EXTRACCIN Y SEPARACIN DE PIGMENTOS VEGETALES

Alba Gisell Garzn Avella Andrs Felipe Ariza aggarzona@unal.edu.co afarizal@unal.edu.co 02245473 02245380 Ingeniera Qumica Universidad Nacional de Colombia Sede Bogot

Gabriel Jimnez gabrieljimenez44@gmail.com

RESUMEN

obtuvo en mayor cantidad la clorofila alfa debido a que esta es la que compone casi el 75% de las clorofilas de la planta.

Los cloroplastos presentes especialmente en las plantas verdes poseen una mezcla de pigmentos con diferentes colores: clorofila-a (verde intenso), clorofila-b (verde), carotenos (amarillo claro) y xantofilas (amarillo anaranjado) en diferentes proporciones. Todas estas sustancias presentan un grado diferente de solubilidad en disolventes apolares, lo que permite su separacin cuando una solucin de las mismas se desplaza a travs de una placa cromatogrfica de gel slica verticalmente sobre una pelcula de un disolvente orgnico, ya que las ms solubles se desplazarn a mayor velocidad, pues acompaarn fcilmente al disolvente a medida que ste desciende. Las menos solubles avanzarn menos en la placa. En la prctica, aparecieron por tanto, varias bandas de diferentes colores (hasta tres o ms, dependiendo del material utilizado) que estarn ms o menos alejados de la disolucin segn la mayor o menor solubilidad de los pigmentos. Estas bandas poseern diferente grosor, dependiendo de la abundancia del pigmento en la disolucin. Esto se logr demostrar mediante la extraccin de estas clorofilas y carotenos con distintos disolventes orgnicos y una solucin sobresaturada de NaCl para evitar emulsiones y obtener las dos fases. Una vez extrados los pigmentos fotosintticos, se procedi a realizar una cromatografa de adsorcin para separar las distintas clorofilas que componen dichos pigmentos fotosintticos que componen las coloraciones de las hojas de las plantas observndose que estas se iban corriendo por la placa dependiendo de la afinidad que tuvieran por el disolvente y se obtenan en diferentes cantidades de acuerdo al tipo de clorofila, ya que por ejemplo se

INTRODUCCIN

Entre todos los caracteres ms externos de los vegetales, el ms notable y caracterstico es probablemente el color. El color no es nicamente un carcter llamativo de la vegetacin, sino que, adems, algunos de los pigmentos que lo condicionan estn estrechamente ligados a las actividades fisiolgicas del propio vegetal. Por consiguiente, el estudio de cmo las plantas viven y se desarrollan requiere el previo conocimiento de los pigmentos vegetales.

Qu son los pigmentos?

Si es posible encontrar en el reino vegetal todos los matices y combinaciones de colores del espectro, existe un predominio general de los colores primarios: verde, amarillo, rojo, azul. Estos colores son conferidos a los vegetales por determinados compuestos qumicos definidos, llamados pigmentos. El color particular que presenta un determinado rgano vegetal depende generalmente del predominio de uno u otro o la combinacin de ellos. Se debe tener claro que cuando un vegetal presenta un color blanco, es debido a la falta de tales pigmentos. La luz solar que incide sobre ellas no es absorbida selectivamente como ocurre en las partes coloreadas, sino que es transmitida o reflejada prcticamente sin sufrir modificacin.

El color verde tan uniformemente presente en los vegetales es debido a la presencia de dos pigmentos estrechamente emparentados llamados clorofila a y clorofila b. Se encuentran prcticamente en todas las plantas con semilla, helechos, musgos y algas. Pueden formarse en las races, tallos, hojas y frutos a condicin de que estos rganos estn situados por encima del suelo y queden expuestos a la luz. Tambin aunque aparentemente falten en algunas hojas de color rojo o amarillo, cuando se extraen las otras sustancias colorantes de estas, puede comprobarse incluso all la presencia de las clorofilas, que estaban enmascaradas por los dems pigmentos.

lquidos no especfico.

miscibles y

con

diferente peso

En el segundo mtodo por cromatografa se utilizar como extractante el n-propanol y como separador el ter de petrleo. Este mtodo se trata de una separacin ms fina de los pigmentos, y se basa en la absorcin y solubilidad diferenciales de varias sustancias entre las que se incluyen los pigmentos. Un soporte inerte como la placa de gel slica para la corrida es el componente necesario para desarrollar la tcnica.

METODOLOGA: Dnde estn los pigmentos? Estos pigmentos se encuentran en el interior de las clulas vegetales, especficamente en un organelo llamada cloroplasto. Los cloroplastos son simplemente plstidos que contienen pigmentos cloroflicos. Los compuestos cloroflicos estn ligados qumicamente con las estructuras internas del cloroplasto (membrana tilacoides) y se hallan retenidos en estado coloidal. Asociados con las clorofilas, existen tambin en los cloroplastos dos clases de pigmentos amarillos y amarilloanaranjados que son xantofilas y carotenides. Para la extraccin de pigmentos vegetales utilizamos dos plantas diferentes: Espinaca y Borrachero (Brugmansia Candida Pers), a continuacin se har una breve descripcin del procedimiento realizado para los dos organismos.

Materiales: 2 vasos de precipitado de 250 mL. Un vidrio reloj. 1 probeta de 100 mL. Recipiente para bao de Mara. Un embudo de separacin Un matraz de fondo redondo. Pipetas de 1, 5 y 10 mL. Un gotero. Papel filtro. Un embudo de filtracin. Hielo. Placa calefactora.

Cmo se dividen los solventes? Los pigmentos cloroflicos son insolubles en el solvente universal llamado agua. Pero s son solubles (afinidad qumica) en solventes orgnicos como por ejemplo alcohol metlico y npropanol. A los solventes que extraen simultneamente todos los pigmentos de la hoja se los suele llamar extractantes. Existen otros solventes que presentan afinidad por algunos pigmentos y se los llama separadores, como por ejemplo el ter dietlico y el ter de petrleo. En el mtodo de extraccin simple como se desarrolla ms adelante, se utilizarn como extractantes el alcohol metlico en solucin y como separador el ter dietlico y de petrleo. Estos dos solventes orgnicos responden en forma diferente a los pigmentos cloroflicos, como as tambin a sus diferencias fsicas que hacen que sean dos

Material Biolgico: Hojas de espinaca. Flores de Borrachero.

Reactivos: Mezcla de metanol 90%, ter dietlico 10%. Mezcla de metanol 70%, ter dietlico 30%. ter dietlico. ter de Petrleo. N- propanol

Solucin saturada de NaCl. NaCl al 10%

Procedimiento:

Cortar en pequeos trozos una hoja de espinaca y pesar en un vidrio reloj aproximadamente 2 g. (Tener en cuenta que cada uno de los trozos debe ir sin venas). Luego colocarlas en un vaso de precipitado, adicionar 50 mL de agua y dejar hervir por dos minutos. A continuacin, en un recipiente para bao de mara colocar varios pedazos de hielo con agua y sumergir el vaso de precipitado hasta que enfre. Descartar el agua y dejar slo las hojas. Extraer los pigmentos de las hojas, utilizando 50 mL de la mezcla metanol 90% - ter dietlico 10%. Calentar a bao de Mara por 5 minutos.

Los extractos obtenidos en las dos anteriores extracciones se deben mezclar en un embudo de separacin y aadirles 50 mL de ter de petrleo. Ahora, aadir 50 mL de solucin acuosa de NaCl y agitar. Dejar separar las capas.

Espinacas:

Retirar el agua de nuevo, y repetir la extraccin con 50 mL de la mezcla metano 70%- ter dietlico 30%. Calentar a bao de Mara por 5 minutos.

Borrachero:

El ltimo paso es realizar una mezcla de N-Propanol al 0,5% en ter de petrleo, con el fin de depositarla en dos vasos de precipitado y realizar la respectiva cromatografa en capa fina. Para este procedimiento se necesitan varios capilares y dos o tres placas de capa fina. (Tambin se puede utilizar papel filtro).

En cada una de las placas se siembran 4 puntos los extractos, se sumergen en un vaso precipitado con la mezcla de N-Propanol-ter petrleo, y se cubre con vinipel para cromatografa. Cuando estn muy bien separadas, descartar la capa inferior. Las dos porciones que quedan se lavan con 50 mL de agua destilada, y la capa verde superior se vierte en un matraz as:

de de de la

Finalmente la muestra corre y el resultado ser as:

En sta imagen podemos observar la extraccin de las dos plantas (Espinaca y Borrachero respectivamente).

. Nota: El procedimiento mencionado se realiza para la extraccin de los pigmentos de cada una de las plantas por separado.

RESULTADOS: Al realizar una extraccin de pigmentos vegetales, obtendremos muy probablemente Carotenos, Xantofilas, Clorofila alfa y Clorofila Beta. Las siguientes son dos figuras comparativas entre las ilustraciones tericas y el resultado de nuestra prctica de laboratorio, evidenciando algunas semejanzas:

En su respectivo orden obtuvimos pigmentos de los siguientes colores: Amarillo claro, Verde oscuro, Verde claro y Amarillo intenso, los cuales corresponden a los tipos de clorofila que se presentan en la planta. El primer pigmento que obtuvimos fueron las Xantofilas de un color amarillo claro cerca a transparente. El segundo pigmento obtenido fue la Clorofila alfa, de color verde claro, se obtuvo en mayor cantidad porque constituye aproximadamente un 75% de la clorofila en las plantas verdes como nuestro ejemplo: Espinaca. En el borrachero las clorofilas van acompaadas de otros pigmentos como carotenoides y ficobilinas de distintos colores, que son las encargadas de teir el organismo, en ste caso amarillo. El tercer pigmento que se obtuvo fue la Clorofila beta, de un color verde oscuro y en menor proporcin que la clorofila alfa. El siguiente pigmento obtenido que podemos notar son los carotenos, stos fueron los ltimos que se obtuvieron debido a que son menos afines al disolvente empleado, recordemos que se utiliz NPropanol al 0,5% en ter de Petrleo. Los Carotenos son de un color amarillo intenso en comparacin con las Xantofilas de un color un poco ms tenue.

CONCLUSIN

Para la cromatografa se utiliz N-Propanol al 0,5% en ter de petrleo como eluyente y anteriormente se utiliz el ter dietlico como disolvente. No se pudo utilizar placas de capa fina porque la muestra no corra, entonces se termin por utilizar papel filtro y realizar la respectiva cromatografa de papel.

A travs de toda la prctica, se logr una correcta extraccin, separacin e identificacin de los pigmentos fotosintticos de la clorofila , mediante el uso de disolventes orgnicos afines a dichos pigmentos, adems del correcto uso de la tcnica cromatogrfica de capa fina. Estos pigmentos son los que le dan color a las hojas de las plantas ya que la fotosntesis es un proceso que permite a los vegetales obtener la materia y la energa que necesitan para desarrollar sus funciones vitales, se lleva a cabo gracias a la presencia en las hojas y en los tallos jvenes de pigmentos, capaces de captar la energa lumnica.

Bibliografa y Fuentes Web:

http://www.virtual.unal.edu.co/cursos/cien cias/2000051/lecciones/cap02/02_04.htm http://es.geocities.com/qo_11_sepypur/ http://www.ub.es/biocel/wbc/tecnicas/crom atografia.htm

http://es.scribd.com/doc/16675209/6EXTRACCION-Y-SEPARACION-DEPIGMENTOS-VEGETALES http://www.enbuenasmanos.com/articulos/m uestra.asp?art=540 http://es.wikipedia.org/wiki/Clorofila http://www.panreac.es/spanish/practicas/pra c23.jpg