UNIVERSIDADE FEDERAL DE JUIZ DE FOR A DEPARTAMENTO DE PARASITOLOGIA, MICROBIOLOGIA E IMUNOLOGIA

Antimicrobianos

Luciana Debortoli de Carvalho

CONCEITOS BSICOS
Antimicrobianos

naturais
antibiticos

sintticos
quimioterpicos

Penicillium, Streptomyces, Cephalosporium, Micromonospora, Bacillus

Antibiose: relao ecolgica no qual uma espcie bloqueia o crescimento ou a reproduo de outra espcie.

Antibitico:

substncia
que,

produzida
em

por

microrganismos

pequenas

quantidades, inibe o crescimento de outros microrganismos.

Antimicrobianos: ao biolgica
Bacteriosttico:inibidores de sntese protica por ligao reversvel aos ribossomos .

Bactericida: inibidores de replicao por ligao irreversvel a DNA girase.

Bacterioltico: inibidores de formao da parede celular

clulas viveis

clulas totais

PROPRIEDADES DESEJVEIS PARA UM AGENTE ANTIMICROBIANO

Parede celular Membrana citoplasmatica

Toxicidade seletiva: destruir o patgeno sem atacar o hospedeiro.

Ribossomos

Bactericida
Principalmente comprometidos;

em
em

vez

de

bacteriosttico:
imuno-

Cromossomo Metabolismo de acido flico

hospedeiros

No induzir resistncia bacteriana;

Espectro de ao satisfatrio
-Amplo/estreito espectro X terapia emprica;

PROPRIEDADES DESEJVEIS PARA UM AGENTE ANTIMICROBIANO

No alergnico;

Ativo quando dissolvido nos fluidos corporais ou exudatos;

Solvel e estvel em soluo aquosa;

Atingir o nvel mximo sistmico rapidamente;

Capaz de atingir o stio de infeco.

Caractersticas gerais das drogas antimicrobianas

Exemplos de diferentes drogas antimicrobianas, classificadas de acordo com o espectro de ao. (Adaptado de Madigan et al., Brock Biology of Microorganisms, 2003)

SINERGISMO x ANTAGONISMO

Sinergismo => ao combinada entre dois agentes antimicrobianos significativamente superior soma dos efeitos alcanados por cada um dos frmacos isoladamente. Antagonismo => ao combinada entre dois agentes antimicrobianos inferior quela do frmaco quando administrado isoladamente.

Uso de combinaes de antimicrobianos

Tratamento imediato de pacientes em estado crtico, com suspeita de infeco microbiana grave; Tratamento de infeces mistas, em particular as que ocorrem aps traumatismo; Para preveno da resistncia a drogas. Se uma bactria torna-se resistente a uma das drogas, a outra droga pode ter um efeito letal sobre este micro-organismo.

Mecanismos de ao de agentes antimicrobianos nas clulas bacterianas

1 - Interferncia na sntese de parede celular; 2 - Interferncia nas funes da membrana; 3 - Interferncia na sntese protica; 4 - Interferncia no metabolismo de cidos nuclicos; 5 - Interferncia em reaes enzimticas (anlogos estruturais)

1 - ANTIMICROBIANOS QUE INTERFEREM NA SNTESE DE PAREDE CELULAR: Beta-Lactmicos:

- So principalmente bactericidas - Anel -lactmico - Principais: penicilinas, cefalosporinas, carbapenmicos, monobactmicos.

- Toxicidade: reao de hipersensibilidade:

- Hipersensibilidade a penicilina: - cefalosporinas e carbapenmicos - exceo - monobactmicos

- Amplo espectro de ao (infeces estreptoccicas, meningoccicas, sfilis, infeces dentrias, infeces por bacilos Gram negativos)

Beta-lactmicos representativos Penicilinas

Penicilina G e V Cloxacilina Dicloxacilina Nafcilina Oxacilina Meticilina Amoxicilina Ampicilina Carbenicilina Ticarcilina Penicilina natural Penicilina semi-sinttica
(penicilinas estveis resistentes beta lactamases produzidas por S. aureus)

(amino) penicilina semisinttica (carboxi) penicilina semisinttica

Mezlocilina Piperacilina

(uredo) penicilina semisinttica

Beta-lactmicos representativos
Cefadroxil Cefazolina Cefalexina Cefalotina Cefradina Primeira gerao

Cefalosporinas

Cefaclor Cefamandol Cefonicid Cefprozil Cefuroxima Cefotetan Cefmetazol Cefoxitina Cefamicina

Cefdinir Cefditoren Cefoperazona Cefpodoxima Cefotaxima Ceftazidima Ceftibuten Ceftizoxima Ceftriaxona Cefepima Cefpiroma

Segunda gerao

Terceira gerao

Quarta gerao

Beta-lactmicos representativos Carbapenmicos

Ertapenem, Imipenem , Meropenem

So ativos contra estreptococos, estafilococos, enterobactrias, P. aeruginosa, Haemophilus e algumas bactrias anaerbias. Particularmente teis no tratamento de infeces por bactrias resistentes a outros antibiticos. Utilizadas no tratamento de infeces polimicrobianas.

Monobactmicos:

Aztreonam

No posssui atividade contra bactrias Gram positivas e nem contra micro-organismos anaerbios.
essencialmente no alrgico, podendo ser utilizado em pacientes com alergia a cefalosporinas e penicilinas.

1 - ANTIMICROBIANOS QUE INTERFEREM NA SNTESE DE PAREDE CELULAR:

Glicopepitdeos (Vancomicina e Teicoplanina)

- Bactericida

- Espectro de ao restrito => Gram positivos

- Dificuldade de penetrar a membrana externa de Gram negativos - Baixa toxicidade ; no absorvida por via oral -Alternativa para pacientes alrgicos aos -lactmicos e para infeces causadas por estafilococos resistentes a oxacilina.

2 - INTERFERNCIA NAS FUNES DA MEMBRANA:

Polimixinas (Colistina, polimixina B)

- Bactericida - Polipeptdeo derivado do Bacillus polimixa - Espectro de ao restrito: Gram negativos

- Uso clnico restrito, altamente txicos

- Desestabilizao da membrana e interferncia no equilbrio osmtico celular

3 - INTERFERNCIA NA SNTESE PROTICA:

INIBIDORES DA TRANSCRIO

- Ligao e inativao da RNA polimerase dependente de DNA => impede a transcrio do DNA em RNA.

RIFAMICINA - amplo espectro de ao (Gram positivos e micobactrias)

3 - INTERFERNCIA NA SNTESE PROTICA:

INIBIDORES DA TRADUO

AMINOGLICOSDEOS - Bactericida - Ligao a sub-unidade 30S impedindo a juno da sub-unidade 50S - O acmulo de sub-unidades 30S aberrantes txico para a clula - Amplo espectro de ao - Ativos contra bacilos Gram negativos (principalmente enterobactrias) micobactrias, enterococos, P. aeruginosa e estafilococos. Gentamicina Trobamicina Canamicina Amicacina Netilmicina Neomicina Estreptomicina

3 - INTERFERNCIA NA SNTESE PROTICA:

INIBIDORES DA TRADUO

TETRACICLINAS - Bacteriosttico - Ligao a sub-unidade 30S, inativando o stio A - Toxicidade baixa - uso e abuso - ampla resistncia - Novas tetraciclinas: desestabilizao da membrana - altamente txicas para humanos Tetraciclina Clortetraciclina Oxitetraciclina Doxicilina Minociclina

3 - INTERFERNCIA NA SNTESE PROTICA:

INIBIDORES DA TRADUO
MACROLDEOS, LINCOSAMIDAS e ESTREPTOGRAMINAS
- Bacteriosttico para a maioria das bactrias / bactericida para alguns Gram positivos. Utilizados contra infeces respiratrias. - Ligao a sub-unidade 50S impedindo a elongao do peptdio: peptidil-transferase - Clindamicina => reserva para anaerbios, principalmente grupo B. fragilis - Toxicidade baixa - uso e abuso => ampla resistncia

Eritromicina

Lincosamida
Clindamicina

Macroldeos

Roxitromicina* Azitromicina* Claritromicina*

* Novos Macroldeos

Estreptograminas
Dalfopristina (estreptogramina A)
Quinupristina (estreptogramina B)

3 - INTERFERNCIA NA SNTESE PROTICA:

INIBIDORES DA TRADUO
OXAZOLIDINONAS (Linezolida) - Classe de novos antimicrobianos sintticos com ao bacteriosttica - Espectro de ao: principalmente contra Gram positivos - Ligao a sub-unidade 50S impedindo a elongao do peptdio. - Reservada para o tratamento de infeces por estafilococos e enterococos. CLORANFENICOL - Bacteriosttico - Boa distribuio tecidual mesmo no crebro e fluidos crebro-espinhais - Toxicidade - uso clnico restrito => txico para a medula ssea - Ligao a sub-unidade 50S impedindo a elongao do peptdio: peptidil-transferase - Utilizado no tratamento de meningites (3 patgenos clssicos)

3 - INTERFERNCIA NA SNTESE PROTICA: INIBIDORES DA TRADUO

CIDO FUSDICO - Ao bacteriosttica principalmente contra Gram positivos (estafilococos) - Alta toxicidade seletiva - Ligao ao fator de elongamento do peptdio interrupo da sntese de protenas

4 - INTERFERNCIA NA SNTESE DE CIDOS NUCLICOS:

QUINOLONAS
- Inibio da duplicao do DNA - Bactericida - Fluoroquinolonas: boa atividade antibacteriana e boas propriedades farmacolgicas - Ligao sub-unidade beta das DNA girases - inibio da atividade - enzimas essenciais no enrolamento e relaxamento das fitas de DNA - Usos: - ativo contra Gram positivos e Gram negativos - baixa atividade contra anaerbios => manuteno da microbiota residente - boa penetrao em macrfagos e PMNs

Quinolonas representativas

* As quinolonas de segunda, terceira e quarta gerao so fluoroquinolonas

cido nalidxico Ciprofloxacina Enoxacina Lomefloxacina Norfloxacina Ofloxacina Levofloxacina Gatifloxacina Moxifloxacina Sparfloxacina Trovafloxacina

Primeira gerao Segunda gerao

Terceira gerao

Quarta gerao

4 - INTERFERNCIA NA SNTESE DE CIDOS NUCLICOS:

NOVOBIOCINA
- Bactericida
- Amplo espectro de ao (especialmente Gram positivos)

- Inibio da replicao do DNA - Ligao sub-unidade beta das DNA girases

- inibio do enrolamento das fitas de DNA (supercoiling)

- Uso: em testes - no h indicaes para o uso teraputico

separao de linhagens de: Staphylococcus epidermides (sensvel) e Staphylococcus saprophyticus (resistente)

4 - INTERFERNCIA NA SNTESE DE CIDOS NUCLICOS:

METRONIDAZOL
- Bactericida - Inicialmente usado para tratamento de infeces por protozorios

- Amplo espectro de ao: Anaerbios, microaerfilos, protozorios e fungos

- Antimicrobiano de escolha contra o grupo B. fragilis

- Droga ativa apenas em anaerobiose

- Oxidao e fragmentao do DNA

5 - INTERFERNCIA EM REAES ENZIMTICAS (anlogos estruturais)

TRIMETOPRIM E SULFONAMIDAS
- Amplo espectro de ao: Gram negativos e Gram positivos - Inibidores competitivos na sntese de cido tetrahidroflico (FH4)

- Alta toxicidade seletiva: clulas de mamferos no sintetizam FH4

- Sulfonamidas: similar ao PABA - inibe a reao da dihidropteroato - sintetase -Trimetropim: similar ao cido dihidroflico inibidor da dihidrofolato redutase - teis contra S. pyogenes, Haemophilus influenza, Chlamydia trachomatis - Trimetoprim exerce efeito sinrgico quando utilizado com uma sulfonamida. Sulfametoxazol-trimetoprim = co-trimoxazol.

cido dihidroflico

cido flico

MECANISMO DE AO DE ALGUMAS DROGAS NA CLULA BACTERIANA

-lactamases (gram negativas)
CROMOSSOMO E PLASMDIO Novobiocina (DNA-girase, sntese de DNA) Quinolonas (DNA-girase, sntese de DNA, permeabilidade) Metronidazol (DNA, fragmentao) Mitomicina sntese e fragmentao) RIBOSSOMOS E mRNA Aminoglicosdio 30s, sntese protica) Tetraciclina sntese protica) Clorafenicol sntese protica) Eritromicina 50s, sntese protica) Lincomicina 50s, sntese protica) Rifamicina polimerases, sntese mRNA) (Rib. (Rib. 30s, PBP (Rib. 50s, PAREDE (Rib. (Rib. (RNAPenicilina, Cefalosporina, Imipenem sntese) Glicopeptdeos (acil-D-alanil-alanina, sntese) (PBP, Polimixina (desestruturao e alterao das propriedades osmticas - toxicidade) MEMBRANA CITOPLASMTICA (FH4) (DNA, PABA PBP -lactamases (gram positivas) Porina

Membrana externa

Peptoglicano Espao periplasmtico

ANLOGOS ESTRUTURAIS
Sulfonamida (Dihidropteroato-sintetase, inibe a reao) Trimetropim (Dihidrofolato redutase, a reao)

cido flico

inibe

Cicloserina (anlogo D-alanina, sntese)

Bacitracina (Defosforilao do pirofosfato, sntese)

Antibiograma
Finalidade
Avaliar in vitro a interao frmaco x bactria
Determinando a sensibilidade Concentrao mnima inibitria
Orientar o Tratamento

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METODOLOGIAS
Avaliao QUALITATIVA
DISCO DIFUSO EM GAR Avaliao QUANTITATIVA DILUIO EM CALDO Macrodiluio

Microdiluio
DILUIO EM GAR AUTOMATIZADOS ETEST
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Mtodo da Difuso em gar

FUNDAMENTO

(Tcnica de Kirby-Bauer)

Os antibiticos impregnados nos discos, difundem

no gar e formam um halo de inibio ao seu redor

quando encontram bactrias sensveis. As bactrias

resistentes

crescem

prximo

ao

disco,

no

ocorrendo a formao de halo

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TESTE DE DISCO DIFUSO EM GAR

Princpio do mtodo

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Mtodo de Kirby-Bauer
Discos de papel de filtro impregnados com concentraes fixas de antimicrobianos

Conforme nvel srico do frmaco a partir de doses padres

No h resultados numricos halos em mm

Interpretao R, I, S tabelas padres

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TESTE DE DISCO DIFUSO EM GAR

Utilizado rotineiramente

Fcil execuo
Flexibilidade na escolha dos antibiticos Reprodutibilidade nos resultados Padronizao dos resultados Baixo custo
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Teste de sensibilidade aos antimicrobianos Leitura e Interpretao

mm

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MEIO MUELLER- HINTON

Reprodutibilidade do teste.
Baixo teor de inibidores de sulfonamidas, trimetoprim e tetraciclinas. Permite crescimento satisfatrio da maioria dos patgenos. Grande nmero de dados e experincia com o meio.

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TESTE DE DISCO DIFUSO EM GAR

O que devemos saber sobre os meios?

Hidratar e autoclavar 60 a 70 mL 25 a 30 mL pH 150 mm 90 mm
4 mm

7.2 a 7.4 2 a 8o C

Conservao

Teste de esterilidade
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TESTE DE DISCO DIFUSO EM GAR

O que devemos saber sobre os meios?

Umidade

Efeito da Timidina ou Timina

Inibidores das sulfonamidas e trimetoprim.

Conservao

2 a 8 oC

Teste de esterilidade

Efeitos da variao de Magnsio e Clcio

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Inculo

3 a 5 colnias

4 a 5 mL de caldo ou salina

Ajustar a turbidez

0,5 McFarland
1 a 2 x 108 UFC/mL

Estabilizar 15 min.

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Inoculao
Superfcie do gar no deve estar mida
Inoculao homognea

Esperar diminuir a umidade antes da aplicao dos discos

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45

46

DISCOS
Agente antimicrobiano em concentrao padronizada
Correlacionada com a obtida na corrente circulatria

Conservao dos discos em geladeira ou congelados Temperatura ambiente para uso Observar prazo de validade Uma vez colocados no remover disco pois a difuso da droga inicia imediatamente

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TESTE DE DISCO DIFUSO EM GAR

Discos
Conservao 8oC ou freezer (no frost free)

Imipenem, Ertapenem Cefaclor e combinaes de c.clavulnico

Retirar do refrigerador ou do freezer at 2 horas antes do uso

Evitar umidade
Data de validade
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Incubao
Imediatamente aps colocao dos discos No mximo 15 minutos Estufa bacteriolgica -35-37C Tempo de incubao:16 a 18 horas

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LEITURA
Deve haver crescimento confluente. Colnias isoladas indicam inoculo insuficiente-Teste deve ser repetido.
Medida do dimetro do halo realizada em mm.

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Discos utilizados nos testes

Utilizam-se discos de concentrao nica e adequada, para cada antibitico, obteno de halos de inibio indicadores do grau de sensibilidade de diferentes bactrias.

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INTERPRETAO
Aps medida do halo
Consultar tabela para classificar nas categorias

Sensvel:
A infeco pode ser adequadamente tratada utilizando o antimicrobiano na dose recomendada para aquele tipo de infeco.

Intermedirio: _ Inclui isolados cujo MIC se aproxima dos nveis obtidos no sangue e tecidos
mas apresenta resposta menor do que a microorganismos sensveis. Resistente: No inibida pelas concentraes usuais.

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Parmetros para Interpretao

a) Concentrao mnima inibitria (C.M.I.) - dose mnima de antibitico que, adicionada ao meio de cultura (lquido ou slido), capaz de inibir totalmente o crescimento de um

inculo padro;
b) Zona de inibio ( Z.I.) - dimetro do halo estril em torno

do disco, em placas semeadas com as mesmas cepas

bacterianas.

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CIM
Concentrao de antimicrobiano
No stio da infeco

Necessria para inibir o crescimento da bactria

infectante.

Valor numrico (mg/mL) til para ajuste de dose

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Etest

Difuso

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E-test - MIC

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MIC

expressa

concentrao

mnima

do

antimicrobiano que necessria para inibir o crescimento do microrganismo que est sendo avaliado. Existem tabelas para a converso desses valores em R, I ou S, sendo que no Brasil normalmente utilizada a tabela preparada pelo National Committe for Clinical Laboratory

Standards (CLSI), rgo americano responsvel pela

padronizao de testes laboratoriais.

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Interpretao do Etest

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Interpretando a CIM
SENSVEL OU SUSCEPTVEL (S) CIM < Concentrao atingida no stio (sangue) aps dose padro
A infeco pode ser tratada
Com a dose recomendada

A categoria susceptvel implica que a infeco causada pela cepa bacteriana isolada pode ser adequadamente tratada com a dosagem do antimicrobiano recomendada para o tipo de infeco e o agente infeccioso.

-Desde que no haja contra indicao.

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Resistente (R)
A categoria resistente inclui isolados que no so inibidos pelas concentraes usuais do antimicrobiano na dosagem padro e/ou falha quando um especfico mecanismo de resistncia expressado.

Intermediria (I)
A categoria intermediria inclui isolados cujos MICs so prximos aos do sangue e tecidos. Ela permite a aplicabilidade do antimicrobiano em infeces em stios onde as drogas so fisiologicamente concentradas ou quando doses maiores podem ser utilizadas.
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Sistema MicroScan
Sistema MicroScan (Dade Behring) - AutoScan-4 e WalkAway 40 ou 96

AutoSCAN - 4

Walkaway 40 e 96

Painel
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