ESCUELA DE INGENIERA AGROINDUSTRIAL

Produccin de Biodiesel a partir de microalga Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008 en Fotobiorreactor Tanque Agitado.

TESIS PARA OBTENER EL TTULO PROFESIONAL DE INGENIERO AGROINDUSTRIAL

AUTOR Justiniano Ruiz, Csar Alejandro

ASESOR Dr. Gonzalez Cabeza, Jos Guillermo

ASESOR METODOLGICO: Ing. Ms. Sc Barraza Juregui, Gabriela del Carmen.

TRUJILLO - PER 2012

PRODUCCIN DE BIODIESEL A PARTIR DE MICROALGA Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008. EN FOTOBIORREACTOR TANQUE AGITADO.

JURADO EVALUADOR

Blgo. Elio Avila Vereau Presidente

Ing. Maria Elena Len Marrou Secretario

Blgo. Jos Gonzalez Cabeza Vocal

TRUJILLO PER 2012

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DEDICATORIA

A mi madre, porque cada vez que toco fondo puedo ver su mano y asirme en ella.

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AGRADECIMIENTOS

A mi Padre, por su prudencia, paciencia y cario.

A mis hermanos, Eduardo y Mayra.

A mis hermosos sobrinos, por su aura angelical que me remecen de cario y ternura.

Al Dr. Jos Guillermo Gonzlez Cabeza, por creer en esta aventura cientfica y diseminar todos sus conocimientos en m.

Al laboratorio de Microbiologa y Biotecnologa de la Facultad de Ciencias de la Salud de la Universidad Privada Antenor Orrego (UPAO), por darme las facilidades del caso y as demostrar que con confianza e integracin de todas las casas de estudios se pueden lograr grandes cosas.

Instituto del mar del Per (IMARPE), en especial a la Ing. Cecil Tenorio, por confiar en m una cepa de preciado valor y entregarme su amistad e irradiar siempre una sonrisa a flor de piel.

A Gerson Daz Aponte, por mostrarme esa mano amiga que necesitaba en los momentos de frustracin.

Y a toda esa gente que estuvo alrededor ..

Csar Alejandro Justiniano Ruiz.

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PRESENTACION

Seores Miembros del Jurado: Siendo uno de los requisitos indispensables la presentacin de una tesis para obtener el ttulo Profesional de Ingeniero Agroindustrial y cumpliendo adems con las normas legales de nuestra Universidad Cesar Vallejo y dejo a vuestra consideracin el presente trabajo de tesis:

Produccin de Biodiesel a partir de microalga Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008 en Fotobiorreactor Tanque Agitado.

El Presente

trabajo de investigacin se bas en la lnea de investigacin de

biotecnologa, trabajando con microorganismos de nuestras aguas continentales, con el fin de desarrollar nuevas tecnologas para sustituir los combustibles fsiles y as preservar el medio ambiente.

El Autor.

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INDICE GENERAL
DEDICATORIA ..................................................................................................................................ii AGRADECIMIENTOS...................................................................................................................... iii PRESENTACION ............................................................................................................................. iv RESMEN ......................................................................................................................................... 9 ABSTRACT ..................................................................................................................................... 10 1. INTRODUCCIN.................................................................................................................... 11 1.1. PROBLEMA DE INVESTIGACION ............................................................................ 12 Realidad problemtica. .......................................................................................... 12 Formulacin del problema..................................................................................... 13 Justificacin del problema ..................................................................................... 13 Antecedentes del problema .................................................................................. 15 OBJETIVOS ............................................................................................................ 20

1.1.1. 1.1.2. 1.1.3. 1.1.4. 1.1.5. 1.2.

MARCO REFERENCIAL. .............................................................................................. 20 Marco Terico ........................................................................................................ 20

1.2.1. 2.

METODOLOGA ..................................................................................................................... 35 2.1. 2.2. Hiptesis .......................................................................................................................... 35 Metodologa ..................................................................................................................... 35 Tipo de estudio ....................................................................................................... 35 Diseo ...................................................................................................................... 35

2.2.1. 2.2.2. 2.3. 2.3.1. 2.4.

Poblacin y muestra ...................................................................................................... 35 Mtodo de Investigacin ........................................................................................... 36 Tcnicas y recoleccin de datos. ................................................................................. 40 Anlisis de microscopia del Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008. ....... 40 Determinacin del peso hmedo total. ............................................................... 40

2.4.1. 2.4.2.

2.5. Mtodos de anlisis de datos para el biodiesel de Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008 ............................................................................................................................... 41 2.5.1. 2.5.2. 3. Desviacin estndar (DS) ..................................................................................... 41 Coeficiente de variacin (CV) ............................................................................... 41

RESULTADOS........................................................................................................................ 42

3.1. Conteo de microorganismos en los diferentes fotobiorreactores tanques agitados y pH utilizado mediante la etapa de cultivo microalgal......................................................... 42 3.2. Observaciones microscpicas del Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008. .... 43

3.3. Peso hmedo y rendimientos del cultivo microalgal en el proceso de cosecha y secado para la obtencin de biodiesel.................................................................................... 45 3.4. Rendimientos del aceite del Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008 en la obtencin de biodiesel. .............................................................................................................. 45 4. 5. 6. 7. 8. DISCUSIN. ........................................................................................................................... 46 CONCLUSIONES ................................................................................................................... 49 SUGERENCIAS...................................................................................................................... 50 REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS .................................................................................... 51 ANEXOS. ................................................................................................................................. 59

INDICE DE FIGURAS

FIGURA 1. Rendimiento de materia prima para biodiesel por hectrea (litro/hectrea) ....................................................................................................... 25 FIGURA 2. Diagrama de flujo para la obtencin de aceite de Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008 .................................................................................... 38 FIGURA 3. Diagrama de flujo para la obtencin de biodiesel de Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008. ................................................................................... 39 FIGURA 4 . Fotobiorreactores tanques agitados y sus respectivos conteos finales de UFC/mL a los 22 das. ..................................................................................... 43 FIGURA 5 Observacin microscpica del Scenedesmus acuminatum IMP-LBA008 a los 8 das. ................................................................................................... 43 FIGURA 6 Observacin microscpica del Scenedesmus acuminatum IMP-LBA008 a los 16 das. ................................................................................................. 44 FIGURA 7 Observacin microscpica del Scenedesmus acuminatum IMP-LBA008 a los 21 das. ................................................................................................. 44

NDICE DE CUADROS

Cuadro 1. Propiedades de los principales grupos de algas .................................. 22 Cuadro 2. Comparacin del diesel y biodiesel ...................................................... 26 Cuadro 3. Comparacin los mtodos de produccin de fotobiorreactores y estanques abiertos ................................................................................................ 29 Cuadro 4. Contenido lipdico de algunas microalgas en condiciones autotrficas ................................................................................. Error! Marcador no definido. Cuadro 5. Contenido de Volumen en fotobiorreactores tanques agitados ............ 36 Cuadro 6. Composicin qumica del Nitrofoska verde (g/L). ................................ 37 Cuadro 7. Conteo final en cmara Neubauer (22 das del cultivo de Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008), promedio, desviacin estndar y coeficiente de variabilidad. ........................................................................................................... 42

RESMEN

El objetivo del presente estudio fue producir biodiesel a partir de la microalga Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008, empleando fotobiorreactores tanques agitados durante 22 das de incubacin. El medio de cultivo empleado fue soluciones de Nitrofoska Verde Foliar al 1%, mantenindose los sistemas de fotobiorreactores cerrados. Se obtuvo un rendimiento de 53% de biodiesel, donde los parmetros ms adecuados en la metodologa de cultivo para obtener biodiesel a partir de la microalga Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008 en fotobiorreactor tanque agitado fueron: Agua potable (76 L), fotoperiodo 12 Hs: 12 Hs (Luz y oscuridad), aireacin de 2000 mL/min, pH 7 y temperaturas oscilantes de 22 a 26 C.

ABSTRACT

The aim of this study was to produce biodiesel from microalgae Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008, using photobioreactors stirred tanks for 22 days of incubation. The culture medium used was Foliar solutions Green Nitrophoska 1%, remaining closed photobioreactor systems. A yield of 53% biodiesel, where the most suitable parameters in the culture methodology for biodiesel from microalgae Scenedesmus acuminatum-LBA-008 IMP in stirred tank photobioreactor were: Drinking water (76 L), photoperiod 12 hs: 12 hs (Light and Darkness), aeration of 2000 mL / min, pH 7 and temperatures oscillating between 22 and 26 C.

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1. INTRODUCCIN

El uso continuo de los combustibles fsiles por parte de la humanidad es insostenible, ya que son recursos limitados de energa y su combustin conducen a la generacin de las emisiones relacionadas con la energa de gases de efecto invernadero (GEI) como el dixido de carbono, xidos de nitrgeno, metano, dixido de azufre y compuestos orgnicos voltiles. Durante las ltimas dcadas, las concentraciones globales atmosfricas de gases de efecto invernadero han aumentado con frecuencia. As, la concentracin creciente de se considera

que es una de las principales causas del calentamiento global. La combustin de combustibles fsiles es responsable de 73 % de la produccin de , dado que la

preocupacin por el calentamiento global y la dependencia de los combustibles fsiles crece, la bsqueda de fuentes de energa renovables que reduzcan las emisiones 2007). , se convierte en una cuestin de atencin generalizada (Chisti,

El uso de la biotecnologa, tiene como objetivo desarrollar mtodos para la produccin de nuevos productos procedentes de organismos, los cuales son productos que podran contribuir a la humana asistencia sanitaria (por ejemplo, compuestos bioactivos que se pueden usar para nuevas medicinas), en la industria alimentaria y de los piensos (por ejemplo, antioxidantes) y para la industria de la energa, con aplicaciones como nuevos biocombustibles. El potencial de los ocanos para este tipo de productos es enorme, pero hasta la fecha las aplicaciones no han estado a la altura de las expectativas (Wijjfells, 2008). El desafo actual consiste en producir estos productos en cantidad y calidad suficientes y en forma sostenible para evitar la sobreexplotacin de los combustibles fsiles y as desarrollar en nuestro pas medidas preventivas ante la

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escases del crudo de petrleo, mediante nuevas tcnicas de obtencin de combustibles renovables.

1.1.

PROBLEMA DE INVESTIGACION

1.1.1. Realidad problemtica. En este siglo la humanidad afronta una grave problemtica, debido al aumento de la demanda energtica mundial, agotamiento de los combustibles fsiles, incremento del precio del petrleo y las dificultades ambientales causadas por los gases de invernadero, tales como la contaminacin local del aire y el calentamiento global. El precio del petrleo en los mercados internacionales desde principios del nuevo milenio viene mostrando una tendencia creciente, que lo llev a sobre pasar ampliamente la barrera de los 100 $ por barril en los meses centrales de 2008. De esta forma, el precio del petrleo en trminos reales (es decir, expresado en la moneda de cada pas y descontado el nivel general de precios) lleg a superar los mximos histricos alcanzados en la primera mitad de los aos ochenta en la mayora de los pases importadores (Estrada, Noguera y Lpez., 2009).

En el Per, la matriz energtica en el ao 2005, estaba compuesta fundamentalmente por un 38.8 % de petrleo y 14.5 % de gas. La balanza comercial del petrleo en el Per, desde hace 30 aos es negativa, siendo Ecuador, Colombia y Venezuela los principales abastecedores. El Per tiene uno de los combustibles ms caros de la regin, debido fundamentalmente a su poltica tributaria (60 % ISC e IGV), variaciones para contrarrestar las constantes de precios del petrleo, el gobierno ha creado en el ao 1992 el Fondo de Estabilizacin de Precios (FEP) para los combustibles, cuando se agota este fondo los precios del petrleo suben. Este precio alto de los combustibles resta

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productividad y competitividad a las empresas peruanas (Rojas, Salas y Rojas., 2006).

La situacin actual debida al agotamiento de los combustibles fsiles, incremento del precio del petrleo y dificultades ambientales, demanda urgentemente fuentes alternas de energa siendo una opcin promisoria el biodiesel; biocombustible producido primordialmente a partir de aceites provenientes de plantas

oleaginosas, cuya disponibilidad desafortunadamente, es incapaz de sustituir el mercado de petrodiesel en el mundo. El uso de microalgas para la produccin de biodiesel es una alternativa ventajosa debido al elevado contenido de lpidos y perfil idneo para la obtencin del biocombustible que stas ofrecen. Anlogamente a lo anterior, otros atributos de las microalgas son su elevada eficiencia fotosinttica, su capacidad de crecer tanto en aguas marinas, dulces, residuales y salobres, as como su velocidad de crecimiento relativamente alta (Garibay et al., 2009).

1.1.2. Formulacin del problema

Ser posible producir biodiesel a partir de microalga Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008 en fotobiorreactor tanque agitado?

1.1.3. Justificacin del problema

Los aceites vegetales son la principal materia prima para la produccin de biodiesel, razn por la cual el uso de cultivos de alto contenido oleaginoso ha sido estudiado exhaustivamente. Los principales materiales oleaginosos utilizados derivan de la palma, colza y soya, adems del girasol, coco, cacahuate, oliva, mostaza, entre otros (Hanna y Frangui, 1999).

El mercado creciente de produccin de biodiesel a partir de aceites vegetales comestibles, requerira del uso de enormes extensiones de terreno frtil, situacin

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que podra conllevar a crisis alimentarias ante la escasez de suelos cultivables. En el caso particular del sureste asitico y Brasil, el considerable incremento en su tasa de produccin de biodiesel a partir de palma y soya, ha ocasionado problemas ambientales inherentes a la deforestacin de regiones tropicales (Dismukes, et al. 2008). En consecuencia se ha planteado el uso de aceites no comestibles procedentes de cultivos marginales tales como Jatropha curcas (pin), Calophyllu inophyllum (tamanu), Pongamia pinnata (Karanja), Madhuca indica, Swidawils oniana, Ricinus communis (higuerilla) y Vernicia fordii (tung). Estos cultivos marginales no necesitan de terrenos frtiles, ya que proliferan en suelos ridos, pobres en nutrientes, con altos niveles de radiacin y baja precipitacin pluvial (Fairless, 2007). El elevado costo de la materia prima, que contribuye del 50 al 90 % del precio de produccin del biodiesel, ha obstaculizado la comercializacin del biocombustible, motivo por el que se ha propuesto el uso de aceites de desecho y de grasas animales, alternativa que no ha sido satisfactoria a causa de los gastos adicionales necesarios para el refinamiento y la transesterificacin de la materia (Al-Zuhair, 2007).

A nivel mundial varias compaas estn actualmente produciendo biocarburantes a partir de algas, como lo son GreenFuel Technologies o Algaebiofuels en EEUU, BFS en Espaa, BiokingAlgae en Holanda y Aquaflowen en Nueva Zelanda, sin embargo, la produccin de estas plantas es muy pequea y no son de mucha ayuda en la cobertura de dficit de produccin de biodiesel que existe y que se prev seguir existiendo en los aos venideros. La demanda mundial de biodiesel en este ao ser de ms de 12 millones de toneladas, mientras que la produccin de biodiesel se estima que ser de aproximadamente 8 millones de toneladas, una diferencia bastante amplia que necesita pronta cobertura (Estrada, Noguera y Lpez, 2010). En el Per se implement la LEY N 28054 LEY DE PROMOCIN DEL MERCADO DE BIOCOMBUSTIBLES donde se establece: El marco general para

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promover el desarrollo del mercado de los biocombustibles sobre la base de la libre competencia y el libre acceso a la actividad econmica, con el objetivo de diversificar el mercado de combustibles, fomentar el desarrollo agropecuario y agroindustrial, generar empleo, disminuir la contaminacin ambiental y ofrecer un mercado alternativo en la Lucha contra las Drogas (MINAM, 2005). Es de all la necesidad de investigar y desarrollar nuevas fuentes de energa renovables; dentro de ellas, la produccin de biodiesel a partir de microalga Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008 en fotobiorreactor tanque agitado se inicia para idear planes estratgicos de biodiesel en el Per, por ende desarrollar conforme a ley nuevas tecnologas para el desarrollo de energas renovables en nuestro pas, ante la futura escases de los hidrocarburos a nivel mundial.

1.1.4. Antecedentes del problema

Brenan y Owende (2009) evaluaron las tecnologas que aportan las microalgas a los sistemas de biocombustibles, centrndose en la produccin de biomasa, la cosecha, las tecnologas de conversin, y la extraccin de los co-productos tiles, tambin se examin el acoplamiento sinrgico de la propagacin de microalgas por secuestro de carbono y el potencial de tratamiento de aguas residuales, para la mitigacin de los impactos ambientales asociados con la conversin de la energa y la utilizacin. Se encontr que, mientras que hay cuestiones pendientes relacionadas con la eficiencia fotosinttica y la produccin de biomasa, los biocombustibles derivados de microalgas, podra sustituir progresivamente una proporcin significativa de los combustibles fsiles necesarios para satisfacer la creciente demanda energtica.

Hossain (2009) determin la transesterificacin adecuada, la cantidad y las propiedades fsicas del biodiesel, donde se utilizaron especies cmo Oedegonium y Spirogyra comparando la cantidad de sus aceites y la posterior produccin de biodiesel, siendo la especie Oedegonium la que presenta mayor efectividad en la obtencin de biodiesel. Sin embargo, la biomasa fue mayor en Spirogyra que en

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Oedegonium. Los sedimentos (glicerina y pigmentos) fue mayor en Spirogyra y no hubo una diferencia de pH entre Spirogyra y Oedogonium. Estos resultados indican que el biodiesel puede ser producido a partir de ambas especies y que Oedogonium es ms productiva que Spirogyra. Rodolfi et al., (2009) evaluaron treinta cepas de microalgas para determinar su productividad de biomasa y su contenido lipdico, 4 cepas fueron seleccionadas (dos marinas y dos de agua dulce), ya que son altamente productivas y con un contenido de lpidico relativamente alto. Bajo privacin de nitrgeno en las microalgas marinas cmo Nannochloropsis eustigmatophyte sp alcanzo un 60% en contenido de lpidos y se cultiv en un fotobiorreactor de panel plano alveolar para estudiar la influencia de la radiacin y de nutrientes (nitrgeno y fsforo). La productividad de lpidos aument en 117 mg/ L por da en nutrientes eficientes (con una productividad de la biomasa media de 0,36g/ L por da y 32 % de lpidos) a 204 mg/ L por da (con una productividad de la biomasa media de 0,30 g/L por da y ms del 60 % el contenido de lpidos final) en los medios privados de nitrgeno. En un proceso de cultivo de dos fases (una fase de nutrientes para producir el inculo seguido por una fase de nitrgeno privado para impulsar la sntesis de lpidos), lo que podra ser el potencial de produccin de petrleo previendo que sea ms de 90 kg por hectrea y por da. Este es el primer reporte de un aumento del contenido en lpidos y la productividad de los lpidos que el rea logra a travs de la privacin de nutrientes en un cultivo de algas al aire libre. Se demostr que Nannochloropsis eustigmatophyte sp., tiene el potencial para una produccin anual de 20 toneladas por hectrea. Abou-Shanab et al., (2010) estudiaron un total de 45 cultivos de algas que se aislaron de un lago de agua dulce en Wonju, Corea del Sur. Cinco cepas de microalgas fueron seleccionados en base a su morfologa. Se cultivaron cepas de Scenedesmus obliquo YSL02, Chlamydomonas pitschmannii YSL03, Chlorella vulgaris YSL04 y Chlamydomonas mexicana YSL0. Se analizaron la concentracin de biomasa en Scenedesmus obliquo YSL02 (1.84 0.30 g/ ) con un contenido

de lpidos inferior (29 % w / w), Los resultados sugieren que Chlorella Pitsh. es

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apropiada para la produccin de biodiesel en base a su alto contenido en lpidos y la proporcin de cido oleico. Ahmad et al., (2010) determinaron que las microalgas se pueden convertir directamente en energa, como el biodiesel, promete ser una fuente de energa renovables prometedora, en este trabajo se presenta una comparacin entre el uso de aceite de microalgas y de palma como materia prima del biodiesel. Se encontr que las microalgas son la fuente ms sostenible de biodiesel en trminos de seguridad alimentaria y el impacto ambiental en comparacin con el aceite de palma. La ineficacia y la insostenibilidad del uso de cultivos alimentarios como fuente de biodiesel, han aumentado el inters en el desarrollo de especies de microalgas para ser utilizados como fuente de energa renovable. Estrada, Noguera y Lpez (2010) desarrollaron el proceso de obtener biodiesel a partir de microalgas en sistemas cerrados, el cual responde al establecimiento y diseo de un proceso productivo, que adems es una oportunidad sostenible en regiones alejadas con dificultades sociales, ambientales y energticas. Este estudio usa la experiencia desarrollada en investigaciones previas; es importante resaltar que se trata de un proceso innovador dentro de la cadena de biocombustibles, a nivel Colombia, y Latinoamrica ya que orienta su estudio en biocombustibles de segunda generacin. Hsin Ho, Wen-Ming, Jo-Shu (2010) determinaron la mayor capacidad de consumo de y la productividad de los lpidos de la microalga Scenedesmus obliquo,

esta cepa se cultiv utilizando un medio rico en nutrientes para promover el crecimiento celular, que fue seguido por una condicin deficiente en nutrientes para provocar la acumulacin de lpidos. La productividad de los lpidos, y la tasa de consumo de fueron 292.50 mg , 78.73 mg (38.9 % de contenido de , respectivamente. Este

lpidos peso seco de la biomasa), y 549.90 mg

rendimiento es superior a los resultados de la mayora de los estudios realizados, estos lpidos estn compuestos principalmente por cidos grasos C16/C18 (que

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representan el 89 % del total de cidos grasos), que esta adecuado para la sntesis de biodiesel. Loera y Olgun (2010) determinaron las ventajas que ofrece la produccin de biodiesel a partir de microalgas, tales como: a) Rendimiento de aceite mucho mayor que cualquier cultivo convencional; b) Bioenerga que presenta una huella ecolgica reducida; c) Se requiere una superficie muy pequea para cubrir la demanda actual de diesel de petrleo; d) Las microalgas oleaginosas pueden ser cultivadas en agua de mar, en agua salobre o en aguas residuales, disminuyendo as la presin sobre el agua dulce requerida para la produccin de alimentos; e) Las microalgas son excelentes captadoras de ; f) Con relacin a la emisin de

gases invernadero, es de los bioenergticos que muestran un valor negativo. Sin embargo, la tecnologa para la produccin de biodiesel a partir de microalgas, an enfrenta grandes retos para lograr una produccin a escala comercial y de manera rentable.

Singh y Gu (2010) evaluaron el impacto que estn teniendo las microalgas que ganan inters en el escenario energtico actual, debido a su rpido crecimiento conjuntamente a los lpidos que son relativamente altos, hidratos de carbono y su contenido de nutrientes, todas estas propiedades la hacen una excelente

fuente de biocombustibles como el biodiesel, el bioetanol y el biometano, as como una serie de otros productos de valor farmacutico y nutracuticos. La conceptualizacin de una biorefinera de algas, ha sido recogida y analizada para presentarse como una evaluacin econmica viable, determinando costos de operacin y mantenimiento, conjuntamente con la maximizacin de la produccin de microalgas ricas en petrleo.

Moazami et al., (2012) evaluaron la produccin de algas a gran escala utilizando la Nannochloropsis sp. en interiores de estanques abiertos, algunos factores claves en la productividad del estanque abierto es la uniformidad de la distribucin de los nutrientes y , Los sistemas de cultivo se evaluaron en tres estanques de

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rodadura con una capacidad de 2000 L cada uno, midindose parmetros cmo los medios de cultivo (agua de mar), iluminacin (150 mol ), pH (7,5

0,2), el nivel de agua (30 cm), y la temperatura (25 C). El resultado demostr que un mayor contenido de biomasa y lpidos pueden obtenerse mediante la variacin de las velocidades de las paletas de las ruedas. Con el aumento de la velocidad del radiador de 1.4 a 2.1 , la productividad de la biomasa aumento

significativamente. La cantidad de hidrocarburo vari desde 55 hasta 70 mg de peso celular, mostrando la mejor combinacin de productividad de la biomasa y el contenido de lpidos en condiciones interiores.

Qi Lai et al, (2011) evaluaron los aceites extrados a partir de cepas Botryococcus braunii, Chlorella vulgaris y Chlorella pyrenoidosa. Donde el mayor porcentaje de lpidos es producido a partir de Chlorella vulgaris (40.7 %, w/w), y Chlorella pyrenoidosa (2.2 %, w/w). Los componentes principales de cidos grasos del aceite de microalgas de Chlorella pyrenoidosa incluyen cido mirstico, cido palmtico, cido esterico, cido oleico, cido linoleico y cido linolnico. La produccin de biodiesel a partir de aceite de microalgas fueron catalizadas por dos lipasas La Penicillium expansum lipasa (ABP) y Candida antrctica lipasa B en dos tipos de disolventes: uno que es el inico (1-butil-3-etilmidazoliohexanofluorofos fato) y un disolvente orgnico (terc-butanol). Los factores en el rendimiento de la produccin de aceite de estas microalgas fueron estudiadas por cuatro sistemas de reaccin: metanol/aceite relacin molar, temperatura de reaccin, volumen de disolvente y el contenido de agua; estos estudios bajo condiciones ptimas permiten a las enzimas tener un rendimiento significativamente ms alto en lquido inico (90.7 % y 86.2 %) con respecto a la obtenida con el terc-butanol (48.6 % y 44.4 %). Estos resultados demuestran que los lquidos inicos ofrecen un nuevo tipo de disolvente en la mejora de la produccin enzimtica de biodiesel a partir de microalgas.

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1.1.5. OBJETIVOS

1.1.5.1.

OBJETIVO GENERAL

Producir biodiesel a partir de microalga Scenedesmus acuminatum IMPLBA-008 en fotobiorreactor tanque agitado.

1.1.5.2.

OBJETIVOS ESPECFICOS

Analizar el rendimiento de biodiesel que produjo la microalga Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008 en fotobiorreactor tanque agitado. Establecer los parmetros ms adecuados en la metodologa de cultivo para obtener biodiesel a partir de la microalga Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008. en fotobiorreactor tanque agitado.

1.2.

MARCO REFERENCIAL.

1.2.1. Marco Terico

1.2.1.1.

Algas.

Las algas son organismos generalmente de organizacin sencilla, con diversos niveles de construccin morfolgica y reproductora por lo comn con pigmentos fotosintticos, de vida acutica o terrestre, microscpicos y macroscpicos. El

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trmino alga, denominacin que se dio inicialmente a estos grupos, por el hecho de poseer algunos caracteres comunes, cmo es el medio de vida y en cierto modo su aspecto externo, tal excepcin en nada se relaciona con los caracteres genticos y fotosintticos de las diferentes taxas (Fernndez, 1982).

1.2.1.1.1.

Generalidades de las algas.

Las algas son o bien unicelulares o coloniales; las ltimas forman agregados, mientras que s la clulas estn agregadas extremo con extremo se dicen que son filamentosas. Entre las formas filamentosas aparecen filamentos sin ramificacin y filamentos con una intricada ramificacin. Contienen clorofila y, por ello son de color verde. Sin embargo, algunas aparecen de color marrn o rojo debido a la presencia de xantofilas que enmascaran el color verde. Las algas contienen uno o ms cloroplastos que, como se saben, encierran los pigmentos fotosintticos. A menudo, los cloroplastos pueden ser reconocidos con ayuda del microscopio dentro del citoplasma, precisamente por poseer color verde. Aunque las algas verdes y en menor medida las rojas estn bastante relacionadas con las plantas verdes. Otros grupos como es el de las diatomeas o las pardas constituyen linajes antiguos dentro de las algas. Las Euglenas estn incluso menos derivadas y, como se ha indicado antes, estn relacionadas con los protozoos flagelados (Madigan, Martinko y Parker, 2007).

1.2.1.1.2.

Microalgas

Las microalgas son organismos fotosintticos que contienen clorofila y pigmentos carotenoides, lo que las hace pioneras en la produccin primaria de la cadena alimenticia acutica. Sostienen las pesqueras marinas y en agua dulce, son importantes en la acuicultura como alimento para larvas, en la biotecnologa y biomedicina, como complemento alimenticio para humanos, uso como

biofertilizantes, biorremedacin y biocombustibles (Borowitzka et. al 2005).

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Grupo

Nombre

Morfologa Unicelulares

Pigmentos

Representante tpico

Material de reserva Almidon(-

Pared celular

Habitad

Chlorophyta

Algas verdes

con ramificaciones

Clorofilas a yb Chlamydomonas

1,4-glucano), sacarosa Paramilon(1,2-glucano) Almidn( 1,4-glucano)

Agua dulce, Celulosa suelos

Euglenophyt a Dinoflagellat a

Euglenoide s Dinoflagela dos

Unicelular flagelados Unicelular flagelados

Clorofilas a yb Clorofilas a yc

Euglena

No

Agua dulce

Gonyaulax

Celulosa Dos

Marinas

Diatomeas, Chrysophyta Algas pardas Unicelular

Clorofilas a yc

Pfiesteria Nitzchia Lpidos

componenet essuper compuestos de slice

Agua dulce,marinas, suelos

Filamentosas con Phaerophyta Algas pardas ramificaciones grandes y parecidas a las plantas Unicelular, Rhodophyta Algas rojas filamentosas con ramificaciones Clorofilas a y d, fiocianina, ficoeritrina. Polysiphonia Florideanstar ch( -1,4-y -1,6glucano) Celulosa Marinas Clorofilas a y c, xantofilas Laminaria Laminaria ( -1,3glucano) matrinol Celulosa Marinas

Cuadro 1. Propiedades de los principales grupos de algas

1.2.1.1.3.

Importancia de las algas.

El significado econmico directo o indirecto de las algas verdes, tiene igual paralelo con la diversidad de este grupo taxonmico. As en primer lugar y gracias

22

a su fcil cultivo en el laboratorio especies de Chlamydomonas y Chlorella han sido elegidas como organismos experimentales para investigaciones sobre aspectos estrictamente biolgicos como la estructura de la pared celular, de los flagelos, cloroplastos, ncleo y otras inclusiones, as como aspectos fisiolgicos del proceso fotosinttico y la reproduccin (Acleto y Zuiga, 1998). Las microalgas crecen de manera espontnea en ambientes acuticos y hmedos. Sin embargo pese a su abundancia en la naturaleza, para la produccin de biocombustibles en masa se lleva acabo su cultivo controlado estas plantas en tierra firme. Diversas son las causas que llevan a ello: Por un lado se asegura la obtencin de la variedad de microalgas adecuada en funcin de la utilidad que se quiera obtener de ella. Se estima que existen ms de 300 000 especies de algas, pero pocas de ellas poseen las caractersticas necesarias para hacer viable la produccin de biocombustibles con fines comerciales. Por otro lado el cultivo asegura la produccin del volumen de microalgas necesario controlando aspectos como la extensin del cultivo y su rendimiento. Optimizando las necesidades vitales de las microalgas es posible obtener una reproduccin mucho ms rpida de lo que se obtendra en estado natural (Barraza et al., 2009).Tambin se

consideran como alimentos funcionales, capaces no slo de elevar el contenido nutricional de los alimentos tradicionales, sino tambin de afectar positivamente la salud de animales y humanos. Poseen cantidades apreciables de carbohidratos, lpidos, vitaminas, minerales, cidos grasos poliinsaturados (omega 3 y omega 6) y antioxidantes (carotenos). Algunas tienen, incluso, un contenido amino- acdico superior al presentado por alimentos convencionales; tal es el caso de Scenedesmus, que posee niveles de aminocidos esenciales superiores al patrn de la FAO; adems, niveles de protena entre 25 y 65 % lo que la convierte en una atractiva fuente de protena (Quevedo et al., 2008).

1.2.1.2.

Biodiesel.

Biodiesel o aceite vegetal moliester se produce de la reaccin vegetal con etanol o bioetanol ante un catalizador para producir alquil-ster y glicerina, la cual luego

23

es removida. El aceite se produce a partir de plantas oleaginosas o rboles tales como, girasol, soya, palma, cocotero o jtrofa, pero tambin se puede producir de grasas animales, sebo y aceite para cocinar ya usado (Dufey, 2006).

1.2.1.2.1.

Proceso de obtencin del biodiesel

La materia prima para la elaboracin de biodiesel es muy variada (distintos tipos de aceites vegetales y grasas animales, aceites reciclados, etc.) haciendo que el resultado de la reaccin qumica correspondiente sea una multiplicidad de steres de cidos grasos distintos, en proporciones muy variables, todos de ellos denominados biodiesel. La reaccin qumica que mejores resultados ha demostrado tener obtener biodiesel es la transesterificacin, est consiste en la reaccin entre un triglicrido (compuesto por una molcula de glicerol esterificada por tres molculas de cidos grasos), contenido en aceite vegetal o grasa animal y un alcohol ligero (etanol o metanol), obtenindose como productos y glicerina y steres derivados de los tres cidos grasos de partida, es decir biodiesel. En general se suele usar metanol como alcohol de sustitucin, en cuyo caso el

biodiesel estar compuesto por steres metlicos (IICA, 2007).

1.2.1.2.2.

Produccin potencial y estimada del biodiesel

La produccin de biodiesel por hectrea con respecto a la canola es de 110 litros/Ha, mientras que la soya puede producir 420 Litros/ Ha. El pin produce 1590 Litros/ Ha aproximadamente, siendo capaz de producir hasta 3 toneladas de semillas, las que se transforman en aceites, las cules se convierten en aceite, las cules se convierten en biodiesel, combustible cuya combinacin con aceite y alcohol puede sustituir al diesel (IICA, 2008).

24

Palma aceitera

890 5550 1590 420 1100

Girasol
Pin Soya Canola

FIGURA 1. Rendimiento de materia prima para biodiesel por hectrea (Litro/ Hectrea) Fuente: instituto Alto Andino et al., 2004. 1.2.1.2.3. Propiedades fsico-qumicas

Gracias a que las propiedades del biodiesel son muy similares a las del diesel del petrleo, los motores no necesitan ninguna modificacin para poder utilizarlo (Frames, 2002). Las emisiones de dixido de azufre ( ) producidas por el

biodiesel son prcticamente nulas, ya que contiene una cantidad despreciable de azufre. Las emisiones de todos los contaminantes principales (con la excepcin de los xidos de nitrgeno), son netamente ms bajas, habindose reportado reducciones de hasta 90 % en los hidrocarburos no quemados, 40 % en el monxido de carbono (CO).Adems, el biodiesel tiene propiedades lubricantes muy importantes lo cual hace innecesaria la adicin de productos que puedan contribuir a las emisiones. El biodiesel presenta un punto de ignicin significativamente ms alto que el petrodiesel, siendo su uso mucho ms seguro. El nmero de ctano del biodiesel tiende a ser ms alto, ayudando al proceso de arranque del motor y evitando el cascabeleo (Carlsteim, 2006).

25

Cuadro 2. Comparacin del diesel y biodiesel

Propiedad Propiedades estndar Densidad (15C) Viscosidad (40C) Punto de ignicin Contenido de azufre Nmero de cetano Contenido de oxigeno Poder calorfico Grado de eficiencia % % (peso) C % (peso) 820 -860 2.00 4.50 >55 <0.20 >49 0 35.6 38.2 875 - 900 3.0 5.0 >110 <0.01 >49 10.9 32.9 40.7 Unidad Diesel Norma Europea 590 Biodiesel

Fuente: Frames, 2002

1.2.1.2.4.

Ventajas y desventajas del biodiesel

Ventajas

El ciclo biolgico en la produccin y el uso del biodiesel reduce aproximadamente en 80 % de las emisiones de anhdrido carbnico, y casi 100 % las de dixido de azufre, tambin la combustin de biodiesel disminuye en 90 % la cantidad de hidrocarburos totales no quemados, y entre 75 y 90 % en los hidrocarburos aromticos. Adems, proporciona significativas reducciones en la emanacin de partculas y de monxido de carbono, cuando se le compara con el diesel de petrleo (Frames, 2002). Distintos estudios en EE.UU, han demostrado que el uso

26

del biodiesel reduce en 90 % los riesgos de contraer cncer, debido a que no contiene hidrocarburos aromticos policclicos (Landa, 2004). Segn WRM (Movimiento Mundial por los Bosques) para mover los coches y autobuses europeos con biodiesel se requeriran 25.9 millones de hectreas. A nivel mundial, una sustitucin completa del petrleo por biodiesel, implicara que la mayor parte de la superficie cultivable del planeta y enormes consumos de agua potable deberan dedicarse a producir biocombustibles y no alimentos para las personas (Llacog, 2007). La produccin de biodiesel constituye una alternativa para aquellas tierras agrcolas muertas. De esta forma, se fijara la poblacin en el mbito rural, manteniendo los niveles de trabajo y renta, y fomentando la creacin de diferentes industrias. Igualmente, mejora la relacin productos primarios del petrleo, y representa la nica respuesta econmicamente vlida a los subsidios del sector agropecuario en los pases industriales (Gonzales, 2007).

Desventajas

Debido a su mejor capacidad solvente que el petrodiesel, los residuos existentes son disueltos y enviados por la lnea de combustible, pudiendo atascar los filtros los steres son ms agresivos que el gasleo y pueden atacar al caucho y a los tipos comunes de pinturas, para evitar el riesgo de estos ataques, es conveniente utilizar pinturas acrlicas y sustituir las conducciones de caucho por tefln o caucho fluorado (Aguilar, 2007).

27

1.2.1.2.5.

Microalgas en la produccin de biodiesel

Las microalgas con elevadas productividades lipdicas son deseables para la elaboracin de biodiesel, razn por la cual la cantidad de lpidos contenidos en la biomasa y la velocidad de crecimiento, sumados a la eficiencia metablica y la robustez del microorganismo, son parmetros relevantes para su seleccin (Chisti, 2007). Recientemente, el potencial de las microalgas para la produccin de biodiesel ha sido sobre estimado por diversas empresas que aseguran productividades iguales o superiores al mximo terico posible (Wijffels, 2008).

1.2.1.2.6.

Produccin de microalgas.

La produccin de biodiesel a partir de microalgas es un proceso conformado, en trminos generales, por las etapas elementales de produccin de biomasa rica en lpidos, recuperacin o cosecha de la biomasa, extraccin de lpidos y transesterificacin (Chisti, 2007). La forma ms simple de cultivo; se trata bsicamente de piscinas descubiertas expuestas al sol. Al agua de estas piscinas se suministra nutrientes para que las microalgas puedan reproducirse a un ritmo acelerado; es el sistema menos eficiente aunque el ms econmico. Sin embargo, a nivel industrial no resulta rentable. Por otra parte los fotobiorreactores son conductos transparentes aislados del exterior en los cuales se desarrollan las microalgas. Estos tubos se colocan al exterior para captar mayor cantidad de radiacin solar, en los fotobiorreactores las microalgas no slo reciben la radiacin natural, sino que aprovechan tambin la radiacin artificial, esta es su gran ventaja frente a los estanques. Sin embargo, ello supone unas instalaciones y unos costes econmicos y energticos adicionales que son muy importantes ya que pueden ir situados tambin dentro

28

de invernaderos de plstico o de cristal, para as disponer de una temperatura ambiente ms elevada (Barraza et al., 2007).

1.2.1.3.

Comparacin entre cultivos de estanques abiertos y

fotobiorreactores.

Los mtodos de produccin se comparan las combinaciones ptimas de productividad de la biomasa y la concentracin que se han alcanzado realmente a gran escala en fotobiorreactores y canales. Los fotobiorreactores ofrecer mucho ms rendimiento de aceite por hectrea en comparacin con los estanques abiertos, esto es porque la productividad volumtrica de biomasa fotobiorreactores es ms de 13 veces mayor en comparacin con los estanques. Ambos mtodos de produccin y la pista de rodadura fotobiorreactor son tcnicamente factibles, las instalaciones de produccin con diseos, y unidades de rodadura de dimensiones similares se han hecho han utilizado ampliamente en operaciones comerciales (Spolaore et al, 2006).La recuperacin de la biomasa de microalgas a partir del cultivo es necesaria para extraer el aceite. La biomasa se recupera fcilmente a partir del caldo por filtracin y centrifugacin, y otros medios. El costo de recuperacin de la biomasa puede ser significativo. La recuperacin de biomasa a partir de caldo de cultivo fotobiorreactor cuesta slo una fraccin del costo de recuperacin para el caldo producido en conductos elctricos (Molina Grima et al., 2003). Cuadro 3. Comparacin los mtodos de produccin de fotobiorreactores y estanques abiertos
Variable Produccin de biomasa anual (Kg) Productividad volumtrica kg Concentracin de biomasa en caldo Kg Grado de dilucin Espacio necesario Fotobiorreactor 100,000 1.535 4.00 0.384 5.681 Estanques abiertos 100,000 0.117 0.14 0.250 7828

29

Rendimiento de aceite Consumo de anual (Kg)

136.9 183,333

99.4 183,333

Fuente: Chisti., 2007 1.2.1.3.1. Fotobiorreactor tanque agitado.

Usualmente, son recipientes cilndricos cuya relacin de altura a dimetro es de uno a tres, la agitacin se lleva a cabo por uno o ms impulsores, los cuales pueden ser axiales o radiales. El gas es suministrado por un difusor, sin embargo, la dispersin del gas es funcin del impulsor (Shuler y Kargi, 2002). Los cambios asociados en los diseos de los fotobiorreactor estanques agitados de acero inoxidable se han basado en su interior, es decir, en el diseo de nuevos impulsores, dispersores de aire, deflectores y en el control de las variables del proceso. Sin embargo, todos se rigen sobre el mismo diseo tradicional. Adems, los requerimientos y necesidades actuales para la produccin debieron molculas teraputicas a gran escala y a menor costo, estn forzando la innovacin de fotobiorreactores, hacindolo un campo nuevo en el diseo ingeniera y en el entendimiento de los fenmenos de transferencia que aqu ocurren, como a su vez en la optimizacin de estos fenmenos (Trujillo y Valdez, 2009).

1.2.1.3.2.

Especies de microalgas productoras de aceite.

Se han catalogado las microalgas en diversas clases productoras del aceite: Diatomeas (Bacillariophyceae): La cual dominan el fitoplancton de los ocanos. Existen alrededor de 100 mil especies conocidas. Contiene slice polimerizado en sus paredes celulares. Todas sus clulas almacenan carbn en diversas formas. Almacenan carbn en forma de aceites naturales o como polmeros de carbohidratos. Alga Verde (Chlorophyceae): Son tambin muy abundantes, particularmente en aguas continentales (lagos, ros, albercas). Estas se presentan como unicelulares o en colonias. Almacenan principalmente almidn, pero tambin aceites pueden ser producidos bajo ciertas condiciones. Alga Dorada

30

(Chrysophyceae): Este grupo de algas es similar a las Diatomeas en su contenido bioqumico y pigmentacin. Existen alrededor de mil especies conocidas, y se encuentran principalmente en sistemas de aguas continentales, produce y almacena aceites naturales y carbohidratos (Barraza et al, 2007). Cuadro 4. Contenido lipdico de algunas microalgas en condiciones autotrficas
Especie Ankistrodesmus sp. Chlorella sp. Dunaliella primolecta Euglena gracilis Isochrysis sp. Nitzschia sp. Scenedesmus dimorphus Scenedesmus obliquus Tetraselmis sueica Contenido lipdico(g lpido/g pesopeso x100) 24.5 40.3 28.0 32.0 23.0 53.8 55.0 7.1 47.0 22.1 47.0 6.0 40.0 11.0 - 55.0 15.0 23.0

Fuente: Chisti., 2007 1.2.1.4. microalgas. Extraccin de petrleo y produccin de biodiesel a partir de

Las algas se secan durante 20 min a 80 C en un incubadora para liberar agua, posteriormente se prepara una solucin de hexano y ter (20:20 mL) donde se va a mezclar con las algas secas para extraer el aceite. La mezcla se mantiene durante 24 horas, la biomasa se recoge despus de filtrar y ponderar. El aceite extrado se evapora para liberar soluciones de hexano y ter, se prepara una mezcla de catalizador y metanol: 0,25 g de NaOH con 24 mL de metanol y se agita adecuadamente por 20 minutos, esta mezcla se vierte en el aceite de algas, donde en el matraz que contiene la solucin, se agita durante tres horas y despus de agitar la solucin se mantiene durante 16 horas a temperatura ambiente para obtener el biodiesel y las capas de sedimentos. La separacin del

31

biodiesel se da por sedimentacin, posteriormente se lava en un 5 % de agua hasta que est completamente limpio. El biodiesel se seca y finalmente se mantiene bajo ventilacin durante 12 horas, la produccin de biodiesel se mide mediante el uso de probeta, midiendo el pH y se almacena para los anlisis posteriores (Hossain, 2008).

1.2.1.4.1.

Aceptabilidad de biodiesel a partir de microalgas

Para la aceptacin del usuario, el biodiesel de microalgas tendrn que cumplir con las normas existentes, en Estados Unidos la norma en cuestin es la norma ASTM norma del biodiesel. En la Unin Europea, los estndares separados para biodiesel destinado al uso de vehculos (norma EN 14214) y para su uso como combustible para calefaccin (norma EN 14213) (Knothe, 2006). Los aceites de microalgas se diferencian de la mayora de aceites vegetales en ser muy rico en cidos grasos poliinsaturados con cuatro o ms dobles enlaces (Belarbi, Molina y Chisti, 2000). Algunos aceites vegetales tambin se enfrentan a este problema. Por ejemplo, los aceites vegetales tales como oleico en el aceite de canola contienen grandes cantidades de cido linoleico (C18: 2n-6; 2-dobles enlaces) y el cido linolnico (C18: 3n-3; 3-dobles enlaces). Aunque estos cidos grasos tienen una estabilidad mucho mayor oxidativo en comparacin con DHA y EPA, la norma europea EN 14214, menciona los lmites de contenido de cido linolnico, ster metlico de biodiesel para el uso de vehculos a 12 % (en moles). No existe tal limitacin para biodiesel destinado a ser utilizado como aceite de calefaccin, pero biodiesel aceptable debe cumplir otros criterios relativos a la medida de insaturacin total del aceite. El grado de insaturacin del aceite de microalgas y su contenido de cidos grasos con ms de 4 dobles enlaces se puede reducir fcilmente por hidrogenacin parcial cataltica del petrleo, la misma tecnologa que se utiliza comnmente en la fabricacin de margarina de aceites vegetales (Jang, Jun y Min, 2005).

32

1.2.1.4.2.

Factibilidad econmica

La factibilidad de la produccin de biodiesel de microalgas depende de su competitividad con los combustibles fsiles, de manera tal que los costos de produccin resultan decisivos. La estimacin de la viabilidad de esta tecnologa es posible mediante una evaluacin anloga a la realizada por Chisti (2008), en la cual se determina el mximo costo de produccin de biomasa microalgal con un contenido oleaginoso especfico, que posibilitara su competencia con los precios actuales del petrleo. El clculo se fundamenta en la definicin de la cantidad de biomasa que, a partir del biodiesel y biogs derivados de la misma, proporciona una cantidad de energa equivalente a la de un barril de crudo (159 L). Acorde con la OPEC (OPEC Annual Report, 2008), en el 2008 el costo promedio del barril de petrleo fue de US$ 94.45. Para poder contender con este precio, el gasto en la obtencin de biomasa microalgal con un contenido lipdico del 55 %, esto debe ser inferior a los US$ 323 ton , algunas compaas productoras de biomasa , por

microalgal han reportado costos de procesos de US$ 370 ton

ende la tecnologa actual podra ser econmicamente viable (Shenk et al., 2008).

1.2.2. Marco conceptual

1.2.2.1.

Biodiesel.

El biodiesel es un combustible domstico y renovable para los motores diesel. Hecho de la agricultura co-productos y subproductos como aceite de soja, otros aceites naturales y grasas, es un biocombustible avanzado. El biodiesel puede usarse en cualquier mezcla con combustible diesel de petrleo (Biodiesel.org, 2010).

33

1.2.2.2.

Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008.

Es una clorofita de organizacin cenobial comn en aguas dulces y contaminadas por drenaje domsticos, este gnero se conoce desde hace ms de 150 aos, la forma ms comunes son cenobios de cuatro clulas, con o sin espinas (Azpiroz, 1984).

1.2.2.3.

Fotobiorreactor tanque agitado.

Usualmente, son recipientes cilndricos cuya relacin de altura a dimetro es de uno a tres, la agitacin se lleva a cabo por uno o ms impulsores, los cuales pueden ser axiales o radiales. El gas es suministrado por un difusor, sin embargo, la dispersin del gas es funcin del impulsor (Shuler y Kargi, 2002).

34

2. 2.1.

METODOLOGA Hiptesis Implcita.

2.2.

Metodologa

2.2.1. Tipo de estudio Biotecnolgico.

2.2.2. Diseo Aplicada, descriptiva.

2.3.

Poblacin y muestra

Las cepa de Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008 (en estudio de tipificacin), se adquiri en los laboratorios de biotecnologa acutica del Instituto del Mar del Per (IMARPE), la cual estuvo conformada por 10 mL. de cepa purificada, los fotobiorreactores tanques agitados y NPK (Nitrofoska verde), las pruebas experimentales se realizaron en el Laboratorio de Microbiologa y Biotecnologa{ia de la Facultad de Ciencias Biolgicas de la Universidad Privada Antenor Orrego.

35

2.3.1. Mtodo de Investigacin

2.3.1.1.

Descripcin del proceso de preparacin del medio de cultivo del

Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008. en fotobiorreactor tanque agitado.

De acuerdo al mtodo descrito por Andrade et al., (2009), para su crecimiento y mantenimiento, los cultivos fueron iniciados con un inculo de 100 l de la microalga Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008, en botellas de vidrio de 500 mL de capacidad conteniendo un volumen de 200 mL de agua con 2 mL de nitrofoska al 1% y mantenindose bajo condiciones de iluminacin (12 Hs luz: 12 Hs oscuridad), y una temperatura que oscil entre los 22 a 25 C.

El cultivo total fue de 76 Litros que fueron cultivados en 6 tanques agitados de diferentes capacidades de volumen que se muestran en el cuadro 5. En el cuadro 5 se presenta el contenido de volumen en fotobiorreactores tanques agitados.

Cuadro 5. Contenido de Volumen en fotobiorreactores tanques agitados

TANQUE 1 2 3 4 5 6

VOLUMEN (L) 20 20 16 8 6 6

36

Fuente: Elaboracin propia.

En el cuadro 6. Muestra la composicin qumica del Nitrofoska verde (g/ L). Cuadro 6 Composicin qumica del Nitrofoska verde (g/L). Componente Nitrogeno total (N) Fsforo( Potasio( ) Porcentaje 25% 10% 17.5% 1.6% 13% 320 ppm 500 ppm 160 ppm 150 ppm 100 ppm 10 ppm

Magnesio (MgO) Azufre (S) Manganeso (Mn) Hierro (Fe) Cobre (Cu) Boro (B) Cinc (Zn) Molibdeno (Mb) Fuente: Compoexpert, 2011.

2.3.1.2.

Extraccin de aceites de Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008 en

fotobiorreactor tanque agitado.

El cultivo microalgal se centrifugo a 2500 rpm durante 10 minutos, obteniendo una pasta hmeda de 1.6 L, luego se procedi a extraer el aceite. Mediante la siguiente tcnica de extraccin:

37

Secado y triturado: La pasta hmeda (1.6 L), se sec en incubadora a 80 C, durante 2 dias, una vez secado se procede a triturar la pasta seca con un mortero para facilitar la extraccin de aceites por parte de los reactivos.

Preparacin de los reactivos: Para esta extraccin de aceites usaremos como agentes extractores el hexano y ter, en proporciones a la pasta seca que obtuvimos que fue de 8.5 g. donde corresponde 5.6 mL de ambos reactivos, una vez mezclado el hexano y ter se agit a 280 rpm por 20 minutos segn nuestro protocolo de referencia (Hossain, 2008). Homogenizado: La mezcla de la solucin (hexano y ter), se vierte en las algas secas para extraer el aceite, agitndose lentamente por 5 minutos, luego de esto se mantendr por 24 horas a temperatura ambiente. Filtrado y ponderacin: se utiliz el papel de filtro como mtodo de separacin del aceite microalgal y la biomasa seca, obteniendo 2.9 mL de aceite. Evaporado: Se somete el aceite a 30 C por 10 minutos para liberar soluciones de hexano y ter. En la figura 2. Presenta el Diagrama de flujo para la obtencin de aceite de Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008
Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008 Secado y triturado Preparacin de los reactivos Homogenizado Filtrado y Ponderacin

38

Evaporado Aceite de Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008

FIGURA 2. Diagrama de flujo para la obtencin de aceite de Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008 Fuente: Hossain, 2008. 2.3.1.3. Obtencin de biodiesel a partir del aceite de Scenedesmus

acuminatum IMP-LBA-008.en fotobiorreactor tanque agitado.

Preparacin de las mezcla del catalizador y metanol: Se utiliz 0.01g de NaOH y 6.8 mL de metanol que se mezclaron en un frasco de vidrio color ambar, luego se agito a 300 rpm por 20 minutos.

Homogenizado: La mezcla se vierte en el aceite microalgal (2.9 mL) luego se agita durante 3 horas a 500 rpm por 3 horas para posteriormente almacenar a temperatura ambiente durante 16 horas para obtener el biodiesel y las capas de sedimento. Lavado: el biodiesel obtenido (5.2mL) se lav con agua (5%) en un tubo de ensayo, a centifugacin por 4000 rpm durante 8 minutos, luego se procedi a retirar el agua con la ayuda de micropipetas, dejando el biodiesel bajo ventilacin durante 12 horas.

En la figura 3. Muestra el Diagrama de flujo para la obtencin de biodiesel de Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008.
Aceite de Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008 Preparacin de mezcla catalizador y metanol Homogenizado Lavado

39

Biodiesel de Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008

FIGURA 3. Diagrama de flujo para la obtencin de biodiesel de Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008. Fuente: Hossain, 2008. 2.4. Tcnicas y recoleccin de datos.

Se determin la desviacin estndar y coeficiente de variabilidad de la biomasa de las microalgas (Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008.), se hall el nmero de microalgas por mL de cultivo, mediante cmara de Neubauer que incluye recuentos finales a los 22 das del cultivo (Scenedesmus acuminatum IMP-LBA008), antes de su cosecha y centrifugado. Tambin se midi el pH del cultivo para posteriormente tener los anlisis respectivos.

2.4.1. Anlisis de microscopia del Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008.

Se realiz el anlisis microscpico para determinar la no presencia de diferentes microorganismos que no sea la microalga de inters (Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008.

2.4.2. Determinacin del peso hmedo total.

Para la determinacin del peso hmedo del Scenedesmus acuminatum IMP-LBA008 se seguir los siguientes pasos: Centrifugar todo el cultivo microalgal de Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008. Hallar por diferencia la biomasa final.

40

2.5.

Mtodos de anlisis de datos para el biodiesel de Scenedesmus

acuminatum IMP-LBA-008

2.5.1. Desviacin estndar (DS) Es una medida de dispersin e indica cunto pueden alejarse los valores respecto al promedio, por lo tanto se aplica para contrastar variabilidad de los resultados obtenidos (PRAT et al., 2004). Se estim mediante la ecuacin 1.

xi S2
i 1

n 1

(1)

Dnde:

= Dato que est entre (o, n) = Promedio de los datos = Numero datos

2.5.2. Coeficiente de variacin (CV)

Es un indicador estadstico y muestra una mejor interpretacin porcentual del grado de variabilidad que la desviacin estndar. A mayor valor de CV, mayor heterogeneidad de los valores de la variable; y a menor CV, mayor homogeneidad entre ellos (PRAT et al., 2004). Se estim con la ecuacin 2.

CV

S X

100

(2)

Dnde:

S = Desviacin estndar

X = Promedio o media aritmtica

41

3.

RESULTADOS

3.1.

Conteo de microorganismos en los diferentes fotobiorreactores

tanques agitados y pH utilizado mediante la etapa de cultivo microalgal. En el cuadro 7. Se presenta el conteo final en cmara Neubauer (22 dias de cultivo de Scenedesmus acuminatum IMP-lBA-008), promedio, desviacin estndar y coeficiente de variabilidad. Cuadro 7. Conteo final en cmara Neubauer (22 das del cultivo de Scenedesmus
(UFC/0.1 mm3) c. variabilidad

Ftbr

Cuadrantes

pH

suma

Promedio

(UFC/mL)

Promedio

D. estndar

1 2 3 4 5 6

8 6 6 5 2 7

2 5 4 2 8 8

5 6 7 3 4 2

6 2 6 9 9 6

6 8 5 7 5 8

7 7 7 7 7 7

27 27 28 26 29 31

5.4 5.4 5.6 5.2 5.8 6.2

135 135 140 130 145 155

89443

0.06

acuminatum IMP-LBA-008), promedio, desviacin estndar y coeficiente de variabilidad. Fuente: Elaboracin propia.

42

En la figura 4. Se muestra los fotobiorreactores tanques agitados y sus respectivos conteos finales de UFC/mL de Scenedesmus acuminatum IMP-LBA 008 a los 22 das.
1.60E+06 1.55E+06 1.50E+06 UFC/ mL 1.45E+06 1.40E+06 1.35E+06 1.30E+06 1.25E+06 0 1 2 3 4 5 6 7 Fotobiorreactores tanques agitados

FIGURA 4 . Fotobiorreactores tanques agitados y sus respectivos conteos finales de UFC/mL a los 22 das.

Fuente: elaboracin propia. 3.2. Observaciones microscpicas del Scenedesmus acuminatum IMP-

LBA-008. En la figura 5. Se muestra las observaciones microscpicas del Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008 a los 8 das.

43

En la figura 6. Se muestra las observaciones microscpicas del Scenedesmus FIGURA 5. Observacin microscpica del Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008 a los 8 das acuminatum IMP-LBA-008 a los 16 das.

FIGURA 6. Observacin microscpica del Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008

a los 16 das.

En la figura 7. Se muestra las observaciones microscpicas del Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008 a los 21 das.

44

FIGURA 7. Observacin microscpica del Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008 a los

21 das. 3.3. Peso hmedo y rendimientos del cultivo microalgal en el proceso de

cosecha y secado para la obtencin de biodiesel.

En 76 litros de cultivo se obtuvo 1.5 Kg de pasta microalgal, de pasta de Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008, de lo cual determinamos un peso de 0.019 Kg/L.

3.4.

Rendimientos del aceite del Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008

en la obtencin de biodiesel.
El rendimiento obtenido fue de 53%.

45

4. DISCUSIN. Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008, logr adaptarse a nuestro medio de cultivo empleado nitrofoska al 1 %, y los parmetros: 12 Hs Luz, 12 Hs oscuridad, flujo de aire 2000 mL/ min, pH 7, teniendo en 22 das una biomasa promedio de UFC/mL (Cuadro 7), sin detectar algn microorganismos exgeno a esta microalga. Anteriormente Andrade (2009) evalu el crecimiento del Scenedesmus sp., utilizando aguas residuales de pescado para la produccin de biomasa, en sistemas abiertos con volumen de 150 L, en este experimento se destaca la produccin de biomasa que fue UFC/ mL, lo cual demuestra que nuestro

sistema de cultivo fue superior en la produccin de biomasa, debido al buen funcionamiento de los fotobiorreactores tanques agitados por burbujeo, ya que en condiciones cerradas y controladas genera mayor actividad de la microalga, debido a que la aireacin fue constante y fluida, para su mayor crecimiento y adaptacin. Segn lo que indica Spolaore et al (2006), un sistema de fotobiorreactores es 13 veces ms productivo que un sistema raceways (sistema abierto) que generalmente alcanza de a UFC/ mL.

Durante la etapa de cosecha del Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008, se tuvo serios problemas en la etapa de centrifugacin, ya que la potencia del equipo no era la ptima para su separacin de las fases (agua-pasta microalgal), esta constituye una de las etapas ms crticas dentro del proceso de recuperacin del Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008. Tal como lo menciona Shenk (2008), la factibilidad en la produccin de biodiesel va a depender exclusivamente a las tecnologas de cosecha del cultivos, ya que los costes energticos y las prdidas de biomasa durante la centrifugacin van a ser que el aprovechamiento decaiga tal es el caso del Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008, donde a nivel de centrifuga genera mucho ms valor energtico, con grandes prdidas en 76 litros de cultivo se recuper el 2.1 % y es all donde se pierde totalmente el aprovechamiento y los costes de produccin. Con respecto al secado de la pasta

46

microalgal el peso seco fue de 0.18 mg/ mL, mientras que Andrade (2009), obtuvo resultados de 0.39 mg/ mL, lo cual indica una mejor recuperacin y secado de la biomasa microalgal, siguiendo como protocolo de cosecha sedimentacin por decantacin y secado al sol durante tres das, obteniendo mejores resultados que el presente experimento, utilizando una cosecha por centrifugacin y secado por incubadora a 80 C durante 52 horas. Lo cual reporta margen considerable de error que parte principalmente de la recuperacin de la biomasa. El contenido de aceite del Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008 tuvo un rendimiento cercano al 26 %, lo cual est dentro de los parmetros de contenido lipdico segn hace referencia Chisti (2007), quien indica que el gnero Scenedesmus concentra lpidos que oscilan del 6 al 55 %, esto va a depender del cultivo a utilizar, frecuentemente los contenidos de N, P, K, hace que se forme mayor generacin de lpidos. Tambin atribuye que se generara mayor concentracin de lpidos cuando la microalga se someta a estrs con inyecciones de , generando una formacin de ms del 50 % de contenido lipdico. Innovar

en nuevas tecnologas de extraccin de aceite microalgal va a ser el nuevo desafo para este rubro, ya que la tendencia de energas renovable tiene que ser inofensivo con el medio ambiente. En este caso se utiliz la mezcla hexano-ter para extraer de forma qumica el aceite del Scenedesmus acuminatum IMP-LBA008 teniendo un rendimiento aproximado del 26 %, pero segn Qi lai (2011), la extraccin de aceites con enzimas (cndida antrctica lipasa B) y lquidos inicos (terc-butanol)en Chlorella vulgaris y Clhorella pyrenoidosa reportaron rendimientos del 48 % de extraccin de aceite microalgal. El rendimiento de biodiesel a partir del Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008 fue del 53%, durante esta etapa se complic las fases de sedimentacin en la produccin de biodiesel debido a la fuerte pigmentacin verde de esta alga Chlorophyta. Hossain (2008), reporta sus ensayos realizados en algas marinas de especies Oedegonium y Spirogyra que segn las bibliografas tienen pequeas cantidades de pigmentacin, lo cual hace que la diferencia sea notoria en la separacin de glicerina, sedimentos y biodiesel. Este tipo de energa renovable no

47

va a contribuir impacto alguno en sus subproductos, tal es el caso de la biomasa sedimentada en el proceso de extraccin de aceites, este tipo de material puede ser utilizado como colorante orgnico, aditivos, etc. Incluso podemos generar mayor energa como lo es el biogs, donde esta biomasa por digestin anaerobia producir cantidades importantes de hidrgeno. Tal como dice Loera y Olgun (2010), esta energa representa una huella ecolgica reducida.

48

5. CONCLUSIONES Se obtuvo 5.2 mL de biodiesel a partir de microalga Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008 en fotobiorreactor tanque agitado en 76 litros de cultivo, con un rendimiento de aceite del 26 % y de biodiesel 53 % lo que indica un buen rendimiento en contenido lipdico de esta microalga. Se produj 76 litros de cultivo microalgal donde se obtuvo 2.1 % de pasta hmeda de Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008, en el proceso de secado se logr recuperar 8.5 g. que durante la extraccin de aceite microalgal el rendimiento represent un 26 % de contenido lipdico. Del cul se obtuvo 6.0 mL de biodiesel de Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008. Los parmetros de crecimiento fueron idneos para este tipo de cepa microalgal, sus componentes del cultivo fueron: Nitrofoska al 1%, agua potable, fotoperiodo 12:12 (Luz y oscuridad), aireacin de 2000 mL/ min, pH 7 y temperaturas oscilantes de 22 a 26 C.

49

6. SUGERENCIAS Caracterizar el biodiesel del Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008, para evaluar su calidad y posterior uso. Observar el crecimiento microscpico de las microalgas a nivel celular va a ayudar a tener una mayor especificad en la velocidad de desarrollo de esta microalga. Buscar nuevas alternativas de cosecha microalgal, de menor coste que la centrifugacin, cosecha por filtracin o sedimentacin en fro seran de inters general. Conservar la microalga en ceparios para investigaciones a nivel regional sera de gran soporte para realizar investigaciones en esta lnea, en todo caso aislar microalgas de ros o lagos para poder domesticarla y as producir o generar aprovechamientos adecuados en la obtencin de biocombustibles. Tecnologas ms eco-sostenibles en el proceso de cultivo microalgal, utilizar aguas residuales para poder colaborar con el medio ambiente en la remocin de sus metales pesados y recuperar el de las plantas

pesqueras o a fines y as generar estresar a la microalga y hacer producir ms lpidos por arrastre de carbono sera una idea ambiciosa para generar o hacer ms real la propuesta de impulsar este biocombustible a nivel del Per.

50

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8.

ANEXOS.

Anexo 1. Esquema de la reaccin de transesterificacin con metanol

Fuente: Hossain, 2008. Anexo 2. Diseos de biorreactores tanque agitados de 1957 (A) y diseo actual (B)

Fuente: Shuler y Kargui, 2002.

59

Anexo 3. Ficha de entrega de cepas por parte del IMARPE.

Anexo 4. Acondicionamiento de la cepa Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008

60

Anexo 5. Primer cultivo para la reactivacin del Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008

Anexo 6. Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008 a los 20 das despus de su primer cultivo

61

Anexo7. Control de la temperatura de crecimiento del Scenedesmus acuminatum IMP-LBA008.

Anexo 8. Cultivo masivo del Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008.

62

Anexo 9. Proceso de centrifugacin del Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008

Anexo 10 Equipo centrfuga.

63

Anexo 11. Diferencia entre centrifugacin del Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008 de 500 mL y de 100 mL

Anexo 12. Pasta del Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008

64

Anexo 12 Pasta hmeda del Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008 a incibacin a 80C

Anexo 13 Pasta seca del Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008

65

Anexo 14 Extraccin de los aceites del Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008.

Anexo 15 Biodiesel a partir de Scenedesmus acuminatum IMP-LBA-008

66