UNIVERSIDAD NACIONAL INTERCULTURAL DE LA AMAZONIA

FACULTAD DE INGENIERIA Y CIENCIAS AMBIENTALES CARRERA PROFESIONAL DE INGENIERA AGROINDUSTRIAL

BIOQUIMICA GENERAL

AMINOACIDOS
DOCENTE:

cesar Abram Cruz Castellon

ESTUDIANTES:

Pezo Mananita, Victor Daniel Bardales Mananita, Katia Lucero

YARINACOCHA- PER 2013

AMINOACIDOS I. INTRODUCCIN
Un aminocido es una molcula orgnica con un grupo amino (-NH2) y un grupo carboxilo (-COOH). Los aminocidos ms frecuentes y de mayor inters son aquellos que forman parte de las protenas. Dos aminocidos se combinan en una reaccin de condensacin entre el grupo amino de uno y el carboxilo del otro, liberndose una molcula de agua y formando un enlace amida que se denomina enlace peptdico; estos dos "residuos" de aminocido forman un di pptido. Si se une un tercer aminocido se forma un tripartido y as, sucesivamente, hasta formar un poli pptido. Esta reaccin tiene lugar de manera natural dentro de las clulas, en los ribosomas. Todos los aminocidos componentes de las protenas son L-alfa-aminocidos. Esto significa que el grupo amino est unido al carbono contiguo al grupo carboxilo (carbono alfa) o, dicho de otro modo, que tanto el carboxilo como el amino estn unidos al mismo carbono; adems, a este carbono alfa se unen un hidrgeno y una cadena (habitualmente denominada cadena lateral o radical R) de estructura variable, que determina la identidad y las propiedades de cada uno de los diferentes aminocidos. Existen cientos de radicales por lo que se conocen cientos de aminocidos diferentes, pero slo 22 (los dos ltimos fueron descubiertos en el ao 2002) forman parte de las protenas y tienen codones especficos en el cdigo gentico. La unin de varios aminocidos da lugar a cadenas llamadas pptidos o poli pptidos, que se denominan protenas cuando la cadena poli peptdica supera una cierta longitud (entre 50 y 100 residuos aminocidos, dependiendo de los autores) o la masa molecular total supera las 5000 uma y, especialmente, cuando tienen una estructura tridimensional estable definida.

1.1.

OBJETIVOS
1.1.1. General Determinar cualitativamente la presencia de aminocidos con el grupo amino libre, mediante la reaccin con la Ninhidrina

1.1.2. Especficos Evaluar el pH de aminocidos con un cido y una base.

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II.

MARCO TEORICO
Todos los aminocidos son anfolitos los cuales contienen al menos un grupo funcional acdico (carboxilo) y uno bsico (-amino). Algunos aminocidos contienen otros grupos que se ionizan fcilmente: grupos amino, carboxilo, phidroxifenilo, sulfihidrilo, guanidino e imidazol. El carcter inico de los polipptidos y las protenas es en gran parte debido a estos grupos adicionales ionizables debido a que los grupo -amino y carboxilo de los aminocidos participan en los enlaces peptdicos. Por otro lado, los aminocidos tiene tres tipos de reacciones qumicas importantes: (1) Reacciones debido a la presencia del grupo carboxilo (COO- ), (2) reacciones debidas al grupo amino (NH2), y (3) reacciones debido al grupo R. Las reacciones debidas al grupo carboxilo y al grupo amino son generales y se dan para todos los aminocidos. Las reacciones del radical R son reacciones especficas; por ejemplo, cisteina da una reaccin para azufre, triptfano da ciertas reacciones de color debido a que su molcula contiene el grupo indol, tirosina da otras reacciones de color debido a su grupo fenlico, etc. Ya que la mayora de las protenas contienen uno o ms de estos aminocidos en sus molculas, algunas de las reacciones de color que son especficas para aminocidos individuales se usan como reacciones de color generales para protenas. Sin embargo, tambin se debe tener cuidado porque pueden existir compuesto que contengan ciertos grupos qumicos y pueden dar falsos negativos. Una forma tambin de determinar los aminocidos es a travs de mtodos colorimtricos, en donde la determinacin de aminocidos se basa en la reaccin especfica de stos con determinados compuestos, dando derivados coloreados. La formacin de color se toma como resultado positivo e indica su presencia, mientras que el no desarrollo de color es indicativo de que no est presente. Hay una amplia gama de mtodos colorimtricos que permiten la determinacin cualiy cuantitativa de aminocidos. Aunque son mtodos muy generales, algunos de ellos permiten discriminar entre diferentes tipos de estos compuestos. As, hay mtodos de determinacin de aminocidos con el grupo amino libre (mtodo de la ninhidrina), de aminocidos con ncleos aromticos (reaccin xantoproteica), de los que poseen un grupo indlico (triptfano; reaccin con el cido glioxlico), un anillo fenlico (tirosina; reaccin de Millon), de aminocidos azufrados (cistena; reaccin con nitroprusiato sdico). En todos los mtodos, el aminocido reacciona con otro compuesto formando derivados coloreados que se pueden determinar cuantitativamente por espectroscopa visible. De todos los mtodos reseados, el ms general y utilizado es el de la reaccin con la ninhidrina. La ninhidrina (hidrato de tricetohidrindeno) reacciona con aminocidos que tengan el grupo amino libre, dando lugar a la formacin de amoniaco y anhdrido carbnico, con reduccin del reactivo (ninhidrina) a hidrindantina (Figura 1).

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Figura 1. Reaccin de los aminocidos con la ninhidrina

La hidrindantina reacciona a su vez con el amoniaco y otra molcula de ninhidrina para dar un compuesto de adicin doble que presenta una coloracin azul-prpura, con la excepcin de la parolina que da una coloracin amarillenta (recordar que en la parolina el grupo amino est sustituido). El derivado coloreado presenta mximo de absorcin en torno a 570 nm. La reaccin se lleva a cabo en caliente y a valores de pH comprendidos entre 4 y 8. Las aminas primarias (R-CH -NH ) dan tambin positiva la
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prueba de la ninhidrina, aunque en este caso no se libera CO . La tcnica es muy

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sensible, por lo que es ideal para detectar concentraciones bajas de aminocidos, utilizndose para revelar su presencia en cromatogramas y fracciones procedentes de otras tcnicas de separacin. La presencia de aldehdos resultantes de la degradacin de la ninhidrina por reaccin con los aminocidos modifica, bajo ciertas condiciones, el color formado, lo que sirve para identificar el tipo de aminocido. La ninhidrina es un poderoso agente y reactivo comn para visualizar las bandas de separacin de aminocidos por cromatografa o electroforesis, tambin es utilizada con fines cuantitativos para la determinacin de aminocidos. Reacciona con todos los aminocidos alfa cuyo pH se encuentra entre 4 y 8, dando una coloracin que vara de azul a violeta intenso. Este producto colorido (llamado prpura de Ruhemann) se estabiliza por resonancia, la coloracin producida por la ninhidrina es independiente de la coloracin original del aminocido. Esta prueba es positiva tanto para protenas como para aminocidos. En aquellos casos donde no da positiva la prueba de biuret y da positiva la de ninhidrina, indica que no hay protenas, pero si hay aminocidos libres.

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AMINOACIDOS III. MATERIALES Y METODOS

3.1. MATERIALES 3.1.1. Materiales 8 vasos de precipitados de 100 ml, embudo. pinzas para tubo de ensayo 3.1.2. Equipos Balanza analtica pH metro 3.1.3. Reactivos Muestras de aminocidos en polvo, NaOH 1N, HCl 1N.

3.2.

METODOS Prueba de Ninhidrina a) Preparacin de los reactivos Ninhidrina: Disolver 0.1 g de ninhidrina en 100 ml de n-butanol Solucin estndares de aminocidos al 1% Pesar 1 g de cada aminocido, luego medir 10 ml de n-propanol y enrazamos a 100 ml. b) Reaccin de la ninhidrina (reaccin con hidrato de tricetohidrindeno): En una serie de tubos de ensaye, coloque 3 ml de las muestras y adiciones 0.5 ml de la solucin de ninhidrina al 0.1%. Mezcle bien y caliente a ebullicin directamente a la llama del mechero. Dejar enfriar. Si la prueba es positiva se desarrolla un color azul (indicando que el aminocido tiene el grupo amino libre) La muestra debe tener un pH entre 5 y 7. Se puede usar unas gotas de pridina o de cristales de acetato de sodio para ajustar el pH.

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3.2.1. PROCEDIMIENTOS Pesar cerca de 400 mg de muestra (aminocidos) y disolverla en 20 ml de H2O en un vaso de precipitado. Introducir una barra magntica y colocarlo en una placa de agitacin, as como el electrodo para medir pH. Titular la muestra disuelta desconocida con HCl 1N, registrando las lecturas de la bureta y el pH a intervalos frecuentes hasta que la solucin alcance un pH de 1.0. Observe y registre la solubilidad de la muestra durante la titulacin. Titular otros 20 ml de agua (blanco) con HCl 1N, gota a gota en las primeras 10 gotas y de dos en dos gotas las siguientes 10 gotas. Finalmente de cuatro en cuatro gotas hasta que la solucin alcance pH de 1.0 Registrar el pH y el volumen del cido despus de cada adicin. Disolver otra muestra (otra vez aproximadamente 400 mg en 20 ml de agua) y titular la muestra con NaOH 1N de la misma manera que para la titulacin con cido hasta que el pH de la solucin llegue a12. Observe y registre la solubilidad de la muestra durante la titulacin. Tambin titular a 20 ml de agua (blanco) con NaOH 1N hasta pH 12.0 de manera similar que el primer blanco.

IV.

RESULTADOS Prueba de Ninhidrina Tabla 1. Reaccin de los diferentes aminocidos con el reactivo de ninhidrina. Nombre de AAs Alanina Color despus Reaccin de R. ninhidrina (+) (-) Anillo violeta purpura formado Tiene el grupo amino libre Si tiene el grupo amino libre Si tiene el grupo amino libre Si tiene el grupo amino libre SI tiene el grupo amino libre

Tirosina

Metionina

Arginina

Anillo violeta purpura formado Anillo violeta purpura formado Anillo violeta purpura formado

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AMINOACIDOS Evaluacin del pH de Aminocidos Hacer una tabla de resultados para cada titulacin: Muestra con NaOH, Agua con NaOH, Muestra con HCl, Agua con HCl.

Nombre del AAs Sin HCl 1N

pH

Gasto HCl 1N (ml) pH= 1 pH= 1 Sin NaOH 1N

pH Con NaOH 1N

Gasto NaOH1N (ml) pH= 12 pH=12

Con HCl 1N

Alanina
16 14 12 10 8 6 4 2 0

6.20

4.5

5.99

9.83

12

Serie 2 Serie 1

Alanino + 20ml de Alanino + 20 ml de Alanino + 20ml de Alanino + 20 ml de h2o NaOH 1N h2o HCl 1N

V.

CONCLUSIONES La prueba de ninhidrina es positiva para aminocidos y protenas que tengan un grupo -NH2 libre. Cuando el grupo -NH2 reacciona con ninhidrina, se forma un complejo azul-violeta.

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AMINOACIDOS VI. CUESTIONARIO

1. Cules son los aminocidos que tienen el grupo amino libre? Son llamados aminocidos corrientes. Excepto la prolina, todos ellos tienen como denominadores comunes un grupo carboxilo libre y un grupo amino libre e insustituido en el tomo de carbono. 2. Cmo se clasifican los aminocidos? Se clasifican en: Grupos R no polares o hidrofbicos. Polares, pero sin carga. Grupos R con carga positiva y Grupos cargados negativamente (a pH 6-7, que es la zona del pH intracelular).

3. Dibuje la estructura qumica de los aminocidos empleados en la Practica? ALANINA

TIROSINA

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METIONINA

ARGININA

4. La prolina es un aminocido que tiene dicho grupo amino libre? Se trata del nico aminocido proteinognico cuya -amina es una amina secundaria en lugar de una amina primaria. La prolina en realidad es uniminocido, pues su cadena lateral es cclica y est compuesta por 3 unidades de metileno; estos quedan unidos al carbono alfa y al grupo amino, el cual pasa a llamarse imino.

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BIBLIOGRAFIA

H. Beyer, W. Walter; 1986; Manual de qumica orgnica, Editorial Reverte, Madrid, pg.908 C. Mathews ; V. Holde; 2002 K.E.; 2 Edicin. Editorial Mc Graw Hill. Pginas 143-148 [3] J. Rivera; C. Lpez; 2001; Bioqumica estructural: conceptos y tests, Editor Tebar, pg. 93

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