Identificao, caracterizao e avaliao da atividade enzimtica de linhagens de fungos filamentosos

Silva, I. A. ; Medeiros, L.A. ; Molina, S.M.G. Laboratrio de Ecogentica de Resduos Agroindustriais e Ecologia Humana 1 2 Graduanda em Cincias dos Alimentos ESALQ/USP, Doutoranda- PPGI Ecologia Aplicada ESALQ3 CENA/USP, Prof Dr Depto. Gentica ESALQ/USP
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Objetivos
O avano da biotecnologia tem mostrado novas perspectivas permitindo-nos inferir que o futuro est direcionado para o emprego de enzimas de aes caracterizadas, com produo em escala industrial. Uma das maneiras de se conseguir alta atividade enzimtica o isolamento e seleo de linhagens de microrganismos com tal capacidade. Por isso, neste trabalho, estudou-se as caractersticas morfolgicas e enzimticas de linhagens selvagens de fungos isolados de diferentes ambientes.

Material e Mtodos
Para o isolamento, fragmentos de miclio foram dispostos em sucessivas placas de Petri contendo Meio Completo (MC) [1] at purificao completa. Quanto s caractersticas enzimticas, as linhagens foram avaliadas pelo mtodo semiquantitativo utilizando o ndice enzimtico obtido pela relao halo/colnia. Para xilanases utilizouse o mtodo adaptado por Pallu et al [2], para pectinases o mtodo foi o proposto por Hanckin & Anagnostakis [3] e, para celulases utilizou-se o mtodo proposto por Lana [4]. A caracterizao morfolgica foi feita atravs do mtodo estabelecido por Pitt & Hocking [5] e por observaes em lmina mida. Tambm foram estudadas diferentes caractersticas tais como tempo, temperatura, em MC.

padres semelhantes, aqui sero discutidos apenas os resultados das anlises da linhagem SK-8. A anlise de varincia evidenciou efeito altamente significativo tanto para o fator tempo como para a temperatura e para a interao entre eles (prob. >F=0,00001, em todos os casos). Os dados sobre efeito do tempo de cultivo, consideradas todas as temperaturas conjuntamente, se ajustaram de modo altamente 2 significativo (prob.>F.=0,00001; R =0,99), a uma regresso linear (y= 0,011 + 0,016 x). Entretanto, ajustes significativos de segundo grau para os maiores tempos de cultivo, indicam 72 horas como o tempo ideal, aps o que as culturas tendem a entrar em fase estacionria. Por outro lado, os coeficientes de x, nas equaes lineares para cada temperatura considerada individualmente, indicaram que 28C a temperatura que melhor promove o crescimento dessa linhagem. As anlises de efeito de tempos de cultivo em cada temperatura, com ajustes significativos de segundo grau, confirmaram esse resultado.

Concluses
Neste trabalho buscou-se conhecer as caractersticas para o melhor desempenho das linhagens estudadas visando a otimizar os processos enzimticos envolvidos. Para a linhagem SK-8, identificada como Penicillium chrysogenum , as melhores condies de crescimento constituem-se em cultivo por 72horas a 28C.

Resultados
As anlises de crescimento em meios seletivos e anlises morfolgicas das linhagens isoladas resultaram na identificao das mesmas como sendo Fusarium sp., a MAD-1; Aspergillus sp., a CER-1, Penicillium citrinum, a AND-1, Penicillium nalgiovense, a GEL-1 e Penicillium chrysogenum, a SK-8. As linhagens que apresentaram maior ndice enzimtico para atividade de pectinase foram SK-8 e AND-1. Para a atividade de xilanase, as linhagens AND-1 e SK-8 obtiveram os maiores ndices. A analise de celulase resultou em maiores valores para as linhagens ACE-1 e AND-1. Dessa forma, a que se mostrou mais promissora para estudos futuros, para atividades de pectinase e xilanase, foi a linhagem SK-8. Embora realizados para todas as linhagens citadas, por apresentarem

Referncias Bibliogrficas
[1] PONTECORVO, G. et al, The genetics of Aspergillus nidulans. Adv. in Genetics, v. 5, p. 141238, 1953. [2] PALLU, A. P. S. et al, Melhoramento gentico e seleo de mutantes xilanolticos. 10 SIICUSP Piracicaba - 2002. [3] HANKIN, L.; ANAGNOSTAKIS, S. L. The use of solid media for detection of enzyme production by fungi. Mycologia, v. 67, p. 597-607, 1975. [4] LANA, T. G. Caracterizao gentica e fisiolgica de Crinipellis perniciosa. Escola Superior de Agricultura "Luiz de Queiroz". Piracicaba, 2004. [5] PITT, J. I; Hocking, A. D. Fungi and Food Spoilage. 2 edition. 1997.