AO DE LA INVERSIN PARA EL DESARROLLO RURAL Y LA SEGURIDAD ALIMENTARIA

PRCTICA N01

BIOSEGURIDAD E IDENTIFICACIN DE MICROORGANISMOS

ALUMNO: MEJIA ROCHA JOHANN LUIGI DOCENTE: Blgo. Mblgo. Eterio ALVA MUOZ. ASIGNATURA: MICROBIOLOGA 2013 _________________________________________________________________________ Microbiologa UNS

INTRODUCCIN

Qu es un microscopio?

El microscopio es una de las herramientas bsicas en el estudio de la biologa. Mediante un conjunto de lentes, el microscopio aumenta el tamao de objetos que son demasiado pequeos para ser visualizados a simple vista. Dos principios estn involucrados en el uso del microscopio: la magnificacin (capacidad de aumentar el tamao de una imagen) y la resolucin (capacidad de producir una imagen ntida, o la capacidad del instrumento para dar imgenes bien definidas de puntos situados muy cerca uno del otro). Existen distintos tipos de microscopios, cada uno con un propsito particular, ya que cada tcnica de microscopa permite observar estructuras dentro de cierto rango de tamao, dependiendo del lmite de resolucin del microscopio empleado, es decir, la separacin mnima que permite que dos objetos puedan ser distinguidos como diferentes.

Desde su invencin, la microscopa ha experimentado increbles adelantos, aumentando no solo su capacidad de resolucin sino tambin el poder de amplificacin. Se los puede clasificar en dos grandes grupos: microscopios pticos y microscopios electrnicos. La gran diferencia entre ambos tipos es la radiacin que emplean para iluminar el objeto de inters y el lmite de resolucin, que depende de las caractersticas fsicas de la radiacin empleada (luz visible o electrones). En el caso de los microscopios pticos, la radiacin utilizada es la luz visible. En los microscopios electrnicos, la radiacin es un haz de electrones, posibilitando un poder de resolucin de 0,1nm.

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Estructura de la clula bacteriana

Las bacterias son organismos relativamente sencillos. Sus dimensiones son muy reducidas, unos 2 m de ancho por 7-8 m de longitud en la forma cilndrica (bacilo) de tamao medio; aunque son muy frecuentes las especies de 0,5-1,5 m. Al tratarse de organismos procariotas, tienen las caractersticas bsicas

correspondientes como la carencia de un ncleo delimitado por una membrana aunque presentan un nucleoide, una estructura elemental que contiene una gran molcula circular de ADN. El citoplasma carece de orgnulos delimitados por membranas y de las formaciones protoplasmticas propias de las clulas eucariotas. En el citoplasma se pueden apreciar plsmidos, pequeas molculas circulares de ADN que coexisten con el nucleoide, contienen genes y son comnmente usados por los procariontes en la conjugacin. El citoplasma tambin contiene vacuolas (grnulos que contienen sustancias de reserva)

y ribosomas (utilizados en la sntesis de protenas).

Una membrana citoplasmtica compuesta de lpidos rodea el citoplasma y, al igual que las clulas de las plantas, la mayora posee una pared, que en este caso est compuesta por peptidoglicano (murena). La mayora de bacterias, presentan adems una segunda membrana lipdica (membrana externa) rodeando a la pared celular. El espacio comprendido entre la membrana citoplasmtica y la pared celular (o la membrana externa si esta existe) se denomina espacio periplsmico. Algunas bacterias presentan una cpsula y otras son capaces de desarrollarse como endosporas, estados latentes capaces de resistir condiciones extremas. Entre las formaciones exteriores propias de la clula bacteriana destacan los flagelos y los Pili.

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OBJETIVOS

Reconocer las partes del microscopio y saber el mecanismo de funcionamiento para un manejo adecuado. Identificar y observar algunas bacterias con ayuda del microscopio. Aplicar el concepto de bioseguridad en las prcticas de laboratorio.

MATERIALES

Bacteria-muestra Portaobjetos Cubreobjetos Microscopio Aceite de inmersin

PROCEDIMIENTOS

I)

MICROSCOPIO

1. Reconocer las partes del microscopio previa introduccin del marco terico del docente a cargo de la prctica de laboratorio. Contrastar la informacin obtenida observando detenidamente de cerca el microscopio. _________________________________________________________________________ Microbiologa UNS

2. Luego manipular el microscopio sin muestra a identificar, para familiarizarse con el instrumento.

II)

RECONOCIMIENTO DE BACTERIAS

1. Con respecto al microscopio, debemos colocar el objetivo de menor aumento en posicin de empleo y bajar la platina completamente. Si el microscopio se recogi correctamente en el uso anterior, ya debera estar en esas condiciones. 2. Colocar la bacteria-muestra sobre la platina sujetndola con las pinzas metlicas. 3. Comenzar la observacin con el objetivo de 4x (ya est en posicin) o colocar el de 10 aumentos (10x) si la preparacin es de bacterias trabaje con los dems aumentos para una mejor comparacin. 4. Realizar el primer enfoque. 5. Emplear el objetivo de inmersin. 6. Realizar el segundo enfoque. 7. Observar por los oculares. 8. Contrastar la informacin en laboratorio con informacin extra para notar posibles caractersticas morfolgicas que puedes identificar en la prctica de laboratorio.

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RESULTADOS

Escherichia coli _________________________________________________________________________ Microbiologa UNS

Staphylococcus

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DISCUSIONES

Otra vista de Escherichia coli, no obtenida con nuestro microscopio

Es un bacilo que presenta forma alargada, cilndrica (mayor relacin superficie volumen)

Esta y otras bacterias son necesarias para el funcionamiento digestivo, correcto de un

del proceso producir

adems Es

las vitaminas B y K.

bacilo que reacciona negativamente a la tincin de Gram (gramnegativo).

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Es anaerobio facultativo, mvil por flagelos peritricos (que rodean su cuerpo), no forma esporas, es capaz de fermentar la glucosa y la lactosa. Es una bacteria utilizada frecuentemente en experimentos de gentica y biologa molecular. __________________________________________________________________

Micrografa SEM de colonias de S. aureus; note los grupos como uvas, comunes a las spp. deStaphylococcus.

Forma redondeada (relacin superficie volumen mnima). Poca relacin con el exterior.

Morfolgicamente los Staphylococcus se presentan de forma: Racimo de uvas, y son cocos grampositivos. crecen todos en Los

estafilococos sobre casi

fcilmente los medios su

bacteriolgicos,

cultivos

crecimiento es mejor en el medio sal manitol y agar sangre, esto puede llegar a dar problemas en el corazn o hgado, tales como la prdida de un hgado. _________________________________________________________________________ Microbiologa UNS

Es un coco anaerobio facultativo, esto significa que puede crecer tanto en condiciones con oxgeno como carente de ste. Su mayor velocidad de crecimiento es a 5 - 25 C; pero tambin se puede ver en activa fisin binaria entre 30 y 27 C. Adems, producen catalasa, lo que los diferencia de los estreptococos. Tiene importancia mdica principalmente el S. aureus, y en humanos adems de ste, el S. saprophyticus y el S. epidermidis.

CUESTIONARIO

Por qu se usa aceite de cedro en el microscopio?

Tcnica de Observacin por Inmersin

Es una tcnica de observacin que no compete a la preparacin misma de la placa, sino a la correccin de un problema de difraccin de la luz en el microscopio. Para ello se utiliza en aceite de cedro o de inmersin, una gota del cual debe ir colocado entre el objeto y el objetivo de 100x, necesitando estos, estar en contacto directo.

Funcin del aceite de inmersin

Sabemos que el aire tiene tambin un ndice de difraccin de la luz aunque no muy considerable. En el microscopio, la luz que sale de la fuente y atraviesa el condensador, llega al objeto al cual debe iluminarlo a trasluz, para luego recorrer una columna de aire hasta llegar al lente objetivo.

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Este ltimo tiene un ndice de difraccin de la luz equivalente a 1.1515, muy superior al de la columna de aire, lo cual produce una alteracin en la visualizacin del objeto. El aceite de cedro que tiene un ndice muy parecido al del objetivo, es colocado desplazando a la columna de aire y resolviendo este problema en forma aceptable. Slo debe usarse, sin embargo, con el objetivo de inmersin Empleo del objetivo de inmersin a. Bajar totalmente la platina. b. Subir totalmente el condensador para ver claramente el crculo de luz que nos indica la zona que se va a visualizar y donde habr que echar el aceite. c. Girar el revlver hacia el objetivo de inmersin dejndolo a medio camino entre ste y el de x40. d. Colocar una gota mnima de aceite de inmersin sobre el crculo de luz. e. Terminar de girar suavemente el revlver hasta la posicin del objetivo de inmersin. f. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente toca la gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la lente. g. Enfocar cuidadosamente con el micromtrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de inmersin y la preparacin es mnima, aun menor que con el de 40x por lo que el riesgo de accidente es muy grande. h. Una vez se haya puesto aceite de inmersin sobre la preparacin, ya no se puede volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se manchara de aceite. Por tanto, si desea enfocar otro campo, hay que bajar la platina y repetir la operacin desde el paso 3. i. Una vez finalizada la observacin de la preparacin se baja la platina y se coloca el objetivo de menor aumento girando el revlver. En este momento ya se puede retirar la preparacin de la platina. _________________________________________________________________________ Microbiologa UNS

Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersin en posicin de observacin. j. Limpiar el objetivo de inmersin con cuidado empleando un papel especial para ptica. Comprobar tambin que el objetivo 40x est perfectamente limpio.

Cul es la distancia del rea de trabajo del microscopio entre la muestra y el objeto?

Un concepto importante en la microscopa es el de "distancia de trabajo", el cual describe la distancia entre el lente del microscopio y la parte superior del preparado a observar. En otras palabras, la distancia de trabajo de un microscopio es una medida del rea libre disponible para que el observador trabaje y manipule el preparado, desde el extremo del microscopio hasta la parte superior del objeto observado en la plataforma o platina del mismo.

Relacin con el aumento

En general, la distancia de trabajo de todo microscopio se ve reducida a medida que el aumento se magnifica. Como en la mayora de los microscopios compuestos, la lente se mueve cerca de la muestra para magnificar el aumento; la distancia de trabajo disponible entre la lente y el preparado se reducen considerablemente mientras que el aumento se magnifica.

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Trabajar con muestras grandes o vivientes

La distancia de trabajo rara vez es una consideracin cuando se trabaja con preparados delgados, estticos o muy pequeos que permiten que la lente se baje por completo para lograr un aumento total. Sin embargo, en el caso de muestras ms grandes, frgiles o con movimiento, quien usa el microscopio debe tener en cuenta la distancia de trabajo al disear un protocolo experimental y darse cuenta de que la necesidad de ubicar y manipular la muestra puede restringir el aumento posible en cualquier microscopio. Contaminacin y distorsin

Al trabajar con una muestra grande o con movimiento con un aumento cercano a la misma, la distancia de trabajo se vuelve crticamente importante para evitar el contacto con la lente, lo cual puede generar tanto la contaminacin de la muestra o la distorsin de la imagen. Por lo tanto, asegrate siempre de que la lente y la platina del microscopio hayan sido adecuadamente limpiadas y desinfectadas, y controla la distancia de trabajo para mantener una distancia apropiada en cuanto al tamao, la sensibilidad y el posible movimiento de la muestra.

CONCLUSIONES

Luego de la prctica de laboratorio, logramos identificar y contrastar las partes del microscopio, y usarlo de manera adecuada.

Logramos, gracias al uso del microscopio, observar e identificar nuestras bacterias-muestras, comparamos la Escherichia coli y el Staphylococcus, notamos que la primera es un bacilo y presenta una forma de bastn, en cambio en la segunda comprobamos la forma redondeada que esta tiene _________________________________________________________________________ Microbiologa UNS