INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS. AISLAMIENTO DE DNA PLASMIDICO.

Castillo Rodrguez Alejandra Gioseline Lpez Gonzlez Vianey 3FM1 seccin 3.

Introduccin. El DNA es un biopolmero lineal de dos cadenas, helicoidal antiparalelo complementario formado por desoxiribonucleotidos unidos mediante enlaces fosfodiester. Contiene la informacin gentica del organismo. Los plsmidos, son molculas de DNA extra cromosmico, circular y de pequeo tamao estos se encuentran en especies bacterianas y que se pueden replicar de manera independiente del DNA cromosmico. Los plsmidos no son necesarios para la viabilidad de la clula pero pueden contener genes que contribuyen a la supervivencia en condiciones especiales como los que confieren resistencia a antibiticos, a metales, etc. Los plsmidos son de inters en ingeniera gentica por ser uno de los sistemas de vectores ms sencillos de usar. Un vector de clonacin es un sistema que permite introducir en una clula hospedadora un fragmento de DNA que se pretende clonar; en esta clula hospedadora el vector se replica y expresa en su caso. La electroforesis es una tcnica para la separacin de molculas segn la movilidad de estas en un campo elctrico a travs de una matriz porosa, la cual finalmente las separa por tamaos moleculares y carga elctrica, dependiendo de la tcnica que se use. El Bromuro de etidio (BrEt) es un agente qumico muy usado en tcnicas de biologa molecular para teir nuestros geles de agarosa y poder apreciar nuestras bandas de ADN.

Objetivos.
Aprender a realizar la tcnica de obtencin de DNA plasmdico. Saber cmo se utiliza el vortex. Observar el proceso de electroforesis. Discutir acerca de los resultados de la electroforesis.

Anlisis de la tcnica.
En la prctica nos dieron la bacteria en el tubo eppendorf que se mantuvo en hielo para mantener en condiciones adecuadas para la bacteria se agregaron 100L de una solucin que contena Tris un regulador de pH entre 8 y 8.5 el cual nos ayuda a mantener la estructura del DNA porque de esta manera las cargas negativas de los grupos fosfato se mantienen, la solucin tambin contena EDTA el cual con las cargas negativas que tiene de acuerdo a su estructura en un pH bsico se une al Ca que es un cofactor de las DNasas que son enzimas que degradan al DNA entonces lo que se hizo fue inactivar a estas enzimas; se resuspendi con vortex. Todo el procedimiento hasta aqu se realiz nicamente para preparar el medio. Despus se agregaron 200L de una solucin de SDS-NaOH el SDS fue el encargado de romper a la clula para que esta liberara el contenido celular mientras que el NAOH ajusto el pH bsico evitando la hidrolisis del DNA se mezcl invirtiendo el tubo suavemente para no romper el DNA, la incubacin en hielo fue por 5 minutos posterior a ese tiempo se adicionaron 150L de acetato de potasio el cual precipita DNA cromosmico y protenas por ello despus de centrifugar el que utilizamos pasando a otro tubo eppendorf fue el sobrenadante a este se le adicionaron 500L de isopropanol que despus de centrifugar precipito al DNA plasmdico por ello en esta ocasin se desech el sobrenadante; el precipitado se resuspendi con una solucin de TrisEDTA.

Resultados.

La agarosa es una fraccin extrada de algas productoras de agar y es la responsable fundamental del poder gelificante de ste. Presenta una histresis importante, que la hace idnea para tcnicas de separacin tales como electroforesis.

INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS. AISLAMIENTO DE DNA PLASMIDICO. Castillo Rodrguez Alejandra Gioseline Lpez Gonzlez Vianey 3FM1 seccin 3.

Discusin de los resultados. Conclusiones. Bibliografa.

Berg Jeremy M., Lubert Stryer, Bioqumica, Reverte, Barcelona, 2009. Pg. 143, 144.

http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/Ex posicion_electroforesis_5087.pdf