Sunteți pe pagina 1din 256

LUCIANA DOBJANSCHI

BIOCHIMIE FARMACEUTIC

EDITURA UNIVERSITII DIN ORADEA

2007

Biochimie farmaceutic

Refereni tiinifici:
Conf.dr. Murean Mariana
Conf.dr. Micle Otilia

Descrierea CIP a Bibliotecii Naionale a Romniei


DOBJANSCHI, LUCIANA
Biochimie farmaceutic / Dobjanschi Luciana. Oradea : Editura Universitii din Oradea, 2007
Bibliogr.
ISBN 978-973-759-422-8
577.1:615

EDITURA UNIVERSITII DIN ORADEA ESTE ACREDITAT DE


CNCSIS
CONFORM POZIIEI 149.

Tipar:
METROPOLIS SRL
Oradea, str. Nicolae Jiga nr.31
Tel.: 0729 845 160, 0788 845 160
Tel./ Fax: 0259 472 640
e-mail: metropolis@rdslink.ro

Luciana Dobjanschi

CUPRINS

I. Introducere
II. Compoziia chimic a organismului uman
III.Nucleotide i structura covalent a acizilor nucleici
IV. Proteine
IV.1. Aminoacizii
IV.2. Peptide
IV.3. Proteine
V. Vitamine
V.1. Vitaminele liposolubile
V.2. Vitaminele hidrosolubile
VI. Enzime
VII. Metabolism
VIII. Ciclul acizilor tricarboxilici
IX. Enzime transportoare de electroni
X. Metabolismul glucidic
X.1. Glicoliza
X.2. Calea pentozofosfatic
X.3. Degradarea glucozei pe calea acizilor uronici
X.4. Gluconeogeneza
X.5. Metabolismul glicogenului
X.6. Glicoproteine i proteoglicani.
X.7. Metabolismul altor hexoze
XI. Metabolismul lipidic
XI.1. Structura i proprietile acizilor grai saturai
XI.2. Metabolismul acizilor grai saturai
XI.3. Biosinteza acizilor grai
XI.4. Metabolismul lipidelor simple
XI.5. Metabolismul lipidelor complexe
XI.6. Metabolimul sfingolipidelor
XI.7. Metabolismul colesterolului
XI.8. Acizii grai eseniali (AGE)
XI.9. Metabolismul corpilor cetonici
XII. Metabolismul proteinelor
XII.1. Digestia i absorbia proteinelor
XII.2. Metabolismul intermediar al aminoacizilor
XII.3. Metabolismul amoniacului
XII.4. Ciclul ureogenetic
4

Biochimie farmaceutic

XII.5. Utilizarea scheletului de atomi de carbon ai aminoacizilor


XII.6. Biosinteza aminoacizilor
XIII. Metabolismul nucleotidelor
XIV. Metabolismul hemoglobinei
XV. Bibliografie

Luciana Dobjanschi

I. Introducere
Scopul principal al biochimiei de astzi este s determine cum
interacioneaz grupele de molecule nevii din organismele vii pentru
a constitui, menine i perpetua starea vie.
Biochimia este o tiin foarte tnr. Pn acum cteva zeci
de ani puine universiti o recunoteau ca tiin n toate drepturile
ei. Exist dou izvoare distincte n genealogia biochimiei actuale.
Unul provine din medicin i fiziologie i este rezultatul unor vechi
preocupri de a cunoate compoziia chimic a sngelui, a urinii, i a
esuturilor, precum i modificrile acestora n stare normal i
patologic. Cellalt deriv din chimia organic, din vechi studii
asupra compuilor organici naturali. Mult vreme, biochimia a fost
privit pur i simplu, fie ca o ramur a fiziologiei, fie ca o ramur a
chimiei. Pn la nceputul ultimului sfert de secol, ea nu a fost o
tiin bine conturat, de sine stttoare, cu o solid metodologie
experimental i cu posibilitatea de aprofundare a fenomenelor
biologice.
Dou descoperiri mai nsemnate au contribuit la schimbarea
situaiei. Una a fost recunoterea sistemelor multienzimatice ca
uniti catalitice pentru majoritatea cilor metabolice i dezvoltarea
unei ipoteze unitare pentru transferul de energie n celula vie.
Cealalt, a avut o inflen mult mai adnc i mai puternic, a fost
recunoaterea faptului c ereditatea, unul din aspectele cele mai
importante ale biologiei, are o baz real, molecular. Biochimia de
astzi face investigaii spectaculoase ntr-o serie
de ramuri
fundamentale ale biologiei diferenierea celulelor i a organismelor,
originea vieii i evoluia, comportamentul i memoria, patologia
uman cercetri ce au demonstrat c aceste probleme fundamentale
pot fi eficient abordate prin metode biochimice.
ntr-adevr, succesul biochimiei n explicarea multor procese
celulare a fost att de mare nct muli oameni de tiin au ajuns la
concluzia c biologia este chimie. Unii biologi nu accept acest punct
de vedere, ei susin c esena sau caracterul complex al organismelor
vii nu poate fi redus, acum i niciodat, la nivelul moleculelor sau al
interaciilor moleculare. Astzi este probabil mai logic s
presupunem, ca o filozofie curent, c toate fenomenele biologice au
n cele din urm o baz molecular i s abandonm aceast idee
numai atunci cnd nu va mai fi util pentru proiectarea
experimentelor cheie sau pentru explicarea datelor experimentale. Nu
trebuie totui s privim biologia numai ca pe o ramur a chimiei
clasice, cum este chimia organic, chimia fizic sau chimia
6

Biochimie farmaceutic

anorganic. Dac biologia este chimie, ea este un fel de suprachimie


care include, dar n acelai timp depete chimia clasic. Aceasta
deoarece moleculele din organismele vii nu numai c se supun
principiilor fizice i chimice obinuite, care guverneaz comportarea
tuturor moleculelor, dar interacioneaz i ntre ele conform altui grup
de principii pe care l vom numi logica molecular a strii vii.
Aceste principii nu includ n mod necesar fore sau legi fizice noi,
nedescoperite nc. Mai curnd ele trebuie privite ca un grup de
reguli fundamentale care guverneaz natura, funcia i interaciile
tipurilor specifice de molecule din organismele vii, proprieti ce
confer acestora capacitatea de a se autoorganiza i autoreplica. Pn
n prezent nu au fost identificate nc toate principiile cuprinse n
logica molecular a strii vii, iar unele dintre ele sunt vag nelese. De
fapt, este probabil mult mai potrivit s considerm aceste principii ca
axiome, deoarece unele dintre ele sunt intuitive i nu pot fi
demonstrate nc.
Biochimia studiaz procesele chimice care condiioneaz
viaa i structurile ce i corespund. Biochimia apare i dezvolt ca
tiin de grani ntre chimie i biologie, fr a se putea realiza ns o
demarcaie net ntre cele dou.
nceputurile Biochimiei ca tiin dateaz din sec.XVIII, dar
empiric unele procese biochimice se cunosc cu mult timp nainte.
Contibuii din domeniul chimiei, biologiei i medicinei se afl
ntr-o relaie de reciprocitate cu dezvoltarea biochimiei. Astfel a
aprut biochimia modern care studiaz procesele biochimice care se
desfoar la nivel celular i molecular.
n ceea ce privete profesia de farmacist, Biochimia este o
disciplin indispensabil, deoarece ea ne ofer bazele moleculare
pentru studiul medicamentului n ceea ce privete aciunea principal,
efectele secundare, biotransformarea medicamentului i toxicitatea
sa.
Deasemenea n terapie sunt cunoscute un numr mare de
produi biologici cum ar fi: vitaminele, hormonii, enzimele,
aminoacizii, glucidele, compuii purinici i pirimidinici precum i
derivaii lor de sintez.
Prin inginerie genetic se obin : hormoni, enzime, anticorpi,
inetrferon, antitripsina.
Deci, se poate concluziona c Biochimia studiaz totalitatea
proceselor biochimice din organism (procese catabolice i anabolice),
precum i procesele de biotransformare a medicamentelor ajunse n
organism.
7

Luciana Dobjanschi

II. Compoziia chimic a organismului uman


1. Compoziia elementar a organismului uman
Au fost identificate un numr de peste 60 de elemente care intr
n compoziia chimic a organismului uman. Acestea au fost
clasificate n funcie de proporia n care se gasesc n organism.
Dintre acestea majoritatea se gsesc n urme. Astfel ele au fost
clasificate n: macroelemente, oligoelemente i microelemente.
Tabelul 1. Repartiia elementelor n organismul uman.
Element
carbon
oxigen
hidrogen
azot
calciu
fosfor

Procent ( %)
50
20
10
8,5
4
1

Element
sulf
sodiu
clor
magneziu
fier
iod

Procent (%)
0,8
0,4
0,4
0,1
0,01
0,00005

Dintre acestea primele patru ( C,O, H i N) reprezint peste 95%


i sunt considerate macroelemente. Ele sunt principalele
bioelemente ale majoritii biomoleculelor datorit tendinei lor
mrite de a forma legturi covalente. Oligoelementele se gsesc
n proporie mai mic n organism i la fel ca i macroelementele
intr n structura biomoleculelor. Microelementele se gsesc n
urme, dar cu toate astea ele au un rol esenial pentru via.
2. Compoziia fundamental a organismului uman
Bioelementele enumerate mai sus se gsesc n organism
grupate n categorii de componeni i anume: componeni
organici i componeni minerali.
Componenii organici care intr n compoziia organismului
uman sunt: proteinele, glucidele, lipidele i acizii nucleici. Aceti
compui sunt molecule complexe, care sunt alctuite din molecule
simple. Astfel, proteinele se formeaz prin policondensarea
aminoacizilor, glucidele sunt formate din monozaharide, lipidele
sunt formate din acizi grai i ali componeni, iar acizii nucleici
sunt formai din ribonucleotide i dezoxiribonucleotide.

Biochimie farmaceutic

Tabelul 2. Principalele biomolecule din organismul uman


Biomolecula
ADN
ARN

Uniti strucurale
dezoxiribonucleotide
ribonucleotide

proteine
glucide
lipide

aminoacizi
monozaharide
Acizi grai
componeni

Funcii
Material genetic
Model
pentru
sinteza proteinelor
Funcii multiple
Rezerv de energie
ali Funcii multiple

Componenii minerali prezeni n organismul uman sunt apa


i electroliii.
Apa este constituientul major al tuturor organismelor vii.
Organismul uman conine ntre 58 i 66% ap. O influen
remarcabil asupra coninutului de ap al organismului o are
vrsta. Coninutul de ap variaz i n funcie de sex, astfel
femeile au un coninut de ap mai redus n comparaie cu brbaii.
Apa din organism este repartizat n vasele sanguine i
limfatice, spaiile intercelulare i celule nsi. Apa din organism
se gsete repartizat n dou compartimente i anume:
compartimentul extracelular, care reprezint aproximativ 50% din
greutatea corpului i compartimentul intracelular, care reprezint
aproximativ 20% din greutatea corporal.

Luciana Dobjanschi

Figura 1

Electroliii sunt reprezentai de cationi i anioni. Ei


ndeplinesc n organism rol fizico- chimic, structural i catalitic.
Distribuia cationilor n compartimentele intra i extracelulare
este diferit.

10

Biochimie farmaceutic

Tabelul 3. Distribuia cationilor intra- i extracelular n mEg/l.


Cationi
Na+
K+
Ca+2
Mg+2

intracelular
10
150
2
15

extracelular
145
5
2
2

O clas diferit de biocompui sunt vitaminele care sunt


indispensabile pentru funciile lor biologice, dar pe care organismul
nu le poate sintetiza.Ele reprezint componenii nutritivi eseniali.
Hormonii sunt o alt clas de biomolecule cu rol major n
procesele endocrine, care au loc n organism.

11

Luciana Dobjanschi

III. Nucleotide i structura covalent a acizilor nucleici


Acidul dezoxiribonucleic (ADN) i ribonucleic (ARN) sunt
macromolecule tip lan, care au funcia de a depozita i transmite
informaia genetic. Acetia sunt componente majore n toate
celulele, reprezentnd 5-15% din masa uscat a acestora. Acizii
nucleici se gsesc i n virusuri, care sunt complexe infecioase
protein-acid nucleic, capabile s se autoreplice n celula gazd.
Dei denumirea acizilor nucleici vine de la faptul c ADN a
fost izolat prima dat din nucleii celulari, ei se gsesc totui i n alte
compartimente ale celulei.
La fel cum aminoacizii sunt elementele constitutive ale
proteinelor, aa nucleotidele sunt componenii de baz a acizilor
nucleici.
Structura general a nucleotidelor
Unitile
monomere
ale
ADN
se
numesc
dezoxiribonucleotide, iar cele ale ARN se numesc ribonucleotide.
Nucleotidele sunt formate din 3 componente caracteristice i
anume: o baz azotat, o pentoz i molecul de acid fosforic.
Bazele azotate care intr n structura nucleotidelor sunt de
dou tipuri: baze purinice i baze pirimidinice. Bazele purinice
prezint un nucleu de baz numit purina, de la care deriv cele dou
baze purinice: adenina i guanina.
N

H bazpurinic
O

NH2
N

N
N

H
H2N

H
adenina

12

N
N

N
H

guanina

Biochimie farmaceutic

Bazele pirimidinice prezint un nucleu de baz numit pirimidina, de


la care deriv 3 baze pirimidinice, care int n structura acizilo
nucleici, i anume: citozina, uracilul i timina.
N
N
bazpirimidinic
O

NH2
H
N
O

N
H

O
H

N
N

citozina

CH3

N
N
H

uracilul

timina

Bazele azotate sunt compui slabi bazici, care pot exista n 2


sau mai multe forme tautomere n funcie de pH. Uracilul, de
exemplu, exist n form de lactam i lactim.
O
H
O

OH

N
N

H
lactam

HO

N
lactim

Aceste forme, n special cea lactam, este responsabil de


formarea legturilor cu celelalte componente din structura
nucleotidei.

13

Luciana Dobjanschi

Pe lng bazele obinuite, descrise mai sus, n acizii nucleici se mai


gsesc n cantiti mici i alte baze, numite baze rare sau minore.
NH

NH2

CH3
N

CH3

N
O

N6 metiladenina

5 metilcitozina
O

H
HC
3

NH2
N

HN

CH2

N
O

OH

N
H

N3 metilguanina

5 hidroximetilcitozina

A doua component care intr n structura nucleotidei este


reprezentat de pentoz. Aceasta poate s fie D - riboza sau 2
dezoxi D riboza.

HO

H2C
H

O
HH

OH OH
D riboza

14

HO

OH

H2C
H

O
H H

H
OH

OH H
2 dezoxi D riboza

Biochimie farmaceutic

Prin ataarea unei pentoze la baza azotat rezult o


nucleozid, care n funcie de natura pentozei poate s fie
ribonucleozid sau dezoxiribonucleozid.

NH2

NH2

N
HO

N
H2C
H

N
H2C

HO

O
H H

H
OH H

N
O
H H
H

OH OH

2 dezoxiadenozina

adenozina

Prin ataarea unei molecule de acid fosforic la structura unei


nucleozide se formeaz un nucleotid.
NH2
N

N
OH
HO

P
O

OH

OH
O

P
O

N
H2C
H

N
O
H H
H

OH H
AMP
ADP
AT P

15

Luciana Dobjanschi

Deci, prin ataarea unei molecule de acid fosforic la o


nucleozid se formeaz nucleozid monofosfatul (NMP), prin
ataarea a 2 molecule de acid fosforic se formeaz nucleozid
difosfatul (NDP), i prin ataarea a 3 molecule de acid fosforic se
formeaz nucleozi trifosfatul (NTP).
Componentele majore ale ADN sunt 4 dezoxiribonucleotide,
care se deosebesc ntre ele prin baza azotat, care le d i numele.
Cele 4 baze specifice dezoxiribonucleotidelor din ADN sunt: adenina
i guanina (baze purinice) i citozina i timina (baze pirimidinice).
Similar, pentru ribonucleotide, care sunt componente fundamentale
pentru acizii ribonucletidici (ARN), bazele azotate care intr n
compoziia lor sunt: adenina i guanina (baze purinice), citozina i
uracilul (baze pirimidinice). Deci, timina se gsete numai n ADN,
nu i n ARN, iar uracilul se gsete numai n ARN i nu i n ADN.
O alt diferen ntre compziiile celor dou tipuri de acizi nucleici
este dat de pentoza din structura nucleotidului:
- dezoxiribonucleotidele conin: 2 dezoxi D riboza
- ribonucleotidele conin: D riboza.

OH
HO

H2C
H

baza azotat
O
HH
H

OH H
dezoxiribonucleotid

OH
HO

P
O

H2C
H

baza azotat
O
HH
H

OH OH
ribonucleotid
16

Biochimie farmaceutic

Nucleozidtrifosfaii prezint o serie de funcii importante.


ATP este un transportor de grupri fosfat i pirofosfat n
cteva recii enzimatice implicate n transferal energiei chimice.
ADP ul rezultat prin defosforilarea ATP ului este refosforilat la
ATP n procesul respiraiei. Sistemul ATP ADP este sistemul
principal pentru transferul gruprilor fosfat n celul, dar i ceilali
nucleozidtrifosfai, i anume: GTP, UTP i CTP au rolul de a
canaliza energia chimic pe anumite biosinteze specifice.
A doua funcie major a NTP i NDP este cea de transportori
de energie, energie pe care o nmagazineaz sub form de legturi
macroergice. NTP i d NTP sunt precursori bogai n energie n
procesul de biosintez enzimatic a ADN i ARN. n acest proces
NTP i d- NTP i pierd gruprile pirofosfat terminale,
transformndu se n resturi de nucleozid monofosfai, care sunt
elemente constitutive ale acizilor nucleici.
O alt funcie major a NTP i NDP este cea de transportori
energizani de tip coenzim ai anumitor elemente constitutive. De
exemplu: UDP este un transportor pentru glucide n procesul de
biosintez a polizaharidelor.
n toate cele 3 funcii ale NTP i d NTP, energia chimic a
legturilor fosfat i este folosit pentru formarea unor legturi
covalente noi.
Pe lng nucleozid 5 fosfaii descrii, n natur mai exist i
nucleotide cu gruprile fosfat n alte poziii.
Dou nucleotide foarte importante au un rol cheie n aciunea
biochimic a unor hormoni: 3, 5 ciclic adenozin fosfatul (AMP
ciclic) i guanozin 3,5 ciclic fosfatul (GMP ciclic).
NH2
N

N
O

H2C

O
H H

H
O

P
OH

O OH
AMPc
17

Luciana Dobjanschi

OH
N

H2N

H2C

O
H H

H
O

P
OH

O OH
GMP c

AMPc se formeaz n celulele eucariote, din ATP prin


aciunea unei enzime din membrane celular, adenilat ciclaza,
stimulat de anumii hormoni adui pe cale sanguin. AMPc mai este
denumit i al doilea mesager, ntruct el transmite i amplific n
celul semnalele chimice transmise pe calea sngelui de ctre
hormoni, care sunt primii mesageri.
ADN ul este format din lanuri de dezoxiribonucleotide
legate covalent, iar ARN ul este compus din lanuri de
ribonucleotide. Acizii dezoxiribonucleici i acizii ribonucleici
prezint o serie de propriti fizice i chimice commune, ntruct n
ambele molecule, nucleotidele succesive sunt legate covalent prin
puni fosfodiesterice ntre gruparea 5 hidroxil a unei nucleotide i
gruparea 3 hidroxil a urmtoarei nucleotide.

18

Biochimie farmaceutic

baz azotat
H2C 5'
O
H H

H
3'
O

O H
P

OH

O
5' CH2
baz azotat
O
H H
3'

HO

H
O H
P

O
ADN

19

Luciana Dobjanschi

baz azotat
H2C 5'
O
H H

H
3'
O

O OH
P

OH

O
5' CH2
baz azotat
O
H H
3'

HO

H
O OH
P

ARN
Astfel catena principal a ADN i ARN const n grupri
fosforice alternnd cu radicali de pentoz, legtura fosfodiesteric
asigurnd continuitatea covalent. Bazele purinice i pirimidinice din
unitile nucleotidice nu fac parte din catena principal, ele formeaz
catene distincte n acelai mod n care radicalii R ai aminoacizilor
sunt catenele laterale distinctive ale polipeptidelor.
Acidul dezoxiribonucleic (ADN) a fost izolat pentru prima
dat din celulele i sperma de somon de ctre Friedrich Miesscher
(1869). El a denumit produsul izolat nuclein, dat fiind prezena lui
n nucleii celulari. De atunci au trecut peste 70 de ani de cercetri
pn la definirea complet a elementelor constitutive i a structurii
catenei principale a acizilor nucleici.
20

Biochimie farmaceutic

Moleculele de ADN din diferite celule i virusuri se


deosebesc prin raportul dintre cele 4 tipuri de monomeri nucleotidici,
prin secvena nucleotidelor i prin masa molecular. Pe lng cele 4
tipuri de baze majore, n anumite tipuri de ADN, n deosebi de
origine viral se gsesc cantiti mici de derivai metilai ai acestor
baze. Acizii dezoxiribonucleici izolai din diferite organisme i
virusuri au dou lanuri dispuse ntr-un aranjament complementar
dublu elicoidal. n majoritatea celulelor moleculele de ADN sunt att
de mari, nct este greu s le izolm sub form intact. n celulele
procariote, care conin un singur cromozom, ntreaga cantitate de
ADN este prezent ca unic macromolecul, o singur elice dubl,
cu masa molecular de peste 2 x 109. n celulele eucariote, ce conin
mai muli cromozomi, exist mai multe molecule de ADN. n
bacterii, molecula de ADN care reprezint 1% din greutatea celulei
se afl zona nuclear; de obicei ea este ataat printr-un singur punct
de un pliu al membranei celulare, numit mezozom. Uneori, n
citoplasma celulelor bacteriene se gsesc molecule mici de ADN
extramitocondrial; aceste molecule de ADN, care poart doar cteva
gene, se numesc plasmide sau epizomi, n funcie de relaia lor
genetic cu ADN -ul cromozomial.
n celulele eucariote diploide, aproape ntreaga cantitate de
ADN se gsete n nucleu, combinat prin legturi ionice cu proteine
bazice, numite histone. Pe lng
ADN ul din nucleu n celulele eucariote diploide mai gsim
cantiti foarte mici de ADN n mitocondrii, care difer de ADN ul
nuclear prin bazele coninute i prin masa molecular.
Acizii ribonucleici
Cele 3 tipuri majore de acizi ribonucleici din celule sunt:
ARNm, ARNr i ARNt. Toate cele 3 tipuri de ARN sunt lanuri
monocatenare poliribonucleotidice, dar se deosebesc ntre ele prin
domenii caracteristice de mase moleculare i de coeficieni de
sedimentare. Fiecare dintre cele 3 tipuri majore de ARN exist n
forme moleculare multiple. ARNr exist n cel puin 3 forme majore,
ARNt exist n 60 de forme, iar ARNm exist n sute i poate mii de
forme distincte. Majoritatea celulelor conin de 2- 8 ori mai mult
ARN dect ADN.
n celulele bacteriene, cea mai mare parte a ARN se afl n
citoplasm, dar o anumit cantitate este ataat necovalent de ADN,
pe msur ce se formeaz n procesul de transcripie. n celulele
eucariote diferitele forme de ARN au o distribuie intracelular
distinct.
21

Luciana Dobjanschi

ARNm conine doar cele 4 baze majore. El se sintetizeaz n


nucleu n procesul de transcripie, prin care secvena bazelor dintr-un
lan de ADN cromozomial este copiat enzimatic n lanul de
ARNm. O anumit cantitate de ARNm se sintetizeaz i n
mitocondrii. Secvena bazelor din lanul de ARNm este
complementar celei din lanul de ADN ce se transcrie. Dup
transcripie, ARNm trece n citoplasm i apoi la ribozomi, unde
servete ca matri pentru ordonarea secvenial a aminoacizilor n
procesul de biosintez a proteinelor. ARN ul mitocondrial
reprezint doar o mic parte din ARN ul total din celul, dar el se
afl n foarte multe forme distincte, care se deosebesc prin masa
molecular i secvena bazelor azotate. Fiecare din miile de proteine
diferite sintetizate n celula este codificat de ctre un ARNm.
ARNm din celulele eucariote se caracterizeaz prin prezena
la captul 3 terminal a unei secvene lungi de cca 200 de radicali
adenilici, care pare s aib un rol n prelucrarea sau transportul
ARNm de la nucleu la ribozomi.
ARNt sunt molecule relativ mici, care funcioneaz ca
transportori specifici ai cte unei molecule de aminoacizi n procesul
de biosintez a proteinelor pe ribozomi. Ei au o mas molecular de
23000 28000 i un coeficient de sedimentare de 4S. Ei conin 75
90 de nucleotide. Fiecare dintre cei 20 de aminoacizi din proteine are
cel puin un ARNt coerspunztor, iar unii au chiar mai muli ARNt.
De exemplu: n celulele de Escherichia coli exist 5 ARNt
diferi pentru transferul leucinei.
Mai mult, n celulele eucariote unui anumit aminoacid i
corespund ARNt mitocondriali diferii de ARNt citoplasmatici.
Moleculele de ARNt prezint cteva trsturi comune. Toate tipurile
de ARNt au la un capt al lanului polinucleotidic un acid guanilic
terminal, iar la cellalt capt secvena terminal citidil citidil
adenil (CCA). Gruparea 5 hidroxil a acidului adenilic terminal este
legat de gruparea 3 hidroxil a acidului citidilic precedent print-o
punte fosfodiesteric. Gruaprea hidroxil liber din acidul adenilic
terminal este acilat enzimatic cu -aminoacidul specific, formnd
aminoacil ARNt. Acest aminoacid este transferat enzimatic la
captul lanului polipeptidic n curs de formare pe suprafaa
ribozomilor, n procesul de biosintez proteic.
ARNr reprezint 65% din masa ribozomilor. El se poate
obine din ribozomii de E.coli ca molecule lineare, monocatenare,
prezente n 3 forme caracteristice, cu coeficienii de sedimentare de
23S, 16S i respectiv 5S. Aceste 3 forme se deosebesc prin secvena
i raportul bazelor. n celulele eucariote, care au ribozomi mai mari
22

Biochimie farmaceutic

dect celulele procariote, exist 4 tipuri de ARNr: 5S, 7S, 18S i 28S.
Dei ARNr reprezint o mare parte din ARN celular total, funcia lui
n ribozomi nu este nc, bine elucidat.
Complexe supramoleculare acizi nucleici - proteine
Unii acizi nucleici se afl n celule asociai necovalent cu
proteine specifice, formnd complexe supramoleculare. Dintre aceste
sisteme acid nucleic proteine, cu structuri i funcii biologice foarte
complexe; ribozomii i virusurile sunt cele mai cunoscute. Cele mai
complexe sisteme acid nucleic protein sunt probabil cromozomii
din celulele eucariote.
Ribozomii sunt particule ribonucleoproteice care se gsesc n
toate tipurile de celule. Ei sunt eseniali n biosinteza proteinelor.
Virusurile sunt structuri subcelulare la limit ntre lumea
biotic i abiotic. Virusurile au capacitatea de a se antagoniza atunci
cnd intr ntr-o celul gazd specific.
Implicaiile terapeutice ale nucleotidice
Unele nucleotide naturale, precum i derivaii lor obinui prin
sintez pot fi utilizate n terapie, fiind utilizate n: chimioterapia bolii
maligne, tratamentul hiperuricemiei i gutei, n afeciuni virale, n
hipertiroidism sau ca ageni imunosupresori, hipogliceminai,
antifungici i antiparazitari.
Mecanismul lor de aciune este variat:
- nhib enzimele implicate n biosinteza acizilor nucleici, blocnd
procesul
- nhib enzimele care catalizeaz conversia xantinei n acid uric.

23

Luciana Dobjanschi

IV. Proteine
Proteinele sunt compui macromoleculari, respectiv
biopolimeri rezultai din policondensarea aminoacizilor legai ntre ei
prin legturi peptidice. Diferena ntre proteine i polipeptide se face
pe baza dimensiunii moleculare, limita de delimitare fiind stabilit
arbitrar la o greutate molecular de 8 x 10 Kd. Lanurile de peptide
alctuite din sub 10 resturi de aminoacizi se numesc oligopeptide, iar
cele de pn la 50 60 de resturi de aminoacizi se numesc
polipeptide. Proteinele sunt formate din sute de resturi de
aminoacizi, iar masa lor molecular poate urca la sute de mii de
daltoni.
IV.1. Aminoacizii
Aminoacizii sunt unitile structurale de baz din molecula
proteinelor. Aminoacizii conin dou grupri funcionale comune
tuturor aminoacizilor: o grupare aminic i o grupare carboxilic.
Capacitatea unui aminoacid de a se condensa cu ali aminoacizi
pentru a forma peptide este dependent de propritile chimice ale
acestor dou grupri funcionale. Cea mai important proprietate a
aminoacizilor este aceea de a servi ca subuniti monomerice pentru
proteine, dar ei prezint i alte roluri importante pentru celul. De
exemplu, glutationul este o tripeptid cu funcii importante, alte
peptide mici au funcii de hormoni, sau n unele organisme au rol de
antibiotice. Acidul glutamic are rol de neuro transmitor.
Aminoacizii sunt precursorii unei variti de biomolecule (de
exemplu: hitidina pentru histamin). Unii aminacizi sunt
metabolizai i utilizai pentru producerea de glucoz
(gluconeogenez). Deoarece nu exist rezerve de aminoacizi, cu
excepia celor implicai n structura proteinelor, atunci cnd
gluconeogeneza are nevoie de aminoacizi, acetia sunt eliberai prin
decompunerea proteinelor.
Structura aminoacizilor
n proteinele tuturor speciilor procariote i eucariote a fost
identificat un set de cca 20 de aminoacizi, marea majoritate
aprinnd seriei sterice L. Toi aminoacizii, cu excepia prolinei,
prezint aceeai strucutur general n sensul c atomul de carbon este legat de o grupare COOH, de una NH 2 i de un rest R
rspunztor de proprietile diferite ale diferiilor aminoacizi.
Formula general a unui aminoacid:

24

Biochimie farmaceutic

CH COO-

NH3+
n toi - aminoacizii, cu excepia glicinei, carbonul este optic
activ. Izomerii posibili aparin seriei D sau L. S-a constatat c toi
izomerii existeni n mod natural n constituia proteinelor aparin
seriei sterice L. Sarcinile aprute n formulele aminoacizilor sunt
cele care apar la pH 6-7. Ca urmare, la pH 6-7, un aminoacid poate
s aib caracter acid sau bazic.
Clasificare aminoacizilor
Din punct de vedere structural aminoacizii se pot clasifica
astfel:
- aminoacizi alifatici
HC
2

H3C

COOH

NH2
glicina ( glicocol, Gly)
H3C

CH

CH

CH

COOH

NH2
alanina (Ala)

COOH

CH3 NH2
H3C

CH

CH2

CH

COOH

NH2

CH3
valina (val)
H3C

CH2

leucina (leu)
CH

CH3
Izoleucina (ile)
-

CH

COOH

NH2

aminoacizi hidroxilai

25

Luciana Dobjanschi

HO

CH

CH2

H3C

COOH

NH2

CH

CH

OH

NH2

serina (ser)

COOH

treonina (thr)

- aminoacizi cu sulf
HS CH2 CH COOH
NH2
H3C S

CH2

CH2

CH

COOH

NH2
cisteina (cys)
-

metionina (met)

aminoacizii dicarboxilici i amidele lor

HOOC

CH2

CH

COOH

NH2
H2N CO CH2

acidaspartic(asp)
CH COOH
NH2

asparagina ( asn)
HOOC

CH2

CH

CH2

COOH

NH2
acid glutamic (glu)
HN
2

CO

CH2

CH2

CH
NH2

glutamina (gln)

26

COOH

Biochimie farmaceutic

aminoacizi cu dou grupri bazice

H2N CH2

CH2

CH2

CH2

CH

COOH

NH2
lisina (lys)
H2N C

NH CH2

CH2

CH2

NH

CH COOH
NH2

arginina (arg)
CH2
N

NH

CH

COOH

NH2

histidina (his)
-

aminoacizi aromatici

CH2

CH

COOH

NH2
fenilalanina (phe)
HO

CH2

CH

COOH

NH2
tirozina (tyr)

27

Luciana Dobjanschi

CH2
N
H
triptofan (trp)

CH

COOH

NH2

COOH
N
H
prolina (pro)
n funcie de polaritatea radicalului, aminoacizii se clasific,
astfel:
- aminoacizi neutri: Gly,Ala, Ser, Cys, Thr, Asn, Gln care au
radicalul polar, dar lipsit de sarcin electric la pH=7.
- aminoacizi hidrofili, cu caracter acid: Asp, Glu, Tyr care sunt
aminoacizi ncrcai negative la pH fiziologic.
- aminoacizi hidrofili cu caracter bazic: Arg, Lys, His aminoacizi
care la pH fiziologic sunt ncrcai cu sarcin pozitiv.
- aminoacizi hidrofobi: Val, Leu, Ile, Met, Pro, Phe, Trp.
Exist proteine care pe lng aceti 20 de aminoacizi eseniali
sau de baz, conin i ali aminoacizi. Acetia pot s ia natere
prin modificri ulterioare sintezei lanului polipeptidic,
determinnd astfel caracteristici noi ale activitii biologice.
Exemplu:
- acetilarea captului N-terminal, crete rezistena la degradare
- prin hidroxilarea resturilor de prolin i lizin se formreaz:
hidroxiprolina i hidroxilizina, cu rol n stabilizarea fibrei de
colagen
- carboxiglutamatul are legtur cu aciunea vitaminei K
- fosforilarea resturilor de: Ser, Thr, Tzr, se folosete ca mecanism
de reglare a multor procese celulare.
o Ali aminoacizi modificai se ntlnesc n structura unor
peptide biologic active. Pe lng aminoacizii prezeni n
proteine, exist aminoacizi, care liberi sau n combinaii
ndeplinesc funcii importante n metabolism.
De exemplu:
- alanina, din stuctura coenzimei A i a unor peptide
- homoserina i homocisteina sunt intermediari metabolici
- citrulina i ornitina apar n biosinteza ureei
28

Biochimie farmaceutic

- acidul - aminobutiric (GABA) este un mediator chimic nervos


- 3,4 dioxifenilalanina (DOPA) este precursor al adrenalinei
- acidul p- aminobenzoic intr n structura acidului folic.
Proprietile aminoacizilor
Aminoacizii sunt substane solide, cristaline i au puncte de
topire sau de descompunere peste 2000C. Ei sunt mult mai solubili n
ap dect n solveni nepolari. n reeaua cristalin, moleculele de
aminoacizi sunt atrase prin fore electrostatice. Dac aminoacizii ar
cristaliza ntr-o form neionic, datorit atraciei Van der Waals,
atunci ar avea puncte de topire mult mai sczute. Toate acestea duc
la concluzia c aminoacizii se gsesc n soluii apoase i n reeaua
cristalin sub form de ioni dipolari sau amfioni.
+

HN
3

H2N R COOH

COO-

Datorit caracterului lor amfoter, aminoacizii formeaz sruri att cu


acizii ct i cu bazele.
+

HN

HN
3

COO- +H+

COO-

+ H2O

HN
3

HN
2

COOH
R

COO- + H2O

Deci, n mediu acid, aminoacizii se comport ca baze, iar n


mediu bazic se comport ca acizi.
Datorit faptului c aminoacizii posed grupri carboxilice i
grupri bazice, ei prezint proprieti datorate gruprilor carboxil i
proprieti datorate gruprii aminice precum i proprieti
determinate de ambele grupri.

29

Luciana Dobjanschi

IV.2. PEPTIDE
Cea mai important proprietate a aminoacizilor, este aceea de
condensare, care duce la formarea de peptide. Peptidele se formeaz
prin eliminarea unei molecule de ap ntre gruparea carboxil a unui
aminoacid i gruparea aminic a unui alt aminoacid.
H2N CH

COOH + H2N CH

R1

R2

COOH

H2N CH

CO

NH

CH COOH +H2O
R2

R1

Prin convenie, un lan polipeptidic se scrie ncepnd cu


extremitatea ce are gruparea aminic liber, numit capt N- terminal
i se ncheie cu captul C terminal, reprezentat de gruparea
carboxilic a ultimului aminoacid.
H2N

CH

CO

NH

CH

CO

....... NH

R2

R1

CH COOH
Rn

n unele cazuri aceste capete sunt derivatizate. Oligopeptidele


se clasific n di-, tri-, tetra- pn la decapeptide, n funcie de
numrul de resturi de aminoacizi prezeni n structura peptidei.
Ca exemple de peptide cu rol biologic cunoscut amintim:
- Dipeptidele: carnozina i anserina, cu rol n metabolismul
muscular.
CH2
N

N R

CH

COOH

NH

CO

CH2

CH2

NH2

R = H carnozina
= CH3 anserina
- Tripeptide.
Glutationul este o tripeptid format acid glutamic, cistein i
glicin, motiv pentru care se numete i - glutamil-cisteinil-glicin.

30

Biochimie farmaceutic

HOOC CH

CH2

CH2

CO

NH

CH

NH2

CO

CH2

NH

CH2
SH

Glutationul se ntlnete n celulele animale, unde se gsete


n concentraie ridicat. El funcioneaz ca un sistem redox i
servete n transportul intercelular de aminoacizi.
- 2H
2
Glu Cys
Gly

Glu Cys Gly


+2H
SH
S
S

Glu

Cys

Gly

(GSSH)
glutation oxidat

(GSH)
glutation redus

Interconversiunea formelor reduse i oxidate are loc sub


aciunea unor enzime i servete n biosinteza eicosanoizilor, a
dezoxiribonucleotidelor, n biotransformarea insulinei circulante,
precum i n alte procese.
Deoarece glutationul redus protejeaz gruprile tiol ale
proteinelor, el este esenial pentru integritatea eritrocitului i
deasemeni pentru meninerea Fe din hemoglobin n stare bivalent.
Mecanismul implicat privete neutralizarea potenialului agresiv al
peroxizilor rezultai n metabolismul aerob.

2 GSH + R- O- OH

glutation
peroxidaza

GSSH + R- OH +H2O

Formarea unor astfel de peroxizi este favorizat de un numr


de medicamente, la care pot s apar ca efecte adverse anemia
hemolitic i methemoglobinemia.
O alt tripeptid este hormonul de eliberare a tirotropine
(TRH) de origine hipotalamic, care are ambele capete derivatizate.
31

COOH

Luciana Dobjanschi

TRH se mai numete: piroglutamil- histidil- prolinamida. Glutamatul


N-terminal apare ciclizat sub forma acidului piroglutamic, iar captul
C terminal este reprezentat de prolinamid.
Exist dou grupe de oligopeptide formate din 7- 10 resturi de
aminoacizi cu aciune asupra musculaturii netede, care rezult din
hidroliza enzimatic a unor proteine plasmatice.
Angiotensinele provin din angiotensigen, o protein format
din cca. 400 de aminoacizi.
Angiotensinogen renina Angiotensina I
(decapeptid)
(proteina plasmatic)
captopril
enzima de conversie
Angiotensina II
(octapeptid)
aminopeptidaza
Angiotensina III
(heptapetid)
Angiotensinele acioneaz asupra vaselor, mai intens pe artere
stimulnd secreia de aldosteron i eliberarea de prostaglandine.
Angiotensina II este socotit cel mai puternic agent presor present n
circulaia general. Aceasta pare a fi implicat n patogeneza
hipertensiunii arteriale eseniale, dei sunt cazuri cu activitate
reninic normal sau chiar sczut. Inhibitorii sistemului reninangiotensin, n care rolul central l are enzima de conversie, se
utilizeaz n tratamentul hipertensiunii arteriale: de exemplu
captoprilul.
Un alt grup de polipetide este reprezentat de kininele
plasmatice, formate din kininogeni sub aciunea enzimelor numite
kalikreine.
Plasmakininele, considerate i hormoni locali, produc
vasodilataie arterial (efect hipotensor), dar determin contracia
vaselor, musculaturii uterine, a intestinului i bronhoconstricie.
Alte oligopeptide cu activitate biologic sunt encefalinele i
hormonii neurohipofizari.

32

Biochimie farmaceutic

Un alt exemplu de polipeptide naturale este reprezentat de


vasopresin i oxitocin, care sunt peptide ciclice alctuite numai din
aminoacizi. Aceste dou polipeptide au o structur foarte apropiat,
fiind alctuite din 9 resturi de aminoacizi, dar prezint funcii
fiziologice diferite. Vasopresina are efect antidiuretic, iar oxitocina
acioneaz asupra musculaturii netede a uterului, producnd
contracia uterului. Oxitocina stimuleaz i contracia musculaturii
din jurul alveolelor mamare, determinnd astfel eliminarea laptelui
din canalele glandei mamare, avnd aciune lactagog.

33

Luciana Dobjanschi

IV.3. PROTEINE
Proteinele i funciile lor biologice.
Proteinele sunt cele mai rspndite molecule organice din
celul. Masa molecular a proteinelor este foarte mare, dar prin
hidroliz acid toate se transform n compui organici simpli, i
anume L-aminoacizi.
Proteinele se mpart, n funcie de compoziia lor n dou
clase principale:
- proteine simple
- proteine conjugate
Proteinele simple sunt acelea care prin hidroliz formeaz
numai aminoacizi i nici un alt compus organic sau anorganic.
Proteinele conjugate sunt acelea care prin hidroliz pun n
libertate pe lng aminoacizi i ali compui organici sau anorganici.
Partea conjugat a proteinei, care nu este aminoacid se numete
grupare prostetic. n funcie de natura gruprii prostetice, proteinele
conjugate se mpart n:
Tipul proteinei
care se gsesc

Gruparea prostetic

Locul n

- nucleoproteine

acizi nucleici: - ADN


- ARN

ribozomi
virusul

fosfolipide

lipide membranare
glucide: - hexozamine

mozaicului tutunului
- lipoproteine
lipoproteinele plasmatice
- glicoproteine
globuline

- fosfoproteine
- hemoproteine
hemoglobina
citocromul C
- flavoproteine
dehidrogenaza
- metaloproteine
34

- galactoz
- manoza
- acid sialic
fosfai esterificai cu
radicali ai sernei
hem

cazeina

FAD

succinat

metale

feritina

Biochimie farmaceutic

Masa molecular a proteinelor se poate determina prin metode


fizice i poate fi cuprins ntre 5000 i cteva milioane.
Exemplu:
- insulina: greutatea molecular de 5700 daltoni
- virusul mozaicului tutunului: greutatea molecular de 40000000
de daltoni.
Diversitatea funcional a proteinelor
Proteinele ndeplinesc n organism multiple funcii, dintre
care amintim urmtoarele:
1. Enzimele sunt proteine ce catalizeaz diverse reacii biochimice.
Exemplu: hexokinaza, lactat dehidrogenaza
2. Proteinele de rezerv
Exemplu:
- ovalbumina proteina din albuul de ou
- cazeina proteina din lapte
- feritina proteina de depozitare a Fe n splin
- zeina proteina din semine de porumb
- gliadina proteina din gru
3. Proteine de transport
Exemplu:
- hemoglobina proteina ce transport oxigenul n sngele
vertebratelor
- hemocianina proteina ce transport oxigenul din sngele
nevertebratelor
- mioglobina proteina ce transport oxigenul n celulele
musculare
- albumina seric proteina ce transport acizii grai n snge
- 1-lipoproteina proteina ce transport lipidele n snge
- ceruloplasmina proteina ce transport cuprul n snge
Aceste proteine sunt capabile s lege i s transporte pe calea
sngelui anumite tipuri de molecule.
4. Proteinele contractile sunt proteine cu rol esenial n fenomenul
de contracie i n micare.
Exemplu:
- actina filamentele subiri din miofibrile
- miozina filamentele groase din miofibrile
- dineina proteinele din cili i flageli.
n muchi, actina i miozina sunt aezate n iruri paralele, alunecnd
unele pe lng altele n timpul contraciei.
35

Luciana Dobjanschi

5. Proteinele cu rol de protecie n sngele vertebratelor


Exemplu:
- anticorpii formeaz compleci cu proteinele strine
- sistemul complement formeaz complexe cu anumite sisteme
antigen-anticorp.
- Fibrinogenul precursor al fibrinei n coagularea sngelui
- Trombina particip la procesul de coagulare.
Unele proteine au rol de aprare sau de protecie.
Proteinele sanguine (trombina i fibrinogenul) particip la
coagularea sngelui oprind astfel pierderile de snge n sistemul
vascular al vertebratelor.
Cele mai importante proteine cu rol de aprare a organismului
sunt anticorpii sau globulinele imune, care se combin cu proteinele
strine sau cu alte substane strine intrate ntmpltor n organism,
neutralizndu-le.
6. Toxinele
Exemplu:
- toxina din Clostridium botulinum
- toxina difteriei
- veninul de arpe
- ricinul
- gossipina
Toxinele sunt substane foarte toxice pentru organismul animalelor
superioare, chiar i n cantiti foarte mici.
7. Hormoni
Exist proteine care funcionez ca i hormoni.
Exemplu:
- insulina este secretat de anumite celule specializate din pancreas
i regleaz metabolismul glucozei.
- Hormonul
adrenocorticotrop: hormonul de cetere sau
somatotropina este un hormon al glandei hipofizare anterioare,
care regleaz sinteza corticosteroizilor.
8. Proteinele structurale
Exist o clas de proteine care servesc ca i elemente structurale.
Exemplu:
- proteinele din nveliul viral
- glicoproteinele
- - keratina
- sclerotina
- fibroina
- colagenul
36

Biochimie farmaceutic

elastina
mucoproteinele.

Anticorpii i rspunsul imun. Specificitatea de specie a


proteinelor.
Anticorpii sau imunoglobulinele au o importan foarte mare
n demonstrarea faptului c proteinele sunt specifice pentru fiecare
specie. Moleculele de anticorpi apar n serul sanguin sau n anumite
celule de vertebrate ca rspuns la introducerea unei proteine sau a
unei alte macromolecule strine acelei specii. O astfel de
macromolecul strin speciei respective se numete antigen.
Moleculele specifice de anticorpi produse n acest mod se pot
combina cu antigenul care a determinat formarea lor pentru a forma
complexul antige-anticorp. Aceast reacie, numit rspuns imun,
este baza ntregului domeniu al imunologiei. Imunitatea fa de o
anumit boal infecioas poate fi adesea realizat prin injectarea
unei cantiti foarte mici de componeni macromoleculari din
microorganisme sau virusuri care provoac boala respectiv. Ca
rspuns la antigenul strin se formeaz anticorpul specific, sau o
imunoglobulin, care rmne n snge un timp ndelungat. Dac
microorganismul va ptrunde mai trziu n snge sau n limf, aceti
anticorpi specifici l vor putea inactiva sau chiar omor prin
combinare cu componenii lor antigenici. Rspunsul imun este dat
numai de vertebrate.
Anticorpii sunt foarte specifici pentru moleculele strine care
le produc. Un anticorp format de un iepure injectat cu ou de gin,
de exemplu, se va combina cu acesta, dar nu i cu alte proteine, cum
ar fi hemoglobina uman. Mai mult ei sunt specifici pentru structura
tridimensional a albuminei native din oul de gin, astfel nct dac
aceasta este denaturat prin nclzire sau prin alt mijloc, cu deplierea
lanurilor polipeptidice componente sau este modificat chimic,
anticorpii nu se vor mai combina cu ea. De aici putem trage
urmtoarele concluzii:
1. Proteine cu funcii diferite aparinnd unei singure specii
determin formarea unor anticorpi diferii. Astfel cnd se
imunizeaz un iepure cu hemoglobin de cal, anticorpii vor
precipita hemoglobina de cal i nu celelalte proteine de cal.
2. Proteine omoloage de la specii diferite nu sunt identice
imunologic.
3. Specificitatea anticorpilor reflect relaia filogenetic.
37

Luciana Dobjanschi

Exemplu:
Proteinele omoloage a speciilor foarte nrudite sunt mult mai
asemntoare ntre ele dect ale speciilor foarte ndeprtate. Astfel,
anticorpii produi de iepure fa de hemoglobina de cal reacioneaz
cel mai bine cu hemoglobina de cal. Ei reacioneaz, de asemenea
puternic cu hemoglobina altor specii nrudite cu calul (zebra, vaca,
porcul sau alte copitate) dar sunt mult mai puin reactivi cu
hemoglobina roztoarelor, psrilor sau amfibienilor.
Astfel cu ct dou specii sunt mai apropiate cu att mai
asemntoare sunt i secvenele de aminoacizi ale proteinelor lor
omoloage. Deci, secvena de aminoacizi ale proteinelor omoloage
poate da informaii preioase despre evoluia diferitelor organisme i
pentru legtura lor filogenetic.
Structura proteinelor
Lanurile polipeptidice ale proteinelor se pliaz n diferite
moduri, att n cadrul propriului lan, dar i ntre lanurile vecine,
adic intracatenar i intercatenar. Acest mod de pliere este esenial
pentru activitatea biologic a proteinelor i aceast organizare
complicat este cea care trebuie conservat pe parcursul procedurilor
implicate n purificarea proteinelor. Dei mult timp s-a considerat c
modurile de pliere ale lanurilor polipeptidice sunt determinate
numai de secvena aminoacizilor din lan, astzi s-a stabilit c
proteinele avnd aceeai secven a aminoacizilor pot exista n forme
diferite de mpachetare i c astfel de plieri pot fi influenate de
prezena altor proteine.
Structura proteinelor a fost imaginat ca avnd 4 nivele de
organizare, i anume: structura primar, secundar, teriar i
cuaternar.

38

Biochimie farmaceutic

Fig. 2. Principalele tipuri de structuri ale proteinelor


Structurile proteice sunt stabilizate de dou tipuri de legturi
puternice:
legtura peptidic i puntea disulfidic, precum i de trei tipuri de
legturi slabe.
Legtura disulfidic se stabilete ntre dou resturi de cistein,
aparinnd sau nu aceluiai lan polipeptidic i este la fel de
rezistent ca i legtura peptidic la aciunea agenilor denaturani
uzuali ai proteinelor. Aceast legtur poate fi distrus prin oxidare
cu acid performic sau prin reducere cu betamercatoetanol. Legturile
disulfidice sunt prezente de obicei n proteinele extracelulare i
aproape c lipsesc din cele intracelulare. Legturile slabe sunt
reprezentate n general de legturile necovalente, i anume: legturi
de hidrogen, ionice i hidrofobe.
Legturile de hidrogen se stabilesc ntre grupri CO i NH
aparinnd unitilor peptidice diferite, aflate n poziie adecvat.
39

Luciana Dobjanschi

R
C

CH

N
H
legtur de hidrogen
O

H
N

CH

R
Forele electrostatice se formeaz prin atracia gruprilor cu
sarcin opus ce aparin aminoacizilor ionizai.
Exemplu:
- ntre un aminoacid dicarboxilic i gruparea aminic a lizinei.
Un rol semnificativ n meninerea structuri l au deasemeni
interaciunile hidrofobe prin care radicalii nepolari ai aminoacizilor
hidrofobi tind s se asocieze.
Proteinele n stare natural au o structur tridimensional unic,
ce se exprim prin conformaia, care i determin de astfel i funcia.
Structura primar
n structura oricrei proteine sau peptide se distinge un
element comun, reprezentat de axul covalent, care se formeaz prin
repetarea gruprii peptidice i o parte a variabilei reprezentat de
radicalii aminoacizilor constituieni.
H2N

CH
R1

CO

NH

CH
R2

CO

....... NH

CH COOH
Rn

Structura primar este definit ca secvena resturilor de


aminoacizi ce deriv din policondensarea lor prin legturi - peptidice.
Exist mai multe argumente n favoarea acestei structuri, dintre care
amintim:
- proteinele au puine grupri amino- i carboxil titrabile, iar numrul
lor crete dup hidroliz
- dau uor reacia biuretului
- sinteza de proteine este posibil excusiv prin interaciuni peptidice
- proteinele sunt substrate pentru peptidaze

40

Biochimie farmaceutic

identificarea aminoacizilor componeni prin difracie cu raze X i


spectroscopie n infrarou (IR).
Cunoaterea structurii primare a proteinei const n stabilirea naturii
radicalilor, n ordinea nlnuirii i localizarea eventualelor puni
disulfidice i stabilirea tuturor conexiunilor dintr-un lan polipeptidic.
Pentru determinarea compoziiei, proteina este supus hidrolizei n
cataliz acid, bazic sau enzimatic, urmat de separarea i
identificarea aminoacizilor rezultai. Hidrolizatul obinut n urma reaciei
de hidroliz este analizat prin cromatografie sau alte tehnici
automatizate. Dup separarea aminoacizilor, cuatentificarea lor se face
prin reacia de culoare cu ninhidrina sau fluoresceina, care sunt reacii de
mare sensibilitate.
Pentru determinarea succesiunii aminoacizilor dintr-un lan se
folosesc tehnici manuale i automate bazate pe procese chimice i
enzimatice. Dac catena polipeptidic este relativ scurt, se identific
mai nti capetele N i C terminale i apoi secvena cuprins ntre ele.
Pentru lanuri mai lungi, dup identicarea capetelor N i C terminale,
fragmentul rmas ntre ele se scindeaz n fragmente de pn la 50 de
resturi, care se separ prin cromatografie sau electroforez. Se determin
structura primar a fiecrui fragment i apoi se potrivesc n ordinea lor
iniial, fcndu-se reconstituirea lanului. Numrul de grupri terminale
gsite ofer informaii asupra numrului de lanuri ce compun proteina.
Captul N terminal se poate identifica prin marcarea sa cu un compus
care formeaz o legtur covalent, stabil n condiiile n care legturile
peptidice sunt hidrolizate. n acest scop s-au utilizat 2,4
dinitrofluorbenzenul, clorura de Dansyl i clorura de Dabsyl. O alt
metod enzimatic folosete aminopeptidaza, care hidrolizeaz legtura
peptidic n care este cointeresat aminoacidul N terminal. Astfel,
enzima va detaa pe rnd cte un aminoacid ce ajunge n poziie
terminal. Dezavantajul acestei metode este c aciunea enzimei este
foarte lent n cazul unor aminoacizi.
Captul C terminal poate fi stabilit prin aciunea carboxipeptidazei,
enzim ce scindeaz lanul peptidic cu un rest, ncepnd dinspre
aminoacidul cu gruparea carboxilic liber. Dup un timp de reacie se
separ i se identific aminoacizii eliberai.
Odat ce fragmentele rezultate din lanul iniial au structura primar
descifrat, urmez rezolvarea succesiunii lor n lan, pentru care se
folosete tehnica peptidelor suprapuse. Lanul peptidic original se
scindeaz prin dou sau mai multe metode diferite de hidroliz specific
i din compararea seturilor de peptide obinute se deduce integral
secvena iniial. Pentru proteinele mari, cu peste 1000 de resturi de
aminoacizi, secvenarea lanului devine o operaie dificil i care cere
41

Luciana Dobjanschi

mult timp. A aprut ns, tehnologia ADN-ului recombinat, care a


permis o nou modalitate de abordare experimental n chimia
proteinelor.
Semnificaia structurii primare
Prima protein a crei structur primar a fost identificat este
insulina. S-a dovedit c structura primar a proteinelor este determinat
genetic i c proteinele din toate organismele sunt sintetizate printr-un
mecanism comun.S-a constatat c secvena de aminoacizi este veriga
ntre mesajul genetic cuprins n ADN i structura tridimensional
responsabil de funcia biologic a proteinei. Cunoaterea secvenei de
aminoacizi aduce informaii eseniale pentru descifrarea conformaiei i
mecanismului de aciune, cu privire la nrudirea proteinelor, n legtur
cu evoluia filogenetic a speciilor precum i cu domeniul patologiei
moleculare. Activitatea biologic a unei proteine poate depinde direct i
indirect de structura ei primar. Modificri minore, ca nlocuirea,
pierderea sau inseria unui aminoacid se traduc biochimic prin
polimorfismul proteinelor n cadrul speciei conferind individualitate
organismelor prin specificitatea de specie i prin boli genetice
consecutive alterrii sau pierderii funciei.
Structura secundar a proteinelor
Structura secundar a proteinelor se refer la dispunerea spaial
a resturilor de aminoacizi nvecinai n secvena liniar, ce poate fi
ordonat sau dimpotriv cu puine neregulariti. Prin difracie cu raze X
a fost confirmat existena conformaiilor ordonate i au fost observate
structuri ce se repet periodic. Tot prin tehnica cristalografic cu raze X
a fost stabilit caracterul planar, rigid al legturii peptidice, datorat
conjugrii.

Figura 3.

Coplanaritatea celor 4 atomi


42

Biochimie farmaceutic

Consecinele formrii acestui sistem puternic conjugat sunt


coplanaritatea celor 4 atomi, ceea ce presupune imposibiliatea rotirii
i existenei formelor cis i trans. S-a observat c izomerul trans este
favorizat, deoarece este mai srac n energie. Scheletul lanului
polipeptidic apare, deci ca o succesiune de planuri rigide unite prin
atomii de C ai aminoacizilor constitutivi. Dou treimi dintre atomii
lanului poilpeptidic se afl n poziii fixe unul fa de altul, dar de o
parte i de alta a fiacrei legturi peptidice exist o libertate de
micare. Astfel 2 planuri succesive se pot roti n jurul aceluiai C.
Prezena unor radicali mai mult sau puin voluminoi va
impune amplitudinea rotaiilor, astfel c unghiurile nu pot avea
valori ntmpltoare, ci sunt caracteristice diferitelor tipuri de
structuri secundare. Structura secundar prezint 2 modele, i anume:
modelul -helix i foaie pliat.
Modelul -helix
Modelul -helix reprezint un tip de structur secundar ce
presupune ca lanul s se nfoare strns pe o direcie spiralat,
formnd un cilindru cu interiorul aproape plin, din care radicalii
aminoacizilor apar nt-o dispunere helicoidal.

Figura 4. Modelul de -helix

43

Luciana Dobjanschi

Ca sens de rsucire n proteine a fost identificat -helix pe


dreapta. Stabilitatea -helixului este meninut prin legturi de H ce
se formeaz ntre gruprile carbonil i aminice din lanul spiralat
aflate fa n fa la o distan adecvat. La -helix fiecare aminoacid
avanseaz spirala cu 1,5A0 la o rotire de 1000, pe fiecare spiral
existnd 3,6 resturi, deci pasul spiralei este de 5,4A0. Aceste
dimensiuni arat formarea legturii de H ntre gruprile CO i NH
din cadrul lanului polipeptidic.
Exist unii aminoacizi care sunt nefavorabili structurii de helix. Acetia sunt aminoacizi ce stabilizeaz structura de -helix.
Exemplu: - prolina poate s rup spirala. Aminoacizii cu resturi
laterale voluminoase (arg, ile, lys, asp, glu) destabilizeaz helixul
prin interferne fizice sau electrostatice.
Coninutul de -helix n proteine cu structur spaial este
variabil. Lungimea i repartizarea segmentelor de -helix depinde de
distribuia resturilor favorabile sau destabilizatoare n lungul
lanurilor. n mioglobin i hemoglobin apare ca motiv structural
major, iar n altele lipsete chimotripsina. La majoritatea proteinelor
se gsete ca helix singular pe distane scurte (40 A 0), rar pe zone
extinse de 1000A0. Dou sau cteva -helixuri se pot mpleti ca
uviele unui nur, aa cum apar n proteinele fibroase: -keratina din
pr, miozina, fibroina, care ndeplinesc un rol mecanic de formare a
mnunchiurilor rezistente de fibre.
Moelul sau foia pliat
Structura de foaie pliat a fost studiat tot de Pauling i
Corey, curnd dup -helix, de aceea au numit-o structura . Cele 2
modele difer n primul rnd prin faptul c lanul polipeptidic n
conformaia este mai relaxat, fiind aproape complet extins.
Distana axial ntre dou resturi succesive este de 3,5A0 fa de
1,5A0 n -helix, cu o periodicitate decorespunznd la cca 7A0.
Lanurile polipeptidice sunt aezate n foi pliate, care sunt legate
ntre ele prin legturi de hidrogen. Radicalii aminoacizilor se
situeaz deasupra i dedesubtul planului foii. Dac sensul de
desfurare a lanului n poriunile adiacente coincide, foaia este
numit paralel. Aranjamentul alternativ n foaia antiparalel este
favorabil, succesiunea gruprilor CO i NH fiind complementare.

44

Biochimie farmaceutic

Figura nr.5. Strucura de foaie pliat.


Aminoacizi mici: gly, ala, avantajeaz foaia pliat, iar cei cu
radical mare sau cu sarcin stnjenesc aranjamentul.
Ca i modelul de -helix, structura se ntlnete n multe
proteine globulare sau fibroase. Asocieri de lanuri paralele apar n
fibroina (mtase) i antiparalele apar n -keratina.
Un exemplu de protein fibrilar prezent la animlaele
superioare este colagenul din esutul conjunctiv, fiind cea mai
rspndit protein dintre proteinele vertebratelor superioare. Cu ct
un animal este mai mare i mai greu, cu att proporia de colagen
este mai mare. Fibrele de colagen sunt aranjate n moduri diferite,
depinznd de sarcina biologic pe care o are de ndeplinit proteina.
Structura teriar a proteinelor
Structura teriar a proteinelor reprezint aranjamentul spaial
general al moleculei, rezultat prin asocierea dintre diferite regiuni ale
aceluiai lan, a cror structur secundar poate sau nu varia.
Aranjamentul spaial al proteinelor s-a studiat cu raze X.
Printre proteinele globulare ale cror structur teriar este
binecunoscut sunt: mioglobina, hemoglobina, lizozomii,
ribonucleaza, citocromul c, lactat dehidrogenaza. Reprezentantul
clasic al structurii teriare este mioglobina.
Mioglobina este o protein globular relativ mic, care
conine un singur lan polipeptidic format din 153 resturi de
aminoacizi, a cror secven nc nu se cunoate. Mioglobina conine
o feroprotein, sau hem, grupare identic cu cea a hemoglobinei,
fiind i ea capabil s se oxigeneze i s se deoxigeneze.
Mioglobina se gsete n celulele muchilor scheletici i este
deosebit de abundent la mamiferele acvatice, cum ar fi: balena, foca
45

Luciana Dobjanschi

sau morsa, a cror muchi sunt att de bogai n mioglobin nct


sunt colorai n brun nchis.
Scheletul moleculei de mioglobin este format din opt
segmente aproximativ drepte, unite prin poriuni curbate. Fiecare
segment drept este un -helix, cel mai lung fiind constituit din 23 de
aminoacizi, iar cel mai scurt este format din numai 7 aminoacizi i
toi au sensul de rsucire spre dreapta. Aceste regiuni - helicoidale
reprezint 70% din aminoacizii din molecul. Dei structura
mioglobinei pare neregulat i asimetric, ea nu este deloc
ntmpltoare. Toate moleculele de mioglobin au aceeai
configuraie.

Figura nr. 6. Structura mioglobinei


Alte aspecte structurale legate de structura mioglobinei sunt
urmtoarele:
1. Molecula este foarte compact, n interiorul ei rmne spaiu
pentru patru molecule de ap.
2. Toate gruprile R polare ale resturilor de aminoacizi sunt
localizate pe suprafaa extern a moleculei i sunt hidratate.
3. Aproape toate gruprile R nepolare sau hidrofobe se afl n
interiorul moleculei, ferite de expunerea la ap.
4. Resturile de prolin se gsesc numai n zonele de curbur, care
conin, deasemenea aminoacizi care nu formeaz cu uurin helix, de exemplu: izoleucina i serina.

46

Biochimie farmaceutic

5. Conformaia de ansamblu a lanului polipeptidic este aparent


aceeai la mioglobina tuturor speciilor speciilor studiate, dei ele
difer oarecum n compoziia de aminoacizi. Astfel, resturile
constante de secven pot fi implicate n determinarea poziiei
curburilor i a direciei segmentelor drepte.
Ribonucleaza, este o enzim pancreatic ce depolimerizeaz
molecula de ARN i exemplific un model diferit de mpachetare
tridimensional a lanului. Catena ei este format din 124 de
aminoacizi i este organizat n proporie de 40% ca foaie pliat
antiparalel, 15% n -helix, restul lanului gsindu-se sub form de
bucle. n structura teriar forma general a moleculei amintete de
cochilia unui melc, la a crei stabilitate contribuie i 4 puni
disulfidice.
Structura cuaternar
Structura cuaternar apare la proteinele alctuite din dou sau
mai multe lanuri polipeptidice care se asociaz formnd o unitate de
sine stttoare, cu form spaial bine definit i posednd o anumit
activitate biologic.
Structura cuaternar se refer la felul, numrul i aranjamentul
lanurilor polipeptidice ncluznd i natura contactelor dintre ele.
Cele mai multe proteine oligomer sunt formate dintr-un
numr mic i par de lanuri, care se numesc subuniti sau protomeri.
Subunitile identice sau diferite au fiecare structura sa spaial; ele
se pot aeza succesiv pe direcie liniar, circular sau mai compact
suprapuse n forme geometrice diferite. Aceste posibiliti de
aranjare se refer la protomeri identici sau foarte puin diferii.
Ansamblul prezint simetrie, suprafeele de contact sunt
complementare, sugernd gradul nalt de specificitate al structurii
cuaternare.
Monomerii realizeaz interaciuni slabe: (legturi saline,
legturi de hidrogen, fore Wan der Waals, legturi hidrofobe),
proteina putnd astfel disocia reversibil.
Lanurile izolate sunt lipsite de activitate, funcia fiind
rezultatul ansamblului cu structur cuaternar.
Exemple de proteine cu structur cuaternar:
- creatin kinaza, lactat dehidrogenaza, glutamat dehidrogenaza,
enzime, proteine neenzimatice: hemoglobina , imunoglobulina G.
Alte exemple de proteine cu structur cuaternar sunt enzimele
allosterice.
47

Luciana Dobjanschi

Noiunea de structur cuaternar se poate extinde i la unele


heteroproteine.
Printre cele mai simple proteine oligomere este hemoglobina,
care este format din 4 lanuri polipetidice.
Hemoglobina conine 2 lanuri formate din 141 de resturi de
aminoacizi i 2 lanuri formate din 146 de resturi de aminoacizi;
fiecare dintre acestea avnd ataat printr-o legtur necovalent cte
un radical hem. Molecula a fost studiat n forma sa oxigenat, care
are o structur sferic, compact, cu dimensiuni de: 6,4/5,5/5,0mm.
n hemoglobin, ntre cele 2 lanuri , ca i ntre cele dou lanuri
exist foarte puine contacte, n schimb, numeroase grupri R fac
legtura ntre perechile de lanuri care nu sunt asemenea.

Figura nr.7. Structura hemoglobinei


Un inters deosebit l prezint aezarea pe fiecare subunitate a
cte uneia dintre cele 4 grupri hem, care leag cele 4 molecule de
oxigen. Aceste grupri hem, molecule plane, n care atomii de fier
formeaz compleci de coordinare plan-ptrai, sunt destul de
ndeprtate ntre ele i sunt situate la anumite ungliuri unele de altele.

48

Biochimie farmaceutic

n molecula hemoglobinei rmne o cavitate cental, mrginit de


grupri cu radical R polare.

Figura nr.8. Formarea hemoglobinei


Denaturarea proteinelor
Denaturarea proteinelor reprezint perturbarea structurii lor
native, nalt organizate, trecerea la o form ntmpltoare cu
creterea entalpiei sistemului, astfel c activitatea biologic este
compromis. Denaturarea proteinelor are loc sub aciunea unor
ageni denaturani.
Agenii denaturani sunt: temperatura, acizii, bazele, oxidanii,
unele metale, ureea, guanidina, solvenii organici.
Agenii denaturani acioneaz distrugnd legturile ce dau stabilitate
structurii tridimensionale.
Fenomenul de denaturare privete nivelele de structur
secundar, teriar i cuaternar, meninute prin legturi slabe, fr
afectarea structurii primare.
Procesul de denaturare poate s fie pn la un punct
reversibil. ns, dac agentul denaturant acioneaz mai energic,
proteina se denatureaz ireversibil. n cazul unui proces reversibil,
dup ndeprtarea agentului cauzant, proteina se renatureaz,
redobndind structura nativ. Aceasta se explic prin dependena
structurii spaiale de cea primar.
49

Luciana Dobjanschi

Figura nr.9. Procesul de denaturare i renaturare a proteinelor


Proteinele denaturate i schimb proprietile fizice, cum ar
fi: activitatea optic i vscozitatea. Deasemenea solubilitatea n ap
scade producnd precipitarea lor. Acest fenomen de precipitare este
exploatat n biochimia analitic la cercetarea proteinelor din lichidele
biologice n scopul deproteinizrii.
Alte aplicaii ale fenomenului de denaturare sunt: procedeele
de purificare a proteinelor i operaia de sterilizare.

50

Biochimie farmaceutic

V. VITAMINE
Vitaminele sunt biomolecule indispensabile vieuitoarelor
pentru creterea, ntreinerea troficitii i funciei esuturilor.
Organismul uman nu le poate sintetiza sau produce n cantiti
insuficiente. Vitaminele sunt necesare organismului n cantiti mici
de ordinul miligramelor sau mai puin, cu excepia vitaminei C care
este necesar n cantiti de aproximativ 75 mg pe zi.
Deci, vitaminele pot fi considerate factori eseniali. Carena unei
vitamine genereaz stri patologice, cu manifestri specifice.
Deficienele vitaminice reflect dezechilibru dintre aport i
necesiti. Ele sunt cauzate:
Primar :
- prin lipsa de aport alimentar
- de afeciuni digestive ce se repercut asupra absorbiei
- datorit disbiozei pentru vitaminele ce sunt produse de flora
intestinal, aceasta este afectat prin administrarea oral de
antibiotice sau sulfamide.
Secundar :
- datorit cerinelor crescute ce apar n anumite stri.
Necesarul pentru o vitamin sau alta depinde de:
- vrst
- de starea fiziologic, de exemplu: sarcina
- de starea de sntate
- efortul fizic
- temperatura ambiant
- administrarea unor medicamente.
Strile careniale sunt numite avitaminoze (apar astzi la
populaia malnutrit din rile subdezvoltate) i hipovitaminoze, cu
manifestri policareniale.
Unele vitamine au provitamine, care sunt compui nrudii
structural, inactivi sau slab activi, pe care organismul i transfer n
forma activ n forma activ de vitamin.
Au mai fost identificai i ali compui numii antivitamine, care
sunt capabili s-i diminuie sau s-i suprime activitatea unei anumite
vitamine. Unele antivitamine au utilizri terapeutice, dar prezin
dezavantajul de a induce simptome careniale.
Clasificarea vitaminelor
Exist o clasificare care are la baz criteriul solubilitii n ap
sau solveni nepolari. Astfel vitaminele se mpart n:
- vitamine hidrosolubile: B1, B2, B6, B12, PP, acid folic, C, biotina,
acidul pantotenic.
51

Luciana Dobjanschi

vitamine liposolubile: A,D,E,K.


Unii autori admit i o categorie de pseudovitamine care cuprind
compui care au parial trsturi de vitamine (vitaminoide). De
exemplu:
- flavonoizii numii i vitamina P
- acizii grai eseniali sau vitamina F
- mezoinozitolul
- colina

Mecanismul de aciune al vitaminelor


Multe vitamine acioneaz dup o prealabil biotransformare,
iar altele rmn nemodificate i funcioneaz ca i coenzime,
participnd la o multitudine de procese biochimice.
Alte vitamine ca de exemplu vitaminele A sau D folosesc ci
de aciune ce amintesc de mecanismele hormonale.
Vitaminele E sau tocoferolii funcioneaz ca sisteme
antioxidante fa de agresiunea peroxidic.
Exist, deasemenea i modaliti particulare de aciune, cum
ar fi de exemplu: retinalul i acidul retinoic.
n general vitaminele prezint i un important rol catalitic.
Implicaii terapeutice
n terapie, vitaminele sunt utile ca medicaie specific pentru
combaterea sau profilaxia strilor careniale. Preparatele pot s
conin o singur vitamin sau asocieri de vitamine. n doze
terapeutice vitaminele sunt n general bine tolerate. Supradozarea
poate provoca tulburri grave, numite hipervitaminoze, mai ales la
vitaminele liposolubile, care sunt mai greu eliminabile.
Exemplu: - n literatur se semnaleaz c vitamina A ar prezenta risc
teratogen, fiind astfel contraindicat n primele luni de sarcin.
n terapie se folosesc unii derivai vitaminici ca sruri, esteri,
reprezentnd forme optimizate sub raportul eficacitii sau al
posibilitii de adminidtrare.

52

Biochimie farmaceutic

V.1. Vitaminele liposolubile


Vitaminele liposolubile sunt molecule apolare derivate din
izopren. Ele sunt relativ stabile la temperatura operaiilor culinare,
dar uor inactivate de radiaiile UV i substanele oxidante.
Digestia i absorbia lor decurge n condiii proprii lipidelor, cu
participarea enzimelor specifice i a bilei.
Ficatul poate depozita vitaminele A,D,K, iar vitamina E se
acumuleaz mai ales n esutul adipos.
n circulaia sanguin vitaminele liposolubile sunt vehiculate de ctre
proteinele plasmatice.
Vitaminele liposolubile se elimin n bil, urmeaz un circuit
enterohepatic i se excret n fecale. Unii metabolii pot s treac n
urin.
Vitaminele A
Vitaminele A mai sunt cunoscute i sub denumirea de retinoide.
Surse de Vitamina A
Vitamina A se gsete n alimenia carnal ca atare sau n
produsele vegetale sub form de provitamine.
Organismul uman nu poate sintetiza vitamina A, dar are capacitatea
de a transforma provitaminele n forme active. Provitaminele A sunt
pigmeni de culoare galben-portocalie sau roie.
Structur
Pigmenii vegetali au o structur polizoprenic format din 40 de
atomi de carbon i au nite inele ciclohexenil (cicluri iononice).
n grupa provitaminelor A intr hidrocarburi (caroteni) i derivaii
lor oxigenai (xantofile, carotenoide).
Condiia structural obligatorie este prezena a cel puin a unui
nucleu -iononic.
Exemplu:

- caroten
53

Luciana Dobjanschi

caroten
n mucoasa intestinal, - carotenul sufer o scindare
oxidativ a legturii duble din poziia 15 (proces enzymatic) n urma
creia se formeaz vitamina A1 (retinalul).
O2
dioxigenaza

CH
2

vitamina A1 (retinalul)
Tot n mucoasa intestinal mai au loc dou transformri i
anume:
- reducerea gruprii carbonilice la grupare alcoolic n prezena
enzimei alcool dehidrogenazei sau retinol dehidrogenazei.

54

Biochimie farmaceutic

CH

alcool
dehidrogenaza
CH2OH

retinol

oxidarea gruprii aldehidice la acid carboxilic, n prezena


aldehid dehidrogenazei, cu formare de acid retinoic.

CH

aldehid
dehidrogenaza
COOH

acid retinoic

Forma alcolic i cea de aldehid reprezint formele de


absorbie intestinal. Dup absorbie vitamina A se esterific cu
acizii grai (acid palmitic) i se depoziteaz n ficat. De acolo se
mobilizeaz dup necesiti. Vitamina A este transportat de o
protein plasmatic specific la esuturile int. Majoritatea
esuturilor au capacitatea de a realiza conversia:
55

Luciana Dobjanschi

ol

al

oic

Se mai cunosc i alte vitamine A, i anume. A2, A3.

CH
O

vitamina A2 (3-dehidroretinal)
Vitamina A2 se gsete sub 3 forme, i anume: 3- dehidroretinal , -ol
i oic i se gsete n ficatul petilor.
CH2
CH

Vitamina A3
n cazul vitaminei A3 are loc deplasarea legturii duble din poziia
13-14 n poziia
13-20.
Toate cele trei forme ale vitaminei A1 (retinol, retinal i acid
retinoic) sunt active biologic, dar sunt inechivalente ca aciune.
Acidul retinoic
Acidul retinoic este capabil s ntrein dezvoltarea i
diferenierea diferitelor esuturi. Acidul retinoic particip n
biosinteza glicoproteinelor, datorit capacitii sale de a proteja
pielea i mucoasele (aciune epitelotrop) i mrete rezistena
organismului la infecii.
Retinolul
n celula int retinolul este captat de o protein specific
citoplasmei, diferit de cea seric i l transloc n nucleul celulei,
unde este preluat de o protein nuclear. Se presupune c vitamina A
sub forma alcoolic acioneaz asemntor hormonilor. Retinolul
influeneaz funcia de reproducere, acionnd asupra hormonilor.
56

Biochimie farmaceutic

Retinalul
Retinalul particip direct n procesul vederii, fiind elementul
cromofor al tuturor pigmenilor vizuali coninui n celulele
fotoreceptoare din retin. Celulele fotoreceptoare din retin conin
dou tipuri de celule ca form: bastonae i conuri.
Pigmenii vizuali sunt instrumente moleculare ale vederii. Ca
structur sunt cromoproteine, proteine complexe formate din
proteina propriu-zis plus o grupare micromolecular colorat.
Celula bastona este implicat n procesul vederii i este format din
dou segmente, i anume unul extern i unul intern. Segmentul
extern este format din aproximativ 1000 de discuri ce conin
pigmeni vizuali de tipul rodopsinei. Rodopsina este o cromoprotein
format din dou componente: o parte proteic, numit opsina i
cromoforul, care este izomer al vitaminei A: 11- cis retinalul. Cele
dou componente sunt legate printr-o legtur de tip baz Schiff ce
se realizeaz ntre funcia carbonil a cromoforului i funcia aminic a unui rest de lizin din structura opsinei.
R

CH

N+

( CH2 )4

CH

NH

opsina

CO

cromofor ( 11- cis retinal )


Rodopsina are capacitate mare de a absorbi lumina, ceea ce face ca
celula bastona s fie un receptor foarte sensibil, fiind necesar
energia unui singur foton pentru a fi fotoexcitat.
Rodopsina face parte dintr-un sistem senzor. Fenomenul primar al
procesului de excitare vizual este izomerizarea 11-cis retinalului din
structura rodopsinei, consecutiv absorbiei luminii.

57

Luciana Dobjanschi

izomerizare
lumina

HC
+

11 cis
-

retinal

NH

opsina

CH

NH

opsina

all trans retinal


Prin izomerizare se schimb geometria structurii polienice a
rodopsinei, are loc o deplasare a legturii aldiminice cu 5A 0 n raport
cu inelul - iononic. Aceast deplasare va antrena structura proteinei
i apar astfel modificri constante ale opsinei, modificri ce duc la
desprinderea cromoforului de opsin. Procesul de fotoliz a
pigmentului are loc n etape care se succed cu vitez foarte mare.
Rodopsina activat va declana o serie de interaciuni n cascad care
explic fenomenul de excitaie vizual.
R
lumina

intuneric

R* (rodopsina fotoexcitata)

all trans retinal


izomeraza
dehidrogenaza
all trans retinol

58

11 cis

retinal

opsina

Biochimie farmaceutic

Procesul de excitare vizual.


Carena de viatmina A mbrac diverse forme.
La nivelul ochilor:
- se instaleaz tulburri funcionale, scderea acomodrii n lumin
crepuscular, apar dificulti n vedere.
- Pot s apar leziuni ale conjunctivei (xeroftalmie)
- Obstrucia canalelor vasculare, cheratomalacie, suprainfectare cu
Bacillus xerosus
La nivelul pielii:
- apar leziuni trofice ale epidermei i mucoasei
Tot n caren de vitamina A pot s apar tulburri ale creterii i
sterilitate.
Supradozarea cu vitamina A duce la hipervitaminoz, care se
manifest prin creterea tensiunii intracraniene, cefalee, prurit,
hepato-splenomegalie, descuamare cutanat, anorexie, iritabilitate.
n condiii obinuite necesarul zilnic de vitamina A este de 1,7mg
pentru adult i 1 mg pentru copii. El poate s creasc n sarcin,
lactie, pneumonie, nefrit.
Indicaii
Vitamina A este indicat n special n: oftalmologie, dermatologie,
dar i n boli infecioase febrile, boli renale, ciroze hepatice,
hipertiroidism, diabet i n pediatrie. n scop terapeutic se folosesc
esterii de retinol i anume: acetatul i palmitatul.
Vitaminele D ( calciferolii)
Prin origine, structur i mod de aciune vitaminele D se
apropie mult de hormonii steroizi. Necesarul n raia alimentar este
evaluat n jur de 150 UI la adult, ntre 300- 500UI la copil, cu
condiia unui aport adecvat da Ca i P. Necesitile de aport exogen
crescut sunt reclamate n sarcin, alptare, la sugari i la persoanele
private constant de lumina solar.
Surse de vitamina D:
- din alimente sub form de provitamine
- endogen prin biosintez
- suplimentar sub form de medicamente n caz de sarcin, la
sugari, persoanele ce triesc i lucreaz mult n ntuneric
Provitaminele D sunt compui sterolici cu 19 atomi da carbon
n structura tetraciclic de baz. Conversia provitaminelor D n
vitamine D este un proces fotochimic ce are loc sub influana
radiaiilor UV. Procesul are loc n etape cu deschiderea inelului B.
59

Luciana Dobjanschi

Se cunosc 6 vitamine D, care se noteaz de la D2 la D7. D1 este


considerat preparat impur de D2.

lumina

HO

HO

7- dehidrocolesterol
(D3)

colecalciferol

lumina

HO

ergosterol
(D2)

HO

ergocalciferol

Provitamina D2 se ntlnete n sclerotul de secar,


S.cereviceae, esuturi animale.

60

Biochimie farmaceutic

Sursa endogen de vitamina D


sinteza endogena

alimente

colesterol
mucoasa intestinala
7

dehidrocolestrol
lumina

HO
colecalciferol
Prin aciunea radiaiilor UV 7-dehidrocolesterolul format n
mucoasa intestinal i depozitat n piele sufer un process de fotoliz
neenzimatic, trecnd n precolecalciferol, care se izomerizeaz
spontan n colecalciferol. Transformarea este direct proporional cu
intensitatea expunerii i invers proprional cu gradul de pigmentare
a epidermei. Procesul de conversie se diminu cu vrsta. Calciferolii
se absorb din intestinul subire proximal.
Metabolismul vitaminei D
Vitamina D sufer un proces de hidroxilare la fel ca i
hormonii. Au fost pui n eviden cca 20 de derivai hidroxilai.
Astfel, n microzomii hepatici o hidroxilaz specific introduce
gruparea hidroxil n poziia 25. 25- hidroxicalciferolul sub aciunea
unui complex de trei enzime duce la hidroxilarea n poziia 1, cu
formare de 1, 25 calciferol sau calcitriolul, care este metabolitul cel
mai activ, fiind considerat i hormonul D.
Perturbarea procesului de obinere a calcitriolilor duce la
cauzele de producere a carenei de vitamina D. Astfel, medicaia
antiepileptic (fenobarbital, fenitoina) administrat timp ndelungat
61

Luciana Dobjanschi

induce enzime capabile s produc produi hidroxilai preponderent


inactivi.
calciferol
OH

hidroxilaza
OH
25 hidroxicalciferol

1,25 calciferol

(calcitriol)

24,25 calciferol

HO
calcitriol

1,24,25 calciferol

62

Biochimie farmaceutic

Rolul biochimic al vitaminei D


Vitamina D alturi de hormonul paratiroidian intervine n
metabolismul Ca i al fosfailor. Astfel, reacia de hidroxilare a
calcifediolului este stimulat direct de scderea fosfatului i indirect
de scderea calciului.
hipofosfatemie

hipocalcemie
+

PTH
+

calcifediol

calcitriol

Calcitriolul i stopeaz propria sintez prin mechanism feedback. Calcifediolul s-a putut localiza n intestine, n esutul renal,
osos; acestea find deci principalele esuturi int a hormonului D.
Aciunea biologic principal a hormonului D este de a
facilita absorbia intestinal de Ca i fosfat. La nivelul tubilor renali
produce retenie de fosfai i crete sinergic cu PTH reabsorbia Ca.
n corelaie cu PTH asigur concentraiile sanguine optime de Ca i
fosfai, n vederea mineralizrii normale a osului. Dup unele preri,
calcitriolul ar stimula sinteza de osteocalcin, o protein
transportoare de Ca, a crei formare depinde i de vitamina K.
Aciunea parathormonului i a hormonului D este de a ridica nivelul
de Ca n fluidul extracelular i de a menine sau scdea concentraia
de fosfat. Cnd exist un deficit de Ca n os, creterea calcemiei sub
influena vitaminei D va produce inhibiie feed-back a secreiei PTH,
permind mineralizarea. Dozele mari de vitamina D stimuleaz
osteoclatii i mobilizeaz Ca din oase. Aceste micri ale Ca pot fi
puse n legtur cu proteinele transportoare din celulele respective.
63

Luciana Dobjanschi

n concluzie, hormonul D este produs printr-o serie complex


de reacii enzimatice i neenzimatice, ce implic transportul
moleculelor precursor la esuturi. n organele int hormonul D
acioneaz dup modelul hormonilor steroizi, interceptnd n final un
numr de procese biologice. Hormonul D are o contribuie esenial
la homeostazia calciului. Acest bioelement este important nu numai
n metabolismul osos, ci i n excitabilitatea neuromuscular,
stimuleaz producerea unor hormoni i neurotransmitori, intervine
i n procesul de coagulare.
Carena de vitamina D
Carena de vitamina D se manifest n primul rnd prin
tulburri n metabolismul osos. La adult, demineralizarea osului
provoac osteoporoza, care evolueaz spre osteomalacie. La copii,
carena de vitamina D duce la apariia rahitismului.
Semnele biuochimice sunt creterea fosfatazei alcaline serice,
hipocalcemia i hipofosfatemia. Tabloul clinic al rahitismului
include: deformri ale scheletului, modificri osoase vizibile
radiologic, hipotonie muscular i ligamentar, uneori spasmofilie.
Deformrile osului se instaleaz n primii ani de via.
Exemplu:
- fontanela defectuos suturat, craniu ovalar, dentiie ntrziat,
toracele cu sternul proiectat nainte, bazin strmtat. La maturitate
apare bazin distocic, membrele inferioare se curbeaz, iar
abdomenul devine voluminos.
Indicaii
n terapie se utilizeaz vitaminele D2 i D3, calcifediolul i
calcitriolul asociate cu preparate de Ca i fosfat. La sugari se face
profilaxie cu vitamina D. Exist forme de rahitism, numite rahitism
pseudocarenial, rezistente la vitamina D. Aceste boli sunt
congenitale, datorate incapacitii transformrii vitaminei D n
calcitriol i a absenei receptorului pentru hormonul D.
Toate preparatele cu vitamina D sunt toxice prin supradozare,
provocnd mobilizarea Ca din os, osteoporoza, hipercalcemia,
depuneri n esutul renal ducnd la calculoza renal. La administrarea
prelungit a vitaminei D se recomand controlul nivelului de Ca i
fosfat din snge.
A fost obinut un analog sintetic al vitaminei D , compusul
dihidrotachisterolul ( AT10, tachystin), prin hidrogenarea parial a
tachisterolului, unul din produii secundari din procesul de fotoliz a
provitaminei D. Acest compus este folosit la combaterea de urgen
a tetaniei paratireoprive, datorit efectului rapid de corectare a
hipocalcemiei.
64

Biochimie farmaceutic

Vitamina E (tocoferolii)
Vitamina E este cunoscut sub denumirea de vitamina
antisterlitii, deoarece este necesar pentru fertilitate la unele
mamifere i psri. Denumirea de tocoferol vine din limba greac
*tokos = a nate, pherein = a purta*. Vitamina E se gsete
exclusiv exogen n plantele verzi, uleiuri vegetale, alimente de
origine animal, mai ales viscere.
Structura vitaminei E
Tocoferolii sunt derivai metilai ai nucleului, numit tocol. Se
cunosc 4 tocoferoli naturali notai: -, -, -, - tocoferol. Compusul
posed activitatea vitaminic cea mai marcat i este cel mai larg
rspndit.

HO
CH3

CH3

CH3

CH3
CH3

tocol
tocoferol: 5,7,8 trimetiltocol
tocoferol: 5,8 dimetiltocol
tocoferol: 7,8 dimetiltocol
tocoferol: 8 metiltocol
Metaboliii acestei vitamine nu se cunosc, neidentificndu-se
nici un metabolit activ.
Rolul biologic al vitaminei E
Vitamina E prezint dou funcii biochimice:
- una legat de calitatea sa puternic antioxidant
- cealalt privind metabolismul Se.
Vitamina E este un puternic antioxidant n vivo sau n vitro.
Vitamina E este activ la presiuni mari de oxygen i protejeaz astfel
acizii grai nesaturai, vitamina A, carotenii i gruprile tiolice ale
enzimelor. Vitamina E este bine distribuit n membranele
eritrocitelor i ale celulelor din teritoriul arborelui respirator.
n vivo joac un rol important n protecia fosfolipidelor
membranare, contribuind astfel la conservarea structurii celulare,
fa de agresiunea peroxidic a diverilor ageni.

65

Luciana Dobjanschi

Relaia vitamina E Se este una de reciprocitate. Rolul legat


de Se este specific i insuficient precizat. n ce privete Se, se arat
c el este necesar pentru funcionarea normal a pancreasului
(digestia lipidelor i deci a vitaminei E). Se contribuie la reinerea
vitaminei E n lipoproteinele plasmatice. Se are o aciune sinergic
antioxidant ca i component al unei enzime numite glutation
peroxidaz.
2G

SH

H2O2
glutation peroxidaza

G S

2 H2O

Necesarul de viatamina E este de 10 mg /zi, iar n sarcin i


alptare ajunge la
15 mg/zi.
Carena de vitamina E
Stri de caren E se pot instala n cadrul sindromului de
malabsobie lipidic, cauzate de disfuncia pancreatic,
colecistopatii, boli inflamatorii intestinale, cnd se produce steatoree
(pierderea de lipde n scaun). Pn n prezent lipsesc dovezi sigure c
vitamina E ar fi necesar funciei reproductive la om.
Carena se manifest prin tulburri neurovegetative, apariia de
edeme, fragilitate eritrocitar, anemia hemolitic, care apare n
special la nou-nscuii prematur.
Vitamina E se indic n sarcin i alptare, la prematuri, la vrstnicii
cu tulburri de circulaie periferic. n avort, sterilitate i distrofii
musculare eficiena este ndoielnic.

66

Biochimie farmaceutic

Vitamina K
Vitaminele K naturale se gsesc n diferite alimente, ca: lapte,
ou, uleiuri vegetale. Sursa major de vitamina K este flora saprofit
intestinal (B.coli), astfel c n mod obinuit nu este necesar aportul
exogen.
Vitaminele K sunt derivai de 2- metal- 1,4-naftochinona.
Compusul printe este considerat vitamina K3, numit i menadiona.
O
CH3

O
vitamina K3 , menadiona
Se cunosc 7 vitamine K, dintre care: K1K3 sunt
liposolubile (vitamine naturale), iar K4..K7 sunt hidrosolubile
(vitamine de sintez).

O
CH3
CH2

CH3
CH

CH3

C CH2 CH2

CH2 CH

CH2

H
3

fitomenadiona , vitamina K1
O
CH3
CH2

CH3
CH

C CH2

H
n

vitamina K2 ( n= 6,7,8)
67

Luciana Dobjanschi

OH
CH3

OH

vitamina K4
NH2HCl
CH3

OH
vitamina K5
NH2HCl
CH3

NH2HCl
vitaminaK 6
OH
CH3

NH2HCl
vitamina K7

68

Biochimie farmaceutic

Biotransformarea vitaminei K are loc n microzomii hepatici.


Metabolitul cel mai activ al vitaminei K este derivatul hidrochinonic.
Acesta sufer un proces de glicuronoconjugare, iar produii rezultai
se elimin pe cale biliar i renal.

Acid glutamic

acid carboxiglutamic
CO2

monooxigenaza

O2
OH

O
CH3

CH3

O
R

OH

O
O
CH3

epoxid reductaza

R
O
Acidul -carboxi- glutamic fixeaz calciul cu afinitate mare
pentru glutamat, care este un chelator slab, permind interaciunea
specific protein Ca+2 fosfolipide, esenial pentru procesul de
coagulare.
Rolul biologic al vitaminei K
Vitamina K are rol n procesul de coagulare a sngelui.
Vitamina K este esenial pentru asigurarea nivelului optim pentru 4
din factorii coagulrii sngelui: II, VII, IX, X. Aceti factori sunt
proteine care se sintetizeaz i se elibereaz n circulaie sub form de
precursori inactivi: zimogeni (precursori enzimatici). Conversia
zimogenilor la forme active este un proces vitamino K dependent.
69

Luciana Dobjanschi

Rolul biochimic al vitaminei K a fost pus n eviden prin


experiene cu antivitamine K. Astfel, s-a demonstrat c dicumarolul
introdus n alimentaia animalelor produce hemoragii letale, deoarece
sngele acestor animale conine o protrombin anormal, incapabil
s lege calciu, ntruct ea nu conine resturi de acid carboxiglutamic. Compuii de tip cumarinic sunt folosii n terapia
anticoagulant, pentru tratamentul i profilaxia afeciunilor
tromboembolice, acionnd asupra epoxid reductazei pe care o nhib.
Carena de vitamina K
Deficitul de vitamina K se poate instala n sindromul
malabsorbiei lipidice, n boli hepatice, prin disbioza intestinal
indus de antibiotice sau sulfamide, abuz de laxative, tratament cu
anticoagulante cumarinice, supradozare cu vitamina A. Carena de
vitamina K duce la hemoragii, epistaxis, hemoragii subcutane,
digestive, hematurie. Deasemenea carena de vitamina K poate s mai
apar n boala hemoragic a sugarului, la care intestinul este relativ
steril, sistemul de sintez hepatic a factorilor de coagulare este
imatur, iar bariera placentar este greu accesibil la vitamina K.
Terapia cu vitamina K
Vitamina K face parte dintre hemostaticele folosite sistemic n
hemoragii de diverse etiologii.
Preparatele farmaceutice de vitamina K sunt: fitomenadiona,
menadiona solubil i derivaii si hidrosolubili, menadion sodiu
sulfat i menadiol sodiu fosfat.
Fitomenadiona este lipsit de toxicitate, celelate fiind contraindicate
la nou-nscui i sugari putnd provoca anemie hemolitic i
hiperbilirubinemie.
Dozele terapeutice sunt mai mari dect cerina fiziologic, care este
apreciat la 2 mg/zi.

70

Biochimie farmaceutic

V.2. Vitaminele hidrosolubile


Vitaminele hidrosolubile sunt molecule polare cu structur
chimic foarte variat. Ele se ntlnesc asociate n produse naturale
ca: drojdia de bere, cortexul gramineelor, ficat. Din aceast cauz
lipsa de aport prin alimentaie provoac stri de policaren i nu o
hipovitaminoz anume.
De exemplu: alcoolismul cronic produce policarena vitaminic B, cu
preponderen a carenei de vitamina B1.
Vitaminele hidrosolubile se absorb n circulaia portal, se stocheaz
n cantiti mici, eliminndu-se cu uurin pe cale renal.
Vitamina B1
Vitamina B1 se mai numete tiamina sau aneurina i apare larg
rspndit n esuturile vegetale i animale, n drojdia de bere.
Necesarul zilnic pentru un adult sntos este de cca 2 mg/zi.
Necesiti crescute pot s apar n sarcin i alptare, n cretere i n
stri patologice ca boli nervoase, alcoolism, boli infecioase.
Structura
n structura moleculei de tiamin intr 2 nuclee heterociclice:
unul pirimidinic i unul tiazolic. Cele dou nuclee sunt unite print-o
punte metilenic.
CH2

N
H3C

N+
S

CH3
CH2

CH2 OH

Vitamina B1 este uor absorbit din intestine, n esuturi unde


este fosforilat i transformat n tiaminpirofosfat (TPP), care apoi
poate fi hidrolizat cu eliminarea gruprii pirofosforice.

71

Luciana Dobjanschi

ATP

AMP

TPP
Tiamina
pirofosfattransferaza
pirofosfataza
P

CH2

N
H3C

N+
S

H2O

CH3
CH2

OH
CH2 O P O
O

OH
P OH
O

TPP
TPP (cocarboxilaza) este forma metabolic activ, care
servete drept coenzim n reacii ce transfer uniti de aldehid
activat. Asemenea transferuri au loc n reacia de decarboxilare
oxidativ a - cetoacizilor i n reacia de transcetolare. Ambele tipuri
de reacii sunt ntlnite n cadrul metabolismului glucidic. n aceste
reacii de transfer, rolul propriu-zis al coenzimei TPP este de a servi
la eliberarea din anumite molecule a unitilor aldehidice care
urmeaz a fi transferate pe alte molecule.
Carena
Carena de tiamin apare atunci cnd cresc necesitile.
Sindromul tipic pentru carena de tiamin este cunoscut sub numele
de boala beri-beri. Sindromul beri-beri prezint 3 forme:
- Beri-beri uscat (paralitic), se manifest prin atonie muscular,
caecsie, polinevrit periferic degenerativ.
- Beri-beri edematos (umed), care se manifest prin tahicardie,
cardiomegalie, dispnee, edem generalizat
- Beri-beri difuz , ce se manifest cu dureri musculare de tip
reumatismal, astenie.
Sindromul beri-beri rmne cauza esenial a mortalitii neonatale n
Asia de S-E. O alt form de hipovitaminoz este sindromul
Wernicke, care se manifest cu fenomene de encefalopatie (afeciune
a sistemului nervos).
72

Biochimie farmaceutic

La alcoolici carena apare frecvent evolund cu polinevrita, crampe


dureroase ale membrelor inferioare, tulburri senzitive, apoi motorii.
Indicaii
Vitamina B1 este indicat n tratamentul strilor careniale, n
neurologie, reumatologie, alcoolism, boli infecioase, diabet zaharat.
Vitamina B2
Vitamina B2 sau riboflavina este sintetizat de plante i
microorganisme. Ea se gsete n cantiti mari n: lapte, ou, ficat,
legume verzi. Este relativ termostabil, dar se descompune n
prezena luminii.
Structura
Riboflavina este reprezentat de nucleul izoaloxazinic
substituit cu doi radicali metil n poziiile 6 i 7, i cu un rest ribitil n
poziia 9.
CH2

CHOH 3 CH2 OH

H3C

H3C

O
NH

O
Riboflavina la nivelul mucoasei intestinale este fosforilat cu
ajutorul mATP rezultnd o structur ce amintete e un nucleotid, i
anume: FMN.
FMN reprezint forma de absorbie intestinal. n diferite
esuturi, FMN este nglobat ntr-o structur mai complex, prin legare
de un rest de AMP, transferat de pe o molecul de ATP cu formare de
FAD.

73

Luciana Dobjanschi

H3C

CH2

CHOH 3 CH2 OH

flavokinaza

+ ATP

NH

H3C

Mg+2

O
CH2

CHOH 3 CH2

H3C

H3C

PO3H2

O
NH

O
FMN
CH2 CHOH 3 CH2 OPO3H2
H3C

H3C

O
+ ATP

NH

flavokinaza
Mg+2
NH2

OH

OH

CH2 CHOH 3 CH2 O

P O

H3C

P O CH2
N
O
O

H3C

N
N

NH
O

HO OH

FAD
Dintre aceste dou forme FAD reprezint 80%, FMN 20%,
iar riboflavina liber rmne ntr-o proporie neglijabil.

74

Biochimie farmaceutic

Rol biochimic
Ambele flavin-nucleotide (FMN, FAD) sunt coenzime care
fac parte din sisteme enzimatice implicate n diverse procese de
oxido-reducere din organism. Datorit structurii coenzimelor
respective, aceste enzime se mai numesc flavoenzime sau
flavoproteine. n structura lor se remarc o legtur strns
(necovalent) ntre coenzim i partea proteic. Deasemenea,
majoritatea flavoproteinelor conin metale cu rol de cofactori
adiionali, de aceea enzimele respective sunt cunoscute i sub numele
de metaloflavoproteine.
n reaciile de oxido-reducere catalizate de flavoproteinele
active, participantele directe la procesele redox sunt tocmai
coenzimele constituente, FMN sau FAD. Astfel, ciclul izoaloxazinic
poate suferi reduceri reversibile prin fixarea temporar la atomii de
azot din poziiile 1 i 10 a doi atomi de hidrogen preluai de la
substratele cu care intr n reacie i care se oxideaz.
R
H3C

NH

H3C

O
+ SH
2

O
R
H3C

H3C

N
N
H

H
N

O
NH

+ Sox

n acest fel, FMN sau FAD trec din formele lor oxidate n
formele reduse FMNH2 sau FADH2 . Formele oxidate sunt pigmeni
galbeni, fluoresceni, iar cele reduse apar ca leucoderivai. Aceste
flavoproteine pot fi utilizate n oxidarea unor substrate ca:
aminoacizi, amine, glucoza, etc.
Necesarul de vitamina B2 este de aproximativ 1,5 mg n 24 de
ore i este acoperit din alimente i prin aportul florei intestinale, astfel
c o caren de B2 este destul de rar ntlnit.
75

Luciana Dobjanschi

Carena
Cnd aportul de riboflavin este insuficient apar simptomele
avitaminozei i anume: ragade la colurile gurii, leziuni ale buzelor,
colorarea n rou intens a limbii, oboseal ocular, dilatarea pupilei,
sensibilitatea ochiului la lumin, modificri ale vascularizaiei la
nivelul corneei, tremurturi, tulburri digestive, dificulti la urinare.
Toate aceste simptome dispar prin includerea sistematic n
alimentaie a unor alimente bogate n vitamina B2 sau prin
administrarea de produse farmaceutice ce conin riboflavin.
Indicaii
Vitamina B2 este indicat n dermatologie, oftalmologie i
neurologie. Ea se administreaz n asociaie cu alte vitamine din
grupul B.
Vitamina PP
Vitamina PP (niacina, nicotinamida, vitamina B3 ) este
vitamina antipelagroas. Vitamina PP se sintetizeaz n plantele verzi
i la animale pornind de la triptofan. Ea se gsete n cantiti mari n:
carne, legume i cereale. Necesarul zilnic de vitamina PP este de cca
15 mg /zi.
Din punct de vedere structural vitamina PP este acidul
nicotinic.
COOH
N
acid nicotinic

CONH2
N
nicotinamida

Vitamina PP este constituientul a 2 nuleotide ce reprezint


formele sale biologic active: NAD+ i NADP+.

76

Biochimie farmaceutic

NH2
CONH2
O
+N

CH2

P O P
OH

N
O

CH2

OH

OH OH

OH O R

R: H
= NAD
PO3H2 = NADP
n celulele animale NAD+ este prezent n cantiti mult mai
mari dect NADP. Coninutul de NADP+ al esuturilor este
proporional cu activitatea lor biosintetic. NAD+ i NADP+ au rol de
coenzime i servesc unor enzime de oxido-reducere, numite
dehidrogenaze. Astfel NAD+ este considerat principalul colector de
hidrogen al substratelor.
AH2
A

H+

CONH2

CONH2

+N

( NAD+)

( NADH )

H+

BH2
77

Luciana Dobjanschi

Aceste reacii implic transferal reversibil de perechi de atomi


de H.
Rolul dehidrogenazelor piridinice:
transfer de H i electroni ntre substrate fie n reacii cuplate
aparinnd aceleai ci metabolice, fie ntre ci metabolice
diferite.
- NADH ofer hidrogen n etapa final a oxidrii celulare
reprezentat de lanul respirator mitochondrial
- NAD+ este principalul colector de H a substratelor. El
funcioneaz mai cu seam n cile metabolice oxidative.
Enzimele NAD dependente se mai numesc reductaze i servesc
n procese de hidroxilare ce privesc substane endogene i
xenobiotice.
Carena de vitamina PP provoac pelagra.
Timp ndelungat pelagra a fost considerat ca o form tipic
de caren PP. Ulterior s-a constatat c pelagra este o stare
policarenial cauzat prin absena aportului de viatamina PP i B6,
precum i de triptofan. Ea apare la populaii malnutrite, mai ales
consumatoare de porumb, din care lipsete triptofanul i proteinele cu
valoare biologic ridicat. Pelagra mai poate s apar i secundar n
cazul sindromului de malabsorbie, al sindromului carcinoid, cnd o
cantitate mare de triptofan este sustras biosintezei de acid nicotinic,
la alcoolici, n aminoacidurii (ca boala Hartnup) i sub tratament cu
izoniazid.
Pelagra se manifest printr-o erupie caracteristic pe pielea
expus soarelui, care devine atrofic, aspr i fisurat, prin inflamaia
mucoaselor digestive (stomatite, glosite, enterite). Simptomelor
dermice li se asociaz i tulburrile de tranzit, diaree apoas, uneori
sanguinolent, tulburri ale SNC, insomnie, confuzie, delir, com,
tulburri hematologice i de circulaie periferic.
Utilizarea n terapeutic
Preparatele cu vitamina PP corecteaz eficient o bun parte
din simptome, ncepnd cu cele digestive i mai trziu cu dermatita.
Pentru administrare se prefer nicotinamida. Acidul nicotinic poate s
produc fenomene adverse chiar i n doze terapeutice.
Administrarea cantitilor mai mari de niacin (pn la 100mg
/zi) nu determin fenomene de toxicitate. Cantitile excesive
provoac ns prurit, roirea pielii i, n general, modificri
circulatorii deoarece vitamina PP determin dilatarea lumenului
vaselor sanguine.
-

78

Biochimie farmaceutic

Vitamina B6
Vitamina B6 , numit i piridoxina sau adermina, apare sub
trei forme biologic active interconvertibile. Vitamina B6 se gsete n
principal n grne, ficat, drojdie, legume verzi i n cantiti mici n
lapte i ou.
Din punct de vedere structural are la baz nucleul piridinic,
substituit.
CH2OH
HO
H3C

CH2OH HO
N

H3C

piridoxina

CH2OH
N

piridoxal
CH2

HO
H3C

CHO

NH2
CH2OH

piridoxamina
Piridoxina i analogii si se absorb din intestine. n citoplasma
celulelor derivaii vitaminei B6 sunt fosforilai la gruparea alcoolic
din poziia 5, rezultnd piridoxal-fosfatul (PALPO).

79

Luciana Dobjanschi

CHO
HO

CHO
CH2OH

H3C

piridoxal kinaza

HO

O
CH2 P

OH

OH

ATP

H3C

ADP

PALPO

CH2NH2
HO

CH2 P

OH

OH
H3C

PMP

PALPO i PMP (piridoxaminfosfat) sunt formele active ale vitaminei


B6. Ele funcioneaz ca i coenzime n metabolismul aminoacizilor.
PALPO intervine n procesul de transaminare a aminoacizilor.
E CHO

H2O

R1 CH COOH

E CH

N CH R1

NH2

COOH
baza Schiff I

+H O
2

R1 C COOH

R1 C N

CH2 E

COOH
baza Schiff II

CH2 NH2

R2 C COOH + E

CH2NH2

H2O

R2 C COOH
N CH2 E

baza Schiff III


+H O
2

R2 CH COOH + E CHO
NH2

80

R2

CH COOH
N

CH E

baza Schiff IV

Biochimie farmaceutic

Deci, ntr- un proces de transaminare are loc transferul


funciei aminice de pe un aminoacid pe un alfa- cetoacid acceptor,
astfel c aminoacidul donor devine alfa- cetoacid, iar alfa-cetoacidul
acceptor devine aminoacid.. n cursul procesului catalitic are loc
transformarea reversibil a PLP n PMP.
Vitamina B6 este foarte bine rspndit n rndul produilor
alimentari, astfel c o alimentaie normal i aportul florei intestinale
acoper necesitile de vitamina B6 n condiii obinuite. Astfel strile
careniale de vitamina B6 de origine nutriional apar foarte rar la om.
Principalele manifestri ale carenei de vitamina B6 sunt dermatita
seboreic, polinevrita, apariia de convulsii (n special la sugari),
anemia. Anemia apare ca urmare a perturbrii etapelor iniiale din
biosinteza hemului.
Alte posibiliti de instalare a deficienei de vitamina B 6 sunt:
alcoolismul cronic, sarcina, insuficiena renal i unele boli genetice.
Deasemenea, unele medicamente, ca: izoniazida (HIN), cicloserina,
penicilamina, contraceptivele orale, administrate timp ndelungat pot
s induc carena de vitamina B6.
Necesarul de vitamina B6 este n jur de 2 mg/zi la adult.
Aportul excesiv poate determina efecte toxice pe sistemul nervos.
Acidul pantotenic (vitamina B5 )
Acidul pantotenic poart acest nume pentru c este foarte mult
rspndit n esuturile vegetale i animale. El este vitamin pentru
om, dar i factor de cretere pentru microorganisme.
Cele mai bogate surse de acid pantotenic sunt: drojdia de
bere, boabele cerealelor, glbenuul de ou, carnea. n organism acidul
pantotenic provine i prin sintetizarea sa de ctre flora bacterian
intestinal.
n structura acidului pantotenic intr acidul pantoic i alanina legate printr-o legtur amidic.
CH3
HO

CH2

CH

CO

NH

CH2

CH2

COOH

CH3 OH
acid pantoic

beta- alanina
81

Luciana Dobjanschi

Acid pantoic este absorbit uor n intestine, i apoi fosforilat


n poziia a acidului pantoic, urmnd astfel o cale metabolic prin
care este transformat n 2 cofactori enzimatici : fosfopantoteina i
coenzima A.
O

CH3

HO P

O CH2 C CH CO

OH

NH CH2 CH2 CO NH CH2 CH2 SH

CH3 OH

fosfopanteina
O
HO

CH3

O CH2 C

CH CO

NH CH2 CH2 CO NH CH2 CH2 SH

CH3 OH

NH2
O

O CH2

OH

N
N

N
N

O OH
O

OH

OH

Coenzima A
Dup cum se observ coenzima A are o structur nucleotidic
ce include fosfopantoteina de care este legat un rest adenilic
fosforilat n poziia 3 a ribozei. Fosfopantoteina servete ca grupare
prostetic transportoare de radicali acil, numit Acyl carrier
Protein (ACP). ACP face parte dintr-un system multienzimativ
implicat n procesul de biosintez a acizilor grai.
Coenzima A este deasemenea implicat n diverse reacii
enzimatice din diferite ci degradative sau biosintetice cum ar fi:
82

Biochimie farmaceutic

oxidarea acizilor grai, decarboxilarea oxidativ a alfa- cetoacizilor,


degradarea aminoacizilor, n procesul de iniiere a ciclului Krebs, n
biosinteza diferitelor lipide, precum i n procesele de acetilare a unor
compui endogeni sau xenobiotici ( de ex. acetilarea HIN).
Coenzima A se leag de resturile acil prin intermediul funciei
tiolice, formnd astfel tioesteri macroergici de tipul : R- CO- SCoA.
Formarea legturilor macroergice presupune consum de energie, care
poate s fie cedat de ATP.
Alimentele pot s ofere cantiti mari de acid pantotenic,
astfel nct nu a fost semnalat carena spontan. Deficiena specific
s-a putut induce experimental prin administrare de antagoniti.
Simptomele sunt variate: digestive, predispoziie la infecii, crampe
musculare, modificri cutanate, hipoglicemie, depresii nervoase.
Deficitul de pantotenat alturi de cel al vitaminei B6, acizilor grai
eseniali i de proteine contribuie la instalarea steatozei hepatice.
Acidul pantotenic este indicat n stri de policaren B.
Biotina (Vitamina H)
Biotina este un derivat imidazolic cu structur biciclic care
conine ca lan lateral un rest de acid valerianic la -biotina sau
izovalerianic la -biotina.
O
HN

NH

CH2 4 COOH

n natur, biotina se gsete liber sau combinat fie cu lisina


(biocitina), fie cu proteine. n intestin biotina este eliberat de
biotinaz pancreatic i absorbit printr-un proces activ Nadependent.
Biotina funcioneaz ca grupare prostetic pentru enzimele ce
catalizeaz reaciile de carboxilare, servind astfel drept cru pentru
CO2 activat.
83

Luciana Dobjanschi

Biotin- enzima + HCO


3 + AT P

CO2

biotin- enzima + ADP + aP

substrat

substrat carboxilat

Astfel, biotin-enzima ncarc gruparea carboxil pe biotin


rezultnd carboxi-biotin-enzima, care transport gruparea carboxil pe
un substrat acceptor.
Exemle de enzime biotin-dependente:
- piruvat carboxilaza, care catalizeaz carboxilarea piruvatului la
oxalil-acetat.
- acetil- CoA carboxilaza, care catalizeaz formarea malonil- CoA.
La om necesarul de biotin este de 150- 300 g pe zi i este n
mare msur asigurat de flora intestinal. Cantiti suficiente se
gsesc alimentaia carnat, glbenu, cereale i legume.
Carena provocat experimental se manifest prin dermatit
seboreic, anorexie, oboseal, insomnii, parestezii. Stri careniale se
cunosc la sugarii cu deficit genetic privind enzima responsabil de
ataarea biotinei la componenta carboxilazic. Semnele clinice
sunt:cetoza metabolic, cu creterea lactocidemiei i o eliminare
anormal de acid propionic n urin.
n terapie, biotina este de obicei inclus n preparatele
polivitaminice.
Acidul folic (folacina)
La fel ca i alte vitamine din complexul B, acidul folic este
factor de cretere pentru microorganisme. Denumirea de acid folic se
datoreaz faptului c prima substan descoperit din acest grup de
vitamine a fost izolat din frunze de spanac i s-a dovedit c are
caracter acid.
84

Biochimie farmaceutic

Din punct de vedere structural acidul folic conine n structura sa


acid pteroic i un lan -glutamil peptidic.
COOH

OH
N

N
H2N

CH2 NH

CO NH CH
CH2
CH2
CO

COOH
NH CH
CH2
CH2
COOH

Acizii folici pot s fie:


- acizi pteroil monoglutamic
- acizi pteroil poliglutamici
La plantele exist sub form de complex heptaglutamic, iar n ficat
predomin conjugatul pentaglutamic. Spre deosebire de plante i
microorganisme, organismul animal este incapabil s sintetizeze acid
pteroilmonoglutamic.
n intestine acizii pteroil poliglutamici sunt hidrolizai cu enzime
specifice rezultnd derivatul monoglutamic, care se absorbe n
circulaia mezenteric. n celulele intestinale acidul folic este n mare
parte redus la THF (FH4). Aproximativ 2/3 din folatul absorbit se
leag de proteinele plasmatice.
Hidrogenarea acidului folic sub aciunea folat-reductazei NADPHdependente are loc n 2 etape, intermediar formndu-se DHF.

85

Luciana Dobjanschi
OH

OH

N
H2N

CH2 NH R

N
N

folat reductaza

NADPH + H+

NADP +

N
H2N

CH2 NH R

folat reductaza

NADPH + H+ NADP +

H
OH

N
H2N

DHF
CH2 NH R
H

H
THF

THF reprezint metabolitul activ i servete drept coenzim n


reaciile de transfer sau interconversiunea gruprilor cu un C, numite
i fragmente C1 active. Donorii de grupri C1 active sunt: serina,
histidina, acidul formic.
Acidul folic particip la biosinteza nucleotidelor i a acizilor
nucleici, care au un rol important n biosinteza proteinelor.
Deasemenea acizii folici controleaz procesul de cretere i
hematopoeza.
Organismul uman este dependent de aportul de folat furnizat de
legumele cu frunze i carne. Acidul folic nu rezist la temperatura de
preparare culinar. Necesarul zilnic este de 400 g, care crete n
sarcin i alptare, n sindroame de malabsorbie intestinal la alcoolici,
la bolnavii cu anemie hemolitic sau cancer cu evoluie rapid.
Carena poate fi indus medicamentos prin administrare de
antifolice sau la tratament ndelungat cu: fenobarbital, fenitoina,
primidona, care cresc nevoia de folat.
Deficiena folic acut cuprinde manifestri digestive i dermice.
Carena cronic se caracterizeaz prin tulburri de cretere, dereglri
de hematopeoz ce conduc la anemia megaloblastic, leucopenie,
trombocitopenie.
Acidul folic se administreaz ca biostimulator general, ca
factor antianemic n diferite forme de anemie, mai ales macrocitar,
n leucopenia secundar, chimio- sau radioterapia bolii maligne.
Acidul folic este contraindicat persoanelor peste 60 de ani deoarece
poate stimula un process neoplazic latent. Uneori acidul folic se
asociaz cu vitamina B12 sau cu preparate pe baz de fier.

86

Biochimie farmaceutic

Antifolice ( Antagoniti folici)


Antifolicele sunt substane care se aseamn structural cu
acidul folc i sunt inhibitori ai unor enzime implicate n biosintez.
Multe antifolice i-au gsit aplicabilitate terapeutic.
Exemple:
- Sulfamidele i sulfonele sunt utilizate ca antibacteriene i
interfereaz inserarea PAB n structura acidului folic, acionnd
asupra dihidropteroat sintetazei, care catalizeaz etapa
intermediar n sinteza de folat.
- Trimetoprimul este inhibitor al folat reductazei
- Metotrexatul este folosit n leucemie i psoroazis.
n tratamentul ndelungat cu antifolice apare o caren folic.
Carena poate fi compensat prin administrare de acid folinic, care se
administreaz oral sau parenteral sub form de folinat de Ca.
Vitamina B12
Vitamina B12 sau ciancobalamina ndeplinete rol de vitamin
pentru om i este factor de cretere pentru microorganisme. Poart
indicele 12 deoarece este al 12-lea compus izolat din complexul B.
Din punct de vedere structural vitamina B 12 are o structur foarte
complex. Asfel, ea conine o parte intern,reprezentat de un schelet
tetrapirolic numit corrina. Nucleul corinic din partea central difer
de cel al hemului prin urmtoarele elemente:
- n centru se afl ionul Co+
- sistemul tetrapirolic este mai saturat
- dou nuclee pirolice sunt unite direct ntre ele
- are un numr mai mare de substituieni, majoritatea lor cu
grupri amidice.
Deasemenea vitamina B12 mai conine i o parte extern reprezentat
de un nucleotid cu riboz. El este unit prin dou legturi cu regiunea
central: una direct ntre unul din atomii de N ai benzimidazolului i
ionul monovalent de cobalt, iar a doua legtur se realizeaz prin
intermediul restului de acid fosforic al nucleotidului cu riboz i o
caten ataat la unul din cele patru nuclee pirolice.

87

Luciana Dobjanschi

R
R: CN- , OH, CH3
N
N

Co+

N
N

nucleotid
Vitamina B12 este sintetizat exclusiv de ctre bacterii anaerobe, dar
se gsete i n esuturile animale, mai ales n ficat. Absorbia ei este
mediat de receptori specifici din ileum, dup prealabila cuplare cu
un factor intrinsec (CASTLE). Acesta este o glicoprotein cu
specificitate absolut pentru vitamina B12, secretat de celulele
parietale din mucoasa gastric. Dup desprindere de factorul intrinsic
cobalamina trece n circulaia portal, unde se leag de o protein
plasmatic transportoare, numit trancobalamina II.
n esuturi se elibereaz ca hidroxicobalamina, fiind apoi
transformat n metilcobalamin.
Ficatul stocheaz cantiti de ordinul mg, pentru lungi perioade,
graie legrii de o alt protein, numit transcobalamina I.
Funciile biochimice ale vitaminei B12
Enzimele cobalaminice funcioneaz n metabolimul
gruprilor cu un C, fiind ntlnite n 3 tipuri de reacii:
1. reacii de rearanjament intramolecular
2. reacii de metilare
3. reacii de reducere a ribonucleotidelor la dezoxiribonucleotide.
n esutul mamiferelor se cunosc dou procese dependente de
cobalamine:
- izomerizarea metal-malonil CoA la succinil CoA

88

Biochimie farmaceutic

COOH
CH2

CH

CO

mutaza
SCoA

CH2

CH2

COOH

CO SCoA

transformarea homocisteinei n metionin


CH2

N5metil THF

HO

Cbl

CH2
CH

NH2

CH3
metionina

COOH
THF

Me

Cbl

CH2

SH

CH2
CH

homocisteina
NH2

COOH
Deficitul de cobalamin se repercut negativ asupra sintezei de
metionin, cu consecine privind biosinteza proteic i regenerarea
de THF.
Vitamina B12 este esenial alturi de folat, pentru creterea i
maturarea celulelor, mai cu seam a celor cu ritm intens de
proliferare. Deasemenea cobalamina este necesar pentru funcia
mduvei hematogene, a aparatului digestiv i a sistemului nervos.
Prin participarea la sistemul metioninei este un factor lipotrop,
protejnd ficatul de ncrcarea cu grsimi.
Carena cobalaminic apare rar, deoarece alimentaia carnal
ofer necesarul (cca 10 mg/zi), existnd avantajul termostabilitii.
Cauza principal este absena factorului intrinsec datorit
incapacitii mucoasei gastrice de a-l produce n afeciuni gastrice,
rezecii sau constituional prin defect genetic de sintez, ori prin
mecanism autoimun.
Carena este rar provocat prin lips de aport, n regim exclusiv
vegetarian prelungit, n sindrom de malabsorbie intestinal, dup
89

Luciana Dobjanschi

tratament cu neomicin, metformin, antiepileptice, n disbioz


intestinal.
Maladia produs n carena de vitamina B12 este anemia pernicioas
(anemia Biermer). Clinic aceasta se manifest prin: paloare, astenie
(sindrom anemic), inapeten, grea, emez, balonri, tulburri de
transit (sindrom de transit), neuropatie.
Anemia biermerian face parte dintre anemiile megaloblastice,
majoritatea cauzate prin deficiena vitaminei B12 i/sau a acidului
folic, ce determin perturbri n sinteza acizilor nucleici, implicnd
suferina tuturor sistemelor celulare. Apare astfel hematopoeza
ineficient cu deviaie megaloblastic, consecina fiind producerea
insuficient a elementelor liniilor celulare ale sngelui i n special a
seriei roii. Astfel n sngele periferic se evideniaz: pancitopenia,
megalocitoza, magaloblastoza, celule cu alte modificri morfologice,
fragile. Diagnosticul diferenial n anemia megaloblastic se face prin
dozarea cobalaminei n plasm, prin testarea absorbiei intestinale,
administrarea de vitamina B12 marcat i msurarea radioactivitii n
urin.
n anemia pernicioas tratamentul ncepe cu doze de atac de
vitamina B12, parenteral, care pe msura ameliorrii simptomelor se
reduce la doze de ntreinere administrate cu intermiten toat viaa.
Alte indicaii ale viatminei B12 sunt n : neuropatii, ciroz, hepatite,
stri de malnutriie.
n terapie se folosesc ciancobalamina i hidroxicobalamina.
Vitamina C
Vitamina C poart i numele de acid ascorbic deoarece este o
substan cu caracter acid, iar carena sa n organism provoac
scorbut. Din punct de vedere structural vitamina C este numit i
lactona acidului 2,3-dienol- L- gulonic. Structura sa este extrem de
labil prin expunere la aer, iar n soluii alcaline trece n acid
dehidroascorbic. Ambele forme sunt active i apar n esuturi.

90

Biochimie farmaceutic

C
HO

HO

HO

HO

CH2OH
acid L ascorbic

CH2OH
acid L dehidroascorbic

Transformarea acidului L-ascorbic n acid L-dehidroascorbic


poate fi efectuat de L-ascorbat oxidaza, enzim ce conine Cu.
Vitamina C este una din cele mai rspndite vitamine, fiind
sintetizat de majoritatea speciilor vegetale i animale din glucoz.
Excepie sunt primatele, cobaiul i alte cteva specii, posesori ai unor
enzimopatii genetice, fiind incapabili s efectueze etapa final din
lanul metabolic de biosintez, adic conversia L-gulono-lactonei n
acid ascorbic.
Acizii ascorbic i dehidroascorbic se absorb aproape n totalitate
n intestin i se distribuie extra- i intracelular. La un aport adecvat
rezervele satisfac necesitile cteva luni consecutive lipsei de
alimentaie. Dozele foarte mari de vitamina C satureaz depozitele i
depete pragul renal de eliminare. Deci dozele mari de vitamina C
sunt excretate urinar, astfel c administrarea excesiv este inutil.
n esuturi vitamina C este transformat n mic msur prin
oxidare.

91

Luciana Dobjanschi
O
C
HO
HO
H

HO C

H
H

CH2OH
acid L ascorbic

HO

C OH

OH

HO

C
C
C

H
CH2OH

CH2OH
acid L dehidroascorbic acid 2,3 diceto gulonic

COOH

Ca+2

COOH
O

oxalat de Ca

OH

OH

HO

CH2OH
acid L treonic

Vitamina C se elimin urinar, n proporie mare netransformat,


cantitatea de acid ascorbic excretat normal fiind pn la 1%.
Oxalatul de calciu poate ns precipita n cile renale cauznd litiaza
oxalic.
Rolul vitaminei C
Acidul ascorbic are un potenial reductor destul de mare, fiind
astfel capabil s reduc oxigenul molecular, nitraii, citocromii a i c,
methemoglobina.
Cuplul ascorbat-dehidroascorbat funcioneaz ca sistem redox activ
ntr-o serie de procese biochimice.
Exemplu:
- n reaciile de hidroxilare din: - metabolismul aminoacizilor
aromatici
o metabolismul prolinei, lisinei
o biosinteza noradrenalnei
o biotransformarea medicamentelor
Dozele mari de vitamina C stimuleaz absorbia Fe,
reducndu-l la ion feros, forma favorabil absorbiei, iar
concentraiile fiziologice cresc ncorporarea Fe n feritina. Se
consider c acidul ascorbic este necesar procesului de cretere,
pentru integritatea tegumentelor, n buna funcionare a aparatului
cardiovascular. De asemenea i se atribuie un rol n procesul de
aprare imunitar, n mrirea rezistenei la efort, n hematopeoz.
Necesarul de vitamina C este de 1mg/kgcorp/zi la adultul
sntos i este asigurat n primul rnd de vegetalele proaspete, crude.
Cerinele sunt crescute n sarcin, alptare, frig, condiii de
munc grea, boli infecioase, cancer i dependent de vrst.
Carena este reprezentat de scorbut. Pot s apar stri de
subcaren, n special la sfritul iernii. Se manifest prin: tendina la
92

Biochimie farmaceutic

hemoragii, n special gingivale, echimoze, hiperkeratoza folicular,


dureri articulare (osteoporoza), anorexie, tulburri de tranzit
intestinal, anemie, astenie.
Acidul ascorbic este necesar formelor active ale unor enzime
(dioxigenaze cu enzime), acionnd probabil prin meninerea
metalului la valena sa inferioar.
Indicaiile vitaminei C sunt profilactice i de corectare a
simptomelor careniale, n boli infecioase, n pediatrie, n
methemoglobinemie, astenie, asociat preparatelor cu Fe.
Nu se cunosc efecte toxice, dar n caz de supradozare poate fi
duntoare la subiecii cu predispoziie la oxaloz sau deranjeaz
absorbia unor vitamine ca: B12 sau a altor medicamente simultan
ingerate.

93

Luciana Dobjanschi

VI. Enzime
Enzimele sunt proteine ce posed o funcie nalt specializat i
anume aceea de biocataliz i se deosebesc de catalizatorii din lumea
nevie prin cteva proprieti care le definesc. Enzimele se
caracterizeaz prin urmtoarele proprieti:
- capacitatea catalitic mare, eficiena catalitic crete cu un factor
de 106 1012 fa de reacia necatalizat.
- Specificitatea superioar de reacie elimin formarea de produi
secundari
- Activitile catalitice enzimatice sunt reglate prin mecanisme
diferite, care privesc fie aciunea lor, fie cantitatea de enzim
sintetizat. Controlul enzimatic are semnificaie major pentru
reglarea metabolismului celular.
- Enzimele acioneaz n condiii foarte blnde i anume la
temperatura celulelor vii, la pH aproape neutru i la presiune
atmosferic.
Nomenclatur i clasificare
Mult vreme enzimele au fost denumite prin adugarea
sufixului aza la numele substratului.
Ex. Amilaza, ureeza, alcool dehidrogenaza.
Unele denumiri ns nu includeau nici substratul, nici reacia
catalizat.
Ex. Tripsina, pepsina, catalaza.
Datorit faptului c numrul de enzime este n continu
cretere, nomenclatura veche crea confuzii, astfel c s-a impus
introducerea unei terminologii unitare i a unei clasificri adecvate.
n 1961, Comisia de Enzime a Uniunii Internaionale de
Biochimie, adopt o claisficare i o nomenclatur sistematic, bazat
pe natura reaciei chimice catalizate.
Astfel, enzimele au fost clasificate n 6 clase, fiecare cuprinznd un
numr de subclase i, respectiv subsubclase.
1. Oxidoreductaze enzime ce catalizeaz reaciile de
oxidoreducere.
2. Transferaze enzime ce catalizeaz reaciile de transfer de
grupri funcionale.
3. Hidrolaze enzime ce catalizeaz reaciile de hidroliz.
4. Liaze enzime ce catalizeaz reaciile de descompunere a
substratului prin alte mecanisme dect cele de oxidare i
hidroliz.
94

Biochimie farmaceutic

5. Izomeraze enzime ce catalizeaz reacii de interconversiune a


izomerilor.
6. Ligaze enzime ce catalizeaz reacii de formare a legturii C-O,
C-C, C-S, C-N, cuplat cu scindarea unui compus macroergic
(ATP).
Pentru a defini o enzim, fiecruia i se atribuie un numr
sistematic format din numele substratelor, urmat de cuvntul ce
indic tipul de reacie catalizat, la care adaug sufixul aza.
Deasemenea, fiecrei enzime i se atribuie un cod determinat de
poziia pe care enzima o ocup n sistemul zecimal.
Exemplu: Acest numr de clasificare este alctuit din iniialele EC
(Comisia de enzime) i 4 cifre. Prima cifr indic clasa din care face
parte enzima, a doua indic subclasa, determinat de felul gruprii
implicate n reacie, a treia cifr reprezint subsubclasa , adic natura
particular a substratelor din grupul respectiv, iar a patra cifr
reprezint poziia ocupat de enzim n subsubclas.
- alcool dehidrogenaza: E.C. 1.1.1.1.
- glucozooxidaza: E.C. 1.1.3.4.
Structura enzimelor
n cea mai mare parte, enzimele sunt proteine globulare.
Excepie face ribonucleaza P.
O mic proporie de enzime sunt proteine simple (pepsina,
chimotripsina, lizozim), iar celelalte sunt heteroproteine
(metaloenzime, dehidrogenaze piridinice). Unele enzime sunt
alctuite sunt alctuite dintr-un singur lan polipeptidic
(ribonucleaza), altele din mai multe lanuri identice sau diferite.
Masa molecular a enzimelor este extrem de variabil datorit
lungimii lanurilor polipeptidicre componente, ct i datorit
asocierii unui numr diferit de subuniti, ca n cazul enzimelor
oligomer.
Pe lng aceste aspecte legate de structur, la enzime mai apar
anumite caracteristici specifice lor:
- identificarea centrului catalitic, i, la enzimele allosterice i a
centrilor allosterici.
- Cunoaterea cofactorilor enzimatici ct i locul lor n ansamblul
structural enzimatic.
Cofactorii enzimatici sunt componente micromoleculare
indispensabile activitii unui numr mare de enzime.
95

Luciana Dobjanschi

Cofactorul poate s fie un ion metalic sau o molecul organic


specific, uneori sunt cerui ambii i foarte rar cofactorul este un
anion anorganic.
1. Metalele n cataliza enzimatic
Un numr mare de enzime cer pentru a-i manifesta
activitatea ioni metalici.Zn+2 , Mn+2 , Mo+2 , Co+3 , Fe+3 , Cu+2 , Mg+2 ,
K+ , Na+ , Ca+2 . Unele enzime care conin o cantitate definit de ion
metalic funcional, fiind strns legat n structura lor se numesc
metalo-enzime, iar altele care leag slab metalu se numesc enzime
metalo-activate.
Exemple:
- anhidraza carbonic: Zn+2
- enzimele heminice: Fe+3
- piruvat kinaza : Mg+2 , K+
2.Cofactorii de natur organic sunt sisteme conjugate n care
mobilitatea electronic este foarte mare, ceea ce explic puterea lor
catalitic. Cofactorii slab legai de enzim sau ataai temporar se
numesc coenzime.
Exemplu: acid lipoic, coenzima Q, biopterinele, NAD+, NADP+,
FAD, CoA.
Centrul activ al enzimei ( centrul catalitic)
Centrul activ al enzimei este o zon restrns din structura
enzimei responsabil direct de funcia ei catalitic, aceea de legare i
transformare a substratului. Aceast regiune reprezint la majoritatea
enzimelor cca 5% din total.
Ca entitate tridimensional centrul activ poate cuprinde o poriune
sau mai multe din acelai lan, ori din lanuri diferite, apropiate
spaial.
Exemplu:
Din centrul activ al ribonucleazei fac parte: His12, His119,
Lys41. Aceti aminoacizi dei sunt situai la distan n structura
liniar, sunt apropiai n structura teriar, datorit plierii lanului.
Centrii activi conin resturi de aminoacizi i eventual cofactori cu rol
de a recunoate i lega substratul sau care particip n transformarea
lor chimic, uneori aceti aminoacizi
ndeplinind ambele funcii. Ali aminoacizi aflai la distane variabile
de centrul activ contribuie la stabilitatea structurii proteice, sunt
resturi structurale, considerate alturi de resturile catalitice i de
legare ca eseniale pentru activitatea enzimei.
96

Biochimie farmaceutic

De fapt, n procesul catalitic particip indirect ntreaga


molecul. Activitatea este condiionat de existena conformaiei
native a structurii enzimatice.
Aminoacizii care nu particip n nici un fel la actul catalitic sunt
numii resturi neeseniale, ele conferind moleculei anumite
proprieti fizico- chimice.
Mecanismul de aciune al enzimelor
Procesul catalitic const n formarea complexului cu
substratul sau substratele, ceea ce determin o scdere a energiei
strii de tranziie, transformarea chimic i eliberarea produilor. Se
cunosc urmtoarele mecanisme de aciune ale enzimelor:
1. Cataliza prin distorsie implic interaciuni care deformeaz
legturile i unghiurile acestora n molecula substratului. n
unele cazuri, contorsia, poate fi consecina atarii covalente a
substratului de enzim.
2. Cataliza acido-bazic se datoreaz radicalilor aminoacizilor
din centrul activ care pot funciona ca acizi sau baze Bronsted
sau ca acizi sau baze Lewis.
3. Cataliza prin orientarea reactanilor. Enzima are rolul de a
dispune substratele ntr-o poziie favorabil reaciei.
Specificitatea catalizei enzimatice
Specificitatea unei enzime reprezint capacitatea unei enzime
de a selecta dintr-un numr de compui substratul particular i a-l
transforma printr-o reacie de un anume tip. Se distinge :
specificitatea de aciune ( de reacie), i specificitatea de substrat.
Specificitatea de recie.
Spre deosebire de catalizatorii neproteici, care accelereaz o
varietate de reacii, o enzim catalizeaz, de regul, un singur tip de
reacie.
Exemplu:
- o reacie de hidroliz
- o reacie redox
- formarea unei legturi.
Exist, ns unele proteine, puine la numr, cu activiti
polienzimatice. n acest caz proteina posed centri catalitici
independeni, responsabili de reacii diferite ce decurg prin mecanism
deosebit.
97

Luciana Dobjanschi

Specificitatea de substrat reprezint calitatea enzimei de a


forma complexul enzim-substrat ca prima etap obligatorie n
transformarea acestuia.
Dac enzima acioneaz asupra unei varieti de compui avem de-a
face cu o specificitate relativ (de grup), n care caz enzima are
capacitatea de a transforma un numr de substrate nrudite chimic.
Exemplu:
- hidrolaze: - esteraze
- peptidaze
- glicozidaze
- proteaze: - exopeptidaze
- endopeptidaze.
Specificitatea relativ are importan n biochimia analitic,
deoarece permite introducerea de substrate artificiale la determinri
enzimatice.
Se cunosc i enzime cu specificitate absolut. Acestea sunt
inactive fa de analogii structurali ai substratului, ceea ce presupune
recunoaterea integral a unei molecule, precum i o rigiditate a
centrului activ, n conformitate cu modelul cheie- broasc.
Exemplu:
- ureaza
- arginaza
- anhidraza carbonic
- fructozo-1,6-difosfataza.
Stereospecificitatea enzimelor.
Stereospecificitatea enzimelor este un caz de specificitate
absolut. Exist un numr mare de substrate care se caracterizeaz
prin asimetrie structural, iar n procesele metabolice adeseori se
ntlnete unul din izomerii posibili.
Exemplu:
- L i D aminoacid oxidazele sunt specifice pentru
stereoizomerii respectivi.
- Alte enzime recunosc numai izomerii geometrici: succinat
dehidrogenaza, fumaraza.

98

Biochimie farmaceutic

Factorii care influeneaz activitatea enzimatic


n reaciile enzimatice viteza de reacie se msoar fie prin
cantitatea de substrat transformat, fie prin cantitatea de produs
format, exprimat n molaritate, iar timpul se exprim n minute.
Viteza unei reacii enzimatice poate fi influenat de un numr de
factori, dintre care amintim: concentraia de enzim, concentraia de
substrat, temperatura, pH, inhibitori.
1. Influena concentraiei de enzim
Viteza unei reacii enzimatice arat o dependen liniar de
concentraia enzimei, n condiiile n care concentraia de substrat
este fix.

[ E]
Dependena vitezei de reacie de concentraia de enzim
Abaterile de la liniaritate se datoreaz erorilor tehnice sau
existenei unui inhibitor ce acioneaz numai la o anumit
concentraie.

99

Luciana Dobjanschi

2. Influena concentraiei de substrat.teoria Michaelis-Menten


De exemplu s presupunem urmtoarea reacie catalizat de
enzim:
E+S

k1
k2

ES

k3

E+P

Pentru enzimele michaeliene, dependena vitezei de reacie de


concentraia de substrat este descris ca o hiperbol, la o
concentraie de enzim constant.
Astfel viteza de reacie crete la nceput rapid i liniar, dup care
dependena nu mai este liniar, iar la o anumit concentraie de
substrat curba tinde spre o valoare maxim.
V
Vmax

Vm/2

Km

[ S]

V0 = Vmax = [S] / [S] + Km


V - viteza iniial de reacie
Vmax capacitatea catalitic maxim a enzimei viteza maxim
realizat
[ S ] concentraia de substrat
Km Constanta lui Michaelis Menten, reprezint concentraia
de de substrat pentru care viteza de reacie atinge jumtatea
valorii maxime.
10

Biochimie farmaceutic

Dozrile de activitate enzimatic se efectueaz la concentraii


mari, saturante de substrat pentru a asigura o cinetic de ordinul
zero.
Ecuaia Michaelis-Menten este fundamental n studiile de
cinetic enzimatic, permind analiza cantitativ a majoritii
reaciilor enzimatice. Pe lng utilitatea la interpretarea
mecanismului reaciilor enzimatice i a aciunii inhibitorilor, cei
doi parametri cinetici ( Vmax, Km ) au importan la
determinarea de enzime, inclusiv n laboratorul clinic.
3. Inhibitorii enzimelor
Inhibiia reprezint scderea parial sau pierderea activitii
enzimatice ca urmare a legrii de enzim a unui compus numit
inhibitor. Inhibiia poate s fie un proces reversibil sau
ireversibil.
a. Inhibiia reversibil
n cazul inhibiiei reversibile inhibitorul se combin cu
enzima sau cu complexul ES, iar prin ndeprtarea inhibitorului
activitatea enzimei se restabilete.
E+I

k1

EI

k2
ES + I

Ki =

Ki

[ E] [ I]
[ EI]

ESI

Eficiena unui inhibitor se msoar prin Ki. Cu ct valoarea


Ki este mai mic cu att inhibitorul este mai efficient.
Inhibiia reversibil este de dou tipuri competitiv i necompetitiv.
Inhibiia competitiv
n cazul inhibiiei competitive inhibitorul intr n competiie cu
substratul pentru acelai loc de legare la situsul activ al enzimei.

E+S

ES

E+P

E+I

EI

E+P

Ki =

[E][I]
[ EI]

10

Luciana Dobjanschi

n cazul inhibiiei competitive inhibitorul este un analog structural al


substratului.
Exemplu:

CH2

COOH

CH2

COOH

HC

+ FAD
-

FADH2

HOOC

COOH

CH

Enzima succinat dehidrogenaza, care catalizeaz aceast reacie,


este inhibat competitiv de analogi structurali, ca de exemplu: acid
malonic, acid oxalilacetic, acid oxalic.
Aceti acizi dicarboxilici se pot lega de centrul activ al enzimei la fel
ca i succinatul.
Inhibiia necompetitiv are loc prin legarea inhibitorului la
un loc diferit de centrul activ al enzimei, rezultnd un complex ternar
ESI. Inhibitorul poate interaciona fie cu enzima liber, fie cu
complexul ES.

E+S
+
I

E+P

ES
+
I
Ki

Ki
EI + S

V 'max =

V max
1 + [I]/Ki

ESI

Pe de alt parte substratul se poate lega i de complexul EI. Spre


deosebire de inhibiia competitiv efectul inhibitorului necompetitiv
nu este influenat de creterea concentraiei de substrat.

10

Biochimie farmaceutic

1/v
Inhibiie competitiv
inhibiie necompetitiv
1/Vm

Reacie fr
inhibitor

1/Vm

-1/Km

-1/Km

1/S

Un alt tip de inhibiie reversibil este inhibiia necompetitiv


(incompetitiv ), care are loc atunci cnd se formeaz complexul
ternar ESI, ca urmare a interaciunii I cu complexul ES, cnd are loc
scderea valorii Km i Vmax.
b. Inhibiia ireversibil
Inhibiia ireversibil este consecina legrii covalente a
inhibitorului de enzim sau de complexul ES, el neputnd fi
ndeprtat.
E+P
ES
E+S
+
I

+
I

EI

ESI
inactivi

10

Luciana Dobjanschi

Capacitatea inhibitorului ireversibil este msurat printr-o


constant de vitez care exprim fraciunea de enzim inhibat ntr-o
perioad definit de timp la o anumit concentraie de inhibitor.
Inhibitorii ireversibili sunt toxici, fiind numii i otrvuri
enzimatice.
Exemplu: metalele grele, agenii oxidani, organofosforicele,
compui ai arseniului.
Semnificaia i importana practic a inhibiiei enzimatice
1. Inhibiia enzimatic este o modalitate important de control
metabolic.
2. Unele toxice i exercit aciunea datorit calitii lor de
inhibitori enzimatici ireversibili.
Exemplu: insecticidele
3. Inhibitorii enzimatici au aplicabilitate n toxicologia
clinic, servind ca antidoturi.
Exemplu: etanolul este folosit ca antidot n intoxicaiile cu
metanol i etilenglicol.
4. Utilizarea inhibitorilor n enzimologie pentru identificarea
mecanismului de aciune i a centrilor activi.
5. Inhibiia enzimatic este un instrument terapeutic
polivalent.
Exemplu:
agenii
chimioterapici,
antiinflamatoarele
nesteroidiene.
4. Influena temperaturii asupra activitii enzimatice
Viteza reaciei enzimatice crete odat cu temperatura, n
intervalul n care enzima respectiv este stabil, datorit creterii
energiei cinetice a reactanilor. n multe procese biologice o cretere a
temperaturii cu 100 C duce la dublarea sau triplarea vitezei de reacie.
Temperatura optim pentru majoritatea enzimelor este
temperatura celulelor n care acestea se gsesc. Peste temperatura de
50 600 C majoritatea enzimelor sunt inactive. Excepie fac unele
microorganisme termofile ale cror enzime sunt active i la 800C.

10

Biochimie farmaceutic

5. Efectul pH-ului asupra activitii enzimatice.


Enzimele sunt stabile ntr-un domeniu relativ ngust de pH,
domeniu n care se gsete o valoare, numit pH optim, pentru care
activitatea unei enzime este maxim.
Majoritatea enzimelor au pH-ul optim n jurul pH-ului fiziologic
de 7,4.
Excepii fac enzimele digestive pentru care pH-ul optim este cel
acid, monoaminooxidazele din membrana mitocondrial extern care
au pH optim aproximativ 10. Exist unele enzime a cror activitate
este independent de pH ( pepsina ).
Reglarea activitii enzimatice
Reglarea activitii enzimatice este o component esenial a
procesului de control i de coordonare a metabolismului, n direct
legtur cu meninerea homeostaziei.
Fluxul reaciei enzimatice poate fi influenat prin 3 mecanisme
generale:
- variaii n cantitatea absolut de enzim
- modificarea fondului metabolic celular de substrate i cofactori,
condiionate i de transportul prin membrane
- schimbri n eficiena catalitic a enzimelor.
Enzimele allosterice
Enzimele allosterice sunt alctuite din subuniti care
interacioneaz n cursul procesului catalitic, fenomen ce se numete
cooperativitate.
Activitatea acestor enzime este controlat prin legarea
necovalent a unor metabolii specifici n locuri distincte de centrul
activ, locuri ce se numesc centri alosterici.
Deci, proteinele (enzimele) allosterice sunt oligomeri alctuii
din monomeri identici sau nu, aflai n numr par. Fiecare monomer
posed un centru activ i locuri separate i diferite de situsul activ
numite centri alosterici.
O enzim allosteric catalizeaz de obicei o etap iniial din
secvena multienzimatic a unei ci metabolice. Reaciile enzimelor
allosterice sunt ireversibile sau cu grad redus de reversibilitate,
reprezennd astfel puncte de control pentru ntregul lan de reacii.
Astfel, cnd produsul final al cii metabolice se acumuleaz peste
concentaia necesar, el funcioneaz ca modulator negativ al
10

Luciana Dobjanschi

enzimei. Acest efect se numete inhibiie prin produs final,


inhibiie feedback sau retroinhibiie.
Exemplu:

E1

S1

E2

S2

P inhiba enzima
-

aspartat transcarbamilaza, enzim ce catalizeaz prima reacie


din procesul de sintez a ribonucleotidelor pirimidinice.

Importana biomedical i farmaceutic


Enzimologia aduce un aport important att n problemele de
diagnostic ct i n ceea ce privete terapia cu enzime.
I.
Diagnosticul enzimatic
Diagnosticul enzimatic se bazeaz pe informaiile furnizate
de dozarea enzimelor din ser. Determinrile enzimatice din
hematii i leucocite, precum i din material bioptic sunt mai
puin abordate. Se mai urmresc unele enzime i n urin, suc
gastric i suc duodenal.
n funcie de locul de producere i modul n care ajung n
snge, enzimele serice se clasific astfel:
1. Enzime secretate activ; se produc n ficat i se
elibereaz n plasm, unde ndeplinesc un anumit rol
fiziologic.
Exemplu: lipoproteinlipaza, pseudocolinesteraza, lecitin
colesterol- acil- transferaza.
2. Enzime ale secreiilor exocrine. Acestea se produc n
diferite organe i difuzeaz pasiv n plasm.
Exemplu: amilaza salivar i pancreatic, lipaza pancreatic,
fosfataza acid prostatic, fosfataza alcalin.
3. Enzime celulare. Aceste enzime se gsesc n plasm n
cantiti de sute de ori mai mici dect n esuturi.
10

Biochimie farmaceutic

Exemplu:
lactat
dehidrogenaza,
creatin
kinaza,
transaminazele.
4. Enzimele inductibile, sintetizate n exces ca rspuns la
un agent imductor, i ca atare mbogesc plasma.
Exemplu: - glutamil transpeptidaza, enzimele de hidroxilare,
glicuronozil-transferaza.
Izoenzimele
Izoenzimele sunt enzime ce ndeplinesc acelai rol catalitic,
dar difer prin proprietile structurale, fizice, chimice,
cinetice i imunologice.
Din punct de vedere structural sunt oligomeri alctuii din
subuniti identice sau diferite.
Exemplu:
1. lactat dehidrogenaza prezint 5 izoenzime LDH, care se
deosebesc prin proporia n care sunt distribuite. Cele 5
izoenzime rezult prin combinarea difert a 2 tipuri de
lanuri, notate cu H (subunitate de origine miocardic) i M
(subunitate ce provine din muchi).
LDH1 : H4
LDH2 : H 3M
LDH3: H 2M2
LDH4 : HM3
LDH5 : M4
Aceste enzime se dozeaz n studiul leziunii de organ i
anume n boli cu citoliz.
2. Creatin kinaza prezint 3 izoenzime, i anume:
CK1 : BB
CK2. BM
CK3 : MM
Aceste izoenzime sunt dozate n infarctul miocardic
II.

Terapia cu enzime.

Pentru multe medicamente att aciunea principal ct i


efectele secundare sunt n legtur direct cu diferite activiti
enzimatice.
Enzimele sunt ageni terapeutici unici ce produc efecte
importante i specifice.
Enzimele sunt introduse n terapie din aproximativ 1930.
Medicamentul enzimatic apare n diferite forme solide,
soluii buvabile, soluii injectabile precum i preparate destinate
uzului local.
10

Luciana Dobjanschi

Terapia cu enzime este indicat n afeciuni digestive i boli


genetice, boli cardio-vasculare, neoplazii sau ca medicamente
antiinflamatoare n dermatologie, oftalmologie, ORL, reumatologie,
afeciuni bronice.
Metode i surse de obinere a enzimelor terapeutice:
- Extragerea din diferite esuturi sau lichide biologice umane
(placenta, snge, urin) sau animal i purificarea
corespunztoare.
- Culturi de celule mamifere sau bacterii din sol.
- Surse vegetale
- n ultimul timp tehnologia ADN-ului recombinat.
Exemplu: - streptokinaza, urokinaza, enzime ce se obin prin
biotehnologie. Aceste enzime reduc mortalitatea prin infarctul de
miocard.

10

Biochimie farmaceutic

VII. METABOLISM
Metabolismul reprezint totalitatea transformrilor de
substan, energie i informaie, care au loc ntr-un organism viu.
Metabolismul general prezint dou aspecte eseniale: catabolismul i
anabolismul.
Catabolismul reprezint totalitatea reaciilor de degradare din
organism, iar aceste reacii sunt frecvent procese de oxido-reducere,
care au loc cu eliberare de energie. Energia eliberat este conservat
sub forma legturilor macroergice din ATP.
Energia nmagazinat n ATP este utilizat n procese de
biosintez a biomoleculelor, care sunt substane cu molecul mare.
Cu mare specificitate i cu nivel nalt de organizare. Totalitatea
proceselor de biosintez din organism constituie anabolismul. Spre
deosebire de procesele catabolice, procesele anabolice decurg cu
consum de energie, fiind endergonice. Energia necesar proceselor de
biosintez este asigurat de hidroliza legturii macroergice din ATP.
Pe lng procesul cu caracter catabolic sau anabolic, n celule
mai au loc transformri ale constituenilor si, care au concomitent
att caracter catabolic ct i anabolic. Acestea se numesc procese
amfibolice. n cadrul acestor procese pot rezulta compui care pot fi
catabolizai sau care pot fi utilizai n procese de biosintez.
Totalitatea transformrilor pe care le sufer anumii compui
de la ingestia sau biosinteza lor pn eliminarea lor din organism se
numete metabolism intermediar. Degradarea constituenilor organici
fundamentali ai celulei vii (proteine, glucide i lipide) se desfoar
n mai multe stadii:
I.

Moleculele mari a acestor compui sunt degradate cu


eliberarea unitilor lor structurale fundamentale;
II.
Produii rezultai n primul stadiu sunt transformai pe ci
specifice ntr-un numr mic de molecule simple, printre
care predomin acetil-CoA;
III.
Compuii rezultai n al doilea stadiu sunt transformai n
dioxid de carbon i ap pe o cale numit ciclul citratului;
IV.
Echivalenii de hidrogen preluai de la metaboliii din
stadiile anterioare sunt oxidai cu formare de ap prin
intermediul lanului respirator.
Stadiile I i II sunt specifice pentru fiecare categorie de compui,
iar stadiile III i IV sunt caracteristice transformrii glucidelor,
lipidelor i proteinelor.
10

Luciana Dobjanschi

Cea mai important cale de formare de dioxid de carbon n celul


este ciclul citric sau ciclul acizilor tricarboxilici sau ciclul lui Krebs.
I

proteine

polizaharide

aminoaacizi

lipide

acizi grasi
glicerina

monozaharide

II
acetil-CoA

CAT

III

CO2
2H

2H
2H

2H
IV
O2

oxidare biologica

lantul respirator
H2O

11

CO2

Biochimie farmaceutic

VIII. CICLUL ACIZILOR TRICARBOXILICI


Respiraia este procesul prin care celula aerob obine energie n
urma oxidrii moleculelor de combustibil de ctre oxigenul molecular.
Ciclul acizilor tricarboxilici este calea metabolic central cea mai
obinuit pentru degradarea resturilor de acetil-CoA rezultate prin
catabolizarea glucidelor, acizilor grai i aminoacizilor. Ciclul acizilor
tricarboxilici este o secven ciclic, care are loc n toate celulele aerobe.
Se mai numete i ciclul acidului citric sau ciclul lui Krebs. Aceast
secven de reacii este catalizat de un sistem multienzimatic care
primete gruparea acetil de la acetil-CoA drept combustibil i o
descompune n dioxid de carbon i echivaleni reductori. Acetia sunt
apoi condui printr-un lan de proteine transportoare de electroni la
oxigen, care este redus pentru a forma ap.
Din schema prezentat mai sus se constat c acetil-CoA
rezultat n urma procesului de catabolizare a principalelor biomolecule,
intr n ciclul acizilor tricarboxilici. n unele cazuri, ns, n urma
procesului de catabolizare a acestor biomolecule nu rezult acetil-CoA,
ci piruvat. Piruvatul ca s poat intra n ciclul acizilor tricarboxilici
trebuie s se transforme, n prealabil, n acetil-CoA.
Oxidarea piruvatului la acetil-CoA.
Oxidarea piruvatului la acetil-CoA este un proces complex
catalizat de complexul multienzimatic piruvatdehidrogenaz.
+

CH3 - C - COOH + NAD + CoA

piruvatdehidrogenaza

CH3 - CO - CoA + NADH + H + CO2

Aceast reacie, care este ireversibil n esuturile animale, nu


reprezint o parte din ciclul acizilor tricarboxilici, dar este obligatorie
pentru participarea tuturor hidrailor de carbon la ciclul acizilor
tricarboxilici.
Decarboxilarea oxidativ a piruvatului la acetil-CoA i dioxid de
carbon necesit trei enzime diferite i cinci coenzime organizate ntr-un
complex multienzimatic. Etapele de reacii realizate sub influena
acestor enzime sunt artate mai jos.
CH3 - C - COOH + E1 - TPP

piruvat
dehidrogenaza

E1 - TPP - CH - CH3

OH
CO2
Aceast etap este catalizat de ctre piruvat dehidrogenaz,
enzim a crei grupare prostetic este coenzima tiaminpirofosfat.
11

Luciana Dobjanschi

Piruvatul sufer o decarboxilare pentru a elimina dioxidul de carbon


i derivatul -hidroxietil.
aminoacizi

glucoza

acizi grasi

piruvat
CO2
2H
acetil-CoA
citrat

oxalilacetat

[cis-aconitat]

malat

izocitrat

fumarat

CO2
-cetoglutarat

succinat
succinil-CoA
2H

2H

2H

NAD

CO2
2H

flavoproteine

ADP + P
ATP

coenzima Q

citocrom b
ADP + P

transportul de e si
fosforilarea oxidativa
din lantul respirator

ATP
citocrom c
ADP + P
citocrom a3

2H+ + 1/2O2

11

ATP

H2O

Biochimie farmaceutic

n etapa a doua, gruparea hidroxietil este dehidrogenat de


piruvat dehidrogenaz iar gruparea acetil care rezult este transferat
la acidul lipoic, care reprezint gruparea prostetic legat covalent la
cea de a doua enzim, dihidrolipoil transacilaz.
E1 - TPP - CH - CH3 + E2

E1 - TPP + E2
S

OH

SH

O = C - CH3

Transferul unei perechi de atomi de hidrogen de la gruparea


hidroxil a TPP la legtura disulfuric a acidului lipoic face ca aceasta
din urm s treac n forma redus a acidului dihidrolipoic.
n etapa a treia, gruparea acetil este transferat pe cale
enzimatic, de la gruparea lipoil a acidului dihidrolipoic la gruparea
tiolic a CoA.
E2
S

SH

+ CoA-SH

E2
SH

SH

+ CH3 - CO - SCoA

O = C - CH3

Acetil-CoA astfel format prsete complexul enzimatic sub forma


sa liber.
n etapa a patra, forma ditiolic a gruprii lipoil a
dehidrolipoil transacetilazei este reoxidat la forma disulfuric prin
transferul atomilor de hidrogen de la cea de a treia enzim a
complexului, cunoscut sub numele de dihidrolipoil dehidrogenaz,
la a crei grupare prostetic este strns legat FAD.
E2
SH

SH

+ E3 - FAD

E2
S

+ E3 - FADH2

FADH2, care rezult, rmne legat de enzim i este reoxidat


n faza a cincea de ctre NAD+.
E3 - FADH2 + NAD+

E3 - FAD + NADH + H+

11

Luciana Dobjanschi

Complexul piruvat dehidrogenaz este inhibat specific de


compuii arsenului trivalent (As+3). Activitatea complexului piruvat
dehidrogenaz este reglat la nivelul ATP-ului i a ionilor de calciu.
Acetil-CoA rezultat intr n ciclul acizilor tricarboxilici unde este
transformat n dioxid de carbon i ap.
Reaciile ciclului tricarboxilic.
La nceput ciclul acizilor tricarboxilici reprezenta o simpl
schem. Aceast schem a fost completat cu detalii privind enzimele
care catalizeaz reaciile, ct i stereochimia reaciilor din ciclu.
1. Acidul citric este primul intermediar al ciclului acizilor
tricarboxilici se formeaz prin condensarea acetil-CoA cu
oxalilacetat.
CO - CoA

COOH

H2O

CH2

HO - C - COOH

HO - C - COOH

CH2

CH2

CH2

COOH

COOH

CoAS - OC - CH3 + O = C - COOH


acetil-CoA

citrat sintetaza

CH2

oxalilacetat

citroil-CoA

COOH

CoA-SH

acid citric

Aceast reacie este catalizat de citrat sintetaz, enzim ce


determin formarea intermediar a citroil-CoA, care ulterior trece n
acid citric. Citrat sintetaza are rol de enzim reglatoare, deoarece este
inhibat de ATP i (NADH + H+), produsul final al fosforilrii
oxidative.
2. A doua reacie a ciclului acizilor tricarboxilici este
reprezentat de trecerea citratului n izocitrat, printr-un intermediar
denumit acid cis-aconitic.

CH2
HO - C - COOH

H2O

CH2
C - COOH

CH2

CH

COOH

COOH

acid citric

COOH

COOH

COOH

acid cis-aconitic

H2O

CH2
CH - COOH
HO - CH
COOH
acid izocitric

Enzima care catalizeaz aceast reacie se numete aconitaz,


care este activat i stabilizat de Fe+2 i de cistein. Aceast reacie
este stereospecific, adiia apei la cis-aconitat este o trans adiie.

11

Biochimie farmaceutic

3. Oxidarea izocitratului la -cetoglutarat este o reacie care


are loc n prezen de izocitrat dehidrogenaz care necesit prezen
de NAD+ sau NADP+.
COOH
CH2
CH - COOH

COOH
izocitrat
dehidrogenaza

CO2

CH2
CH2

HO - CH

C=O

COOH

NAD

acid izocitric

NADH + H+

COOH

acid -cetoglutaric

Izocitrat dehidrogenaza NAD dependent din mitocondrie


necesit prezena ionilor de magneziu, este o enzim alosteric
reglat de ADP, ca i activator specific i Mg+2.
4. A patra etap o constituie oxidarea -cetoglutaratului la
succinil-CoA n prezena -cetoglutarat dehidrogenazei.
COOH
CH2
CH2

+ NAD+ + CoA

C=O
COOH

acid -cetoglutaric

-cetoglutarat
dehidrogenaza

COOH
CH2
CH2

+ CO2 + NADH + H+

CO - CoA
succinil-CoA

Reacia este analoag oxidrii piruvatului la acetil-CoA i


dioxid de carbon i are loc prin acelai mecanism, cu participarea
tiamin-pirofosfatului, a acidului lipoic, a coenzimei A, FAD-ului i
NAD-ului drept coenzime.
5. n etapa a cincea succinil-CoA sufer o pierdere a gruprii
CoA, nu printr-o simpl reacie de hidroliz ci printr-o reacie
conservatoare de energie. Reacia are loc n prezena succinil-CoA
sintetazei, ca enzim, care provoac formarea legturii macroergice a
GTP-ului, gin GDP i fosfat anorganic, pe seama legturii
macroergice din succinil-CoA.

11

Luciana Dobjanschi

COOH
CH2

+ Pa + GDP

CH2

COOH

succinil-CoA
sintetaza

CH2

+ GTP + CoASH

CH2

CO - CoA

COOH

succinil-CoA

Acid succinic

GTP

GDP + Pa

E-succ-fosfat + CoA

succinil-CoA + Pa + E
E-succ.-fosfat
fosfat + GDP

fosfat + succinat

E + GTP

6. n etapa urmtoare succinatul este oxidat la fumarat de


flavoproteina succinat dehidrogenaza, care conine FAD legat
covalent.
COOH
CH2
CH2

+ FAD

succinat
dehidrogenaza

COOH
CH
HC

+ FADH2

COOH

COOH

Acid fumaric

Acid succinic

Enzima este activat de succinat, fosfat, ATP i coenzima Q


redus i inhibat de concentraii mici de oxalilacetat.
Reacia este stereospecific, dehidrogenaza ndeprteaz
atomii de hidrogen din poziia trans de la atomii de carbon metilenici
ai succinatului.
7. Succinatul rezultat este apoi hidratat la L-malat n prezena
enzimei fumarat dehidrogenaz sau fumaraz.
COOH
CH
HC

COOH
+ H2O

fumaraza

HO - C - H
CH2

COOH

COOH

Acid fumaric

Acid malic

11

Biochimie farmaceutic

Fumaraza acioneaz stereospecific, deoarece ea formeaz


numai stereoizomerul L al malatului.
8. n ultima reacie a ciclului L-malatul este oxidat la
oxalilacetat n prezen de L-malat dehidrogenaz NAD dependent.
COOH

COOH
HO - C - H
CH2
COOH
Acid malic

+ NAD+

O=C
CH2

+ NADH + H+

COOH
Acid oxalilacetic

Reacie este strict stereospecific pentru stereoizomerul L al acidului


malic. Oxalilacetatul rezultat poate reintra ntr-un nou ciclu
condensndu-se cu acetil-CoA.
Dac facem un bilan al ciclului se constat c pentru fiecare
grupare acetil intrat n ciclu doi atomi de carbon formeaz dou
molecule de dioxid de carbon, iar prin reacia de dehidrogenare
enzimatic, care au loc, rezult patru perechi de atomi de hidrogen:
trei dintre ele au fost utilizate la reducerea NAD + i una la reducerea
FAD. Aceste patru perechi de atomi de hidrogen vor ceda electronii,
n cursul lanului respirator, oxigenului.
Ecuaia global se poate scrie astfel:
Ac-CoA + 3 NAD+ + FAD + 2 H2O + GDP + Pa
2 CO2 + CoA-SH + 3 NADH + 3 H+ + FADH2 + GTP

Localizarea intracelular a enzimelor ciclului


Cercetrile efectuate de Kennedy i Lehninger au demonstrat
c mitocondriile izolate prin ultracentrifugare omogenatelor de esut
hepatic, asigur transformarea tuturor intermediarilor ciclului citric,
deci conin toate enzimele necesare acestui ciclu.
Pe de alt parte nucleele, fraciunea microzomal i fraciunea
solubil a citoplasmei erau inactive. Deci, mitocondriile hepatice
conin toate enzimele necesare ciclului citric i enzimele necesare
transportului de electroni. Deci, se constat c la toate animalele i
plantele studiate pn n prezent, sediul desfurrii ciclului Krebs ce
reprezint mitocondriile.
Natura amfibolic a ciclului
11

Luciana Dobjanschi

Ciclul acizilor tricarboxilici este de fapt o cale amfibolic,


care funcioneaz nu numai n catabolism, ci i n anabolism, fiind
precursor important ntr-o serie de biosinteze. Anumii intermediari i
cu preponderen -cetoacizi i oxalilacetatul servesc n biosinteza
unor aminoacizi ce pot fi uor transformai n prezena unor
transaminaze.
HOOC - C - CH2 - CH2 - COOH + H3C - CH - COOH
O

GPT

NH2

acid -cetoglutaric

alanina

HOOC - CH - CH2 - CH2 - COOH + H3C - C - COOH


NH2

acid glutamic

acid piruvic

HOOC - C - CH2 - CH2 - COOH + HOOC - CH - CH2 - COOH


O

GOT

NH2

acid -cetoglutaric

acid aspartic

HOOC - CH - CH2 - CH2 - COOH + HOOC - C - CH2 - COOH


NH2

acid glutamic

acid oxalilacetic

Citratul format imediat dup intrarea acetil-CoA n ciclu poate


s serveasc ca precursor n biosinteza hemului. La fel i succinilCoA va servi pentru biosinteza hemului.
Prin ndeprtarea citratului din ciclul acizilor tricarboxilici,
acesta servete pentru biosinteza acizilor grai
Aceti intermediar pot fi, la rndul lor, pui la loc prin
reacii enzimatice specifice, numite i reacii anaplerotice. De
exemplu carboxilarea piruvatului duce la formarea acidului
oxalilacetic.
CH3 - CO - COOH + CO 2 + ATP + H2O

piruvatcarboxilaza
Mn+2

HOOC - CO - CH2 - COOH + ADP + Pa

Lanul respirator constituie o secven de procese


biochimice a crui rezultat este transportul electronilor la oxigenul
molecular. Sistemul este format dintr-un complex multienzimatic
avnd componentele niruite ntr-o secven dictat de valoarea
crescnd a potenialului redox.
11

Biochimie farmaceutic

Sistemul de enzime care deservete lanul respirator este


localizat n membran mitocondrial intern.
substrat

FMNH2

NADH + H

ATP ADP + Pa

ADP + Pa

cit c

CoQ

cit a3 + H+ + O2

cit a

ADP + Pa

cit. b

cit c1

ATP

H2O

ATP

Energia eliberat n urma proceselor de oxidare din lanul


respirator este ncorporat n moleculele de ATP.
ADP + Pa + Q

ATP + H2O

Aceste procese ce cupleaz sinteza endergonic de ATP n


urma unor procese de oxidoreducere din lanul respirator reprezint
punctele de fosforilare oxidativ.
Astfel, oxidarea unei molecule de NADH + H+ din lanul
respirator produce trei molecule de ATP, iar oxidarea unei molecule
de FADH2 produce 2 ATP.
Semnificaia energetic a ciclului acizilor tricarboxilici.
Procesele din ciclul Krebs i din lanul respirator au loc n
mitocondrie i constituie etapa final a oxidrii celulare care
furnizeaz o cantitate mare de energie stocat sub form de ATP.
Bilanul energetic al ciclului este urmtorul:
GTP

1 ATP

3(NADH + H+)

3 ATP

FADH2

2 ATP
12 ATP/AcCoA

11

Luciana Dobjanschi

Reglarea ciclului acizilor tricarboxilici.


piruvat
CO2
Ac-CoA

oxalilacetat

citrat

malat

izocitrat

fumarat

CO2
-cetoglutarat

succinat

12

succinil-CoA

CO2

Biochimie farmaceutic

IX. ENZIME TRANSPORTOARE DE ELECTRONI


n transportul de electroni de la substrate organice la oxigenul
reductor particip patru tipuri de enzime:
1. dehidrogenaze legate de un nucleu piridinic
(piridindependente), care necesit NAD sau NADP ca i
coenzime;
2. dehidrogenaze
legate
de
nucleu
flavinic
(flavindependente), care conin FAD sau FMN ca i
grupare prostetic;
3. proteine cu fier-sulf;
4. citocromii, care conin inelul porfirinic cu fier ca i
grupare prostetic.
n plus, fa de aceste proteine, pentru transportul de electroni mai
particip i ubiquinona sau coenzima Q.
Dehidrogenaze legate de piridin.
Deoarece aceste enzime necesita NAD sau NADP drept coenzime,
aceste enzime se numesc dehidrogenaze piridin dependente. Se
cunosc mai bine de dousute de astfel de enzime care funcioneaz
n diferite procese metabolice. Forma general a reaciilor
catalizate de acest tip de enzime este:
SH2 + NAD+

S + NADH + H

SH2 + NADP+

S + NADPH + H+

Aceste reacii implic transferul reversibil a echivalenilor


reductori de la substrat, sub forma unui ion de hidrur (H -), la
poziia 4 a inelului nicotinamidic (n forma oxidat) a nucleului
piridinic; cellalt hidrogen este eliminat de pe substrat ca ion liber
(H+)
12

Luciana Dobjanschi

Piridinnucleotidele sunt legate necovalent i slab de


dehidrogenaza proteic. Deci, NAD i NADP trebuiesc privite nu ca
i grupri prostetice fixe, ci ca un al doilea substrat, deoarece ele se
leag reversibil de situsul activ catalitic de pe enzim. Astfel,
nucleotidele piridinice servesc ca i transportori disociabili de
electroni.
Unele dehidrogenaze piridin dependente (ex. -hidroxibutirat
dehidrogenaza) sunt localizate n mitocondrie, altele (de ex. lactat
dehidrogenaza) sunt localizate n citoplasm, iar altele (ex. malat
dehidrogenaza) se gsesc n ambele compartimente. n celulele
animale, NAD se gsete intr-o cantitate mult mai mare dect NADP.
n ficat cca 6o% din NAD-ul total se afl n mitocondrie, iar restul n
citoplasm. Dehidrogenazele NAD - dependente au un rol important
n respiraie unde asigur transferul de electroni de pe diferite
substrate spre oxigen, pe cnd dehidrogenazele NADP-dependente
servesc n principal la transferul de electroni de la intermediari
catabolici la intermediari anabolici.
Multe dehidrogenaze piridin dependente conin strns legai
ioni metalici divaleni, de exemplu, alcool dehidrogenaza conine
ioni de zinc (Zn+2). Dehidrogenazele piridin dependente reacioneaz
stereospecific, de exemplu, lactat dehidrogenaza este specific numai
pentru L-lactat.
n secvena glicolitic aldehida 3-fosfogliceric este oxidat la
piruvat n urmtoarele reacii, cu intermediarul comun NAD.
COOP

CH = O
H - C - OH + Pa + NAD+

H - C - OH + NADH + H+
CH2 - O- P

CH2 - O- P

CH3

CH3
NADH + H+ + C = O

NADH+ + H - C - OH
COOH

COOH
nsumnd cele dou ecuaii:
CH = O

CH3

H - C - OH + Pa + C = O
CH2 - OP
12

COOH

CHOOP

CH3

H - C - OH + H - C -H
CH2 - OP

COOH

Biochimie farmaceutic

deci sistemul NADH/NAD+ poate transfera electroni de la un


substrat la altul n virtutea faptului c NADH are capacitatea de a
aciona ca un intermediar comun pentru dou reacii piridin
dependente, fiecare catalizat de o dehidrogenaz specific.
Dehidrogenaze legate de flavin. Aceste enzime conin,
strns legate grupri prostetice, fie FMN, fie FAD. n reaciile
catalizate de aceste enzime are loc transferul unei perechi de atomi de
hidrogen de la substrat pentru a genera formele reduse FMNH2 i
FADH2.
SH2 + E-FMN

S + E-FMNH2

SH2 + E-FAD

S + E-FADH2
O

H3C

H
N

H3C

N
H

O
H3C

H3C

N
R

N
N

H
O

2H

H
O

Cele mai importante dehidrogenaze flavin dependente


ntlnite n transportul de electroni n procesul de respiraie
mitocondrial sunt:
1. NADH dehidrogenaza, care conine FMN i catalizeaz
transferul de electroni de la NADH la urmtorul membru al lanului
respirator;
2. Succinat dehidrogenaza, este activ n ciclul acizilor
tricarboxilici;
3. Dihidrolipoil dehidrogenaza, un component al sistemului
piruvat i -cetoglutarat dehidrogenaz;
5. Acil-CoA- dehidrogenaza, catalizeaz prima etap de
dehidrogenare din oxidarea acizilor grai.
Dehidrogenazele flavin dependente difer semnificativ de cele
piridin dependente, deoarece flavin nucleotida este strns legat de
molecula enzimei, funcionnd astfel ca o grupare prostetic i nu
ca i o coenzim. Flavin nucleotida nu prsete enzima n timpul
sau dup efectuarea ciclului catalitic.

12

Luciana Dobjanschi

Enzimele de oxidoreducere flavin dependente pot fi plasate n


dou clase: dehidrogenaze i oxidaze, n funcie de capacitatea lor
de a reaciona ca acceptori de electroni. La flavin dehidrogenaze
de tipul NADH dehidrogenaz i succinat dehidrogenaz exist o
tendin foarte slab a reoxidrii formei reduse a flavin nucleotidei
de ctre oxigenul molecular. Spre deosebire de acestea, flavin
oxidazele sunt reoxidate de oxigenul molecular cu formare de
peroxid de hidrogen, de exemplu, D-aminoacid oxidaza i xantin
oxidaza.
n celule, acceptorul direct de electroni dintre hidrogenazele flavin
dependente, pare s fie ubiquinona din lanul transportor de
electroni. Unele flavoproteine conin, pe lng flavin nucleotid i
metale (de ex. Fe i Mn), acetia fiind eseniali n pentru
exprimarea activitii catalitice. Flavoproteinele cu fier (de ex.
succinat dehidrogenaza i NADH dehidrogenaza) conin atomi de
sulf reactivi. Atomii de fier n flavoproteinele cu fier i sulf sufer
tranziia:
FeII

FeIII

i par s participe la transferul de electroni ctre i de la gruparea


prostetic flavinic. Alte enzime flavin dependente (de ex. xantin
oxidaza i aldehid oxidaza) conin Fier i molibden.
Proteine cu fier i sulf.
Proteinele cu fier sulf conin fier i sulf liberabil cu acizi, n
cantiti echimoleculare. Prima protein fier sulf descoperit,
feredoxina, a fost identificat ntr-o bacterie anaerob, Clostridium
pasteurianum, capabil s fixeze azotul atmosferic. Proteine
asemntoare au fost apoi descoperite n plantele superioare, unde ele
se gsesc n cloroplaste i particip la transportul de electroni al
procesului de fotosintez. Proteine cu fier sulf au fost gsite i n
microorganisme i n esuturi animale, n mod special n mitocondrii.
Grupri Fe S se gsesc n unele flavoproteine i se numesc centri
fier sulf. Aceste proteine par s funcioneze ca transportori de
electroni suferind tranziii reversibile Fe(II) Fe(III). n lanul
mitocondrial de la NADH la oxigen, par s existe cel puin apte
centre de fier sulf diferite. Patru sunt localizate n complexul

12

Biochimie farmaceutic

NADH-dehidrogenaza, dou centre sunt asociate citocromului b i


unul citocromului c1.
Citocromii
Citocromii sunt proteine transportoare de electroni care conin
n molecula lor ca i grupri prostetice fier porfirinic. Aceste structuri
sunt prezente doar n celulele aerobe. Unii citocromi sunt localizai
n membrana mitocondrial intern, unde acioneaz secvenial
pentru transportul de electroni provenii de la diferite sisteme de
oxido-reducere pn la oxigen molecular. Ali citocromi joac un rol
important n procesele specializate de hidroxilare. Toi citocromii
sufer tranziii reversibile de stare de oxidare Fe(II) Fe(III) n
timpul secvenelor de transport de electroni. Formele reduse de
citocromi nu pot fi oxidate direct de ctre oxigenul molecular, cu
excepia citocromului terminal al respiraiei mitocondriale, i anume
citocromul a3 sau citocrom c oxidaza, care conine cupru ca i
cofactor. n membrana mitocondriile animalelor superioare, au fost
identificai cel puin cinci citocromi diferii (cit. b, c1, c, a i a3.
Citocromii conin ca i grupare prostetic porfirinic
protoporfirina. Dac protoporfirina complexeaz ionul de F +2 rezult
hemul iar dac complexeaz ionul Fe+3 rezult hemina.
CH=CH2
H3C

H3C

H
H

CH=CH2

CH3
CH=CH2

H3C

CH3
CH=CH2

N
+2

Fe
N

CH3

H3C

CH3

CH2

CH2

CH2

CH2

CH2

CH2

CH2

CH2

COOH

COOH

COOH
COOH
protoporfirina IX

hem

Se tie c ionul de fier are ase coordinaii. Datorit


structurii plane a sistemului aromatic porfirinic cei patru atomi de
azot formeaz un ptrat iar ionul de fier se afl n centru, consumnd
n felul aceste patru coordinaii. Coordinaiile 5 i 6 se afl de o parte
i de alta a planului ptratului pe o perpendicular.
12

Luciana Dobjanschi

5
1

Fe
4N

N3

6
n mioglobin i hemoglobin, coordinaia a cincea este legat
de gruparea imidazolic a unui rest de histidin, iar poziia a asea
este fie neocupat, fie ocupat cu O 2. n aproape toi citocromii (cu
excepia citocromului a3, att poziia a cincea ct i poziia a asea de
coordinare sunt ocupate de gruprile R ale unor resturi specifice de
aminoacizi. Deci citocromii pot lega liganzi ca O2, CO sau CN-.
n funcionarea normal a hemoglobinei i a mioglobinei atomul de
fier nu sufer schimbri ale strii de oxidare, n timp ce oxigenul este
desprins sau prins. La citocromi, ns, Atomul de fier sufer trecerii
reversibile ntre starea de oxidare Fe(II) i Fe(III). Deci, se constat
c citocromii servesc ca transportori de electroni, pe cnd
hemoglobina i mioglobina acioneaz ca transportori de liganzi.
Ubiquinona (Coenzima Q)
Ubiquinona este o coenzim liposolubil, care particip la
transferul de electroni de la substratele organice la oxigen, n lanul
respirator din mitocondrie.
OH

O
CH3

H3CO

CH3

(CH2 - CH = C - CH2)n

H3CO
O

+ 2e-, + 2 H+
- 2 e-, - 2 H+

H3CO

CH3

H3CO

(CH2 - CH = C - CH2)n

CH3

OH

Aceast coenzim este o chinon reductibil, n mod


reversibil i are o caten lateral izoprenoid. Se cunosc mai multe
ubiquinone, care difer numai prin lungimea catenei izoprenoide,
care are ase uniti de izopren n unele microorganisme i zece n
mitocondriile esuturilor animale. n esuturile vegetale,
corespondentele ubiqinonei sunt plastochinonele, care ndeplinesc
funcii similare n transportul de electroni ai fotosintezei.
12

Biochimie farmaceutic

Calea transportului de electroni (lanul respirator)


Secvenele de reacii pe care le pargurg electronii de la
NADH la oxigen molecular poart numele de lan respirator. NADH
este forma sub care electronii sunt colectai de la diferite substrate, cu
ajutorul dehidrogenazelor NAD-dependente.
Secvena de reacii, care are loc este:
NADH + H+ + FMN
FMNH2 2 Fe.S(III)
+

2 Fe.S(II) + 2 H + Q
QH2 + 2 cit.b(III)
2 cit.b(II) + 2 cit.c(III)
2 cit.c(II) + 2 cit.a(III)
2 cit.a(II) + 2 cit.a3 (III)
2 cit.a3(II) + 1/2 O2 + 2 H+

NAD+ + FMNH2
FMN + 2 Fe.S(II) + 2 H+
2 Fe.S(III) + QH2
Q + 2 H+ + 2 cit.b(II)
2 cit.b(III) + 2 cit..c(II)
2 cit.c(III) + 2 cit.a(II)
2 cit.a(III) + 2 cit.a3(II)
2 cit.a3(III) + H2O

Se constat c transportorii de electroni intermediari din lan,


dinspre substrat ctre oxigenul molecular, se gsesc n stare de
echilibru aerob ntr-o succesiune de forme din ce n ce mai oxidate,
artnd c electronii se scurg de-a lungul unui gradient de la NADH
la O2.
De asemenea, s-a constatat c exist inhibitori care blocheaz
n mod specific transportorii din lanul transportor de electroni.
Exemple de astfel de inhibitori amintim: rotenona (substan foarte
toxic extras din plante), amitalul (medicament din clasa
barbituricelor), antimicina (izolat din Streptomiccs griseus),
monoxidul de carbon, hidrogenul sulfurat i acidul cianhidric.
Schimburi de protoni n timpul transportului de electroni.
O alt proprietate a lanului transportului de electroni este
aceea c ionii de hidrogen sunt formai sau utilizai ntru-nele din
reaciile secveniale ale transportului de electroni.
Unii dintre transportorii de electroni (NADH i ubiquinona)
transport electroni ca atare i nu preiau s-au cedeaz protoni. Aceste
reacii unde se formeaz sau se absorb protoni au un rol important n
conservarea energiei transportului de electroni.
Energetica transportului de electroni.
n cursul trecerii unei perechi de electroni de-a lungul lanului
respirator de la NADN la oxigen se formeaz 3 ATP, n urma unui
proces numit fosforilare oxidativ.
ATP + H2O
Pa + ADP
12

Luciana Dobjanschi

Cele trei puncte de formare a ATP n procesul de transport de


electroni de la NADH la oxigen sunt:
FP - Fe.S
cit.b
cit.a3

Q
1 ATP
cit.c
1 ATP
O2
1 ATP
Deci, se constat c eliberarea energiei are loc n trepte i sunt
absorbii i eliberai numai la unele dintre aceste etape, sugernd c
schimburile de protoni sunt implicate n conservarea energiei.
Transhidrogenaze piridin-nucleotide
esuturile animale i microorganismele conin enzime ce
catalizeaz reacia:

NADPH + N AD+

NADP+ + NADH

Aceast reacie permite utilizarea echivalenilor reductori ai NADH


de ctre lanul respirator, care, n mod normal, accept electroni de la
NADH ca donor apropiat. Enzimele ce catalizeaz reacia invers, ce
permite reducerea NADP+ se numesc transhidrogenaze. Sensul
reaciei de trasnhidrogenare n mitocondria intact depinde de energia
produs de transportul de electroni i prezena ATP. Viteza reaciei
de la NADPH la NAD+ este, de obicei, mai mare dect viteza reaciei
n sens invers. Tendina electronilor de a trece de la NADH la NADP+
cu formare NADPH apare atunci cnd exist exces de ATP, iar
NADPH-ul rezultat joac un rol nsemnat n procesele de biosintez.
Utilizarea oxigenului de ctre oxigenaze.
Dei, cea mai mare parte an oxigenului molecular consumat
de celulele aerobe este redus cu formare de ap. Cantiti mici de
oxigen sunt folosite n reacii enzimatice, n care unul sau ambii
atomi de oxigen din molecul sunt introdui direct pe substrate
organice cu formare de grupri hidroxil. Enzimele care catalizeaz
astfel de reacii se numesc oxigenaze. i se mpart n dou clase.:
- dioxigenaze
- monoxogenaze
Dioxigenazele catalizeaz introducerea ambilor atomi de
oxigen ai moleculei O2 pe diferite substrate organice, n timp ce
monoxigenazele introduc numai unul.
Dioxigenazele numite i oxigen-transferaze, catalizeaz reacii
de tipul:
12

Biochimie farmaceutic

AH2 + O 2

A(OH)2

unde AH2 este molecula de substrat A(OH)2 forma


hidroxilat.
Cele dou grupri hidroxil sunt introduse de obicei n poziii
adiacente sau vicinale. Produsul A(OH)2 este deseori instabil i are
loc ruperea legturii C C ntre gruprile hidroxilice vicinale. Un
exemplu important este cazul triptofan-2,3-dihidroxilazei, enzim ce
catalizeaz o etap de degradare oxidativ a triptofanului. n aceast
reacii doi atomi de oxigen sunt introdui n ciclul de cinci atomi al
triptofanului rezultnd un produs hidroxilat, care este apoi
transformat n L-formilkinunerin.
NH2

CH2 - CH - COOH
N
H

NH2

CH2 - CH - COOH
OH

O2
dioxigenaza
triptofan oxigenaza

N
H

OH

NH2

C - CH2 - CH - COOH
NH - CH = O
N-formil-L-kinuinerina

Monooxigenazele sau hidroxilazele catalizeaz introducerea


unui singur atom de oxigen din molecula de oxigen pe un substrat
organic, cellalt atom de oxigen fiind redus la ap.
Monoxigenazele necesit un al doilea substrat care s cedeze
electroni pentru reducerea pentru reducerea celui de-al doilea atom la
ap. Din aceast cauz monooxigenazele mai sunt numite i
oxigenaze cu funciune mixt. Ecuaia general este:
AH + XH2 + O2

AOH + H2O + X

unde: AH - substratul ce va fi hidroxilat, XH 2 - donorul de electroni,


AOH substratul hidroxilat i X donorul de electroni oxidat.
Substratul care furnizeaz electroni pentru a reduce un atom de
oxigen la ap este NADH sau NADPH.
12

Luciana Dobjanschi

Cele mai multe monooxigenaze (din bacterii) sunt


flavoproteine care conin FAD i catalizeaz secvena de reacii:
NAD(P)+ + E-FADH2
E-FADH2 + AOH + H2O

NAD(P)H + E-FAD
E-FADH2 + AH + O2

unde E + enzima i AH + substratul.


De exemplu: fenilalanin hidroxilaza (enzim hepatic) sau
fenilalanin-4-monooxigenaza catalizeaz reacia de hidroxilare a
fenilalaninei cu formare de tirozin. Ultimul donor de electroni este
NADPH, dar echivalenii reductori sunt transferai prin intermediul
tetrahidrobiopterinei.
O2
HO

CH2 - CH - COOH
NH2

NADPH + H

CH2 - CH - COOH + H2O


NH2

Superoxid dismutaza i catalaza


n timpul transportului de electroni spre oxigenul molecular
sau n diferite reacii de hidroxilare i oxigenare, se pot forma produi
toxici rezultai prin reducerea parial a oxigenului. Cei mai
importani produi toxici sunt O -2 (superoxid) i H2O2, care sunt
extrem de reactivi i capabili de a distruge activitatea biologic a unor
macromolecule.
n celulele aerobe a fost pus n eviden o superoxid
dismutaz, ce catalizeaz reacia:
2 O2- + 2 H+

H2O2 + O2

Peroxidul de hidrogen format este distrus de o hemoglobulin


numit catalaz.
H2O2

H2O + 1/2 O2

Superoxid dismutaza se gsete sub dou forme una n


citoplasma extramitocondial i alta n mitocondrie. Aciunea
superoxid dismutazei i catalazei este completat de acidul sorbic,
13

Biochimie farmaceutic

glutationul redus i vitamina E, care accept uor electroni, fiind


eficieni pentru ndeprtarea radicalului.

13

Luciana Dobjanschi

X. METABOLISMUL GLUCIDIC
Generaliti.
Glucidele sau zaharurile sunt compui polihidroxicarbonilici
(aldoze i cetoze). n funcie de capacitatea de a hidroliza glucidele se
pot clasifica n monozaharide (zaharuri simple nehidrolizabile),
oligozaharide (formate din 2 10 resturi de monozaharide, legate
prin intermediul legturilor glicozidice i care prin hidroliz
elibereaz monozaharidele constituente) i polizaharide (formate din
lanuri lungi, liniare sau ramificate de monozaharide, ce pot fi
eliberate prin hidroliz.
O categorie aparte o constituie glucidele conjugate
glicoproteinele, glicolipidele (care prin hidroliz pun n libertate pe
lng componenta glucidic i o component neglucidic numit
aglicon).
Rolul glucidelor n organism.
Glucidele ndeplinesc n organism funcii variate.
a. Glucidele sunt surse nemijlocite de energie. Astfel n toate
organismele vii, sursa imediat de energie o constituie oxidarea
glucozei. De exemplu, celulele nervoase sunt dependente de glucoz
ca i surs de energie.
b. Glucidele au rol de substane de rezerv. n organismele
animale superioare i ale omului, glucoza poate constitui depozite de
energie sub form de glicogen hepatic i muscular. La plante,
substana major de rezerv glucidic este amidonul.
c. Glucidele ndeplinesc roluri de substane structurale i de
susinere. La animale, polizaharidele intr n structura esuturilor
conective ale matricei osoase.
d. Glucidele sunt substane cu funcii specifice.
Mucopolizaharidele intr n structura substanelor de grup sangvin,
particip la procesele imunitare, intr n structura heparinei, substan
cu aciune anticoagulant.
Digestia i absorbia glucidelor.
n organismul animal, glucidele pot fi de origine exogen,
introduse n organism sub form de alimente sau de origine
endogen, rezultate n urma unor procese de biogenez. Cea mai
mare parte din glucidele din organismul animalelor superioare i al
omului este de origine exogen. Glucidele alimentare pot fi, la rndul
lor, de natur vegetal sau animal. principala glucid de origine
13

Biochimie farmaceutic

animal este glicogenul, ns cea mai mare parte a glucidelor


alimentare const din amidon, glucid de origine vegetal, mai ales
sub form de pine.
n cantiti mai mici alimentele mai conin dizaharide ca
zaharoza, lactoza, maltoza sau monozaharide ca glucoza sau fructoza.
Pentru a putea fi utilizate de ctre organism, glucidele
alimentare sunt n prealabil unui proces de digestie, urmat de un
proces de absorbie. Digestia polizaharidelor ncepe n cavitatea
bucal sub aciunea amilazei salivare, care este o enzim hidrolitic
secretat de glandele salivare. Sub aciunea acestei enzime, amidonul
alimentar este hidrolizat sub form cu formare de dextrine, eventual
maltoz. Aciunea acestei enzime este limitat timpul de contact
pentru c alimentele rmn n gur un timp relativ scurt.
n continuare, la nivelul stomacului sub aciunea sucului gastric
asupra bolului alimentar, amilaza salivar este inactivat de aciditatea
sucului gastric.
La nivelul intestinului, glucidele alimentare sunt hidrolizate
sub aciunea enzimelor pancreatice i a celor intestinale. Astfel,
amilaza pancreatic acioneaz asupra amidonului i a glicogenului
alimentar, pe care le hidrolizeaz cu formare intermediar de
dextrine, pn la stadiul de maltoz. Asupra maltozei, precum i
asupra altor dizaharide, acioneaz enzime coninute n sucul gastric.
O serie de polizaharide, cum ar fi celuloza, nu sunt transformate n
tubul digestiv al omului, care nu conine enzimele necesare acestor
procese. Aceti compui trec, ca atare, n intestinul gros, unde sunt
degradai n mic msur sub aciunea florei intestinale i sunt apoi
eliminai prin fecale. Aadar, aceste polizaharide nu au rol n nutriie,
cu sunt utile pentru digestie, deoarece regleaz peristaltismul
intestinal.
Ca rezultat al digestiei zaharurilor, n intestinul subire rezult
o serie de monozaharide, printre care predomin glucoza, galactoza,
fructoza, manoza precum i unele pentoze.
Absorbia glucidelor are loc la nivelul intestinului subire sub
form de monozaharide. Viteza de absorbie depinde de mai mui
factori, printre care regiunea i starea de funcionare a intestinului,
prezena unor anumite coenzime (tiamin, acid pantotenic) i
hormoni (tiroxin).
Absorbia monozaharidelor se pate face prin mecanisme fizice
sau prin mecanisme biochimice. Monozaharidele provenite din
absorbia intestinal ajung prin vena port la ficat, unde pot fi
temporar depozitate sub form de glicogen, apoi trec n circulaia
13

Luciana Dobjanschi

general ajungnd pe calea sangvin n toate celulele diferitelor


organe i esuturi.
n celule, glucidele pot suferi diferite transformri, care pot fi
anabolice (n cadrul crora au loc sinteze de glucide din ali compui
glucidici i neglucidici) i catabolice (n cadrul crora moleculele
glucidice sunt degradate cu eliberare de energie).
Catabolismul glucidic
Glucidele care servesc cel mai frecvent substrate al
transformrilor catabolice la animale, plante i microorganisme este
glucoza
Schema metabolizrii glucozei
4

1
2

CO2 2a
acetil-CoA

G-6-P

oze (3-7c) + NADPH + H+

piruvat

G-1-P
2c

lactat + energie

2CO2

glicogen

acid glucuronic

reactii de conjugare vitamina C

CAT
2b

lant respirator

H2O + energie

1 - fosforilarea glucozei, 2 glicoliza, 2a decarboxilarea


oxidativ a piruvatului, 2b ciclul Krebs i lanul respirator, 2c, 3,
4 gluconeogeneza, 5 calea pentozofosfatului, 6 calea de
interconversie n cei doi esteri ai glucozei, 7 gliconeogeneza, 9
glicogenoliza.

13

Biochimie farmaceutic

Ficatul utilizeaz glucoza astfel:


- o parte o utilizeaz pentru necesiti proprii;
- o parte o depoziteaz sub form de glicogen;
- cea mai mare parte este repus n circulaie pentru a servi
altor esuturi.
Glucoza i fructoza sunt transformate n ficat n glucoz, care
reprezint forma principal de utilizare de ctre organismul animal.
n ficat:
25% din glucoz se transform pe calea 2;
2% din glucoz se transform pe calea 5;
18% din glucoz se transform pe calea 8;
55% din glucoz este repus n circulaie graie cii nr. 4,
catalizat de ctre glucozo-6-fosfataz. Aceast cale este prezent n
rinichi, intestin, lipsete din muchi, creier, esut adipos.
Eritrocitele folosesc
90% din glucoz pe calea 2;
10% din glucoz pe calea 5.
Creierul
Nu face depozit de glicogen;
Cnd nu primete glucoz pe cale sangvin rmne fr
substrat glucidic, astfel c n caz de hipoglicemie, se ajunge uor la
lipotimie.
Calea nr. 1
- cale obligatorie pentru intrarea glucozei n transformri
metabolice.
G + ATP

Mg+2
glucokinaza
hexokinaza

G-6-P + ADP

procesul de fosforilare este endergo-dependent ireversibil;


procesul are loc cu scderea entalpiei libere;
enzime: glucokinaza (enzim specific)
hexokinaza (enzim nespecific).
Ambele enzime au rol cheie n metabolismul glucozei.

13

Luciana Dobjanschi

X.1. Glicoliza
Calea nr. 2 ciclul Embden Meyerhof Parnas (glicoliza)
-

procesul de degradare a glucozei pn la piruvat sau


lactat;
procesul are loc cu producere de energie;
se desfoar n faza solubil a celulei (citoplasm),
deoarece acolo se gsete ntregul set de enzime necesare
desfurrii procesului.

Etapele glicolizei
I degradarea glucozei pn la trioze (proces consumator de energie);
II descompunerea glicerinaldehid-3-fosfatului pn la piruvat (proces
n care se produce energie)
I.
CH2OH
O
OH

glucokinaza

OH

OH

HO

CH2OP
O

ATP

OH

ADP

glucozo-6-fosfat
izomeraza

CH2OP

HO

OH

HO

CH2OH

OH

OH

OH
CH2-O-P
C=O

fosfofructo
kinaza

CH2OP

CH2OH

CH2OP

O
HO

fosfotriozo
izomeraza

OH

CH=O

OH

HC-OH
CH2OP

II.
CH=O
H-C-OH
CH2OP

13

O
glicerinaldehid-3-fosfat
dehidrogenaza

NAD+

NADH + H+

C-O

fosfogliceroil
kinaza

H-C-OH
CH2OP

ADP

ATP

COOH
H-C-OH
CH2OP

Biochimie farmaceutic
fosfoglicerat
mutaza

H-C-OP

enolaza

CH2OH

H2O

C-O P
CH2

CH3

piruvat kinaza

ADP

ATP

C-OH
CH2

COOH

COOH
lactat dehidrogenaza

C=O

COOH

COOH

COOH

NADH + H+

H - C - OH
CH3

NAD+

Importana glicolizei
- glicoliza este o etap obligatorie n procesul de degradare a
glucozei, ca substrat energetic pn la dioxid de carbon i ap;
- este cea mai important cale sub aspect cantitativ de degradare a
glucozei;
Bilanul energetic al glicolizei
I
- consum
2 ATP
(reaciile 1 i 3)
II
- ctig
4 ATP
(reaciile 7 i 10)
2 ATP
Glicoliza este:
- un proces metabolic cu bilan exergonic;
- o important surs de energie att pentru esuturile ce
lucreaz anaerob, ct i pentru cele ce lucreaz aerob.
Fermentaia alcoolic
Unele microorganisme (drojdia de bere) au capacitatea de a
transforma glucoza n etanol cu eliberare de dioxid de carbon.
Procesul se numete fermentaie alcoolic, i are un mers asemntor
cu glicoliza pn la formare de acid piruvic. De aici, fermentaia
alcoolic i are mersul su caracteristic.
Astfel, ntr-o prim etap, acidul piruvic este decarboxilat,
sub aciunea piruvat decarboxilazei.
H3C - CO - COOH

piruvat
decarboxilaza
(TPP, Mg +2)

H3C - CH=O + CO2

Acetaldehida rezultat este redus la alcool etilic, sub aciunea alcool


dehidogenazei, care necesit prezena coenzimei NADH.

13

Luciana Dobjanschi

H3C - CH=O + NADH + H+

alcool
dehidrogenaza

H3C - CH2 - OH + NAD+

Ecuaia global este:


glucoza + 2 Pa + 2 ADP

2 CH3-CH2OH + 2 CO2 + 2 ATP + 2 H2O

Procesul prezint importan industrial deosebit, deoarece


st la baza fabricrii buturilor alcoolice de fermentaie.
n fermentaia acetic, acetaldehida sub aciunea alcool
dehidrogenazei, care are ca i coenzim NAD+, se transform n acid
acetic.
H3C - CH=O + H2O
NAD+

13

H3C - COOH
NADH + H+

Biochimie farmaceutic

X.2. Calea pentozofosfatic


O alt cale de degradare a glucozei n celulele organismului
uman este reprezentat de calea pentozofosfat sau untul
pentozofosfat. Aceast cale se realizeaz n poriunea solubil a
citoplasmei extramitocondriale din celulele animale. n procesul de
degradare a glucozei pe aceast cale se pot distinge dou etape:
1. oxidativ (obinerea de pentoze din hexoze);
2. calea ce permite interconversia dintre diferite glucide.
1. Etapa oxidativ
CH2OP
O
HO

OH

CH2OP
O
OH

OH

HO
NAD+

OH

NADH+H

OH

n aceast reacie glucozo-6-fosfatul se oxideaz sub aciunea


glucozo-6-fosfat
dehidrogenazei
(GDPH)
formnd
6+
fosfogluconolacton. GPDH are drept coenzim NADP care
funcioneaz ca i acceptor de electroni i hidrogen. n continuare 6fosfogluconolactona, hidrolizeaz spontan sau sub influena unei
lactonaze formeaz acid 6-fosfogluconic.
COOH
CH2OP
O
HO

H2O

OH
OH

H-C-OH
HO-C-H
H-C-OH
H-C-OH
CH2-O-PO3H2

n etapa urmtoare, catalizat de 6-fosfogluconat


dehidrogenaz (PGDH) are loc concomitent o oxidare i o
decarboxilare. Enzimele utilizeaz NADP ca i coenzim.

13

Luciana Dobjanschi
COOH

COOH

H-C-OH
HO-C-H

C=O

O=C

H-C-OH
H-C-OH

CH2-OH

H-C-OH
H-C-OH
+

NADP

NADPH+H

CH2-O-PO3H2

- CO2

H-C-OH

H-C-OH
H-C-OH
CH2-O-PO3H2

CH2-O-PO3H2

Sub aciunea unei izomeraze, ribulozo-5-fosfatul se izomeraz


la nitrozo-5-fosfat.
CH2-OH
C=O
H-C-OH

CH=O
ribulozo-5-fosfat
izomeraza

H-C-OH
CH2-O-PO3H2

H-C-OH
H-C-OH
H-C-OH
CH2-O-PO3H2

n unele cazuri procesul se poate opri aici, din oxidarea


glucozo-6-fosfatului rezult dioxid de carbon, NADH+H+ ce intr n
reaciile de biosintez, care au loc n citoplasma extramitocondrial i
D-ribozo-5-fosfat, care este un precursor n sinteza nucleotidelor.
Ecuaia global este:
G-6-P + 2 NADP+

Ribozo-5-fosfat + CO2 + 2 NADPH + H+

n alte cazuri, ins, pentozele rezultate pot fi din nou


convertite n hexoze, n cadrul unei secvene de reacii de sine
stttoare.
n etapa anterioar din glucozo-6-fosfat a rezultat ribulozo-5fosfat, care sub aciunea unei izomeraze se transform n ribozo-5fosfat, iar sub aciunea unei epimeraze se transform n xilulozo-5fosfat.

14

Biochimie farmaceutic

CH=O
H-C-OH
t
sfa
-fo
5
zo za
ulo mera
b
i
r izo

CH2-OH

H-C-OH
H-C-OH
CH2-O-PO3H2
ribozo-5-fosfat

C=O
H-C-OH
H-C-OH
CH2-O-PO3H2
ribulozo-5-fosfat

rib
ulo
epi zo-5
me -fo
raz sfa
t
a

CH2-OH
C=O

HO-C-H
H-C-OH
CH2-O-PO3H2
xilulozo-5-fosfat
Aceste transformri sunt reversibile, iar echilibrul se stabilete
n urmtoarele rapoarte cantitative. 35% ribulozo-5-fosfat, 25%
ribozo-5-fosfat i 40% xilulozo-5-fosfat.
n etapa urmtoare, sub aciunea transcetolazei are loc
transferul unei grupri glicolaldehidice de la xilulozo-5-fosfat la
ribozo-5-fosfat. Reacia necesit prezena TPP ca i coenzim i ioni
de magneziu, iar produsul care rezult este o heptoz, seduheptulozo7-fosfat i o trioz.
CH2-OH
CH=O

CH2-OH

H-C-OH
H-C-OH
H-C-OH
CH2-O-PO3H2
ribozo-5-fosfat

C=O

H-C-OH
H-C-OH
CH2-O-PO3H2
ribulozo-5-fosfat

C=O
transcetolaza

CH=O

HO-C-H
H-C-OH
H-C-OH
H-C-OH

H-C-OH
CH2-O-PO3H2
glicerinaldehid-3-fosfat

CH2-O-PO3H2
seduheptulozo-5-fosfat

14

Luciana Dobjanschi

n continuare n prezena unei transaldolaze, are loc transferul


unei grupri de dihidroxiaceton la seduheptulozo-7-fosfat la
glicerinaldehid-3-fosfat. Din reacie rezult o prim molecul de
hexoz i anume fructozo-6-fosfatul, precum i o molecul de
eritrozo-4-fosfat. Fructozo-6-fosfatul este un produs ce face legtura
cu secvena glicolitic.
CH2-OH

CH2-OH

C=O

C=O

HO-C-H
H-C-OH
H-C-OH
H-C-OH

CH=O

H-C-OH
CH2-O-PO3H2
glicerinaldehid-3-fosfat

CH2-O-PO3H2
seduheptulozo-7-fosfat

transaldolaza

HO-C-H

CH=O
H-C-OH

H-C-OH
H-C-OH

H-C-OH
CH2-O-PO3H2
eritrozo-4-fosfat

CH2-O-PO3H2
fructozo-6-fosfat

Produii rezultai sunt tot intermediari ai secvenei glicolitice.


Enzimele cheie ale acestei ci sunt glucozo-6-fosfat dehidrogenaza i
6-fosfogluconat dehidrogenaze.
Importana metabolic a ciclului pentozofosfat
Metabolizarea glucozei pe calea pentozofosfat nu constituie
propriu-zis o form de degradare sau de oxidare a glucozei. Calea
pentozofosfat nu este cuplat cu lanul respirator, ci n cadrul ei, nu se
formeaz ATP, ci se consum pentru activarea glucozei la glucozo-6fosfat.
Importana sa metabolic o constituie faptul c diveri produi
ai secvenei metabolice sau intermediarii cii pentozofosfat sunt
implicai n procese de biosintez a unor compui de importan
biologic major. NADPH + H+ este un furnizor de hidrogen i de
electroni n procesele de sintez a acizilor grai, a compuilor
steroidici. Diferitele tetroze, pentoze, hexoze i heptoze rezultate sunt
implicate n biosinteza monozaharidelor i a acizilor nucleici.
Transformarea glucozei pe calea pentozofosfat constituie un
mecanism tipic amfibolic de metabolizare. Diferitele etape ale acestei
secvene metabolice au loc n faza solubil a citoplasmei i toate
enzimele care particip la aceste reacii au fost izolate n stare pur.
Ciclul pentozofosfat este avantajos pentru economia celular i prin

14

Biochimie farmaceutic

faptul c necesit echipament enzimatic relativ redus, de unde i


denumirea de unt pentozofosfat.
Patologia cii pentozofosfat
Glucozo-6-fosfat dehidrogenaza este o enzim ce prezint
proprietatea de polimorfism genetic. Aceasta nseamn c exist
numeroase variante genetice ale acestei enzime, ca urmare a unor
mutaii genetice.
Aceast enzim este un exemplu tipic de enzimopatie
farmacogenetic, deoarece se manifest condiionat de administrarea
unor medicamente i numai la indivizi cu variaii genetice ale
enzimei.
Exemple de medicamente ce pot provoca apariia de
enzimopatii
sunt
antimalaricele
(chimina),
sulfamidele,
nitrofurantoina, vitamina K, aspirina. Posesorii de o astfel de
enzimopatie nu prezint suferine pn cnd nu inger un astfel de
medicament, cnd se produce hemoliz, anemie hemolitic i
methemoglobinurie.
Aceste medicamente cresc potenialul oxidativ al celulei i
enzima nu mai face fa.

14

Luciana Dobjanschi

X.3. Degradarea glucozei pe calea acizilor uronici


Pe lng celelalte ci de degradare a glucozei n organismele
animale i la plantele superioare s-a observat i o alt cale, care
implic oxidarea glucozei la acid glucuronic.
Aceast cale este important din punct de vedere metabolic
deoarece:
1. Furnizeaz acid glucuronic, care este utilizat n procesele
de detoxificare hepatic prin conjugarea sa cu fenoli, bilirubin, cu
diveri hormoni, cu unele medicamente sau produii lor de oxidare.
Aceast conjugare are ca i consecin scderea toxicitii acestor
compui i mrirea solubilitii lor, ceea ce faciliteaz excreia renal.
2. acidul glucuronic prezint i o importan structural,
deoarece intr n structura mucopolizaharidelor.
3. Att n plantele superioare ct i n organismele animale (cu
excepia omului, a primatelor i a cobailor), acidul glucuronic
constituie o etap intermediar n biosinteza acidului ascorbic din
glucoz.
Formarea acidului glucuronic n organismele umane parcurge
mai multe etape.
1. Glucozo-1-fosfatul rezultat din glicogen prin foforoliz sau
din izomerizarea glucozo-6-fosfatului i se activeaz prin cuplare cu
UTP, cu formare de UDP-glucoz.
O
H
CH2OH
O
HO

14

OH
OPO3H2
OH

O
+ P P P - O - H2C

OH OH

UDP-glucozo-pirofosforilaza
pp

Biochimie farmaceutic

O
H
CH2OH
O
HO

OH

OH

OH

OH

O - P - O - P - O - P - O - H2C
OH O
O
O

OH

OH

UDP-glucoza

n etapa urmtoare UDP-glucoza se oxideaz n prezen de


UDP-glucozo dehidrogenaz cu formare de acid UDP-glucuronic.
O
H
CH2OH
O
HO

OH

OH

OH

OH

N
UDP-glucozopirofosfataza

O - P - O - P - O - P - O - H2C
OH O

PP
OH OH

O
H
COOH
O
HO

OH

OH

OH

OH

O - P - O - P - O - P - O - H2C
OH O
O
O

OH

OH

acid UDP-glucuronic

Acidul UDP-glucuronic poate elibera i UTP prin hidroliz


sau poate intra direct n reacii de conjugare.
14

Luciana Dobjanschi

O
H
CH2OH
O
HO

OH

OH

OH

OH

O - P - O - P - O - P - O - H2C
OH O
O
O

UDP-glucozodehidrogenaza

2 NAD+

2NADH + 2H+

OH OH

O
H
COOH
O
HO

OH

OH

OH

OH

O - P - O - P - O - P - O - H2C
OH O
O
O

OH

OH

acid UDP-glucuronic

Acidul UDP-glucuronic poate elibera acidul glucuronic i


UTP prin hidroliz sau poate intra direct n reacii de
glucuronoconjugare.
reactii de
conjugare
acid UDP glucuronic

vitamina C
alicozaminoglicani
(gliciproteine)

Transformarea acidului UDP-glucuronic pe calea 7a,


reprezint o cale de detoxifiere a organismului. Aceast cale se
desfoar n esutul hepatic i renal, viznd, n primul rnd,
14

Biochimie farmaceutic

compuii toxici de origine exogen sau produi rezultai n urma


metabolismului normal. n urma acestui proces se formeaz
glicuronide, compui solubili i uor de eliminat, prin care se
neutralizeaz efectul toxic al unor metabolii ( de exemplu, compui
fenolici, carboxilici, aminici etc.)
UDP-glucuronic

R-OH

glucuronat transferaza

R-O-glucunoril

UDP

La om, la maimue i la cobai, acidul glucuronic rezultat prin


hidroliza acidului UDP-glicuronic se oxideaz la acid gulonic, cu
formare final de xiluloz i dioxid de carbon (7c).
H H OH H
acid UDP-glucuronic

H2

HOOC - C - C - C - C - CH=O
UDP

HO OH H OH
acid glucuronic

H H OH H

CO2

HOH2C - C - C - C - CH2OH

HOOC - C - C - C - C - CH2OH
HO OH H OH
acid gulonic

OH H

H2

O H OH
L-xiluloza

L-xiluloza trece n D-xiluloz, care intr intr n calea


pentozofosfat. Prezena xilulozei n cantitate mic n urina omului
sntos i n cantiti mari la bolnavii suferinzi de pentozurie
carenial, dovedete posibilitatea acestei ci de degradare a acidului
glucuronic.
La plantele superioare i la majoritatea animalelor, acidul
glucuronic trece n acid ascorbic (7b).

14

Luciana Dobjanschi

CH=O
H - C - OH
HO - C - H

C - CH=O

H - C - OH

OH

H - C - OH

H2O

H2

glucuronolactona

COOH
O

OH OH

H
O

C - CH2OH

gulonolactona

C - CH2OH
OH

OH
OH OH

H2

OH OH
acid ascorbic

Deficiena genetic, care nu permite sinteza acidului ascorbic


la om, primate i cobai, const n absena enzimei L-gulonolacton
oxidaz, care catalizeaz etapa final abiosintezei de acid ascorbic.

14

Biochimie farmaceutic

X.4. Gluconeogeneza
Procesele de catabolizare a glucidelor n celule se desfar
concomitent cu cele de biosintez. Astfel, dei majoritatea proceselor
metabolice sunt procese reversibile, calea de biosintez a unei
molecule nu reprezint o simpl inversare a cii de degradare. n
cadrul fiecrui proces metabolic trebuie s existe cel puin o verig
prin care anabolismul s se diferenieze de catabolism. Aceste verigi
constituie, n general, tocmai punctele de control al cii metabolice
respective.
Cile anabolice prezint o anumit independen n raport cu
cele catabolice, ele desfurndu-se adesea n compartimente celulare
diferite.
Cuplarea proceselor catabolice cu cele anabolice este realizat
frecvent prin intermediul ATP-ului, transportor al energiei eliberate
n cursul catabolismului i totodat furnizor al energiei necesare n
procesele de biosintez.
n cadrul anabolismului glucidic, formarea glucozo-6fosfatului constituie etapa nodal. Glucozo-6-fosfatul se poate forma
pe mai multe ci:
1. prin fotosintez (procesul se ntlnete n organismele
autotrofe);
2. prin conversia acidului lactic, respectiv a acidului piruvic n
glucoz;
3. prin gluconeogenez din intermediari ai ciclului acizilor
tricarboxilici;
4. prin gluconeogenez din aminoacizi;
5. prin interconversia altor hexoze n glucozo-6-fosfat.
Gluconeogeneza este procesul de resintez a glucozei din
material neglucidic. Este procesul ce contribuie la satisfacerea
necesarului de glucoz a esuturilor ntre mese sau atunci cnd aportul
alimentar de glucoz este insuficient. Procesul poate avea loc plecnd
de la lactat sau piruvat prin inversarea etapelor glicolizei cu
intercalarea anumitor etape unidirecionale, care sunt soluionate prin
alte secvene de reacii, cu participarea altor enzime. Acestea se
numesc ci de ocolire i sunt:
1. formarea fosfoenol piruvatului din piruvat;
2. transformarea fructozo-1,6-difosfatului n fructozo-6-fosfat;
3. transformarea glucozo-6-fosfatului n glucoz
Formarea
fosfoenolpiruvatului.
Trecerea
fosfoenol
piruvatului n piruvat sub aciunea piruvatkinazei este un proces care
decurge cu o scdere apreciabil a energiei libere, ceea ce face ca
14

Luciana Dobjanschi

reversibilitatea acestei reacii s fie extrem de redus. Din aceast


cauz, fosforilarea piruvatului la fosfoenol piruvat, care pe cale
direct ar fi puternic endergonic, decurge pe o cale deviat, care
implic participarea att a unor enzime din citoplasm ct i din
mitocondrii. Astfel ntr-o prim etap piruvatul este carboxilat n
mitocondrii cu formare de oxalilacetat. Reacia necesit participarea
ATP-ului, ca donor de energie i prezena acetil CoA, ca modulator
de reacie.
COOH

CH3

CH2

C = O + CO2 + ATP

C=O

COOH

+ ADP + Pa

COOH

Acidul oxalilacetic rezultat este apoi redus la malat, tot n


mitocondrii, sub aciunea NADH.
COOH

COOH
CH2
C=O

CH2

+ NADH + H+

CHOH

+ NAD+

COOH

COOH

Acidul malic difuzeaz din mitocondrie n citoplasm unde


este reoxidat la acid oxalil acetic, sub aciunea malat dehidrogenazei.
COOH

COOH
CH2
CHOH
COOH

+ NAD+

CH2
C=O

+ NADH + H+

COOH

Acidul
oxalilacetic
sub
aciunea
fosfoenolpiruvat
dehidrogenazei li cu participarea GTP ca donor de energie se
decarboxileaz i se fosforileaz concomitent formnd fosfoenol
piruvat.

15

Biochimie farmaceutic

COOH
CH2
C=O

CH2
+ GTP

Mg

+2

C-O

PO3H2 + GDP + CO2

COOH

COOH

Ecuaia global a procesului este:


CH3

CH2

C = O + ATP + GTP

C - O PO 3H2 + GDP + ADP + Pa

COOH

COOH

Deci, pentru fosforilarea enolpiruvatului la fosfoenolpiruvat a


fost necesar energia unei molecule de ATP i una de GTP. n
continuare fosfoenolpiruvatul format, se transform prin inversarea
reaciilor glicolitice pn la stadiul de fructizo-1,6-difosfat.
Hidroliza fructozo-1,6-difosafatului este a doua reacie din
cursul biosintezei glucozei care are un mecanism propriu i nu const
dintr-o inversare a reaciei din cadrul glicolizei.
Fructozo-1,6-difosfat + H2O

fructozofosfataza

Fructozo-6-fosfat + Pa

n etapa urmtoare fructozo-6-fosfatul


izomerazei este transformat n glucozo-6-fosfat.
Fructozo-6-fosfat

sub

aciunea

Glucozo-6-fosfat

Glucozo-6-fosfatul este un compus cheie n cadrul


metabolismului glucidic, deoarece el constituie compusul iniial
pentru multiple transformri anabolice i catabolice ale glucozei. n
vederea biosintezei glucozei libere, glucozo-6-fosfatul hidrolizeaz n
baza unui mecanism propriu i nu prin inversarea procesului de
formare.
Hidroliza glucozo-6-fosfatului. n secvena glicolitic,
glucozo-6-fosfatul se formeaz prin fosforilarea direct a glucozei de
ctre ATP i n prezena hexokinazei. Reacia invers este
endergonic i puin probabil.
Formarea glucozei libere se realizeaz prin hidroliza glucozo6-fosfatului sub aciunea glucozo-6-fosfatazei
15

Luciana Dobjanschi

Glucozo-6-fosfat + H2O

glucozo-6-fosfataza

Glucoza + Pa

Aceast enzim este repartizat selectiv n RE din ficat i


rinichi. Este o enzim cu funcii multiple poate cataliza i hidroliza
pirofosfatului sau biosinteza glucozo-6-fosfatului din glucoz i
pirofosfat.
n acest caz glucozo-6-fosfatul nu se gsete n muchi i
creier, care nu au capacitatea de a forma glucoza liber.
Organismul poate s produc glucide i din ali precursori
(intermediari ai ciclului acizilor tricarboxilici, amino acizi etc).
n procesul de gluconeogenez exist patru enzime ce
constituie puncte de control a acestei ci: piruvat carboxilaza,
fosfoenolpiruvat carboxilaza, fructozodifosfataza i glucozo-6
fosfataza, de fapt sunt enzimele care catalizeaz etapele de ocolire din
procesul de gluconeogenez.
Gluconeogeneza este un proces endergonic ce se desfoar n
ficat, rinichi i mai puin n alte esuturi. Dac n proces se pleac de
la lactat i piruvat se consum ase molecule de ATP pentru o
molecul de glucoz.

15

Biochimie farmaceutic

X.5. Metabolismul glicogenului


Glicogenul reprezint forma major de stocare (uor
disponibil) a excesului de glucoz n organismul animal. La acest
form se face apel n faza catabolic a metabolismului.
Glicogenul este un polimer ramificat alctuit din -Dglucoz, legate majoritar prin prin legturi 1-4 glicozidice i cu o
frecven de cca 10 uniti legturi 1-6 glicozidice, care for crea
punste de ramificare.

CH2OH
O
OH

CH2OH
O
O

OH

OH

CH2OH
O
O

OH

OH

O
OH
HO

CH2

OH

O
OH

Glicogenul este localizat n ficat (cca 60%) i n muchi (


1%). Cantitatea de glicogen depozitat n ficat este mai mic dect
cea din muchi, deoarece masa muscular este mai mare dect masa
ficatului. Glicogenul va fi folosit n scopuri diferite n funcie de locul
de depozitare.
Gliconeogeneza i glicogenoliza, ca i alte ci metabolice
decurg decur distinct i se conformeaz principiului general al
dualitii reglrii, ceea ce asigur funcionarea lor nesincron.
Glicogenoliza reprezint procesul de degradare a
glicogenului, care presupune desfacerea legturilor 1-4 i 1-6glicozidice din structura acestuia. Procesul se desfoar sub aciunea
conjugat a dou enzime specifice.
Prima etap (limitant de vitez) este o fosforoliz adic
transferul unui rest glucozil, de la captul nereductor al polizaharidei
pe o molecul de acid fosforic (fosforoliz). n urma transferului
rezult glucozo-1-fosfat i glicogen cu o unitate de glucoz mai puin.
glicogen (n+1) + P

fosforilaza

glucozo-1-fosfat + glicogen (n)

Fosforilaza sau 1-4 glucozil-fosfo-glicozil transferaza este o


enzim specific care acioneaz asupra legturii glicozidice 1-4.
15

Luciana Dobjanschi

Aciunea acestei enzime nceteaz la o distan de patru


uniti de glucoz fa de punctul de ramificare. Aici intr n aciune
enzima de deramificare, care ndeplinete dou roluri: desprinde un
rest de trei uniti de glucoz (rest trizaharidic) pe care-l va transfera
pe lanul nvecinat.

enzima de
deramificare

enzima de
deramificare

Enzima de deramificare funcioneaz ca o transferaz. n apropierea


punctului de ramificare mai existp o singur unitate de glucoz.
Aceeai enzim de deramificare, dar cu activitate 1-6 glicozidic va
desface i acest ultim rest de glucoz.
Glucozo-1-fosfatul rezultat n urma procesului de fosaforoliz
se va transforma n glucozo-6-fosfat, care n ficat, sub aciunea
glucozo-6-fosfatazei trece n glucoz, care trece n snge i va servi
ca surs de energie prin trecere prin secvena glicolitic.
n muchi nu exist glucozo-6-fosfataz, astfel c glucozo-6fosfatul va trece direct n glicogenoliz (glicogenul muscular nu poate
funciona direct ca surs de glucoz sanguin).Totui, metabolismul
esutului muscular poate contribui la glucoz sanguin indirect, prin
aceea c lactatul produs n muchi poate fi convertit la glucoz n
ficat. Aceat secven de reacii prin care poart numele de ciclul lui
Cori.
Deci, degradarea glicogenului la glucoz implic 4 reacii
catalizate de 4 enzime:
- fosforilaza, care hidrolizeaz legturile -1,4
- enzima de deramificare, care ndeprteaz ramificaiile cu
legturi -1,6
- fosfoglucomutaza, care convertete G 1P n G 6P
- glucozo-6 fosfataza, care convertete G 6P n glucoz.
Gliconeogeneza reprezint etapa de formare a glicogenului
din resturi de glucoz i glicogen cu uniti mai puine de glucoz
(primer).
n procesul de formare a glicogenului din glucoz, mai nti glucoza
este transformat n glucozo-6 fosfat, din care apoi se formeaz
15

Biochimie farmaceutic

glucozo-1 fosfat. Glucozo-1 fosfatul reacioneaz cu UTP pentru a


forma UDP-glucoza. UDP-glucoza reacioneaz cu o molecul
iniial de glicogen preexistent din metabolismul glicogenului,
denumit iniiator (primer) pe care vor fi transferate una cte una
uniti de glucoz de pe forma activat a aceasteia.
La nceput se formeaz legturile 1-4--glicozidice sub aciunea
glicogen sintetazei (rol reglator). Se pornete de la o molecul iniial
de glicogen preexistent din metabolismul glicogenului, denumit
iniiator (primer), pe care vor fi transferate una cte una uniti de
glucoz de pe forma activ a acestuia.
UDP

glicogen (n) + UDP-glucoza


(primer)
GS

glicogen (n+1)

Reacia decurge n acest fel pn se leag cel puin 11 resturi


de glucoz. Dup aceast faz intervine enzima de ramificare, care
creiaz legturi 1-6 glicozidice. Aceast enzim desprinde un rest de
ase uniti de glucoz i l transfer pe un lan nvecinat cu apariia
unui punct de ramificare. Aciunea combinat a moleculei primer de
glicogen, a glicogensintetazei i a enzimei de ramificare duce la
formarea moleculei de glicogen.

enzima de
ramificare

Deci, secvena de reacii din biosinteza glicogenului cuprinde


urmtoarele etape:
- legarea a aproximativ 8 resturi de glucoz la molecula
primer de glicogen
- creterea catenei -1,4 sub aciunea glicogen-sintetazei
- formarea legturilor -1,6 de ctre enzima de ramificare
- creterea ulterioar a catenelor -1,4 de ctreglicogensintetaza
- repetarea etapelor 3 i 4.
15

Luciana Dobjanschi

Reglarea i controlul metabolismului glicogenului


Reglarea glicogenolizei
- afecteaz n mod special fosforilaza, aceast enzim este
supus unui control metabolic variat i complex realizat
att prin modificri de covalen ct i allosterice.
- Sistemul fosforilaz este alctuit din mai multe enzime:
- fosforilaza b (form inactiv)
- fosforilaza a (forma activ)
- alte dou fosforilaze
- bosforilaz-b-kinaza (transform forma
inactiv b n forma activ a)
- fosforilaz-b-fosfataza (catalizeaz reacia
invers)
epinefrina
adenilat
ciclaza

glicogensintetaza
fosforilata

AMP

insulina
adenilat-ciclaza
PD

glicogensintetaza
defosforilata

AMPc

ATP
proteinkinaza
AMPcinactiva

ATP

proteinkinaza
AMPca

ADP

ADP
fosforilazkinaza b
defosforilata

glucozo-1-fosfat
glicogen (n) + glicogen (n-1)

fosforilaza a

fosforilazkinaza a fosforilazfosfataza
ATP

fosforilaza b

fosforilazfosfataz
kinaza

La apariia unui stimul intr n aciune epinefrina care


acioneaz pe R i determin activitatea adenilat ciclazei, care
transform AT n AMPc. Este vorba de o activare n cascad a
glicogenului care duce la o amplificare a semnalului iniial.

15

Biochimie farmaceutic

adrenalina

DAG (diacilgliceride)

I3P3(inozitol-3-fosfat)
OH

CH2OOC-R1
CHOOC - R2

OH

PO
HO

CH2OH

OP

OH
Cele dou ci metabolice, glicogenoliza i giconeogeneza
sunt distincte, dar n reglare intervin aceleai mecanisme: creterea cAMP afecteaz i procesul glicogenezei, acionnd asupra
glicogensintetazei, favoriznd fosforilarea acesteia de ctre
proteinkinaz.
Reglarea acestor procese se realizaz nu numai ca AMPc, ci i
n urma interaciunii hormonului (andrenalin) cu R1-adrenergici i
prin intermediul altor mesageri secunzi (I 3P)
Inozitol-3-fosfatul acioneaz prin scoaterea calciului din RE,
creterea tranzitorie a concentraiei intracelulare a ionului de calciu,
care poate aciona fie independent, sau cuplat cu sisteme de formare a
acestuia sub aciunea altor mesageri. Aciunea poate s fie o aciune
rapid, de scurt durat (10-7s) mai ales cnd se produce un influx
de ioni de calciu din exterior, sau poate fi o aciune de mai lung
durat, n cazul n care aciunea sa este cuplat cu a altor mesageri
secunzi (ex. inozitol-3-fosfat).
Ionul de calciu acioneaz cuplat cu calmodulina, protein cu
mare flexibilitate conformaional, cu patru domenii similare de
legare a ionului de calciu. Att ionul de calciu ct i calmodulina,
separat, sunt inactivi. Prin legare de ion de calciu, calmodulina trece
ntr-o conformaie compact activ, capabil s scioneze asupra altor
proteine, determinnd la acestea o tranziie cu implicaii n activitatea
acestora. Uneori calmodulina constituie o parte integrant a unei
enzime fosforilazkinaz.
Prin creterea concentraiei ionilor de calciu intracelular,
calmodulina fixeaz calciu i duce la transformri conformaionale
favoriznd activitatea fosforilazkinazei.
15

Luciana Dobjanschi

Inhibarea glicogenolizei
AMPc

5'AMP

Insulina este un hormon ce activeaz PDE, favoriznd


trecerea AMPc la 5-AMP, deci inactiveaz glicogenoliza.
Tulburri metabolice. Datorit unei deficiene ereditare a
sistemului enzimatic implicat n cele dou ci ale glicogenului duc la
depuneri masive de glicogen n ficat sau muchi sau depunere
anormal de glicogen cu o evoluie blnd sau dramatic (mortale
uneori). Maladia se numete glicogenoz.
Exist cteva defecte genetice ce duc la stri n care se
acumuleaz glicogenul. Acestea au consecine severe asupra sntii
esuturilor, n special a ficatului. Ele sunt cunscute sub denumirea de
boli de stocare a glicogenului.Una din cele mai comune boli se
datorete deficienei glucozo-6-fosfatazei i este cunoscut ca tipul 1
de boal de stocare a glicogenului sau boala Von Gierke. n acest
caz se observ nivel sczut al glicemiei n timpul repausului
alimentar i ficat mrit cu un nivel ridicat al glicogenului.

15

Biochimie farmaceutic

X.6. Glicoproteine i proteoglicani.


Conjugaii glucidelor
Sunt compleci formai prin asociere de glucide cu proteine
i/sau lipide, de exemplu, glicoproteinele, proteoglicanii,
lipoproteinele etc.
Glicoproteinele i proteoglicanii sunt compui care se
formeaz prin ataarea covalent de lanuri oligo sau polizaharidice la
schelete polipeptidice. Distincia se face n raport cu componenta
glucidic.
Glicoproteinele sunt formate din lanuri de oligozaharide, de
obicei ramificate, unite n proporie variabil cu lanuri proteice.
Structura unitii glucidice
Unitile glucidice pot fi reprezentate de:
- uniti glucidice: galactoz, glucoz, manoz
- oze N-acetilate (doi aminoacizi): N-acetilactozamina, Nacetilglucozamina
- acid sialic (NANA ac. N-acetilneuraminic)
- fucoza
CH2OH
O
HO
OH

CH2OH
O
OH

OH
NH-CO-CH3
N-acetilgalactozamina

HO

OH
NH-CO-CH3
N-acetilglucozamina
COOH

HO

COOH

H2N-C-H O
HO-C-H

HOOC

OH
NH2

C-OH
CH2
O

HO O

H-C-OH
H2N-C-H

H-C-OH

H-C-OH

C-H

H-C-OH

H-C-OH

H-C-OH

CH2OH

CH2OH

H-C-OH
CH2OH

acid sialic (NANA) = acilarea ac. Neuraminic


15

Luciana Dobjanschi

CHO

CHO

HO-C-H

HO-C-H

H-C-OH

H-C-OH

H-C-OH

H-C-OH

HO-C-H

HO-C-H

CH2OH
L-galactoza

CH3
fucoza

Lanurile zaharidice se leag de lanurile proteice prin


legtur O- sau N-glicozidic. De exemplu, n colagen (glicoprotein)
se leag de hidroxilul lizinei.
CH2OH
O
HO
OH

O
O

O
OH

CH2-NH2
CH
(CH2)2
CH-CONH

Biosinteza
Componentele se sintetizeaz separat, dup care se cupleaz
formnd glicoproteina.
Sinteza oligozaharidei
n sinteza oligozaharidei l are un compus lipofil cu structur
poliizoprenic, poliizoprenol = dolichol.
H3C - C = CH - CH2 - [CH2 - C = CH - CH2 -]n- CH2 - CH - CH2 - CH2OH
CH3
dolidol

16

CH3

CH3

Biochimie farmaceutic

Etapele sintezei
1. Asamblarea lanului oligozaharidic i transferul su pe
scheletul peptidic.
2. Prelucrarea glicoproteinei formate n prima etap.
1.
Dol

kinaza
ATP

Dol-P

UDP-glu

ADP

Dol-P-P-Glu

UMP

UDP-N-acetil-gal

UDP

Dol-P-P-glu-N-Ac-gal
GDP-manoza

GDP

Dol-P-P-glu-N-Ac-gal-man

Dol-P-P-oligozaharida

lant polipeptidic
oligozaharid transferaza

Dol-P-P
glicoproteina primara
Dol-P

16

Luciana Dobjanschi

2. n etapa a doua are loc prelucrarea enzimatic a


glicoproteinelor primare prin eliminarea i adugarea de uniti
glucidice sub aciunea unor glicozidaze i a unei glicozil transferaz,
ce adaug alte subuniti cu formare de glicoproteine de anumite
tipuri.
Rolul glicoproteinelor este divers i multiplu.
- rol structural: - colagen
- peretele celular;
- rol de transport glicoproteinele ce transport ioni
metalici, lipide, vitamine etc.
- rol lubrifiant i protecie mucina
- rol enzimatic factori de coagulare
- unii hormoni sunt glicoproteine
- rol n imunitate
- rol n reacii de recunoatere (rol receptor) ex.
recunoaterea unei bacterii sau a unui virus.
Proteoglicani.
Proteoglicanii sunt compui formai dintr-un lan
polizaharidic legat de un lan polipeptidic. n structura lor ponderea
mare o are componenta glucidic (95%) polizaharide i 5% proteic.
Proteoglicanii sunt specifici celulelor animale i formeaz matricea
esutului conjunctiv. Partea glucidic este reprezentat de
glicozaminoglicani (mucopolizaharide) polimeri liniari de natur
heteropolizaharidic.
n structura lor intr:
- hexoze aminate
- acizi uronici
1. Acid hialuronic
Acidul hialuronic este un polimer linear cu mas molecular
foarte mare, fiind format din acid glucuronic i N-acetilglucozamin,
legate alternativ prin legturi -1,3-glucuronidice i -1,4glucozamidinice. SE ntlnete n esutul conjunctiv, piele, corpul
vitros, cartilagii, lichid sinovial. Legturile glicozidice ale acidului
hialuronic pot fi hidrolizate de ctre hialuronidaza bacterian, ceea ce
duce laalterarea capacitii de filtru selectiv al substanei
fundamentale i la expunerea esuturilor la invazia bacterian.

16

Biochimie farmaceutic

COOH
O
O

OH

O
OH CH3CONH

OH

CH2OH

2. Condroitin-sulfaii sunt glicozaminoglicanii majori din


proteoglicanii cartilagiilor, arterelor, corneei, fiind alctuii din acid
glucuronic i N-acetilgalactozamin legate -1,3-glucuronidic i 1,4-galactomidinic. Numrul mare de sarcini negative din molecula
condroitinsulfailor i consacr un rol de rini schimbtoare de
cationi, avnd un rol important n reglarea homeostaziei
matriceicartilajului i n mineralizarea matricei osoase.
3. Dermatansulfatul este un constituient fundamental al
esutului conjunctiv dermic. Se ntlnete n tendoane, valvele
cardiace, peretele vascular.
4. Heparina
Heparina este un glicozaminoglican ce are o serie de
particulariti funcionale. Heparina este sintetizat n mastocite i n
toate esuturile ce le conin. Aciunea anticoagulant a heparinei s-ar
explica prin abilitatea acesteia de a accentua aciunea de inhibare a
trombinei, manifestat prin antitrombina III. Legarea de heparinei la
antitrombina III induce n molecula acesteia o tranziie allosteric ce
favorizeaz legarea sa la trombin. Heparina joac un rol important i
n procesul de clarificare a plasmei prin aciunea de eliberare n
circulaie a lipoproteinlipazei din pereii capilarelor.

O
COOH
OH

COOH
O

CH2OSO3H
O
O

OSO3H

OH

O
NHSO3H

OH

CH2OSO3H
O
O

OSO3H

OH

O
NHOCCH3
16

Luciana Dobjanschi

Patologia metabolismului glucidic


Desfurarea normal a metabolismului glucidic este
controlat att la nivel molecular prin intermediul enzimelor
reglatoare, ct i la nivel superior, de factorii de reglare cum sunt:
hormonii, sistemul nervos.
Starea de echilibru a metabolismului glucidic este indicat de
glicemie, care reprezint concentraia glucozei din snge. n condiii
fiziologie, la 12 ore de la ultima ingestie alimentar glicemia este
cuprins ntre 80 i 120 mg%. Tulburprile metabolismului glucidic,
mecanism deosebit de complex, se poate manifesta prin
hiperglicemii, iar n form mai avansat prin glicozurie (apariia
glucozei n urin) este diabetul zaharat, care const ntr-o alterare
complex a ntregului metabolism intermediar, ndeosebi a celui
glucidic n corelare cu cel lipidic. Diabetul zaharat implic i
tulburri endocrine grave, mai ales a secreiei insulinei din pancreas.
O alt categorie de tulburri ale metabolismului normal al
glucidelor o constituie sindroamele hipoglicemice, care au la baz
modificri patologice ale activitii principalilor factori de reglare i
control care intervin n metabolismul glucidic, respectiv hormonii
pancreatici, insulina i glucagonul.
n patologia metabolismului glucidic sunt ntlnite i boli de
depozitare ale glicogenului, numite glicogenoze. Acestea sunt boli
congenitale i familiale rare i sunt caracterizate prin depunerea n
diverse esuturi i organe a unor cantiti neobinuite de glicogen.

X.7. Metabolismul altor hexoze


Metabolismul galactozei
Galactoza este o component a catenei oligoglucidice care
intr n constituia unor glicolipide, glicoproteine i
proteoglicani.Deasemenea intr n compiziia lactozei, care este
diglucida din lapte. Galactoza este un important substrat energetic.
16

Biochimie farmaceutic

Schema metabolizrii galactozei


NADH + H+

dulcitol

NAD+
hexokinaza

galactoza

aldoreductaza

ATP
ATP

galactozo-6-fosfat

ADP

galactokinaza (1)
ADP

galactozo-1-fosfat

UDP-glucoza

UDP-galactoza

glicogen

glucozo-1-fosfat

glucozo-6-fosfat
glicoliza

glucoza

Prima etap n metabolismul galactozei o constituie formarea


galactozo-1 fosfatului, sub aciunea unei kinaze, numit
galactokinaza.
CH2
HO

CH2
ATP

O
OH
OH
OH

galactoza

ADP

galactokinaza

HO

O
OH
O

OH
galactozo_ 1 fosfat

16

Luciana Dobjanschi

n continuare Gal-1 fosfatul reacioneaz cu UDP-glu i


formeaz UDP-gal i glucozo-1 fosfat.

HO

CH2OH

CH2OH

O
OH

O
OH

HO

uridil _

transferaza
O UDP

OH

Gal1P

O P
OH

OH

UDP_glu
epimeraza

UDP_gal

O
OH

O UDP HO

OH

OH

CH2OH

CH2OH
HO O

UDP_gal

G1P

UDP_ glu

Aceste reacii au loc n ficat, motiv pentru care viteza de


metaboliare a galactozei reflect capacitatea de funcionare a
ficatului. Acest lucru se folosete n practic prin testul de ncrcare
cu galactoz.
La nivelul glandei mamare UDP-galactoza reacioneaz cu
glucoza sub aciunea enzimei lactozo-sintetaza i formeaz lactoza.
CH2OH

CH2OH
HO O
OH

O
OH

O UDP
OH

HO

OH
OH

CH2OH

CH2OH
HO O
lactozo_sintetaza
OH

O
OH
O

OH

UDP

OH
OH

Dismetaboliile galactozei
Acestea apar ca urmare a deficienei enzimelor care intervin
n metabolismul galactoze. Prin deficiena galactokinazei, prima
enzima de transformare a galactozei apare galactozemia. Aceasta
duce la acumularea galactozei n snge. Acumularea galactozei n
cristalin duce la transformarea acesteia n prezena aldo-reductazei n
galactil, care este responsabil de apariia cataractei.
Prin absena celei de-a doua enzime (uridil-trabsferaza), se
acumuleaz
16

Biochimie farmaceutic

Gal-1P, care este un produs toxic pentru organism. La copii lipsa


acestei enzime este destul de sever, deoarece UDP-gal nu se mai
formeaz. Sugarul prezint tulburri de cretere, iar n lipsa unui
tratament pot aprea afeciuni hepatice, boli mintale, cataracta i
leziuni ale tubilor renali. Galactozemia se trataeaz prin excluderea
galactozei din alimentaie.
Metabolismul fructozei
Fructoza, n urma metabolizrii ei ofer intermediari
metabolici cu importan metabolic major, n special ai glicolizei.
Pentru a putea fi metabolizat fructoza trebuie s fie n prealabil
fosforilat. Fosforilarea poate avea loc cu ajutorul unei hexokinaze
(F6P- calea minor) sau a unei fructokinaze F1P- calea major).
Fructokinaza este o enzim cu afinitae mare pentru fructoz, nu este
dependent de insulin i este influenat de natura dietei, astfel c
fructoza este un zahr care poate fi folosit de ctre diabetici.
Fructozo-1 fosfatul poate fi scindat de o aldolaz (fructoaldolaza) la
DOAP i gliceraldehid (nefosforilat). Gliceraldehida poate s fie la
rndul ei fosforilat la gliceraldehid-3 fosfat n prezen de
gliceraldehidkinaz sau s fie redus la glicerol, n prezena unei
reductaze ce necesit NADH + H +.
Glicerolul rezultat poate s fie fosforilat la glicerol-fosfat de o
glicerol-kinaz. Glicerol-fosfatul la rndul su poate s fie oxidat
printr-o reacie de dehidrogenare cu ajutorul unei gliceroldehidrogenaze cu formare de DOAP. Deci, fructoza se poate integra
n glicoliz pe mai multe ci: calea minor, prin DOAP, prin glicerolkinaz i calea ocolit.

16

Luciana Dobjanschi
NADH+H+NAD+
G
Sorbitol
AR
NAD+
G6P
Sor_DH
NADH +H+
ADP
ATP
F 6P
F
HK
ATP
FK
ADP
F 1,6DP

F1P
FA
GA NADH +H+

DOAP
Ga3P

ADH NAD+
TK

piruvat

ATP
ADP

glicerol
ATP

GK

glicerol_ 3 fosfat
NAD+
ADP
NADH+H+
DOAP

AR- aldozo-reductaza
HK- hexokinaza
FK fructokinaza
FA fructoaldolaza
TK tiokinaza
GK glicerolkinaza

Fructoza se administreaz diabeticilor sub form de perfuzii.


Fructoza se transform n mare parte n glucoz, astfel c n
circulaia posthepatic ajunge o cantitate destul de mic de fructoz,
deoarece se metabolizeaz n glucoz. Apariia -glicerofosfatului ca
metabolit al fructozei, leag metabolismul glucidic de metabolismul
lipidic. Calea de formare a fructozei din glucoz prin intermediul
sorbitolului se numete calea poliol.
16

Biochimie farmaceutic

Glu

AR

Sor

NADH+H+ NAD+

Sor_DH_aza
F
+
NAD
NADH+H+

Aspecte de patologie
Deficiena fructokinazei duce la apariia enzimopatiei numit
fructozurie esenial (nu se fosforileaz fructoza, aceasta se
acumuleaz n snge, apoi trece n urin).
Deficiena de fructozoaldolaz duce la acumularea de
Fructozo-1P, ceea ce provoac intoleran ereditar la fructoz 8boal
Grav). Sugarul prezint tzlbiurri digestive cu formare de emez,
hepatomegalie, icter, uneori moarte. Tratamentul const n excluderea
fructozei din alimentaie pentru toat viaa.
Administrarea de fructoz n perfuzii, n cantiti mari,
precum i a excesului alimentar de zaharoz, duce la ncrcarea
sngelui cu fructoz, care stimuleaz sinteza de grsimi i implicit
rete lipemia.
Patologia metabolismului glucidic
Desfurarea normal a metabolismului glucidic este
controlat att la nivel molecular prin intermediul enzimelor
reglatoare, ct i la nivel superior de factorii de reglare cum sunt:
hormonii, sistemul nervos.
Starea de echilibru a metabolismului glucidic este indicat de
glicemie, care reprezint concentraia de glucoz din snge. n
condiii fiziologice, la 12 ore de la ultima ingestie alimentar,
glicemia este cuprins ntre 80-120mg%. Tulburrile metabolismului
glucidic se pot manifesta prin hiperglicemii sau hipoglicemii. Cea
mai grav maladie care se manifest prin hiperglicemie, iar n forma
cea mai avansat prin glucozurie este diabetul zaharat, care const
ntr-o alterare complex a ntregului metabolism intermediar,
ndeosebi a celui glucidic n corelare cu cel lipidic. Diabetul zaharat
implic ns i tzlburri endocrine grave, mai ales ale secreiei
hormonului insulin din pancreas.
O alt categorie de tulburri ale metabolismului normal al
glucidelor o constituie sindroamele hipoglicemice, care au la baz tot
16

Luciana Dobjanschi

modificri patologice ale activitii principalilor factori de reglare i


control care intervin n metabolismul glucidic, respectiv hormonii
pancreatici: insulina i glucagonul.
n patologia metabolismului glucidic sunt ntlnite i boli de
depozitare a glicogenului, numite glicogenoze. Acestea sunt boli
congenitale i familiale rare i sunt caracterizate prin depunerea n
diverse esuturi i organe a unor cantiti neobinuite de glicogen, cu
structur normal i anormal.

XI. Metabolismul lipidic


Lipidele sunt biomolecule organice, insolubile n ap ce se pot
extrage din celule i esuturi cu solveni organici nepolari. Lipidele au
cteva funcii biologice importante, servind drept:
- componente structurale ale membranelor
17

Biochimie farmaceutic

forme de depozitare i de transport al combustibililor


nveli protector al multor organe
drept componente ale suprafeei celulare implicate n
recunoaterea celular, n specificitatea de specie i
imunitatea tisular.
Unele substane din clasa lipidelor, cum sunt unele vitamine i
hormoni au o important activitate biologic.
Clasificarea lipidelor
Din punct de vedere structural lipidele se mpart n:
- I. Lipide simple : esteri ai acizilor grai cu glicerina
(triacilgliceroli)
- esteri ai acizilor grai cu alcooli superiori
monocarboxilici (ceruri)
II. Lipide complexe: - glicerofosfolipide: esteri ai
glicerinei cu acizi grai, compui azotai i un rest de acid
fosforic
- sfingolipide: conin un alcool
(sfingozina), acizi grai, compui azotai i un rest de acid
fosforic
Exemple: - fosfolipide
- glicolipide
- sulfatide
- aminolipide
- lipoproteine
- III. Derivai ai lipidelor sunt compui rezutai prin
hidroliza lipidelor simple i complexe.
Exemple: - acizii grai: - saturai
- nesaturai
- glicerina
- steroizi
- aldehide grase
- corpi cetonici
Din punct de vedere funcional lipidele se mpart n :
- I. Lipide de rezerv. Acestea sunt localizate n esutul
adipos i sunt constituite n special din trigliceride de
provenien exogen (alimentar)
- II. Lipidele citoplasmatice sunt lipide complexe care
alctuiesc elementul constant care variaz numai n
funcie de natura esutului.
17

Luciana Dobjanschi

XI.1. Structura i proprietile acizilor grai saturai


Acizii grai sunt elemente constitutive ale diferitelor clase de
lipide. n stare liber acizii grai se ntlnesc n cantiti mici n celule
i esuturi. Acizii grai conin un lan de hidrocarbur saturat sau
nesaturat i o grupare carboxilic terminal. Acizii grai din lipidele
plantelor i animalelor superioare cuprind un numr par de atomi de
17

Biochimie farmaceutic

C, n majoritate lanuri formate din 14-22 atomi de carbon. Acizii


grai saturai pot exista ntr-un numr infinit de conformaii datorit
faptului c legatura simpl permite rptaia liber a atomilor de carbon.
Forma cea mai probabil este cea extins, cu un coninut minim de
energie. Acizii grai nesaturai prezint conformaia cis. n cazul
acizilor polinesaturai dublele legturi nu sunt niciodat conjugate.
Acizii grai sunt insolubili n ap, dar solubili n solveni
nepolari, de asemenea ei se solubilizeaz n NaOH i KOH cu
formare de sruri numite spunuri. Acizii grai saturai sau nesaturai
nu absorb lumina nici n vizibil nici n UV. Prin ncalzire cu KOH
acizii grai polinesaturai pot fi izomerizai n acizi grai cu duble
legturi conjugate, form sub care absorb lumina UV ntre 230-260
nm. Acizii grai nesaturai dau reacii de adiie la legtura dubl.
Adiia de halogeni (iod) are utilitate practic n determinarea
numrului de duble legturi din acizii grai liberi sau din acizii grai
care alctuiesc lipidele.
Exemple de acizi grai saturai:
H3C

( CH2)2

COOH

acid butiric

H3C

( CH2)4

H3C

(CH2)6

COOH

H3C

(CH2)8

COOH

H3C

(CH2)10 COOH

H3C

(CH2)12 COOH acid miristic

H3C

(CH2)14

COOH

acid capronic
acid caprilic
acid caprinic
acid lauric

COOH acid palmitic

H3C

(CH2)16

COOH acid stearic

H3C

(CH2)18

COOH acid arahidic

H3C

(CH2)22

COOH acid lignoceric

Acizii grai nesaturai se clasific n:


- acizi monoenoici
H3C (CH2)5 CH CH (CH2)7 COOH acid palmitoleic
H3C (CH2)7 CH
- Acizi polienoici

CH

(CH2)7

COOH acid oleic

17

Luciana Dobjanschi

H3C (CH2)4 CH CH CH2 CH CH (CH2)7 COOH acid linoleic


H3C CH2 CH CH CH2 CH CH CH2 CH CH (CH2)7 COOH acid linolenic

H3C (CH2)4 CH CH CH2 CH CH CH2 CH CH CH2 CH CH (CH2)3 COOH acid arahidonic

Acizii linoleic, linolenic i arahidonic sun acizi grai eseniali.

17

Biochimie farmaceutic

XI.2. Metabolismul acizilor grai saturai


Catabolismul acizilor grai
Acizii grai se degradeaz prin cedarea succesiv a unor
fragmente de 2 atomi de C, n urma unui proces de oxidare ce ar avea
loc la nivelul carbonului din poziia n raport cu gruparea carboxil.
Catabolismul acizilor grai presupune activarea i transportul
acizilor grai saturai n mitocondrie unde are loc oxidarea propri-zis
(-oxidarea).
Activarea acizilor grai se face cu consum de ATP i
participarea CoA cu formare de tioesteri, ce nu penetreaz membrana
intern. Pentru traversarea barierei are loc o transesterificare de pe
CoA pe o molecul carrier numit carnitin.
(CH3)3N+ CH2

CH

CH2

COOH carnitina

OH
Activarea i transportul acizilor grai saturai
Pentru activarea i transportul acizilor grai saturai sunt
necesare anumite enzime: tiokinaze (acil CoA -sintetaze) i acil CoAtransferaze.
Aceste enzime se gsesc n membrana mitocondrial extern,
intramitocondrial precum i n microzomi.
Activarea acizilor grai se realizeaz n membrana
mitocondrial extern, dup care are loc transferul acidului gras
activat cu ajutorul canitinei n mitocondrie, unde pune n libertate
carnitina i acidul gras intr n procesul de -oxidare propriu-zis.
R COOH +ATP +CoASH

tiokinaza

AMP +PP

CO

SCoA

R CO SCoA
aciltransferaza

aciltransferaza

CoA

membrana mitocondriala externa

carnitina

carnitina

acilcarnitina

acilcarnitina

membrana
mitocondriala
interna

oxidarea
CoASH

mitocondrie

17

Luciana Dobjanschi

Oxidarea propriu-zis (- oxidarea)


Procesul de -oxidare sau ciclul lui Lynen se desfoar n
mitocondrie. Etapele procesului de -oxidare sunt urmtoarele:
- dehidrogenarea de tip -
- aditia stereospecific a moleculei de ap
- dehidrogenare
- clivare - (tioliz)
R CH2

CH2

CO SCoA

NAD+
acil_CoA_dehidrogenaza
NADH +H+
R

CH

CH

CH CH2

CO
H2O

CO

LR

SCoA

SCoA

OH
FAD
dehidrogenaza
LR
FADH2
R C CH2
O

CO

3 ATP

2ATP

SCoA

CoASH

tiolaza
H3C CO SCoA
R CO SCoA

TCA

LR

12 ATP

Degradarea acizilor gra prin -oxidare are loc pe o cale


alctuit di 2 reacii de dehidrogenare, ntrerupte de o hidratare i o
scindare prin tioliz, cnd se pierd 2 atomi de C sub form de acetilCoA. Restul obinut, mai scurt cu e atomi de C repet calea pn este
integral degradat la acetil- CoA.
Acidul gras se oxideaz total pn la CO2, ap i energie.

17

Biochimie farmaceutic

Exemplu:
Pentru oxidarea acidului palmitic care este format din 16
atomi de C, acesta trece de 7 ori prin procesul de -oxidare propriuzis, rezultnd la final 7 molecule de acetil-CoA.
Bilanul energetic pentru oxidarea aciduli palmitic este
urmtorul:
Din cele 8 Ac-CoA ----- 8 x 12 ATP = 96 ATP
n fiecare tur de -oxidare se formeaz 5 ATP---- 7 x 5ATP =
35 ATP
n procesul de acticare se consum 1 ATP
Total: 130 ATP / molecul de acid palmitic oxidat.
Pe lng procesul de -oxidare se mai cunosc i alte procese
de oxidare a acizilor grai cum ar fi: -oxidarea i - oxidarea.
Catabolismul acizilor grai cu numr impar de atomi de carbon
Oxidarea acizilor grai cu numr impar de atomi de carbon se
realizeaz dup acelai model ca i -oxidarea i presupune aceleai
etape: activarea, transportul n mitocondrie, integrarea n -oxidare.
n final se ajunge la un rest cu 5 atomi de carbon. Acesta se scindeaz
la acetil CoA i propionil-CoA. Propionil-CoA se transform n
succinil-CoA, care intr n TCA.
CH3

CO2

CH2

H3C
propionil
carboxilaza

CO SCoA

COOH
CH
CO SCoA

mutaza

CH2

COOH

CH2

CO

TCA
SCoA

XI.3. Biosinteza acizilor grai


Biosinteza acizilor grai saturai se realizeaz din acetil-CoA
(precursorul principal). Procesul are loc n toate organismele, dar este
predominant n ficatul, esutul adipos i glandele mamare ale
animalelor superioare. Procesul debiosintez difer de cel al oxidrii
acizilor grai. Biosinteza acizilor grai are loc n citosol, iar oxidarea
lor are loc n mitocondrii. Deasemenea, prezena citratului este
necesar pentru obinerea unor viteze maxime de sintez, dar nu este
cerut pentru oxidarea lor. O alt deosebire o constituie faptul c CO2
este esenial pentru sinteza acizilor grai n extractele celulare, dei
nu este ncoporat n acizii nou sintetizai. Aceste observaii au dus la

17

Luciana Dobjanschi

concluzia c sinteza acizilor grai se realizeaz au un grup de enzime


total diferit de cel folosit la oxidarea acizilor grai.
Reacia de sintez a acizilor grai este catalizat de un sistem
multienzimatic complex din citosol, numit complexul sintetazei
acizilor grai.
Biosinteza acidului palmitic
Precursorul esenial al acizilor grai este acetil-CoA. Totui,
din cele 8 uniti acetil necesare pentru biosinteza acidului palmitic,
numai una este furnizat de acetil-CoA. Restul sunt furnizate sub
form de malonil-CoA, format din actil-CoA i HCO 3- ntr-o reacie
de carboxilare. Restul acetil i cele 7 resturi malonil sunt supuse unor
trepte succesive de condensare care elibereaz 7 CO2 formnd acidul
palmitic.
Ac_CoA

+7 malonil_CoA + 14NADPH +H+

H3C

(CH2)14 + 7 CO2 +8CoA

14NADP

++

6H2O

Singura molecul de Ac-CoA necesar procesului servete ca


iniiator, cei doi atomi de C ai acestei grupri acetil devenind atomii
de C terminali ai acidului format. Creterea lanului acidului gras
ncepe la gruparea carboxil a acetil-CoA i continu prin adiia
succesiv a resturilor acetil la captul carboxil al lanului care crete.
Fiecare rest acetil este obinut dintr-un rest de acid malonic, care
ptrunde n sistem sub form de malonil-CoA. Al 3-lea atom de C al
acidului malonic este eliminat sub form de CO2.
Intermediarii acil al procesului de alungire a lanului sunt
tioesteri, dar nu ai CoA, ca n cazul oxidrii acizilo grai, ci ai unui
conjugat proteic, numit protein acil-transportoare (PTA). Aceast
protein poate forma un complex cu cele 6 enzime implicate pentru
sinteza complet a acidului palmitic. n majoritatea celulelor
eucariotelor, toate proteinele complexului sintetazei acizilor grai
sunt asociate ntr-un grup multienzimatic.
Sursa de atomi de carbon
Principala surs de carbon este acetil-CoA, format n
mitocondrii prin decarboxilarea oxidativ a piruvatului, prin
degradarea oxidativ a unor aminoacizi sau prin oxidarea acizilor
grai cu lanuri lungi. Acetil-CoA nu poate trece ca atare din
mitocondrie n citosol. Citratul format n mitocondrii din acetil-CoA
i oxalil-acetat, poate s treac prin membrana mitocondrial n
citoplasm pe calea sistemului de transport tricarboxilat. n citosol

17

Biochimie farmaceutic

acetil-CoA este regenerat din citrat sub aciunea ATP-citrat liazei,


care catalizeaz reacia:
Citrat + ATP + CoA = acetil-CoA + ADP + Pa + oxalil-acetat
Formarea de malonil-CoA
Malonil-CoA se formeaz din acetil-CoA i bicarbonat n
citosol, prin aciunea acetil-CoA carboxilazei.

H3C CO SCoA

+ HCO 3

COOH
acetil- CoA
+ADP
CH2
carboxilaza
CO SCoA

+ ATP

Pa

Atomul de C al bicarbonatului devine carbonul carboxilic


distal sau liber al malonil-CoA. Acetil-CoA carboxilaza este o
enzim ce conine biotin ca grupare prostetic. Biotina legat
covalent este transportor intermediar al unei molecule de CO 2, ntr-un
ciclu de reacii n dou trepte.
HCO3- H+ ATP

ADP Pa

biotin_enzima

malonil_CoA

carboxi_biotin_enzima

acetil_CoA

Reacia catalizat de acetil-CoA carboxilaza (enzim


allosteric) este etapa reglatoare care limiteaz viteza n cadrul
biosintezei acizilor grai.
Citratul este modulatorul pozitiv al acestei reacii deplasnd
echilibrul ntre monomerul inactiv i polimerul activ, n favoarea
celui din urm.
Reacia acetil-CoA carboxilazei este de fapt mai complex
dect a fost descris anterior. Unitatea monomeric a enzimei conine
4 subuniti diferite. Una dintre aceste subuniti, biotin-carboxilaza
(BC), catalizeaz prima treapt a reaciei totale i anume carboxilarea
resturilor de biotin legat de a doua subunitate, care se numete
proteina transportoare biotin-carboxil (PTBC).

17

Luciana Dobjanschi
Biotin_PTBC HCO3- H+ ATP
carboxibiotin_PTBC H3C

sububitatea BC
carboxi_biotin_PTBC ADP Pa

CO SCoA

subunitatea CT
biotin_PTBC
carboxil
transferaza

COOH
CH2
CO SCoA

Resturile de biotin ale proteinei transportoare de carboxil


servesc ca prghii n transportul ionului bicarbonat de pe subunitatea
biotin-carboxilzei la acetil-CoA, care este legat la situsul activ al
subunitii carboxil-transferazei. Trecerea de la forma monomeric
inactiv a acetil-CoA carboxilazei la forma polimeric activ a
enzimei are loc cnd citratul este legat de cea de-a patra subunitate a
fiecrui monomer.
Reaciile sistemului sintetazei
Dup formarea malonil-CoA, urmeaz sinteza acizilor grai
ntr-o secven de 6 trepte succesive, catalizate de 6 enzime ale
complexului sintetazei acizilor grai. Cea de-a aptea protein din
sistem, nu are activitate enzimatic, ea este protein transportoare de
acil, de care este atat covalent lanul de formare a acidului gras.
Complexul acid gras-sintetazei este un dimer; fiecare
monomer conine 2 grupri SH, una aparine 4-fosfopantoteinei din
ACP (Acyl-Carrier-Protein), a doua unei cisteine din cetoacilsintetazei. Cei 2 monomeri sunt astfel aranjai ct n
apropierea ACP-SH dintr-un monomer se gsete o grupare Cis-SH
din cetoacilsintetaza.
Biosinteza acidului gras ncepe prin legarea unei molecule de
acetil-CoA de gruaprea Cis-SH, catalizat de acetil-transacilaza.
Malonil-CoA se combin cu gruparea SH a 4-fosfopantoteinei
legat de ACP din cellat monomer n prezena malonil-transacilazei.
n continuare acetilul atac gruparea metilen din malonil, reacie
catalizat de -cetoacil-sintetaza cu eliberarea de Co2 i formarea de
-cetoacil enzima. Gruparea SH a cisteinei rmne liber. Prin reacia
de decarboxilare se elibereaz energie necesar condensrii i
desfurrii secvenei de reacii. Gruparea cetoacil legat de enzim
este redus, deshidratat, redus din nou pentru a forma acil enzima
saturat. Reaciile sunt analoage celor din -oxidare, cu deosebirea c
-hidroxiacidul este izomerul D(-), iar donorul este NADPH. n
continuarea a nou grupare malonil atac gruparea SH a
fosfopantoteinei deplasnd restul acil saturat la gruparea SH liber a
cisteine. Secvena de reacii se repet de 7 ori, de fiecare dat fiind
ncorporat un rest malonil, pn la formarea acidului palmitic.
18

Biochimie farmaceutic

Reaciile procesului de biosintez sunt urmtoarele:


(1)
(2)

Cis_SH
Pan_SH

H3C

COSCoA

HOOC CH2

acetiltransacilaza

(1)

Cis

maloniltransacilaza
COSCoA
(2)

S CO CH3

Pan

CO CH2

betacetoacil
sintetaza
COOH

2CoASH
(1) Cis_SH
(2)

CO 2

- cetoacilreductaza

Pan_S CO CH2

CO CH3 NADPH H+

(1) Cis_SH

NADP +

(2)

Pan_S

CO CH2

CH

CH3

OH

hidrataza

Cis_SH

(2)

Pan_S CO

H2O

malonil- transferaza
malonil- CoA

H
C C CH3
H

NADPH H+

(1) Cis_S CO CH2


(2)

Pan_S

CO CH2

CH2

NADP +

(2)

Pan_S

CO CH2

CH2

CH3

CH3

COOH

CoASH

(1) Cis_SH
(2)

(1) Cis_SH

enoil- reductaza

(1)

Pan_S CO

tioesteraza
(CH2)14 CH3

(1)

Cis_SH

(2)

Pan_SH

H3C

(CH2)14 COOH

Ecuaia global de obinere a acidului palmitic este:


8H3C CO SCoA 14 NADPH 14 H+ 7ATP H O
2

H3C (CH2)14 COOH 8CoASH 14NADP+ 7ADP 7P a

Acidul palmitic format pentru a putea fi ncorporat ntr-o cale


metabolic este activat n prezena de tikinaz i ATP la palmitilCoA.
Moleculele de NADPH necesare reaciilor de reducere se
formeaz
prin
oxidarea
glucozo-6-fosfatului
pe
calea
fosfogluconatului.
Etapele ce conduc la biosinteza acizilor grai diferp de cele
implicate n oxidarea acizilor grai astfel:
-

localizarea intracelular
tipul de transportor de grupri acil
forma sub care sunt adugate sau ndeprtate unitile cu 2
atomi de carbon
specificitatea fa de NADP+ a reaciei -cetoacil hidroxiacilului
configuraia stereoizomeric a intermediarului hidroxiacil
sistemul acceptor-donor de e- ai etapei crotonil-butiril
18

Luciana Dobjanschi

rspunsul la citrat i HCO3-.

XI.4. Metabolismul lipidelor simple

18

Biochimie farmaceutic

Biosinteza acilglicerolilor
Acilglicerolii sunt sintetizai de organismul animalelor i
plantelor superioare. Sinteza are loc n majoritatea esuturilor, dar
importan practic prezint ficatul i esutul adipos. Precursorii
pentru sintez sunt glicerol-3-fosfatul i acizii grai activai sub
form de acil-CoA. Glicerina este activat prin fosforilare la glicerol3-fosfat n prezen de glicerolkinaz i ATP. Enzima este prezent n
ficat, rinichi, mucoasa intestinal, glanda mamar n lactaie i este
absent n muchi i esutul adipos. n esuturile n care enzima este
absent sursa de glicerin o formeaz dihidroxiacetonfosfatul,
intermediar din glicoliz. Transformarea dihidroxiacetonfosfatului n
glicerin-3-fosfat se face n prezen de NADH i glicerin-3-fosfat
dehidrogenaza.
CH2

OH

CH OH
CH2

OH

glicerolkinaza
ATP

ADP

CH2

OH

CH OH
CH2

glicerin- 3- fosfat
dehidrogenaza

OP NAD+

NADH H

CH2

OH
glicoliza

C O
CH2

OP

Acizii grai sunt activai prin transformarea lor n derivai de


CoA n prezen de ATP i CoASH,reacie catalizat de tiokinaz.
Astfel n prezen de acil-CoA, glicerin-3-fosfat i transferaze
specifice se formeaz ca intermediar 1,2-diacilglicerolfosfatul (acidul
fosfatidic).
Reacia are loc n 2 trepte. Se observ c acidul fosfatidic este
intermediar att n sinteza acilglicerolilor ct i a fosfolipidelor.
Pentru a fi convertit n triacilglicerin acidul fosfatidic este hidrolizat
n prezena unei fosfataze.
n mucoasa intestinal exist a cale alternativ care pleac de
la 2-monoacilglicerin. Aceasta n prezena unui acil-CoA i a
monoacilglicerinaciltransferazei este convertit la 1,2-diacilglicerin.
Triacilglicerina se formeaz cu participarea diacilglicerintransferazei
i a unei molecule de acil-CoA.

18

Luciana Dobjanschi
CH2
HO

OH

CH2

OP

CH2

glicerol- 3- fosfat
acil- transferaza

R1

HO

CoA

COSCoA

O CO R1

CH2

OP

R2

COSCoA

CoA

acid lizofosfatidic
CH2
R2

CO

O C

H2O

OP

R2

CO

O C

CoA

R2

CO

O C

O CO R1

CH2

CH2

diacilgliceril
aciltransferaza
COSCoA

fosfohidrolaza

CH2

R3

CH2

O CO R1

OH

O CO R1

CH2

CO R3

n esuturile n care este absent glicerina se pornete de la


dihidroxiacetonfosfatul rezultat din glicoliz.
CH2 OH

CH2 OH
C

CH2 OP

NADH H+

HO
NAD+

T AG

C H
CH2 OP

R1 SCoA
CoA

CH2 OCO

CH2 OCO R1
C

HO

CH2 OP

NADH

H+

NAD+

R1
TAG

CH2 OP

Catabolismul triacilglicerolilor
Primul pas n degradarea triacilglicerolilor l constituie
hidroliza legturii ester (lipoliza) n prezena unor nzime numite
lipaze. Se cunosc triglicerolipaze deosebite prin localizare i funcie.
Exemplu:
- lipaza pancreatic este localizat n sucul pancreatic i
ajut la digestia triacilglicerolilor din alimentaie
- lipaza hormon sensibil este localizat n adipocite i
servete la mobilizarea lipidelor
- lipoproteinlipaza este localizat n capilare i ajut la
utilizarea triacilglicerolilor n lipoproteine
18

Biochimie farmaceutic

lipaza hepatic este localizat n ficat i are rol n


catabolismul lipoproteinelor.
n esutul adipos hidroliza triacilglicerolilor are semnificaie
cantitativ i reprezint procesul de mobilizare a lipidelor cu
eliberarea acizilor grai liberi n plasm. Acetia sunt captai de
esuturi i utilizai n scop energetic sau pentru sinteza lipidelor
proprii. esutrul adipos conine mai multe lipaze. Hormonii au rol
lipolitic (catecolaminele), acioneaz prin intermediul c-AMP printrun mecanism analog cu cel responsabil de stimularea glicogenolizei.
Lipoliza este un proces hidrolitic care se desfoar n trepte.
CH2

OCO R1

CH OCO R2
CH2

OCO R3

T AG

CH2
lipaza
R1COOH

CH OCO R2
CH2

CH2

OH

OCO R3

DAG

lipaza
R2COOH

OH

CH

OH

CH2

OCO R3

MAG

lipaza
R3COOH

CH2

OH

CH

OH

CH2

OH

Glicerol

Etapa limitant de vitez este reacia de ndeprtare a primului


rest de acid gras dinTAG, catalizat de lipaza adipolitic sau lipaza
hormon-dependent.

18

Luciana Dobjanschi

XI.5. Metabolismul lipidelor complexe


Biosinteza glicerofosfolipidelor
Acidul fosfatidic este precursor comun pentru dou ci
separate n biosinteza glicerofosfolipidelor:
1. O cale n care acidul fosfatidic se activeaz cu CTP i
formeaz CDP-diacilglicerina, care apoi reacioneaz cu
componenta polar (mioinozitol, serina, fosfatidilglicerina)
formnd glicerofosfolipidele respective.
2. O a doua cale n care acidul fosfatidic sub aciunea
fosfohidrolazei pierde fosfatul i trece n 1,2-diacilglicerol,
care reacioneaz apoi cu formele activate ale bazelor cu
formare de cefaline i lecitin
n ambele ci citidin-trifosfatul are rol de activator.
1. Biosinteza glicerofosfolipidelor plecnd de la acid fosfatidic
Aceast cale este specific bacteriilor, dar este utilizat i de
esuturile animal n special pentru biosinteza cardio-lipinei i a
fosfatidilinozitolului. Activarea acidului fosfatidic cu citin-trifosfat
(CTP) are loc sub aciunea fosfatidil-citidil-transferazei.
CH2
R2

OCO R1

COO CH
CH2 OPO3H2

CH2
fosfatidil- citidil
transferazei
R2 COO CH
CTP
PP

CH2

OCO R1
O
O P
OH

O
O P O citidil
OH

CDP- diacilglicerina

n bacterii CDP-diacilglicerina reacioneaz cu gruparea OH a


serinei i formeaz fosfatidilserina.

18

Biochimie farmaceutic
CH2 OCO R1
R2

COO CH

HO

CH2

CH COOH
NH2

O P O citidil

CH2 O P
OH

CMP

OH

CH2 OCO R1
R2

COO CH

CH2 O P O CH2 CH COOH


OH

NH2

fosfatidilserina

Fosfatidilserina printr-o reacie de decarboxilare trece n


fosfatidiletanolaminei (cefalina), care mai departe n urma unui
proces de metilare formeaz fosfatidilcolina (lecitina).
CH2 OCO R1
R2 COO CH

PALPO

CH2 O P O CH2
OH

CO2
CH COOH

CH2 OCO R1
R2 COO CH

CH2 O P O CH2 CH2 NH2


OH
cefalina

NH2

fosfatidilserina
CH2 OCO R1
R2 COO CH
3SAM

3SAH

CH2 O P O CH2 CH2 N+(CH3)3


OH
lecitina

CDP-diacilglicerolul reacioneaz cu inozitolul n prezena


CDP-diacilglicerol-inozitol-transferazei formnd fosfatidilinozitolul.

18

Luciana Dobjanschi

OHOH
HO

CH2 OCO R1
R2COO CH
CH2

O P O P citidil
OH

OH

CH2 OCO R1
R2COO CH
CH2

HO

OH
OH
inozitol

CMP

OHOH

O
O P O
OH

fosfatidilinozitolul

HO
OH
OH

Prin fosforilarea gruprilor OH din inozitol n prezen de


ATP i o unei kinaze rezult formele fosforilate: fosfatidilinozitol-4fosfat i fosfatidilinozitol-4,5-bifosfat. Ultimul este considerat
mesager de ordinul II care sub aciunea unor efectori (hormoni
neurotransmitori) determin rspunsuri specifice la nivel celular.
Cardiolipina se gsete n mitocondrii, cloroplaste i bacterii.
Se sintetizeaz de la CDP-diacilglicerol care reacioneaz cu glicerin3-fosfat i formeaz fosfatidilglicerolfosfat. Acesta sub aciunea unei
fosfataze pierde fosfatul formnd fosfatidilglicerina care este
precursorul cardiolipinei. Fosfatidilglicerolul reacioneaz cu o no
molecul de CDP-diacilglicerol i formeaz difosfatidilglicerolul.

18

Biochimie farmaceutic
CH2
R2COO CH
CH2

CH2

OCO R1
O

O
citidil

O P O P
OH

OH

CH OH O
CH2

CMP

O P OH
OH

OH
O

R1 COO CH2
R2

COO CH
CH2

CH2 O P
O

OH fosfatidilglicerolfosfataza

CH OH OH

H2O

O P O CH2

OH
fosfatidilglicerolfosfat
CDP_diacilglicerol

R1 COO CH2
R2

COO CH
CH2

CMP

O
O P O CH2

OH
fosfatidilglicerol

CH CH2

OH

OH

R1 COO CH2
R2

CH2

COO CH
CH2

H3PO4

O
O P O CH2
OH

OCO R1

CH OCO R2

CH CH2 O P O CH2
OH

OH

cardiolipina

2. Biosinteza glicerolfosfolipidelor plecnd de la 1,2-diacilglicerol


Pe aceast cale se sintetizeaz lecitina i cefalina n esuturile
animale. n acest caz acidul fosfatidic pierde radicalul fosfat i se
transform n 1,2-diacilglicerin care este acceptorul de fosforil-baz.
Rolul CTP este de a activa bazele azotate.

18

Luciana Dobjanschi

Biosinteza fosfatidilcolinei i foafatidiletanolaminei


n prima etap bazele (etanolamina i colina) se fosforileaz
n prezen de ATP i a unei kinaze specifice, apoi reacioneaz cu
CTP formnd CDP-colina, respectiv CDP-etanolamina. n ultima
etap baza fosforilat este transferat pe diacilglicerol cu formarea
fosfolipidei i eliberarea CMP.
O
HO CH2

CH2

colinkinaza

N (CH3)3

ATP

O
fosfocolin_citidil_
transferaza CDP O P
CTP

PP

fosfocolin_diacil_
transferaza
R2
CMP
1,2- diacilglicerol

OH

ADP

P O CH2

CH2

N+(CH3)3

OH

O
O

P O CH2

CH2

N+(CH3)3

OH
CH2

COO

HO

CH

OCO R1
O

CH2 O P O CH2

CH2

N+(CH3)3

OH

Aceast cale de sintez a lecitinei se mai numete i cale de


recuperare, deoarece lecitina provenit din alimente n urma
catabolismului elibereaz colina, care poate fi reciclat n acest sens.
n esuturile animale lecitina se formeaz i prin metilarea
succesiv a fosfatidiletanolaminei sub aciunea unui donor de metil
(SAM), care trece n SAH. Metilarea are loc n ficat avnd ca substrat
unic fosfatidiletanolamina (cefalin) i depinde de disponnibilitatea
fa de SAM.

19

Biochimie farmaceutic
NH2

CH2 OCOR1
N

3
N

CH

OCOR2
O
O CH2 CH2 NH2

CH2 O P
O

CH2

S+

CH3

OH

(CH2)2
OH OH

CH NH2
COOH

SAM
NH2

CH2 OCOR1

N
+

3
N

N
O

CH2 S
(CH2)2

OH OH
SAH

CH

OCOR2
O

CH2 O P

O CH2 CH2 N+(CH3)3

OH
lecitina

CH NH2
COOH

Biosinteza fosfatidilserinei
n esuturile animale sinteza fosfatidilserinei const n
nlocuirea enzimatic a etanolaminei din cefalin cu serina. Reacia
este reversibil ntruct fosfatidilserina se poate decarboxila i reface
fosfatidiletanolamina. Fosfatidiletanolamina n continuare se
metileaz i formeaz lecitina.
Toate aceste transformri au drept scop formarea de lecitin pentru
sistemul nervos i creier, care necesit cantiti sporite de lecitin.
Catabolismul glicerofosfolipidelor
Degradarea glicerofosfolipidelor este un proces complex
catalizat de enzime numite fosfolipaze. Locul de aciune a
fosfolipazelor asupra diferitelor legturi din molecula substratului.
Exemplu:
19

Luciana Dobjanschi

A1
CH2
R2

OC

A2

CH

CO R1
O D

CH2

baza

C OH
Fosfolipaza A1 scindeaz legtura ester din poziia 1 a
fosfolipidei elibernd acidul gras. Fosfolipaza A 2 acioneaz asupra
legturii ester din poziia 2 elibernd acidul gras nesaturat. Prin
ndeprtarea unui acid gras din glicerofosfolipide rezult
lizoglicerofosfolipide, care sunt intermediari n metabolismul
glicerofosfolipidelor. n general se gsesc n concentraii mici n
celule i esuturi, n concentraii mari sunt toxice i au aciune
distructiv asupra membranelor datorit proprietii lor tensioactive.
Asupra lizofosfolipidelor acioneaz fosfolipaza B sau
lizofosfolipaza care ndeprteaz acidul gras rmas i formeaz
glicerol-fosforil-baza.
Fosfolipaza C atac legtura ester din poziia 3 elibernd 1,2diacilglicerolul i baza fosforilat.
Fosfolipza D hidrolizeaz baza i elibereaz acid fosfatidic. n
urma acestei reacii este posibil schimbul de baze prin transfer ntre
fosfolipide.
Scindarea difritelor pri componente ale fosfolipidelor se
face cu viteze diferite, astfel c degradarea parial poate fi urmat de
resintez. De xemplu, catabolismul lecitinei poate avea loc pe mai
multe ci: o cale important const n hidroliza de ctre fosfolipaza
A2 a acidului gras din poziia 2 cu formare de lizolecitin, care fie c
este reciclat, fie c sufer catabolism n continuare pn la
glicerolfosfat i colin. Lizolecitina se poate forma i pe o cale
alternativ care implic lecitin-colesterol-aciltransferaza (LCAT).

lecitina + colesterol

LCAT

lizolecitina + colesterol esterificat

Enzima se gsete n plasm i probabil n ficat i transfer


acidul gras din poziia 2 a lecitinei pe colesterol, formnd colesterol
esterificat la nivelul lipoproteinelor plasmatice.
19

Biochimie farmaceutic

Fosfolipaza A2 care scindeaz acidul gras nesaturat din poziia


2 furnizeaz astfel acizi grai nesaturai pentru sinteza
prostaglandinelor, tromboxanilor i leucotrienelor. n pancreatita
acut fosfolipaza A2 trece n snge unde transform lecitinele n
lizolecitine a cror proprieti hemolizante stau la baza anemiilor din
pancreatite.
Fosfolipaza B care scindeaz acizii grai din poziia 1 sau 2 a
lizofosfolipidelor are rol i n resinteza fosfatidilcolinei, conform
urmtoarei reacii:
lizofosfatidilcolina + acil- CoA

fosfatidilcolina + CoASH

Toxinele bacteriene conin fosfolipaza C care degradeaz


lecitinele la digliceride i fosfocolin.

19

Luciana Dobjanschi

XI.6. Metabolimul sfingolipidelor


Sfingolipidele sunt lipide complexe care se gsesc n cantiti
mari n creier i esut nervos. Toate au ca unitate structural ceramida
(format dintr-un aminoalcool, sfingozina, i un acid gras) precum i
o component polar. n funcie de componenta polar se clasific n:
- sfingomieline care conin ca grupare polar fosforilcolina
sau fosforiletanolamina
- glicosfingolipide care au ca grupare polar una sau mai
multe oze.
Exemplu:
Prin acilarea gruprii amino din sfingozin cu un acid gras cu
catena lung rezult N-acilsfingozina sau ceramida.
H3C

(CH2)12 CH CH CH CH

CH2OH

COSCoA

OH NH2
sfingozina
H3C

(CH2)12 CH CH CH CH

CH2OH

CoASH

OH NH CO R
ceramida
Alte exemple de sfingolipide:
Sfingomielina, cerebrizidele, sulfatidele i gangliozidele.
Degradarea sfingolipidelor
Sfingolipidele sunt degradate de ctre sfingomielinaz, o
enzim care ndeprteaz restul de fosforilcolin. Cerebrozidele i
gangliozidele sunt hidrolizate de ctre hidroxilaze, care ndeprteaz
cte un rest de oz de la capetele nereductoiare ale lanului glucidic.
Arilsulfatazele ndeprteaz resturile sulfat din molecule.
Toate acestea sunt enzime lizozomale a cror deficit determin boli
lizozomale. Aceste boli se caracterizeaz prin acumularea n
esuturile substratului de lipde a cror enzime de degradare sunt
deficitare i se numesc sfingolipidoze.
19

Biochimie farmaceutic

XI.7. Metabolismul colesterolului


Colesterolul este un sterol major n organism i se gsete n
cantitate mare n ficat, piele, creier, sistem nervos, corticosuprarenal,
aort. Colesterolul intr n structura memebranelor celulare i a
lipoproteinelor plasmatice i este punct de plecare pentru biosinteza
acizilor biliari, a hormonilor steroizi i a vitaminei D3.
Colesterolul din organism este de origine exogen i
endogen. Colesterolul exogen provine din alimentaie (0,3g/zi),
(glbenu de ou, carne, ficat, creier, unt=, iar colesterolul endogen
provine prin biosintez.
Schema metabolizrii colesterolului

formarea membranelor
alimente

colesterol

vitamina D3
acizi biliari

hormoni steroizi
colesterol sintetizat
esteri ai colesterolului
(lipoproteine plasmatice)

Din colesterolul sintetizat 50% se transform n acizi biliari,


care sunt excretai n bil. O parte se transform la nivelul pielii n
vitamina D3, la nivelul corticosuprarenalei n hormoni steroizi i intr
n structura membranelor. Excesul se excret ca atare, mai nti n
bil, apoi n intestin unde sub aciunea florei bacteriene se tranform
n coprostanol i colestanol, care se elimin prin fecale.
Biosinteza colesterolului
Toate esuturile ce conin celule nucleate au capacitatea de a
sintetiza colesterol, dar cele mai active sunt ficatul, pielea i aorta.
Biosinteza colesterolului este un proces complex, care const dintr-un
numr mare de reacii ce se transform n faza solubil a citoplasmei
i n microzomi.
Procesul de biosintez a colesterolului se desfoar n etape,
i anume:
1. transformarea acetil-CoA n acid mevalonic
2. transformarea acidului mevalonic n scualen
3. transformarea scualenului n colesterol.
19

Luciana Dobjanschi

n biosinteza colesterolului singura surs de atomi de carbon


este acetil-CoA. Reaciile se desfoar n faza solubil a citoplasmei
i reaciile sunt catalizate de enzime, care n marea lor majoritate sunt
ataate de RE i necesit prezena unor cofactori i coenzime: NADH,
ATP, CoA.
Etapele biosintezei colesterolului
1. Formarea acidului mevalonic din acetil-CoA
Acidul mevalonic se formeaz prin condensarea a 3
molecule de acetil-CoA. n prima etap se condenseaz numai 2
molecule de acetil-CoA n prezena cetotiolazei, formnd
acetoacetil-CoA. n continuare are loc condensarea acetoacetil-CoA
cu a treia molecul de acetil-CoA n prezena hidroxi,-metilglutaril-CoA-sintetazei (HMG-CoA-sintetaza) i formeaz HMGCoA. Mai departe gruparea carboxilic legat de CoA este redus la
grupare hidroxilic, cu eliminare de CoA. Reacia are loc n prezena
unui sistem multienzimatic catalizat de HMG-CoA-reductaza, care
necesit NADPH + H+, ca donor de hidrogen. Reacia catalizat de
HMG-CoA-reductaza este etap limitant de vitez sau etap
reglatoare n procesul de biosintez a colesterolului. Cnd
colesterolul se acumuleaz n cantitate prea mare n celul nhib
sinteza de HMG-CoA-reductaza.
2H3C CO SCoA

tiolaza

H3C CO CH2 CO

H3C CO CH2 CO

SCoA

SCoA

H3C CO SCoA

CoASH

HMG_CoA sintetaza

OH
HOOC CH2 C CH2 COSCoA
CH3
OH
HOOC CH2 C CH2 COSCoA

+ 2NADPH + 2H+

HMG_CoA reductaza

CH3
OH
HOOC CH2 C CH2 CH2 OH
CH3

19

2NADP

+ +

CoASH

Biochimie farmaceutic

2. Transformarea acidului mevalonic n scualen


Acidul mevalonic se fosforileaz n 3 etape. n prima
etap n prezen de ATP i mevalonatkinaz are loc formarea de acid
5-fosfomevalonic. n a 2-a etap sub aciunea fosfomevalonatkinazei,
acidul mevalonic trece n acid 5-pirofosfomevalonic. Cea de-a treia
fosforilare are loc n poziia 3 i rezult acid 3-fosfo-5pirofosfomevalonic. Acesta este un compus instabil care se
decarboxileaz i pierde o grupare fosfat i rezult
izopentenilpirofosfat.. 3-izopentenilpirofosfatul se izomerizeaz la
3,3-dimetilalilpirofosfat
sub
aciunea
izopentenilpirofosfatizomerazei.
Dimetilalilpirofosfatul
se
condenseaz
cu
izopentenilpirofosfatul
sub
aciunea
geranilpirofosfatsintetazei i formeaz geranilpirofosfatul(10atomi de
C). n continuare geranilpirofosfatul se condenseaz cu o nou
molecul de izopentenilpirofosfat i rezult farnezilpirofosfat (15
atomi de C). Prin condensarea reductiv a 2 molecule de
farnezilpirofosfat la capetele pirofosfatice rezult scualen (30 atomi
de C).
OH

mevalonatkinaza

HOOC CH2 C CH2 CH2

OH

CH3

HOOC CH2 C CH2 CH2

ATP

O
OH
O
OH

H2C C CH2 CH2 O P


CH3

OH

ATP

OH
O

O P O P OH

CH3
O

pirofosfomevalonat
kinaza (Mg+)

O P O P OH

OPO3H2

OH

OH

ADP

pirofosfomevalonat
decarboxilaza
CO 2 + H3PO4
O

O
O P OH

OPO3H2

CH3

ADP

fosfomevalonat
OH
kinaza
HOOC CH2 C CH2 CH2
ATP ADP
CH3

HOOC CH2 C CH2 CH2

OH

H3C C CH CH2 O P O
CH3

OH

O
P OH
OH

19

Luciana Dobjanschi
CH3

C
H3C

CH3

CH2 O P O P OH +
CH

OH

H2C

OH

CH2

geranilpirofosfat
sintetaza

CH2 O P O P OH
PP

OH

OH
CH3

C
CH

H3C

CH3

CH3
CH2

H2C

CH2

OH

CH2 O P O P OH

C
CH2 CH

OH

PP

OH

OH

CH2 O P O P OH

geranilpirofosfat
CH3
farnezilpirofosfat CH3
CH3
sintetaza
C
CH2
CH2 C
C
CH2 O
H3C CH
CH2 CH
CH2
CH

P O P OH
OH

OH

farnezilpirofosfat
CH3

CH3
2

H3C

C
CH

CH2

CH2 CH

CH3
C
H3C

CH3
CH2

CH

C
CH2

CH

C
CH2

CH

P O P OH

CH2 O

OH

OH

CH3

CH3
CH2

CH2

C
CH2

CH2
CH

CH
CH2

CH2

CH3

CH
CH2

CH2

CH3

CH
CH3
CH2 C
CH3

scualen

3. Transformarea scualenului n colesterol


Scualenul n urma ciclizrii formeaz primul sterol,
lanosterolul. nainte de nchiderea ciclului, scualenul se hidroxileaz
n poziia 3 sub aciunea unei monooxigenaza formnd 2,3-epoxidul
scualenului.

19

Biochimie farmaceutic

O2

O
2,3_epoxidulscualenului

scualen

HO
lanosterolul

Lanosterolul conine 3 grupri metil n plus fa de colesterol.


Gruprile metil sunt oxidate de ctre un sistem hidroxilazic
microzomal ce necesit O2 i NADPH i sunt ndeprtate sub form
de CO2. Compusul rezultat este zimosterolul (C27 ), care difer de
colesterol prin poziia legturii duble din nucleul B i printr-o
legtur dubl la catena lateral.
Prin dehidrogenare i deplasarea dublei legturi, zimosterolul
trece n 7-dehidrodesmosterol, care este precursorul desmosterolului
i a 7-dehidrocolesterolului, care sunt precursorii colesterolului.

HO
lanosterol

HO
zimosterol

HO
7_dehidrodesmosterol

19

Luciana Dobjanschi

HO
NADPH +H+

7_dehidrodesmosterol

NADPH +H+

NADP +

NADP +

HO

HO
7_dehidrocolesterol
NADPH +H+

desmosterol
NADPH +H+
NADP +

NADP +

HO
colesterol

Reaciile de transformare ale scualenului n colesterol sunt


catalizate de enzime microzomale i necesit n plus prezena a dou
proteine din faza solubil a citoplasmei, numite proteine
transportoare de scualen, respectiv de steroli. Rolul lor este de a
forma complci solubili cu sterolii facilitnd astfel reaciile din
mediul apos din celul.
Dac am face bilanul biosintezei colesterolului am constata
c este un proces consumator de energie i echivaleni reductori.
Astfel pentru sinteza unui mol de colesterol se consum 18 moli de
acetil-CoA, 16 moli NADPH i 36 legturi macroergice de ATP.
Colesterolul eliberat este utilizat de ctre celul, n general,
pentru sinteze de membrane, iar n celulele specializate este utilizat i
n alte scopuri: sinteza de acizi biliari n ficat, hormoni steroizi n
corticosuprarenal, hormoni sexuali n gonade.

20

Biochimie farmaceutic

Cantitatea de colesterol eliberat de LDL determin viteza


metabolismului colesterolului, reglarea la nivel celular, astfel, excesul
de colesterol acumulat n celul acioneaz prin 3 mecanisme
importante:
1. nhib sinteza de novo, adic reduce capacitatea celulei de a
sintetiza colesterol, prin nhibarea sintezei enzimei HMGCoA reductaza, n lipsa cruia celula va utiliza numai
colesterol extracelular introdus prin receptori.
2. Colesterolul extras din LDL faciliteaz stocarea lui n celul
prin activarea enzimei acil-colesterol-aciltransferazei(ACAT),
care esterific colesterolul n exces n vederea depunerii lui
sub form de picturi n citoplasm.
3. Acumularea colesterolului nhib prin mecanism feed-back
sinteza de noi receptori pentru LDL. nhibarea are loc la
nivelul biosintezei proteinelor n etapa transcrierii.
Absorbia i transportul colesterolului
Colesterolul exogen provine din alimente de natur animal n
care se gsete liber i esterificat. Raia zilnic a unui adult conine
0,6-1,2g colesterol, din care se absoarb 0,3-0,4g/zi. Cnd concentraia
lui din hran este mai mic, absorbia este mai eficient i invers.
Cnd se urmrete scderea absorbiei colesterolului la persoane la
persoane cu hipercolesterolemie, se impun restricii severe, adic o
scdere a colesterolului din diet pn la 0,1-0,3g/zi. Spre deosebire
de colesterol, sterolii vegetali nu se absorb, ei sunt total excretai de
lumenul intestinal.
In lumenul intestinal colesterolul din hran este ncorporat n
agragate micelare mixte formate din acizi biliari, fosfolipid i
colesterol. Colesterolul esterificat la nivelul micelelor este hidrolizat
de ctre colesterol-esteraza pancreatic, deoarec numai colesterolul
liber este absorbit de ctre celulele mucoasei intestinale. O parte din
colesterolul este reexcretat n intestinul subire i eliminat prin fecale.
Cea mai mare parte din colesterolul absorbit mpreun cu cel
sintetizat n intestin, se esterific n celulele mucoasei intestinale sub
aciunea ACAT (acil-colesterol-aciltransferazei), enzim ce transfer
un acid gras activat pe colesterol.
Colesterolul liber i esterificat este integrat n chilomicroni,
lipoproteine mari, ncrcate cu trigliceride. Chilomicronii ajung n
snge i la nivel extrahepatic (esut adipos i muscular) descarc
trigliceridele cu ajutorul lipoprotein-lipazei din endoteliul capilar.
20

Luciana Dobjanschi

Chilomicronii reziduali ce conin esteri ai colesterolului i colesterol


sunt captai de ctre ficat unde esterii sunt hidrolizai.
Ficatul sintetizeaz probeta-lipoproteinele sau VLDL, care
conin trigliceride i colesterol esterificat. Cnd VLDL traverseaz
vasele capilare ale esutului adipos i muscular cedeaz trigliceridele,
iar particulele rmase, de talie mic, ce conin esteri ai colesterolului
sunt aa-numitele lipoproteine cu densitate intermediar (IDL).
IDL dispar rapid din circulaie, n aproximativ 2-6 ore de la
formarea VLDL, n urma interaciunii lor cu ficatul. Acesta extrage
colesterolul din Idl i-l utilizeaz pentru sinteza de VLDL i acizi
biliari. Lipoproteinele Idl care nu sunt utilizate de ctre ficat rmn n
circulaie i dup un timp apoi se disociaz i devin beta-lipoproteine.
IDL reprezint fraciunea care conine cea mai mare proprie
de colesterol. Transportul colesterolului de la esuturile extrahepatice
la ficat se face de ctre lipoproteine (HDL), care se sintetizeaz n
ficat i intestin. La nivelul HDL are loc esterificarea colesterolului
din plasm printr-o reacie de transesterificare ntre acidul gras din
poziia 2 a lecitinei i colesterol. Reacia este catalizat de LCAT.
Esterii colesterolului de pe HDL sunt transferai pe LDL, apo pe IDL
pentru a fi reciclai. HDL sunt apoi catabolizate de ctre ficat i
intestin. HDL i LCAT au rolul de a purifica esuturile extrahepatice
de colesterol.
n final, tot colesterolul este destinat excreiei n ficat, apoi
excretat n bil, fie ca atare, fie ca acizi biliari.
Concentraia normal de colesterol plasmatic la adult este n
medie de 200mg%. Exist variaii n funcie de vrst, sex (mai
crescut la brbai dect la femei pn la menopauz), n funcie de
alimentaie i variaz de la un individ la altul.
Aproximativ 65% din colesterolul plasmatic se gsete sub
form esterificat. Determinrile de colesterol se fac jeun, adic la
12-14 ore de la ultima mas, cnd n mod normal n plasm nu exist
chilomicroni i exist puine probeta-lipoproteine (VLDL). n aceste
condiii colesterolul este coninut n cea mai mare parte n fraciunea
LDL i HDL.
Creterea colesterolului plasmatic sau hipercolesterolemia
apare n diferite boli cum sunt: hipercolesterolemia familial i
aterosclerpoza.
Hipercolesterolemia familial este o boal genetic ce se
caracterizeaz prin creterea beta-lipoproteinelor i a colesterolului n
plasm.
Ateroscleroza este o boal ce se caracterizeaz prin depunerea
de colesterol esterificat pe pereii arterelor sub form de plci numite
20

Biochimie farmaceutic

ateroame. Acest fapt duce la ngustarea lumenului capilarelor i n


cele din urm la apariia infarctului.
Catabolismul colestrolului
Degradarea nucleului steranic n compui simpli nu are loc n
organism, el se elimin sub form de derivai ai steranului, inactivi
biologic. Astfel, n funcie de esut, colesterolul sufer urmtoarele
transformri:

colesterol

intestin

steroli neutri

ficat

acizi biliari

coprostanol
colestanol

piele

7- dehidrocolesterol(provitaminaD3)
corticosuprarenale
hormoni steroizi
Sterolii neutri
O parte din colesterolul exogen se excret ca atare prin
intestin, fr s fie absorbit. O alt parte se transform n intestinul
gros sub aciunea florei bacteriene n steroli neutri: coprostanol i
colestanol, care se elimin prin fecale.
Acizii biliari
Formarea acizilor biliari primari are loc n ficat, prin
introducerea grupelor hidroxil n molecula colesterolului i scindarea
catenei laterale. n urma acestei transformri (hidroxilare ni
scindarea catenei laterale) rezult acizii biliari sub form activat cu
CoA i anume: colil-CoA i chenodezoxicolil-CoA. Urmeaz apoi
conjugarea cu glicocolul i taurina cu formarea de acizi biliari
primari:
- glicocolic, glicochenodezoxicolic
- taurocolic, taurochenodezoxicolic
Acizii biliari sunt excretai n bil unde datorit mediului
alcalin vor forma sruri biliare de Na i K.

20

Luciana Dobjanschi
OH
COOH

COOH

OH

HO

OH

HO

acid chenodezoxicolic

acid colic

Din bil acizii biliari sunt deversai n intestin. La nivelul


intestinului o parte din acizii biliari primari sunt transformai sub
aciunea florei bacteriene n acizi biliari secundari. Aceste
transformri constau din conjugarea prin hidroliza glicocolului i a
taurinei i ndeprtarea gruprii OH din poziia 7. Astfel acidul colic
trece n acid dezoxicolic, iar acidul chenodezoxicolic trece n acid
litocolic.
OH
COOH

COOH

HO
acid dezoxicolic

HO
acid litocolic

n condiii normale un om sintetizeaz 200-500mg acizi acizi


biliari pe zi. Rata sintezei este reglat de cantitatea de acizi biliari
care se rentorc din intestin n ficat, pentru a se nlocui pierderile de
acizi biliari eliminai prin intestin. n acest fel, rezervorul de acizi
biliari rmne constant.
Acizii biliari primari i secundari din intestin sunt reabsorbii
n proprie de 99% i se rentorc prin circulaia portal la ficat. De la
ficat sunt reexcretai n bil, apoi n intestin, efectund aa-numitul
ciclu enterohepatic. n condiii normale zilnic parcurg acest ciclu 35g acizi biliari din care numai 1% sunt excretai prin fecale.
Funciile acizilor biliari sunt urmtoarele:
- Datorit proprietilor tensioactive, acizii biliari au rol n
emulsionarea grsimilor la nivelul intestinului, favoriznd
20

Biochimie farmaceutic

digestia i absorbia lor, precum i a vitaminelor


liposolubile: A, D, E i K.
Acizii biliari activeaz lipaza pancreatic i
colesterolesteraza pancreatic. Deasemenea mpreun cu
lecitinele contribuie la solubilizarea colesterolului sub
form de micele din bil.
Acizii biliari au aciune coleretic, de stimulare a secreiei
biliare i aciune colagog, de contracie a vezicii biliare.

Biotransformareacolesterolului n vitamina D3
Colesterolul la nivelul pielii se transform n 7dehidrocolesterol sau provitamina D3, care sub aciunea radiaiilor
UV formeaz vitamina D3. Vitamina D3 sau colecalciferolul face
parte din grupul vitaminelor D, substane liposolubile care au aciune
antirahitic la copil i previn osteomalacia la adult.
Vitamina D se formeaz prin iradiere cu lumina UV a
sterolilor nesaturai din plante i animale. Astfel, din ergosterol
rezult ergocalciferolul sau vitamina D2, iar din 7-dehidrocolesterol
rezult colecalciferol sau vitamina D3.

UV

HO

HO
vitamina D2

ergosterol

UV
HO

HO
7_dehidrocolesterol

vitamina D3

20

Luciana Dobjanschi

Omul are 2 surse de vitamine: una exogen din alimente i


una endogen din fotoliza 7-dehidrocolesterolului din piele.
Vitaminele D2 sau D3 din alimente se absorb la nivelul
intestinului sub form de micele, apoi este transformat n snge de o
globulin specific i ajunge la ficat. n ficat vitamina D3 este
hidroxilat n poziia 25 de ctre o hidroxilaz specific, rezultnd
calciferol, care este metabolitul principal din circulaie.

20

Biochimie farmaceutic

XI.8. Acizii grai eseniali (AGE)


Importana acizilor grai eseniali n alimentaie afost subliniat
de la nceputul secolului prin experiene pe animale. Carena se
manifest prin tulburri de cretere, reproducere, dermatite, rezistena
sczut la stres i unele deficiene n transportul lipidelor.
Acizii grai eseniali ndeplinesc n organismun rol multiplu,
nc incomlet recizat. Pe lng faptul c sunt surse de eicosanoide, ei se
gsesc n lipidele structurilor celulare, sunt implicai n meninerea
integritii membranei mitocondriale. De asemenea ei se gsesc n
cantitate mare n organele de reproducere i intr n structura
fosfolipidelor.
Eicosanoidele reprezint un grup de compui ce deriv din acizii
grai eicosanoidici i cuprind prostanoidele i leucotrienele (LT).
Prostanoidele cuprind la rndul lor: prostagladinele (PG),
tromboxanii(TX) i prostaciclinele (PC).
Biosinteza prostaglandinelor
Prostaglandinele au fost descoperite prima dat n plasma
seminal, de unde i numele, iar ulterior au fost gsite n toate esuturile.
Prostagalndinele sunt compui foarte aczivi biologic, n concentraie de
numai 1 g/l produc contracia musculaturii netede.
Din punct de vedere structural, deriv din acizi grai cu 20 de
atomi de carbon, care pot avea n molecul 3,4 sau 5 duble legturi. Din
aceti precursori deriv prostaglandinele primare (seria E, PGE), care
prezint la carbonul C9 o grupare cetonic, iar la carbonul C 11 o grupare
hidroxilic sau seria F, cnd au n ambele poziii C i C grupri
hidroxilice. Prostaglandinele secundare deriv prin modificri
enzimatice din prostaglandinele din seria E.
Exemple de prostaglandine naturale:
HO
O
COOH
COOH

HO

HO

OH

OH
PGE 1

PGF 1

20

Luciana Dobjanschi
O
COOH
HO

HO
COOH
HO

OH

OH

PGE 2

PGF 2

HO

COOH

COOH

HO

HO

OH

OH

PGF 3

PGE 3

Cel mai frecvent precursor al prostaglandinelor este acidul


arahidinic, care este foarte rspndit n esuturi. Acesta sub aciunea
unei ciclooxigenaze se transform ntr-un endoperoxid ciclic (PGG 2)
care este precursorul imediat al prostaglandinelor, tromboxanilor i al
prostaciclinelor.
COOH

COOH
acid arahidonic

acid eicosatrienoic

PGE 2, PGF 2

PGE 1, PGF 1
COOH

acid eicosapentaenoic

PGE 3, PGF 3

20

Biochimie farmaceutic

Obinerea prostaglandinelor din acidul arahidonic se face pe


calea ciclooxigenazei. Sub influena acestei enzime acidul arahidonic
se transform ntr-un endoperoxid ciclic (PGG2).

fosfolipide
membranare

fosfolipaza
A2

COOH

acid arahidonic
O2

ciclooxigenza

O
COOH
endoperoxid ciclic

O
OOH
PGG2

prostagladinsintetaza
O
COOH
HO
OH
PGE 2
HO
COOH
HO
OH
PGF 2

Cicloxigenaza poate s fie nhibat de aspirin i indometacin,


care sunt antiinflamatori nesteroidieni. Blocnd ciclooxigenaza,
20

Luciana Dobjanschi

antiinflamatoarele nesteroidiene opresc biosinteza prostaglandinelor,


dobndind astfel eficiena terapeutic n tratamentul proceselor
inflamatorii. Acidul arahidonic necesar sintezei prostaglandinelor este
rezultat din fosfolipidele membranare sub aciunea fosfolipazei A2,
care poate s fie nhibat de corticosteroizi cu efect antiinflamator.
Tot din acid arahidonic se pot sintetiza i alte eicosanoide cum ar fi:
prostaciclinele, tromboxanii i leucotrienele.
Schema biosintezei eicosanoizilor
activata de adrenalina,
angiotensina II

fosfolipide
lizofosfolipide

fosfolipaza A 2
inhibata de AINS

acid arahidonic

c.lipooxigenazei
LT 4

inhibata de indometacin,
aspirina (AINS)

c.ciclooxigenazei
PG2, PGI2, TX 2

Aciunea biologic a prostaglandinelor este extrem de


complex. Uneori diferitele prostaglandine au efecte opuse i din
interaciunea lor rezult echilibrele biologice ale anumitor funciuni
ale organismului.
Prostaglandinele acioneaz att asupra adenilatciclazei ct i
asupra guanilatciclazei, influennd biosinteza AMPc i GMPc. Prin
intermediul acestor mesageri secunzi influenuaz secreia unor
glande endocrine cum sunt: tiroida, suprarenalele, ovarul,
paratiroidele. Ali hormoni cum sunt: bradikinina, acetilcolina,
histamina stimuleaz i ei sinteza de prostaglandine. Deasemenea o
excitare sau o lezare a membranelor celulare declaneaz biosinteza
de prostaglandine prin eliberarea de acizi grai nesaturai din
fosfolipide.
Principalele efecte ale prostaglandinelor sunt: efectul lipolitic,
efectul asupra apei i electroliilor, de unde decurge intervenia
21

Biochimie farmaceutic

prostaglandinelor i asupra metabolismului Ca, stimulnd activitatea


osteoclastelor i producnd hipercalcemie.
Prostaglandinele influeneaz contracia musculaturii netede,
ndeosebi a uterului gravid, precum i a aparatului respirator i a
tractului gastro-intestinal.
Efectele metabolice multiple ale prostaglandinelor deschid ci
variate de utilizare a lor n terapeutic. Astfel sunt utilizate n
tratamentul astmului bronic, a ulcerelor, a bolilor cardiovasculare.
Sunt utilizate pentru declanarea travaliului n sarcinile ajunse la
termen. Deasemenea sunt implicate n procesele inflamatorii i unele
medicamente antiinflamatoare nesteroidiene, cum este de exemplu
aspirina care i datorez aciunea farmacodinamic capacitii lor de
a inhiba sinteza prostaglandinelor.
Procesul de degradare a prostaglandinelor se realizeaz rapid
prin oxidare la carbonul 15 i prin oxidarea acidului gras, ncepnd
de la captul ce conine gruparea carboxilic, -COOH.

21

Luciana Dobjanschi

XI.9. Metabolismul corpilor cetonici


Corpii cetonici sunt produi n cantiti mari n ficat, de unde
trec prin difuziune n snge. n anumite condiii metabolice ficatul
produce cantiti mari de acid acetilacetic i acid hidroxibutiric.
Acidul acetilacetic sufer o decarboxilare spontan i trece n
aceton. Aceti 3 compui sunt cunoscui sub denumirea de corpi
cetonici.
CH3
CH3
CH3
CH OH
C O
C O
CH2
+
CH2
NADH + H+ NAD
CH3
CO2
COOH
COOH
acetona
acid betahidroxibutiric
acid acetilacetic
Acidul acetilacetic i hidroxibutiric sunt n echilibru, acesta
fiind controlat de raportul NAD+/NADH din mitocondrie. n snge
raportul acid betahidroxibutiric/acid acetilacetic este cuprins ntre 1:1
i 1:10.
Concentraia normal de corpi cetonici din snge este de sub
1mg%, iar eliminarea lor prin urin este de sub 1mg/24 de ore.
Cantiti peste valorile normale n snge (cetonemia) i eliminarea lor
n urin (cetonuria) reprezint o stare cunoscut sub numele de
cetoz. Condiia de cetoz este asociat cu deplasarea hidrailor de
carbon utilizabili, cuplat cu mobilizarea acizilor grai liberi.
Deoarece acidul acetilacetic are caracter acid pronunat, excreia prin
urin poate duce la la cetoacidoz, care poate s fie fatal ntr-un
diabet netratat.
n vivo, ficatul pare s fie singurul organ care produce
cantiti semnificative de corpi cetonici, iar esuturile extrahepatice le
utilizeaz ca substrate respiratorii. Fluxul de corpi cetonici de la ficat
spre esuturile extrahepatice se datorete unui mecanism enzimatic de
producere n ficat, cuplat cu o activitate sczut a enzimelor
responsabile n utilizarea lor; n schimb n esuturile extrahepatice
situaia se inverseaz. Enzimele responsabile de formarea corpilor
cetonici sunt localizate n mitocondrie.
Substratul cetogenezei este acidul acetilacetic, care rezult din
fragmentul C4 terminal rezultat prin oxidarea acizilor grai n ficat,
21

Biochimie farmaceutic

fie prin reversarea reaciei catalizat de tiolaz. Dezactivarea


acetoacetil-CoA la acetoacetat se poate realiza pe dou ci.
Prima cale este deacilarea acetoacetil-CoA n prezena
acetoacetil-CoA deacilazei, conform reaciei:
H3C CO CH2

CO SCoA

H3C CO CH2

COOH

CoASH
A doua cale este aceea prin care are loc condensarea unei
molecule de acetoacetil-CoA cu o molecul de acetil-CoA cu formare
de hidroxi--metilglutarilCoA, catalizat de HMG-CoA sintetaza.
Acesta este scindat n prezena hidroxi--metilglutaril-CoA liazei
mitocondriale cu formare de acetoacetat.
H3C CO CH2
HMG_CoA
liaza

HMG_CoA
OH
sintetaza
H3C C CH2 CO SCoA
CO SCoA +H3C CO SCoA
CH2 COOH

H3C CO CH2 COOH

H3C CO SCoA

Ambele enzime sunt localizate n mitocondriile hepatice,


locul de formarea a corpilor cetonici. Acetoacetatul format poate fi
transformat n beta-hidroxibutirat n prezena beta-hidroxibutiratdehidrogenazei.
Ficatul dispune de echipamentul enzimatic necesar sintezei
corpilor cetonici, dar nu dispune de cel necesar n reactivarea lor
pentru a putea fi metabolizai. Acest proces are loc n esuturile
extrahepatice i se poate realiza pe dou ci.
Una din ci presupune reacia acetoacetatuluicu succinil-CoA n
prezena succinil-CoA-acetoacetat-CoA transferazei.

CH3

COOH

C O

CH2

CH3
transferaza

C O

COOH
+

CH2

CH2

CH2

CH2

CH2

COOH

CO SCoA

CO SCoA

COOH

Cea de-a doua cale activeaz acetoacetatul n prezen de ATP i


CoA i acetoacetatkinaz.
21

Luciana Dobjanschi

CH3

CH3
C O
CH2

COOH

ATP

CoASH

tiokinaza

C O
CH2

AMP

+ PP

CO SCoA

n mod normal corpii cetonici sintetizai n ficat reprezint


substrate uor metabolizabile pentru esuturile extrahepatice unde
sunt scindai n acetil-CoA n prezena tiolazei i oxidai prin ciclul
citric. Oxidarea corpilor cetonici n esuturile extrahepatice se face
proprional cu concentraia lor n snge. Pnp la o concentraie de
70mg% ei sunt oxidai, peste aceast valoare, capacitatea oxidativ a
sistemului de degradare este depit, concentraia va crete i vor fi
eliminai prin urin.

21

Biochimie farmaceutic

XII. Metabolismul proteinelor


XII.1. Digestia i absorbia proteinelor
Majoritatea compuilor cu azot ingerai de om sunt proteine.
Deci, atunci cnd discutm digestia proteinelor, implicit discutm i
digestia compuilor cu azot. Moleculele proteice intacte nu pot fi
absorbite ca atare prin tractul gastro-intestinal la animalele adulte,
dect n cazuri excepionale i foarte rare. Pentru a putea fi absorbite
proteinele sunt hidrolizate la structuri cu molecule mai mici de
aminoacizi sau peptide mici. Cu toate c proteinele au structuri
complexe, ele sunt formate de un numr redus de aminoacizi (cca.
20) diferii, legai ntre ei prin legturi peptidice. Legtura peptidic
se rupe uor conducnd la un amestec de aminoacizi liberi. Teoretic,
o singur enzim specific poate asigura scindarea legturilor
peptidice i deci digestia proteinelor. n realitate situaia este mai
complex, deoarece enzimele digestive prezint a mare specificitate
pentru localizarea respectivei polipeptide, localizarea punctului de
hidroliz i natura aminoacizilor, care intervin n legtura peptidic
respectiv.
Cu toate c n alimentaie exist n mod obinuit milioane de
proteine, el pot fi digerate de un numr redus de enzime proteolitice,
ce pot fi clasificate n 2 mari grupe: exopeptidaze i endopeptidaze.
Exopeptidazele au rolul de a ndeprta un aminoacid de la
captul lanului prin hidroliza unei legturi peptidice cu obinerea
unui aminoacid i a unei polipeptide cu un aminoacid mai puin n
molecul. De exemplu: carboxipeptidaza, aminopeptidaza,
dipeptidaza, tripeptidaza.
Endopeptidazele au rolul de a hidroliza n general legturi
peptidice din interiorul lanului, dnd natere unor lanuri
polipeptidice mai mici. De exemplu: pepsina, tripsina, chimotripsina,
elastina.
Proteinele ptrunse n tractul digestiv sufer aciunea
diferitelor enzime degradndu-se pn la stadiul de aminoacizi, care
la rndul lor sunt apoi catabolizai pe ci diferite.
O enzim deosebit de important pentru laboratorul clinic, din
categoria N-aminoacidpetidazelor este LAP (leucinaminopeptidaza).
Nivelul acestei enzime crete mult i specific n afeciunile cilor
biliare, dar rmne nemodificatn leziunile parenchimului hepatic.
Deasemenea are valoare n diagnosticul diferenial al icterului
21

Luciana Dobjanschi

mecanic fa de cel hepatocelular i cel hemolitic. n ultimele 2 forme


de icter, nivelul rmne cel normal.
Schema degradrii proteinelor
Proteine alimentare
endopeptidaze: pepsina, tripsina, chimotripsina
oligopetide
exopeptidaze: N- aminoacidpeptidaza, C- aminoacidpeptidaza
aminoacizi si oligopeptide
catabolizati
Ficat

intestin subtireunde sunt

tesut enterohepatic - aminoacizii

21

utilizati in biosinteza proteinelor

catabolizati
utilizati in biosinteza proteinelor

Biochimie farmaceutic

XII.2. Metabolismul intermediar al aminoacizilor


Aminoacizii sunt substanele cele mai importante ale
metabolismului azotului n organismele heterotrofe. Deasemenea ei
pot servi ca surs de energie n special prin intermediul oxidrii
scheletului hidrocarbonat. Metabolismul aminoacizilor se gsete
ntr-o stare dinamic, la fel ca i cel al hidrailor de carbon i al
lipidelor.
Metabolismul aminoacizilor include cteva probleme de
interes medical. Acestea ar fi: sinteza i degradarea proteinelor,
conversia scheletului hidrocarbonat al aminoacizilor n intermediari
amfibolici, sinteza ureei i formarea unor compui fiziologici
activi( adrenalina, noradrenalina, DOPA, dopamina, serotonina,
acidul--aminobutiric sau GABA, tirozina, creatina, creatinina,
nucleul heminic, bazele purinice.
Catabolismul N-aminoacidic
Cei cca 20 de aminoacizi care intr n structura proteinelor
prezint pe de o parte mecanisme specifice de metabolizare, ier pe de
alt parte mecanisme comune.
Cile comune de degradare se refer pe de o parte la soarta gruprilor
funcionale, aminice i carboxilice, iar pe de alt parte la soarta
catenelor ternare, care n aceste etape trec prin transformri comune.
Principalele mecanisme generale de transformare ale aminoacizilor
sunt:
- transaminarea
- decarboxilarea
- dezaminarea aminoacizilor
Transaminarea
n cel puin 12 aminoacizi gruparea -aminic este ndeprtat
enzimatic prin transaminare. n aceste reacii, gruparea -aminic
este transferat pe atomul de carbon al unui cetoacid, care, de
obicei este acidul cetoglutaric cu formarea cetoacidului analog
aminoacidului iniial i a acidului L-glutamic.

21

Luciana Dobjanschi

HOOC CH2 CH COOH

HOOC CH2 CH2 C COOH

NH2

HOOC CH2 C
O

COOH + HOOC CH2 CH2 CH COOH


NH2

Enzimele care catalizeaz acest tip de reacii se numesc


aminotransferaze sau tranaminaze. Cele mai multe transaminaze
folosesc ca acceptor de grupare aminic -cetoglutaratul, fiind astfel
specifice pentru substratul -cetoglutarat-L-glutamat. Specificitatea
pentru donorul de grupri aminice este mai puin strict, dect cea
pentru acceptorul de grupri aminice. Totui, enzimele manifest
anumite preferine i, astfel anumii aminoacizi sunt transaminai mai
rapid dect alii.
De exemplu: aspartat transaminaza catalizeaz reacia
dintre acid aspartic i acid -cetoglutaric cu formare de acid
oxalilacetic i acid L-glutamic.
Aceast enzim are activitate mai mare atunci cnd donorul
de grupri aminice este acidul L-aspartic, dar poate fi folosit i
pentru ali aminoacizi ca i donori.
esuturile animale mai conin pe lng aspartat-transaminaz
i alte transaminze, ce folosesc tot -cetoglutaratul ca acceptor de
grupri aminice ca : alanin-transaminaza, leucin-transaminaza,
tirozin-transaminaza, ce catalizeaz urmtoarele reacii:
H3C

CH COOH

HOOC CH2

C COOH

CH2

NH2

H3C

COOH + HOOC CH2

CH2

H3C CH CH2

CH

CH3

NH2

COOH

HOOC CH2

CH3

COOH

leucin_transaminaza

CH COOH + HOOC CH2

CH2

CH2

CH COOH
NH2

CH2

C COOH tirozin_tranaminaza
O

C
O

21

C COOH

HOOC CH2

NH2
HO

CH2

H3C CH CH2

CH2

CH COOH
NH2

HO

alanin_transaminaza

COOH

HOOC CH2

CH2

CH COOH
NH2

Biochimie farmaceutic

Reaciile de transaminare sunt uor reversibile, ele se pot


desfura n ambele direcii. Glutamatul, produsul final al majoritii
transaminrilor, cedeaz apoi gruparea aminic ntr-o serie de reacii
final, ce duc la formarea compuilor azotai de excreie.
Tranasaminazele se gsesc att n mitocondriile, ct i n
citossolul celulelor eucariote. La mamifere, aspartat transaminaza din
citosol catalizeaz reaciile de transaminare a diferiilor aminoacizi cu
formarea glutamatului. Glutamatul format intr apoi n matricea
mitocondrial, printr-un sistem specific de transport prin membran.
Aici, glutamatul este fie dezaminat direct, fie cedeaz gruparea
aminic osalilacetatului, ntr-o reacie catalizat de aspartat
transaminaza mitocondrial, cu formarea aspartatului, donorul
imediat de grupri aminice n sinteza ureei.
Transaminazele au drept coenzim piridoxalfosfatul, care
poate fixa aminoacidul formnd o cetimin sau baza Schiff, cu
urmtoarea structur:
H
R

C COOH
N
C

HO
H3C

O
CH2 O P O-

O-

Hidrogenul de la C este eliberat ca proton, ceea ce conduce la


restructurarea moleculei, cu deplasarea dublei legturi i a centrului
nucleofil la C unde se fixeaz protonul. Acest produs este tot o baz
Schiff, care prin hidroliz elibereaz un cetoacid i piridoxalfosfatul,
care reintr ntr-un nou ciclu de reacii. Procesulare loc n felul
urmtor:

21

Luciana Dobjanschi
H+

H
R

C COOH
C

HO

O-

N
R

H3C

CH

HO

CH2 O P O-

C COOH
N

H3C

C COOH

HO

CH2 O P O-

CH2 O P OO-

H3C

O-

C COOH
N
CH2

HO
H3C

O
H2O

CH2 O P O-

COOH

O-

NH2
CH2

HO
H3C

CH2 O P OO-

Piridoxal-fosfatul, legat foarte strns, dar nu covalent de


proteina enzimatic este transportorul de grupri aminice. n cursul
ciclului su catalitic el sufer tranziii reversibile ntre forma sa liber
de aldehid (piridoxal-fosfatul) i forma sa aminat (piridoaminfosfatul). Schema complet cu cei doi timpi ai procesului de
transaminare este urmtoarea:
I.
R1

CH COOH
NH2

H2O
+

R1

C O
H

piridoxal_fosfat_
enzima

H2O

CH COOH
N
C
E

aldimina

22

R1

C COOH
N

CH2
E
cetimina

H2O

E
H2O

CH2

NH2

piridoxamin_
_fosfat_enzima

R1

C COOH
O

Biochimie farmaceutic

II.
R2

C COOH
O

CH2

NH2

H2O

piridoxamin_fosfat_
_enzima

R2

H2O

C COOH
N
CH2

E
cetimina

R2

CH

COOH

H2O
H2O

R2

CH
NH2

COOH

CH O

piridoxal_fosfat_
_enzima

CH
E
aldimina

Piridoxal-fosfatul format poate s reintre ntr-un nou ciclu de


transformri. Reacia de transaminare este un exemplu de dubl
dislocare, cu cinetica ping-pong corepsunztoare.
n enzima liber, piridoxal-fosfatul se leag de proteina
enzimatic nu numai prin azotul din ciclu, ci i prin formarea unei
baze Schiff cu gruaparea -amino a unei lizine din protein.
Aminoacidul substrat disloc gruparea lizil--amino din legtura cu
piridoxal-fosfatul, formnd o aldimin substrat-piridoxal fosfat.
Acidul glutamic, drept colector universal de grupri aminice
joac un rol central n metabolismulaminoacizilor din dou puncte de
vedere. Acesta poate prelua direct sau indirect gruprile aminice de la
majoritatea aminoacizilor i poate regenera, prin dezaminarea
oxidativ acidul -cetoglutaric, care devine apt s accepte gruprile
aminice.
Exemplu:

aminoacid

alfa_cetoglutarat

transaminaza
cetoacid

glutamat

NADH +H++ NH3


glutamat dehidrogenaza
NAD++ H2O

22

Luciana Dobjanschi

Dezaminarea oxidativ
Glutamatul format sub aciunea transaminazelor poate fi rapid
dezaminat oxidativ sub aciunea glutamat dehidrogenazei, o piridinenzim prezent att n citosol, ct i n mitocondriile hepatocitului.
HOOC CH2 CH2 CH COOH + NAD+(NADP +)+ H2O
NH2

HOOC CH2 CH2 C COOH + NH4++ NADH (NADPH)


O

Gruprile aminice colectate de la diferii aminoacizi de ctre


glutamat sunt descrcate sub form de ioni de NH 4+ . n aceast
reacie are loc i o dehidrogenare. Se presupune c dehidrogenarea
glutamatului are loc n dou etape: n prima etap se formeaz iminoglutaratul, care n a 2-etap este hidrolizat la cetoacid.
HOOC CH2 CH2 CH COOH +NAD+
NH2

HOOC CH2 CH2

HOOC CH2 CH2

HOOC CH2 CH2

COOH+H2O

NH

+
COOH+NADH +H

NH

COOH+NH3

Enzima care catalizeaz aceast reacie se numete L-glutamat


dehidrogenaza. Aceasta poate folosi ca acceptor de electroni att
NAD+ ct i NADP+, preferat fiind NAD+. NADH ul format este
oxidat n lanul transportor de electroni. L-glutamat dehidrogenaza
are un rol cheie n dezaminarea aminoacizilor. Este o enzim
allosteric, nhibat de ATP, GTP i NADH i stimulat de ADP,
GDP.
Multe oerganisme conin aminoacid oxidaze flavindependente, care i ele catalizeaz dezaminarea oxidativ a
aminoacizilor. L-aminoacid axidaza este specific pentru
dezaminarea L-aminoacizilor i catalizeaz reacia:

L- aminoacid + H2O+ E- FMN

22

NH3 +E_FMNH2
cetoacid +

Biochimie farmaceutic

L-amionoacidoxidaza are ca grupare prostetic FMN strns


legat de proteina enzimatic. Se gsete n reticulul endoplasmatic
din ficat i rinichi.
O alt flavoprotein ce catalizeaz dezaminarea oxidativ este
D-aminoacid oxidaza, prezent n ficat i rinichi, care oxideazp Daminoacizii la -cetoacizii corespunztori.

D- aminoacid + H2O + E- FAD

cetoacid + NH3 E_FADH


+
2

Rolul D-aminoacidoxidazei este de a iniia degradarea Daminoacizii provenii din degradarea enzimatic a peptidoglicanilor
din pereii celulari ai bacteriilor intestinale, care conin acid Dglutamic i ali D-aminoacizi.
Formel reduse al L- i D-aminoacidoxidazelor pot reaciona direct cu
O2 formnd
H 2O2 i regenernd enzimele sub forma lor
oxidat.
E_FMNH2+ O2
E_FMN + H2O2
E_FADH2 +O2

E_FAD +H2O2

Apa oxigenat format este descompus de catalaz la ap i oxigen


molecular.
H2O2

H2O + 1/ 2O2

n celulele eucariote, L-i D-aminoacidoxidazele precum i


uratoxidaza sunt localizate n microcorpi. Tot n aceste organite se
gsete i catalza. Din acest motiv organitele repective se mai numesc
i peroxizomi.
Decarboxilarea aminoacizilor
Un alt mecanism de degradare a aminoacizilor l constituie
decarboxilarea sub aciunea aminoaciddecarboxilazelor, acror
coenzim este piridoxal-fosfatul. n urma procesului de decarboxilare
se formeaz aminele primare corespunztoare, numite i amine
biogene.

22

Luciana Dobjanschi

R CH NH2

aminoacid
decarboxilaza
R

CH2

NH2

CO2

COOH

Pentru ca reacia s aib loc, i n acest se formeaz o baz


Sciff ntre aminoacid i piridoxal-fosfat. Deplasrile electronilor spre
N piridinic labilizaeaz legtura dintre C i gruparea carboxilic. Are
loc eliberarea unei molecule de CO2 urmat de hidroliza bazei Schiff
astfel rezultate. Din hidroliz rezult piridoxalfosfatul i se pune n
libertate amina respectiv.
Mecanismul reaciei este urmtorul:
R
O
OH
R CH2 CH COOH

HO

NH2

+N

HO

22

OH
N

CH3

N+
C

R CH2 CH2 NH3+

O-

O CH2

CH3

CH O
O CH2

OH
HO

CH2 CH2

CH3

H
O-

O..
N
H

OH
P

O CH2

HO

N+

+N

CH3

CH2 C H

N+

P O CH2
O

OH

HO

O-

O CH2

OH

CH

CH2 CH C

CH3

O
OCO2

Biochimie farmaceutic

Exemple de reacii de decarboxilare:

CH2

CH NH2
COOH

N
H
histidina

histamina

H2C CH COOH

H2C CH2

OH NH2

CO2

NH2

OH

serina

N
H

CH2 NH2

N
H

CO 2

CH2

CH2

colamina
CH COOH
NH2

O2

HO

hidroxilaza

CH2
N
H

CH COOH
NH2
CO2

HO

CH2

CH2

NH2

N
H
serotonina

Din
decarboxilarea
histidinei,
triptofanului,
5hidroxitriptofanului, tirozinei rezult histamina, triptamina,
serotonina i tiramina cu rol de hormoni tisulari. Din decarboxilarea
treoninei, cisteinei i acidului aspartic rezult propanolamina,
cisteamina, -alanina, care intr n structura cobalaminei i CoA. Din
decarboxilarea acidului glutamic se formeaz acidul -aminobutiric,
important pentru metabolismul esutului nervos; iar din
decarboxilarea aminoacizilor bazici ca: lizina, ornitina, arginina
rezult cadaverina, putresceina, care sunt produi de putrefacie.

XII.3. Metabolismul amoniacului


22

Luciana Dobjanschi

Formarea i eliminarea amoniacului


n afara amoniacului care apare n esuturi ca rezultat al
metabolismului aminoacizilor (dezaminarea oxidativ), o cantitate
considerabil se mai formeaz din proteinele alimentare sub aciunea
bacteriilor intestinale i din ureea prezent n lichidele secretate din
tractul gastro-intestinal. Acest amoniac este absorbit din intestin n
sngele portal venos, care conine cantiti mai mari de amoniac dect
sngele sistemic. n condiii normale, ficatul ndeprteaz prompt
amoniacul din sngele portal, astfel nct sngele ce prsete ficatul,
este n mod virtual liber de amoniac. Acest lucru este esenial
deoarece cantiti mici de amoniac sunt toxice pentru sistemul nervos
(normal n snge se gsesc 10-20g NH3 /100ml).
Simptomele intoxicaiei cu amoniac sunt rezultatul unei
slbiri ale funciilor creierului i se manifest prin grea i vrsturi,
letargie, ataxie, convulsii, iar n cazuri mai grave com prin
hiperamoniemie (cc 100g NH3 /100 ml) i chiar moartea. Aceste
simptome sunt asemntoare comei hepatice, cnd nivelul
amoniacului din ficat i probabil din creier este foarte crescut.
Intoxicaia cu amoniac pare s fie un factor etiologic n coma
hepatic. Simptome asemntoare apar i n hepatomegalie i n
general, cnd funciile hepatice sunt puternic alterate, deoarece ficatul
este sediul transformrii amoniacului n uree.
Mecanismul prin care amoniacul i exercit efectul asupra
creierului nu se cunoate nc. SE presupune c se datorete
descreterii formrii de ATP pe calea ciclului citric din cauza
transformrii unei cantiti excesive de -cetoglutarat n glutamat i
glutamin. Nivelul acestor metabolii, la fel ca i a amoniacului este
crescut n creier n decursul intoxicaiei cu amoniac. Alterri ale
proceselor de transmisie neural datorit unor formri excesive de
acid -aminobutiric (GABA) din glutamat pot fi, deasemenea
implicate.
Coninutul de amoniac din sngele din venele renale, mai
mare dect n arterele renale, indic faptul c amoniacul este produs
n rinichi i apoi trece n snge. Excreia n urin a amoniacului
produs n celulele tubilor renali constituie cel mai semnificativ aspect
al metabolismului amoniacului renal. Producerea de amoniac este un
mecanism important al tubilor renali, de reglare a balanei acidobazice i conservare de cationi, fiind foarte crescut n acidoza
metabolic i sczut n alcaloz.
22

Biochimie farmaceutic

Amoniacul produs la nivelul rinichilor deriv din aminoacizii


intracelulari i n special din glutamin. Eliberarea de amoniac este
catalizat de glutaminaza renal, conform reaciei:
H2N C CH2

CH2

NH2

glutaminaza

CH COOH

H2O

HOOC CH2

CH2

NH3

glutamina

CH COOH
NH2

acid glutamic

Amoniacul poate fi excretat sub form de sruri de amoniu.


Marea majoritate este excretat sub form de uree, care se formeaz
n ciclul ureogenetic. Practic amoniacul format n esuturi, dar prezent
n sngeleperiferic n urme, este ndeprtat rapid din circulaie sub
form de glutamin i uree.
Formarea de glutamin este catalizat de glutamin-sintetaz, enzim
prezent n cantiti mari n esutul renal.
ATP
HOOC CH2

CH2

+ Pa

H2N C CH2

CH COOH
NH2

acid glutamic

ADP

NH3

H2O

CH2

CH COOH
NH2

glutamin_sintataza
glutamina

La animale, plante i microbi exist o reacie catalizat de Lasparaginaz, analoag celei catalizate de glutaminaz la om.
Asparaginaza i glutaminaza sunt utilizate ca ageni antitumorali,
deoarece tumorile necesit cantiti mari de acid aspartic i acid
glutamic.
n timp ce la nivelul creierului calea major de ndeprtare a
amoniacului este formarea glutaminei, n ficat calea major o
constituie transformarea n uree.
Un adult cu o activitate normal, moderat excret zilnic
16,5g azot. Din acesta 95% se elimin prin rinichi, iar 5% este stocat
i apoi eliminat prin fecale. Ureea constituie 80-90% din azotul
excretat.
Interconversia amoniacului i a glutaminei, catalizat de
glutaminsintetaz i glutaminaz, poate fi prezentat schematic astfel:

22

Luciana Dobjanschi

acid glutamic + Mg_ATP

Mg_ADP

glutamin sintetaza

NH4+

H2N C CH2
O
glutaminaza

acid glutamic

XII.4. Ciclul ureogenetic


22

H2O

CH2

CH COOH
NH2

Biochimie farmaceutic

n cursul reaciilor ce alctuiesc un ciclu complet dintr-un mol


de amoniac rezult un mol de uree i se consum 3 moli de ATP.
Reaciile succesive sunt catalizate de 5 enzime.
Carbamoil sintetaza prezent n mitocondriile hepatice ale
organismelor ureotelice, inclusiv organismul uman, catlizeaz sinteza
carbamoilfosfatului cu consum de 2 moli de ATP.

NH3 + CO2

Mg+2

2AT P
HO
carbamoil
sintetaza

P O C NH2
OH

2ADP +Pa

Ornitincarbamoilaza se gsete n mitocondriile hepatice i


catalizeaz reacia de sintez a citrulinei, pentru care are o mare
specificitate.
CH2

NH2

CH2
+

CH2

CH2

NH C

CH2
P O C NH2
CH2
ornitin
carbamoilaza
OH
O
CH NH2

HO

CH NH2

NH2

H3PO 4

COOH

COOH
ornitina

citrulina

n continuare citrulina n prezen de arginino-succinatsintetaza formeaz arginino-succinatul.


COOH
CH2

NH C

CH2

CH2
CH NH2
COOH
citrulina

renal

NH2
+

COOH
H2N

CH

ATP

AMP +PP

CH2

NH C N CH

CH2

NH2

CH2

CH2
H2O
arginino_succinat
CH NH2
COOH
sintetaza
COOH
acid aspartic

CH2
COOH

argininosuccinat

Mai departe, argininosuccinaza, prezent n esutul hepatic i


al mamiferelor catalizeaz reacia de scindare a
22

Luciana Dobjanschi

argininosuccinatului n arginin i acid fumaric, care intr n ciclul


citric.
COOH
CH2

CH2

NH C N CH

CH2

NH2

CH2

CH2

arginino
succinaza

COOH

HOOC CH

NH C NH

CH2

NH2

HC COOH

CH2

CH NH2

CH NH2

COOH

COOH

argininosuccinat

arginina

acid fumaric

n continuare acidul fumaric intr n ciclul citric i va suferi o


transformare obinuit, adic n prezen de fumaraz trece n acid
malic, care la rndul su sub aciunea malatdehidrogenazei trece n
oxalilacetat. Oxalilacetatul intr ntr-o reacie de transaminare la care
particip
acidul
glutamic
i
transaminaza
glutamicooxalacetic(GOT), formnd acidul aspartic.
H C COOH
HOOC

fumaraza
H2O

acid fumaric

COOH

CH

C O

malat
OH dehidrogenaza

CH2
COOH

CH2

CH2

CH2

COOH

CH NH2
COOH

CH2

NAD+ NADH+ H+

COOH

acid malic

acid oxalilacetic

COOH

COOH

COOH

COOH
C O

COOH

GOT

C NH2

CH2

CH2

CH2

COOH

C O
COOH

Deasemenea arginina format este scindat de arginaz


(enzim prezent n ficatul tuturor organismelor ureotelice) la
ornitin i uree. Arginaza se gsete n cantiti mici i n rinichi,
creier, glanda mamar, esut testicular i piele. Emzima poate fi
nhibat competitiv de ornitin i lizin.

23

Biochimie farmaceutic
CH2

CH2

NH C NH

CH2

NH2

arginaza

CH2
CH NH2
COOH
arginina

H2O

NH2

CH2
CH2

H2N

C NH2
O

CH NH2
COOH
ornitina

uree

Ornitina rezultat poate s reia un nou ciclu, iar ureea format


este excretat urinar.
Deci, ciclul ureogenetic este o cale metabolic foarte
costisitoare pentru organism, deoarece pentru fiecare molecul de
uree ce se formeaz se consum 3 legturi macroergice.
Cantitatea de uree excretat de un adult normal prin urin este
de 25-30g n 24 de ore. Aceast cantitate reprezint 90% din
substanele azotate i variaz proporional cu cantitatea de protein
ingerat.
n condiii normale excreia de amoniac reprezint numai de
2,5-4,5% din totalul azotului urinar. Excreia amoniacului reprezint
o funcie important n meninerea balanei acido-bazice. Amoniacul
se formeaz la nivelul rinichilor unde se combin cu ionii de
hidrogen formnd ioni de amoniu. Coninutul su crete n acidoz i
scade n alcaloz.
Ureogeneza este un proces semiciclic deoarece ornitina
consumat n reacia 2 este regsit n ultima reacie.
Boli metabolice legate de dereglri aprute n ciclul ureogenetic
Lipsa uneia dintre enzimele care intervin n ciclul ureogenetic
determin apariia unor afeciuni, care toate sunt cauzate de
intoxicaia cu amoniac. Acesta nu se mai poate transforma n uree,
produs netoxic care se elimin.
Deficitul de carbamoilfosfatsintetaz este probabil ereditar i
cauzeaz hiperamoniemia de tip 1.
Deficitul de transcarbamoilaz duce la apariia enzimopatiilor
congenitale. Boala se numete hiperamoniemie de tip II. n aceste
cazuri n snge, lichid cerebrospinal i urin s-au gsit cantiti mari
de glutamin, iar n esuturi cantiti mari de amoniac.
Lipsa activitii argininosuccinat-sintetazei duce la
citrilinemie, o boal foarte rar. n sngele i n lichidul cerebrospinal

23

Luciana Dobjanschi

al pacienilor se gsesc cantiti mari de citrulin, iar n urin


eliminarea este masiv (1-2g citrulin/24 de ore).
Absena argininosuccinazei duce la argininosuccinurie.
Enzima este absent n creier, ficat, rinichi, eritrocite i fibroblastele
din piele.
Absena arginazei conduce la hiperargininemie. Aceasta se
caracterizeaz prin creterea nivelului de arginin n snge i n lichid
cerebrospinal. Arginaza cerebrospinal nu este ntotdeauna absent,
uneori este mai sczut.

XII.5. Utilizarea scheletului de atomi de carbon ai aminoacizilor


Aminoacizii sunt utilizaialturi de glucide i lipide la
acoperirea necesitilor energetice ale organismelor animale. n
condiiile unei alimentaii echilibrate i n stare noemal, organismul
uman i procur cel mult 10% din necesarul de energie prin
degradarea aminoacizilor.
Pentru producerea de energie, scheletul de atomi de carbon al
aminoacizilor este degradat oxidativ la CO2 i H2O. S-a constatat c
atomii de carbon din scheletul aminoacizilor se regsesc nu numai n
CO2 ci i n strucrura glucozei i lipidelor sintetizate endogen.
Aminoacizii din care se sintetizeaz glucoz se numesc glucogeni, iar
cei din care se sintetizeaz lipide se numesc cetogeni. Unii
aminoacizi sunt att glucogenici ct i cetogenici.
Att n vederea utilizrii pentru producerea de energie ct i
pentru sinteza de lipide i glucoz, aminoacizii sunt transformai pe
ci mai simple sau mai complexe n intermediari ai ciclulu Krebs sau
n compui aflai n strns legtur cu acest ciclu: oxalilacetat, cetoglutarat, succinil-CoA, fumarat, piruvat, acetil-CoA.
n cazul unora dintre aminoacizi exist ci specifice de trecere
apre 2 dintre compuii menionai: triptofanul la acetil-CoA i
acetoacetil-CoA, tirozina la fumarat i acetoacetil-CoA.

23

Biochimie farmaceutic

Schema general de metabolizare a scheletului de atomi de C ai


aminoacizilor
Ala, Gly, Cys,
Ser, T hr

T ry, Leu, Lys,


Phe, T yr

acid piruvic
Ile, Leu, T ry

Asp, Asn

acetoacetil- CoA
acetil- CoA

acid oxalilacetic

acid citric
acid izocitric

acid malic

T yr, Phe

acid fumaric

acid alfa- cetoglutaric


succinil- CoA

Gln, Glu, His,


Pro, Arg
Ile, Met,T hr,Val

acid succinnic

Defecte n metabolizarea aminoacizilor


n legtur cu metabolismul aminonoacizilor sunt descrise
mai multe afeciuni cauzate n principal de defecte la sinteza unor
enzime cheie.
Exemplu:
Fenilcetonuria apare atunci cnd lipsete fenilalaninhidroxilaza. Fenilalanina nu se mai poate transforma n tirozin i
astfel se transform n acid acid fenil-piruvic acid fenil-lactic, toxici
pentru creiercare se elimin parial prin urin.
Alcaptonuria apare datorit absenei homogentizatoxidazei.
Aceasta duce la pigmentarea anormal a esutului conjunctiv, datorit
unui pigment negru ce se formeaz la nivelul esutului conjunctiv.
Albinismul apare prin lipsa tirozinazei, enzim ce iniiaz
oxidarea tirozinei pentru formarea pigmenilor melaninici. Astfel
pielea i prul sunt decolorate.
Histidinemia apare datorit lipsei enzimei histidin-amonioliazei. Histidina se elimin parial prin urin, parial se transform n
acid imidazol-piruvic. Acestea duc la ntrzierea dezvoltrii generale
i a vorbirii.

23

Luciana Dobjanschi

Cistinuria apare datorit unei reabsorbii tubulare defectuoase


a cistinei, ceea ce determin eliminarea ei n cantiti mari prin urin.
Fiind puin solubil, cistina formeaz calculi.

23

Biochimie farmaceutic

XII.6. Biosinteza aminoacizilor


Dintre aminoacizii cunoscui numai un numr de 20 prezint
importan pentru biosinteza proteinelor. Unele forme de viat
(plante, bacterii) sunt capabile s sintetizeze toi cei 20 de aminoacizi
din intermediari amfibolici. Altele, inclusiv mamiferele i n special
omul, pot sintetiza numai o parte din ei, care au fost numii
aminoacizi neeseniali. Cei ce nu pot fi sintetizai i care trebuie
suplimentai prin diet sunt numii aminoacizi eseniali.
Exemplu:
Aminoacizi eseniali: arginina, histidina, izoleucina, leucina, lizina,
metionina, fenilalanina, treonina, triptofan, valina.
Aminoacizi neeseniali: alanina, asparagina, acid aspartic, cisteina,
acid glutamic, glutamina, glicina, hidroxiprolina, prolina, serina,
tirizina.
Sinteza de aminoacizi neeseniali din intermediari amfibolici
Alanina se sintetizeaz din acid piruvic printr-o reacie de
transaminare.
H3C C COOH
O

transaminaza
H3C CH

Glu(Asp)

KG

COOH

NH2

Acidul glutamic se formeaz din acid -cetoglutaric printr-o


reacie catalizat de L-glutamat dehidrogenaz.
COOH
C

(CH2)2

L_glutamat
dehidrogenaza

NH4+ H2O
NADPH + H+
NADP +
COOH

COOH
CH NH2
(CH2)2
COOH

Acidul aspartic se sintetizeaz din acid oxalilacetic prin


reacia de transaminare.

23

Luciana Dobjanschi

COOH

COOH
transaminaza

C O
CH2
COOH

Glu

CH NH2
CH2

KG

COOH

Glutamina se sintetizeaz printr-o reacie catalizat de ctre


glutaminsintetaz, plecnd de la acid L-glutamic. Reacia necesit
ATP ca i donor de energie.
COOH

COOH

CH NH2

glutaminsintetaza
+

NH4+

(CH2)2

Mg+2
ATP
ADP

+P

COOH

CH

NH2

(CH2)2
CONH2

Asparagina se sintetizeaz printr-o reacie similar plecnd


de la acid L- aspartic sub aciunea aparaginsintetazei ATP trece, n
acest caz la AMP i PP.
COOH

COOH

CH NH2
CH NH2 asparaginsintetaza
CH2
CH2
CONH2
COOH
n cazul serinei, n esutul mamiferelor coexist dou ci de
biosintez. n ambele cazuri punctul de plecare n sintez este acidul
3-fosfogliceric, intermediar din glicoliz.

23

Biochimie farmaceutic
CH2 OPO3H2

CH2 OH

CH2 OH

CH OH

CH OH

C O

H2O

COOH

NAD+ NADH + H+

COOH

NAD+ NADH + H+

COOH

CH2 OPO3H2

CH2 OPO3H2

C O

CH NH2

COOH

KA

AA

CH2 OH

COOH

AA

KA

COOH

H2O

Calea prin intermediul derivailor fosforilai necesit n prima


etap o dehidrogenaz, apoi o transaminaz i o fosforilaz. Calea
prin intermediari nefosforilai, necesit o fosfataz i o transaminaz.
Sinteza glicinei n esutul mamiferelor poate s se fac pe mai
multe ci. n citosolul hepatic se gsete glicintransaminaza care
transform acidul glioxilic i acizii glutamic i aspartic n glicin.
La mamifere exist dou ci importante de sintez a glicinei,
una plecnd de la colin i alta de la serin.
(H3C)3N+ CH2

CH2OH

2[ H]

colina
transmetilare
(H3C)2N CH2
CH3

colinoxidaza

COOH

dimetiglicina

dimetilglicinoxidaza

H3C

CH2O

HOH2C CH COOH
NH2

(H3C)3N+ CH2
betainaldehida

H4 folat

betainaldehid
CHO dehidrogenaza

(H3C)3N+ CH2

NAD+ NADH

betaina

NH CH2
sarcozina

H2N CH2

+ +

COOH

COOH

sarcozinoxidaza
CH2O

COOH

Metilen H4 folat

n cea de a doua cale serina sufer o reacie de hidroximetilare


n prezena tetrahidrofolatului.
Sinteza de aminoacizi neeseniali din ali aminoacizi
neeseniali
La mamifere prolina se sintetizeaz pornind de la acid
glutamic printr-o serie de reacii reversibilecare sunt utilizate i n
catabolismul prolinei.

23

Luciana Dobjanschi

H2C CH2

H2C CH2
HO C CH COOH
O NH2

H2O

NADH

COOH

CH CH COOH

+
H NAD

+ +

O NH2

NAD+

NADH + H+

N
H

COOH

Hidroxiprolina se sintetizeaz din prolin prin aciunea prolin


hidroxilazei. Reacia necesit oxigen molecular, Fe+2 i vitamina C.
HO
N
H

COOH

N
H

COOH

Sinteza de aminoacizi neeseniali care iau natere din


aminoacizi eseniali
23

Biochimie farmaceutic

Cisteina se sintetizeaz din L-serin i homocistein, care


provin ca intermediari n metabolizarea metioninei.
CH2 SH

CH2

HO CH2

CH2

H2O

COOH
L_homocisteina

CH NH2 COOH

L_serina

COOH
cistationina

HO CH2 CH2 CH COOH


H2O

CH2
CH NH2

CH2

CH NH2
COOH

CH NH2

HS CH2 CH COOH
NH2

NH2
L_homoserina

L_cisteina

Tirozina se sintetizeaz din fenilalanin sub aciunea


fenilalanin hidroxilazei. Reacia este ireversibil i necesit prezena
de NADPH, oxigen molecular i tetrahidrobiopterina.
CH2

CH COOH
NH2

fenilalaninhidroxilaza
I

H4 biopterina

H2 biopterina

HO

CH2

CH COOH
NH2

II
NADP +

NADPH

+ H+

Complexul fenilalanin hidroxilazei prezint dou activitai


distincte:
1 reducerea oxigenului molecular la ap i a fenilalaninei la tirozin
2 reducerea dihidrobiopterinei la tetrahidrobiopterin pe socoteala
NADPH.
La fel ca i prolina hidroxilizina este prezent n fibra de
colagen. Hidroxilizina este, ns, absent din aproape toate proteinele
mamiferelor, provine din lizina alimentar prin hidroxilare, dar numai
dup ncorporarea lizinei n legtura peptidic, analog formrii
hidroxiprolinei din prolin. Enzima care catalizeaz aceast reacie
este lizinhidroxilaza.
XIII. Metabolismul nucleotidelor

23

Luciana Dobjanschi

Nucleotidele ocup un loc central n procesele biochimice,


deoarece ele sunt:
- precursori n biosinteza acizilor nucleici
- principalele rezervoare de legturi macroergice
- componeni ai mai multor coenzime
- efectori allosterici.
ARN din diferite celule i clase este continuu hidrolizat la
nucleotide i resintetizat dup necesiti n toate celulele. Procesul
este mai rapide n acele celulel sau organe n care eliminarea de
secreii bogate n proteine sau restructurarea diferitelor ci metabolice
necesit o biosintez proteic activ: glandele digestive exocrine i
ficat. Unele tipuri de celulle au o via relativ scurt (celulele
epidermei mucoasei intestinale, celulele sanguine), n cazul lor fiind
supus unui proces asemntor i ADN, evident la nivelul ntregului
organism.
Transformrile metabolice ale nucleotidelor libere formeaz o
schem unitar n care biosinteza este corelat cu biodegradarea la
diferite nivele prin circuite de recuperare. n acest sens se pot face
urmtoarele precizri generale, i anume:
1.
Nucleotidele sunt constant degradate pn la
nucleozide i apoi la bazele azotate corespunztoare
i ribozo-1-fosfat )sau dezoxiribozo-5-fosfat)
2.
Nucleozidele, bazele azotate i ribozofosfatul pot fi
reutilizate n ci de recuperare pentru resintez de
nucleotide
3.
O parte din bazele purinice sunt catabolizate pn la
acid uric care se elimin, iar cele pirimidinice pn
la intermediari metabolici din alte ci.
4.
ribozofosfatul poate fi utilizat n calea
pentozofosfatului
5.
Nucleotidele pot fi sintetizate de novo pornind de la
intermediari simpli anumii aminoacizi (glicocol,
acid aspartic, glutamina), dioxid de carbon i
grupri C1 activate (legate de acizi tetrahidrofolici).
6.
Reutilizarea bazelor i biosinteza lor de novo sunt
controlate prin disponibilitatea formei activate a
ribozo-5-fosfatului cum ar fi 5-ribozo- -D-ribozil
pirofosfat (PRPP); enzima care-l formeaz PRPPsintetaza (sau ATP fosforil transferaza) este activat
de fosfatul anorganic i nhibat allosteric de
nucleotide, asigurnd concentraia lor constant.
24

Biochimie farmaceutic

Hidroliza acizilor nucleici


Lanurile lungi a acizilor nucleici sunt hidrolizate de ctre
nucleaze n fragmente scurte. Ele sunt, n general, de dou tipuri:
I.
Exonucleazele care desfac succesiv nucleotidele de la
una din capete, fiind 5 sau 3specifice i necesit un
anumit mod de terminare (cu sau fr fosfat) a
captului atacant.
II.
Endonucleazele care desfac legturile situate n
interiorul
lanului
formnd
astfel
lanuri
oligonucleotidice. Sunt cunoscute numeroase enzime
de acest tip cu localizri i roluri diferite. Aciunea lor
poate specific pentru un anumit de acid nucleic
(ADN sau ARN) sau nespecific hidrolizndu-le pe
amndou. Specificitatea poate privi i alte aspecte
cum ar fi existena ADN ca molecul dublu sau
monolan, mai ales pentru unele exonucleaze,
recunoaterea unui anumit nucleotid dintre cele dou
sunt unite prin legtura atacat (unele exndonucleaze)
sau a unei
secvene ntregi de nucleotide din
vecintate (enzime de restricie). Nucleazele intervin
n digestia acizilor nucleici din alimente sau n
prelucrarea i distrugerea acizilor nucleici endogeni
(cu numeroase aspecte).
Digestia acizilor nucleici are loc n duoden. Sub aciunea
endonucleazelor pancreatice (ribonucleaza i dezoxiribonucleaza) se
elibereaz oligonucleotide din care diesterazele intestinului subire
elibereaz 5 i 3 nucleotide.

24

Luciana Dobjanschi
Lanturi polinucleotidice
H2O ribonucleaza
dezoxiribonucleaza
Oligonucleotide + Nucleotide
H2O

fosfodiesteraze

5'_Nucleotide

H2O

nucleotidaza
P fosfomonoesteraze

Nucleozide
P
nucleozidfosforilaze
R1_P
(dR1_P)
Baze purinice
Baze pirimidinice

R5_P
(dR5_P)

Calea
pentozofosfatului

Catabolismul general al nucleotidelor la baze purinice i


pirimidinice
Nucleotidele sunt hidrolizate specific de ctre 5-nucleozide i
fosfat. Exist o mare varietate de asemenea enzime, unele secretate
de mucoasa intestinal cu rol n digestie, altele n general rspdite n
organism cu localizare pe membrana periplasmatic, n lizozomi,
microzomi sau citoplasm, care intervin n metabolismul
nucleotidelor endogene. Membrana perplasmatic este impermeabil
pentru nucleotide dar permite ptrunderea nucleozidelor. Ecto-5 nucleotidaza fixat pe faa extern a plasmei d posibilitatea utilzrii
nucleotidelor, extracelulare (mai ales a AMP) hidrolizndu-le
vectorial la nucleozide (adenozin). n hematii exist o 5nucleotidaz specific pentru nucleotidele pirimidinice.
Cea mai mare parte din adenozin-5- monofosfat este
catabolizat printr-o dezaminare la inozin-5 - monofosfat.
Adenilat deaminaza are mai multe izoenzime, una din ele
fiind abundent n muchi. Aa cum se va vedea IMP este primul
24

Biochimie farmaceutic

nucleotid purinic format prin sinteza de novo i prezint un punct de


ncruciare ntre cile catabolice i cele anabolice.
Adenozina care rezult din restul AMP-ului este, la rndul ei,
dezaminat de ctre adenozin deaminaz la inozin. O mare parte de
adenozin provine n urma hidrolizei S-adenozilhomocisteinei
(SAH), format din S-adenozilmetionin n urma procesului de
metilare. Un caz particular l prezint celulele musculare ale
miocardului. Ele sunt lipsite de adenilatdeaminaz iar AMP produs,
n urma contraciei, este fie hidrolizat la adenozin, care se elibereaz
n snge, fie refosforilat pn la ATP. Ajungnd pn la arterele
coronare, adenozina cauzeaz vasodilatia i consecutiv creterea
debitului circulator. Deoarece producerea adenozinei crete
proprional cu hipoxia, efectul ai primete semnificaia unei
autoreglri a fluxului sanguin n funcie de necesitile miocardului.
Desfacerea nucleozidelor poate decurge pe dou tipuri de
aciuni enzimatice i anume hidrolitic i fosforolitic.
Nucleotidazele, ntr-o reacie ireversibil, hidrolizeaz nuclozidele la
baze purinice i pirimidinice i riboz (sau dezoxiriboz).
Nucleozida +
H2O

nucleozidaza
Baza

purinica

+ Riboza(dezoxiriboza)

pirimidinica

Astfel de enzime sunt rspndite n diferite esuturi fr a se


cunoate numrul i specificitatea lor exact. Nucleozifosforilazele
scindeaz cu ajutorul fosfatului anorganic i elibereaz din
nucleozide
bazele
azotate
i
ribozo-1-fosfat
(sau
dezoxiribozo+1+fosfat). Exist nucleozid fosforilaze specifice pentru
purine i pentru pirimidine. Purinucleozid fosforilazele nu pot folosi
ca substrat adenozina. Din acest motiv este necesar ca AMP i
adenozina s fie n prealabil dezaminate.
Aciunea acestor fosforilaze este reversibil, ele putnd servi
i n biosintez, dei sensul fiziologic este catabolic.

Nucleozida +

purin_pirimidin
nucleozifosforilaza purinica
+ R _P(dR _P)
fosfat
baza
1
1
pirimidinica

n digestie se absorb nucleozide, catabolizate n interiorul


celulelor intestinale ca produi finali. Din acest motiv majoritatea
bazelor azotate din nucleotidele alimentare nu pot fi utilizate de ctre
organismul uman.
24

Luciana Dobjanschi

Catabolismul bazelor purinice


Din catabolismul nucleotidelor purinice rezult dou baze
azotate principale: hipoxantina (din inozin) i guanina (din
guanizin). Ele sunt oxidate mai departe pn la acid uric, produs
final de catabolism la om, primate, psri i unele reptile.
Guanina este dezaminat, n prealabil, pn la xantin de ctre
o xantioxidaz sau o xantindehidrogenaz.
n mod normal, n celule, se formeaz foarte puin adenin
liber, provenind din fosforilarea 5-metioninadenozinei. Adenina nu
poate fi catabolizat direct organismul uman fiind lipsit de
adenindeaminaz, prezent doar la bacterii i nevertebrate, care s-o
transforme n hipoxantin. Cea mai mare parte din adenin este
utilizat n cile de recuperare. n cazul unor deficite enzimatice
ereditare sau n aportul alimentar crescut, excesul de adenin este
oxidat de ctre xantinoxidaz la 8-hidroxixantin i apoi la 2,8dihidroxiadenin, substan puin solubil, care formeaz calculi
renali.
OH

OH
N

H2N
O3PO

-2

H2C

fosfomonoesteraza
H2O

H2N

H2C

N
N
H

O
N

HN
H2N

N
H

HN

guanaza
O

N
H
xantina

guanina

24

R_1_P

OH

H2N
HO

purin_nucleozid
fosforilaza

OH OH
guanizina

OH OH
guanizin_5'_fosfat

N
H

Biochimie farmaceutic
OH

OH
N

N
-2

O3PO

H2C

fosfomonoesteraza
H2O

H2C

purin_nucleozid
fosforilaza

O
N
N
H
hipoxantina

HN
N

R_1_P

OH OH
inozina

OH

N
HO

OH OH
inozin_5'_fosfat

NAD+ NADH + H+ HN

N
H

O
H2O + O2 H2O2

N
N
H

N
H

xantina

n organismul uman xantinoxidaza se gsete mai ales n


mucoasa intestinal i n ficat, restul organelor prezentnd doar urme
de activitate. n consecin purinele din alimente formeaz direct acid
uric, iar sursa major de acid uric endogen este ficatul. O parte din
acidul uric este excretat n intestin prin bil. n general acidul uric din
organismul uman (n jur de 1,2g) provine din trei surse principale:
1. din nucleotidele alimentare
2. catabolismul purinelor endogene
3. transformarea direct a IMP sintetizat de novo
Concentraia normal de acid uric n ser este ceva mai mare la
brbai (6,9-7,5mg/dl) dec la femei (5,7-6,6 mg/dl). Hiperurinemii
apar n guta primar i secundar, hipouricemii n deficienele de
xantinoxidaz ereditar sau n cadrul unei insuficiene hepatice.
Eliminarea urinar este ntre 400 i 800 mg/24 ore variind i n
funcie de alimentaie. Rinichiul uman elimin acidul uric ntr-un
proces destul de complicat. La nivelul glomerulilor este filtrat, apoi
reabsorbit n tubii contori distali. O serie de medicamente
interfereaz cu aceste procese renale.

24

Luciana Dobjanschi

O
HN

N
H

N
H

+O

H2O

H2O2

HN

NADH

N
N
H
H
acid uric

O
NAD+

H
N

+ H+

xantina

n afara semnificaiei sale de produs final al catabolismului


purinic, acidul uric servete pentru eliberarea amoniacului la psri i
unele reptile, fiind puin solubile acestea se elimin sub form de
past economisindu-se ap. Astfel de animale se numesc uricotelice
i nu posed enzimele necesare formrii de uree.
Mamiferele, cu excepia primatelor, descompun n continuare
acidul uric n prezen de uricaz la alantoin pe care o elimin prin
urin. La alte specii degradarea merge mai departe prin aciunea
alantoinazei la acid alantoic, sau continu datorit alantoicazei pn
la uree i acid glioxilic. Deci, flora intestinal descompune ureea cu
ureeaz la dioxid de carbon i amoniac, la unele nevertebrate.
O
H
N

HN

uricaza
O

N
N
O
H
H
acid uric

H2N
O

O
O2

H2O2

COOHNH2

N
N
H H
acid alantoic

NH
N
H

CO2

H2O

H2N

N
H

H2O

alantoina

H2N
O

NH2

H2N

ureea
ureaza

2 (CO2

24

COOH

NH2

alantoicaza
H2O

alantoinaza

2NH3)

CHO
acid glioxilic

Biochimie farmaceutic

La om se elimin prin urin n mod normal i cantiti mici de


hipoxantin, xantin i adenin. Bazele purinice minore, de exemplu,
7-metilguanina, nu pot fi catabolizate i se elimin ca atare.
Biosinteza de novo a nucleotidelor purinice
Nucleotidele purinice pot fi sintetizate n citoplasm printr-o
succesiune de 10 reacii enzimatice, heterociclul bazei fiind construit
direct din robozo-5-fosfat.
Primul compus purinic format este un nucleotid, acidul
inozinic (IMP), nu o purin liber.
1. Prima etap este catalizat de o aminotransferaz care trece
gruparea aminic a glutaminei pe PRPP (fosforibozopirofosfat)
pentru a forma fosforibozil amina. Enzima are proprieti allosterice
i este etapa principal de reglare a biosintezei de novo.

O
HO P
OH

O
H2C

O P O P OH

OH OH

OH

aminotransferaza HO P H2C NH
O 2
OH
OH
Gln + H2O
Glu + PP
OH OH

2. n a doua etap prin hidroliza ATP se asigur energia


necesar condensrii glicocolului cu fosforibozilaminpentru a da
fosforibozil-glicinamida, sub aciunea unei sintetaze. Reacia este
reversibil dar produsul reaciei este ndeprtat n mod continuu
deplasnd echilibrul.

24

Luciana Dobjanschi

CH2 NH2
O

O
HO P

H2C

OH

HO P

sintetaza

NH2
+

ATP

H2C

OH

Mg+2

HOOC CH2 NH2

OC
O

NH

ADP + P
OH OH

OH OH

3. De pe N5, N10 metenil-tetrahidrofolat, o transferaz, trece,


folosind o molecul de ap, o grup formil pe atomul de azot provenit
din glicocol. n acest fel se completeaz atomii din ciclul pentatomic
al purinei.
CH2 NH2
CH2 NH
O
OC
O
OC
CH O
HO P
OH

H2C

NH

OH OH

transferaza

HO P
OH

N5N10_metilen THF
THF

H2C

NH

OH OH

4. Fosforibozil - N formilglicina din etapa precedent se


transform prin aciunea unei sintetaze care schimb CO a amidei cu
NH provenit de la glutamin. Reacia necesit hidroliza ATP.
Produsul format este fosforibozil-N-formil glicinamidin.
CH2 NH
CH2 NH
O HN C
CH O
O
OC
CH O Gln
Glu
HO P H2C
HO P H2C
+2
NH
NH
Mg
O
O
OH
OH
P
ATP H2O
ADP
OH OH

OH OH

5. Utiliznd energia liber eliberat prin hidroliza unui rest


fosfat din ATP, o alt sintetaz nchide ciclul de cinci atomi i
24

Biochimie farmaceutic

formeaz 5-fosforibozil-5-aminoimidazol. Grupa =NH adugat, n


reacia anterioar, apare acum ca un substituient amino al ciclului.

HC

NH

H2N C

CH

CH2 NH
O
HO P

HN C
H2C

OH

CH O

HO P

NH

OH

Mg+2
ATP

H2C

ADP +P
OH OH

OH OH

6. n etapa urmtoare se adaug un grup carboxil din dioxid


de carbon. Carboxilaza este enzima care formeaz, astfel, 5 fosforibozil-5-aminoimidazol-4-carboxilat nu are ca grupare
prostetic biotina i difer ca mecanism de alte enzime care adaug
grupri carboxil.

O
HO P
OH

HC

NH

H2N C

CH

H2C

carboxilaza
CO2

OH OH

HOOC C

NH

H2N C

CH

O
HO P
OH

H2C

OH OH

7. O sintetaz condenseaz acidul aspartic cu produsul


anterior de reacie consumnd o legtur macroergic din ATP.
Condensarea are loc ntre grupa amino a acidului aspartic i
carboxilul
imidazolului.
Intermediarul
5-fosforibozil-4-(Nsuccincarboxamid)-5-aminoimidazol, care rezult, servete pentru
introducerea atomului N1 din inelul purinic.

24

Luciana Dobjanschi
HOOC

CH2 COOH
CH

HOOC C

NH

NH CO C

NH

O H2N C

CH

O H2N C

CH

ATP ADP + P
Mn+2
HO P H2C
N
O
HOOC CH2 CH COOH sintetaza
OH
+

HO P

H2C

OH

NH2
OH OH

OH OH

8. Produsul reaciei anterioare este scindat de ctre o liaz la 5


fosforibozil-4-carboxamid-aminoimidazol i acid fumaric. Reaciile
7 i 8 se aseamn sintezei argininei din citrulin din ciclul
ureogenetic.

HOOC

CH2 COOH
CH
HN CO C

NH

O H2N C

CH

HO P
OH

H2C

OH OH

adenilatsuccinat liaza
acid fumaric

H2N CO C

NH

O H2N C

CH

HO P
OH

H2C

OH OH

9. n etapa urmtoare este transferat o grup formil de pe N 10formil


tetrahidrofolat ducnd la 5-fosforibozil-4-carboxamid-5formamidoimidazol, care conine toi atomii ciclului purinic.

25

Biochimie farmaceutic

H2N CO
HO

H2N C

H2C

OH

NH

H2N CO

N10 _formil
CH THF
THF
N

formiltransferaza

NH

OHC HN C

CH

H2C

OH OH

OH OH

10. n fine, n ultima etap prin eliminare de ap de ctre


ciclohidrolaz se nchide i inelul de ase atomi ducnd la apariia
primului nucleotid purinic, acidul inozinic (IMP).
OH
N
H2N CO
P

NH

OHC HN C

CH

H2C

N
N
ciclohidrolaza

H2C

N
O

_CO2

OH OH

OH OH

Se poate observa c pentru sinteza IMP se consum ase


legturi macroergice, considernd i formarea PRPP.

Aspecte de patologie din metabolismul nucleotidelor


Guta este una din cele mai rspndite boli de metabolism cu
o frecven de 0,3% din populaia Europei. Sub acest denumire sunt
incluse un grup heterogen de boli caracterizate toate prin
hiperuricemie, care duce la depunerea uratului de sodiu n sinoviala
articulaiilor, atacuri acute de artrite, formarea de depozite masive de
urat i apariia urolitiazei.
25

Luciana Dobjanschi

Hiperuricemia poate aprea din numeroase cauze, unele


determinate genetic, altele dobndite. Nu orice uricemie duce la
apriia gutei, n unele cazuri aceasta poate persista toat viaa fr a
provoca modificri patologice.
Guta poate s fie primar, ca boal ereditar de metabolism n
sine, sau secundar dezvoltndu-se ca o consecin a altor boli
ereditare sau dobndite. Guta secundar poate s apar n deficien
de glucozo-6-fosfataz sau n deficiena total a hipoxantin-guanin
fosforibozil transferazei, precum i n boli de distrugeri celulare
masive: anemii hemolitice, leucemii, policitemii, etc. Tratamentul cu
medicamente citotoxice n neoplazii poate declana apariia
secundar a gutei, ceea ce impune asocierea acestora cu inhibitori ai
xantinoxidazei. O alt posibilitate a gutei secundare este n urma unei
afeciuni renale cu scderea capacitii de excreie.
n majoritatea cazurilor de gut primar n se cunoate defectul
enzimatic cauzal, putndu-se evidenia doar diferite situaii generale.
Astfel poate s fie vorba de:
1. o hiperproducie endogen crescut a acidului uric
2. o scdere a eliminrii renale
3. o scdere a proteinei serice de vehiculare: 1 - 2 globulina
de legare a uratului.
Xantinuria ereditar este o boal relativ blnd, acesea
asimptomatic ce se datoreaz deficitului de xantinoxidaz. Bolnavii
prezint adesea hiperuricemie i hiperuricozurie cu eliminri renale
de xantin i hipoxantin. Xantina fiind mai puin solubil dect
acidul uric poate forma calculi renali.

25

Biochimie farmaceutic

XIV. Metabolismul hemoglobinei


Deoarece exist o pierdere permanent de hemoglobin prin
catabolism i prin mbtrnirea hematiilor este nevoie de nlocuirea
acesteia n mod permanent. Durata medie de via a eritrocitelor umane
este n jur de 120 de zile. Ele sunt apoi lizate i hemoglobina coninut
n ele, este convertit n produi de excreie.
Biosinteza globinei se realizeaz din aportul corporal de
aminoacizi ntr-o cantitate de 8 g pe zi. Aproximativ 14% din
aminoacizii aprinnd proteinelor ingerate sunt utilizai pentru obinerea
globinei. Procesul de sintez a globinei are loc n eritrocitele nucleate
din mduva osoas i n reticulocite. Sinteza globinei are loc la nivelul
ribozomilor ntr-un mod asemntor cu a altor proteine. Studii de
electrnomicroscopie arat c sinteza hemoglobinei n reticulocite are loc
pe structura multiribozomal care conine cinci ribozomi. Aceti
ribozomi sunt nirai pe un lan de ARNm.
Nucleul eritrocitelor nucleate din mduva osoas uman nu
sintetizeaz cantiti semnificative de hemoglobin. Formarea globinei
nu pare s implice factori genetici sau mecanism speciale. Cele dou
tipuri de lanuri se formeaz independent sub controlul diferitelor gene i
de asemenea, cu viteze egale.
Biosinteza porfirinelor i hemului const din trei etape
succesive:
1. biosinteza acidului aminolevulinic din glicin i succinilCoA
2. formarea porfibilinogenului din acid aminolevulinic
3. conversia porbilinogenului ntr-un ciclu tetrahidropirolporfirinic i apoi a hemului.
25

Luciana Dobjanschi

n etapa final fierul este nserat n molecula protoporfirinei sub


aciunea ferochelazei
formnd hemul, produsul final de reacie.
Aproximativ 85% din hemul sintetizat pentru formarea hemoglobinei,
cca 10% este utilizat pentru formarea mioglobinei i 5% pentru formarea
citocromilor sau alte proteine hemice.
Porfirinele care iau natere n cantiti mici sunt compui
colaterali care ies din calea biosintezei hemului. Acetia nu pot fi
utilizai i se elimin ca atare prin urin.
Formarea n cantitate mare a acestor porfirine reprezint o
perturbare n biosinteza hemului. Aceast perturbare reprezint boli
genetice, prin deficit enzimatic, cu sau fr manifestri clinice cunoscute
sub numele de porfirii i caracterizate printr-o eliminare crescut de
porfirine prin urin, fotosensibilitate. Porfirinele constituie un grup
heterogen de boli caracterizate prin excreie crescut de porfirine i
precursori ai porfirinelor. Principalele tipuri de porfirii sunt:
- porfiria hepatic acut intermitent
- porfiria eritropoetic congenital
- coproporfiria ereditar
- protoprfiria
- porfiria cutanat tardiv
- porfiria toxic
- porfiria dobndit
- porfirii variate.
Catabolismul hemoglobinei
n condiiifiziologice la un om adult se distrug 1-2 x 10 8
eritrocite pe zi. Astfel, un adult de 70 de kg prezint un turnover de 6 g
Hb/zi. Din eritrocitele mbtrnite hemoglobina este eliberat prin
fagocitoz n celulele reticuloendoteliale, n special n splin.
Hemoglobina eliberat n snge este captat de ctre o glicoprotein
specific numit heptaglobulin (Hp), care prezint proprieti
peroxidice.
Degradarea hemului are loc la nivelul microzomilor hepatici i
implic o oxidare unic a atomului de carbon din puntea metilenic cu
formare de monoxid de carbon. Reacia este catalizat de ctre hemoxigenaz, o enzim microzomal, n prezen de oxigen molecular,
citocrom c reductaz i NADH.
Inelul tetrapirolic al hemului se deschide i atomul de fier este
eliberat. Se formeaz, probabil cai intermediar, verdohemin. Se ajunge
25

Biochimie farmaceutic

apoi la biliverdin care sub aciunea biliverdin oxidazei i NADPH, este


transformat n bilirubin.
O parte din bilirubin se formeaz i la nivelul altor esuturi din
diferite hemoproteine i este transportat la ficat i legat de o albumin
plasmatic. Bilirubina este insolubil mn mediu apos.
n ficat bilirubina este conjugat cu acid glucuronic formnd
acid bilirubin diglucuronic care este solubil n ap i este rapid xcretat
prin intermediul bilei n intestin. Bilirubin diglucuronidul este hidrolizat
la nivelul intestinelor de ctre -glucuronidaz. Bilirubina este redus de
flora bacterian trecnd n D- sau L-urobilinogen incolor. O parte din el
este reabsorbit i excretat n urin sub forma unui compus de oxidare
colorat n galben oraj, L-urobilin. Partea rmas de urobilinogen este
redus n intestin la L-stercobilinogen, care este xcretat n fecale sub
forma unui produs de oxidare de culoare brun L-stercobilin.

25

Luciana Dobjanschi

XV. Bibliografie
1. Barrett A.J., Cantor C. R., Enzyme nomenclature, Academic
Press, 1992
2. Bedeleanu D., Manta I., Biochimie medical i farmaceutic,
Ed.Dacia Cluj-Napoca, 1985
3. Cristea-Popa E., Popescu A., Truia E., Dinu V., Tratat de
Biochimie Medical, Ed. Medical-Bucureti, 1991.
4. Champe Pamela C., Harwey A. Richard, Biochemistry, J.B.
Lippincott Company, 1994
5. Cplna S., Tnsescu D., Truia E., Biochimie medical,
Ed.Didactic i Pedagogic Bucureti, 1977
6. Felszeghy E., Abraham A., Biochimie, Ed. Didactic i
Pedagogic Bucureti, 1972
7. Lehninger A.L. Biochimie, Ed.Tehnic Bucureti, 1987
8. Gilu D., Antonescu A., Dobjanschi L., Gilu R.D., Gilu L.,
Compendiu de Biochimie medical, Ed. Imprimeriei de Vest
Oradea, 2002.
9. Gilu L. Proinov I., Biochimie, Ed. Universitii din Oradea,
1999
10. Murean Mariana, Biochimie medical, Ed. Universitii din
Oradea 2003
11. Mihele D., Biochimie clinic, Ed.Medical Bucureti, 2001.
12. Rosetti-Coloiu Matilda, Mitrea Niculina, Biochimie, Ed.
Didactic i Pedagogic, Bucureti, 1985
13. Thierry Grisar, Elements de biochimie humaine normale et
pathologique, partium I, Les Editions de lUniverite de Liege,
2004
14. rmure Cornelia, Biochimie structural i metabolic vol.I,
Ed.Dacia Cluj-Napoca, 1996
15. Vrana K.E., Biochemistry, Lippincott Williams Wilkins,
Philadelphia,1999.

25