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Espectrofotometria. Fonaments Qumics. Univ. Girona 1.

Apuntes de espectrofotometra.
(ver. maig02)
(por Florencio de la Torre)


Indice
Introduccin. 2
El espectro electromagntico. 2
Las molculas absorben radiacin electromagntica. 5
Cuantificacin. 7
Ley de Beer. 7
Errores de medida. Desviaciones de la ley de Beer. 8
Calibracin. 9
Parmetros de Calidad. 9
El espectrofotmetro. 10
Tipos de espectrofotometras. 13
Espectrofotometria de absorcin molecular VIS-UV. 13
Espectrofotometria de absorcin molecular IR. 15
Espectrofotometria de absorcin y de emisin atmica. 16
Espectrofotometra con atomizadores electrotrmicos. 18
Espectrofotometria de emisin con plasma. 19
Espectrofotometria de fluorescencia molecular. 19
Otros mtodos. 20
Resonancia Magntica Nuclear (RMN). 20
Espectroscopia de masas (MS). 20


Bibliografia.

Fundamentos de qumica analtica. D.A. Skoog. 4 ed. Ed. Revert. 1996
Qumica analtica . Gary D. Christian. 2 ed. Ed. Limusa. 1981
Anlisis qumico cuantitativo. Daniel C. Harris. 2 ed. Ed. Revert. 2001


Espectrofotometria. Fonaments Qumics. Univ. Girona 2.
Introduccin.

Si observamos una disolucin acuosa de Cu
2+
al trasluz percibimos un color azulado.
Esta coloracin se debe a la interaccin de los iones cobre con la radiacin lumnica
que atraviesa la disolucin. Ms concretamente, se debe a la absorcin de algunas
radiaciones lumnicas que corresponden al color complementario (en este caso el
amarillo) Las radiaciones no absorbidas son las que atraviesan la disolucin sin
obstculo alguno y llegan a nuestro ojo. Estas radiaciones transmitidas
corresponden al color azul.

Adems, si comparamos el color de dos disoluciones de Cu
2+
con diferente
concentracin, observamos que a mayor concentracin corresponde una mayor
intensidad del color azul de la disolucin. Por lo tanto podemos adivinar la
sustancia que hay en una disolucin, segn el color de esta, y an ms podemos
saber la cantidad de esa sustancia, segn la intensidad de ese color.

Esta propiedad de interaccin de la luz con una gran cantidad de especies qumicas
nos permitir identificar y cuantificar analitos, dando lugar a una rama de la
Qumica Analtica denominada espectrofotometra.

Espectrofotometra significa medida del espectro de la luz y se refiere a la
medida del tipo y cantidad de luz que se obtiene de una disolucin. A continuacin
explicamos que es el espectro de la luz y como se produce la interaccin con la
materia.


El espectro electromagntico.

La luz se puede explicar como un conjunto de radiaciones que se mueven por todo
el espacio. Aquellas detectables por nuestro ojo corresponden a la luz visible, pero
la mayora son invisibles para nosotros.

Estas radiaciones se pueden describir como partculas y como ondas. La
descripcin como onda se basa en que la luz son campos elctricos y magnticos
que oscilan perpendicularmente a la direccin de traslacin por el espacio dando
lugar a ondas transversales.

Una radiacin electromagntica (cualquier fenmeno ondulatorio) se define
generalmente mediante dos parmetros:
Longitud de onda (l): distancia recorrida por un ciclo completo. De cresta a
cresta de la onda.
Frecuencia (n): nmero de oscilaciones completas que realiza la onda por segundo.

Espectrofotometria. Fonaments Qumics. Univ. Girona 3.
En el vaco, el producto de estos dos parmetros es constante e igual a la velocidad
de traslacin de la luz
c =
donde c es la velocidad de la luz en el vaco (3.10
8
m/s)

La longitud de onda se expresa en unidades de longitud y varia entre dcimas de
nanmetro a varios metros. La frecuencia se expresa en ciclos por segundo (s
-1
) o
Hertzios (Hz) Un Hz es igual a 1 ciclo/s.

Mediante la frmula anterior podemos calcular l a partir de n o viceversa

Ejem. 1. Cul es la frecuencia de una radiacin electromagntica de l= 650 nm
que corresponde al color rojo?

Hz s
m
nm
nm
s m c
14 1 14
9 8
10 6 , 4 10 6 , 4
1
10
650
/ 10 3
= =

= =
-
l
n

Por otro lado, la luz se puede describir como una partcula. En este caso se dice
que es una partcula de energa llamada fotn. Tambin se puede describir como un
paquete de energa. La energa que tiene un fotn es proporcional a la frecuencia
de la radiacin que forma mediante la ecuacin
h E =
donde h es la constante de Planck (=6,6.10
-34
J.s)

y tambin se puede relacionar con la longitud de onda
l
c
h E =
Ejem. 2. Cul ser la energa del fotn correspondiente a la radiacin roja de
l=650 nm? Y la de un fotn de una radiacin ultravioleta de l=50 nm?

z
y
campo elctrico
campo magntico
Figura 1. Radiacin electromagntica.
Espectrofotometria. Fonaments Qumics. Univ. Girona 4.
J 10 3,0 10 4,6 10 6,6
-19 14 -34
= = = h E
J 10 4,0
m 10 50
m/s 10 3
10 6,6
18 -
9
8
34 -
=

= =
-
l
c
h E
vemos como las radiaciones ultravioletas (con menor l) son ms energticas que las
visibles.

Por lo tanto la energa es inversamente proporcional a la longitud de onda y
directamente proporcional a la frecuencia. La luz roja (con mayor l y menor n) es
menos energtica que la luz azul (con menor l y mayor n)

El conjunto de radiaciones electromagnticas se llama espectro electromagntico
y es conveniente agruparlas en regiones para poder conocer sus propiedades. En la
fig. siguiente se muestran las zonas del espectro segn la clasificacin ms
aceptada. Como se puede observar la zona del visible (radiaciones percibidas por
nuestro ojo) es muy pequea en comparacin con la gran amplitud del espectro.

Ten en cuenta, tambin, que aunque hablamos de una radiacin determinada (l),
fsicamente es imposible aislar dicha radiacin. Siempre podremos obtener un
rango de radiaciones pequeo segn la exactitud del dispositivo de seleccin
(difractores de radiacin y filtros), pero nunca una sola. De la misma manera que
no podemos obtener o aislar un punto de una recta, sino un trozo pequeo (un
conjunto de puntos)

Figura 2. Espectro de radiaciones electromagnticas.
Espectrofotometria. Fonaments Qumics. Univ. Girona 5.

Las radiaciones ms importantes con aplicacin al anlisis qumico son:

Rayos X 0,1-10 nm fluorescencia
Ultravioleta (UV) 10-380 nm absorcin/emisin
Visible (VIS) 380-780 absorcin/emisin/colorimetras
Infrarrojo (IR) 780 nm- 300 mm infrarrojos
Microondas 300 mm 0,01 m
Radio 0,01 10 m resonancia electrnica /nuclear




Las molculas absorben radiacin electromagntica.

Cuando una molcula absorbe un fotn su energa interna aumenta y pasa a un
estado inestable, por lo que rpidamente vuelve a liberar esa energa sobrante y
vuelve al estado inicial que es ms estable. El estado inicial se denomina estado
fundamental y el estado ms energtico se llama estado excitado. La absorcin de
radiacin produce un paso del estado fundamental al excitado (excitacin) y en el
proceso contrario (llamado relajacin) hay una liberacin de energa. Esta energa
liberada en la relajacin puede ser en forma de calor o en forma de radiacin
electromagntica otra vez. Este ltimo proceso de desprendimiento de radiacin
se llama emisin.

Estos procesos se pueden representar como una reaccin qumica y en un diagrama
de energa


*
M h M
emisin
absorcin

+ n





Que le pasa a la molcula al absorber una radiacin electromagntica?

El aumento del nivel energtico interno de la molcula produce unos cambios en los
enlaces intramoleculares y/o en el movimiento de los electrones alrededor del
tomo. Estos cambios se llaman transiciones y se clasifican en tres tipos:

e
n
e
r
g

a

absorcin emisin
estados excitados
estado fundamental
Espectrofotometria. Fonaments Qumics. Univ. Girona 6.
transiciones electrnicas tomos
transiciones vibracionales molculas o iones
transiciones rotacionales molculas o iones

energa requerida

As, las radiaciones ms energticas (VIS, UV y mayores) comunican suficiente
energa como para alterar el movimiento orbital de los electrones, tanto alrededor
de un tomo slo como de los orbitales de enlace entre dos tomos. Las
radiaciones menos energticas (IR) producen cambios en los movimientos de
vibracin y rotacin de la molcula.

Estas ltimas son muy especficas de cada enlace y por lo tanto de cada molcula
por lo que se utilizan como tcnica de identificacin.

Para realizar una identificacin generalmente se hace incidir sobre la sustancia
estudiada radiaciones electromagnticas de diferente energa. Normalmente se
estudia un rango de radiaciones y se va aumentando (o disminuyendo) la longitud de
onda de las radiaciones incidentes desde un extremo del rango hasta el extremo
opuesto. As se obtiene un espectro de absorcin de la sustancia, que se puede
representar grficamente como se muestra en la figura.

Cada uno de los picos del espectrograma corresponde aproximadamente a una
transicin energtica de un enlace molecular, por lo tanto el espectro es nico de
cada molcula. Es como una huella digital de esa molcula donde quedan
registrados todos los enlaces y sus transiciones correspondientes. Entonces, si
tenemos el espectro de absorcin de una molcula podemos identificarla con
bastante exactitud.





Figura 3. Espectro de infrarojos del agua pura.
Espectrofotometria. Fonaments Qumics. Univ. Girona 7.
T
c
T
b
Cuantificacin.
Ley de Beer.

La cantidad de radiacin electromagntica absorbida por un analito se puede
relacionar cuantitativamente con la concentracin de dicha sustancia en disolucin.

Se define la transmitancia (T) como la fraccin de radiacin incidente transmitida
por la disolucin. Si la potencia radiante que incide sobre la disolucin es P
o
i P la
potencia radiante que sale, entonces


o
P
P
T =


Adems se observa que la potencia de la energa
transmitida disminuye geomtricamente
(exponencialmente) con la concentracin c y con la
distancia b recorrida a travs de la disolucin.


c -k
10 T

=
b -k'
10 T

=






donde k y k son ctes de proporcionalidad, y combinando ambas y aplicando
logaritmos
c b -a
10 T

=

A c b a T log = = -

que es la expresin matemtica de la Ley de Beer y que indica la relacin directa
entre la absorbancia de un analito y su concentracin en disolucin.

a es la absortividad. Es una constante e indica la absorcin de cada analito por
unidad de concentracin y unidad de distancia recorrida por el haz. Cuando se usan
unidades molares se llama absortividad molar (e) y se expresa en L/mol.cm

P
o
P
b
c
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Ejemplo:
Cual ser la transmitancia y la absorbancia de una disolucin de 1,00 mg de Fe en
100 mL en una celda espectrofotomtrica de 1 cm. Absortividad del Fe es 15,5
L/g.cm
a absorbanci de unidades 0,155
L
g
0,01 1cm
cm g
L
15,5 c b a A =

= =
cia transmitan de unidades 0,70 10 10 T
-0,155 -A
= = =


En la prctica esta ley no se cumple exactamente y para determinar la
concentracin de un analito a partir de las medidas de absorbancia, es preciso
realizar un proceso de calibracin.

Errores de medida. Desviaciones de la ley de Beer.

Errores instrumentales:

Hay dos errores de lectura inherentes al detector espectromtrico. El primero se
produce cuando hay una gran cantidad de analito y, por lo tanto, una gran
absorbancia de radiacin. Al detector llega muy poca potencia radiante y se
encuentra en la zona lmite de deteccin, con lo que no responde bien a
pequesimas variaciones de absorbancia.
El segundo se produce cuando hay muy poco analito y, por tanto, muy poca
absorbancia. Esto implica que casi toda la potencia incidente atraviesa la
disolucin y llega al detector. Entonces, el detector espectromtrico esta en la
zona de saturacin y no aprecia bien pequeas variaciones en la absorcin.

En la grfica se muestra el error (en %) que se calcula matemticamente para toda
la escala del espectro.


En la figura se observa que hay
un error mnimo entre el 20 y el
65% de T (0,200 a 0,700
unidades de absorbancia). Los
espectrofotmetros ms
sensibles permiten medidas con
un error aceptable entre 0,100
y 1,500 unidades de
absorbancia.

Otros errores relacionados con
el aparato son los debidos a que
los espectrofotmetros no
Figura 4. Error relativo del espectrofotmetro.
Espectrofotometria. Fonaments Qumics. Univ. Girona 9.
pueden seleccionar una radiacin de una nica l, sino un rango. Esto introduce un
error ya que hay interacciones con otras absorciones . En la medida que el aparato
sea ms exacto en la seleccin de la l, este error se minimiza.

Errores qumicos:

Hay analitos que tienen una ionizacin parcial y la especie ionizada puede tener
diferente absorbancia que la especie molecular. Esto condiciona la absorbancia al
desplazamiento del equilibrio
AH A
-
+ H
+

absorbe transparent
En este caso el error se puede evitar fijando el pH de la disolucin con un tampn.

Otro error esta relacionado con la variaciones en el ndice de refraccin de la
disolucin. Este efecto es significativo en disoluciones de elevada concentracin.

En estos casos una manera de evitar el error es realizar la calibracin de la tcnica
con patrones que se mezclan con la disolucin problema. Ver el mtodo de
Calibracin mediante Adiciones Mltiples. De esta manera los efectos afectan por
igual al analito que a los patrones.

Calibracin.

Dado que hay una serie de fenmenos que no permiten la aplicacin de la ley de
Beer, en la prctica se realiza siempre una calibracin de la tcnica de medida, con
la cual obtenemos una relacin matemtica entre la concentracin y la absorbancia.
El procedimiento de la calibracin se basa en medir la absorbancia de varias
disoluciones patron (de concentracin conocida), en las mismas condiciones que se
mide la absorbancia de la disolucion problema, y se hace una interpolacin.

En los apuntes de la asignatura: Mtodos de Cuantificacin en
Espectrofotometras, se describe con detalle todo el procedimiento y se incluyen
problemas numricos de ejemplo.



Parmetros de Calidad.

La calidad de una tcnica espectrofotomtrica expresada en trminos de
incertidumbre, se basa esencialmente en tres parmetros: sensibilidad, lmite de
deteccin y rango de linealidad.

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Sensibilidad: Es la concentracin requerida para dar un 1% de absorbancia (99% de
transmitancia o lo que es lo mismo 0,0044 unidades de absorbancia. A medida que
esta concentracion es menor, la sensibilidad de la tcnica es mayor porque es
necesaria menos concentracin para producir una seal en el detector.

Lmite de deteccin: Es la mnima concentracin que se puede medir con la
tcnica y con un elevado nivel de certidumbre. Est relacionado con el ruido de
fondo del aparato, es decir la seal que mide el aparato cuando se introduce un
blanco. Una manera de calcularlo es multiplicar por tres la seal correspondiente
al ruido de fondo.

Rango de linealidad: Es el intervalo de concentraciones dentro del cual podemos
medir una muestra problema con un elevado nivel de certidumbre. Generalmente a
partir del valor mximo de este rango, la seal (absorbancia) deja de tener una
relacin lineal con la concentracin y la curva se hace horizontal, tendiendo a un
valor mximo de absorbancia. Las muestras o patrones que estan fuera de este
rango no se pueden medir con seguridad con la tcnica empleada.



El espectrofotmetro.

Es el nombre genrico de todos los aparatos basados en esta tcnica. A este
trmino se le aaden los adjetivos adecuados a la subtcnica adecuada, ej.
espectrofotmetro de absorcin atmica.

El espectrofotmetro tiene un generador de radiacin lmnica (policrmica), un
separador para obtener la radiacin adecuada y luego mide la potencia radiante
obtenida. Los componentes fundamentales que tienen todos los espectrmetros
son:

Fuente: es el dispositivo emisor de radiacin electromgnetica. Generalmente
emite una banda muy amplia de radiaciones contnuas alrededor de la l deseada.
Segn la zona del espectro que emite hay tres tipos:
Visible: Lmparas de filamento de Tungsteno incandescente o de Wolframio
(halgeno). Son similares a las bombillas comunes.
Ultravioleta: Tubo de hidrgeno o de descarga de deuterio. A veces estn
refrigerados con agua para disipar el elevado calor que producen.
fuent
e
monocromador muestra
detector
(transductor)
registrador
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Infrarojos: Fuentes especiales de xidos de tierras raras (disprosio, holmio,
erbio) o carburos (de silicio). Estos emiten radiacin en IR (1,5 a 2,0 mm) a
elevadas temperaturas (1000-2000C).

Monocromador o selector de l: tiene como objetivo controlar la pureza de la
radiacin emitida consiguiendo el menor ancho de banda de longitud de onda
posible. Consta de un conjunto de lentes, espejos y rendijas para dispersar y
separar, enfocar y restringir la radiacin no deseada.
Los componentes de los monocromadores son:
PRISMAS: producen la refraccin de la luz, siendo el ngulo de refraccin mayor
cuanto menor es la l de la radiacin.
Despus del prisma hay una rendija por donde se
hace pasar la radiacin deseada.
Segn el tipo de radiaciones se usan prismas de
vidrio (VIS), cuarzo o slice (UV) y cristales de
NaCl para IR.


REDES DE DIFRACCION: Es una lmina metlica (Al)
altamente pulida sobre la que se han hecho una gran
cantidad de estras (lneas paralelas). Estas estras
actuan como centros de dispersin de todas las
radiaciones incidentes. Hay una dispersin lineal de
las l de una determinada banda cromtica, por lo
tanto se puede usar en todas las regiones del
espectro. Funciona mejor que el prisma en el IR.


Celdas para la muestra: recipientes donde se coloca la muestra a analizar. Varian
mucho segn la tcnica a ulilizar, pero como caracterstica comun deben ser
transparentes en la regin de l que se va a medir.
VIS y UV cubetas cuadradas de vidrio, cuarzo de 1 cm de lado.
IR cubetas de NaCl, AgCl.

Detector (transductor): Produce una seal elctrica cuando recibe un fotn. Esta
seal elctrica luego es convertida en unidades de potencia radiante transmitida o
absorbida.
Los detectores tambin dependen de la regin de l en la que se trabaja:
FOTOTUBO. Para la zona del VIS y UV. Con el mismo principio de funcionamiento
que la clula fotoelctrica.

Al golpear un fotn en el ctodo, este
emite un electrn hacia el nodo, lo cual
provoca un flujo de corriente elctrica que
es medida por un voltmetro. La respuesta
policromat.
rojo
viole
t

PRISMA
Espectrofotometria. Fonaments Qumics. Univ. Girona 12.
del material fotoemisivo depende de la l, por tanto se usan diferentes tipos de
fototubos segn la l en la que se trabaja.
Cuando se utilizan radiaciones de baja intensidad la seal elctrica es muy dbil y
sujeta a un gran error. En este caso se utiliza el TUBO FOTOMULTIPLICADOR,
que incluye varios fototubos en serie. En este caso, el choque de un fotn forma
una cascada de electrones que dan una seal ms intensa.

FOTODIODO ARRAY:
Sobre un semiconductor se fabrican diodos en serie paralelos, de manera que al
incidir sobre l una radiacin difractada, se puede tener una seal instantnea para
un amplio rango de l.

INFRAROJOS.
Los detectores de infrarojos se basan en la propiedad trmica de estas
radiaciones y traducen el calor asociado a la radiacin transmitida en una seal
elctrica. Los ms utilizados son los TERMOPARES y BOLOMETROS, formados
por metales cuya resistencia elctrica cambia con la temperatura.


Registrador: En los instrumentos ms antiguos la seal se mostraba en un medidor
de aguja que tenia una escala en unidades de transmitancia y de absorbancia. Los
instrumentos ms modernos tienen un display digital, en el que aparece el valor
nmerico de absorbancia o el valor de concentracin cuando puede realizar
automticamente los clculos de calibracin. En el caso de obtener el espectro de
absorcin (en un intrvalo de l) de una sustancia, el registrador nos muestra un
grfico con el valor de l en abcisas y la absorbancia en ordenadas.



Espectrofotometria. Fonaments Qumics. Univ. Girona 13.
Tipos de espectrofotometras.

En la tabla siguiente se muestra una clasificacin de los principales tipos de
espectrofotometrias agrupados segn el tipo de interaccin luz-molcula
(absorcin o emisin) y segn la zona del espectro en la que se trabaja.
Y a continuacin se describen las caractersticas principales de cada tipo, los
instrumentos utilizados y las aplicaciones analticas ms importantes.

Clasificacin

molecular

UV VIS
IR
RMN
ABSORCION

atmica

llama (EAA)
electrotrmica (GF)

atmica

llama (EEA)
plasma (ICP)
EMISION

molecular

fluorescencia (FS, XRF)

OTROS

turbidimetria
refractometria
polarimetria
espectroscopia masas (EM)


Espectrofotometria de absorcin molecular VIS-UV.

Hay un proceso de absorcin de radiacin por parte de las molculas pasando a un
estado excitado.
*
M h M
absorcin
+ n
y en un tiempo muy breve se produce la relajacin con emisin de energa en forma
de calor
calor M
*
M
relajacin
+
Espectrofotometria. Fonaments Qumics. Univ. Girona 14.
El aumento de energa interna conlleva transiciones electrnicas. Estas
transiciones son de electrones compartidos que forman enlaces o de electrones de
orbitales atmicos externos (no compartidos).
Los principales tipos de moleculas que experimentan este fenmeno son:
- compuestos orgnicos con grupos no saturados (dobles y triples enlaces),
donde hay electrones de enlace que pueden saltar a otros orbitales de enlace.
Estos grupos funcionales que absorben en VIS o UV se llaman cromforos.
- compuestos de coordinacin (complejos) de metales de transicin. Ej.
Fe(SCN)2- rojo intenso.
- iones de metales de transicin, de lantnidos y de actnidos. Ej. color azul de la
disolucin de Cu
2+



Generalmente la absorcin de estos compuestos se produce en varias l o amplias
bandas de absorcin, por lo que no hay picos bien definidos. Sobre todo cuando
hay interacciones con el disolvente. Esto confiere poca selectividad a la tcnica
para identificacin de especies, siendo ms util en anlisis cuantitativo.

El instrumento utilizado en la tcnica es el espectrofotmetro visible-ultravioleta.
Que permiten trabajar con una gran cantidad de l, incluso hay algunos que hacen
un barrido en una region del espectro dando un grfico del espectro de absorcin
de una sustancia. Estos aparatos constan de un selector de l, y una cubeta
transparente de 1 cm de lado y 3 cm de alto donde se coloca la disolucin a medir.
Normalmente hay dos huecos para dos cubetas, uno para la muestra y otra para una
disolucin de referencia o blanco, frente a la cual se hacen todas las medidas.

Cuando la especie qumica a medir absorbe en el visible (y la disolucin tiene color)
la tcnica se llama vulgarmente colorimetra. Y los aparatos utilizados se llaman
colormetros. Tambin se comercializan kits de anlisis rpidos que tienen unas
tablas de comparacin de colores (o disoluciones prepararadas y de color estable)
en lugar de un aparato como el descrito. La disolucin problema se mezcla con los
reactivos adecuados en un pequeo tubo de ensayo y se compara con la tabla de
colores. En esta tabla est asignada la concentracin de analito que corresponde a
cada color, con lo cual es puede determinar la concentracin en el problema. Este
mtodo no tiene una gran exactitud pero en muchas aplicaciones es suficiente
(cloro en piscinas, nitratos en aguas de embalses, NaCl en aguas para riego, etc).

En muchos casos la especie estudiada no absorbe en el VIS-UV, pero s un
complejo formado con otro compuesto. Por ej. el in fosfato no absorbe en el VIS,
pero forma un complejo con el in molibdato y el vanadato (fosfomolibdovanadato)
que tiene una gran intensidad de absorcin a 430 nm (azul), y se emplea para
anlisis de fsforo en aguas, suelos, etc. En estos casos la determinacin
espectromtrica no es directa, sino que previamente se hace reaccionar la muestra
con unos reactivos adecuados (reaccin colorimtrica) y posteriormente se mide la
absorbancia de la mezcla.
Espectrofotometria. Fonaments Qumics. Univ. Girona 15.

Especies qumicas determinadas:
P, B mediante formacin de complejos
aguas, suelos,
fertilizantes
nitritos, nitratos directamente, o con complejos aguas
Fe, Co, Mo con SCN
-
suelos
Ti, Va, Cr con H
2
O
2
contaminantes
Bi, Pd, Te con I
-
contaminantes
Cu, Pb, Ni , Fe con complejos suelos

Ventajas y aplicaciones.

- gran aplicabilidad, ya que hay muchas especies absorbentes y posibilidades de
formar complejos con las que no lo son
- elevada sensibilidad, se pueden determinar conc hasta 10
-5
M
- selectividad media, interacciones cuando hay grupos que absorben a la misma l
- permite automatizacin del proceso, se usa en sistemas de anlisis en contnuo
- sistema no destructivo en medidas directas

Como principal desventaja de la tcnica las interacciones por partculas que
interfieran el paso de luz. Las disoluciones han de ser exentas de slidos en
suspensin.

Espectrofotometria de absorcin molecular IR.

La absorcin molecular de radiaciones de esta zona del espectro produce
transiciones vibracionales y rotacionales. Por lo tanto, todas las molculas
absorben en IR, excepto algunas diatmicas (O
2
, N
2
, Cl
2
) de elevada simetra.

Las bandas de absorcin son muy estrechas y corresponden a enlaces muy
especficos, y a menudo dependen de los atomos ms prximos. Un espectro de IR
es como una huella dactilar de la molcula y esto implica que es una tcnica idnea
para identificar compuestos orgnicos o inorgnicos puros, pero no es tan
adecuada para cuantificar.

Los instrumentos ms utilizados son:
Espectrofotomtros IR. Similares al VIS-UV, pero con componentes diferentes.
Hacen un barrido de l y recogen el espectro. Los ms utilizados son los llamados
NIR (near infrared) que trabajan con zonas del espectro en el infrarojo cercano.

Espectrometros de transformada de Fourier. Recoge datos de una zona del
espectro simultneamente y en varias pasadas, posteriormente por un proceso
matemtico muy complejo se resuelven los picos del espectro con una gran
sensibilidad. Son los ms usados actualmente.
Espectrofotometria. Fonaments Qumics. Univ. Girona 16.

Fotmetros de filtro. Con un filtro adecuado se selecciona una l deseada. Sirven
para monitorizar la concentracin de una especie qumica en un punto fijo. Se usan
mucho para contaminantes atmosfricos: CO, nitrobenceno, cloruro de vinilo, HCN,
piridina,etc. En algunos instrumentos se usan para determinar CO
2
, SO
2
, etc.

Aplicaciones. Se usa en la identificacin de compuestos en investigacin de
medicamentos, bioqumica, biologa, fisiologa. En la industria farmaceutica,
pesticidas, alimentacin, contaminantes, etc.


Espectrofotometria de absorcin y de emisin atmica.

Permite la determinacin (cuantificacin) de unos 70 elementos qumicos en
concentraciones que oscilan entre ppb a ppm. La medida de los elementos qumicos
se hace en estado atmico mediante una atomizacin de la muestra en estado
gaseoso.

Estos tomos experimentan absorcin, emisin o fluorescencia de radiaciones VIS,
UV o rayos X, debidas a transiciones electrnicas entre orbitales atmicos. Esta
tcnica no da informacin sobre enlaces moleculares en absoluto y nos da
informacin especfica sobre un elemento qumico.

La principal diferencia con las otras espectrometrias es la atomizacin, proceso
por el cual la muestra se introduce en un mechero, junto con el combustible, y se
quema a elevada temperatura. Las molculas del analito se rompen totalmente
liberando los elementos qumicos en estado atmico, y estos pueden
experimentar fenmenos de absorcin, emisin o fluorescencia. En la figura
siguiente se muestra un esquema de estas posibilidades.

Segn el sistema de atomizacin, y la temperatura a la que se produce, se tienen
los siguientes mtodos de espectrofotometra atmica: llama, electrotrmico,
plasma, arco voltaico y chispa elctrica.



Espectrofotometra de absorcin atmica con llama.
Es el mtodo ms utilizado de la espectrofotometria atmica. Muy adecuado para
la determinacin de ppm de Fe, Cd, Au, Pb, Zn, Cu, Mn en disoluciones acuosas de
aguas, fertilizantes, suelos, extractos vegetales, etc.
Los tomos en la llama absorben radiacin de determinadas l (VIS y UV) segn su
naturaleza, por lo que es una tcnica muy especfica para cada elemento. La
absorcin en la llama sigue la ley de Beer, pero en la prctica es necesario hacer un
Espectrofotometria. Fonaments Qumics. Univ. Girona 17.
calibrado con disoluciones patrn de las que se obtienen valores de absorbancia y
que permiten calcular la recta de calibrado.

El instrumento se denomina Espectrofotmetro de Absorcin Atmica (EAA). En
ingls: Flame Atomic Absorption Spectrophotometer (F)AAS.

Como fuente de radiacin se usa una lampara de catodo hueco que contiene el
mismo metal que se va a analizar y que emite una radiacin con una banda de l
entorno a la que se va a absorber.
En lugar de una cubeta o recipiente para poner la muestra lleva un mechero donde
se produce la llama con la que se atomiza la muestra. Esta llama suele ser de
propano, acetileno o hidrgeno y oxgeno o xido nitroso (N
2
O). Las temperaturas
que alcanza varian entre 1500 y 3000C.

monocromado
monocromado
monocromado
detector
detector
detector
tomo en la llama
emisin
absorcin
fluorescencia
laser
lmpara
llama
e
n
e
r
g

a

transicin
absorcin
atmica
transicin
emisin
atmica
estados excitados
estado fundamental
transicin
fluorescencia
atmica
transicin no radiante
Espectrofotometria. Fonaments Qumics. Univ. Girona 18.


Espectrofotometra de emisin atmica con llama.

Es una tcnica muy utilizada para la determinacin de metales alcalinos y alcalino-
trreos: Na, K, Li, Ca, etc, en concentracines del orden de ppm. Se utiliza con los
mismos materiales ya comentados: aguas, fertilizantes, suelos, material vegetal,
alimentos, contaminantes, etc.

Se basa en el mismo principio que la absorcin, pero en este caso la temperatura de
la llama es suficiente para que haya una excitacin atmica y una emisin posterior.

Los instrumentos utilizados en esta tcnica se denominan Espectrofotmetros de
Emisin Atmica (EEA) y en ingles con las siglas AES. A diferencia de los
anteriores (absorcin) no tienen fuente de radiacin. El resto de componentes es
igual, as como el procedimiento de calibracin y clculo de resultados.



Espectrofotometra con atomizadores electrotrmicos.
Se utiliza para determinar concentraciones muy pequeas (ppb) de metales
contaminantes: Pb, Cd, Cr, Zn, Cu, Co, Mn, Pt, Hg, etc.
En las tcnicas anteriores el rendimiento de la atomizacin (molculas atomizadas
con respecto al total) es muy bajo: aprox del 0,1%. Esto hace que la sensibilidad
de la tcnica sea baja. El atomizador electrotrmico consta de un pequeo
minihorno, que es un cilindro de grafito de 50mm10mm f, que se calienta con una
resistencia elctrica hasta 3000C. Con una pequea cantidad de muestra (varios
mL) se obtiene una gran cantidad de particulas atomizadas (eficiencia del 100%) y
una gran seal que da una gran sensibilidad a la tcnica. Por el contrario la
precisin no es tan buena y hay un gran nmero de interferencias. El proceso de
calibrado es muy delicado y solo es til en determinaciones de concentraciones muy
bajas de algunos metales.
El instrumento utilizado se llama Espectrometria con Horno de Grafito o GFS
(Graphit Furnace Spectrometry).


CaCl
2
(dis) CaCl
2
(s) Ca(g) Cl(g)
+
Ca*(g)
hY
emisin
Espectrofotometria. Fonaments Qumics. Univ. Girona 19.
Espectrofotometria de emisin con plasma.
Se consigue una llama de altsima temperatura que transforma la mezcla de
combustible y muestra al estado de plasma: una mezcla gaseosa con una
concentracin muy alta de cationes y electrones. Esto permite una elevada
eficiencia en la atomizacin, una intensa emisin de los tomos y la determinacin
de una gran cantidad de elementos qumicos metlicos (y algunos no metales) con
algo menos de sensiblidad que el Horno de Grafito, pero con ms precisin.
Adems la combinacin de esta tcnica con un sistema informtico potente,
permite la determinacin de la concentracin de varias decenas de elementos
qumicos en unos segundos.
Los diferentes aparatos se basan en la fuente de energa para obtener el plasma
en el mechero. Los ms comunes son:
- DCP: plasma generado por una corriente contnua.
- ICP: (induced coupled plasm) plasma acoplado por induccin de un generador de
radiofrecuencias.
- plasma generado por frecuencias de microondas.
Entre los nometales que pueden ser determinados por esta tcnica se encuentra el
P y el B. Se obtienen lmites de deteccin entre 0,1 y 100 ppm, y el acoplamiento
de esta tcnica con otras muy sensibles permite llegar hasta 1 ppb. Ej. ICP-EM o
ICP espectrometro de masas.


Espectrofotometria de fluorescencia molecular.
Se basa en el fenmeno que experimentan algunas molculas de absorber una
radiacin determinada y en el proceso de relajacin, liberar parte de la energia
como calor (radiacin trmica) y otra parte como radiacin electromagntica de
una longitud de onda mayor a la incidente. Este fenmeno se produce en un
intervalo de tiempo muy pequeo despus de la absorcin (10
-5
s) a diferencia de la
fosforescencia que puede durar minutos y horas.
Este fenmeno permite una tcnica muy sensible ya que no todas las molculas
fluorescen y las l pueden cambiar segn las condiciones. Los lmites de deteccin
son inferiores a la absorcion molecular VIS-UV.
El instrumento ms usado es el espectrofluormetro, y la tcnica ms comun se
denomina Fluorescencia de Rayos X, ya que son estos los utilizados como fuente de
energia.
Tiene una gran aplicabilidad en la cuantificacin de molculas orgnicas en
productos alimenticios, farmaceuticos, clnicos y naturales.


Espectrofotometria. Fonaments Qumics. Univ. Girona 20.
Otros mtodos.
Resonancia Magntica Nuclear (RMN).

Se produce una absorcin de radiacin electromagntica por los ncleos atmicos.
Estos tienen un movimiento de giro, que es cambiado en el proceso de absorcin.
El tipo de radiaciones que se utilizan son de gran l (microondas de baja energia), y
la absorcin depende de la configuracin electrnica que rodea al nucleo y de las
interacciones intramoleculares. Por lo tanto da informacion sobre los enlaces que
tiene un tomo, y el tipo de molcula que se estudia. Las radiaciones involucradas
en esta tcnica no alteran los materiales estudiados (dada su baja energia), por lo
que tiene una gran aplicacin en seres vivos, productos fcilmente alterables, etc.
Los elementos qumicos que se detectan por esta tcnica son H, F, P, B, Cl, N.
Mientras que el C y el O no tienen un momento cintico de giro nuclear.
Esto hace que la tcnica sea muy interesante para identificar molculas orgnicas,
opteniendo espectros de los tomos de H, de los que se deduce todos los enlaces
del H en la molcula.
Esta tcnica tiene una gran aplicacin en medicina (estudios no destructivos de
tejidos de organos del cuerpo humano), determinacin de humedad, estudios de
aceites y grasas, estudios de F en plsticos, etc.

Espectroscopia de masas (MS).

No es una tcnica espectrofotomtrica propiamente dicha, pero se utiliza mucho
en conjunto con algunos de los instrumentos citados.
Se basa en obtener una nube de moleculas gaseosas ionizadas, de manera que
quedan los elementos quimicos en forma inica (cationes) en estado gaseoso. Esta
nube se acelera mediante un campo elctrico y pasa por un potente imn que separa
los iones segn su masa, y finalmente choca sobre un detector sensible a todos los
iones. El detector es como una pantalla alargada y los tomos de un mismo
elemento chocan en una misma zona, distinguiendose varias regiones o rayas en el
detector relacionadas con la masa de los tomos presentes en la muestra.
Al final se obtiene una grfica llamada espectrograma o espectro de masas, con
los pesos atmicos en abcisas y la frecuencia o cantidad en ordenadas. En este
aparecen rayas indicando los elementos qumicos presentes y son ms o menos
largas segn la cantidad de tomos que hay.
La instrumentacin de esta tcnica es muy sofisticada y solo disponible en muy
buenos laboratorios. Da un grado de exactitud muy bueno, siendo la tcnica ms
sensible para determinar algunos elementos qumicos. Permite determinar ppb de
algunos metales en combinacin con la tcnica ICP.