compos des tapes suivantes: 93 :' 69 mn7" .0 U92 :' 61 mn7" 20 :' 61 mn7" 93 :' 6; mn7V" 93 :' 69 mn7 -#amplification est faite en prsence d/un excs de d8+P -a sparation des fra%ments amplifis est faite sur %el & 1"3B d/a%arose t)pe ,, -a mi%ration est conduite pendant 90 mn & 100 volts -e tampon des %els et des mi%rations est du +0! -es %els sont colors au F!+ et visualiss sous ultraviolet" puis photo%raphis & l/aide d/un appareil polaroid AP2 sur film polaroid ou par un ima%eur quip d/une camra ''1 6Fi%ure 127 -a structuration de la diversit caractrise par G!P@P'G a t anal)se en rapport le facteurs espce bactrienne" sol d/ori%ine et %not)pe v%tal associ -/tude de 92 isolats de ,.meliloti et 2; de ,.medicae isols du sol de Fulla Ge%ia montre que les deux espces forment deux %roupes nettement distincts -/anal)se comparative par G!P@P'G" des souches isoles de sols diffrents montre qu/ils forment des %roupes distincts & la fois che( ,.medicae et che( ,.meliloti -/apparentement de profils obtenus montre que les bactries sont structurs en rapport avec le %not)pe v%tal & l/chelle population et & l/chelle li%ne 6Fi%ure 1.7

22

2.0 0pb

Felix <,,1 <,,2 4,,2 100pb

4,,3

4.0 0pb 400 0pb

.00 pb

700 pb

400 pb

Fi%ure 12 : Caractrisation par R(,G,CR de @ lignes de #inorhizobium CII4 et CII@ (#. meliloti)* et )II2 et )II. (#. medicae)
1;

19

12

12

10

0 A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!A!1 A!1 A!1 A!1 A!1 A!1 A!1 A!1 A!1 A!1 A!1 A!1 A!1 A!1 A!1 A!1 A!1 A!1 A!1 A!1 A!1

1igure 46 1endro%ramme d/apparentement %ntique de souches de ,. meliloti et ,. medicae isoles de M. truncatula cultive sur sol de Fulla Ge%ia" bas sur les profils G!P@P'G et construit avec la mthode RPMA0 Ael: ,. meliloti" Aed: ,. medicae

23

,olymorp'isme symbioti:ue* d>assimilation d>a<ote et de tolrance ? la salinit


-es li%nes en cours de cration pour lesquelles aucune htro()%otie n/a t suspecte au niveau molculaire et phnot)pique ont t values quant & l/importance de leur pol)morphisme -/tude a t conduite sur des caractres d/intr*t ,ls se rapportent & la performance s)mbiotique 6l/infectivit" & l/efficacit de fixation a(ote7 et & l/efficacit d/assimilation d/a(ote minral -a tolrance & la salinit dans l/expression de ces traits spcifiques de la nutrition a(ote ainsi que la %ermination est %alement anal)se

4) ,olymorp'isme symbioti:ue
-/tude comparative de l/effet souche sur chacune des populations a montr une importante variabilit dans l/infectivit 6Fi%ure 127 et l/efficience 6Fi%ure 137 -es souches de ,. meliloti sont %nralement plus infectives que celles de ,. medicae 6Fi%ure 1907 alors que ces dernires sont plus efficientes 6Fi%ure 19F7 Par ailleurs l#infectivit des souches est %nralement plus faible quand elles sont inocules & la population d#ori%ine 6Fi%ure 127 !n revanche l/efficience de la souche quand elle est inocule & sa population hOte est des plus leves 6Fi%ure 137 -#inefficience des souches est le rsultat d/un mauvais fonctionnement des nodules qui sont dans ces conditions" blanchPtres" de diffrentes formes" petites sphriques ou allon%es 6Fi%ures 19a"b"c77 Pour les associations efficientes plusieurs formes de nodules roses sont observes accompa%nes parfois par des nodules rudimentaires 0u sein de la m*me population une variabilit de comportement s)mbiotique entre plantes a t observe parfois 1/autre part" sur la m*me population une seule souche donne une rponse s)mbiotique variable ce qui appuie l#existence d#une diffrence %ntique intra population 1ans un essai impliquant des li%nes pures 6li%ne de rfrence Demalon%9 et li%ne locale +81 1. de !nfidha7 inocules avec 9 souches diffrentes appartenant aux deux espces de ,inorhi-obium" l/anal)se a montr pour l/efficacit de fixation un effet si%nificatif pour les deux facteurs ainsi que leur interaction 6+ableau 37 Pour l/!F0 l/anal)se de variance a montr que le facteur li%nes contribue dans la variabilit avec =1 B -e facteur souches

29

intervient avec 1; B et l/interaction entre les deux facteurs contribue avec 9 B dans la variabilit 6+ableau 97 -/anal)se dtaille d/un %roupe de li%nes de plusieurs populations montre que des li%nes efficientes existent parmi les diffrentes populations 6Fi%ure 1;7 -es li%nes +81 11 de !nfidha et +8; 21 de 4oliman sont bien plus efficientes que les autres" elles multiplient leur biomasse initiale correspondante & la mobilisation de leurs rserves par environ 2 1/autres li%nes appartenant & d/autres populations comme +82 12 et +83 12 ont des efficiences suprieures & . 3 -a li%ne Demalon%" la moins efficiente des li%nes anal)ses ne donne pas plus que le double de la biomasse donne par le tmoin absolu -/anal)se de relation entre la production de biomasse des parties ariennes des plantes inocules et l/efficience de fixation a(ote est faite par la r%ression linaire ,l en ressort une corrlation non si%nificative entre ces deux paramtres : )X 0 02x Y 2 21" soit GX0 1; 6Gddl 1;0 03thoriqueX0 227

2=
40

Nodulatio ! odul"#$%l&

#mra

20

RCR2011

KIII5

TII7

KIII4a

MII10

KIII4b

KII2a

SII4

TI2

TI5

E10

MI4

KI7

J7

E5

E6

J2

A5

40 Nodulatio ! odul"#$%l&

(l)ef

20

Nodulatio ! odul"#$%l&

40

&ol*ma+
20

8odulation 6nodules@pl7

40

Jemalo+,

20

1igure 4@ 8odulation de populations locales de M. truncatula 6+81: de !nfidha" +8.: 1e 0mra" +8=: de !l<ef et de +8;: de 4oliman7 et de la li%ne Demalon% 6D97 avec 1; souches locales et la souche de rfrence 2011
-es mo)ennes avec les m*mes lettres ne sont pas diffrentes avec le test de 1uncan 6seuil 0 037

A3

2;
30 Mati'(" #')*" d" la %a(ti" a+(i" " !,-$%l& 20 10 0

(+f*d-a

Mati'(" #')*" d" la %a(ti" a+(i" " !,-$%l&

30 20 10 0

#mra

Mati'(" #')*" d" la %a(ti" a+(i" " !,-$%l&

40 30 20 10 0

(l.ef

30 Mati'(" #')*" d" la %a(ti" a+(i" " !,-$%l& 20 10 0

&ol*ma+

40 Mati'(" #')*" d" la %a(ti" a+(i" " !,-& 30 20 10 0

Jemalo+,

1igure 4. Production de biomasse des parties ariennes che( les populations locales de M. truncatula 6+81: de !nfidha" +8.: 1e 0mra" +8=: de !l<ef et de +8;: de 4oliman7 et de la li%ne Demalon% 6D97 inocules avec 1; souches locales et la souche de rfrence 2011
-es mo)ennes avec les m*mes lettres ne sont pas diffrentes avec le test de 1uncan 6seuil 0 037

29
mel 23 00 20 00 13 00 10 00 3 00 0 00
!nfidha 4oliman 0mra Demalon% !l<ef

med

8odulation 6nod@pl7

.0
Fiomasse des parties ariennes 6m%@pl7

mel

med

20

10

0
!nfidha 4oliman 0mra Demalon% !l<ef

Fi%ure 19: Zariation de la nodulation 607 et du rendement en poids de matire sche de la partie arienne 6F7 en fonction de l#espce bactrienne: 4 meliloti et 4 medicae che( quatre populations locales

.0
Nodulatio ! odul"# $ %la t"&

30

20

10

TN1.11

TN2.11

TN2.12

TN3.11

TN3.13

TN5.11

TN5.14

TN5.19

TN6.18

TN7.17

TN8.15

TN8.20

TN8.21

TN8.22

TN8.23

TN8.25 TN8.22

J",alo -

083005.5

./A45.5

1i- +"#

1igure 45 8odulation des li%nes issues des populations locales de M. trunatula provenant d#!nfidha 6+81 117" Delma 6+82 11" +82 127" 0mra 6+8. 11 et +8. 1.7" Aajel Fel0bbes 6+83 197" +hala 6+89 1;7" !l<ef 6+8= 1=7 et 4oliman 6+8; 13" +8; 20" +8; 21" +8; 22" +8; 2." +8; 23" +8; 2=7 et celles de rfrence Demalon%" 1H023 3 et F;.003 3" inocules avec la souche de rfrence 2011
0es moyennes sont calcules ? partir de 40 ? 42 rptions 0a barre indi:ue lHintervalle de confiance au seuil de .I"

E0A

520

225

020 TN2.11 TN2.12 TN3.11 TN5.11 TN5.14 TN5.19 TN6.18 TN7.17 TN8.15 TN8.20 TN8.21 TN8.23 TN8.25 TN1.11a J",alo 08300.5.5 TN3.13d .3a45.5 TN8.27

TN8.27 1i- +"#

1igure 4=

!fficacit de la fixation a(ote 6!F0[7 des li%nes locales de M. truncatula

provenant d#!nfidha 6+81 117" Delma 6+82 11" +82 127" 0mra 6+8. 11 et +8. 1.7" Aajel Fel0bbes 6+83 197" +hala 6+89 1;7" !l<ef 6+8= 1=7 et 4oliman 6+8; 13" +8; 20" +8; 21" +8; 22" +8; 2." +8; 23" +8; 2=7 et celles de rfrence Demalon%" 1H023 3 et F;.003 3" inocules avec la souche de rfrence 2011
!F0[ X Aatire sche des parties ariennes du traitement inocul@ Aatire sche des parties ariennes du tmoin absolu X A40,@A40+ -es mo)ennes sont calcules & partir de 10 & 12 rptions -a barre indique l#intervalle de confiance au seuil de 3B

.1

1igure 4-a ,nteractions populations de M.truncatula x souches rhi(obiales - 4ur la population +8. de 0mra les souches 6 ,.meliloti7 isoles sur cette m*me population ainsi que les souches 6,.medicae7 isoles de la population +81 d/!nfidha sont toutes efficientes - 4ur la population d/!nfidha seules les souches qui en sont isoles sont efficientes

1igure 4-b -es souches D2 et A,2 isoles des populations +82 6Delma7 et +83 6Aajel Fel0bbes7 sont inefficientes sur population de !lIhef !lles donnent des nodules blanchPtres" oblon%s 6D27 ou rudimentaires 6A,27

.2

1igure 4-c -es souches <,= et +,2 isoles des populations +8= 6!lIhef7 et +89 6+hala7 sont efficientes sur la population d/!lIhef !lles donnent des nodules roses de differentes tailles -a souche 0. est inefficiente sur la m*me population avec des nodules blanchPtres rudimentaires

!ffet li%nes souches

ddl 1 3

'arr mo)en ..";9 6=1B[7 ;"=3 61;B7

ddl erreur 1.2 1.2 1.2

F 1;2";2 2="=2 23"9=

p 0"000 0"000 0"000

souches x li%nes 3 2"=1 69B7 [: pourcenta%e de la variation totale

#ableau 7 0nal)se de variance et implication des facteurs li%nes" souches et interaction pour le caractre efficacit de fixation a(ote -e nombre mo)en de nodules forms varie de 3 pour les li%nes +82 12 et +89 1; & .0 nod@pl pour Demalon% 6Fi%ure 1=7 Kn remarque en revanche que la li%ne +82 12 prsente l/efficience la plus leve Par contre la li%ne Demalon%" elle donne l/efficience la plus faible -/tude de la relation entre l/efficience et l/infectivit montre qu/elles sont n%ativement corrles de faJon si%nificative : )X >0 09x Y . 9;" GX0 33 6G ddl 1;0 03thoriqueX0 227 ,l semblerait qu/une souche peu efficiente sur une li%ne aura tendance & exprimer un pouvoir infectif plus important que celui qu/elle exprime sur une li%ne avec qui elle dveloppe un pouvoir fixateur important -a comparaison des performances s)mbiotiques de 9 souches de ,inorhi-obium de diffrentes ori%ines montre que les souches de ,. medicae sembleraient plus efficientes sur Demalon%" o5 elles semblent par contre moins infectives 6+ableau =7

..

!spce ,.meliloti ,.meliloti ,.meliloti ,.meliloti ,.medicae

4ouches 2011 0. A,2 +,3 <,,,3

Kri%ine 0mra Aajel Fel0bbes +hala !l<ef

!F0 2 12 b[ 0 == c 1 12 c 2 21 ab . 1= a

8odulation .; ; a 2= 2 a 2= . a .1 = ab 1; 3 bc

,.medicae 4,,2 4oliman . 19 a 19 ; c [: les mo)ennes avec la m*me lettre ne sont pas si%nificativement diffrentes au seuil de 3B #ableau 5 !fficacit de fixation a(ote et nodulation de six souches de ,inorhi-obium inocules sur la li%ne Demalon% de M. truncatula.

2) ,olymorp'isme pour l>aptitude des lignes ? valoriser l>a<ote minral (. mM)


-/valuation de l/efficacit d/assimilation d/a(ote montre un comportement variable des li%nes 6Fi%ure 207 'ertaines d#entre elles comme les li%nes +8; 20" +8; 23 semblent utiliser l/a(ote de faJon trs efficace !lles produisent plus de 9 fois leur biomasse rsiduelle 1#autres par contre prsentent des si%nes de toxicit comme la li%ne +8. 11 'eci semble se manifester par un desschement des extrmits des feuilles les plus P%es -a li%ne +81 11 en dpit des si%nes de toxicit qu/elle prsente montre la plus %rande capacit d/assimilation avec une mo)enne du rapport A400@A40+ suprieure & 9 -es li%ns +82 11 ainsi que Demalon% n/attei%nent %ure une efficacit de . Mlobalement plus de la moiti des li%nes locales dpassent une efficacit de 2 dpassant par l& les . li%nes de rfrence ,l est & si%naler que l/efficacit d/assimilation d/a(ote prsente une relation linaire inverse si%nificative avec la production de biomasse des parties ariennes: )X >0 0;x Y 9 29" GX0 31 6Gddl 1;0 03thoriqueX0 227 -/anal)se de r%ression linaire entre l/efficacit de fixation a(ote et l/efficacit d/assimilation montre une corrlation si%nificative positive: )X 0 22x Y 1 19" GX0 90 6G ddl
1;

0 03thoriqueX0 227

.2

!00

725

520

225

020
.3a45.5 08300.5.5 TN1.11 TN2.11 TN2.12 TN3.11 TN3.13 TN5.11 TN5.14 TN5.19 TN6.18 TN7.17 TN8.15 TN8.20 TN8.21 TN8.22 TN8.23 TN8.25 J",alo TN8.27

1i- +"#

1igure 20 !fficience d#assimilation d#a(ote 6!00[7 des li%nes locales de M. truncatula provenant de !nfidha 6+81 117" Delma 6+82 11" +82 127" 0mra 6+8. 11 et +8. 1.7" Aajel Fel0bbes 6+83 197" +hala 6+89 1;7" !l<ef 6+8= 1=7 et 4oliman 6+8; 13" +8; 20" +8; 21" +8; 22" +8; 2." +8; 23" +8; 2=7 et celles de rfrence Demalon%" 1H023 3 et F;.003 3
[!00 X Aatire sche des parties ariennes du traitement a(ot@ Aatire sche des parties ariennes du tmoin absoluXA400@A40+ -es mo)ennes sont calcules & partir de 10 & 12 rptions -a barre indique l#intervalle de confiance au seuil de 3B

6) ,olymorp'isme pour la tolrance ? la salinit


1es tudes prliminaires ont permis de retenir la concentration de =3 mA de 8a'l pour poursuivre l/tude de variabilit de rponse che( 11 li%nes tunisiennes en prsence de Demalon% sous les deux modes de nutrition a(ote 6"4)Jariabilit de rponse au sel des lignes en symbiose avec 2044 -e suivi de l/effet du sel montre que le nombre de feuilles est si%nificativement diminu au bout de deux mois pour la plupart des li%nes 6Fi%ure 217 -a li%ne +89 1; est la plus touche alors que les autres li%nes paraissent peu affectes !lles %ardent leur port naturel" c/est le cas de la li%ne +8; 20 -es li%nes +8; 20" +8; 2. et +83 19 ne sont pas affectes par le sel et elles semblent tolrantes pour ce paramtre -#efficience s)mbiotique des li%nes inocules avec la souche 2011 est %lobalement plus affecte que les feuilles !lle est inhibe par le sel & des pourcenta%es variables allant de .0 & =9B 6Fi%ure 227 -es li%nes les plus tolrantes +8; 20" +8; 22 proviennent de la population de 4oliman issue d/un sol salin -es autres li%nes issues des population de 0mra 6+8. 1.7" Aajel Fel0bbes 6+83 197" !l<ef 6+8= 1=7 et +hala 6+89 1;7 se sont avres les plus

.3

sensibles et prsentent toutes des pourcenta%es d/inhibition suprieurs & 30 B -a li%ne +89 1; est la plus sensible d/entre elles avec un pourcenta%e d/inhibition de =9B !lle est issue d/un sol o5 la salinit est des plus faibles ,l s/est avr d/aprs l/tude de corrlation une indpendance entre le pourcenta%e de rduction du nombre de feuilles d/une part et le pourcenta%e de rduction de l/efficience: )X 0 3;x Y .= 12" GX0 31" 6Gddl 100 03 thoriqueX0 3=7 ou la matire sche des traitements inoculs: )X >0 02.x Y .9 21" GX 0 01" 6Gddl 100 03 thoriqueX0 3=7 0insi" les mcanismes dvelopps par les li%nes pour la tolrance d/initiation foliaire semblent indpendants de ceux impliqus dans la croissance v%tale et l/efficience des li%nes -es li%nes +83 19 et +8; 2. semblent tolrer le sel pour l/initiation des feuilles alors que leur efficience ainsi que leur croissance sont svrement affectes 630 B7 0 l/inverse la li%ne +8; 22 des plus tolrantes au sel au niveau biomasse et efficience semble des plus affectes au niveau nombre de feuilles !nfin la li%ne +8; 20 semble tolrante pour les deux caractres
nombre de feuilles@ plante

10

+8. 1.

+8; 13

+8; 21

+8; 22

+8; 2.

+8; 23

+83 19

+89 1;

+8= 1=

+8; 20

+8; 2= -i%nes

> 8a'l

Y8a'l

1igure 24 !ffet de 8a'l 6=3 mA7 sur le nombre de feuilles che( les li%nes de A truncatula en provenance de 0mra 6+8. 1.7" Aejel Fel 0bbes 6+83 197" +hala 6+89 1;7" !l<ef 6+8= 1=7 et 4oliman 6+8; 13" +8; 20" +8; 21" +8; 22" +8; 2."+8; 23" +8; 2=7 en plus de Demalon% inocules avec la souche 2011
-es mo)ennes sont calcules & partir de 10 & 12 rptions -a barre indique l#intervalle de confiance au seuil de 3B

Demalon%

.9

E0A

520

225

TN3.13d

4NaCl

5NaCl

1i- +"#

1igure 22 !ffet de 8a'l 6=3 mA7 sur l#efficacit de fixation d#a(ote 6!F0[7 che( les li%nes de M.truncatula en provenance de 0mra 6+8. 1.7" Aejel Fel0bbes 6+83 197" +hala 6+89 1;7" !l <ef 6+8= 1=7 4oliman 6+8; 13" +8; 20" +8; 21" +8; 22" +8; 2."+8; 23" +8; 2=7 en plus de Demalon% inocules avec la souche 2011
[!F0X matire sche des parties ariennes du traitement inocul @ matire sche des parties ariennes du tmoin absolu -es mo)ennes sont calcules & partir de 10 & 12 rptions -a barre indique l#intervalle de confiance au seuil de 3B

6"2)Jariabilit de rponse au sel des plantes &%6 dpendantes -es plantes alimentes en a(ote minral 3 mA sont %lobalement moins affectes par le sel que celles vivant en s)mbiose avec la souche 2011 4eules trois li%nes +8; 2=" +8; 22 et +8; 13 ont montr une inhibition du nombre de feuilles 6Fi%ure 2.7 !lles sont issues de la population de 4oliman +outes les autres donnent des mo)ennes statistiquement similaires au tmoin non trait -/une d/entre elles" +8. 1. semble m*me stimule par le traitement salin -/effet du sel sur l/efficacit d/assimilation a(ote est plus notable que celui exerc sur les feuilles Pour ce paramtre" la li%ne +8; 21 semble *tre la plus tolrante alors que la li%ne +8; 13 est la plus sensible avec un pourcenta%e d/inhibition de 33B 6Fi%ure 227 Rn trs haut niveau de variabilit est observ ainsi entre les li%nes appartenant & la population de 4oliman

J",alo -

TN5.19

TN6.18

TN7.17

TN8.15

TN8.21

TN8.22

TN8.23

TN8.25

TN8.20

TN8.27

020

.=

8ombre de feuilles @ plante

20

10

+8. 1.

+8= 1=

+8; 21

+8; 23

+83 19

+89 1;

+8; 13

+8; 20

+8; 22

+8; 2.

+8; 2= -i%nes +8; 2=

>8a'l

Y8a'l

1igure 26 !ffet de 8a'l 6=3 mA7 sur le nombre de feuilles che( les li%nes de A truncatula en provenance de 0mra 6+8. 1.7" Aajel Fel0bbes 6+83 197" +hala 6+89 1;7" !l <ef 6+8= 1=7 et 4oliman 6+8; 13" +8; 20" +8; 21" +8; 22" +8; 2."+8; 23" +8; 2=7 en plus de Demalon%" cultives sur 3 mA de 8>8K.
-a barre indique l#intervalle de confiance au seuil de 3B -es mo)ennes sont calcules & partir de 10 & 12 rptions
!00 ="3

3"0

2"3

+83 19

+8; 13

+8; 21

+8. 1.d

+8; 23

+89 1;

+8= 1=

+8; 20

+8; 22

+8; 2.

0"0

>8a'l

Y8a'l

li%nes

1igure 2@ !ffet du sel sur l#efficacit d#assimilation d#a(ote 6!00[7 che( les li%nes de A truncatula en provenance de 0mra 6+8. 1.7" Aajel Fel0bbes 6+83 197" +hala 6+89 1;7" !l <ef 6+8= 1=7 et 4oliman 6+8; 13" +8; 20" +8; 21" +8; 22" +8; 2."+8; 23" +8; 2=7 en plus de Demalon%" cultives sur 3 mA de 8>8K.
[!00X Aatire sche des parties ariennes du traitement a(ot@Aatire sche des parties ariennes du tmoin absolu X A40,@A40+ -a barre indique l#intervalle de confiance au seuil de 3B -es mo)ennes sont calcules & partir de 10 & 12 rptions

,l semblerait que les plantes en prsence de sel et & la faveur d/une disponibilit d/a(ote" multiplient leur feuilles parfois plus que le tmoin non trait au sel comme c/est le cas de +8. 1. Aais ceci ne la prserve pas d#une inhibition svre de la croissance pondrale

Demalon%

Demalon%

.;

l ressort de l!ensemble des rsultats obtenus une variabilit entre lignes pour la tolrance au sel" La tolrance des plantes alimentes en azote est plus importante que celle des plantes vivant en s#mbiose" L!e$pression de cette tolrance sous rgime s#mbiotique semble indpendante de celle e$prime en condition de nutrition %&'-dpendante -es mcanismes de tolrance de la morpho%nse foliaire semblent moins sensibles que la croissance en biomasse 'ertaines li%nes subiraient une stimulation de morpho%nse foliaire pour pallier & une chute de croissance 6"6)Jariabilit de rponse des souc'es bactriennes ? la salinit !n culture pure sur milieu solide L!A0>G' durant =2h" 100B des bactries anal)ses 6plus de 130 souches7 tolrent 22= mA de 8a'l 0 9;2 mA" 93B des bactries anal)ses sont inhibes 0u bout de 22h" ,. meliloti semble un peu plus tolrante que ,. medicae -a comparaison des souches au sein de chaque espce montre que leur tolrance dpend de leur provenance daphique et bioclimatique !n effet les souches de ,. meliloti provenant d/!nfidha 6(one saline7 sont nettement plus tolrantes que celles d/!l<ef 6r%ion de culture dans le sub humide7 -es souches de Aajel Fel0bbes et 0mra 6r%ions semi>arides7 montrent un comportement intermdiaire 6Fi%ure 237 -es rsultats obtenus sur milieu liquide montrent que les diffrentes phases de croissance sont affectes che( les souches anal)ses -#inhibition est diffrente che( les deux espces 'he( ,. meliloti, la rduction de la croissance ne dpasse pas 30B alors que che( ,. medicae" l/inhibition peut atteindre ;0B de son taux normal 6Fi%ure 297 6"@)Jariabilit de rponse ? la salinit (.0 mM) de symbioses impli:uant diffrentes souc'es bactriennes avec la ligne Eemalong -a nodulation paraQt plus touche che( les traitements inoculs avec l/espce ,. meliloti plutOt que ,. medicae Aais" l/inhibition n/est si%nificative que che( les plantes inocules avec la souche de rfrence 2011 6Fi%ure 2=7 ,l en est de m*me de la croissance des parties ariennes

@)#raits p'ysiologi:ues lis ? la tolrance ? la salinit


-a rponse au sel" en condition de fixation s)mbiotique de l/a(ote 6F487 de deux li%nes locales de Medicago truncatula prselectionne pour rponse contraste vis>&>vis du sel a t

.9

anal)se par comparaison & la li%ne de rfrence Demalon% 0prs %ermination" les plantules sont inocules avec la souche de ,inorhi-obium meliloti 2011 puis cultives sur solution nutritive are exempte d/a(ote minral -e sel 6=3 mA 8a'l7 est apport dans le milieu de culture & des plantes nodules -a culture a t conduite sous serre vitre dans des conditions contrOles d/humidit et de temprature -es mesures ont port sur la croissance et le statut minral des plantes -a F48 a t estime par des mesures hebdomadaires de l/activit rductrice de l/act)lne 60G07 des plantes nodules -es rsultats montrent que la li%ne ;>20 provenant de la r%ion de 4oliman exprime les m*mes potentialits de croissance aussi bien en prsence qu/en absence de sel 6Fi%ure 2;7 Par contre" la li%ne 9>1; ori%inaire de la r%ion de +hala est la plus sensible" sa croissance est rduite de 33B en prsence de =3 mA 8a'l -a li%ne Demalon% occupe une position intermdiaire -a nodulation et la croissance nodulaire sont affectes uniquement che( la li%ne 9>1; 6Fi%ure 2;7 !n l/absence de sel" les li%nes locales semblent exprimer les potentialits les plus leves de F48 : l/0G0 est s)stmatiquement plus leve che( les li%nes locales 6particulirement 9> 1;7 que la li%ne Demalon% 6Fi%ure 297 -e sel rduit si%nificativement ce paramtre che( les . li%nes 'et effet dpressif qui s/installe ds la premire semaine de traitement salin s/accentue par la suite 0u terme de 3 semaines de traitement" l/0G0 des plantes soumises au sel ne reprsente que 20 & 20 B de celle des plantes tmoins -/anal)se des relations entre la F48 et la rpartition ionique due & la salinit 6+ableau ;7 montre que la tolrance de la li%ne ;>20 est associe & sa capacit de prot%er ses or%anes photos)nthtique contre l/accumulation de 8aY et de 'l>
100 #.meliloti

100 I des souc'es tolrantes

#.medicae

I des souc'es tolrantes

=3 0mra AFel0bbes !nfidha 30 !lIef 13 23= .22 20 22; 23 &aC l (mM)

=3

!nfidha !lIef 30 23= 13 .22 20 22; 23 &aCl (mM)

1igure 2. +olrance & la salinit sur milieu solide che( les deux espces de ,inorhi-obium en fonction de la provenance des souches

20

."0

."0 Croissance B%720nm


<,,1 <,,1>8a'l

4,,2 4,,2>8a'l

Croissance B%720nm

2"0

2"0

1"0

1"0

2;h

99h

22h

=2h

120h

122h

120h

122h

19;h

te mps

te mps

1igure 27 +olrance & la salinit 622; mA7 sur milieu liquide che( deux souches de ,inorhi-obium appartenant aux deux espces" <,,1 6,. meliloti7 et 4,,2 6,. medicae7

20 8odulation 6nod@pl7

20

0 2011 <,,1 <,,2 0mA 8a'l


30

A102 30mA 8a'l

4,,2

4,,3 4ouches

A40 6%@pl7

23

0 +8 2011 <,,1 <,,2 A102 4,,2 4,,3 +0 4ouches

0mA 8a'l

30mA 8a'l

1igure 25 ,mplication des souches de ,inorhi-obium dans la tolrance & la salinit che( la li%ne Demalon% de M. truncatula pour la nodulation et la croissance des parties ariennes
-es mo)ennes sont calcules & partir de 10 & 12 rptions -es barres reprsentent les intervalles de confiance au seuil de 0 03

19;h

0"0 =2h 22h 2;h 99h

0"0

21

Mati!re s!c'e* g"plante-4

320 225 220 125 120 025

&aCl* 0 mM 5. mM .9 21

2. 22

99

=1

0 !ffet du sel 6=3 mA 8a'l7 sur la croissance pondrale de deux li%nes 1igure 2=" -i%ne 9 1; Demalon% -i%ne ; 20 et ; 20 ori%inaire locales de Medicago truncatula" 9 1; provenant de la r%ion de +ala de la 4ebIha de 4oliman" par comparaison & la li%ne de rfrence Demalon% -es plantes dpendant strictement de la fixation s)mbiotique de l/a(ote pour leur nutrition a(ote -es chiffres ports au dessus des histo%rammes correspondent aux masses mo)ennes de matire sche des nodules Ao)ennes de 10 rptitions et intervalles de scurit au seuil de 3B

$R$* Kmol"plante-4"'eure-4

12 10 8

0 mA 8a'l =3 mA 8a'l

L*,+/e 6018

$R$* Kmol"plante-4"'eure-4

6 4 2 0 1 2 3 4 5

12 10 8 6 4 2 0 1 2 3

Jemalo+,

22

$R$* Kmol"plante-4"'eure-4

12 10 8 6 4

L*,+/e 8020

1igure 2- 'intique de la fixation s)mbiotique de l/a(ote" estime par l/activit 2 rductrice de l/act)lne" che( les li%nes de M. trucatula cultives en l/absence ou en prsence de =3 mA 8a'l -es chiffres 1" 2" ." 2 et 3 correspondent aux mesures 0 successives effectues respectivement au bout 1 2 3 4 de 1" 2" 5 ." 2 et 3 semaines de traitement
'haque point est la mo)enne de trois mesures

>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>> Kr%anes >>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>> 8odules Gacines +i%es Feuilles >>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>> &aL* Kmol"g-4 M) -i%ne 9 1; 1029 1322 12;. ;0= Demalon% 1220 1233 ;90 22; -i%ne ; 20 1;9. 122= 992 21. Cl-* Kmol"g-4 M) -i%ne 9 1; 9.; 911 29; .02 Demalon% 999 ;1. 392 309 -i%ne ; 20 921 330 229 1=. >>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>

#ableau = 0ccumulation de 8aY et de 'l> 6Tmol %>1 A47 dans les or%anes des li%nes de M. truncatula Ao)ennes de 10 rptitions

.) ,olymorp'isme de tolrance ? la salinit pour la germination


-a rponse de la %ermination au sel 68a'l7 a t tudie che( les 9 populations naturelles locales de Medicago truncatula 6+ableaux 9a " 9b7 0 partir de leur capacit %erminative & 100 et 130 mA 8a'l" la population de 4oliman issue d#une sebIha s#est avre la plus tolrante" et celle de Aajel Fel0bbes issue de l#aride des plus sensibles

2.

#ableau -a" !ffet du sel sur la vitesse de %ermination Zariation du temps 30B 6temps ncessaire pour obtenir 30 B de la capacit %erminative7 avec la salinit du milieu >>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>> temps de %ermination de 30 B 6h7 Populations >>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>> 0 100 130 mA 8a'l >>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>> !nfidha 92 2 11; 120 0mra 99 = 1=; 220 Delma =2 212 2.5 Aajel Fel0bbas 31 2 1=. 27@ 4oliman 3; 1 112 0-7 Dendouba 22 9 129 19. !l<ef =3 9 103 120 +hala 3. 102 220 Fja == 122 122 >>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>> #ableau -b" !ffet du sel sur la capacit %erminative en B de %ermination sous traitement salin par rapport & la %ermination sans sel >>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>> 'apacit de %ermination Populations >>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>> > 100 130 mA 8a'l >>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>> !nfidha .9 0= 0mra 22 0. Delma 22 06 Aajel Fel0bbas 42 02 4oliman 77 24 Dendouba .9 02 !l<ef .; 10 +hala .3 10 Fja 20 09 >>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>

(8priences en cours
1 -es li%nes +89 1; et +8; 20 ont t slectionnes pour des tudes ultrieures en raison de leur pol)morphisme pour de nombreux caractres tels que : dlai de floraison" port"

22

tolrance & la salinit" morpholo%ie foliaire\1es croisements ont t raliss entre la li%ne modle Demalon% et les li%nes +89 1; et +8; 20 -es h)brides F1 sont maintenues par culture in vitro et propa%es par boutura%e 1es populations F2 sont en cours de ralisation N le matriel obtenu sera parta% entre les laboratoires 1es populations de li%nes recombinantes seront cres & partir de ces li%nes parentales 1es cartes %ntiques seront ralises ds le stade F2 2 1es expriences prliminaires ont montres que la li%ne +89 1; tait sensible 6et +8; 20 tolrante7 & la salinit tant au niveau de la croissance de la plante qu/au niveau de la fixation s)mbiotique de l/a(ote 'es 2 li%nes serviront pour une approche ph)siolo%ique" %ntique et molculaire de la tolrance & la salinit . -es capacits s)mbiotiques de ces 2 li%nes seront tudies s)stmatiquement tant avec les souches isoles dans ce pro%ramme 'A'R qu/avec une collection de souches de rfrence -es couples plante x bactrie les plus efficaces seront slectionns 1es tests d/inoculation au champ seront entrepris

Conclusions et perspectives

-/action entreprise a totalement remplis les objectifs %nraux que nous nous tions fixs initialement 1 8ous avons identifis des populations naturelles de Medicago truncatula dans des lieux & caractristiques pdo climatiques contrastes 1ans chaque population" des li%nes de M.truncatula ont t obtenues et leur description molculaire et phnot)pique a t entreprise 0 partir des sols prlevs ainsi que des nodules collects in situ une collection d/isolats bactriens du %enre ,inorhi-obium a t constitue 'es collections de plantes Medicago et de bactries associes sont les premires ralises en +unisie 2 -es visites rciproques de chercheurs et tudiants FranJais et +unisiens ont permis de tisser des liens troits entre les 2 laboratoires -/attribution d/une bourse de +hse ] Pa)s en 1veloppement ^ & l/tudiante Fatma -a(reI lui a permis de commencer en 2002 une +hse & +oulouse en cotutelle entre les 2 Gesponsable de ce projet 'A'R 'ette +hse reprsente une attache trs solide entre les partenaires et une %arantie de la poursuite de la collaboration . -es publications se sont pour l/instant limites & des prsentations dans des con%rs internationaux mais plusieurs articles sont en cours de prparation

23

2 -e matriel obtenu pendant ce contrat reprsente une valeur scientifique considrable ,l est parta% sur un pied d/%alit entre les laboratoires participants 3 -es expriences en cours sont ambitieuses et permettent une approche pluridisciplinaire des bases %ntiques et ph)siolo%iques de la tolrance & la salinit -es participants sont convaincus de l/importance de poursuivre la collaboration existante -e soutient du 'A'R est %randement remerci pour l/importance dcisive qu/il a eu dans les annes coules 8ous esprons que le 'A'R pourra continuer & nous aider dans l/avenir