CAPTULO 2.6.2.

BRUCELOSIS PORCINA

RESUMEN
La brucelosis en cerdos est causada por Brucella suis. Se trata de una infeccin bacteriana que tras una bacteriemia inicial, causa lesiones inflamatorias crnicas en los rganos reproductores de ambos sexos, con localizacin y lesiones ocasionales en otros tejidos. Las especies de Brucella suis abarcan cinco biovariedades, pero la infeccin en los cerdos se debe a las biovariedades 1, 2 o 3 de B. suis. La enfermedad causada por las biovariedades 1 y 3 es similar, mientras que la debida a la biovariedad 2 difiere de la 1 y la 3 en su rango de hospedadores, su distribucin geogrfica limitada y su patologa. La biovariedad 2 raramente es patognica para el hombre, mientras que la 1 y la 3 son muy patognicas y causan una enfermedad grave. La brucelosis porcina es de amplia incidencia; sin embargo, por lo general, su prevalencia es reducida a excepcin de Sudamrica y el sureste asitico, donde la prevalencia es mayor. En algunas zonas, se ha llegado a establecer la infeccin por B. suis en cerdos silvestres o asilvestrados (los mtodos de diagnstico recomendados para los cerdos silvestres o asilvestrados son los mismos que para los cerdos domsticos). Varias biovariedades de B. suis causan infecciones en otros animales, tales como renos, caribes, liebres y varias especies murinas y, ocasionalmente, en vacas y perros. Las infecciones debidas a Brucella suis en animales diferentes al cerdo se recogen en el Apndice que aparece al final de este captulo. Como signos de la enfermedad en las cerdas destacan el aborto en cualquier fase de gestacin y el nacimiento de lechones muertos o dbiles. En los verracos, el signo ms destacado es la orquitis y pueden estar afectados los rganos sexuales secundarios. Brucella suis puede estar presente en el semen, a veces, en ausencia de signos clnicos. La transmisin durante la monta es ms comn que en el caso de la brucelosis en rumiantes. En ambos sexos, pueden verse afectados los huesos y especialmente las articulaciones y las vainas de los tendones, lo que causa cojera y, a veces, parlisis. Los cerdos son susceptibles a la infeccin artificial con B. abortus y B. melitensis, pero son escasos los informes de enfermedad natural en cerdos causada por cualquiera de estos organismos. Normalmente, en el hombre la infeccin est confinada a aquellas personas que, por su ocupacin, estn en contacto con los cerdos, y a los trabajadores de laboratorio. La capacidad de B. suis para colonizar las ubres bovinas con la consiguiente aparicin en la leche significa que tiene el potencial de ser un riesgo serio para la salud humana. Identificacin del agente: Brucella suis se asla fcilmente a partir de cerdos vivos mediante el cultivo de los productos del nacimiento y a partir de los canales mediante el cultivo de los rganos y ganglios linfticos. Se dispone de medios selectivos para el cultivo de muestras contaminadas. En la naturaleza, B. suis se encuentra de modo invariable en la fase lisa (la apariencia en medio slido es tpica de las brucelas lisas). Las biovariedades porcinas aglutinan con el antisuero monoespecfico A y no con el antisuero M. Se puede efectuar la identificacin definitiva de las especies y biovariedades mediante pruebas de fagotipificacin y pruebas bioqumicas, preferiblemente llevadas a cabo en laboratorios especializados. Pruebas serolgicas: Hasta la fecha, ninguna de las pruebas serolgicas tradicionales ha resultado ser completamente fiable en el diagnstico rutinario de los cerdos individuales. Se utilizan sobre todo para identificar las piaras infectadas. Las pruebas recomendadas con propsitos de comercio internacional son un enzimoinmunoensayo (ELISA) indirecto y uno competitivo. Las pruebas del antgeno brucelar tamponado (BBATs), p. ej. la prueba de aglutinacin tamponada en placa (BPAT) y la prueba de rosa de bengala (RBT), se consideran pruebas alternativas con propsitos de deteccin o pruebas para el estudio de piaras completas. Tambin se ha

Manual de la OIE sobre animales terrestres 2004

835

Captulo 2.6.2. Brucelosis porcina

desarrollado un ensayo de polarizacin de fluorescencia. La prueba alrgica cutnea tambin es til para identificar piaras infectadas. Requisitos para las vacunas y los materiales de diagnstico: La vacuna con la cepa 2 de Brucella suis se emplea para inmunizar cerdos en China (Repblica Popular). Es necesaria la confirmacin de los resultados obtenidos en China con la vacuna de la cepa 2 antes de recomendar su uso general. En otros pases, el trabajo experimental ha demostrado que la vacuna Rev.1 de B. melitensis posee un poder de proteccin de las ovejas frente a B. melitensis superior al de la cepa 2 de B. suis. No se dispone de datos suficientes para concluir que la vacuna con la cepa RB51 de B. abortus sea eficaz para proteger a los cerdos frente a la exposicin a B. suis. En la prctica, todava no se ha encontrado un producto de aceptacin general. Se ha descrito la preparacin, la prueba y la utilizacin de un alrgeno estabilizado, el brucelizado (o fraccin F de la brucelina).

A. INTRODUCCIN
La brucelosis porcina es una infeccin causada por las biovariedades 1, 2 o 3 de Brucella suis. Es propia de muchos pases en los que se cran cerdos. En general, la prevalencia es baja, pero en muchas zonas, tales como Sudamrica y el sureste asitico, la prevalencia es mucho mayor. La brucelosis porcina puede ser un problema serio pero no reconocido actualmente en muchos pases. En estados sureos de los EE.UU. y en Queensland, Australia, se han descrito infecciones debidas a la biovariedad 1 de Brucella suis en cerdos silvestres. En Queensland, se han detectado varias infecciones humanas en personas que cazan o manejan material procedente de cerdos silvestres (16). Generalmente, la enfermedad se transmite por consumo de alimentos contaminados mediante productos del nacimiento y/o aborto y de las secreciones uterinas. Es normal que los cerdos coman las membranas y los fetos abortados. Con mucha frecuencia tambin se produce la infeccin durante la monta y, esto tiene implicaciones para aquellas personas que practican la inseminacin artificial. En los cerdos y en los rumiantes, tras una bacteriemia inicial, B. suis coloniza las clulas del tracto reproductor de ambos sexos. En las hembras, invade las placentas y los fetos, en tanto que en los machos, la invasin tiene lugar en una o ms de las siguientes zonas: testculos, epiddimos, vesculas seminales y/o glndulas bulbo uretrales. Las lesiones en los machos, que casi siempre son unilaterales, comienzan con una hiperplasia que puede progresar hasta la formacin de abscesos; la etapa final se caracteriza por esclerosis y atrofia. En varias articulaciones se puede presentar artritis y a veces espondilitis. El aborto es la manifestacin ms comn de la brucelosis en las cerdas, lo que sucede muy tempranamente o en cualquier momento de la gestacin. Con frecuencia la secrecin vaginal no es evidente y puede parecer un caso de infertilidad ms que de aborto. En los machos, es ms probable que la brucelosis sea persistente, con lesiones en el tracto genital que a menudo provocan interferencias con la actividad sexual, que pueden ser temporales o permanentes. El verraco puede excretar brucelas en el semen sin ninguna anormalidad aparente en los rganos sexuales o interferencia con la actividad sexual. En ambos sexos, pueden estar inflamadas las articulaciones y las vainas de los tendones, es posible que provoque cojera y, ocasionalmente, parlisis posterior. Una proporcin significativa de cerdos y cerdas se recuperar de la infeccin, con frecuencia en unos 6 meses, pero muchos permanecern infectados de forma permanente. La brucelosis causada por la biovariedad 2 de B. suis difiere de la infeccin causada por las biovariedades 1 y 3 en cuanto a la variedad de los hospedadores, la distribucin y la patologa. En brotes recientes en Europa, han estado implicados cerdos silvestres como fuente de transmisin de la biovariedad 2 a cerdos criados al aire libre (7). Adems de porcinos silvestres, la liebre europea (Lepus capensis) tambin acta de reservorio de la biovariedad 2 de B. suis y se considera que es una posible fuente de transmisin para el ganado domstico (1, 7). Histricamente, la biovariedad 2 ha tenido una distribucin geogrfica extensa entre Escandinavia y los Balcanes (1). La biovariedad 2 de Brucella suis causa lesiones miliares en los tejidos, particularmente en los reproductores, que con frecuencia llegan a ser purulentas. Hasta la fecha slo se ha descrito en una ocasin que la biovariedad 2 cause brucelosis humana. Las biovariedades comunes de B. suis (1 y 3) son patgenos humanos serios y es necesario tomar precauciones cuando se maneja y elimina material potencialmente infeccioso. Esto es especialmente cierto en el laboratorio despus de cultivar el microorganismo, ya que se incrementa de forma considerable su nmero. En los laboratorios la manipulacin de los cultivos o de material contaminado procedente de animales infectados se debe realizar bajo condiciones estrictas de bioseguridad para manipular sin riesgo este peligroso agente zoonsico. En cuanto a bioseguridad, se recomienda un nivel de contencin 3 o superior, tal y como se describe en el Captulo I.1.6. Seguridad humana en el laboratorio de microbiologa veterinaria.

836

Manual de la OIE sobre animales terrestres 2004

Captulo 2.6.2. Brucelosis porcina

B. TCNICAS DE DIAGNSTICO
En la brucelosis porcina, los mtodos de cultivo son al menos tan sensibles como las pruebas serolgicas (4). Como el producto de casi todas las explotaciones de cras de cerdos pasa por los mataderos, los mtodos de vigilancia (serologa y cultivo) pueden aplicarse de manera efectiva a ese nivel. En muchas zonas, la cra del cerdo tradicional est siendo reemplazada o acompaada por el desarrollo de unidades comerciales mayores, por eso aumenta el uso de la inseminacin artificial. Por consiguiente, la inseminacin artificial que emplea verracos libres de brucelosis puede resultar una ayuda valiosa en el control de la brucelosis porcina, pues, obviamente, el uso inadvertido de semen infectado podra causar un dao incalculable.

1.

Identificacin del agente

Las muestras ptimas para el cultivo bacteriolgico y los mtodos para el procesamiento de muestras son similares a los descritos en el Captulo 2.3.1. Brucelosis bovina. Los mtodos selectivos y estndares utilizados para otras especies de Brucella son adecuados para B. suis (vase Captulo 2.3.I. Brucelosis bovina). La adicin de suero no es esencial, pero el medio basal que contiene suero al 5% es un medio satisfactorio, tanto para el aislamiento como para el mantenimiento de los cultivos y la tipificacin. No es necesaria la adicin de CO2 a la atmsfera. En la naturaleza B. suis se presenta siempre en la forma lisa y las colonias son indistinguibles de otras brucelas lisas descritas en el Captulo 2.3.1. Brucelosis bovina. Las biovariedades 1, 2 y 3 de B. suis tienen todas el antgeno dominante de superficie A, y el crecimiento se puede identificar de manera preliminar mediante la aglutinacin en porta con el suero monoespecfico anti-A. La identificacin confirmativa de las especies y biovariedades se debera realizar en un laboratorio de referencia especializado. Los laboratorios de referencia de la OIE para la brucelosis estn indicados en el Cuadro de la Parte 3 de este Manual de animales terrestres. La confirmacin de las especies y biovariedades depende de pruebas de fagotipificacin, de produccin de H2S (nicamente la biovariedad 1 produce H2S), y de crecimiento en presencia de colorantes. Algunas especies de la biovariedad 1 de B. suis son atpicas por el hecho de que crecen en medios que contienen 20 g/ml de fucsina bsica. La mayora de las cepas de B. suis resultan inhibidas en presencia de safranina O a una concentracin de 1/10.000, mientras que B. suis reacciona ms rpidamente en la prueba de la ureasa que B. abortus o B. melitensis. La prueba metablica de la oxidasa es una prueba adicional, que puede usarse para diferenciar B. suis de otras especies lisas de Brucella. Se dispone de tcnicas de gentica molecular basadas en la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) que emplean cebadores especficos y permiten diferenciar B. suis de otras especies lisas de Brucella (3, 18). Sin embargo, estos ensayos de PCR no pueden distinguir las biovariedades de B. suis, ni han sido totalmente evaluadas ni estandarizadas. Se ha determinado la secuencia genmica completa de 3,3 Mb de la cepa 1330 de B. suis y tiene una estructura cromosmica y un contenido gnico similar al de la cepa 16M de B. melitensis (14). El conocimiento de la secuencia de B. suis ser valioso para la investigacin bsica de la taxonoma, la virulencia y los antgenos protectores de B. suis y puede ser de ayuda en el desarrollo de nuevas pruebas diagnsticas.

2.

Pruebas serolgicas

Ninguna de las pruebas serolgicas convencionales utilizadas para el diagnstico de la brucelosis porcina es fiable para el diagnstico individual en porcino . Un problema significativo es el hecho de que las cras destetadas de ms de 23 meses de edad son susceptibles a la infeccin con B.suis, pero es muy limitada su respuesta anticuerpos aglutinantes a la infeccin de. Estas pruebas convencionales utilizan antgenos que dependen del lipopolisacrido (LPS) liso para su actividad. Debido a que comparten la cadena polisacardica O, tales antgenos reaccionan igual que el LPS de Yersinia enterocolitica serotipo 0,9 y, por tanto, no tienen la capacidad de distinguir entre los anticuerpos de estas dos infecciones. La infeccin en cerdos por Yersinia enterocolitica no es comn en algunas zonas (21). Los estudios sugieren que son similares las sensibilidades y especificidades del ensayo del antgeno tamponado y acidificado en placa, de la prueba con 2-mercaptoetanol, del enzimoinmunoensayo indirecto (I-ELISA), del ELISA competitivo (C-ELISA) y del ensayo de polarizacin de fluorescencia (FPA) (13). A veces el suero porcino tambin puede contener anticuerpos inespecficos, que posiblemente sean de la clase IgM, lo que reduce en gran medida la especificidad de las pruebas serolgicas convencionales, especialmente la prueba de aglutinacin del suero (SAT). Adems, el complemento porcino interacta con el complemento de cobaya lo que

Manual de la OIE sobre animales terrestres 2004

837

Captulo 2.6.2. Brucelosis porcina

produce una actividad pro-complementaria que reduce la sensibilidad de la prueba de fijacin del complemento (CFT). Para la CFT se han descrito niveles de sensibilidad tan bajos como del 38% (15) y del 49% (17); por tanto, esta prueba no se puede recomendar para el diagnstico de la brucelosis en cerdos individuales. Para fines internacionales y otros fines comerciales, tales como la adquisicin de verracos, es ms importante conocer el estado de la enfermedad de la piara y del rea en la que est situada la piara que las pruebas en animales individuales. A pesar de esto, la Unin Europea y algunos otros pases todava insisten en que slo se debera permitir cruzar las fronteras internacionales a los cerdos cuyo suero muestre un ttulo de aglutinacin inferior a 30 Unidades Internacionales (IU) por ml y un resultado de la CFT de menos de 20 ICFTU (unidades internacionales de la CFT).

Sueros de referencia
Los estndares de referencia primaria son aqullos frente a los que se comparan y calibran otros estndares. Actualmente se estn desarrollando estos estndares y los laboratorios de referencia nacional podrn disponer de ellos cuando estn completos. Los reactivos biolgicos que se utilizan en los ensayos C-ELISA e I-ELISA para el diagnstico de la brucelosis porcina estn disponibles en cantidades pequeas con fines de investigacin o estandarizacin1.

a)

Enzimoinmunoensayo (prueba prescrita para el comercio internacional)

ELISA indirecto

Se han desarrollado ELISAs indirecto y competitivo para el diagnstico de la brucelosis en cerdos individuales y para el muestreo de grandes cantidades de sueros. Estas tcnicas prometen ser ms eficaces que cualquier otra prueba mencionada ms arriba y la C-ELISA parece ser mejor para distinguir reacciones de anticuerpos debidas a la infeccin con Y. enterocolitica serotipo 0,9 de las debidas a la infeccin con Brucella sp. El mtodo del I-ELISA se describe con detalle en el Captulo 2.3.1. Brucelosis bovina, sin embargo, deberan utilizarse anticuerpos monoclonales especficos para la IgG porcina conjugada con peroxidasa de rbano picante. ELISA competitivo

Los procedimientos del C-ELISA para la deteccin de anticuerpos porcinos frente a Brucella sp. (11) son idnticos a los empleados para la deteccin de anticuerpos bovinos frente a B. abortus descritos en el Captulo 2.3.1. Este ensayo es capaz de eliminar algunas reacciones debidas a Y. enterocolitica serotipo 0,9 y a otros anticuerpos de reaccin cruzada, tales como las IgM, que tienen afinidad por los eptopos de Brucella menor que la de los anticuerpos monoclonales utilizados en el ensayo. Se recomienda el C-ELISA como prueba confirmativa ya que su sensibilidad y especificidad superan las de las pruebas de aglutinacin.

b)

Ensayo de polarizacin de fluorescencia (prueba alternativa para el comercio internacional)

El FPA para la deteccin de anticuerpos porcinos frente a Brucella sp. es en esencia el mismo que el descrito para bvidos (para ms detalles, vase el Capitulo 2.3.1); la dilucin del suero puede variar dependiendo de la validacin con las muestras locales, pero con frecuencia se utiliza una dilucin 1/25 para la prueba en tubo y 1/10 para la prueba en placa (11). Es una tcnica simple para medir la interaccin antgeno/anticuerpo y puede llevarse a cabo tanto en el laboratorio como en el campo. Este ensayo puede ayudar a eliminar algunos resultados de reactividad por la exposicin a Y. enterocolitica serotipo 0.9 y a otros anticuerpos de reaccin cruzada. Los sueros porcinos liofilizados tienden a incrementar la actividad de fondo en este ensayo. Se puede utilizar el FPA como prueba de deteccin y/o confirmacin.

c)

Pruebas del antgeno brucelar tamponado (prueba alternativa para el comercio internacional)
Se recomiendan como pruebas alternativas con fines de deteccin o como pruebas para piaras completas, las pruebas del antgeno brucelar tamponado (BBAT), p. ej. la prueba de la tarjeta, la prueba de aglutinacin de rosa de bengala en placa (RBT) o la prueba de aglutinacin en placa con antgeno tamponado (BPAT). En el Captulo 2.3.1. Brucelosis bovina, se describe la preparacin y estandarizacin de los antgenos de las BBATs y los mtodos para realizar las pruebas. Todas las biovariedades de B. suis que afectan a los cerdos tienen el mismo antgeno A inmunodominante, como la mayora de las biovariedades de B. abortus, lo que hace que los antgenos de B. abortus resulten apropiados para probar los sueros porcinos.

3.

Otras pruebas

Se puede obtener del Laboratorio de Referencia de la OIE para la Brucelosis en el Instituto de Investigacin de Enfermedades Animales, 3851 Fallowfield Road, Nepean, Ontario K2H 8P9, Canad.

838

Manual de la OIE sobre animales terrestres 2004

Captulo 2.6.2. Brucelosis porcina

a)

Pruebas alrgicas (de hipersensibilidad)

Las pruebas alrgicas se han utilizado ampliamente para el diagnstico de la brucelosis en piaras de Europa del Este, en los pases que antes formaban parte de la Unin de Repblicas Socialistas Soviticas (URSS) y en la Repblica Popular de China. La especificidad es muy elevada; sin embargo, la sensibilidad de la prueba alrgica es similar a la de las pruebas serolgicas (BBATs) y no es fiable para el diagnstico individual. Algunos animales infectados que son sero-negativos, reaccionan de manera positiva a la prueba cutnea, y viceversa. As, donde sea practicable, resultar til realizar ambas pruebas. Como el principio activo de la prueba alrgica es una protena, no debera haber reaccin cruzada con Y. enterocolitica serotipo 0.9, al menos en teora, y se desconoce si existe alguna demostracin de esta reaccin cruzada. Para el diagnstico se han utilizado muchos alrgenos diferentes, pero uno que es simple de preparar, que se ha utilizado con efectividad como prueba de grupo en cerdos, y que todava se utiliza en algunos pases es un hidrolizado cido, a veces llamado brucelizado o fraccin F de la brucelina. A pesar de contener algn polisacrido, esta preparacin no induce la aparicin de aglutininas ni de anticuerpos fijadores del complemento ni sensibiliza a los animales (9). El mtodo para preparar la fraccin F de la brucelina (Seccin C2), es decir, la hidrlisis cida, provocar el aumento de una cantidad sustancial de polisacrido O en el sobrenadante, de modo que esto no ayuda a diferenciar los anticuerpos de Yersinia respecto a los de Brucella. En la Seccin C2 se indica un mtodo de preparacin. Como un agente diagnstico porcino, se inyectan por va intradrmica 0,2 ml del alrgeno en la piel situada en la base de la oreja. La lectura de la reaccin se lleva a cabo despus de 48 horas. Una reaccin positiva muestra eritema sobre una piel no pigmentada y una inflamacin edematosa. En reacciones graves tambin puede haber alguna necrosis. Ms recientemente, se ha desarrollado la brucelina INRA para ser utilizada en rumiantes; se desconoce si se ha utilizado en cerdos. En su preparacin se emplea una cepa rugosa, de modo que se evita la presencia del LPS liso. La preparacin, la prueba y el uso de la brucelina INRA se describen con detalle en el Captulo 2.3.1. Brucelosis bovina.

C. REQUISITOS PARA LAS VACUNAS Y LOS MATERIALES DE DIAGNSTICO

Se han efectuado numerosos intentos de desarrollar una vacuna con el fin de inmunizar a los cerdos frente a B. suis. Slo ha encontrado cierta aceptacin un producto para uso de campo: la vacuna preparada a partir de la cepa 2 de B. suis (S2) se ha utilizado ampliamente en el sur de la Repblica Popular de China. Hasta la fecha no parece que se haya utilizado en animales distintos al cerdo, probablemente porque se ha demostrado que confiere una proteccin menor en las ovejas frente a B. melitensis que la vacuna Rev.1 (20). No se dispone de datos suficientes para concluir si la vacuna de la cepa RB51 de B. abortus es eficaz para proteger al ganado porcino de la exposicin a B. suis.

C1. Vacuna de la cepa 2 de Brucella suis

La S2 es una cepa atenuada de manera natural, estable y lisa de la biovariedad 1 de B. suis. Muchos estudios han fracasado en la deteccin de cualquier caracterstica que distinga la S2 de las cepas de campo de la biovariedad 1, a excepcin del nivel de virulencia, el cual, como se estima por su persistencia en ratones y cobayas, es mucho menor que el medio de la cepa de campo. Se ha demostrado el nivel bajo de virulencia y su estabilidad mediante pases en cerdas gestantes y verracos (22). La vacuna S2 se puede administrar por va oral; por ejemplo, en la Repblica Popular China con frecuencia se mezcla con la comida, aunque se advierte que la comida fermentada inactiva rpidamente la vacuna. La vacunacin oral podra ser una posibilidad atractiva para el control de la brucelosis en los cerdos silvestres. Los experimentos de desafo en ambos sexos han demostrado de manera apreciable niveles de infeccin menores en los animales vacunados comparados con los control no vacunados, incluso en cerdas desafiadas con el semen infectado. Para la vacunacin oral, se necesitan dosis de alrededor de 2 1010 y normalmente se administran dos dosis en un intervalo de aproximadamente dos meses. Se dice que los anticuerpos producidos en respuesta a la vacunacin oral desaparecen en unos 6 meses despus de la vacunacin. Liang Xingxian (10) informa que en la Provincia de Guangdong en el sur de China, se ha controlado la brucelosis porcina mediante una combinacin de pruebas serolgicas anuales de los grupos de crianza con la eliminacin de los animales sero-positivos y la vacunacin de los animales sero-negativos. En 1985, la tasa de animales reactivos fue del 10%; en 1987 cay hasta el 1,2% y no se han encontrado verracos reactivos en los 4 aos posteriores hasta 1991. Antes de aceptar la vacuna S2 para uso general, debera investigarse cuidadosamente su inocuidad e inmunogenicidad segn las condiciones propias de cada pas.

1.

Control del inculo

Manual de la OIE sobre animales terrestres 2004

839

Captulo 2.6.2. Brucelosis porcina

Se dispone de cultivos liofilizados del inculo para la produccin experimental y el uso de las vacunas S2 procedentes de instituciones reconocidas2. Este material liofilizado se puede propagar mediante cultivo en agar nutritivo o en agar tripticasa soja durante 23 das para producir lotes del inculo que no es conveniente subcultivar ms de 3 veces desde el cultivo original. Cualquier pas interesado en la introduccin de esta vacuna debera organizar experimentos de desafo adecuados y ensayos de campo en los cerdos.

2.

Mtodo de produccin

La vacuna S2 se produce en fermentadores empleando los mismos procedimientos y medios a los descritos para la cepa 19 de B. abortus (S19) (vase Captulo 2.3.1. Brucelosis bovina). Sin embargo, para la propagacin de la vacuna S2 en medio slido, se prefiere el agar nutritivo o el agar tripticasa soja al medio de agar patata.

3.

Control del proceso y prueba posterior

El control del proceso, el control de lotes y las pruebas sobre el producto final son las mismas que para B. abortus S19. Con respecto a la longitud de la inmunidad, se recomienda una revacunacin anual.

C2. Bruceliado (fraccin F de la brucelina)

a) Preparacin
i) ii) iii) iv) v) vi) vii) Se cultiva una cepa lisa de Brucella (p. ej. B. suis) en medio solidificado con agar o en un fermentador. Las clulas desarrolladas en medio slido se recogen en solucin salina normal (0,15 M NaCI). Se precipitan por centrifugacin y se resuspenden hasta alcanzar la densidad de 50100 109 clulas/ml en solucin salina normal. Se aade cido hidroclrico 1 N y se ajusta el pH hasta 1.22.0. Se incuba a temperatura ambiente durante 90 minutos. Despus de autoclavar a 120C durante 25 minutos, se deja toda la noche en el autoclave. Las clulas se separan por centrifugacin. Se ajusta el pH del sobrenadante hidrolizado hasta 6.87.0. Se calienta en un bao de agua a 80C durante 30 minutos.

viii) Se pasa a travs de un filtro estril. ix) x) Se estima el contenido de nitrgeno del hidrolizado concentrado. Se ajusta el contenido de nitrgeno proteico a 2530 mg/100 ml. Se comprueba que est estril. La falta de toxicidad se comprueba inyectando de tres a cinco ratones con 0,5 ml.

La potencia se puede probar en cobayas sensibilizados comparndola con la de un producto de potencia conocida. Se pueden sensibilizar los cobayas mediante inyecciones repetidas de B. suis muerta en adyuvante incompleto de Freund (2).

b)

Utilizacin de campo
Como agente diagnstico porcino, se inyectan por va intradrmica 0,2 ml del alrgeno en la piel de la base de la oreja. La lectura de la reaccin se realiza despus de 48 horas. Una reaccin positiva muestra eritema en la piel no pigmentada y una inflamacin edematosa. En las reacciones graves tambin puede haber alguna necrosis.

Se puede obtener del Instituto Nacional para el Control de los Productos Veterinarios y Farmaceticos del Ministerio de Agricultura, 30 Baishiqiao Road, Beijing 100081, China (Repblica Popular), o de VLA Weybridge, New Haw, Addlestone, Surrey KT15 3NB, Reino Unido. El suministro a partir del laboratorio Weybridge necesita el permiso previo de la Organizacin Mundial de la Salud.

840

Manual de la OIE sobre animales terrestres 2004

Captulo 2.6.2. Brucelosis porcina

APNDICE: INFECCIONES DE BRUCELLA SUIS EN ANIMALES DISTINTOS AL CERDO

1. Brucelosis rangiferina

La biovariedad 4 de Brucella suis provoca una enfermedad grave en los renos y los caribes (Rangifer tarandus y sus diferentes subespecies) a lo largo de la regin rtica, Siberia, Canad y Alaska (12). Algunos de estos animales son domsticos, otros son salvajes y migratorios. Rangifer tarandus es muy susceptible a la infeccin por B. suis, caracterizada por fiebre, depresin y varios signos locales, tales como aborto, retencin de placentas, mamitis, a veces con secreciones sanguinolentas, mastitis, bursitis y orquitis. En la regin rtica, la biovariedad 4 de B. suis constituye una zoonosis seria (5). Puede trasmitirse al hombre por contacto directo o a travs del consumo de leche y otros productos procedentes de los renos, calentados de modo inadecuado. La mdula sea, que en esta regin se considera una exquisitez especial, tambin constituye una fuente de infeccin para el hombre. Los mtodos descritos anteriormente para el aislamiento y la identificacin de B. suis en muestras de cerdo son aplicables de igual modo a la biovariedad 4 de B. suis para las muestras de reno. La biovariedad 4 crece bien en todos los medios habituales para el cultivo de Brucella. Adems, reacciona positivamente tanto con los sueros monoespecficos A como M. Para los pruebas serolgicas, se ha descrito que la prueba de aglutinacin en tubo es satisfactoria, considerndose diagnsticos los ttulos a partir de 1/20. Asimismo, se ha utilizado la CFT, pero en los renos no se ha establecido la interpretacin clnica de estas pruebas. Se ha intentado de modo experimental, sin conseguir un resultado preciso, la vacunacin de los renos con la vacuna S19 de B. abortus, o, alternativamente, empleando la vacuna 45/20 de B. abortus con adyuvante. En el caso de la S19, la reaccin a la vacunacin es bastante grave y en los animales vacunados slo se puede demostrar la inmunidad frente al desafo con dosis muy pequeas de la biovariedad 4 de B. suis. Gall et al. (6) han comparado varias pruebas serolgicas y concluyen que los valores de especificidad para la BPAT y la CFT que utilizan sueros de reno/carib son menores que los de los I-ELISA, C-ELISA y FPA, mientras que los valores de sensibilidad son similares en todas las pruebas.

2.

Infeccin por Brucella suis en otras especies no porcinas

Existen dos tipos diferentes de situacin epidemiolgica con respecto a la infeccin por B. suis en otras especies no porcinas. En el primer caso, la infeccin por B. suis en animales que no son los hospedadores naturales de la infeccin se produce a travs de la ingestin de materiales contaminados o por la cohabitacin con los hospedadores naturales infectados. Por ejemplo, los lobos y los zorros rticos pueden contraer la biovariedad 4 de B. suis a partir de los renos; los perros y los roedores, tales como las ratas y ratones, pueden adquirir otras biovariedades de B. suis por la cohabitacin con hospedadores infectados. Las vacas pueden resultar infectadas por la cohabitacin con ganado porcino silvestre. Invariablemente, las bacterias que infectan son las biovariedades bien definidas de la especie del hospedador natural. En el segundo caso, resultan infectadas algunas especies de vida libre que son hospedadores naturales de B. suis o se infectan por bacterias relacionadas con B. suis. Un ejemplo corresponde a la llamada brucelosis murina de la antigua URRS, en donde algunos roedores pequeos se infectan con la biovariedad 5 de B. suis. Se han descrito otras situaciones similares en Queensland, Australia, y en Kenia. En los tres casos, estn implicadas cepas de B. suis con diferentes caractersticas, y al menos en uno de los casos es difcil de clasificar. La brucelosis causada por la biovariedad 2 de B.suis es quizs un caso especial. El reservorio de la infeccin es el cerdo silvestre (Sus scrofa) que vive en la misma zona (7, 8), o la liebre europea (Lepus capensis) (19), o los dos. Histricamente, la infeccin por la biovariedad 2 ha estado confinada a una zona entre Escandinavia y los Balcanes. El cerdo domstico criado al aire libre en esta zona tiene mayor riesgo para la trasmisin de la biovariedad 2 a partir de los vectores de vida silvestre. Despus de invadir las piaras de cerdos domsticos, probablemente la biovariedad 2 se extiende tan rpidamente como la 1 o la 3. La enfermedad en las liebres se caracteriza por la formacin de ndulos de un tamao que vara desde el de una semilla de mijo hasta el de una cereza o incluso mayor; con frecuencia estos ndulos llegan a ser purulentos. Adems, pueden presentar una localizacin muy variada, en ocasiones subcutnea o intramuscular, en el bazo, hgado o pulmn y en los rganos reproductores de ambos sexos. Sorprendentemente, la funcin corporal de la liebre puede no verse afectada. Normalmente, las investigaciones serolgicas en las especies no porcinas se llevan a cabo con fines de encuestas. En estas circunstancias particulares, la especificidad es ms importante que la sensibilidad. En este caso se recomienda la CFT, aunque la prueba de aglutinacin en placa con antgeno brucelar tamponado puede ser til debido a su simplicidad. En muchas investigaciones previas, se ha utilizado la prueba de aglutinacin en tubo, aparentemente de modo satisfactorio. Sin embargo, en las especies no porcinas puede ser problemtica la

Manual de la OIE sobre animales terrestres 2004

841

Captulo 2.6.2. Brucelosis porcina

interpretacin de los resultados serolgicos. En el caso de encontrar muestras supuestamente positivas, despus de la deteccin mediante pruebas serolgicas se debera realizar un estudio de investigacin bacteriolgica. En las investigaciones bacteriolgicas realizadas en estas situaciones, en las que los organismos infecciosos pueden tener caractersticas inusuales, se aconseja duplicar el cultivo en medios selectivos empleando medio simple suplementado con suero al 5% y ampliar la investigacin incubando los cultivos en una atmsfera que contenga CO2 al 10%. Las colonias que parezcan debidas a Brucella se pueden identificar de modo preliminar mediante la tincin de Gram, con pruebas de aglutinacin en porta con sueros monoespecficos A y M y mediante suero anti-cepas rugosas de Brucella (Captulo 2.3.1 Brucelosis bovina). La biovariedad 5 de Brucella suis es inusual por el hecho de que reacciona con el suero monoespecfico M y no con el A. Es mejor llevarla a cabo la identificacin posterior en un laboratorio especializado.

REFERENCIAS
1. ALTON G.G. (1990). Brucella suis. En: Animal Brucellosis, Nielsen K. & Duncan J.R., eds. CRC Press, Boston, EE.UU. ALTON G.G., JONES L.M., ANGUS R.D. & VERGER J.M. (1988). Techniques for the Brucellosis Laboratory. INRA, Paris, Francia. BRICKER B.J. & HALLING S.M. (1994). Differentiation of Brucella abortus bv. 1, 2 and 4, Brucella melitensis, Brucella ovis, and Brucella suis bv. 1 by PCR. J. Clin. Microbiol., 32, 26602666. FERRIS R.A., SCHOENBAUM M.A. & CRAWFORD R.P. (1995). Comparison of serologic tests and bacteriologic culture for detection of brucellosis in swine from naturally infected herds. J. Am. Vet. Med. Assoc., 207, 13321333. FORBES L.B. (1991). Isolates of B. suis biotype 4 from animals and humans in Canada, 19821990. Can. Vet. J., 32, 686688. GALL D., NIELSEN K., FORBES L., COOK W., LECLAIR D., BALSEVICIUS S., KELLY L., SMITH P. & MALLORY M. (2001). Evaluation of the fluorescence polarization assay and comparison to other serological assays for detection of brucellosis in cervids. J. Wildl. Dis., 37, 110118. GODFROID J. & KASBOHRER A. (2002). Brucellosis in the European Union and Norway at the turn of the twentyfirst century. Vet. Microbiol., 90, 135145. GODFROID J., MICHEL P., UYTTERHAIEGEN L., DE SMEDT C., RASSENEUR F., BOELAERT F., SAEGERMAN C. & PATIGNY X. (1994). Brucellose enzootique a Brucella suis biotype 2 chez le sanglier (Sus scrofa) en Belgique. Ann. Med. Vet., 138, 263268. JOINT FOOD AND AGRICULTURE ORGANIZATION OF THE UNITED NATIONS (FAO)/WORLD HEALTH ORGANIZATION (WHO) EXPERT COMMITTEE ON BRUCELLOSIS (1986). Sixth Report. Technical Report Series 740. WHO, Ginebra, Suiza.

2.

3.

4.

5.

6.

7.

8.

9.

10. LIANG XINGXIAN (1991). The prevalence, prevention and control of swine brucellosis in Guangdong Province, China. Document AGU/BRU/92/21 Organizacin de las Naciones Unidas para la Agricultura y la Alimentacin (FAO), Roma, Italia. 11. NIELSEN K., GALL D., SMITH P., VIGLIOCCO A., PEREZ B., SAMARTINO L., DAJER A., ELZER P. & ENRIGHT F. (1999). Validation of the fluorescence polarization assay as a serological test for the presumptive diagnosis of porcine brucellosis. Vet. Microbiol., 68, 245253. 12. ORLOW E.S. (1963). Brucellosis in reindeer. Proceedings of the 17th World Veterinary Congress, Hanover, Alemania, 1, 585588. 13. PAULO P.S., VIGLIOCCO A.M., RAMONDINO R.F., MARTICORENA D., BISSI E., BRIONES G., GORCHS C., GALL D. & NIELSEN K. (2000). Evaluation of primary binding assays for presumptive serodiagnosis of swine brucellosis in Argentina. Clin. Diagn. Lab. Immunol., 7, 828831. 14. PAULSEN I.T., SESHADRI R., NELSON K.E., EISEN J.A., HEIDELBERG J.F., READ T.D., DODSON R.J., UMAYAM L., BRINKAC L.M., BEANAN M.J., DAUGHERTY S.C., DEBOY R.T., DURKIN A.S., KOLONAY J.F., MADUPU R., NELSON W.C., AYODEJI B., KRAUL M., SHETTY J., MALEK J., VAN AKEN S.E., RIEDMULLER S., TETTELIN H., GILL S.R., WHITE O., SALZBERG S.L., HOOVER D.L., LINDLER L.E., HALLING S.M., BOYLE S.M. & FRASER C.M. (2002). The Brucella

842

Manual de la OIE sobre animales terrestres 2004

Captulo 2.6.2. Brucelosis porcina

suis genome reveals fundamental similarities between animal and plant pathogens and symbionts. Proc. Natl Acad. Sci. EE.UU., 99, 1314813153. 15. PRIADI A., CHASANAH U., HIRST R.G., EMMINS J.J., VAN DER GIESSEN J. & SEOROSO M. (1995). Development of an enzyme-linked immunosorbant assay (ELISA) for detecting antibody to Brucella suis in porcine sera. Penyakit Hewan., 17, 6670 (Vet. Bull., 56, abstract 7528). 16. ROBSON J.M., HARRISON M.W., WOOD R.N., TILSE M.H., MCKAY A.B. & BRODRIBB T.R. (1993). Brucellosis: reemergence and changing epidemiology in Queensland. Med. J. Aust., 159, 153158. 17. ROGERS R.J., COOK D.R., KETTERER P.J., BALDRODCK, F.C., BLACKALL P.J. & STEWART R.W. (1989). An evaluation of three serological tests for antibody to Brucella suis in pigs. Aust. Vet. J., 66, 7780. 18. SIFUENTES-RINCON A.M., REVOL A. & BARRERA-SALDANA H.A. (1997). Detection and differentiation of the six Brucella species by polymerase chain reaction. Mol. Med., 3, 734739. 19. SZULOWSKI K., IWANIAK W., PILASZEK J., TRUSZCZYNSKI M. & CHROBOCINSKA M. (1999). The ELISA for the examination of hare sera for anti-Brucella antibodies. Comp. Immunol. Microbiol. Infect. Dis., 22, 3340. 20. VERGER J.M., GRAYON M., ZUNDEL E., LECHOPIER P. & OLIVER-BERNARDIN V. (1995). Comparison of the efficacy of Brucella suis strain 2 and Brucella melitensis Rev.1 live vaccines against a Brucella melitensis experimental infection in pregnant ewes. Vaccine, 13, 191196. 21. WRATHALL A.E., BROUGHTON E.S., GILL K.P.W. & GOLDSMITH G.P. (1983). Serological reactions to Brucella species in British pigs. Vet. Rec., 132, 449454. 22. XIE XIN (1986). Orally administrable brucellosis vaccine: Brucella suis strain 2 vaccine. Vaccine, 4, 212216.

* * *

NB: Existen laboratorios de referencia de la OIE para la Brucelosis porcina (vase la Cuadro de la Parte 3 de este Manual de animales terrestres o consltese la pgina Web de la OIE para conseguir la relacin ms actualizada: www.oie.int).

Manual de la OIE sobre animales terrestres 2004

843