BIOTECHNOLOGIES IR DU DVELOPPEMENT

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Les biotechnologies IORSTOM. Fermentation en milieu solide. Fermentation lactique de %amidon
par Maurice RAIMBAULT

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Valorisation des r Gsidus agricoles ou agro-industriels tropicaux par fermentation en milieu solide
par J. BALDENSPERGER

Microbiologie @t Biotechnologie des fermentations

par Vincent JACQ

Fermentation m6thanique de rGsidus agro-industriels

par Jean-Louis GARCIA

Symbioses actinorhiziennee
par Y. DOMMERGUES et H.G. DIEM

Les lGgumineuses foresti2res tropicales

par Y. DOMMERGUES et B. DREYFUS

etude des nodules de ~ e s b a n i rosirata a

par Pierre de LAJUDIE

Eegumineuees B nodules de tige

par Bernard DREYFUS, Grard RINAUDO, Didier ALAZARD Fixation biologique de lazote par %es cyanobacteries par Pierre REYNAUD

Fixation bislogique de Iazote par les eyanophyc6es libres dans les rizikres submerg6es
par Pierre ROGER

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&lisraiion

de ligname par fusisn de protoplastes (hybridation somatique)

par Bernard MALAURIE

Applications de la culture in vitro 6 Pam6liorationde l a production v6g6tale

par Jacqueline BUFFARD-MOREL, Janina HANOWER, Christian VARECHON

Mecanismes physiologiques et biochimiques de l a production v6g6tale

par Bernard MARIN

Production de m6tabolites secondaires glinmt&-i?t th6rapeutique par voie de culture in vitro de plantes m6dicinales
par Herv CHRESTIN

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etude des virus dinsectes pathog~nes pour les ravageurs des palmeraies
par Gilles FEDIERE

Etude des virus dinsectes : mise a u poirm-icrune production industrielle de virus entomopatlnogGnes
par Pierre MONSAR RAT

ORSTOM Actualits : Supplment au

Directeur de la publication : Jean-Yves MARTIN Rdactrice en chef : Catherine LEDUC-LEBALLEUR Direction de la Formation, de lInformation et de la Valorisation (DIVA) ORSTOM 24 rue Bayard, 75008 PARIS -Tl. : (1) 723.38.29 ISSN 0758 833 X - Commission Paritaire n o 1 864 ADEP

N o 6 de Janvier-Fvrier 1985
Conception et Ralisation : Copyright LOGIMAGES - Tl. : 547.70.75 Couverture : ADEQUAT, Tl. : 664.94.06 Maquettes : (9 B. BARROMES et P. PYTKOWICZ Photocomposition : S.M. - Tl. : 735.05.52 Imprimerie : Offset. Arcueil - Tl. : 664.01.02

par les sciences bioloaques ont permis davancer vers une maitrise croissante des mcanismes du vivant. Les applications qui en rsultent se multiplient: ainsi sont de mieux en mieux valorises les potential its des micro-organismes, des cellules vgtales et animales, des fragments biochimiquement actifs qui en drivent. Les pays du Tiers-Monde ne peuvent rester Icart de la recherche biologique fondamentale et de ses applications tech nol ogiq ues. La voie biotechnologique, parce quelle peut sappuyer sur les ressources biologiques de chaque pays, est certainement lune des meilleures voies de lindpendance, en particulier pour les pays du monde intertropical dont les richesses biologiques sont considerables. La preuve a dailleurs dj t faite quavec des investissements mme modrs, les biotechnologies pouvaient, par exemple, en sappuyant sur les ressources naturelles et sur certaines traditions sociales, rpondre des pnuries alimentaires, ou faciliter la lutte contre des endmies. En outre, beaucoup reste faire pour connatre et valoriser les potentialits biologiques du monde intertropical, terrestre et aquatique. LORSTOM, Institut Franais de Recherche Scienti f iq ue pour Ie DveIoppement en Coopration, a pour vocation de contribuer la connaissance au service du dveloppement, au service de lindpendance, des pays du TiersMonde. La dpendance technicoconomique de ces pays est Iundes facteurs de leur sous-dveloppement : la recherche doit contribuer permettre chaque pays de rduire cette dpendance. La connaissance et la valorisation technologique des ressources biologiques est lune des voies que IORSTOM a choisi, en plein accord avec plu-

sieurs de ses partenaires scientifiques du Tiers-Monde, de dvelopper, avec des moyens importants. Cest ainsi quellnstitut a t amen sintresser lamlioration des techniques de fermentation, loptimisation de la conversion des dchets agroalimentaires (ou agro-industriels) des fins nergtiques, diffrents processus de bio-nergtique, lisolement et la synthse de substances naturelles dintrt thrapeutique, la selection des varits de plantes tropicales aux proprits agronomiques intressantes, la production dinsecticides biologiques et la mise au point dengrais verts rsultant de lemploi judicieux de systmes biologiques fixant lazote atmosphrique. Ces recherches sont caractre finalis. Elles nont de sens que si elles sappuient sur les ralits biologiques et physiques et sur les traditions socioconomiques. Elles doivent donc tre, le plus souvent possible, ralises, du fondamental lappliqu, dans les pays concerns. Cest le pari permanent de IORSTOM : la recherche de pointe en coopration, permettant en particulier, dans les pays qui en onf besoin, la formation sur place, par la recherche, des cadres de la recherche et de la production ; permettant aussi les transferts rciproques de connaissances et de tec hnologes. Les pages qui suivent illustrent comment IORSTOM, avec ses partenaires trangers et franais, essaie, par les recherches biologiques et ses applications technologiques, de contribuer au Dveloppement des pays et des peuples du Tiers-Monde.

Alain RUELLAN Directeur Gnral de IORSTOM

omaine, l'usage des mots n'a pas zncore t sanctionn par une longue I/ pratique. Le terme de biotechnologie reoit encore des dfinitions trs variables selon les pays, les secteurs conomiques, les acteurs industriels et scientifiques. Le mieux serait peut-tre de reprendre alors les deux dfinitions admises par la E.F.B. (European Federation of Biotechnology). Sensu stricto, la biotechnologie concerne exclusivement I'industrie et I'environnement. Les disciplines impliques sont alors la chimie et la biochimie, la microbiologie, la gntique et les sciences de I'ingnieur. Toutefois, sensu largo, elle est conue comme toute technologie qui utilise des organismes vivants (ou partie de ces organismes) pour produire ou transformer une molcule, pour amliorer une plante ou un animal, modifier un micro-organismepour un besoin spcifique. C'est le champ d'action de I'ORSTOM. li' existe ncessairement deux axes d'action : - le premier correspond h des recherches fondamentales considres comme prioritaires pour le dveloppement des biotechnologies,
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- le second consiste encourager les chercheurs initier le dveloppement des applications de leurs travaux. Il sagit de valoriser les rsultats obtenus. LORSTOM possde une longue tradition de recherche dont la vocation est finalise, une recherche oriente, une finalit socio-conomique sous-tendant le plus souvent les actions en cours. Ainsi, llnstitut a dvelopp quatre axes prioritaires en matire de recherche fondamentale oriente vers le dveloppement des pays du Tiers-Monde. Lun de ces axes concerne la bioconversion de substrats agro-alimentaires et de rsidus agro-industriels pour : - la production de proEines alimentaires pour les animaux dlevage, et denzymes pour lindustrie agroalimentaire. Ces tudes ont port sur lutilisation de champignons filamenteux et ont permis denrichir jusqu 20 .% en protines divers substrats amylacs tels que la banane, le manioc, la fcule de pomme de terre... - la production de bio-gaz, cest un moyen de production dnergie sans destruction des lments minraux. La production de biogaz est faite par voie anarobie. Lintrt de ce procd est dune part de pouvoir traiter des matriaux humides, dautre part de raliser simultanment une opration dpuration tout en fournissant un compost utilisable comme amendement et engrais. Le second des axes retenus dveloppe tout un ensemble de programmes sur la fixation symbiotique de lazote atmosphrique par des systmes biologiques symbiotiques aussi divers que : - les associations lgumineuses - Rhizobium, - les associations plantes actinorhiziennes Frankia, - les associations endo- ou ecto-mycorhiziennes, - les symbioses Azolla Anabaena, et lassociation de cyanobactries. Les recherches sont focalises aussi sur quelques systmes choisis en fonction de leur intrt pour le dveloppement de lagriculture et de la foresterie en Afrique de lOuest comme : - les lgumineuses nodules de tige (Sesbania,Aeschvnomene), - les lgumineuses forestires (Acacia), - les Casuarinaces. Pour ce qui concerne les cultures de plantes vivrires, comme larachide ou le soja, lun des objectifs est la mise au point dune technologie permettant laccroissement de la productivit vgtale dans des conditions climatiques et daphiques marginales (sols pauvres dficients en azote et en phosphate) ; sols en cours de dgradation par surexploitation ;sols en cours de dsert$cation ;sols inonds). Les conditions optimales sont recherches en rduisant lapport dengrais minraux, souvent coteux, mais aussi signals comme des molcules polluant les nappes phratiques.
Le troisime axe prioritaire concerne la production vgtale selon les techniques de cultures cellulaires & v a . Leur dveloppement correspond la rsolution de problmes diffrents : - lamlioration de plantes tropicales, dcrites comme ayant des proprits agronomiques et alimentaires importantes, - la multiplication vgtative despces tropicales dintrt conomique, comme le palmier--huile, le cocotier ou lIgname. - la production de mtabolites dintrt thrapeutique

par les cultures de cellules vgtales, obtenues partir de tissus de plantes tropicales utilises dans la pharma- cope africaine, - la conception de bioracteurs rversibles permettant la synthse de produits dintrt local ou non (thrapeutique ou autre) et fonctionnant dans des conditions photo-autotrophes. Pour ce qui concerne les deux derniers programmes, les objectifs, court terme, sont de valoriser pour les pays en voie de dveloppement les potentialits offertes par les plantes tropicales. Le rsultat esprer est la production de substances naturelles utiles, de molcules haute valeur ajoute par un procd biotechnologique moins coteux que lextraction classique partir de la plante entire ou son obtention par synthse chimique (quand elle est possible). En consquence, moyen terme, il sagit de contribuer la mise au point dun systme de cellule automatise en bioracteurs, par un apport dans la connaissance des mcanismes rgulateurs de la biosynthse, de laccumulation et de lexcrtion des mtabolites par des cellules vgtales cultives en milieu liquide. Le dernier axe prioritaire porte sur lutilisation de virus pathognes pour les ravageurs des cultures comme insecticides biologiques. Deux programmes sont en cours : - mise au point dune technique de production industrielle de virus dinsectes, - tudes sur deux groupes de virus paraissant prsenter dintressantes potentialits en lutte biologique. Ce numro fait le point, de faon claire et vivante, sur lensemble des oprations de recherche menes dans le domaine des Biotechnologies IORSTOM. Il est videmment impossible dans le cadre restreint de cette brochure de dcrire lensemble des thmes de recherche en prise avec la Biotechnologie et les structures mises en place (en concertation ou non avec dautres organismes publics ou privs) pour faciliter le passage des recherches aux technologies de production (phase industrielle). On peut toutefois conclure quil est possible de rBaliser des tudes performantes et utiles pour les pays en voie de dveloppement, condition de faire des choix raisonnables. Ces choix sont, la plupart du temps, dtermins comme prioritaires dans les plans de programmation scientifique des pays concerns. Dans tous les cas, il sagit de la mise au point de procds techniquement fiables et conomiques sur lesquels les pays du tiersmonde peuvent tre comptitifs. Ce nestpas un hasard sils concernent essentiellement le secteur agroalimentaire et agro-industriel. Dans les conditions actuelles de la crise conomique, les programmes et les solutions proposes constituent une alternative intressante pour les pays concerns. Les projets pour transformer les cultures microbiennes ou vgtales en agents dpolluants, en producteurs dnergie, de protines et de substances mdicamenteuses intressent vivement les pays en voie de dveloppement.

Bemard M A R m (dp. F), Andr CHARRIER (dp. E), Pierre MONSARRAT (dp. F)

PERSPECTIVES
Les recherches de base poursuivies IORSTOM ont permis doptimiser les paramtres de la croissance des champignons filamenteux en phase solide, de la production denzymes (amylases, cellulases.. .) , de la sporulation et dadapter les connaissances des substrats amylacs ou ligno-cellulosiques, quils soient dorigine tropicale ou tempre. Les recherches appliques ont dbouch sur la mise au point de nouveaux fermenteurs statiques ou agits adapts la croissance en phase solide. Un appareil capable de traiter 100 Kg de poids sec de substrat amylac a t brevet par IIRCHA (Insitut National de la Recherche Chimique Applique) la suite dune tude de prdveloppement ralise sur pulpe de pomme de terre puise. Des essais toxicologiques et nutritionnels ont t raliss par IORANA (Office de Recherche sur lAlimentation et la Nutrition Africaine) au Sngal sur farine de manioc enrichie, puis par lINRA en France sur un rsidu de fculerie de pomme de terre ; ils ont dmontr linnocuit de ces AFEP et permis d e prciser les conditions de leur utilisation. EJfin la SPEICHIM (Socit Pour IEquipement des Industries Chimiques) sest associe au groupe ORSTOM-IRCHA pour mettre au point un nouveau fermenteur. Pour parvenir une meilleure exploitation et une meilleure connaissance des cultures des moisissures en phase solide, il a t ncessaire de dvelopper des recherches de base plus gnrales concernant les mcanismes et les caractristiques de la croissance en phase solide. Dautre part, en raison de la ncessit dobtenir des inocula de spores en quantit abondante et de faon pratique, des tudes sur la production de spores en conditions contrles ont t poursuivies. Enfin, lhydrolyse du substrat, quil soit amylac ou cellulosique, est une tape limitante dans le processus de croissance des moisissures sur substrats solides. Cest pourquoi des tudes cintiques et biochimiques ont t faites pour caractriser les amylases et les cellulases synthtises en phase solide. Les travaux de IORSTOM dans le domaine des fermentations en phase solide conservent une originalit reconnue tant sur le plan des tudes de base (publications sur la physiologie, la production damylases, d e cellulases.. .) que sur les perspectives de dveloppement de nouveaux procds agro-industriels ayant donn lieu des prises de brevets. Les derniers rsultats laissent prvoir que dans une seconde tape, les applications des fermentations en phase

LABORATOIRE : Dpartement de biotechnologie, Universit autonome mtropolitaine de Mexico, IZTAPALAPA, Mexico 13, DF (Mexique), et Antenne ORSTOM de Mexico, Calle Homero 1804 no 404, Colonia Los Morales, 11.510 Mexico, DF (MEXIQUE) Tl. : 557.60.32

Mots-cls Matriel biologique : Valorisation des productions vgtales tropicales en vue de produire des aliments enrichis en protines ou des enzymes dintrt agro-alimentaires. - Techniques principales : Celles de la microbiologie industrielle - Problmatique : Valorisation de la fermentation en milieu solide des fins agroalimentaires.

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Parmi les diffrentes catgories de fermentations qui peuvent conduire valoriser des substrats agricoles ou des sous-produits de lindustrie agroalimentaire, les fermentations en milieu solide apparaissent comme une nouvelle voie biotechnologique encore peu exploite mais prometteuse pour la fabrication de produits alimentaires, industriels o u pharmaceutiques. LORSTOM a entrepris depuis 1974 des recherches dans ce domaine pour la valorisation des productions vgtales tropicales, soit en vue de produire de nouveaux aliments pour le btail (AFEP), soit pour la production denzymes dintrt agro-alimentaires (amylases, cellulases, protases, pectinases...) et autres mtabolites microbiens dintrt alimentaire ou industriel. Les fermentations en milieu solide traditionnelles de type alimentaire sont pratiques depuis fort longtemps dans toutes les rgions du globe (attieke en Afrique, koji au Japon, tempeh en Indonsie, fromages en Europe.. .) Ces fermentations impliquent le dveloppe-

ment de micro-organismes (bactries, levures et surtout moisissures) sur des substrats agricoles en phase solide. Elles prsentent par rapport aux fermentations en phase liquide lavantage de paraitre plus simples de mise en uvre, mieux adaptes la nature et aux volumes des substrats de nature agricoles, donc saisonniers et disperss gographiquement ; enfin la concentration du substrat en phase solide permet de rduire la taille des quipements et surtout dviter lemploi de volumes deau importants qui sont un frein aux phnomnes de transfert doxygne et reprsentent un effluent gnant coteux liminer. Depuis 1974, une quipe de IORSTOM dirige par M. RAIMBAULT a entrepris des recherches de base sur les fermentations en phase solide, ainsi que des tudes fondamentales sur la cintique et la physiologie de la croissance, la sporulation et la taxonomie des moisissures dintrt agroalimentaire, impliques dans ce type de fermentation. Les premiers rsultats ont conduit ds 1976 la mise au point dun nouveau procd denrichissement en protines de substrats amylacs. Ce procd permet aprs 24 heures de fermentation, si le substrat est convenablement conditionn et si les conditions optimales de dveloppement de la moisissure sont respectes, denrichir jusqu 20 % en protines, divers substrats amylacs tels que le manioc, la banane ou la fcule de pomme de terre. Ce procd peut tre utilis pour la production dAFEP (Aliments Ferments Enrichis en Protines).
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conjoint est assur en partie par la UAM pour ses personnels et les infrastructures, par ,YORSTOM pour ses chercheurs et par des contrats de recherche avec des organismes nationaux et internationaux : CONACYT (Conseil National de la Science et de la Technologie - Mexico), FIS (Fondation Internationale pour la Science - $tockolm), OEA (Organisation des Etats Amricains - Washington) et la CEE (Communaut Economique Europenne - Bruxelles). L'infrastructure disponible pour l'quipe comporte 4 laboratoires de microbiologie et d'analyse, des bureaux, et 2 hall-pilote-fermentation. La UAM souhaite intensifier sa coopration scientifique avec I'ORSTOM de faon constituer un groupe enseignement - recherche d'un niveau international dans le domaine des fermentations agro-alimentaires et plus particulirement sur les thmes de la fermentation en phase solide et la fermentation lactique. Ce groupe serait alors destin former des scientifiques et des techniciens dans ce domaine, non seulement pour le Mexique mais galement pour les autres pays d'Amrique Latine et permettrait d'intensifier les changes avec les pays europens, en particulier avec la France.

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solide ne concerneront pas seulement l'enrichissement en protines d'aliments fourragers, mais galement la production d'enzymes (amylases, cellulases, pectinases) ou autres mtabolites synthtiss en abondance par les moisissures. des tudes finalises et concernent les domaines suivants : - Enrichissement en protines du manioc et autres substrats amylacs, - Amlioration de la digestibilit de substrats ligno-cellulosiques (pailles, bagasse), - Dtoxification de rsidus agroindustriels (pulpe de caf), - Fermentation lactique des amidons et ensilages, - Production d'enzymes hydrolytiques (amylases, cellulases, pectinases) ou d'autres mtabolites, - Physiologie et modlisation de la croissance des moisissures en phase solide (sporulation, croissance, mtabolisme secondaire), - Contrle des fermentations en phase solide (capteurs, contrles de qualit, mycotoxines.. .) et ingnirie. Pour la ralisation de ce programme de coopration, I'quipe de recherche franco-mexicaine comprend actuellement 2 chercheurs de I'ORSTOM (M. RAIMBAULT et S. ROUSSOS), 2 VSN du MRE, 4 Professeurs de la UAM mi-temps, 2 chercheurs de la UAM actuellement en spcialisation en France, 4 tudiants d e Licence ou Matrise et 4 chercheurs mexicains contrac'tuels. Le financement de ce programme Pour cela des collaborations avec des organismes de recherche franais ont t entreprises et fonctionnent depuis plus de 2 ans. Tout d'abord avec I'IRCHA qui apporte son appui pour les problmes d'quipements et de constructions de prototypes de fermenteurs ; avec I'INSA de Toulouse pour les aspects des recherches portant sur la cintique des processus fermentaires, avec l'UTC de Compigne enfin pour les aspects d'ingnirie des procds. Ces collaborations se droulent travers des changes de chercheurs. Un programme annexe s'est dvelopp entre la UAM et l'UTC pour des recherches portant sur la fabrication d'aromes alimentaires par fermentation en milieu solide, Une collaboration avec l'INRA est envisage pour les tudes zootechniques. Le groupe ORSTOM/UAM collabore par ailleurs avec des organismes de recherche mexicains dans les domaines de l'agronomie, la nutrition et des aliments. Des collaborations avec d'autres pays d'Amrique Latine (Venezuela, Guatemala, Cuba, Brsil) se mettent en place. On espre que les rsultats des travaux de ce groupe pourront tre transfrs au secteur productif travers la constitution d'une socit francomexicaine pour le Co-dveloppement des nouvelles technologies.

STRUCTURES
Aprs 4 ans de travail en rgion parisienne dans les locaux de I'IRCHA l'quipe ORSTOM sur les fermentations en phase solide a t transfre en Martinique et au Mexique de faon pouvoir raliser des tudes sur les substrats tropicaux. Depuis 1981,I'ORSTOM et le Dpartement de Biotechnologie de l'Universit Autonome Mtropolitaine (UAM) Mexico, collaborent un programme de recherche conjoint portant sur les fermentations en phase solide. Un accord de coopration a t sign entre ces deux organismes dans le cadre de l'accord gnral d e coopration ORSTOM-CONACYT au Mexique. Ce groupe de recherche fonctionne sous la responsabilit scientifique du Prof. G. VINIEGRA de la UAM et du Dr. M. RAIMBAULT de YORSTOM. Les tudes ralises portent la fois sur des tudes de base prospectives et

RESPONSABLE : J. BALDENSPERGER. LABORATOIRE : Laboratoire de biotechnologie et de microbiologie applique, B.P. 81, 97201 Fort-de-France

Tl. : (596) 60.24.79. Tlex : ORSTOM 912024. Adresse h compter de fin Equipe ORSTOM, C.I.T.A., Universidad de Costa Rica, San Jos, (COSTA RICA) America Central.
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Mots-cls Matriel biologique : carts de triage de bananes, Techniques : schage solaire ; fermentation en milieu solide dans un fermenteur type ptrin (I.R.C.H.A.) ; champignon filamenteux (As~erqillus

protines par une technologie simplifie, susceptible dtre mise en uvre au niveau des communauts rurales, et permettant de combiner localement la culture de la matire premire, sa conversion en protines et son utilisation directe pour llevage. La fermentation en .milieu solide par des champignons filamenteux pourrait permettre datteindre ces objectifs. On constate dans les Antilles, et en particulier en Martinique et Guadeloupe, la fois une dpendance des levages sur des aliments imports et une disponibilit en certains rsidus agricoles pauvres en protines tels que les carts de triage de bananes. Bien que des rsultats aient t obtenus auparavant au stade pilote sur un substrat agro-industriel de rgion tempre (rsidu de fculerie de pomme de terre), plusieurs annes de travail taient ncessaires en rgion tropicale pour vrifier lintrt de la fermentation en milieu solide, pour la valorisation par la biotechnologie des rsidus tropicaux. Linstallation du laboratoire de biotechnologie en Martinique correspondait donc 1 9 fois une demande du Secrtariat dEtat aux DOM-TOM et une tape de ce programme.

EQUIPE ET LA
Initialement compose de trois chercheurs, une lve et une technicienne, lquipe compte actuellement deux chercheurs, une technicienne et un volontaire de laide technique. Le laboratoire est install dans un local de 145 m2plus dpendances (hall de fermentation lchelle pilote). Le matriel scientifique ncessaire la ralisation du programme expos cidessus a t en grande partie acquis au cours des annes prcdentes et a t transfr Fort-de-France. Le pilote de fermentation solide agite a t construit partir dquipements mis au point et prts par IIRCHA (Institut National de Recherches Chimiques Appliques) et complt par du matriel acquis grce un financement de la CORDET (Commission de Coordination de la Recherche dans les DOMTOM). Dautre part une aide de IAFME a t obtenue pour la construction et ltude dun schoir solaire adapt au climat tropical humide.

nlser),

- Problmatique : production daliment ferment enrichi en protines (AFEP) pour les animaux.
Le programme ORSTOM de valorisation des rsidus agro-industriels par fermentation en milieu solide a dbut Dakar en 1974. Son objectif tait de mettre au point un procd permettant de valoriser, dans un systme de dveloppement auto-centr, des quantits relativement faibles de rsidus (de lordre de 1 500 t/an) en assurant une rentabilit conomique cette chelle, soit par la production dun aliment enrichi en protines pour le btail, soit par la production denzymes ou de mtabolites forte valeur ajoute. La production de protines dorganismes unicellulaires par fermentation de type classique, cest--dire en milieu liquide, dans des conditions aseptiques et par des procds comportant une sparation et un schage de la biomasse, exige une technologie complexe et le seuil minimal de production conomiquement rentable peut tre suprieur aux marchs potentiels dans les pays en voie de dveloppement. Ces considrations ont conduit envisager une approche diffrente, consistant en un enrichissement en

tudes de base concernant la fermentation en milieu solide : Optimisation des conditions physicochimiques pour la fermentation en milieu solide de nouveaux substrats (tourteau dananas) et recherche des souches les plus performantes (souches

Mise au point des conditions de production et d'extraction de cellulases l'chelle pilote (programme termin en Martinique). Essais nutritionnels du produit enrich de banane sur I'crevisse d'levage Macrobrachium rosenberqii.

COLLABORATIONS ET PERSPECTIVES
Pour mener bien ses travaux, l'quipe de microbiologistes ORSTOM en Martinique a tabli des relations avec divers organismes et socits aussi bien dans le domaine prospectif qu'appliqu. On peut citer : - l'IRCHA et la SPEICHIM (Socit pour l'Equipement des Industries Chimiques) auxquels l'ORSTOM tait li par des accords pour le dveloppement du procd. - Des organismes ou socits dispo sant en Martinique de rsidus agricoles tels que la SOCOMOR, le CTCS et I'IRFA, ou intresss par la mise au point d'appareillages spcifiques (SUNWIND Recherche pour le schage solaire). - IFREMER (Institut Franais de Recherche pour l'Exploitation de la Mer) pour les essais nutritionnels sur Macrobrachium, dont l'levage est en pleine expansion dans la rgion et plus gnralement dans les DOM-TOM. - L'ICAITI (Instituto Centroamericano de Investigation y Tecnologia Industrial) au Guatemala, qui tudie galement sur un pilote IRCHA la valorisation des carts de bananes. Certains des objectifs finaliss ayant t atteints aprs 3 ans de travail en Martinique, il a sembl ncessaire de poursuivre les recherches en microbiologie applique la valorisation des rsidus agricoles par une coopration ouvrant des perspectives nouvelles. I1 a donc t dcid d'installer l'quipe compter de fin 85 au CITA (Centro de Investigaciones en Tecnologia Alimentaria) de San Jos, Costa Rica. Cet institut universitaire dispose en effet la fois de structures de recherche de base (Universit de Costa Rica) dans les domaines de la microbiologie, de la biochimie et de la zootechnie, ainsi que de possibilits d'exprimentation de modles s'appuyant sur un rseau constitu. D'autre part le CITA souhaite promouvoir fortement la formation de ses ingnieurs et chercheurs dans le domaine des fermentations. Enfin la valorisation des carts de triage de bananes fait dj l'objet au Costa Rica de ralisations concrtes et originales : production mcanique de farine de bananes vertes pour l'alimentation du btail et aquaculture d'eau douce (Macrobrachium) en diversification dans les rgions bananires.

conditionnement conomique, par exemple schage solaire. L'utilisation des rsidus agricoles frais, tels que les carts de triage d e bananes, se heurte en effet au problme de leur schage

par des moyens conomiques. Un schoir exprimenta! construit par le CEEMAT (Centre d'Etudes et d'Exprimentation du Machinisme Agricole Tropical) a t mis en service. Sa capacit tant infrieure aux besoins du fermenteur pilote, un second schoir de capacit double a t mis au point, construit par la St SUNWID ENERGIES et tudi dans le cadre d'une convention avec la Rgion Martinique. Construction d'un fermenteur pilote. Mise a'u point des conditions optimales de fermentation solide de la farine de banane verte et production de lots d'aliment enrichi.
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Naturelles de lE.N.S.U.T. I1 en rsulte une double direction scientifique, la biotechnologie de lE.N.S.U.T. tant sous la responsabilit du Professeur P. VIAUD, la microbiologie, le fait de V. JACQ. I1 en est de mme pour son administration. Toutefois, ce laboratoire a un encadrement constitu dun personnel qualifi nombreux (11chercheurs en plus des techniciens locaux) permettant un accueil et une formation cohrente (lie lenseignement e t la recherche faits dans ce laboratoire). I1 peut sagir de stages de courte dure (dau plus 3 mois). Dans ce cas quatre stasiaires au maximum peuvent tre accueillis en simultan. 11 peut sagir de stages de longue dure (six mois deux annes).

LABORATOIRE : Antenne ORSTOM de microbiologie des fermentations, Ecole Nationale Suprieure Universitaire de Technologie, Fote Postale no 5085, Dakar (SENEGAL).

Deux trois postes sont disponibles, dont un ncessairement rserv un jeune chercheur ORSTOM. Dans ce dernier cas, le niveau minimum exig est la Matrise en Sciences (chimie ou biologie), voire un D.E.A. Ds lors, il sera possible de prparer une thse.

Mots-cls Matriels biologiques : dchets agro-industriels ; algues marines ; dchets dabattoirs ; ordures mnagres ; coques darachides ; biomasse varie. - Techniques : fermentation mthanique ; fermenteur de laboratoire ; digesteur-pilote (2 m3) ; pilote de compostage (8 m3) ; chromatographie en phase gazeuse. Problmatique : dpollution industrielle, production dnergie et de fertilisants.

PERSPECTIVES
Leffort port sur la microbiologie fondamentale est prioritaire pour une priode situe entre 1985 et 1988. Deux russites actuelles sont signaler son actif. Dune part, les panses de buf constitueraient une source intressante de bactries fermentaires et, en particulier, de bactries mthanignes. Dautre part, les boues de mangroves constituent un bon inoculum pour la fermentation anarobie des macrophytes marins. Quant au second thme abord (les processus de mthanisation) , il est prvu le passage, avant juin 1985, aux tudes en modles semi-industriels (pilotes) pour une fermentation en continu ou en batch B. La recherche concernant les coques darachide portera sur une tude microbiologique sur les bactries et les champignons cellulolytiques. Toutefois, on remarquera que la technique empirique dveloppe actuellement permettra dans un premier temps la construction dune usine de compostage prs dune huilerie. Lquipe mise en place constitue un des bureaux dtude pour la dpollution de la ville de Dakar, lune des mthodes employes tant la mthanisation des dchets.
( (

I1 sagit de recherches de microbiologie dont la valorisation porte sur la biotechnologie des fermentations (principalement partir de dchets agroindustriels). Elles concernent : - la microbiologie fondamentale (recherche dinoculums ; analyse de microflore fermentaire ; isolement de souches performantes), - la mthanisation et le compostage : dalgues choues, de dchets dabattoir, dautres substrats agro-industriels. - le compostage de coques darachide, - la dpollution de dchets urbains. Elles sassocient un enseignement (I.U.T.), la formation et laccueil de stagiaires (de tout niveau entre la Matrise et le Doctorat), des sessions de recyclage (formation permanente) mais aussi lanimation de rencontres scientifiques de haut niveau (congrs, ateliers.. .).

Elles sont complexes. Les recherches dveloppes dans ce laboratoire sont menes en accord avec quatre ministres de tutelle sngalais : la Recherche (M.R.S.T.), le Dveloppement industriel (M.D.I.A.), lEnseignement Suprieur (M.E.S.), et lEnvironnement (M.E.). I1 en rsulte des contacts frquents pour dfinir les priorits et mener des enqutes communes sur les besoins locaux. Dautres contacts existent : - avec des structures de recherche : en France, le C.N.R.S. (Laboratoire de chimie bactrienne de lUniversit de Provence), et diffrents autres laboratoires des Universits dAixMarseille I, de Nancy et de Paris-XII (Crteil), pour des collaborations en Microbiologie Fondamentale, au Sngal, l1.S.R.A. (Institut Sngalais de Recherches Agricoles) pour la fermentation algale et ltude de2 composts, le C.E.R.E.R. (Cgntre dEtudes et de Recherches sur les Energies Renouvelables) et la Facult des Sciences de Dakar pour les tudes de chimie et de biochimie, et l0.N.G. (CARITAS / E . N . D . A . - Tiersmonde / CORDIA) pour ltude commune des applications en milieu rural, avec des organismes internationaux comme le F.I.C.U. (Fond International de Coopration Universitaire), le C.R.A.T. (Centre Rgional Africain de T e c h n o l o g i e ) , 1 A . U . P. E . L . F . , lU.N.E.S.C.O., le F.E.D. ou la C.E.E., pour la formation, lchange de chercheurs, diverses missions ou aide au financement.

STRUCTURE
I1 sagit dune stucture mixte, lie luniversit de Dakar (Facult des sciences). LAntenne ORSTOM constitue est jumele (et intgre) au Laboratoire de Valorisation des Substances

Fermentation mthanique de rsidus agro-industriels

LABORATOIRE : Laboratoire de microbiologie ORSTOM, Universit de Provence, 3, place Victor-Hugo, 13331 MARSEILLE-CEDEX 03 Tl. : (91) 50.64.04

Lquipe ORSTOM sest constitue grce au recrutement rcent de trois jeunes chercheurs qui ont reu une formation trs spcialise lors de stages de longue dure aux U.S.A. Lquipement complet du laboratoire install dans les locaux de luniversit de Provence a t acquis par une aide de 1A.F.M.E. (A2ence Franaise pour la Matrise de lEnergie) et du C.N.R.S. (A.T.P./P.I.R.S.E.M.). I1 est prvu dtendre la superficie de ce laboratoire. I1 squipera dun petit hall de fermentation en collaboration avec lquipe du Professeur J.-P. BELAICH. Cette opration permettra de dvelopper plus particulirement la partie finalise de ce programme.

COLLABORATHO
Limplantation de Iquipe dans les locaux mme de la Matrise de Sciences et Techniques de Microbiologie Gnrale et Applique de luniversit de Provence a permis de crer un environnement scientifique universitaire remarquable. Une telle situation permet daccrotre les possibilits daccueil et de formation pour les tudiants franais et trangers dsireux de se spcialiser dans ce domaine. Actuellement, lquipe comprend trois chercheurs, deux lves ainsi que plusieurs tudiants (prparant une thse). Lquipe, qui a des relations privilgies avec lquipe du Professeur J.-P. BELAICH (Chaire de microbiologie, Universit dAix-Marseille 1) , collabore aussi activement avec l1.R.C.H.A. (Institut National de Recherche Chimique Applique) pour lexprimentation en pilote de toute innovation ventuellement mise au point au Laboratoire de H Microbiologie.

RESPONSABLE : Jean-Louis GARCIA

Mots-cls - Matriel biologique :rsidus agroindustriels (cellulose, hmicellulose, ligno-cellulose, protines, sucres, composs aromatiques, corps gras.. .) ; bactries anarobies strictes mthanognes, sulfo-rductrices, homoactognes, syntrophiques, hydrohytiques.. . - Techniques : dnombrements des populations bactriennes ; isolement et caractrisation de souches pures ; exprimentation et caractrisation de souches pures ; exprimentation de cultures mixtes dfinies ; fermentation en batch et en continu (fermenteurs de laboratoire). P r o b l m a t i q u e : dpollution industrielle ; production dnergie et de fertilisants.

humides, dautre part de raliser simultanment une opration dpuration tout en fournissant un compost utilisable comme amendement et engrais.

PERSPECTIVES :
Contrairement aux djections animales (fumiers et lisiers), les rsidus cellulosiques dindustries agro-alimentaires sont pauvres en micro-organismes et une inoculation est indispensable pour obtenir une fermentation mthanogne satisfaisante. Une tude approfondie des microflores spcifiques responsables des diffrentes tapes de la biodgradation anarobie est donc ncessaire pour pouvoir introduire une microflore adapte afin dorienter et contrler ce processus de fermentation. La mise au point de techniques et de milieux de numration des populations bactriennes impliques dans le processus de digestion anarobie a.contribu constituer une collection de souches pures. Ces souches permettent actuellement la ralisation dune exprimentation de cultures mixtes dfinies dans le but dobtenir des inocula adapts au substrat digrer. Cela devrait permettre de faire avancer les connaissances dans le domaine encore mal connu de la microbiologie de la digestion anarobie, de faire progresser la technologie des cultures mixtes dfinies et doptimiser au laboratoire la fermentation mthanique de divers substrats dorigine agricole (cellulose, hmicellulose, protines, composs aromatiques, corps gras, etc.. .).
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THEME :
Un aspect possible de la valorisation des rsidus agro-industriels est la production dnergie (biogaz) couple la dpollution et lobtention de fertilisants. La fermentation mthanique reprsente une valorisation intressante des sous-produits d e lagriculture. Elle a en effet lavantage de produire de lnergie sans dtruire les lments minraux et mme, au contraire, de favoriser leur concentration. Thoriquement, on peut obtenir 410 litres de mthane partir d e la dcomposition complte de 1 kg de cellulose. Toutefois, en pratique, la production de biogaz varie fortement suivant la nature des matires premires utilises pour la fermentation. Lintrt d e ce procd est dune part de pouvoir traiter des matriaux

- Valorisation des recherches

Lorsque l'on aura amen maturation la prparation des inoculum de Frankia, il sera possible de procder des essais systmatiques d'inoculation grande chelle.

STRUCTURES
Les recherches sont conduites essentiellement, mais non exclusivement au BSSFT, les activits dans les trois laboratoires impliqus tant complmentaires. Ces activits sont de trois types : - Recherches fondamentales : (1) physiologie de la croissance culture et gntique de Frankia ; (2) multiplication vgtative in vitro des plantes htes, rgnration partir de cals : slection de clones. Ces recherches seront conduites au BSSFT (Nogent-sur-Marne). - Estimation de la fixation d'azote in situ 15N et valorisation des recherches sur les Casuarina. Ces recherches seront conduites en collaboration par I'ORSTOM, la Direction des Eaux et Forts du Sngal et le BSSFT. - Inventaire des espces actinorhiziennes Centre-Amricain. Recherches conduites I'INIREB (Xalapa, Mexique). Le BSSFT sera fonctionnel partir de la fin de l'anne 1985. Deux chercheurs seront affects ce programme. L'quipement du BSSFT comprendra en particulier : une serre, des chambres de culture de tissus vgtaux, une installation de microscopie lectronique (transmission et balayage), l'quipement pour des recherches immunologiques et des tudes de croissance et de physiologie des Frankia. I1 y aura possibilit d'accueillir au BSSFT deux stagiaires partir du l e r janvier 1986. Le laboratoire de I'ORSTOM Dakar dispose d'un chercheur : ce laboratoire est dot de I'quipement ncessaire l'excution du programme. Le laboratoire de I'INIREB est parfaitement quip pour conduire bien l'inventaire des espces actinorhiziennes centre-amricaines (Herbarium, moyens informatiques) et accessoirement procder des estimations de fixation d'azote. Deux chercheurs sont affects au programme.

LABORATOIRE : 1 - Laboratoire de microbiologie des SOLS, ORSTOM BP. 1386 Dakar (SENGAL). 2 - Laboratoire de biotechnologie des systmes symbiotiques forestiers tropicaux (BSSFT) CNRS/CTFT avenue de la Belle Gabrielle 94130 - NogentSur-Marne, 3 - INIREB Apartado Postal 63 Xalapa 9100 (MEXIQUE).

Mots-cls Actinorhize, Frankia, Fixation d'azote, reforestation.

rina partir d'explants de diffrente nature y compris cnes femelles ; rgnration de plantes entires partir de cals; - slection de clones de Casuarina potentiel fixateur d'azote nul (tmoins dans les expriences d'valuation de fixation d'azote) ou trs lev; - mise au point d'une technique d'valuation fiable de la fixation d'azote, au champ.

multiplication vgtative de Casua-

THME
Comme dans le cas des lgumineuses forestires, l'objectif vis est d'accrotre les potentialits fixatrices d'azote des plantes actinorhiziennes, mme lorsque celles-ci se trouvent places dans des conditions environnementales hostiles (par ex. sols sals). Pour atteindre cet objectif on fera simulanment appel deux approches : (1) approche microbiologique consistant slectionner ou manipuler le microorganisme symbiotique fixateur d'azote, Frankia, (2) exploitation de la variabilit (spontane ou provoque) de la plante hte en vue de l'obtention de clones prsentant un potentiel fixateur d'azott. accru, ainsi que des qualits remarquables telle que croissance rapide ou rsistance certaines contraintes environnementales. On a commenc tudier des Casuarinaces appartenant aux genres Casuarina et Allocasuarina. Ces recherches seront dveloppes et compltes par I'tude de plantes actinorhiziennes tropicales notamment Coriaria s m a et divers M & a de rgion tropicale humide. Les principaux axes de recherches sont les suivants : - tude de la physiologie et des exigences nutritionnelles de Frankia ; amlioration de la technique de culture in vitro;

PERSPECTIVES
Biotechnologie de Frankia Aprs avoir perfectionn les techniq u e s d e culture in vitro d e diffrentes souches de Frankia on pourra en entreprendre I'tude gntique avec pour objectif final l'obtention de souches effectives et spectre largi. Biotechnologie des plantes actinorhiziennes On poursuivra le programme de slection de clones de Casuar k e n fonction de leur potentialit fixatrice d'azote ainsi que d'accrotre leur rsistance certaines contraintes de l'environnement notamment la salinit. L'largissement de la variabilit gntique des Casuarina pourra tre recherch en faisant appel la mutagense. Compte tenu des rsultats obtenus avec Casuarina, on pourra envisager d'appliquer la technologie mise au point d'autres espces actinorhiziennes.

lia.

Inoculation de Casuarina equisetifoA gauche tmoin non inocul ; d droite inoculation parfaitement russie ; au centre inoculation mdiocre due d l'insuffisance du nonibre d'units infectieuses dans /'inoculum utilis.

1%

COLLABORATIONS
- Insitut Pasteur Paris (tude de la nitrogenase des Frankia) , - Universit de Nice, laboratoire de physiologie vgtale (Isoenzymes chez Frankia) , - INSA Toulouse, laboratoire de gnie biochimique (culture de Frankia) , - Universit de Dakar. - Direction des Eaux et Forts du Sngal, - Institut National de Recherche Forestire de Tunisie.

RESPONSABLES : Y . DOMMERGUES et B. DREYFUS

LABORATOIRE : Laboratoire de Microbiologie deScsols, ORSTOM B.F. 1386, Dakar - (SENEGAL).

Mots-cls Fixation d'azote, Rhizobium, arbres fixateurs d'azote, mycorhizes, reforestation.

L'objectif majeur est de mettre au point une technologie permettant l'accroissement de la productivit des lgumineuses forestires tropicales, notamment dans le cas de conditions climatiques et dapthiques dfavorables. Cette technologie devrait en particulier contribuer efficacement la lutte contre la dsertification partout O les sols ont t dgrads par surexploitation, sans recourir l'utilisation d'engrais azots. Pour atteindre cet objectif n fait essentiellement appel l'approche microbiologique qui consiste (1) tudier la biologie des microorganismes symbiotiques (Rhizobium et champignons mycorhiziens) I'tat isol et la biologie de leur association avec la plante hte (2) acqurir la matrise des techniques d'tablissement des associations symbiotiques les plus performantes (inoculation). Les recherches en cours portent sur plusieurs espces d ' A d a , notamment A. Snsal (gommier), A. Leta, A. raddiana. A. nilotica, deux Prosonis (P. africana, F. iuliflora) et un Alzelia (A. africana). Les recherches portent la fois sur les Rhizobium associs (spectre d'hte ; slection en fonction de l'effectivit) et sur la multiplication vgtative des CIOnes slectionns in situ nour leur productivit.

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PERSPECTIVES

Trois volets de recherche seront dvelopps : - Constitution d'une collection de Rhizobium spcifique et tude de leur physiologie, - Constitution d'une collection d'ectomycorhizes tropicaux et valuation d e leur effet sur le potentiel fixateur d'azote et la nutrition minrale des plantes htes, - Slection d e clones d'arbres hautes performances en ce qui concerne leur potentiel fixateur d'azote et leur productivit (ex. gomme arabique).

STRUCTURES
Les recherches correspondantes sont conduites au laboratoire de l'ORSTOM de Dakar en ce qui concerne les espces sahliennes et soudaniennes et au laboratoire CTFT/CNRS de NogentSur-Marne (BSSFT) pour les espces tropicales humides ou mditerranennes.
Laboratoire de I'ORSTOM h Dakar Ce laboratoire n'est pas encore quip de salles climatises pour cultures de tissus vgtaux. Cet quipement devrait pouvoir tre mis en place la fin de l'anne 1986. Le personnel comprend deux chercheurs et deux stagiaires.

BSSFT de Nogent-sur-Marne Ce laboratoire sera fonctionnel partir de la fin de l'anne 1985. L'IUFRO et la Banque Mondiale ont demand l'aide de l'ORSTOM pour la mise sur pied, en Afrique d'un vaste programme ayant pour objet le dveloppement de nouvelles technologies en vue de la reforestation dans les zones Sahliennes et SoudanoSahliennes avec des lgumineuses forestires.

COLLABORATIONS
Universit de Dakar. CNRF/ISRA (Sngal) et National Academy of Sciences, Washington ; Direction des Eaux et Forts du Sngal.

La recherche de pointe en coopration. permettant en particulier. dans les pays qui en ont besoin, la

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tion sur place, par la recherche, des cadres de la recherche et de la production ; facilite

les transferts rciproques d e connaissances et d e technologies

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RESPONSABLE : Pierre de LAJUDIE

LABORATOIRE : Laboratoire d e Biologie molculaire des relations Plantes-micro-organismes, Centre de Recherches INRA-CNRS, Boite Postale No 27, Auzeville, 31320 CastanetTolosan (FRANCE).

I1 a t montr, notamment chez le pois (T. BISSELING e t a l .1983) , et chez le soja (R.P. LEGOCKI et D.P.S. VERMA, 1980, F. FLLER e t ; 1983 ; H. BERGMANN e t a l . 1983), , que la plante, en rponse sa colonisation par le Rhizobium, synthtise des protines spcifiques. F. FULLER (1983)les classent en trois types possibles : - les protines de structure du nodule, - les enzymes ncessaires lassimilation de lazote rduit, - les protines qui aident le rle des bactriodes en facilitant la rduction de lazote. Au sein du laboratoire mixte INRACNRS dAuzeville, qui travaille sur la symbiose Rhizobium-luzerne, il a t entrepris en parallle linventaire des nodulines dune lgumineuse tempre, Medicaso sativa, et dune lgumineuse tropicale nodules caulinaires Sesbania rostrata.
Les protines solubles totales ont t prpares de divers tissus h analyser (nodules et racines pour Medicaqo ; nodules de tige, nodules de racine, tige et racine pour Sesbania) . La comparaison des profils protiques obtenus aprs electrophorse sur gel de polyacrylamide en prsence de SDS fait apparatre des diffrences entre les tissus avant et aprs infection par le Rhizobium spcifique. Afin de mieux pouvoir prciser ces diffrences, ces protines ont t analyses par lectrophorse bidimensionnelle, comportant une premire dimension par isolectrofocalisation et une seconde par un classique PAGESDS. Paralllement, il a t prpar toute une srie dantisra par immunisation de lapins contre les protines solubles totales des diffrents organes vgtaux. Une telle approche est faite dans le but de pouvoir, par immunodtection, mettre en vidence les nodulines. Par ailleurs, il est envisag de purifier les RNA messagers partir des diffrents organes, les mettre dans un systme de traduction in vitro, comparer les polypeptides entre eux et ceux mis en vidence in vivo. Ce programme dbouchera sur lidentification et le clonage de.s gnes des cellules vgtales qui codent pour ces nodulines. Pour cela, il sera ralis la synthse in vitro du cDNA partir des RNA messagers purifis des nodules, que nous clonerons dans un vecteur dexpression. Ces perspectives rsultent de rsultats prliminaires particulirement intressants obtenus dans le cadre de ce programme qui a t initi il y a un an peine.

Mots-cls Matriel biologique : Sesbania rostrata

Noduline Techniques principales : Mesure de la fixation de lazote Electrophorse bi-dimensionnelle Isoelectrofocalisation Synthse proteique - Problmatique : Comprhension du mcanisme de la symbiose fixatrice dazote.

capacits remarquables pour la fixation dazote qui en fait un matriel de choix pour son utilisation comme engrais vert (B. DREYFUS e d 1981) et la prsence la fois de nodules racinaires et caulinaires en quantit trs abondante. Par ailleurs, lespce Rhizobium associe Sesbania possde la capacit de fixer lazote en culture pure, ce qui permet ltude gntique directe (C. ELMERICH e t a l .1982). ,

DE LA RECHERCHE ET PERSPECTIVES
Cest le laboratoire de microbiologie des sols du Centre ORSTOM de Dakar-Hann qui, en 1979, a attir lattention du monde scientifique sur lintrt de la symbiose RhizobiumSesbania et en a commenc Itude : ultrastructure, physiologie, biochimie (tude des leghmoglobines) , tude des Rhizobia isols des nodules de tiges et de racines (taxonomie, analyse gntique, recherche de plasmides, isolement de phages spcifiques) (B. DREYFUS, 1982 : P. de LAJUDIE et 4, 1 9 8 2 ; P. de LAJUDIE et D. BOGUSZ, 1984). En collaboration avec D. BOGUSZ (Centre ORSTOM de Dakar-Hann) , il a t entrepris, au sein de lquipe anime par Th. HUGUET (Laboratoire mixte INRA-CNRS dAuzeville) , ltude des protines vgtales spcifiques de ltat symbiotique : les nodulines (selon la nomenclature de A. VAN KAMMEN, 1984).
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THkME
La symbiose fixatrice dazote R k o bkm-lgumineuses fait intervenir une diffrenciation coordonne (morphologique et biochimique) dun procaryote et dun eucaryote. Chaque tape dans Itablissement dune telle symbiose, depuis linfection de la plante par le Rhizobium jusqu la fixation de lazote lintrieur des nodules, est sous le contrle rciproque de chacun des deux partenaires (cf. D.P.S. VERMA et T. HOHN, 1984). Parmi les lgumineuses tropicales, Sesbania rostrata a retenu ces dernires annes une attention toute particulire. Cette plante possde en effet des potentialits agronomiques certaines et constitue un modle trs intressant pour des tudes de type fondamental visant la comprhension des mcanismes sous-jacents la symbiose. Sesbania rostrata est en effet un systme qui offre de multiples avantages : des

Sesbania rostrata bge de 5 semaines, prte tre utilise comme engrais uert pour la culture d u riz.

STRUCTURES ET COLLABORATIONS
Ce programme se dveloppe dans un environnement remarquable autant intellectuellement que matriellement (Laboratoire de biologie molculaire des relations plantes-micro-organismes du centre INRA-CNRS dAuzeville). Le dynamisme de lquipe de Th. HUGUET li a celui des quipes diriges par Y.DOMMERGUES permettront le dveloppement rapide et fructueux dune telle opration de recherche.

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- Cycles saisonniers et nycthmraux de la fixation dazote par S . rostrata. - valuation de la fixation de N2 h situ (15 N) et dtermination du seuil dinhibition par lazote combin. - Valorisation des recherches : utilisation de Sesbania rostrata et des Aeschynomene comme engrais vert ; valeur fourragre des lgumineuses nodules caulinaires.

PERSPECTIVES
Les recherches gntiques sur le Rhizobium d e Sesbania rostrata RS 571 auront pour objet de cloner les gnes codant pour la nodulation de tige et la fixation dazote, lobjectif final tant dobtenir les souches plus performantes (travaux effectuer en collaboration avec le laboratoire GEVI de Gand). Un effort particulier sera consacr ltude de linfection chez Aeschvnomene ainsi qu la physiologie des RAzobium. On observera la variabilit gntique de Sesbania rostrata en vue de slectionner des clones prsentant des caractristiques intressantes sur le plan de la croissance, de la fixation dazote et de la rsistance certains pathognes. Le transfert des biotechnologies mises au point au laboratoire en milieu paysan portera la fois sur Sesbania rostrata (utilis comme source dengrais azot en culture irrigue et en culture sche) et sur diffrentes espces dAeschvnomene (utilises comme fourrage et engrais vert).

RESPONSABLES : Bernard DREYFUS, Grard RINAUDO, Didier ALAZARD.

LBBOWATOIRE : Laboratoire de microbiologie des BOI:, ORSTOM - B.P. 1386 Dakar, (SENEGAL).

Mots-cls Fixation dazote, Rhizobium, nodules de tige ( = caulinaires).

En 1980 nous avons dcouvert quune lgumineuse poussant spontanment dans la valle du Sngal Sesbania rostrata possdait la fois des nodules racinaires et des nodules de tige. Cette dcouverte a t le point de dpart dinvestigations approfondies qui ont montr en particulier que le Rhizobium spcifique, appel ORS 571, prsentait des proprits uniques parmi les Rhizobium connus, en particulier la proprit de fixer lazote en culture libre. En outre ce systme est caractris par un potentiel fixateur dazote trs lev et une bonne tolrance lazote comb& du sol. Enfin sur le plan des applications, il a t montr, quutilis comme engrais vert Sesbania rostrata pouvait accrotre considrablement ( X 1,5 ou x 2,O) les rendements de riz. Paralllement ltude de Sesbania rostrata nous avons entrepris des recherches sur une srie de plantes galement nodules de tige mais appartenant au genre Aeschynomene . Les premiers rsultats ont permis de mettre en vidence un certain nombre de diffrences entre ces systmes, diffrences portant non seulement sur la physiologie des Rhizobium impliqus, mais aussi sur les modalits dinfection de la plante-hte. Les recherches en cours portent sur les points suivants : - Rhizobium de Sesbania rostrata :

taxonomie, physiologie, gntique (constitution dune banque de gnes en collaboration avec le GEVI, Gand). - Rhizobium dAeschynomene SPP : taxonomie ; spectre dhte, physiologie. - tude ultrastructurale des processus dinfection. - Identit et proprit des leghmoglobines des nodules de Sesbania rostrata.

Nodules de tige de Sesbania rostrata

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Fixation biologique de lazote par les cyanobactries

certaines caractristiques : rsistance aux nmatodes, non sensibilit la photopriode : potentiel fixateur dazote. - Recherche de nouvelles applications agronomiques et dveloppement des projets de valorisation. Lgumineuses forestires tropicales I1 sagit l dun programme en pleine expansion qui implique deux approches : - Approche microbienne en vue de lobtention de souches de Rhizobium haute: performances et dassociations mycorhiziennes (de prfrence ectomycorhizienne) permettant une meilleure nutrition des arbres en P et certains lments et, par l, une meilleure fixation dazote. - Approche vgtale consistant perfectionner les techniques de multiplication vgtafive in vitro en vue de lobtention de clones caractriss par une productivit et un potentiel fixateur dazote accrus. Lgumineuses graines Les objectifs des recherches effectus dans ce domaine sont court terme. I1 sagit essentiellement de rsoudre des problmes appliqus dont ltude est demande par des instituts ou organismes de mise en vale ur.

LABORATOIRE : Laboratoire de Microbiologie des Sols, centre ORSTOM de Dakar-Hann, Bpite_ Postale No 1386, Dakar-Hann (SENEGAL). E l . : 21.34.80 et 22.34.76

RESPONSABLE : Pierre REYNAUD

Mots-cls - Matriel biologique : CyanophycesAnabaena Anabaena azollae Azolla Azolla pinnata Techniques principales : Fixation biologique de lazote Problmatique : Comprhension des mcanismes de fixation biologique de lazote.

THkME
Les Cyanophyces sont des microorganismes procaryotes photosynthtiques dont certaines espces possdent la facult de fixer et dutiliser lazote atmosphrique pour leur nutrition azote. Cette indpendance trophique leur confre un intrt tout particulier en tant que source dazote dans les cosystmes naturels et cultivs. Le centre ORSTOM de Dakar met laccent plus particulirement sur la symbiose existant entre Azolla et Anabaena azollae. Cette symbiose entre une fougre aquatique et une cyanobactrie fixe des quantits dazote quivalentes celles des lgumineuses les plus efficientes. Son emploi en agronomie et en riziculture se dveloppe en Afrique de lOuest de faon considrable.

giques sur un chantillonnage complet des biotopes et les essais dinoculation des cyanobactries libres (algalisation) ont mis en vidence : - des corrlations positives entre la flore fixatrice et le pH, la concentration en C , N, Ca, P, K et la nature du sol (sableux), - lexistence des populations algales sous trois tats dfinis en fonction des potentialits fixatrices : slectif, accumulatif ou actif, - des probabilits d e russite optimale si lalgalisation avec des souches indignes, en contrlant les prdateurs, a lieu au dbut de ltat actif. Dans le cadre de la lutte contre la dsertification, les connaissances cophysiologiques acquises sont reportes aux crotes de cyanophyces ralentissant lrosion et apportant lazote indispensable la croissance des gramines. Par ailleurs, une tude fondamentale sur la symbiose entre 13fougre aquatique Azolla et la cyanobactrie &baena azollae sest dveloppe. Par rapport aux autres systmes fixateurs dazote utiliss en riziculture, les avantages dAzolla, en plus de son importante activit fixatrice, sont davoir une rapide croissance, dtre cultiv avec le riz sans dpense deau supplmentaire, de prsenter lorsque les conditions sont dfavorables des variations morphologiques spcifiques, de limiter la croissance des adventices, de ncessiter trs peu de manipulation, davoir une dcomposition lente favorisant un effet rsiduel.

STRUCTURES
Le laboratoire de microbiologie des, sols de Dakar comporte un quipement complet pour Ptude de la physiologie et de lcologie microbienne ainsi quun terrain dessai et des serres. Le personnel affect ce programme comporte quatre chercheurs et deux stagiaires.

PERSPECTIVES
Sous les conditions climatiques spcifiques la zone tropicale sche (hautes intensits lumineuses, longue priode de scheresse), les tudes cophysiolo79

Les tudes effectues sur une souche indigne Azolla pinnata varit africana ont aussi mis en vidence : - les caractristiques principales de la croissance ; de la fixation dazote et de la reproduction sexue, - une hirarchisation des facteurs favorisant son utilisation, - un intrt certain en riziculture traditionnelle. Les tudes physiologiques sur la symbiose sont actuellement limites par limpossibilit de cultiver la cyanobactrie concerne (Anabacna azollae) Itat libre. Une approche pour rsoudre ce problme a t faite en travaillant directement sur le DNA de cette cyanobactrie, et en employant les techniques de gnie gntique. La mise en vidence des parents antigniques entre les Anabaena libres et symbiotiques doit permettre court terme de dterminer les souches libres proches des souches symbiotiques. I1 sera alors possible de reconstituer la symbiose.

RESPONSABLE : Pierre ROGER

LABORATOIRE : mission ORSTOM II.R.R.1. (International Rice Research Institute), P.O. Box n o 933, Manila (PHILIPPINES) Tl. : 88.48.69 et 88.45.14.

STRUCTURES ET COLLABORATIONS
Lquipe comprend 3 chercheurs (P. REYNAUD, C. FRANCHE-BOGUSZ, C. BOIVIN), un technicien et un manuvre. Elle travaille dans des conditions permettant de mener terme lensemble de ce programme. Les tra; vaux de gntique sont entrepris avec lInstitut Pasteur.

Mots-cls Matriel biologique Cyanophyces libres fixatrices dazote - Techniques principales : Toutes celles de la fixation biologique dazote des fins agronomiques (riziculture) - Problmatique : Techniques de fertilisation biologique

- la facilit dtablissement du systme fixateur, - des intrants ncessaires pour la production dazote fix et sa mise-disposition pour la plante hte, - la superficie totale des surfaces cultives ou cultivables concernes.
Ainsi, les cyanophyces libres ont une potentialit moyenne, de lordre de 20 30 kg dazote fix par hectare et par cycle cultural, compense par une possibilit dutilisation leve qui stend des sols faiblement acides aux sols alcalins. Certes, les mthodes pratiques dutilisation de ces micro-organismes ne sont encore quimparfaitement dfinies. Toutefois, trois techniques sont utilisables, sparment ou en association : - le placement en profondeur de lengrais azot, Les cyanophyces fixatrices dazote atmosphrique sont des organismes peu comptitifs qui sont supplants par une flore eucaryote non fixatrice dazote atmosphrique, lorsque lengrais azot est pandu la surface du sol. En consquence, le placement en profondeur de lengrais azot dune part permet le dveloppement de la flore algale fixatrice dazote atmosphrique et donc un apport supplmentaire dazote et dautre part, vite le dveloppement dune flore algale non fixatrice dazote atmosphrique, qui entrerait en comptition avec le riz pour sa nutrition azote et qui, en augmentant le pH de leau de submersion, entraine dabondantes pertes dazote par volatilisation,

TH~ME
Dans le cadre dune convention existant entre IORSTOM et lI.R.R.1, une quipe dveloppe un programme sur les cyanophyces libres, leur cologie et leur utilisation pratique en riziculture. En effet, les rizires inondes constituent un environnement favorable leur dveloppement et la possibilit dutilisation des cyanophyces comme engrais organique en riziculture a t mentionne il y a bientt une cinquantaine dannes. Toutefois, les mcanismes daction de ces organismes sont encore mal connus et leur utilisation pratique est svrement limite par un manque chronique de connaissances sur leur cologie. Cest lobjet mme du programme $e recherches men par Iquipe de P. ROGER et ses collaborateurs.

7 . 1 I

PERSPECTIVES
Les possibilits dutilisation et lintert agronomique dun systme fixateur dazote dpendent dau moins quatre facteurs : - la potentialit absolue (quantit dazote fix par hectare et par an),

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- le contrle des populations de prdateurs des cyanophyces, principalement des gastropodes et des microcrustacs, par des pesticides d'origine vgtale peu coteux, - l'inoculation des rizires avec des souches indignes ou importes, leur intrt est vident. Le cot de leur utilisation est rduit, un facteur important pour leur emploi. Ainsi, les deux premires mthodes peuvent tre considres comme une composante, mineure sur le plan financier, d'un systme de pratiques culturales intgres. La troisime mthode implique l'emploi d'un inoculum sec dont la production peu coteuse peut tre assure directement par le riziculteur. II en rsulte une perspective claire et cohrente quant au devenir de ce programme de recherches.

STRUCTURES ET COLLABORATIONS
L'tude des cyanophyces libres fixatrices d'azote constitue l'un des trois programmes majeurs du Dpartement de Microbiologie du Sol de U.R.R.I., o les activits de recherches sont orientes principalement vers l'tude des systmes fixateurs d'azote utilisables en riziculture. L'quipe de recherche comprend actuellement un e( visiting scientist (P. ROGER, ORSTOM) un associate visiting scientist (J. GRANT, Cornell University, ITHACA, U.S.A.), un post doctoral fellow (P.M. REDDY, Shilong University, Inde), deux assistantes, une technicienne et un manceuvre . Aprs une phase prospective de quatre ans durant laquelle les tudes ont t conduites principalement dans les laboratoires, les serres et la ferme exprimentale de l'I.R.R.I., les recherches entrent maintenant dans une phase d'tudes collaboratives. Une enqute prospective pour l'tablissement d'un rseau d'information et d'tude de l'cologie et de l'utilisation des cyanophyces dans les rizires a t effectue en 1984. Des contacts ont dj t tablis avec des universits et des centres de recherches aux Philippines, en Egypte et en Inde.
) )

RESPONSABLE : Bernard MALAURIE

LABORATOIRE : Laboratoire de Biotechnologie, centre ORSTOM d'Adiopodoym, B.P. V-51, Abidjan (COTE-D'IVOIRE).

((

) )

Mots-cls - matriel biologique : Igname - techniques principales : mthodes de cultures in vitro Techniques de fusion de protoplastes - problmatiques : Amlioration des cultivars

tance, morphologie des tubercules permettant la mcanisation de la rcolte, rsistance aux maladies, facteurs de conservation, productivit,. ..

STRUCTURES ET COLLABORATIONS
Ce programme, initi fin 1984, n'est actuellement dvelopp que par un MALAURIE). seul chercheur (B. Toutefois, il s'inscrit en droite ligne dans les objectifs prioritaires du plan scientifique quinquennal ivoirien, redfini en 1984. I1 constitue l'un des trois seuls ples innovateurs en matire de biologie l'ORSTOM en Cte-d'Ivoire. I1 s'intgre dans notre participation b l'acquisition des pays en voie de dvelppement l'auto-suffisance alimentaire. Ce programme bnficiera pour se poursuivre dans les meilleures conditions possibles dans un trs proche avenir djune structure particulirement importante : le laboratoire de Biotechnologie du Centre ORSTOM d'Adiopodoum. Par ailleurs, ce travail s'effectuera en concertation avec la Facult des Sciences d'Abidjan et PIDESSA (Bouak, Cte-d'Ivoire) . Une collaboration effective devrait s'engager fin 1985 - dbut 1986 avec le C.I.R.A.D. (Dpartement I.R.A.T.), sous la forme d'un dtachement d'un chercheur senior, au sein de nos structures. N

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) )

THME ET PERSPECTIVES
L'igname constitue une source alimentaire majeure assurant 12 % de l'alimentation dans les zones intertropicales. La production de l'Afrique de l'Ouest reprsente les 3/4 de la production mondiale (de l'ordre de 25 millions de tonnes annuelles). I1 semble difficile sinon impossible d'amliorer les varits existantes par les mthodes gntiques classiques (hybridation par voie sexue), du fait de l'absence de fleurs ou de l'existence d'incompatibilits chez certaines espces cultives. Par ailleurs, le cot en main-d'uvre de l'exploitation des varits apprcies est trs lev, vu les problmes poss lorsque l'on envisage la mcanisation des rcoltes (tubercules allongs, gros et profondment enfouis). D'autre part, certaines espces ou cultivars prsentent une grande sensibilit vis--vis de nombreuses maladies (anthracnose, viroses, bactrioses,. ..) . Les mthodes de culture in vitro et en particulier les techniques de fusion de protoplastes, peuvent permettre de combiner diffrents caractres susceptibles de rsoudre ces problmes : app21

RESPONSABLES : BUFFARD-MOREL Jacqueline HANOWER Janina VARECHON Christian.

ESnBOWATOIRE Laboratoire de physiologie vgtale, Services Scientifiques Centraux de 1'ORSTOM 70-74. route d'Aulnav.

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Mots-cls - Matriel biologique : Palmaces (Eleais suineensis, Cocos nucifera) Sesbania spp. - Techniques employes : Multiplication vgtative in vitro (embryogense somatique) culture h vitro dembryons, protoplastes. Problmatiques : Reproduction vgtative in vitro des espces vgtales rcalcitrantes. Slection vgtative. Hybridation somatique. Rapport nuclo-cytoplasmiques.

Le laboratoire de Physiologie vgtale de IORSTOM Bondy (France) conduit depuis les annes 70 des recherches sur la multiplication vgtative des Palmaces grce aux techniques de culture in vitro. Ces travaux ont t initis par MARTIN et RABECHAULT sur le palmier huile (Eleais suineensis) et tendus depuis 1980 au Cocotier (Cocos nucifera). Plus rcemment, la mise au point de la rgnration de protoplastes a t aborde en vue de dvelopper des recherches sur la cration de variabilit par la fusion somatique. Dans la cadre de lUR 507 (Bases biologiques de lamlioration des plantes tropicales) relevant du dpartement E (Indpendance alimentaire), trois oprations de recherches sont en cours : - la multiplication vgtative in vitro du palmier huile - la multiplication vgtative in vitro du cocotier - la fusion et la rgnration de protoplastes (Sesbania).

PERSPECTIVES
a) La multiplication vgtative des Palmaces par embryogense somatique. Les travaux sur la culture des tissus vgtaux dvelopps depuis une cinquantaine dannes ont abouti la rgnration de plantules et de plantes entires. Lutilisation pratique de ces rsultats sest considrablement dveloppe au cours de ces derniares annes. Cette technique permet en particulier daccrotre le taux de multiplication des techniques horticoles classiques (bouturage, greffage) et surtout de reproduire vgtativement des espces vgtales que lon ne pouvait reproduire par cette voie. Cest le cas des palmiers qui ne possdent quun seul bourgeon vgtatif terminal. Le palmier huile se reproduit normalement par fcondation croise entre parents htrozygotes, et il en rsulte une descendance contenu gntique htrogne et des rendements individuels variables. La multi-

plication vgtative in vitro des individus les plus performants dans un schma nouveau de slection vgtative devrait accrotre la production dhuile lhectare. La technique de culture in vitro sapplique des tissus de folioles provenant de la rgion basale des feuilles juvniles dont le prlvement nentrane pas la mort du pied-mre. La formation dembryodes sur cal permet de rgnrer des plantules. Cette technique de multiplication vgtative du palmier huile a t brevete par lA.N.V.A.R. La conformit des vitroplants issus de palmiers slectionns est teste en Cte dIvoire : les premires floraisons et fructifications savrent normales. Des travaux analogues sont en cours chez le cocotier et sur le point daboutir la rgnration dembryons somatiques sur cal et de plantule. Par contre, la culture in vitro dembryons zygotiques immatures de cette espce est parfaitement matrise. b) La rgnration de protoplastes Une voie davenir explorer dans le domaine de la variabilit sest ouverte avec le transfert du matriel hrditaire appartenant des espces ou des genres isols par la reproduction sexue grce lhybridation somatique. La fusion de protoplastes permet aussi dassocier des cytoplasmes diffrents et dengendrer toutes sortes dassociations cytoplasme - noyau sous la forme d e cybrides. Cette technique ouvre la porte linvestigation de rapports nuclocytoplasmiques varis. Dans le cas de Sesbania rostrata, plante ligneuse portant des nodules caulinaires en relation avec la fixation symbiotique de lazote, le but recherch est le transfert de cette aptitude la nodulation caulinaire dautres espces du genre Sesbania et dautres lgumineuses.

- 1salle et le matriel de cytologie - 1 serre tropicalise humide (100

m *). Le transfert de ce laboratoire vers le centre ORSTOM de Montpellier est prvu pour 1987. Ce serait lamorce dun nouveau laboratoire ORSTOM de culture in vitro. I1 assurera bien entendu la continuit des actions de recherche en cours sur la multiplication vgtative des Palmaces, dans le sens dun approfondissement des rsultats acquis. Ce sera aussi loccasion de dvelopper un thme de recherche commun aux gnticiens et aux physiologistes centr sur la variabilit naturelle ou en culture in vitro et la conservation des ressources gntiques. Lunicit de ce thme fdrateur et interdisciplinaire entrainera progressivement le remplacement des actions de recherches en cours par de nouvelles oprations. Soulignons aussi que dautres quipes de recherches ORSTOM sont aussi intresses par le laboratoire de culture in vitro de Montpellier (slection de vitroplants rsistants aux maladies, culture de suspensions cellulaires par la production de susbtances naturelles, etc...) . Linstallation dune guipe pionnire Montpellier sera possible en 1987 condition de disposer dun laboratoire de culture in vitro quip et dune tropicalise.

CsLLABowATasNS
Les recherches condui(es sur la multiplication vgtative des Palmaces ont t ralises en collaboration troite avec lIRHO, dans le cadre dune convention signe en 1980. Le procd de multiplication in vitro mis au point Bondy est valoris dans des units pilotes de production de vitroplants de palmier huile en Cte dIvoire (1980), en Indonsie (SOCFINDO 1983) et en Malaisie (FELDA 1983) avec lappui technique de IIRHO et de lORSTOM. Dautres projets sont ltude. Les responsables de ces units sont forms par lORSTOM (Bondy) et lIRHO (La M). Ce laboratoire entretient des relations avec de nombreux laboratoires universitaires franais (Orsay, Strasbourg), lINRA (Versailles) et des laboratoires bangers, en particulier du fait de laccueil de stagiaires. Lopration de recherche sur les protoplastes de Bondy est associe des oprations ORSTOM conduites dans les PVD : - la fusion de protoplastes digname (Adiopodoum, Cte dIvoire) - la fixation symbiotique de lazote (Dakar, Sngal).

STRUCTURE
Le laboratoire de Physiologie de Bondy se consacre entirement aux techniques de culture in vitro : culture de tissus, dembryons isols et de protoplastes. Actuellement le laboratoire compte 4 chercheurs ORSTOM, 2 chercheurs IRHO et 6 techniciens. I1 accueille annuellement 2 ou 3 stagiaires. Les infrastructures se rapportant la culture in vitro sont constitues de : - 1salle d e prparation des milieux et une laverie - 2 salles densemencement comportant 7 postes striles - 4 salles de culture climatises, avec ou sans clairage (60 m *)

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- Techniques employes : celles de la solubilisation et de la purification denzymes membranaires ayant une fonction vectorielle (chromatographie varie sur supports nouveaux ; reconstitution ; liposomes ;...) - Problmatiques : phylognie de lATPase tonoxoplastique ; son rle dans la compartimentation cellulaire vgtale ; conception de bioracteurs varis.
THEME ET PEWSECT%VES
I1 existe un grand nombre de molcules biologiquement actives dans le compartiment de la cellule vgtale. Dans un programme long terme, il est propos dtudier les mcanismes de leur accumulation et de leur squestration dans ce compartiment cellulaire ainsi que les facteurs les contrlant autant au niveau biochimique (aspect retenu jusqu prsent) quau niveau gntique (en cours dlaboration). Lun des ces facteurs est lnergisation de tonoplaste par lactivit adnosinetriphosphatase (ATPase) qui catalyse un flux electrognique de protons et, par consquent, accroit la force motrice protonique, source dnergie de tous les transports actifs de soluts, caractriss juqu prsent, entre les compartiments cytoplasmique et racnolaire ( c f .B. MARIN, 1985). Cette ATPase tonoplastique correspond un nouveau type de pompes-protons, intermdiaire entre les types reversibles ou non, mis en vidence actuellement (cf. P.C. MALONEY et T.H. WILSON, 1985 ; B. MARIN l a 1985). Ltude approfondie de ses proprits nous amnera la comprarer aux activits ATPases membranaires. Elle permettra entre autre den dgager son degr de parent avec les deux autres classes dATPases membranaires : dune part, lATPase rversible du type F, F, (mitochondries, chloroplastes, membranes bactriennes, ...) et dautre part, lATPase non rversible du type E, E, (membranes plasmiques, membranes gastriques, membranes de reticulum sarcoplasmique, certains systmes procaryotiques impliqus dans le transport dions comme Na+ , K+ , ou Ca,+ , ...). Elle se rappocherait des systmes membranaires hydrolysant lATP caractriss au niveau dautres vacuoles de vgtaux (levures, Neurospora, .. .), de sranules chromaffiniaues. de sranules synaptiques ,... (cf. B. MARI 1985). La caractrisation de son activit lectrogne implique la formation de liposomes fonctionnels, o un gradient electrochimique de protons peut tre crd artificiellement.Selon la nature de lenzyme concerne (rversible ou non), il est possible de concevoir un bioracteur synthtisant lATP.

RESPONSABLE : Bernard MARIN

MBOWATOIRES : - Groupe ATP du Laboratoire des biosystBmes simplifis, Association

pour la Recherche en Bioejergie Solaire (A.R.B,.) Centre dEtudes Nuclaires de Cadarache, Bstiment No 161, Boite Postale No 1, 13.115 Saint-Paul-Lez-Durance (FRANCE) Tl. : (42) 25.46.39,
I

- Laboratoire de physiologie vgtale applique, Universit des Sciences et Techniques du Languedoc, Place E u g n e Bataillon 34060 MONTP~LLIER-CEDEX (France) Tl. : (67) 63.91.44, - Laboratoire de physiologie vgtale, centre ORSTOM dAdiopodoum, B.P. V-51, ABIDJAN (CtedIvoire).
I

Mots-cls

- Matriel biologique : latex dHevea brasiliensis ; ATPases membranaires de diffrentes origines (bactrienne. chlorodastiaue. mitochondriale, granules chromaffimiques, microsomes de diffrents tissus vgtaux de plantes suprieures, tonoplastique).
* I

u.

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STRUCTURES
I1 sagit de la continuation dun travail initialement effectu par J . DAUZAC (1975 et 1977). En effet, ds 1975, il avait caractris une activit ATPase lie au tonoplaste du latex &Hevea brasiliensis. Deux annes plus tard, il en dcrivait les principales proprits. Son activit pompe--protons lectrognique tait, caractrise par la suite , ; H. CRETIN, (B. MARIN e t a l .1982 1983). Par consquent, ce programme est ralis essentiellement par deux laboratoires : - le Laboratoire de Physiologie Vgtale du Centre ORSTOM dAdiopodoum (ABIDJAN, Cte-dIvoire), avec lquipe de M. CHRESTIN, - le Laboratoire d e Physiologie Vgtale Applique de luniversit des Sciences et Techniques du Languedoc (MONTPELLIER, F r a n c e ) , avec lquipe du Professeur J. DAUZAC,

Dans le meilleur des cas, dans la mesure o un consensus est trouv, B. MARIN envisage de le continuer dans le Laboratoire des Biosystmes Simplifis de lA.R.B.S. Chacune de ces structures est susceptible daccueillir des chercheurs en position post-doctorale ou non, selon des modalits dfinir cas par cas.

KOMOR, 1985).La plupart des quipes travaillant dans ce domaine considrent ces rsultats comme un lment de rfrence permettant de faire progresser utilement et rapidement leur propre recherche.

Les lutodes du latex dHevea brasiliensis correspondent un compartiment vacuolaire qui a lavantage dtre isol facilement et sans contaminations majeures, dans un tat natif (cf. J. DAUZAC et, 1982). Cette proprit permet de caractriser sans ambiguit une activit ATPase tonoplastique pompe--protons electrogne. Cette activit a t solubilise et purifie (B.MARIN et E. KOMOR, 1985 ; B. MARIN, J. PREISSER et E. 25

D o des collaborations importantes avec de nombreux laboratoires autant franais qutrangers (E.N.S.A.M. ; Institut fr Botanik, T.H.D., Darmstadt, R.F.A. ; Botanisches Institut, Universitt Bayreuth, Bayreuth, R.F.A. ; McGill University, Department of Biology, Montreal, Canada, Faculty of Science, University o f California, Division of Natural Sciences, Thimann Laboratories, Santa-Cruz, U.S.A. ; Insitute of Biochemistry and Physiology of Microorganisms, U.S.S.R. Academy of Sciences, Puschino, Moscou, U.R.S.S. ; Laboratoire de Physiologie Vgtale, Universit de Paris VII, Paris...)

RESPONSABLE : Herv CHRESTIN

LABORATOIRE : Laboratoire de biotechnologie, centre ORSTOM dAdiopodoum, B.P. V-51, Abidjan COTE DIVOIRE

ST ET
Les objectifs ainsi dfinis sont dvelopps sur la base dun projet cherchant associer le laboratoire de biotechnologie du centre ORSTOM dAdiopodoum avec dautres structures mtropolitaines o u non ayant des proccupations voisines (groupe des cellules vgtales et groupe ATP de lAssociation pour la Recherche en Bionergie solaire, C.E.N. de Cadarache, SAINT-PAUL-LEZ-DURANCE, France, par exemple). Lquipe ORSTOM du centre dAdiopodoum travaillant sur ce programme se compose de 5 chercheurs (H. CHRESTIN, C. NEFF, J.J. BONO, Th. HARDY et I. CLARE), dun technicien suprieur (M. NIAMIEN NGORAN) et dune importante quipe dassistants et de prparateurs. Un phytopharmacien et/ou un pharmacochimiste ivoiriens devraient tre recruts avant la fin de lanne 1985 pour renforcer lquipe actuellement en place. Elle bnficiera dun laboratoire actuellement en cours dinstallation et qui est fonctionnel depuis fin 84.

Mots-cls matriel biologique : Espces vgtales tropicales dintrt thrapeutique techniques principales : Slection et clonage rapide. Synthse de molcules diverses. Optimisation de bioracteurs en condition htrotrophe, mixotrophe ou photoautotrophe.

varit de substances utiles lhomme semble devenir une ralit. Ce type de valorisation permet de rsoudre en partie les difficults lies leur approvisionnement souvent saisonnier et alatoire mais aussi la grande htrognit des teneurs en principes actifs souvent observe dans le matriel rcolt.

- problmatiques : Production de mtabolites secondaires haute valeur ajoute par la technique de cultures vgtales.

I1 est vident que ce type de valorisation implique la mise au point dun procd biotechnologique moins coteux que les procdures longues et onreuses dextraction partir de la plante entire, des mthodes souvent fastidieuses et caractrises par un faible rendement, les classiques mthodes de la synthse chimique tant pratiqoement non exploitables dans ces cas.
Do court terme, le franchissement des tapes suivantes envisager : - le screening des espces vgtales offrant des possibilits intressantes pour tudier les trois voies essentielles productrices de substances naturelles reconnues importantes (voie mvalonique, voie phnylpropanode, synthse des alcalodes), - la slection et le clonage rapide des espces, des varits (plantes entires) et des souches (cellulaires), les plus performantes pour la production des substances recherches (cibles), - la culture, en bioracteurs, de suspensions cellulaires slectionnes, assurant, en conditions htrotrophes, mixotrophes ou photo-autotrophes, la production optimise gntiquement et physiologiquement en continu, de substances naturelles dintrt thrapeutique haute valeur ajoute.

Les pays en voie de dveloppement se heurtent quotidiennement aux problmes poss par les grandes endmies et le manque chronique de soins de sant primaire apports aux populations locales. Ainsi, aussi paradoxalement que cela puisse paratre, les plantes mdicinales de ces pays constituent encore de nos jours la principale source de la pharmacope africaine. Dans de nombreux cas, le principe actif contenu dans ces plantes est connu. Leur valorisation sinscrit en droite ligne dans les objectifs prioritaires du plan scientifique quinquennal ivoirien redfini en 1984. En consquence leur valorisation selon des mthodes modernes doit tre une proccupation prendre en compte par IORSTOM dans le cadre des nouvelles orientations prises. Elle simpose dautant que les applications industrielles de production par des cellules vgtales en culture in vitro dune grande

Elles sont multiples avec les laboratoires dont la problmatique est la mme. Elles impliquent lagrment pralable des autorits de tutelle (Conseil ORST_OM du dpartement F, Ministre de 1Education Nationale et de la Recherche Scientifique de Cte-dIvoire). Ds maintenant, on peut noter les relations privilgies existant avec le groupe des cellules vgtales de IA.R.B.S., et M. F. TROUSLOT, en particulier.

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Mots-cls - Matriel biologique : Palmier huile, Cocotier - Limacodidae - Hispinae - Densovirus - Picornavirus - Techniques principales : Techniques virologiques de purification et identification de virus - Tests de pathognite - Essais sur le terrain.

THkME :
Les palmeraies et cocoteraies sont des Biotopes relativement stables qui abritent des populations de divers ravageurs. Ces populations sont sujettes dimportantes fluctuations. Un des principaux facteurs de contrle naturel de ces populations en milieu tropical humide semble tre les virus entomopathognes. Les tudes portent surtout sur les virus de Limacodidae, Lpidoptres reprsents sur Palmacae dans toute la zone intertropicale. Deux grands groupes de virus libres ont retenu lattention en raison de leur msence Dermanente dans les populatibns de Lkacodidae et de des picornavirus.

RESPONSABLE : Gilles FEDIEWE

LABORATOIRE : Laboratoire dentomovirologie - centre ORSTOM DAdiopodoum - B.P. V 51 Abidjan - COTE DIVOIRE

PERSPECTIVES :
Les densovirus et picornavirus dinsectes semblent capables en palmeraie aprs une pizootie dassurer le contrle des populations pendant plusieurs mois. Lors dessais de terrain le contrle de populations de ravageurs a t obtenu par traitement des doses extrmement faibles (environ 30 - quivalent chenille lhectare). Sous rserve de tests de pathognite sur vertbrs, ces virus prsentent donc de trs intressantes potentialits dutilisations. Si leur spcificit est en gnral trs troite, il semble exister des souches spectre relativement large permettant denvisager une utilisation industrielle. D u n point de vue plus fondamental Itude de ces virus prsente un trs grand intrt dans diffrents domaines et notamment en biologie molculaire et en pidmiologie.

STRUCTURE ET COLLABORATIONS :
Ces tudes sont menes en trs troites collaborations avec la Station INRA-CNRS de Pathologie compare de Saint-Christol-les-Ales, IIRHO (Institut de Recherche sur les Huiles et Olagineux) et la Station INRA de lutte biologique de la Minire.

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Elle peut tre conue dans le cadre de programmes de lutte intgre. La production industrielle d e virus peut tre envisage dans le pays utilisateur avec des investissements relativement peu levs. Les tudes portent sur la mcanisation de la production de virus sur lhte. La souche de virus multiplie prsente lavantage davoir un spectre dactivit relativement large pour un baculovirus. Elle est active sur une dizaine despces de ravageurs des cultures. Une unit pilote de productions est en cours de montage.

STRUCTURES ET @OELABOWATI8NS
LABORATOIRE : Station INRA de Lutfe biologique et de Biocoenotique de la Minire - 78000 Versailles - T], (3) 048.81.13 -(3) 723.38.29
Cette action est mene en collaboratiOn trs troite avec les stations INRA de la Minire et du Magneraud ainsi quavec IIRCT (Institut de Recherche sur le Coton et les fibres Textiles). Lquipe ainsi constitue travaille en collaboration trs troite avec la Socit Calliope.

Mots-cls - Matriel biologique :Baculovirus Polyedrose Nuclaire - Noctuelles Mamestra brassicae. Techniques principales :levage Milieux semi-artificiels - Extractions Purifications. - Problmatique : Production industrielle - Biopesticide.

THhE
Les Baculovirus de Polyedrose nuclaire sont des virus qui nont t jusqu ce jour rencontrs que chez des invertbrs. Ils sont responsables dpizooties dans les populations de ravageurs de cultures. Les essais de pathognite vis-vis des vertbrs, raliss avec des virus de ce groupe, ont t totalement ngatifs. Leur utilisation comme pesticides biologiques prsente certains avantages : - Inocuit vis--vis des vertbrs. - Grande spcificit - Ils ont donc un impact minimal sur la biocoenose et grce la slectivit de leur action, leur utilisation permet la mise en uvre dautres techniques de lutte biologique (lutte par entomophages). - Absence de Pollution. - Utilisation possible en association avec des pesticides classiques.

PERSPECTIVES :
Lutilisation de Baculovirus pour la lutte contre les ravageurs des cultures peut parfaitement tre envisage pour un certain nombre de productions tropicales, comme le coton ou les cultures marachres.

Cel/uleS,atteintes d e Polydrose nuclaire

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