Ao de la Inversin para el Desarrollo Rural y la Seguridad Alimentaria

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA PROFESIONAL DE TECNOLOGA MDICA

Fijadores Y MEDIOS DE FIJACION histopatolgicos

PATO
CATEDRA
HISTOPATOLOGIA

DOCENTE: EDISON SUARES BUITRON

Alumnos: 1_ JOSE LUIS RODRIGUEZ HINOSTROZA 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

SEMESTRE: CICLO:

VI 2013-II
Huancayo Per

PRESENTACION
Los mtodos histopatolgicos continan siendo herramientas importantes para el diagnstico de enfermedades transmisibles y no transmisibles. Gracias al desarrollo de nuevas tcnicas, se ha incrementado la capacidad de detectar la presencia en las muestras de diferentes tejidos de agentes patgenos, de antgenos y anticuerpos, y de cambios en los tejidos y sus componentes. Para el mejor aprovechamiento de estas herramientas diagnsticas, se requiere de la obtencin y preparacin adecuadas de las muestras antes de su examen. Por esto, con el objeto de contribuir a mejorar la calidad del diagnstico histopatolgico en los laboratorios de los servicios de salud,

Dedicamos este trabajo a todas las personas que desecan trabajar con esta informacin y al docente por la motivacin de seguir investigando.

INTRODUCCION

La histopatologa diagnstica es una especialidad que, incluso hoy en da, no ha dejado de ser una labor en particular intensa, sobre todo si se considera que en esta rea el desarrollo de la tecnologa automatizada ha sido discreto y an toman tiempo sus procedimientos. Las mquinas que procesan y tien cortes, como parte integral de cualquier laboratorio de histologa comn, son cada vez ms complejas en trminos de su aplicacin y contribucin a un ambiente de salud y seguridad. El registro manual de casetes para procesar tejidos y el portaobjetos del microscopio se ha vuelto en poco tiempo obsoleto desde la introduccin de sistemas de transcripcin independientes conectados a una computadora. Los sellos hermticos y automatizados tambin son comunes en muchos laboratorios y hacen posible minimizar la exposicin del personal a los solventes orgnicos; en consecuencia, los laboratoristas pueden concentrarse en las tareas manuales del departamento y no en las labores de montaje. El moderno laboratorio de histopatologa, aunque se ha beneficiado en cierto grado con la automatizacin y el continuo desarrollo de mejoras del equipo estndar, es todava un rea sensible a las cargas de trabajo. La posibilidad de renovacin se relaciona de manera directa, primero, con la capacidad de procesamiento y, segundo, con el personal disponible para realizar las tareas requeridas para obtener los cortes histopatolgicos teidos necesarios para el examen microscpico subsiguiente y el diagnstico patolgico. Muchos laboratorios modernos han experimentado aumentos notables de la carga de trabajo en los ltimos aos, como resultado de nuevos lineamientos y fusiones, sin un aumento correspondiente de la contratacin de personal. De manera inevitable, estos laboratorios han mejorado sus metodologas y tcnicas para no sucumbir a las exigencias del alto rendimiento y proporcionar un servicio de calidad eficiente.

CAPITULO I
BIOSEGURIDAD
Bioseguridad es el conjunto de medidas preventivas mnimas para proteger la salud y seguridad del personal que trabaja en el laboratorio frente a diferentes riesgos biolgicos. 1.1 FACTORES DE RIESGO OCUPACIONAL Estos se pueden agrupar en varias categoras: 1.1.1 Fsicos - Mecnicos: Cuchillas de micrtomo rotatorio, criostato. - Trmicos: Estufas, mecheros. - Radiacin: Microscopio de luz ultravioleta 1.1.2 Qumicos - Colorantes: Estas sustancias por la naturaleza de su estructura son txicas e irritantes para los ojos, sistema respiratorio y piel; algunas de ellas pueden ser explosivas y otras son potencialmente cancergenas. Ejemplo: Hematoxilina, Acido pcrico, etc. - Reactivos: a) cidos: Los accidentes ms frecuentes son las proyecciones de cidos sobre las manos, ojos y cara. b) lcalis: En forma slida o en solucin. Ejemplo: Hidrxido de sodio. c) Solventes orgnicos: Xilol, potencialmente cancergeno; Eter, produce depresin del sistema Nervioso.

d) Gaseosos: Formol (solucin saturada de gas formaldehdo en agua, aproximadamente 40% de gas en peso), es irritante para las fosas nasales y puede provocar dermatitis. 1.1.3 Biolgicos: - Parsitos - Bactrias - Virus - Hongos 1.1.4 Ergonmicos: - Instalaciones fsicas de la Institucin - Diseo inadecuado de Laboratorio - Ventilacin inadecuada.

1.2 PROGRAMA DE SEGURIDAD

La seguridad es fundamental en el manejo y funcionamiento de todo laboratorio. El personal de laboratorio debe estar consciente sobre los riesgos presentes y conocer cmo hacerles frente. 1.2.1 Consideraciones generales Un ambiente confortable y seguro provee una sensacin de seguridad y reduce la aprehensin respecto a la manipulacin de especmenes, reactivos o equipos. Todo el personal debe estar consciente de los riesgos y saber cmo prevenirlos. 1.2.2 Consideraciones sobre el factor de riesgo qumico Los factores de riesgo qumico pueden disminuir teniendo en cuenta las siguientes medidas generales de prevencin:

a) Uso de seales de peligro y rtulos: Todos los reactivos deben estar rotulados, sealando las precauciones a tener en cuenta. b) Empleo de ropa de proteccin: Guantes protectores, mandiles, protectores raciales o gafas protectoras y mascarilla. c) Manejo de qumicos: Colocar los recipientes que contienen qumicos peligrosos en su sitio y mantener el rea de trabajo organizada y limpia. Esto reducir los derrames accidentales y Roturas. Con sustancias peligrosas como el xilol, evitar el contacto directo en lo posible; usar pinzas para introducir lminas en el xilol. d) Almacenaje de inflamables: Se recomienda que los reactivos inflamables sean colocados en posicin fcilmente accesible y lo ms cercano al piso. e) Eliminacin de qumicos: El mtodo de eliminacin (incineracin, dilucin, eliminacin por el sistema de drenaje, autoclave) depende del tipo de qumico y sus especificaciones. 1.2.3 Consideraciones sobre el factor de riesgo biolgico Todas las muestras son potencialmente infecciosas, y es prudente, por tanto, manejar estos materiales en forma tal que permita reducir razonablemente la exposicin del personal a los patgenos. a) Implementos de proteccin: - Todo el personal que manipula muestras fijadas debe usar mandil y guantes. - Usar guantes dobles, protectores faciales o gafas y mascarilla, aquellos que manipulan o disecan especmenes no fijados. b) Manejo de especmenes: Los espcimenes deben ser colocados en recipientes a prueba de derrames o en bolsas plsticas seguras. Si el recipiente primario est contaminado por fuera, debe colocarse en un contenedor secundario seguro, antes de transportarlo al laboratorio.

La hoja de solicitud de examen debe mantenerse no contaminada, si ocurriera, debe ser descartada y reemplazada. Los tejidos deben ser fijados lo ms pronto posible. Si se va a retener especmenes no fijados, Deben ser colocados en bolsas plsticas dobles y guardarlos en el refrigerador y rotulados como material peligroso. . Los extendidos vaginales, improntas y extendidos de fluidos corporales deben considerarse contaminados hasta que sean fijados (con alcohol corriente, o una solucin de alcohol-ter) o hasta que sean teidos y montados en la lmina.

CAPITULO II OBTENCION DE LA MUESTRA

El estudio anatomopatolgico se lleva a cabo en muestras obtenidas por biopsia, especmenes quirrgicos o especmenes de necropsias (post mortem). La biopsia es un fragmento de tejido que se extrae de un rea representativa de una lesin, y que nos brinda informacin histolgica para el diagnstico. Puede ser obtenida de cualquier rgano mediante diversos procedimientos, muchos de ellos realizados nicamente por personal mdico especializado, como endoscopas, broncoscopas, legrados uterinos, etc. La biopsia de piel es la de ms fcil acceso, pudiendo ser realizada por personal paramdico; asimismo la toma de muestras post-mortem.

2.1BIOPSIA
Consiste en la extraccin de pequeos fragmentos de tejido de un organismo vivo. Este procedimiento puede ser realizado de muy diversas formas, considerremos algunas: Biopsia incisional: se realiza seccionando con instrumentos cortantes como el bistur. Biopsia por punch: el punch es un instrumento filoso con forma de sacabocados que se utiliza para tomar biopsias de piel. Biopsia por puncin : se realiza con agujas de biopsia y recientemente tambin con agujas del tipo intramuscular (microbiopsia). Biopsia endoscpica: se hace a travs de endoscopios, que son instrumentos flexibles que permiten la observacin de algunas cavidades internas del organismo.

2.2RESECCION QUIRURGICA
consiste en la extirpacin de rganos completos o de grandes partes de los mismos, a travs de un procedimiento quirrgico.

2.3ESPECIMENES POST MORTEM

Es necesario que se obtenga lo ms pronto posible despus del fallecimiento, pero si es inevitable el retraso, el cadver debe ser colocado en refrigeracin (a 4 C). Las muestras post mortem pueden dar informacin al patlogo hasta 12 horas despus del fallecimiento, pero cuanto menos tiempo transcurra, el diagnstico ser ms confiable.

CAPITULO III FIJACION Y MEDIOS DE FIJACIN HISTOPATOLOGICOS

En cuanto se extirpa un tejido del organismo o se priva de su irrigacin, ste empieza a descomponerse, lo cual es una consecuencia de la falta de oxgeno y metabolitos esenciales, de la acumulacin de CO2 y otros productos del metabolismo celular y de la accin de diversas enzimas (autolisis). Para preservar el estado natural de los tejidos es indispensable detener cuanto antes estos procesos de descomposicin. Par este propsito, debe colocarse el tejido en un volumen adecuado de una solucin fijadora, lo ms pronto posible despus de la extirpacin. 3.1 FIJACION Es el proceso mediante el cual los elementos constitutivos de los tejidos son tejidos, en cuanto a su estado fsico y parcialmente tambin en su estado qumico, de manera que puedan resistir el tratamiento sucesivo con varios reactivos sin distorsin importante de sus estructuras o descomposicin. En condiciones ideales un fijador debe penetrar rpidamente al tejido, su accin debe ser inmediata, y debe causar una prdida y alteracin qumica y fsica mnima de las clulas y sus componentes. La mayora de fijadores producen cierto endurecimiento tisular, facilitando as el corte; pero generalmente este efecto endurecedor es reforzado por la accin de alcoholes, que son empleados durante el proceso de deshidratacin .Los fijadores tambin

aumentan, por lo general, la diferenciacin ptica de las estructuras tisulares, y reducen el riesgo de infeccin en las personas que manejan los tejidos. 3.1.1OBJETIVOS DE LA FIJACION La fijacin debe detener la autolisis y la putrefaccin y preservar las clulas y los componentes tisulares en un estado tan natural como sea posible . El fijador no debe propiciar la contraccin, inflamacin o endurecimiento del tejido y debe estabilizarlo pese al rigor del proceso. Por ltimo, el fijador debe complementar y mejorar los subsecuentes procedimientos histolgicos de tincin, inmunohistoqumicos y de biologa molecular. En trminos amplios, stas son las exigencias de un fijador ideal. Sin embargo, la fijacin depende en realidad de la conjuncin de estos requisitos. 3.2 FIJADORES Los fijadores simples son soluciones de un solo qumico, por ejemplo metanol, etanol, cido actico glacial y formaldehdo estos, que carecen de aditivos, pueden inducir algunos de los artefactos ya mencionados si se usan solos. Los fijadores compuestos son mezclas de fijadores simples que se han formulado para compensar y reducir al mnimo los artefactos de la fijacin, como el lquido de Carnoy (etanol-cloroformo-cido actico), que se recomienda para la fijacin de cidos nucleicos. Ambos tipos de fijadores reaccionan con las protenas de dos maneras. Los coagulantes, como lo sugiere su nombre, coagulan la protena del tejido, por ejemplo el etanol. Los fijadores no coagulantes, como el formaldehdo, forman enlaces cruzados (recirculaciones) con la protena del tejido.

Principios Generales de Fijacin de las Muestras

a) Cantidad de Fijador: Debe ser aproximadamente 10 a 20 veces el volumen de la muestra, as por ejemplo: Muestra de 0,5 x 0,5 cm: 6 a 10 mL Muestra de 0,5 x 1 cm: 10 a 15 mL

Muestra de 2 x 1 cm: 20 a 40 mL Muestra de 2 x 2 cm: 40 a 80 mL b) Deben colocarse en frascos preferentemente de plstico, de boca lo suficientemente ancha para que el tejido pueda ser extrado del frasco sin dificultad. Una vez que el tejido est fijado se endurece, y si el frasco es muy pequeo, en relacin al volumen de la muestra, surgen dificultades al intentar extraerlo del frasco. c) El fijador empleado rutinariamente en Patologa es el formol al 10% en solucin acuosa o en solucin acuosa tamponada (formol neutro) (ver Anexo 1), pero existen otros que mencionaremos para su conocimiento: Fijador de Zenker: Es un fijador de sales mercuriales. Tienden a mejorar la tincin de ncleos y el tejido conjuntivo. Preserva mejor los detalles para fotografas. Fijador de Bouin: Es un fijador derivado del cido pcrico. Es uno de los mejores fijadores para el estudio del glucgeno y que penetra rpidamente al tejido. d) Tiempo de Fijacin: Vara segn el fijador que se utilice y el tamao de la muestra. Con el fijador de uso comn, el formol al 10%, las biopsias pequeas pueden tomar 6 horas aproximadamente en fijarse. Las muestras grandes toman aproximadamente 24 horas. Se pueden dejar en el lquido fijador por ms tiempo, pero si los tejidos van a ser sometidos a procedimientos especiales como Inmunohistoqumica, requieren idealmente un tiempo de fijacin mximo de 24 horas. Principios generales de la fijacin. Los principios generales No existe un mtodo universal de fijacin, por lo que un agente fijador para un tejido no tiene por qu ser adecuado para otro. No todos los fijadores conservan indefinidamente el tejido, porque fijacin no equivale a conservacin tisular.Un defecto en la fijacin nunca puede ser corregido.Es intil realizar un estudio histolgico sobre un material con grandes defectos de fijacin. 3.2.1 CLASES DE FIJADORES SEGN SU MECANISMO 3.2.1.1 FISICOS

A.-Congelacin: Se utiliza como mtodo para la fijacin el enfriamiento por congelacin del tejido es el mtodo de eleccin para realizar estudios morfolgicos o funcionales en los que se requiere conservar intacta la estructura antgena del tejido o su contenido enzimtico. La clave para una correcta fijacin por congelacin del tejido es que su realizacin sea instantnea porque un enfriamiento lento provoca la formacin de microcristales titulares de hielo que pueden agregarse con el paso del tiempo produciendo roturas titulares que dificulten el diagnostico El procedimiento idneo para fijar tejidos por congelacin consiste en utilizar ISOPENTANO a menos de 50C como agente de congelacin y realizar una fragmentacin suficiente de la muestra que se vaya a congelar. Normalmente se preparan bloques de no ms de 3 cm. cuadrados de superficie y 3 mm de espesor de modo que el proceso de congelacin instantnea no requiera ms de 10 segundos. El mantenimiento continuo de isopentano debe realizarse en un congelador programado a -70C para que quede compensado la subida inmediata de la temperatura que se produce al extraer el lquido del congelador. Al enfriar tanto no actan bacterias ni enzimas y el tejido se endurece para cortar estos tejidos utilizamos el micrtomo de congelacin o un aparato mas evolucionado o criostato el cual tiene como ventajas que la temperatura se mantiene ms baja y se pueden realizar cortes ms finos entre 2 y 15 micras. B.-Criodesecacin o filiacin: Consiste en someter al tejido a dos procesos el primero es la fijacin instantnea por congelacin en Nitrgeno lquido y el segundo desecacin por sublimacin directa del agua confiada a vapor en una bomba de vaco es un proceso complicado y costoso pero tiene una ventaja muy importante y es que al eliminar totalmente el agua tisular, paraliza la autolisis y produce una conservacin indefinida, adems evita que se produzcan enlaces qumicos entre el tejido y el fijador, conservando asila estructura antignica tisular.

Criosustitucin: es la sustitucin lenta y progresiva del agua congelada de un tejido por un lquido fijador que en ocasiones puede actuar simultneamente como medio de inclusin. Tras la congelacin instantnea del tejido con nitrgeno lquido o isopentano a -50C se coloca el tejido congelado en el medio de sustitucin, este medio est formado por una mezcla de alcohol etlico, acetona y propiln- glicol. Enfriado a -40C, el intercambio del agua tisular por el lquido de sustitucin, se realiza dentro de un congelador y debe procurarse que la temperatura no disminuya del punto de congelacin del lquido de sustitucin. 3.2.1.2 QUIMICOS Caractersticas fundamentales de un lquido fijador: Los fijadores por mtodos qumicos son normalmente qumicos y deben poseer unas caractersticas que son las siguientes: Deben tener la capacidad de bloquear de inmediato la autolisis, paralizando la actividad enzimtica del tejido. Poseer un efecto microbicida, que impide la accin bacteriana responsable de la putrefaccin. Son capaz de no provocar sobre el tejido retracciones o distorsiones que generen anomalas en su estructura. Sea capaz de inducir cambios en la textura y composicin tisular que favorezcan la inclusin, el corte y la coloracin del material histolgico (favorecer la coloracin posterior es decir tienen carcter mordiente) De todas estas caractersticas la ms importante es la capacidad de bloquear la autolisis de inmediato y se va a relacionar con dos cualidades del agente fijador: Velocidad de penetracin: y se refiere a la rapidez con lo que un fijador se difunde en el interior de un tejido de manera que el tamao de una pieza que se pretende fijar ha de ser proporcional a la velocidad de penetracin del agente fijador que se va a utilizar.

La velocidad de fijacin: se refiere al tiempo que cada fijador tarda en estabilizar los componentes qumicos de los tejidos. La velocidad de fijacin de un agente qumico no siempre es proporcional a su velocidad de penetracin.

3.2- REGLAS GENERALES EN EL EMPLEO DEL FIJADOR Para evitar la autolisis, las piezas deben tallarse lo antes posible y no deben ser muy gruesas ya que en este caso el fijador tardara mucho en penetrar en el centro de la pieza por lo que es preferible que al tallarlo se hagan cortes con un grosor mximo de 5 mm. 0.5cm. Si se va a fijar un rgano en bloque para preservar la arquitectura del rgano se deben realizar incisiones, cortes, sobre su superficie y apertura de sus cavidades internas con el fin de que el lquido fijador alcance lo ms rpidamente posible el interior del tejido. Para conseguir una buena fijacin de rganos huecos stos deben ser rellenados con lquido fijador y atados en sus extremos. El volumen del fijador respecto al de la pieza, es un punto muy importante para la fijacin, lo ideal es 1-20 como mnimo. En la fijacin con lquido que pierde eficacia al utilizarlos hay que ser mucho ms cuidadoso. Este es el caso del Formol que debe ser renovado cada cierto tiempo en una misma fijacin, ya que pierde eficacia tambin hay que ser precavidos en el resto de los fijadores porque generalmente todos los fijadores con voltiles, por lo que nunca ser empleado el mismo fijador ms de una vez. Para lograr una fijacin correcta el lquido tendr que estar en contacto con todas las paredes del tejido, es por eso que no es conveniente meter en un mismo frasco varias piezas porque podran pagarse unas a otras y evitar la penetracin del fijador. Si en una misma biopsia se presentan varios fragmentos nunca deben pegarse al ser sumergidos ni deben fijarse diferentes rganos en un mismo recipiente

Los tejidos que flotan como por ejemplo grasa o tejido pulmonar no deben quedarse en la superficie por lo que deben envolverse en papel de filtro o gasa pesen vallan hacia el fondo y as estn rodeados del fijador. Cada fijador tiene un tiempo de fijacin que va a depender de su capacidad de penetracin y del tipo de tejido. Si este tiempo de fijacin se prolonga se produce en endurecimientos en distintas estructuras del tejido. Solo se permitir la permanencia de un tejido: en un fijador, si adems al tener esta propiedad es un lquido conservante porque si no se corre el peligro de que bacterias aerobias descompongan el tejido. Durante la fijacin se producen accidentes que modifican el estado de la pieza, los ms importantes son la Hinchazn y la retraccin de los tejidos as como la alteracin en el color. Si por ejemplo: el cido actico produce hinchazn debido a que deshace los enlaces formando molculas de agua que son absorbidas por la pieza. Otros como el cido crmico, alcohol y acetona, realizan el efecto contrario porque el fijador absorbe el agua del tejido por eso es importante que la presin osmtica del lquido fijador sea equivalente a la del tejido y que la de su pH se aproxime al pH fisiolgico salvo que nos interese que su composicin sea acida. Este ltimo caso nos interesa para descalcificar. Cada fijador tiene caractersticas negativas y positivas por tanto ninguno es el mejor y para cada tipo de tejido ser conveniente usas uno u otro. Los fijadores puros no suelen usarse porque sern buenos fijadores de algunas estructuras pero estropearan otras. Por ello lo que ms se usan sern las mezclas de varios fijadores que permiten un campo de trabajo ms amplio. 3.3FORMALDHIDO COMO FIJADOR DE RUTINA El fi jador utilizado de forma ms extensa en los departamentos de histopatologa es la formalina al 10% (formaldehdo al 4%) y sus derivados. El formaldehdo es soluble en agua a un mximo de 40% por peso (formalina al 100%) y est disponible en el comercio como solucin al 40%, con la adicin de 10 a 14% de metanol como estabilizador. En condiciones normales se diluyen 10 partes de formalina al 100% con 90 partes de agua, amortiguador salino fisiolgico o de fosfato para obtener la solucin de trabajo al 10%. La formalina no amortiguada puede adquirir acidez permanente debido a la formacin de cido frmico. ste reacciona con la sangre en tejidos muy

vascularizados, como el bazo, para producir un pigmento negro llamado hematina formalina cida. Esto ocurre casi siempre despus de una fijacin prolongada; las soluciones amortiguadas de formalina resuelven este artefacto de la fijacin.La formalina tiene un olor acre y es un intenso irritante de los ojos, la piel y las membranas mucosas; en algunos trabajadores puede causar dermatitis por contacto. El personal que manipula esta sustancia debe someterse a una valoracin respiratoria anual de sensibilizacin. Los lmites mximos de exposicin recomendados son una parte por milln y los grados de exposicin deben supervisarse con regularidad. Las soluciones de formalina deben manipularse de forma cuidadosa en cuartos bien ventilados que dispongan de extractores para vapores; asimismo, debe usarse ropa protectora, como guantes, capas de laboratorio, gafas y respiradores. La formalina reacciona para formar enlaces cruzados (reticulaciones) entre las protenas. Las protenas solubles se fijan a las estructurales y ello suministra fuerza al tejido y hace posible el proceso siguiente. La formalina no fija los carbohidratos sino el glucgeno cuando se adhiere a una protena fijada. Es un buen fijador para los lpidos complejos. El calor y la agitacin aceleran el proceso de fijacin. El tiempo recomendado para la fijacin de tejidos en formalina es de 24 a 48 horas; el tiempo ptimo es de siete a 10 das. Las mquinas modernas cerradas que procesan tejido pueden calentar los reactivos (40 a 45C) durante el procedimiento y, por lo tanto, el proceso de fijacin puede acelerarse. Los tejidos recibidos en el laboratorio se deben sumergir por completo en el fijador cinco a 10 veces su volumen. No existe un fijador ideal, pero la formalina al 10% tiene la ventaja de preservar una amplia variedad de tejidos. La formalina es tolerable y permite llevar a cabo con posterioridad una histoqumica adecuada. El tejido se puede almacenar por largos periodos sin sufrir efectos dainos en el ncleo, el citoplasma o la morfologa total de la muestra. No es el fijador de eleccin para la inmunohistoqumica o biologa molecular, pero muchos de los problemas derivados de su uso pueden superarse con los pretratamientos apropiados del tejido. 3.4OTROS FIJADORES DE USO GENERAL El glutaraldehdo es a menudo el fi jador de eleccin para el tejido que requiere la microscopia electrnica, ya que proporciona una buena

preservacin de la ultraestructura celular. Es un sensibilizador respiratorio y tiene un vnculo evidente con la denominada asma industrial. Deben observarse las medidas de seguridad adecuadas al usar glutaraldehdo. Su uso como desinfectante en las caeras se ha proscrito en muchos hospitales. El tetraxido de osmio se emplea como fijador secundario en microscopia electrnica, por lo regular despus de la fijacin primaria en glutaraldehdo. Fija los lpidos y tambin preserva la estructura fina de la clula. El tetraxido de osmio es txico y exige tambin la institucin de medidas de seguridad adecuadas. El dicromato de potasio se puede utilizar para identificar tumores medulares suprarrenales, macroscpicos microscpicos. Reacciona con las catecolaminas medularessuprarrenales y produce un precipitado negro o marrn que es insoluble en agua. No conviene como fijador general cuando penetra el tejido lentamente y causa contraccin. El alcohol penetra el tejido con rapidez y se puede usar junto con otros fijadores para aumentar la velocidad dela fijacin. El etanol absoluto preserva al glucgeno,pero distorsiona el contorno nuclear y altera la contraccin del citoplasma. El fijador de Carnoy es un buen fijador para los cidos

nucleicos, si bien propicia la contraccin del tejido y la lisis de los eritrocitos; consiste en etanol absoluto, cloroformo y cido actico glacial. Pueden emplearse diversos aditivos en los fijadores. Por ejemplo, las

soluciones de cido tnico, fenol o metales pesados se pueden adicionar a la formalina para incrementar el grado de penetracin y de esa manera mejorar la preservacin o favorecer los procedimientos subsecuentes de teido. La fijacin por vapor mediante fijadores voltiles permite la retencin de sustancias solubles in situ y las convierte en productos insolubles antes de que entren en contacto con los solventes. Este mtodo es de uso frecuente junto con la liofilizacin. Los fijadores convenientes para esta tcnica incluyen al formaldehdo, el tetraxido de osmio y el alcohol. Los hornos de microondas son recursos en la fijacin para conservar el tejido mediante la accin del propio calor o acelerar el proceso de fijacin, como se describi con anterioridad.

Lquidos fijadores simples: Dependiendo del mecanismo de actuacin sobre los tejidos podemos clasificar los lquidos fijos simples en 4 apartados: Fijadores por deshidratacin tisular: Alcohol etlico y acetona. Son sustancias altamente higroscpicas es decir absorben agua actan eliminando tanto el agua libre como el agua ligada a las protenas de forma que estas ltimas precipitan y disminuyen su solubilidad. Este cambio proteico es conocido con el nombre de desnaturalizacin y provoca importantes alteraciones en la organizacin y estructura celular y tisular, por tanto estos agentes fijadores inducen grandes cambios en la morfologa orgnica sobre todo si se emplean como agentes fijadores aislados. Alguno de ellos como por ejemplo la acetona, altera poco la estructura antignica tisular y ello se debe a que estos fenomenitos inducidos son reversibles en parte tras la rehidratacin. El fundamente molecular de la accin deshidratante de los alcoholes y la acetona, est en la competicin que establecen con las protenas por las molculas de agua cuando se encuentra en soluciones concentrada, los principales agentes fijadores por deshidratacin son alcoholes metlico y etlico, acetona y cloroformo. Los nicos que se utilizan como fijadores simples son el alcohol etlico y la acetona. El alcohol metlico se emplea exclusivamente para la fijacin de extensiones hematolgicas. Alcohol etlico: lquido claro, transparente o incoloro, voltil, inflamable y de olor agradable. En el comercio se puede encontrar puro en cuyo caso tiene fuertes gravmenes tributarios para evitar su utilizacin clandestina para evitar la fabricacin de bebidas alcohlicas, o bien lo tenemos desnaturalizado diluido al 90 o 70 %. Como fijador nico utilizaremos alcohol a unas concentraciones entre el 70 y 90% y se obtiene cogiendo de 70-90 ml de alcohol puro y se lleva hasta 100 con agua destilada. La fijacin mas potente va a corresponder a las soluciones ms concentradas pero a altas concentraciones la capa externa del tejido se endurece en exceso, lo que impide la penetracin del fijador a la parte interna de la pieza. Es un fijador que preserva el glucgeno y la actividad de ciertas enzimas titulares, fija los pigmentos y se emplea en las extensiones citolgicas. Como altera escasamente la estructura antignica de los tejidos es un buen agente

fijador para inmunohistoqumica. estn: Fijan y deshidratan al mismo tiempo Posee una gran velocidad de penetracin

Entre las ventajas del alcohol

Precipita muy rpidamente las protenas y el glucgeno lo que unido a la anterior propiedad aporta extraordinariamente el tiempo de fijacin es un notable agente bactericida y por tanto un buen conservante. Entre sus inconvenientes tenemos los siguientes: Fijan y deshidratan al mismo tiempo: es incompatible con muchos fijadores: KCr2 o el OsO3 lo que limita su participacin en muchas mezclas fijadoras. No fija adecuadamente la cromatina porque disuelve los cidos nucleicos y adems disuelve parcialmente los lpidos. Endurece y contrae excesivamente los tejidos. A medida que realiza la fijacin se va diluyendo al incorporar el agua que extrae de los tejidos por lo cual pierde actividad progresivamente Acetona: es un lquido transparente, inflamable, muy voltil y de olor dulzor. Des hidrata rpidamente y considerable el tejido por lo que es poco utilizable. El tiempo de fijacin nunca exceder de dos horas y en piezas delgadas son recomendables 20 minutos. Su uso como fijador est prcticamente limitado a los mtodos hitoqumicos e inmunohistoqumicos porque conserva muy bien la estructura antignica y la actividad enzimtica, a veces tambin se utiliza en microscopia electrnica para la fijacin del material que se va a incluir en resinas acrlicas. Se emplea generalmente sin diluir a 4C, entre sus inconvenientes mas notables provocan una gran contraccin tisular y por tanto grandes artefactos que suelen hacer intil su empleo en el microscopio ptico convencional otro de sus inconvenientes es que debido a su rapidez de accin y a su capacidad de endurecimiento es imprescindible controlar el tiempo de fijacin. Fijadores que actan por cambios en el estado coloidal de las protenas: Las protenas son molculas anfteras (pueden comportarse como cidos o bases,

segn el pH) cuyo punto isoelctrico se encuentra entorno a un pH de 5.8. en este punto la estabilidad de las molculas es mnima y su disociacin mxima. sta escasa estabilidad molecular se debe a que las protenas en este punto se desprende del agua lquida o endgena. Por este motivo las protenas precipitan en presencia de determinadas cidos que disminuyen el pH de la disolucin hasta alcanzar el punto isoelctrico. Todos los fijadores de este grupo son de carcter cido y se emplean formando parte de mezclas fijadores. Poseen adems una gran velocidad d penetracin en los tejidos y algn poder de descalificacin.

cido actico: Lquido transparente y fuerte olor avinagrado. Sus vapores son muy inflamables en estado puro se denomina: c. Actico glacial. Cuando la temperatura ambiente disminuye o aumenta, disminuye por debajo de los 10C tiende a solidificarse en forma de agujas cristalizadas muy custicas. Se utiliza diluido en concentraciones entre el 1 y 5 % formando parte de mezclas fijadores o de soluciones de calcificantes. Entre las ventajas que tiene es el fijador ideal para ncleo protenas y acido nucleicos y otra es precipitar protenas sin sustraer el agua de los tejidos porque no es giroscpico y produce cierto edema intersticial que compensa la excesiva refraccin pausado por otros agentes fijadores. Entre los inconvenientes es mal fijador de citoplasma y membranas celular y destruye mitocondrias. cido tricloroactico: Son cristales incoloros custicos, solubles en agua en solucin al 5 % fija los nervios de 8 a 20 horas. Nunca se lavan el tejido despus de usar ste cido porque el edema que produce es excesivo y de lugar a muchos artefactos. Al 2.5 % se usa mezclado con otras sustancias. cido sulfosaliclico: Se usa al 5% es buen fijador porque permite casi todas las coloraciones endurece ptimamente los tejidos pero no los contrae despus hay que lavar el tejido con agua pero la fijacin debe hacerse en la oscuridad de 6 a 24 horas. cido crmico: Se emplea en disoluciones al 2% formando parte de mezclas fijadoras, se utiliza bastante en microscopia electrnica entre las ventajas que tiene:

Excelente fijador estructural y acta como mordiente en tinciones que emplean colorantes bsicos, entre los colorantes que tiene es que incompatible con fijadores habituales como el formol y alcohol. Escasa velocidad de penetracin en trozos pequeos tarde varios das en penetrar en la pieza Impregna de coloracin verdosa los tejidos por lo que hay que lavarlos abundantemente en agua destilada tras el uso de ese acido, los tejidos quedan excesivamente blandos. Fijadores por formacin de sales con los tejidos: En estos casos el fijador es un catin metlico fundamentalmente cromo o mercurio o un derivado orgnico como el acido pcrico que son susceptibles de formar con los tejidos sales denominados protenatos metlicos o picratos por lo general todos los agentes d este grupo poseen gran velocidad de penetracin y fijacin porque la formacin de sales se produce instantneamente. Se origina un efecto barrera al actuar los proteinatos formados superficie como dos mecanismos obstaculizando penetracin fijador adems se produce sobre el tejido precipitacin metlica lo que provoca un notable endurecimiento que obliga a emplearlo en mezclas fijadoras que amortigen este efecto. Cloruro de mercurio o sublimado: es un polvo cristalino blanco y venenoso y hay que usarlo bajo campana se usa en soluciones del 5-6%. El efecto fijador se consigue por la combinacin de los iones de Mercurio con los grupos cidos de las protenas especialmente con los de carcter carboxlico, hidroxlico, sulfidrilo y con los residuos fosfricos de las nucleoprotenas. Ventajas: entre sus ventajas tenemos que es un excelente fijador de los caracteres morfolgicos celulares por lo que es el de eleccin para patologas hematopoyticas y renales, donde el diagnostico se apoya normalmente en la observacin de finos detalles nucleares y citoplasmticos. Es un excelente mordiente por lo que produce intensa y brillante coloracin nuclear y citoplasmtica. Inconvenientes: No es un buen bactericida por lo que no es un buen lquido conservante tiene escasa capacidad de penetracin por lo que requiere

fraccionamiento cuidadoso del tejido. Otro de los inconvenientes es que si se prolonga demasiado tiempo de actuacin contrae y endurece los tejidos hasta dificultar el corte en el micrtomo, por eso nunca deben sobrepasarse las 4 horas de fijacin. Tras haber cumplido esta y comn paso previo a la inclusin, los tejidos pueden conservarse indefinidamente en alcohol etlico al 70%. Otro de los inconvenientes es que de origen a precipitados metlicos de color pardo sobre los tejidos lo cual dificulta su observacin al microscopio estos precipitados pueden eliminarse mediante tratamiento del tejido previo a la coloracin con soluciones alcohlicas yodales semejantes al LUGOL yodadas. Dicromato Potsico: es un polvo amarillento que reacciona con las protenas para formar cromatos, se utiliza en disolucin acuosa al 1-2%, fija las protenas por lo que los mitocondrias quedan perfectamente conversadas y da un aspecto homogneo al ncleo despus de la fijacin del dicromato deben lavarse abundantemente con agua. Ventajas: es que tiene un fuerte efecto mordiente excelente fijador para lapidar complejos para mielina, mitocondrias y aparato de Golgi que los contienen en abundancia. Su utilizacin es indispensable para tcnicas de impregnacin argntica de las clulas del sistema nervioso central. Inconvenientes: el primero de ellos es incompatible con alcohol y formol, posee baja velocidad de penetracin y endurece escasamente los tejidos lo que puede dificultar el corte en el microtomo. Otro: provoca artefactos titulares como la aparicin de vacuolas citoplasmticas, retracciones y cambios en la morfologa nuclear. Otro: disuelve la cromatina por lo que es necesario en estos casos asociarlo con cido actico dentro de mezclas fijadoras. Los tejidos han de ser lavados despus de fijados en una solucin salina o tamponada para evitar el depsito de pigmento verde que puede producirse en el curso de la inclusin o coloracin posterior. cido Pcrico: En el comercio se encuentra en forma de agujas cristalizadas de color amarillo muy txicas de carcter explosivo. Acta coagulando las protenas a travs de la formacin de picratos que las confieren gran apetencia por colorantes cidos. Se utiliza en solucin saturada al 2%, es un excelente fijador estructural que conserva adecuadamente la

composicin proteica de los tejidos. Controlando adecuadamente el tiempo de fijacin produce una ptima contraccin de los tejidos que favorece su procesamiento histolgico. Aunque tiene penetracin algo lenta posee buena velocidad de fijacin no disuelve el glicgeno ni los lpidos es el fijador de eleccin para estas sustancias. Posee una leve accin descalcificante por lo cual puede emplearse como fijador para las muestras de tejido seo. Se maneja fcilmente en soluciones debido a la gran estabilidad que tiene. Inconvenientes: en estado puro el cido pcrico es explosivo si se somete a color hay que mantenerlo alejado de fuentes de color, tampoco deben dejarse evaporar sus disoluciones para evitar la formacin de precipitados. Si se prolonga el efecto de fijacin que es de 4-18 horas dependiendo de tamao pieza aparecen inconvenientes por una excesiva retraccin tisular. Sobre todo si la pieza ha sido inadecuadamente lavado en agua y luego deshidratada. Tie los tejidos de color amarillo y si no se elimina completamente antes de la inclusin en parafina provoca un continuo deterioro de la estructura tisular que pueda hacer imposible su estudio histopatolgico algunas semanas despus del procesamiento. La eliminacin se realiza mediante lavados sucesivos en alcohol etlico al 7080% o en una solucin saturada de LiCO4 en alcohol de 70 es incompatible en la inclusin en celoidina. Acetato de uranilo: Es una sal soluble en agua, cristalizado de color amarillo, se descompone con la luz, no endurece los tejidos, se usa en soluciones al 23% normalmente mezclado con OsO3 y despus de la fijacin hay que lavar el tejido abundantemente con agua. Fijadores que actan por reticularizacin de las protenas: El proceso que denominamos reticularizacin de las protenas sobreviene cuando la

desnaturalizacin de stas molculas de se produce no por precipitacin, sino porque el agente que provoca el fenmeno induce la rotura masiva de los puentes de Hidrgeno determinantes de la estructura helicoidal de las

molculas proteicas, con la formacin posterior de una malla reticular polipeptdica por asociacin qumica entre los grupos activos desenmascarados por el lquido fijador. PRINCIPALES FIJADORES Formaldehdo o formol: Es gaseoso en estado puro, se vuelve lquido a 21C, es txico y con un olor caracterstico. Se disuelve fcilmente en agua y en ste estado en concentraciones entre 35-40% y estabilizado con metanol se denomina formalina pura o formol con la accin del fro la formalina pura tiende a precipitar y esta situacin suele ser reversible aadiendo unas gotas de NaOH y concentrando la mezcla. Como agente fijador el formaldehdo se emplea a una concentracin del 4% pero como se parte de una solucin de formalina sta concentracin se obtiene diluyendo una parte de sta de la formalina en 9 de agua en formacin salina o tampn. Ventajas: Es el fijador mas barato que existe por lo tanto es de eleccin para los trabajos de rutina en Anatoma patolgica. Es un buen fijador nico que determina una moderado conversacin de la estructura tisular. Por ser buen desinfectante y no endurecer excesivamente los tejidos, es un medio ptimo para conversar y almacenar biopsias y piezas quirrgicas. Provoca escasa retraccin tisular Posee una velocidad de penetracin intermedia entre la de los alcoholes y la del sublimado Tiene aproximadamente una velocidad de un milmetro por hora apenas altera la coloracin tisular, por eso es el agente de eleccin para fijar grandes piezas quirrgicas. Es excelente fijador para el tejido adiposo y para lpidos en general y se emplea como agente de eleccin para fijar el tejido nervioso y en general antes de cualquier impregnacin argntica. El proceso de fijacin puede ser acelerado o retrasado sin graves inconvenientes modificando la temperatura, as a temperatura ambiente se

consigue un fijador completa a partir de las 36 horas. A 35 entre 12 y 24 horas y a 55C en solo 3 horas. Por este motivo la formalina es un fijador de eleccin cuando se emplean hornos de microondas en tcnicas de histotecnologa. Es compatible con la mayor parte de las tinciones que se utilizan rutinariamente en Anatoma patolgica.

Inconvenientes: Produce abundantes vapores de carcter irritante sobre la conjuntiva y mucosa nasal. Por accin de la luz y del oxgeno atmosfrico se transforma progresivamente en cido frmico y sta sustancia tiene la propiedad de disolver rpidamente la cromatina nuclear por eso con el paso del tiempo los ncleos celulares adoptan un aspecto fantasma para evitar este inconveniente el formol debe guardarse en frascos opacos o emplearse en forma de solucin neutra o tamponado. Se incorpora progresivamente al tejido con lo cual se consumen durante el proceso de fijacin por lo que debe encontrarse en exceso Es debido a que se incorpora al tejido y que tiene baja presin osmtica provoca la incorporacin de agua a los espacios intratisulares por lo que el peso y el volumen del tejido una vez fijado se aumenta de manera notable. Este efecto se puede prevenir utilizando formol salino o tamponado. Posee una relativa capacidad de fijacin sobre las protenas, los pigmentos que contienen hierro y los derivados de la bilirrubina, a stos ltimos les da una coloracin verdosa. Tras la utilizacin prolongada de formalina debido a que se convierte en cido frmico confiere a las piezas un tinte grisceo y en tejidos que tienen mucha sangre da origen a un pigmento formlico que es negro o pardo oscuro que precipita en aglomeraciones irregulares sobre estructuras preexistentes. Este pigmento se puede eliminar sumergiendo los cortes en alcohol absoluto saturado con acido pcrico compuesta por 10, 12 gramos de pcrico en alcohol etlico al 95-100% durante 5 minutos. O bien podemos sumergirlo en alcohol amonacal que es el de 1 a 5 partes de hidrxido amnico en 95 a 99 de alcohol etlico al 70%. En este caso se tratan los cortes durante 15 minutos, seguidos

de dos baos de agua destilada y despus otro de alcohol al 70% de 5 minutos de duracin cada uno. Soluciones fijadoras simples que contienen formol Formol salino: Se utiliza para prevenir el efecto osmtico que provoca el empleo de disoluciones de formaldehdo en agua destilada y se prepara disolviendo 9 gramos de cloruro sdico en 1000 mililitros de formalina al 10%. Formalina neutra: Se prepara aadiendo a la solucin de formalina al 10% una pequea cantidad de carbonato clcico insoluble que queda depositado en el fondo del recipiente neutraliza esta sal el exceso de cido frmico que se produce y aunque puede utilizarse todava para la formacin de tejidos en la prctica ha sido desplazada por las soluciones tamponadas. Formol tamponado: Es la solucin ms empleada hoy en da para prevenir el choque osmtico que provoca la disolucin de formalina en agua destilada y el depsito de pigmento formlico que ocurre a un pH inferior a 6. Se preparada la siguiente manera, como amortiguador se emplea el tampn fosfato calibrado con pH de 7.0 a 7.2 de la siguiente frmula: FORMALINA PURA..100.0 ml. FOSFATO SDICO MONOBSICO.4.0 gr. FOSFATO SDICO DIBSICO (ANHIDRO**)...6.5 gr. AGUA DESTILADA....900.0 gr. Se emplea fundamentalmente para fijar tejidos nerviosos en la preparacin de algunas tcnicas de impregnacin argntica. Y se prepara aadiendo una parte de cido actico glacial a 9 partes de formalina al 10% con ello se consigue un pH en torno a 2. Formol clcico o solucin de Baker: Se emplea como fijador de eleccin en algunas tcnicas de histoenzimologa y se prepara aadiendo cloruro clcico al 1% a una solucin de formalina neutra o tamponada al 10% Mezclas fijadoras

Glutaraldehido: lquido oleoso en comercios se encuentra en disolucin al 25%. Mecanismo de actuacin es el mismo que el formaldehdo y como fijador se emplea en concentraciones entre el 1 y el 3%. Ventajas: Es el primer fijador de eleccin para microscopa electrnica porque tienen una excepcional capacidad para preservar la morfologa celular. Se emplea para fijacin de animales por perfusin en patologa experimental. Inconvenientes: Tiene velocidad de penetracin muy baja por lo que los fragmentos de tejido no pueden tener volumen superior a unos pocos milmetros cbicos. Posee gran capacidad de retraccin y endurecimiento tisular que impide prolongar el tiempo de fijacin por encima de las 3 horas. Tiene osmolaridad muy baja por lo que hay que emplearlo disuelta en soluciones amortiguadoras. Tetraxido de Osmio: OsO4: En el comercio se encuentra en forma de cristales amarillentos solubles en agua, muy voltiles y txicas. Acta igual que el formol y se prepara como agente fijador al 1% en tampn fosfato. Ventajas: Es el mejor fijador estructural conocido, por eso se utiliza en microscopa electrnica especficamente como 2 fijador. Inconvenientes: Muy caro y descompone en preseca de luz por lo que hay que conservarlo en recipientes opacos y oscuridad. Aunque sea soluble en agua es difcil preparar disoluciones acuosas con las que se trabaja Muy txico y en estado cristalino emite vapores que irritan la crnea mucosa respiratoria. Su manipulacin es obligatoria en una campana de extraccin de gases para prevenir la aparicin de queratitis. Posee muy baja capacidad de penetracin tisular por lo que las muestras deben tener muy poco volumen. Es incompatible con formol y dificulta la coloracin nuclear, esto obliga a lavar abundantemente los tejidos tras utilizarlo.

Es que inactiva por completo las enzimas y altera notablemente la composicin antignica del tejido. La combinacin de diversos fijadores simples formando soluciones, complejas llamadas mezclas fijadoras pretende sumar las ventajas de cada una de ellas amortiguando sus inconvenientes. Desde un punto de vista general se clasifican en dos grupos: Aquellas que contienen formol: Lquido de Buin: Solucin muy usada como alternativo a la formalina cuando queremos fijar ciertos Tejidos como piel rganos endocrinos, testculos y tejido embrionario en general. Sin embargo no est fijado para la fijacin de biopsias renales sobre los cuales provoca una severa distorsin. Se prepara de la siguiente manera: - SOLUCIN ACUOSA DE C. PCRICO (C. PCRICO AL 1-2% EN AGUA DESTILADA)..750.0 ml. FORMALINA CONCENTRADA250.0 ml. C. ACTICO GLACIAL.50.0 ml. PH. FINAL2.2 TIEMPO DE FIJACIN..2 a 24 horas Fijador de Bouin-Hollander: es una variante del liquido de Bouin especialmente indicado para la fijacin de los cilindros de biopsia de mdula sea cuando no es posible controlar el tiempo de fijacin de la muestra en ste lquido, la conservacin, puede incluso conservar las 48 horas sin que se produzca excesivo endurecimiento. Se prepara de la siguiente manera:
ACETATO NEUTRO DE COBRE.2.5 gr. C. PCRICO..4.0 gr. FORMALINA CONCENTRADA....10.0 ml. C. ACTICO GLACIAL..1.5 ml.

AGUA DESTILADA..100.0 ml.

Para preparar la solucin se disuelve primero la sal de cobre en el agua destilada luego se aade el cido pcrico y tras filtrarlos el formol y el cido actico glacial. Esta solucin se conserva indefinidamente a temperatura ambiente el tiempo de fijacin oscila entre 48-72 horas y sigue las mismas precauciones que el lquido de Bouin Bouin alcohlico (fijador de Dubosq-Brasil): Es una alternativa de lquido de Bouin cuando la pieza que se debe fijar es relativamente voluminosa porque posee una velocidad de penetracin mucho mas elevada. Se utiliza tambin cuando se precisa una fijacin especfica de sustancias hidrosolubles como el glucgeno ya que evita su disolucin. Se prepara de la siguiente manera: ALCOHOL ETILICO 80%...............................................75.0 ml. C. PCRICO0.5 gr. FORMALINA CONCENTRADA.....30.0 ml. C. ACTICO GLACIAL...7.5 ml. Mezclar antes de usar el tiempo medio de fijacin para fragmentos con un espesor en torno a 5 milmetros es de 2 a 3 horas. Lquido de Gendre: Es una variacin que est especialmente diseada para la fijacin del glucgeno y pigmentos derivados de la hemoglobina. Se prepara por: SOLUCIN SATRUADA DE C. PCRICO EN ALCOHOL ETLICO AL 70%.....................................80.0 ml. FORMALINA CONCENTRADA...15.0 ml. C. ACTICO GLACIAL.7.5 ml.

El tiempo de fijacin oscila entre 1 y 4 horas. Tras acabar el proceso debe realizarse sucesivamente 2 lavados cortos en etanol al 80, 95 y 100 Fijador de Mller: Es la disolucin acuosa de un fijador simple de dicromato potsico con la adicin de sulfato sdico su importancia actual radica en que se emplea para fabricar los fijadores de Orth y de Zenker. Lo que llamamos solucin madre. Est compuesta de: DICROMATO POTASICO2.5gr. SULFATO SDICO..1.0 gr. AGUA DESTILADA 100.0 ml. Tiempo de fijacin 4 y 8 horas. Tras la fijacin es necesario lavar abundantemente en agua corriente durante unas horas. Fijador de Orth: Hoy da se emplea exclusivamente en ciertas tcnicas de fijacin de tejido nervios. Se prepara de la siguiente manera: Solucin stock de Orth: idntica a la composicin del fijador de Mller. Solucin de trabajo: en el momento de su uso se mezclan: SOLUCIN STOCK..90.0 ml. FORMULINA CONCENTRADA.10.0 ml. El tiempo de fijacin de tejido nervioso es de 48 horas y tras el proceso de fijacin los tejidos han de ser lavados abundantemente en agua y almacenados en alcohol etlico al 70% Solucin de B-5 y Zenker-Formol (Liquido de Nelly): Ambas mezclas son en esencia casi idnticas. La denominacin B5 corresponde en realidad a una modificacin de la de Zenker. La solucin de Zenker-formol contiene dicromato potsico y sulfato sdico. La mayor utilidad de estos fijadores es que mejoran considerablemente la tincin nuclear, de hecho la fijacin en una mezcla que contenga sublimado es hoy da prcticamente imprescindible para el diagnstico morfolgico en las patologas del sistema linfoide y hematopoytico. Es debido a la gran importancia que se da a la observacin de finos detalles nucleares como es la presencia o no de

hendiduras o repliegues nucleares y del ncleo para catalogar un tumor maligno de ganglios linfticos, o de mdula sea (leucemias) como de alto o bajo grado de malignidad y por tanto recomendar la teraputica ms oportuna. Adems estas soluciones B5 zenker formol son los fijadores de eleccin para el rin, hgado, fibras de tejido conectivo y para fibrina.

Se prefiere la solucin de B5 porque al no contener dicromato, esto permite una mejor conservacin de la cromatina nuclear y de la estructura antignica tisular. Solucin stock de B5: Esta mezcla es estable durante bastante tiempo pero concentrado en frasco opaco y oscuridad. CLORURO MERCRICO... 12.0 gr. ACETATO SDICO....2.5 gr. AGUA DESTILADA C.S.P.200 ml.

Solucin de trabajo de B5: Esta solucin es inestable debido a que el formaldehdo reduce el sublimado a cloruro mercurioso y mercurio metlico que se depositan en forma de un precipitado blanco grisceo, por este motivo y por el elevado ndice de endurecimiento que posee el sublimado, el tiempo de fijacin no debe superar las 4 horas. Adems el espesor mximo de las muestras no debe superar los 4 mm debido al escaso poder de penetracin de la mezcla fijadora. Debido a la aparicin de precipitados mercricos sobre los tejidos las secciones histolgicas antes de ser coloreados. Han de ser sometidas a un tratamiento especfico mediante soluciones que eliminan estos depsitos. Tras la fijacin los tejidos se pueden conservar indefinidamente en alcohol etlico al 70-80% - SOLUCIN STOCK DE B520.0 ml. - FORMALINA CONCENTRADA .2.0 ml. Solucin de Zenker-Formol Eliminacin del pigmento mercrico: *Solucin stock de Zenker:

- CLORURO MERCRICO5gr. - DICROMATO POTSICO...2.5 gr. - SULFATO SDICO 1 gr. - AGUA DESTILADA C.S.P. ....100.0 ml. Solucin de trabajo: en el momento de su uso mezclamos: - SOLUCIN STOCK DE ZENKER..95 ml. - FORMALINA CONCENTRADA...5 ml. Aquellas que no contienen formol Lquido de Zenker: Trata de combinar los efectos favorables del sublimado y del dicromato potsico. En la prctica habitual ha sido sustituido por B5. Su empleo ha quedado prcticamente restringido al proceso de refinacindecalcificacin a que son sometidas las biopsias de mdula sea cuando se realiza una fijacin inicial con B5. Se prepara de la siguiente manera. SOLUCIN STOCK DE ZENKER95.0 ml. C. ACTICO GLACIAL.. 5.0 ml. El cido actico reacciona con el dicromato y hace que la solucin se oscurezca progresivamente, por lo que debe recomponerse antes de su uso. El tiempo de fijacin puede ser mas prolongada que con la solucin de b5 porque el cido actico que contiene, produce un excesivo endurecimiento. Pero no se deben sobreasar las 48 horas. Tras la fijacin el material debe ser tratado con sulfato sdico al 5% durante 1-2 horas. Liquido de Carnoy: Es el mejor fijador conocido para el glucgeno y en general, para los hidratos de carbono simples y para protenas fibrilares y sobre todo miofibrillas, su accin fijadora es extremadamente rpida deshidratando el tejido al mismo tiempo, sin embargo produce una excesiva retraccin mstica y una hemlisis masiva de eritrocitos as como una pobre conservacin estructural del ADN. Est compuesta por: ETANOL ABOSLUTO..60.0 ml. CLOROFORMO.30.0 ml.

C. ACTICO GLACIAL..10.0 ml. El tiempo de fijacin puede ser acortado hasta 3 horas. Las muestras deben cambiarse directamente a alcohol etlico absoluto. El mayor endurecimiento se produce al prolongar demasiado la deshidratacin en alcohol, para prevenirlo se puede sustituir el etanol por metanol en la composicin de lquido fijador, que adems provoca menor retraccin tisular, y para conservar la pieza se deposita en alcohol etlico absoluto. ndice Capitulo i Capitulo ii Capitulo iii Capitulo iv