UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA-UNADESCUELA DE CIENCIAS BASICAS TECNOLOGA E INGENIERIA

GUA DE LABORATORIO DE BIOLOGA

Carmen Eugenia Pia Lpez1 Yurby Salazar Nez2, Bibiana vila Garca3

_________________________ 1 M. Sc. Ciencias Biolgicas; M.Sc. Docencia Universitaria; Especialista en Nutricin Animal Sostenible; Especialista en Informtica y Multimedia. 2 Bacteriloga Tutora Jos Acevedo y Gmez 3 Magistra en Educacin. Especialista en planeacin para la educacin ambiental. Psicopedagoga Licenciada en Biologa y qumica

GUIAS PARA PRCTICAS DE BIOLOGA GENERAL INTRODUCCION Las guas para las prcticas de biologa, son un importante dispositivo de ayuda pedaggica y didctica en el proceso de formacin profesional que inician los estudiantes de los programas de pregrado Estas guas estn descritas de manera clara y sencilla con el fin de que la ejecucin prctica pueda hacerse completamente. Antes de realizar la parte prctica se recomienda ver cada uno de los videos presentados en el curso de Biologa en el link Multimedia, http://www.unad.edu.co/curso_biologia/multimedia.htm para hacerse una idea del material a utilizar y procedimiento a seguir lo cual le facilitar la comprensin y el desarrollo de la prctica Actividades de Laboratorio

El componente prctico se desarrollar mediante laboratorios previamente apoyados en vdeos didcticos introductorios y se complementar con observaciones en el laboratorio. Los laboratorios se realizan de forma presencial en cada uno de los CEAD donde estn matriculados, con un tutor asignado por el director del Cead para tal fin. La fecha de realizacin la determinan en cada CEAD y saldr publicada en el Foro Noticias del aula y en cada CEAD, motivo por lo cual hay que estar pendiente " leer diariamente" las noticias del foro, para que puedan hacer su inscripcin La realizacin de las prcticas de laboratorio es obligatoria para aprobar el curso. Los informes de laboratorio de los estudiantes virtuales deben ser entregados al tutor de metodologa tradicional con quien realicen el laboratorio. El Informe incluye las respuestas a las preguntas sobre la observacin de los videos de preparacin previa , el pre-informe y el desarrollo de las guas El tutor tradicional con quien realizan el laboratorio debe calificar su proceso y su informe, y enva la nota al tutor virtual para sumarla con las notas obtenidas en las dems actividades y de esta manera se pueda dar la nota definitiva de su curso. Las actividades en campus tienen un valor de 60% sobre la calificacin del curso. El 60% equivale a 300 puntos, de los cuales 90 puntos corresponden a la nota enviada por el tutor tradicional. La equivalencia es la siguiente por ejemplo para una nota de 4,5 enviada por el tutor tradicional:

Calificacin de los laboratorios enviada por el tutor tradicional 5 4,5 X= (90 x 4,5) / 5= 81 puntos El costo de los laboratorios est incluido en la matrcula

Valor en Puntos 90 X

Nota: No olviden colocar en el informe a entregar al tutor tradicional de laboratorio el nmero del grupo colaborativo, el nombre de su tutor virtual, adems de sus datos nombre apellidos y cdigo.

FORMATO PARA OBSERVACIN DE VIDEOS DE LABORATORIO. Objetivos: Identificar los temas, materiales, habilidades que podemos desarrollar con la observacin de los videos y prcticas de laboratorio.

Instrucciones: Esta actividad no reemplaza los laboratorios nos prepara para la realizacin de los mismos. Observe detenidamente cada uno de los videos de laboratorio relacionados en el material didctico del curso de Biologa. Responda las preguntas que se realizan para cada video de las experiencias de laboratorio. Con los compaeros de su grupo colaborativo compare las respuestas. Consolide en un solo documento los datos y presntelos al tutor virtual Recursos: Videos de las experiencias: 1. Vdeo: Normas generales de uso del laboratorio http://www.unad.edu.co/curso_biologia/videoseguridad.htm 2. Video:_El microscopio parte 1 http://www.unad.edu.co/curso_biologia/video_microscopio1.htm Video: El microscopio parte 2 http://www.unad.edu.co/curso_biologia/video_microscopio2.htm 3. Video: Clula parte 1 http://www.unad.edu.co/curso_biologia/video_celula-1.htm Vdeo: Clula parte 2 http://www.unad.edu.co/curso_biologia/video_celula_2.htm 4. Vdeo: mitosis y meiosis parte 1 http://www.unad.edu.co/curso_biologia/video_mitosis1.htm Vdeo: mitosis y meiosis parte 2

http://www.unad.edu.co/curso_biologia/video_mitosis2.htm 5. Vdeo: biodiversidad microbiana parte 1 http://www.unad.edu.co/curso_biologia/biodiversidad1.htm Vdeo: biodiversidad microbiana parte 2 http://www.unad.edu.co/curso_biologia/biodiversidad_2.htm 6. Vdeo: tejidos vegetales http://www.unad.edu.co/curso_biologia/video_Tej_vegetales.htm

Preguntas: RESPONDA PARA CADA VIDEO. 1. Cul es el objetivo de esta prctica? 2. Qu materiales necesita? Los conoce todos? Cules desconoce? 3. Qu temas del mdulo puede relacionar con esta experiencia? Justifique su respuesta. 4. Qu habilidades cree que se pueden desarrollar al realizar sta prctica de laboratorio? 5. Qu utilidad o aplicaciones prcticas puede derivar del conocimiento que se desarrolla con estos laboratorios? 6. Despus de observar el video Cul es la conclusin a la que llega? Formato elaborado por: Esp. Bibiana vila Garca. Punto de contacto: 3004986704 bibi.avila@gmail.com Tutora CEAD Barranquilla.

Recomendaciones Generales Implementos que deben llevar al laboratorio Bata Blanca, Guantes. Papel absorbente, Paos de cocina Jabn Lminas y laminillas Tapabocas. Papel y lpiz para tomar apuntes Antes de iniciar las prcticas usted debe haber ledo el captulo correspondiente en el curso de biologa, observado los videos de preparacin previa y resuelto las preguntas sobre la observacin de videos y lo que se solicite en cada prctica

Forma de Evaluacin La evaluacin se llevar a cabo por medio de las siguientes actividades 1. Participacin en el foro colaborativo con la presentacin del pre-informe sobre los laboratorios, el cual incluye las respuestas a las preguntas sobre observacin de videos y las respuestas a los cuestionarios de cada prctica. Los puntos del pre-informe son: Titulo Objetivos Resumen de la informacin terica Esquema o diagrama de flujo en orden riguroso por cada observacin Respuesta a cuestionario que encuentre en la gua de prctica

2. Evaluaciones parciales presenciales al iniciar algunas prcticas 3. Presentacin de informes de prcticas realizadas en el laboratorio, el cual incluye tambin el pre-informe 3. Resolucin de cuestionarios para medir el rendimiento despus de las prcticas Aspectos mnimos que debe llevar un informe final (que se entregar al tutor tradicional para su calificacin) 1. Titulo 2. Objetivos 3. Resumen de la informacin terica 4. Esquema de pasos para las observaciones en el laboratorio o diagrama de flujo en orden riguroso por cada observacin 5. Respuesta a cuestionario de cada prctica 5. Descripcin detallada de las observaciones 6. Conclusiones 7. Referencias bibliogrficas A continuacin encontrar una tabla con la descripcin de la actividad a realizar y los productos a entregar

Laboratorio 1 Normas de seguridad en el laboratorio.

Objetivo Conocer y cumplir las principales normas de seguridad e higiene que se deben seguir en el laboratorio, con el fin de evitar posibles riesgos, tanto para las personas como para el medio ambiente. Introduccin La bioseguridad, es la aplicacin del conocimiento, de las normas y tcnicas en el desarrollo de las prcticas que se realizan en el laboratorio para prevenir la exposicin del personal y del medio ambiente a cualquier riesgo. Los riesgos pueden estar relacionados con las propias instalaciones, con las muestras de origen biolgico, con los procedimientos y manipulaciones que se realicen. Para el desarrollo de esta prctica el estudiante debe observar el video normas de seguridad en el laboratorio y contestar las preguntas presentadas en el formato de observacin del video Principales Normas Las principales normas a tener en cuenta para el desarrollo de prcticas en el laboratorio de Biologa son las siguientes: en la zona de trabajo del laboratorio no se debe consumir alimentos ni bebidas para evitar riesgos de contaminacin. est prohibido fumar en el rea del laboratorio o sus alrededores. Recordemos que se trabaja con gas y que algunos qumicos generan vapores inflamables. No se deben llevar a la boca lpices, etiquetas o cualquier otro material utilizado en el laboratorio. se debe mantener el laboratorio limpio y aseado. Por consiguiente al terminar la prctica se debe descontaminar la superficie de trabajo. las manos se deben lavar despus de manipular material infeccioso, as como al abandonar el laboratorio. todo estudiante debe hacer uso de la bata blanca, esto le proteger la ropa del contacto con reactivos y colorantes empleados en el laboratorio. slo se debe permitir el paso a la zona de trabajo del laboratorio a las personas autorizadas. Durante el trabajo se mantendrn cerradas las puertas del laboratorio. no se debe pipetear con la boca. debe utilizarse siempre un dispositivo de pipeteo todas las pipetas deben tener tapones de algodn para reducir la contaminacin de los dispositivos de pipeteo. todo el personal debe poner especial cuidado en evitar el contacto de la piel con materiales potencialmente infecciosos. Con este fin deben usarse guantes. Los guantes deben ser desechados antes de salir del rea de trabajo. Jams se debe salir de la misma con los guantes puestos, ni con ellos se debe coger el telfono. marque y rotule adecuadamente las lminas. Deben llevar claramente escrito en un lugar visible, el nombre o identificacin del grupo de trabajo, practica realizada y fecha.

 una vez concluida la prctica, proceda a organizar el sitio de trabajo, desinfectando el mesn con toallas de papel humedecidas con hipoclorito de sodio o alcohol y dejando tanto el material como el equipo utilizado limpio y en el lugar adecuado. es importante conocer los agentes, sustancias y productos peligrosos que existen en el laboratorio. Antes de utilizar un compuesto hay que fijarse en la etiqueta para asegurarse de que es el que se necesita y de los posibles riesgos de su manipulacin. es necesario conocer el manejo de cada uno de los equipos existentes en el laboratorio. Todo el material, especialmente los aparatos delicados, como lupas y microscopios, deben manejarse con cuidado evitando los golpes o el forzar sus mecanismos. Cualquier material de vidrio no debe enfriarse bruscamente justo despus de haberlos calentado con el fin de evitar roturas. en neveras que no posean un sistema de proteccin antideflagracin no deben almacenarse reactivos que contengan compuestos voltiles inflamables como ter etlico. los productos inflamables como gases, alcohol, ter, entre otros deben mantenerse alejados de la llama del mechero. Si hay que calentar tubos de ensayo con estos productos, se har al bao Mara, nunca directamente a la llama. Si se manejan mecheros de gas se debe tener mucho cuidado de cerrar las llaves de paso al apagar la llama. se debe lavar muy bien la cristalera que se utilice. Preste atencin y cuidado al manipular cristalera mojada. en el laboratorio habr un recipiente plstico, para cristalera rota y para plsticos que hayan estado en contacto con cultivos de clulas o virus. Por favor, deseche cada cosa en el envase apropiado. mantenga despejadas las reas. Trate de traer la menor cantidad posible de pertenencias al laboratorio. Coloque sus pertenencias en un rea designada o donde no estorben. Cuestionario para el pre-informe 1.1 Que es bioseguridad? 1.2 Cules seran para usted las normas bsicas de bioseguridad en el laboratorio de biologa? 1.3 Cmo puede usted evitar en el laboratorio daos a su salud? 1.4 Conclusiones

LABORATORIO 2: MICROSCOPA Autora: Carmen Eugenia Pia L vdeo:_El microscopio parte 1 vdeo:_EL microscopio parte 2

OBJETIVOS:

Sealar los componentes mecnicos y pticos que constituyen el microscopio. Realizar montajes hmedos Comprobar las propiedades que posee el microscopio. Realizar correctamente el manejo del microscopio ptico Calcular el dimetro del campo de visin Comprobar los principios en que se basa la microscopa ptica. Desarrollar en trabajo colaborativo el informe de laboratorio

Marco Terico Tipos de Microscopio El Microscopio ptico simple Constituido por una lente biconvexa nica o lupa que hace converger los rayos luminosos que la atraviesan en un punto denominado foco y a una distancia focal muy corta. El Microscopio ptico Compuesto El microscopio se define como un instrumento ptico formado por un sistema de lentes: objetivos y oculares que amplan los objetos extremadamente pequeos para posibilitar su observacin. La lente del objetivo proporciona una imagen intermedia ampliada del objeto, es decir, funciona como una lente simple, y la lente del ocular que recoge la imagen dad por el objetivo y la aumenta. El Microscopio electrnico Este microscopio en lugar de una fuente de luz, utiliza un haz de electrones que se desplazan en el vaco y en lnea recta. Con el microscopio electrnico es posible observar objetos muy pequeos como los virus que no pueden ser resueltos con el microscopio ptico. En el microscopio ptico en lugar de lentes se emplean campos magnticos que enfocan los haces de electrones.

El Microscopio ptico Compuesto: componentes A continuacin se describen las partes que lo conforman:

Los objetivos: estn localizados en la parte inferior del tubo insertados en una pieza metlica, denominada revlver o portaobjetivos, que permite cambiarlos fcilmente. Estos generan una imagen real, invertida y aumentada, esta imagen intermedia es captada y sufre una nueva ampliacin por el ocular. . Los objetivos ms frecuentes son los de 4X, 10X, 40X y 100X aumentos. Este ltimo de 100x se llama de inmersin ya que para su utilizacin se necesita aplicar aceite de cedro sobre la preparacin. Y se utiliza para observar lminas coloreadas completamente secas. El poder de aumento de cada objetivo se indica en el nmero grabado en la manga del lente. Generalmente el objetivo de 4X se encuentra marcado por un anillo rojo, el de 10X por un anillo de color amarillo, el de 40=x con un anillo de color azul y el de 100X con un anillo de color blanco La abertura numrica se encuentra (A.N.) se encuentra grabada en la manga del objetivo, junto a la indicacin del aumento. 0,30 0,65 1,30 En el objetivo de 10X En el objetivo de 40X En el objetivo de 100X

A medida que aumenta la A.N. disminuyen las dimensiones de la lente frontal, montada en la base del objetivo. La lente del objetivo de 100x tiene el tamao de una cabeza de alfiler es mayor el poder de resolucin. Adems a medida que aumenta A.N. es mayor el poder de resolucin. Cuanto mayor sea el poder de resolucin del objetivo, ser ms clara la imagen y aumentar la capacidad de poner de manifiesto detalles adyacentes muy cercanos, separndolos y aclarndolos. El poder de resolucin mximo de un buen microscopio es

aproximadamente 0,25 nanmetros, el poder de resolucin del ojo humano es de milmetros.

0,25

Los oculares se denominan as porque estn muy cercanos al ojo. Su funcin es la de captar y ampliar la imagen formada en los objetivos. El poder de aumento del ocular se encuentra marcado en el ocular. Un ocular por 4 aumenta 4 veces la imagen que produce el objetivo. Un ocular por 6 la aumenta 6 veces. Un ocular por 10 la aumenta 10 veces Nunca se deben tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, se deben limpiar muy suavemente con un papel de ptica

El tubo ptico: es una cmara oscura unida mediante una cremallera. Tiene el revolver con los objetivos en su parte inferior y los oculares en el extremo superior. El Brazo: es una columna perpendicular al pie. Puede ser arqueado o vertical y une al pie con el tubo.

Platina

Es una plataforma horizontal con un orificio central, sobre el que se coloca la preparacin, que permite el paso de los rayos procedentes de la fuente de iluminacin situada por debajo. Dos pinzas sirven para retener el portaobjetos sobre la platina y un carro con un sistema de cremallera guiado por dos tornillos de desplazamiento que permite mover la preparacin de delante hacia atrs o de izquierda a derecha y viceversa. Est dotado de una escala graduada para medir de forma precisa las observaciones.

El condensador: es un sistema de lentes convergentes situadas bajo la platina, su funcin es la de concentrar la luz generada por la fuente de iluminacin hacia la preparacin.

Diafragma-iris Es una cortinilla que regula la cantidad de luz que entra en el condensador, eliminando los rayos demasiado desviados. Se acciona mediante una perilla. Esta situado debajo de la platina, inmediatamente debajo del condensador. La disminucin del diafragma permite visualizar partes de protozoos u hongos se utiliza en las preparaciones frescas

Tornillo Macromtrico: Se encuentra en la parte inferior del microscopio. Sirve para alejar o acercar el tubo y la platina movindola de arriba hacia abajo y viceversa. Permite un enfoque aproximado o grueso de la muestra Tornillo micromtrico: Generalmente se encuentra incorporado al tornillo macromtrico. Sirve para dar claridad a la imagen al lograr un ajuste fino y preciso, mediante movimiento de la platina hacia arriba y hacia abajo de forma lenta. Ambos tornillos llevan incorporado un mando de bloqueo que fija la platina a una determinada altura. La fuente de iluminacin: se trata de una lmpara halgena de intensidad graduable. Esta situada en el pie del microscopio. Se enciende y se apaga con un interruptor y en su superficie externa puede tener una especie de anillo para colocar filtros que facilitan la visualizacin. Por ltimo definimos el pie o base: sirve como base del microscopio y tiene un peso suficiente para dar estabilidad al aparato. En el se integra la fuente luminosa.

Poderes o capacidades del microscopio

Poder de aumento: Permite magnificar la imagen. Corresponde al aumento (A) dado por la relacin: Tamao de la imagen / tamao del objeto. La ampliacin es igual al producto del aumento del lente ocular por el del objetivo. Cada objetivo y cada ocular tienen grabado el nmero de veces que aumentan la imagen. Si la imagen del objeto, se hace aumentar 40 veces mediante el objetivo y enseguida 10 mediante el ocular, su aumento total ser 10X40= 400

Cmo se calcula el aumento de una muestra? Se multiplica el aumento que seala el ocular por el aumento del objetivo dando como resultado el aumento total de la muestra o nmero de veces en que el objeto se encuentra ampliado con respecto a su tamao original. Aumento total = aumento del ocular X aumento del objetivo

Poder de definicin Es la capacidad del microscopio para formar imgenes ntidas y con contornos definidos

Poder de penetracin o profundidad

Permite visualizar los diferentes planos de una preparacin y est dado por el ajuste de precisin que se logra con el tornillo micromtrico.

Poder de resolucin es la capacidad de presentar dos puntos que se encuentran muy cercanos entre s como separados, lo cual permite observar detalles de los objetos que con el ojo humano no se podran ver. El ojo humano no puede ver separados dos puntos cuando su distancia es menor a una dcima de milmetro. Con el Microscopio ptico, el poder separador mximo es de 0,2 dcimas de micra. Mejora la visin unas 500 veces con relacin a la del ojo humano

En la imagen se observan espacios blancos entre la tinta negra que a simple vista no seran vistos

En la imagen se observan varias fibras de hilo que a simple vista no seran vistos

El poder de resolucin depende de la longitud de onda ( ) y de la apertura numrica del objetivo (A.N.)

El Poder de resolucin esta dado por la formula: Poder de resolucin= 2x A.N. A.N: relaciona el ngulo de apertura de los rayos de luz, que provienen de la muestra, con el ndice de refraccin.

Principios generales de microscopa Principios pticos Una lente sencilla (biconvexa) posee dos focos, uno a cada lado de la lente (F y F). Cuando los rayos luminosos pasan a travs de la lente se concentran en el foco. La distancia focal es la distancia entre el centro de la lente y el punto en donde convergen los rayos. La distancia focal de una lente depende del ndice de refraccin del material del cual est hecha, y del medio que envuelve la lente. Por eso, es diferente la distancia focal de una lente en el agua, que esta misma en el aire. Como tambin es diferente la distancia focal de una lente de vidrio en comparacin con una construida en plstico.

http://micro.magnet.fsu.edu/primer/java/lenses/simplethinlens/index.html

Cuanto ms pequea es la distancia focal de una lente tanto mayor es su aumento. Si el objeto se coloca a distancia mayor del foco, se obtiene una imagen real invertida, mientras que si el objeto se localiza a una distancia menor del foco la imagen ser virtual. A medida que se aleja el objeto del foco, la imagen se percibe ms pequea.

La distancia de trabajo focal de un objetivo, es el espacio que existe entre la superficie de la lente del objetivo y la laminilla, una vez se encuentre enfocada la preparacin. A mayor aumento del objetivo la distancia de trabajo disminuye. Como determinar la posicin de los objetos observados Los objetos que se observan en el campo microscpico se pueden localizar en relacin con las manecillas del reloj. Los objetos que aparecen en la parte inferior del fondo del campo microscpico se encuentran realmente en la parte superior. Los objetos en el lado izquierdo del campo microscpico se encuentran realmente al lado derecho. Desplazamiento del objeto Si se mueve el portaobjetos hacia la derecha, el objeto examinado se desplazar hacia la izquierda. Si se mueve el portaobjetos hacia usted, el objeto examinado se alejar.

Formacin de la imagen real invertida

http://www.edumedia-sciences.com/a301_l3-microscope.html Las imgenes se observan invertidas por las lentes. Refraccin de la luz

La distancia focal de una lente depende del ndice de refraccin del material del cual esta hecha y del medio que envuelve la lente. Cuando los rayos de luz se mueven en un medio homogneo como el aire, se propagan en lnea recta, pero cuando caen sobre la superficie de un medio de diferente densidad, a la del medio en el cual se vena propagando, cambian de direccin y de velocidad a estos cambios se les conoce como refraccin de la luz. Los rayos de luz procedentes de los objetos sumergidos en el agua se desvan al atravesar dos medios de diferente densidad (agua-aire), originando este efecto de refraccin. Por ejemplo si introducimos un lpiz en un vaso con agua, el lpiz se ver cortado al pasar del agua al aire. En la prctica de microscopa encontramos diferentes medios: aire, agua aceite de inmersin y vidrio, cuyos ndices de refraccin son 1.0, 1.33, 1.51, .1.54 respectivamente. Al observar una muestra a travs del microscopio, los rayos de luz tienen que atravesar estos medios y son refractados cambiando su direccin.

Al aplicar el aceite inmersin se entre el preparado y la lente, aceite de inmersin, que tiene un ndice de refraccin igual al de la lente y evita la refraccin de los rayos luminosos. Campo de Visin

El campo de visin de un microscopio es la zona preparacin bajo un determinado aumento. Para microscopio, se debe usar una unidad llamada micra. otras palabras, hay 1000 micras en un milmetro. medida.

circular que se observa al mirar la medir el campo de visin de un Una micra equivale a 0,0001 mm; en El dimetro de este campo es su

Para calcular el dimetro del campo de visin para un determinado aumento hay que seguir los siguientes pasos:

a) Recortar un cuadrado de 1 cm de lado de papel milimetrado. b) Ponerlo sobre la abertura central del portaobjetos C) Observando por el ocular y con el objetivo de 4X, mover la muestra hasta lograr que la lnea 0 mm quede en el borde izquierdo del campo visual

d) Enfocar con el objetivo de menor aumento 4X hasta que se vea con claridad. Enfocar la preparacin quiere decir situarla a la distancia del objetivo que permite su observacin ntida. Esta distancia s e conoce como distancia de trabajo y es tanto menor cuanto mayor es el poder de aumento del objetivo e) Medir el campo visual haciendo coincidir una de las lneas del papel milimetrado con el borde del campo de visin.

f) Contar el nmero de milmetros que se ven (recuerde que la distancia entre dos lneas es un milmetro) y estimar aproximadamente la fraccin sobrante, si la hay. El resultado ser el dimetro del campo visual para ese aumento (objetivo x ocular). g) Si queremos calcular el dimetro del campo de visin para aumentos mayores, hay que tener en cuenta que cuanto mayor sea el aumento, el campo ser menor, es decir, se ver menos de la muestra que estemos observando. De forma que, si el aumento es el doble, el campo ser la mitad, si el aumento es el triple, el dimetro ser la tercera parte, etc. (inversamente proporcionales). Por tanto, bastar con realizar un sencillo clculo matemtico para saber el nuevo dimetro.

As se puede calcular los dimetros de objetos microscpicos, clulas, amibas, vistos. Recuerde que aunque la escala est marcando mm usted lo leer en micras. Medida en mm (escala del portaobjetos) 1mm 0.1 mm 0.01mm

Equivalencia en m 1000 m 100 m 10 m

Tamao de las marcas (divisiones) grandes medianas ms pequeas

Preparaciones Las preparaciones pueden ser de varios tipos: a. Frescas: Son montajes generalmente hmedos. La muestra se observa sin modificar, diluida o concentrada. Permite observar la movilidad de los microorganismos

vivos. Se utiliza tambin para observar procesos como la mitosis, meiosis, la formacin d esporas. Para realizar un montaje hmedo se debe verter una gota de agua o del lquido que contiene los microorganismos en el centro de una lmina portaobjetos y cubrirlo con una laminilla cubreobjetos. Para evitar la evaporacin se puede sellar el espacio que hay entre el portaobjetos y el cubreobjetos con vaselina o alguna sustancia similar. Frescas ligeramente modificadas: Las muestras se pueden diluir con agua o con agua con sal, esta ltima evita que la presin osmtica del medio no sea demasiado baja. Se puede aplicar un colorante o reactivo para observar mejor las estructuras. Fijadas y teidas: Se coloca una suspensin homognea de microorganismos en b. una gota de agua sobre el portaobjetos y se fija (mediante calor o agentes qumicos) y despus se tien mediante diferentes tcnicas. Estas preparaciones se observan sin cubreobjetos y, habitualmente, con objetivos de inmersin.

Manejo del Microscopio

Para realizar las preparaciones se deben alistar los siguientes elementos. MATERIALES QUE DEBEN LLEVAR Bata Blanca, Guantes. Papel absorbente, Paos de cocina Jabn Tapabocas. Papel y lpiz para tomar apuntes Resueltas las preguntas sobre la observacin de videos y las que se solicite en cada prctica Agua estancada o de solucin de tierra de infusorios Papel milimetrado Hilos de colores Tela de cuadros 2 centmetros Recorte de peridico con la letra asimtrica: Pude ser la letra e o la letra a Lminas portaobjetos, Laminillas (por grupo) papel absorbente MATERIALES QUE LE SERN SUMINISTRADOS EN EL LABORATORIO Lamina con extendido coloreada Microscopio Aceite de inmersin Papel de Arroz o de ptica Alcohol isoproplico Realizacin de Montaje hmedo Tome con una pipeta agua estancada o de solucin de tierra de infusorios Coloque la gota de agua estancada o de solucin de tierra de infusorios sobre una lmina porta-objeto Tome una laminilla cubreobjetos, en posicin oblicua, (45 grados) y apoyando una arista sobre la lmina al lado de la gota, djela caer suavemente. Manejo del microscopio Encienda el microscopio Coloque el objetivo de menor aumento 4X Baje la platina completamente girando el tornillo macromtrico. Si el microscopio se recogi correctamente en el uso anterior, ya debera estar en esas condiciones Tome la lmina con la preparacin fjese que est completamente seca en la parte inferior Coloque la lmina con la preparacin sobre la platina sujetndola con las pinzas. Procure que la preparacin quede centrada, girando el tornillo para desplazamiento del carro mvil

Gire el tornillo macromtrico en sentido contrario a las agujas del reloj para subir la platina hasta el tope. Debe hacerlo mirando directamente y no a travs del ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparacin. Cierre o abra el diafragma hasta una posicin intermedia, accionando su perilla en sentido contrario a las agujas del reloj para que la luz no sea ni muy brillante ni demasiado tenue. Inicie la observacin con el objetivo de 4X. Mirando a travs de los oculares, separe lentamente el objetivo de la preparacin con el tornillo macromtrico en sentido de las agujas del reloj. Hasta lograr observar la imagen Cuando se observe algo ntida la muestra, gire el tornillo micromtrico hasta obtener un enfoque fino Gire el revolver Coloque el objetivo de 10X Visualice con el objetivo de 10X y detalle las estructuras Gire el revolver y visualice con el objetivo de 40X enfoque con el tornillo micromtrico y detalle las estructuras Detalle como el campo se reduce y el alga y el protozoo se observan mejor. Observacin con el objetivo de inmersin 100X Se utiliza para la observacin de muestras fijadas, no para muestras frescas Coloque el objetivo de inmersin de manera que el orificio de la platina quede entre el objetivo de 100X y el de 40X Suba totalmente el condensador para ver claramente el crculo de luz que nos indica la zona que se va a visualizar y donde habr que aplicar el aceite Coloque una gota de aceite de inmersin sobre la preparacin en el crculo de luz Coloque una lmina coloreada sobre la platina Ubique el objetivo el objetivo de 100x Suba la platina lentamente hasta que la lente toque la gota de aceite Observe la imagen con aumento de 100X En esta preparacin se muestran eosinfilos un tipo de clulas sanguneas coloreados con colorante de Wright Limpie el objetivo de inmersin con un papel especial para ptica y alcohol isoproplico Deje el objetivo de menor aumento en posicin de trabajo En la siguiente direccin encuentra un excelente ejercicio en lnea sobre las partes del microscopio y su funcin. http://personales.ya.com/geopal/g-b_1bach/ejercicios/act10tema6.htm

Cuestionario a resolver para el pre-informe

PROCEDIMIENTO

2.1 En la siguiente representacin grfica de un microscopio, reconozca y ubique cada una de las siguientes partes y su funcin Tubo Oculares

Brazo Objetivos de 4x, 10x, 40x y 100x Platina Condensador Fuente de iluminacin Tornillo macromtrico y micromtrico Pie

2.2 Clasifique en el cuadro las partes mecnicas y pticas del microscopio. Partes mecnicas Partes pticas

2.3 Qu es un montaje hmedo. 2.4 Defina los tipos de montaje que se pueden hacer en el laboratorio. 2.5 Describa los pasos para la elaboracin de un montaje hmedo. 2.6 Qu debe hacerse para lograr una iluminacin adecuada? 2.7 Cmo se enfoca el microscopio al iniciar la observacin? 2.8 Al mover el portaobjetos de derecha a izquierda a qu lado se mueve la imagen?

2.9 Con qu objetivo se logra un campo de visin ms grande? 2.10 Con qu objetivo se observan mejor los detalles de una imagen? 2.11 Con el objetivo de mayor aumento se necesita menor o mayor iluminacin de la que se necesita con el de menor aumento? 2.12 Qu funcin cumple el aceite de inmersin? Con qu objetivo se utiliza? 2.13 Cul es el poder de aumento cuando se estn utilizando cada uno de los objetivos de 4X, 10X, 40X y el ocular de 10X? 2.14 Cules son las propiedades del microscopio? 2.15 Defina los siguientes poderes o capacidades del microscopio a. b. c. d. Poder Poder Poder Poder de de de de Aumento definicin Resolucin Penetracin de Foco o Campo

Preguntas adicionales para el informe final 2.15 Observe cul es el valor de los oculares_________________ 2.16 Observe cual es el valor de cada uno de los objetivos_____,______,________,______ 2.17 Calcule el aumento logrado para cada objeto observado en su prctica de laboratorio (Al multiplicar el valor del ocular por el valor del objetivo se obtiene el aumento del tamao del objeto que observamos).

3. Uso del microscopio Organizacin del proceso paso a paso

Tome una gota de la muestra de agua estancada

Colquela sobre una lmina portaobjetos, y cbrala con una laminilla.

Retire el exceso de agua por los bordes, usando papel absorbente.

Dibuje sus observaciones anotando el aumento utilizado

Observe el montaje realizado al microscopio en 4x, 10x y 40x.

3.1. De la muestra de agua estancada tome una gota y colquela en una lmina portaobjetos, cubra con una laminilla. 3.2 Retire el exceso de agua por los bordes usando papel absorbente. 3.3 Observe el montaje realizado al microscopio con aumentos de 4x, 10x y 40x. En el informe debe incluirse el siguiente cuadro que debe registrar las observaciones realizadas. OBJETO OBSERVADO Agua estancada AUMENTO UTILIZADO 4X 10X 40X DIBUJO ANLISIS Y CONCLUSIONES

3.4 Qu organismos pueden observarse en la gota de agua estancada? 3.5 Son todos de igual tamao y forma? 3.6 Se observan organismos mviles o estticos? 4. Comprobacin de los poderes o capacidades del microscopio ptico

4.1 Realice un montaje hmedo con la letra asimtrica y obsrvela al microscopio siguiendo los pasos anteriores. 4.2 Calcule el aumento del tamao del objeto observado para cada objetivo del microscopio con el cual le correspondi trabajar. 4.3 Cmo se manifiesta el poder de aumento al observar la letra?

5. Realice un montaje hmedo con un centmetro cuadrado de papel milimetrado y obsrvelo al microscopio 5.1 Calcule el dimetro del campo de visin para un aumento de 4x en un cuadrado de 1 cm de lado de papel milimetrado. Para calcular el dimetro del campo de visin para un determinado aumento hay que seguir los siguientes pasos:

a) Recortar un cuadrado de 1 cm de lado de papel milimetrado. b) Ponerlo sobre la abertura central del portaobjetos C) Observando por el ocular y con el objetivo de 4X, mover la muestra hasta lograr que la lnea 0 mm quede en el borde izquierdo del campo visual

d) Enfocar con el objetivo de menor aumento 4X hasta que se vea con claridad. Enfocar la preparacin quiere decir situarla a la distancia del objetivo que permite su observacin ntida. Esta distancia s e conoce como distancia de trabajo y es tanto menor cuanto mayor es el poder de aumento del objetivo e) Medir el campo visual haciendo coincidir una de las lneas del papel milimetrado con el borde del campo de visin.

f) Contar el nmero de milmetros que se ven (recuerde que la distancia entre dos lneas es un milmetro) y estimar aproximadamente la fraccin sobrante, si la hay. El resultado ser el dimetro del campo visual para ese aumento (objetivo x ocular). g) Si queremos calcular el dimetro del campo de visin para aumentos mayores, hay que tener en cuenta que cuanto mayor sea el aumento, el campo ser menor, es decir, se ver menos de la muestra que estemos observando. De forma que, si el aumento es el doble, el campo ser la mitad, si el aumento es el triple, el dimetro ser la tercera parte, etc. (inversamente proporcionales). Por tanto, bastar con realizar un sencillo clculo matemtico para saber el nuevo dimetro. As se puede calcular los dimetros de objetos microscpicos, clulas, amibas, vistos. 5.2 Calcule el dimetro del campo de visin para cuadrado de 1 cm de lado de papel milimetrado. aumentos de 10X, 40X del mismo

5.3 Compare la anchura del campo visual con cada uno de los tres objetivos 5.4 Con cul objetivo el campo de visin es mayor con el de mayor o menor aumento? 6. Realice un montaje hmedo con tres hebras de hilo superpuestas y obsrvelas al microscopio 6.1 Para las muestras de la letra, la hebra de hilo observadas determine: a. b. c. d. Cmo Cmo Cmo Cmo se se se se manifiesta manifiesta manifiesta manifiesta el el el el poder poder poder poder de de de de resolucin? aumento? definicin? penetracin o profundidad?

6.2 Cul es la utilidad del microscopio? 6.3 En qu montaje se observ mejor el poder de penetracin? 7. Comprobacin de los principios pticos del microscopio Despus de observar la letra asimtrica, Conteste las siguientes preguntas:

7.1 Al observar la letra asimtrica: Se ve invertida, o en la misma posicin en que estara si se viera a simple vista? Parece como si se viera por un espejo? 7.2 Al mover la preparacin hacia la derecha. Hacia dnde se mueve la imagen? 7.3 Al alejara el portaobjeto o la muestra de usted hacia donde se nueve la imagen? 7.4 Si la distancia focal es mayor el tamao del objeto es mayor o menor?

8. Tome la lmina con el extendido coloreado y obsrvela en el microscopio enfocando primero con el objetivo de 10x, luego ponga una gota de aceite de inmersin sobre el extendido y ubique el objetivo de 100x. Describa los detalles observados con cada objetivo. Al finalizar el trabajo deje el microscopio en su correcta posicin, limpie los objetivos, colquele la funda y guarde en su puesto. Al terminar de desarrollar las prcticas usted debe ingresar al foro colaborativo del curso y participar con sus 4 compaeros de grupo colaborativo en la elaboracin del informe de laboratorio respondiendo a las anteriores preguntas compare las respuestas de los 5 integrantes y consolidelas en un solo documento que enviarn al foro para la retroalimentacin y calificacin por parte de su tutor.

Laboratorio 3: La Clula
vdeo Clula parte 1 Vdeo Clula parte 2 OBJETIVOS: Describir las diferentes formas y tamaos de las clulas Identificar las diferentes estructuras y organelos que posee una clula, con base en la capacidad de ampliacin del microscopio ptico. Describir las diferentes formas y tamaos de una clula Sealar las diferencias fundamentales entre una clula animal y una vegetal Reconocer que una clula puede constituir un organismo.

MATERIALES QUE DEBEN LLEVAR: Bulbo de cebolla Allium cepa Papa Tomate Hojas de Elodea Laminas portaobjetos y Laminillas

Cuchilla o bistur Pinza Tijeras pequeas hisopos MATERIALES QUE LE SERN SUMINISTRADOS EN EL LABORATORIO: 1 caja de petri Aguja o asa recta Algodn Alcohol Lancetas Lugol Solucin salina Aceto carmn Azul de metileno Safranina Colorante de Wright Microscopio PROCEDIMIENTO: Observacin de tejido epidermal de cebolla 1. Tome la cebolla y sobre la epidermis de la misma utilizando la cuchilla, haga un corte

2. Levante suavemente con la pinza una capa delgada y transparente de la parte interna, ste es el tejido epidermal. 3. Extindalo sin invertirlo sobre una lmina porta objetos. 4. Coloque una gota de lugol sobre el tejido epidermal. O si prefiere adicione una gota de agua. 5. Deje actuar el colorante lugol durante 5 minutos. 6. Acerque una laminilla, en posicin oblicua, y apoyando una arista sobre la lmina al lado de la gota, djela caer suavemente sobre la gota. 7. Enseguida proceda a la observacin de la preparacin con pequeo aumento de 10x. Anote sus observaciones 8. A continuacin revise la preparacin con el objetivo de 40x .Anote sus observaciones Observacin de tejido parenquimatoso en un corte transversal de papa: Elabore un montaje para observacin del tejido parenquimatoso en un corte transversal de papa: 1. Tome el bistur y haga un corte transversal de la papa, este corte debe ser tan fino que la apariencia de la porcin que obtenga sea transparente.

2. En una caja de petri con agua, enjuague el corte para sacar el exceso de almidn, contenido en las clulas de los tejidos de la papa. 3. Elabore un montaje hmedo como se indic anteriormente. 4. Observe con el objetivo de 10x. Anote sus observaciones

5. Observe el montaje con el objetivo de 40x Observacin de tejido epidermal y parnquima cloroflico en hoja de Elodea Para observacin de tejido epidermal y parnquima cloroflico utilice una hoja de Elodea: 1. Tome con la pinza una ramita de Elodea y corte con las tijeras una hojita. 2. Extindala sin invertirla sobre una lmina portaobjetos, adicione una gota de agua y cbrala con una laminilla. 3. Observe detenidamente a travs del microscopio con aumento 10x, 40x y 100x. Anote sus observaciones

Observacin de cromoplastos en pulpa de tomate Para continuar realice un montaje con pulpa de tomate e identifique los cromoplastos: 1. Con una hoja de afeitar o bistur, haga una incisin y separe la cscara. 2. Extraiga una pequea porcin de pulpa con el extremo de una aguja y esprzalo sobre un porta objetos seco. No adicione agua. 3. Coloque encima un cubreobjetos y comprima suavemente con los dedos hasta obtener un completo aplastamiento del fragmento de pulpa de tomate. 4. Identifique las clulas con el objetivo de 10X 5. Seleccione el mejor grupo de clulas y luego pase al objetivo de 40x. Anote sus observaciones Observacin de clulas escamosas epiteliales 1. Coloque una pequea gota de solucin salina en el centro del portaobjetos. 2. 3. 4. Con un palillo raspe suavemente el interior de su mejilla, de abajo hacia arriba. Coloque el producto de este raspado en la gota de solucin salina. Coloree con una gota de acetocarmin, azul de metileno o safranina. 100x e

6. Coloque el cubre objetos y observe al microscopio con objetivo de 40x y identifique las clulas de forma irregular

Anote sus observaciones Observacin de clulas sanguneas A continuacin realice un extendido para observacin de clulas sanguneas: 1. Desinfecte con un algodn humedecido en alcohol la punta del dedo anular o ndice, deje secar el alcohol y con la lanceta, haga una puncin en la yema del dedo. 2. Coloque una pequea gota en una lmina portaobjetos limpia y seca. 3. Coloque otra lmina en ngulo agudo sobre la primera, acrquela a la sangre y deslice suavemente en forma continua hasta formar una capa o frotis delgado. 4. Deje secar la preparacin al medio ambiente. 5. Una vez seca la lamina aplique sobre el frotis el colorante de Wright y djelo actuar durante cuatro minutos. Con este procedimiento el colorante fijar la preparacin. 6. Lave el exceso de colorante con agua de la llave y deje secar la lmina verticalmente.

7. Observe al microscopio con el objetivo de pequeo y mediano aumento e identifique los glbulos rojos, leucocitos y plaquetas. 8. Posteriormente observe la preparacin con el objetivo de 100X y detalle la forma de los eritrocitos, plaquetas y neutro filos. Anote sus observaciones Formato de observaciones y datos importantes. Epidermis de Cebolla. Dibuje lo que observa y describa cmo son las clulas 10X sin colorante 10 X con colorante

40 X sin colorante

40 x con colorante

Parnquima de papa. Dibuje lo que observa y describa cmo son las clulas 10X sin colorante 10 X con colorante

40 X sin colorante

40 x con colorante

Epidermis y parnquima de Elodea. Dibuje lo que observa y describa cmo son las clulas 10X 40 X

Cromoplastos en pulpa de tomate. Dibuje lo que observa y describa cmo son las clulas 10X 40 X

Clulas escamosas epiteliales. Dibuje lo que observa y describa cmo son las clulas 40X 100 X

Clulas sanguneas Dibuje lo que observa y describa cmo son las clulas 40X 100 X

Conclusiones: Deben estar relacionadas con la diferencia entre las clulas epidrmicas vegetales y parenquimatosas vegetales; diferencias entre las clulas animales y vegetales, (forma tamao, distribucin, entre otros)

Laboratorio 4: Mitosis y Meiosis OBJETIVOS: Manejar correctamente los materiales y reactivos especficos de la prctica. Identificar cada uno de los periodos que comprende el ciclo celular Relacionar cada cambio presente en las clulas meristemticas, con las diferentes fases de la mitosis. Reconocer los procesos de la meiosis con base en el material suministrado.

MATERIALES QUE DEBEN LLEVAR Bulbo de cebolla Allium cepa Bistur Pinzas vaso desechable Palillos grandes Tijeras Papel de filtro

Portaobjetos Cubreobjetos Lanceta Esmalte transparente MATERIALES QUE LE SERN SUMINISTRADOS EN EL LABORATORIO Pipeta Pasteur, Vaso de precipitado Cubeta de diseccin Aceto orceina Eosina Metanol Bistur PROCEDIMIENTO: Para el desarrollo de esta practica utilice bulbos de cebolla, Allium cepa y realice preparaciones con la raz de material fijado y teido, una vez obtenidos los extendidos de clulas obsrvelos al microscopio ptico. 1. Con ayuda de una pinza retire la capa externa marronacea o roscea y lave con abundante agua, esto se realiza para eliminar restos de sustancias con las que frecuentemente han sido tratadas para inhibir o retardar la germinacin de las raicillas. 2. Llene un vaso de precipitados con agua y coloque un bulbo de cebolla sujeto con dos o tres palillos de manera que la parte inferior quede inmersa en el agua. 3. Pngalo a germinar a 25C o a temperatura ambiente durante 3 das, al cabo de estos aparecern numerosas raicillas en crecimiento de unos 3 o 4 cm. de longitud. 4. Revise diariamente y procure que la corona no se deseque para lo cual es necesario rellenar con agua cada 24 horas. 5. Cuando las races tengan entre 0.5 y 1 cm de longitud, realice cortes de raz de aproximadamente 2 3 mm a partir del pice. 6. colquelas en una lmina portaobjetos. Adiciona una gota del colorante aceto orceina o eosina. 12. Coloque el cubreobjetos con mucho cuidado sobre la raz. Con ayuda de la punta de una lanceta, de unos golpecitos sobre el cubre objetos sin romperlo, de modo que la raz quede extendida. 13. Use papel de filtro para retirar el exceso de colorante realice una suave presin, evitando que l cubre objetos resbale. Si la preparacin est bien asentada no hay peligro de rotura por mucha presin que se realice. 14. Selle todos los bordes del cubre objetos con esmalte transparente, para evitar que se seque y de esta manera conservar la preparacin durante varios das. 15. Coloque la preparacin al microscopio e inicie la observacin con el objetivo de 10x e identifique las clulas.

16. Cambie al objetivo de 40X para detallar las clulas. Observe los ncleos y cromosomas en color rosceo morado. 17. Ubique el objetivo de 100 x y anote sus observaciones anotando las diferencias en cada uno de los aumentos mencionados. 18. Trate de observar detenidamente las preparaciones y distinga clulas en interfase y clulas en divisin y dentro de estas, las diferentes etapas de la mitosis Realice dibujos de lo observado. Para la observacin de las diferentes fases de la meiosis trabaje con un pez macho: 1. Introduzca el pez en una cubeta de diseccin y realice un corte rectangular desde el ano hasta el oprculo y observe la musculatura. 2. Retire la musculatura y de esta manera quedan a la vista las vsceras del pez. 3. Con la pinza tome los testculos los cuales aparecen como cintas alargadas de color blanco situadas en la parte superior de la cavidad abdominal desde la regin occipital hasta el poro genital. 4. Coloque los testculos sobre una lmina portaobjetos. 5. Coloque encima una laminilla, realice una suave presin y observe al microscopio con objetivo de menor y mayor aumento. 6. Anote sus observaciones. Observaciones Coloque la preparacin al microscopio e inicie la observacin con el objetivo de 10x e identifique las clulas. Escriba alguna anotacin importante

Cambie al objetivo de 40X para detallar las clulas. Observe los ncleos y cromosomas en color rosceo morado. Dibujlos

Escriba alguna anotacin importante

Ubique el objetivo de mencionados.

100 x

y anote las diferencias en cada uno de los aumentos

Trate de observar detenidamente las preparaciones y distinga clulas en interfase y clulas en divisin y dentro de estas, las diferentes etapas de la mitosis Realice dibujos de las fases que distinga, tenga en cuenta la posicin de los cromosomas para identificar las fases.

Conclusiones. REFERIDAS A LOS OBJETIVOS

Laboratorio 5: Diversidad de Microorganismos Descripcin A travs de esta prctica el estudiante podr realizar una descripcin macroscpica de las colonias bacterianas y de hongos, de microorganismos como protozoos y microalgas, adems de adquirir destrezas en tcnicas de tincin. OBJETIVOS: Reconocer en placas de cultivo diferentes tipos de microorganismos, en especial Colonias de bacterias y hongos. Conocer y aplicar la tcnica de tincin de Gram Identificar bacterias Gram positivas y Gram negativas Observar microscpicamente bacterias con endosporas (Bacillus) Observar microscpicamente hongos. Observar microscpicamente levaduras. Observar microorganismos de fermentacin cido lctica y fermentacin alcohlica a partir del kumis o yogurt. Observar protozoarios y algas en muestras de agua

MATERIAL SUMINISTRADO Cultivos de diversos hongos y bacterias en cajas de petri Cultivo de Bacillus Levadura de panadera Solucin salina Agua destilada Coloracin de Gram (cristal violeta, lugol, alcohol acetona y safranina) Verde de Malaquita Safranina 0.5% Lactofenol Azul de Metileno Rojo neutro Alcohol o Metanol Aceite de inmersin Mechero Asa recta y de argolla Papel de filtro Tubo de ensayo Papel de filtro Tubo de ensayo Microscopio Varilla de vidrio MATERIAL QUE DEBEN LLEVAR Yogur casero o probitico Agua estancada Agua azucarada, Tajada de pan

PROCEDIMIENTO: Entre los principales grupos de microorganismos se encuentran: bacterias, hongos, algas y protozoarios. Observacin microscpica de colonias 1. realice una descripcin macroscpica de las colonias bacterianas y de hongos entregadas en las cajas de Petri. Haga un cuadro donde describa la forma (puntiforme, circular, rizoide, irregular y filamentosa), el borde (entero, ondulado o filamentoso), la elevacin (plana, elevada, convexa, crateriforme y acuminada) y la superficie (lisa o rugosa, mate o brillante, seca o cremosa, invasiva o superficial). COLORACION DE GRAM A partir de una de las colonias de los cultivos dados realice un frotis de la siguiente manera: 1. Tome una lamina portaobjetos limpia y en ella coloque una gota de solucin salina. 2. Con un asa previamente esterilizada a la llama del mechero, obtenga una pequea muestra de las colonias observadas. Mzclela en la gota de solucin salina que coloco en el portaobjetos. 3. Djela secar al aire libre y fjela pasndola por la llama del mechero. Posteriormente proceda a colorear con la tincin de gram de la siguiente manera: 1. Cubra la preparacin con cristal violeta y djela corriente. actuar por 1 minuto. Lave con agua

2. Cubra la preparacin con lugol y djelo actuar por 1 minuto. Lave con agua corriente. 3. Agregue alcohol acetona y djelo actuar por 5 segundos. Lave con agua corriente. 4. Adicione safranina y djela actuar por 30 segundos. Lave con agua corriente y ponga a secar la lmina. 5. Ubique la lmina en el microscopio, localice las bacterias con el objetivo de menor aumento y observe en detalle a mayor aumento. 6. Identifique las clulas observadas. Anote sus observaciones. OBSERVACION DE ESPORAS A partir del cultivo en caja de petri marcado como microorganismo. Bacillus, prepare un extendido del

1. Fije por calor y cubra todo el portaobjetos con una solucin de verde de Malaquita. 2. Caliente hasta emisin de vapores y siga dicho calentamiento durante 3 minutos.

3. Lave con agua y cubra con solucin de safranina. Deje actuar 30 segundos. Lave con agua y deje secar la lmina. 4. Enfoque con el objetivo de inmersin y observe los bacilos y en su interior las esporas ubicadas en un extremo. Anote sus observaciones. BACTERIAS DE LA CAVIDAD BUCAL 1. Prepare una lmina portaobjetos limpia y sin grasa. 2. Tome un escotilln desechable, pselo por el borde de la enca en la parte que hace contacto con los dientes. 3. La muestra extrada con el escotilln colquela sobre una lmina portaobjetos. 4. Deje secar por s sola la lmina durante unos minutos con el fin de definir el frotis. 5. Pase lentamente el portaobjetos a travs de la llama del mechero, con esto se fija el frotis. 6. Deje enfriar y coloree con la tincin de Gram como se indic anteriormente. 7. Deje secar la lmina y ubique las clulas con el observe con el objetivo de inmersin. objetivo de menor aumento y luego

8. Tenga en cuenta que las bacterias Gram positivas toman coloracin violeta y las Gram negativas coloracin roja. Anote sus observaciones. OBSERVACION DE MOHOS 1. Prepare una solucin de agua azucarada y agregue 20 gotas de esta a una tajada de pan, djela por espacio de media hora al aire libre. 2. Almacnela en una bolsa plstica y cirrela. Gurdela en un lugar oscuro a 30C y obsrvela diariamente. 3. Cuando el pan est enmohecido, coloque solucin de lactfenol. en un portaobjetos una pequea gota de

4. Luego con un trozo de cinta adhesiva transparente de aproximadamente 2 cm toque la superficie del pan enmohecido. 5. Pegue la cinta adhesiva sobre la gota del portaobjetos. Elimine el colorante sobrante con un papel de filtro. 6. Observe al microscopio con objetivo de 40X e identifique el micelio y las hifas. El procedimiento anterior tambin puede hacerlo con frutas u hortalizas daadas que presenten en su superficie mohos. Anote sus observaciones.

OBSERVACION DE LEVADURAS 1. Tome un poco de levadura de panadera y colquela contenga agua con azcar. en un tubo de ensayo que

2. Incube a 37C durante 15 minutos esto producir el desarrollo de las levaduras. 3. Con una varilla de vidrio tome portaobjetos. Deje secar al aire una gota del cultivo anterior y extindala en el

4. Adicione dos gotas de azul de metileno y deje actuar durante tres minutos 5. Coloque una laminilla y elimine el exceso de colorante con papel de filtro. 6. Observe al microscopio e identifique las levaduras por su forma ovalada. Observe que algunas presentan gemaciones. Anote sus observaciones. BACTERIAS DEL YOGUR 1. Tome una lmina portaobjetos y en ella coloque una gota de agua destilada. 2. Con un asa de argolla, obtenga una gota de yogur y mzclela con la gota de agua colocada en el portaobjetos. 3. Deje secar completamente la lmina. Psela 3 veces por la llama del mechero. Tenga cuidado de no sobre calentar la muestra. 4. Cubra la preparacin con alcohol o metanol por unos segundos para eliminar la parte grasa. 5. Escurra el alcohol y deje secar al aire. Luego cubra el extendido con azul de metileno durante 2 minutos. Lave el exceso de colorante y deje secar. 6. Enfoque el microscopio con el objetivo de mayor aumento e identifique los estreptococos y los lactobacilos. Anote sus observaciones. BACTERIAS DEL SUELO 1. Entierre horizontalmente un portaobjetos djela all durante 5 das. en la tierra de una maceta o de un jardn,

2. Transcurrido este tiempo saque la lamina y fjela pasndola tres veces por la llama del mechero. 3. Limpie los bordes del portaobjetos y la parte que no va a teir. 4. Luego coloree la lamina con safranina al 0.5% durante 1 minuto. Lave el exceso de colorante y deje secar. 5. Observe al microscopio con el objetivo de mayor aumento y anote sus observaciones.

ALGAS Y PROTOZOOS 1. Tome una muestra de agua estancada con un cuentagotas y depostela en el centro de un portaobjetos. Coloque un cubreobjetos. 2. Observe la preparacin al microscopio. Mueva lentamente la preparacin, e identifique las algas y los protozoos. 3. Aada unas gotas de rojo neutro por el borde del cubre para que penetre en la preparacin y puedas ver los microorganismos, que por su transparencia son difciles de observar. 4. Anote sus observaciones. CONTENIDO DEL INFORME: portada objetivos diligenciamiento de los formatos para cada uno de los diagramas: FORMATO #1 bacterias tincin Enfoque 40X Enfoque 100X forma Gran (-) Gram (-) Observaciones

FORMATO #2 hongos tincin Enfoque 40X Enfoque 100X Estructuras nombre Observaciones

FORMATO #3 levaduras tincin Enfoque 40X Enfoque 100X Reproduccin Observaciones

(Utilice lpices de colores) Anlisis de resultados conclusiones

bibliografa

Laboratorio 6: Tejidos Vegetales Laboratorio 6: Tejidos Vegetales Vdeo: tejidos vegetales Descripcin Esta prctica permite a los estudiantes comprobar la diversidad y especuializacin de los tejidos vegetales , adems de adquirir la habilidad para realizar cortes a mano alzada

OBJETIVOS: Comprobar la diversidad y especializacin de las clulas vegetales y sus agrupaciones en tejidos. Adquirir habilidad en la elaboracin de cortes a mano alzada y en coloracin Agudizar el sentido de la observacin de las estructuras vegetales, aspecto importante para comprender la morfologa vegetal.

MATERIALES QUE DEBEN LLEVAR Hoja de lirio Hoja de olivo Hoja de Elodea Rama de hiedra Bulbo de cebolla Tomate Papa Pera Races de cebolla Lpiz de madera de cedro Bistur o cuchilla Pinza Lminas portaobjetos y Laminillas MATERIAL SUMINISTRADO Fluoroglucina Acido clorhdrico Verde brillante Microscopio

PROCEDIMIENTO: En esta prctica vegetales. observe a travs del microscopio la morfologa de los distintos tejidos

TEJIDO PROTECTOR 1. Tome una hoja de lirio y con un bistur haga una pequea incisin en el limbo 2. Con ayuda de una pinza levante la capa externa para obtener una lmina fina. 3. Coloque la lmina fina obtenida en el portaobjetos y agregue una gota agua. y 40x. Identifique los ostiolos y los

4. Enfoque al microscopio con objetivo de 10x cloroplastos. Anote sus observaciones.

Observe otro ejemplo de tejido epidrmico realizando un montaje con cebolla como se explico en la prctica de la clula. Observe al microscopio con el objetivo de menor aumento e identifique clulas epiteliales. Con el objetivo 40X identifique los nucleolos. Otro ejemplo de tejido protector puede observarlo en la hoja de olivo. Raspe el envs de una hoja de olivo. Coloque el raspado en una lmina y adicione una gota de agua. Observe los pelos escamiformes con forma de sombrilla. Anote sus observaciones la forma de las

TEJIDO PARENQUIMTICO DE ALMACENAMIENTO. Realice un montaje con pulpa de tomate como se explic en la prctica Observe al microscopio y anote sus observaciones. de la clula.

Realice un montaje con el raspado de papa como se indico en la prctica de la clula. Observe al microscopio y anote sus observaciones. Realice un montaje con la hoja de Elodea al microscopio y anote sus observaciones. TEJIDOS MECNICOS O DE SOSTN. Raspe con un cuchillo o bistur una parte pequea de mesocarpio de pera y colquela en un portaobjetos. Cubra la muestra con fluoroglucina durante 2 minutos. Elimine el exceso y cubra con cido clorhdrico. como se indico en prcticas anteriores. Observe

Coloque una lmina portaobjetos y observe el microscopio con objetivo de 40x. Anote sus observaciones.

TEJIDOS CONDUCTORES Realice un corte longitudinal y fino de un lpiz de madera de cedro. Coloque las virutas en un portaobjetos, adicione agua. Coloque una laminilla y observe al microscopio. Realice finos cortes perpendiculares del pecolo de la hiedra, a la direccin del tallo; mnimo cuatro cortes. Depostelos en una lmina y adicione verde brillante durante 5 minutos. Lave con agua corriente. Cubra la lmina con fluoroglucina durante 2 minutos. Transcurridos los 2 minutos elimine el exceso de colorante.

Cubra con cido clorhdrico, coloque un cubreobjetos y observe al microscopio. Anote sus observaciones. TEJIDO MERISTEMATICO Realice un montaje con la raz de la cebolla como se indico en la prctica de mitosis. Observe las clulas que se encuentran en mitosis.