Microbiologia de Los Alimentos

MICROBIOLOGA DE ALIMENTOS
A - 1
Efecto de una combinacin de Staphylococcus xylosus, Debaryomyces
hansenii y Penicillium chrysogenum en la ene!acin de "ol#tile$ du!ante
la madu!acin de lomo$%
Alonso, M., Asensio, M.A., Bermdez, E., Sosa, M.J. y Nez, F.
Higiene de los Alimentos, Facultad Veterinaria. Universidad de Extremadura. Apdo. correos 643.
10.01 !"ceres. #nune$%unex.es
Algunas cepas de mohos, levaduras y estafilococos muestran una gran
capacidad de generar compuestos voltiles in vitro o en productos crnicos
fermentados cuando se inoculan de forma individual. Sin embargo no se ha
establecido su influencia cuando se inoculan conjuntamente en productos
crnicos que, adems, no incorporan carbohidratos. El objetivo del presente
trabajo es estudiar la influencia de una combinacin de microorganismos en la
formacin de compuestos voltiles en lomo madurado, para su evaluacin
como posibles cultivos iniciadores.
Se establecieron tres lotes de lomos, uno control sin inocular, otro inoculado
con &. x'losus Sx5EA, (. )ansenii Dh345 y *. c)r'sogenum Pg222 y un
tercero sin inocular tratado con la proteasa Epg222 procedente de *enicillium
c)r'sogenum para conocer el efecto debido al aumento de la proteolisis. Los
lomos se maduraron 61 das en condiciones habituales de una industria crnica
(7C y 75% de humedad). Los compuestos voltiles fueron extrados con fibra
de polidimetilxilosano e identificados por GC-MS, comprobando sus ndices de
Kovats y sus espectros con los de las bibliotecas Wiley y NST/EPA/NSH.
Como era de esperar no hubo diferencias para los terpenos y otros derivados
de las especias y condimentos utilizados. La variedad de compuestos de
oxidacin lipdica (alcoholes, aldehdos y steres lineales) fue mayor en el lote
inoculado probablemente debido a la actividad lipoltica de estos
microorganismos. En control no inoculado no se detectaron compuestos
relacionados con el catabolismo de aminocidos, mientras que en los otros
lotes se detectaron 3-metilbutanal y benzaldehdo y en el inoculado con
microorganismos, adems, pirazinas y cidos ramificados. La presencia de
derivados de aminocidos en lomo con proteasa y no en el control, con una
poblacin microbiana similar, puede deberse a la mayor disponibilidad de
precursores por la actividad del enzima aadido.
En conclusin los microorganismos inoculados muestran una mayor capacidad
que la poblacin salvaje para generar compuestos voltiles en lomo,
especialmente los derivados del catobolismo aminoacdico. Por lo tanto las
cepas de &. x'losus, (. )ansenii y *. c)r'sogenum estudiadas podran ser
utilizadas como cultivos iniciadores para la elaboracin de lomo curado.

Agradecimientos. Este trabajo ha sido realizado como parte del proyecto
CAL02-085 financiado por el nstituto Nacional de nvestigacin y Tecnologa
Agraria y Alimentaria dentro del Programa Nacional de Alimentacin. M. Alonso
fue beneficiaria de una beca FP de la Junta de Extremadura.
+icro,iolog-a de Alimentos .
A - 3
Sen$ibilidad del &'&tido antif(nico de Penicillium crustosum a di"e!$a$
&!otea$a$%
Acosta, R.; Bermdez, E.; Nez, F. y Asensio, M. A.
Higiene de los Alimentos. Facultad de Veterinaria. Universidad de Extremadura. 1001, !"ceres.
E/mail0 racosta%unex.es.
Durante el proceso de maduracin o almacenamiento de algunos alimentos se
desarrolla una poblacin fngica superficial potencialmente toxignica. La
utilizacin de tratamientos qumicos para su control plantea serios
inconvenientes. No obstante, la obtencin de pptidos de origen microbiano
con actividad antifngica abre nuevas perspectivas en este sentido. En trabajos
anteriores se ha obtenido un pptido con actividad antifngica producido por un
moho aislado de jamn curado, que ha sido caracterizado como *enicillium
crustosum. Dicho pptido muestra un amplio espectro de inhibicin frente a
mohos aislados de jamn curado y frente a otros como Aspergillus #lavus con
gran potencial toxignico. La utilizacin del pptido en alimentos depende por
una parte de que se mantenga activo en presencia de enzimas de origen
microbiano y de proteasas de uso alimentario, y por otra parte de los posibles
efectos indeseables en el consumidor (toxicidad, alergias, trastornos digestivos,
etc.), que podran eliminarse si el pptido se degradase con enzimas
digestivos. El objetivo de este trabajo ha sido estudiar la sensibilidad de dicho
pptido al tratamiento con proteasas de origen diverso.
Los enzimas utilizados fueron: tripsina, pepsina, lisozima, papana, ficina y dos
proteasas producidas por &teptom'ces griseus y Aspergillus or'$ae, todos ellos
a una concentracin final de 0.5 mg/ml. El tratamiento se aplic a distintas
concentraciones del pptido (de 50 a 2.5 gN/ml) en las condiciones ptimas
de actuacin del enzima, durante 12 horas. Posteriormente se evalu la
prdida de actividad del pptido mediante ensayos de inhibicin de A. #lavus en
placas microtiter. Los enzimas ms activos fueron la proteasa de A. or'$ae
(p<0.01), tripsina (p<0.05) y fundamentalmente la proteasa de &. griseus
(p<0.001), que produjeron una prdida significativa de actividad a una
concentracin del pptido de 25 gN/ml. Tambin se mostr eficaz el
tratamiento con pepsina, ficina y papana a concentraciones del pptido de 12.5
gN/ml. A concentraciones inferiores el pptido pierde actividad con todos los
enzimas ensayados (p<0.05).
La limitada actividad de los enzimas puede deberse a una conformacin cclica
del mismo o a estar compuesto por aminocidos caractersticos de
microorganismos. La actividad mostrada tanto por las proteasas de origen
microbiano como por tripsina o pepsina sobre el pptido permite ser optimistas
respecto a su empleo en alimentos.

Este trabajo se ha realizado con el proyecto AGL2004-06546-AL (Ministerio de
Educacin y Ciencia y FEDER). Raquel Acosta es beneficiaria de una beca FP
del Ministerio de Educacin y Ciencia.
+icro,iolog-a de Alimentos 3
A - 5
Ca!acte!i)acin !#&ida de le"adu!a$ ai$lada$ de *amn ib'!ico mediante
an#li$i$ de !e$t!iccin del ADN mitocond!ial
Casado, E.M., Andrade, M.J., Mena, O., Ramos, B. y Rodrguez, M.
Higiene de los Alimentos. Facultad de Veterinaria. Aptdo. de !orreos 643. 1001/!"ceres. E/mail0
evamcs%)otmail.com
A lo largo del proceso de maduracin del jamn ibrico se desarrolla una
abundante poblacin microbiana entre la que destacan las levaduras. El inters
tecnolgico de estos microorganismos radica en la generacin de compuestos
voltiles responsables del aroma a producto curado. Se han encontrado una
gran variedad de biotipos entre las distintas especies en funcin de las distintas
localizaciones geogrficas de produccin, que generan diferentes perfiles y
concentracin de voltiles. Esto se traduce en diferencias en el aroma de los
jamones dependiendo de la industria de procedencia.
Es necesario desarrollar mtodos simples y rpidos para caracterizar las
levaduras a nivel de especie y cepa como herramienta para controlar las
levaduras implantadas durante la maduracin. Entre estos mtodos destaca el
anlisis de restriccin del ADN mitocondrial (ADNmt). El objetivo del presente
trabajo es optimizar un mtodo de anlisis de restriccin del ADNmt que
permita diferenciar las levaduras seleccionadas en el menor tiempo posible.
Para el desarrollo de este trabajo se han utilizado 25 aislamientos de levaduras
procedentes de distintas Denominaciones de Origen de jamn ibrico. Se
optimizaron dos protocolos: a) realizando la digestin del ADN durante toda la
noche y b) realizando la digestin del ADN en un horno microondas durante 1
min (Lpez y col., 2001). Se utilizaron los enzimas de restriccin Hae111 y H)a1.
Con ambos enzimas se obtuvieron 8 patrones de bandas diferentes, con
perfiles de 3 a 6 bandas con el Hae111 y perfiles de 2 a 10 bandas con el H)a1.
20 aislamientos se agruparon en 5 patrones diferentes identificados como (.
)ansenii, 4 se agruparon en 2 patrones que correspondan a !andida sp. y un
aislamiento no se pudo identificar. Los resultados obtenidos con ambos
enzimas estn correlacionados, agrupando los diferentes aislamientos en los
mismos patrones. Los resultados obtenidos con el mtodo rpido de digestin
enzimtica fueron idnticos a los obtenidos por el mtodo de digestin
convencional, observndose en ambos casos los mismos fragmentos de
restriccin.
El grado de diferenciacin conseguido con estos dos enzimas de restriccin
permite un buen nivel de discriminacin y aportan informacin suficiente para
poder tipificar a nivel de cepa los aislados de levaduras de jamn ibrico.
Adems, la utilizacin del mtodo rpido de digestin enzimtica supone una
gran ventaja en cuanto a ahorro de tiempo y reduccin del coste del anlisis,
por lo que sera de gran utilidad en el control rutinario de levaduras en la
industria alimentaria.
Lpez, V.; Querol, A.; Ramn, D.y Fernndez-Espinar, M.T. (2001) 1nt. 2. Food
+icro,iol., 68. 75-81.
Este trabajo ha sido financiado con el proyecto del Ministerio de Ciencia y
Tecnologa AGL01-0804.
A - 6
Deteccin de Penicillium brevicompactum mediante +CR
Patio, B.
1
, Domnech, M.
1
, Gonzlez-Salgado, A.
2
, Jurado, M.
2
, Lpez-
Errasqun, E.
1
, Gonzlez-Jan, M.T.
2
, Jimnez, M.
3
y Vzquez, C.
1
1
(pto. de +icro,iolog-a 111 ' de
.
4en5tica. Facultad de 6iolog-a. Universidad !omplutense de
+adrid.
3
(pto. de +icro,iolog-a ' Ecolog-a de la Universidad de Valencia. ,elenp%,io.ucm.es
*enicillium ,revicompactum Dierckx es un hongo ubicuo que se ha aislado de
aire (Wu et al., 2003), uvas (Bau et al., 2005), manzanas (Paterson et al.,
2003), queso (Kure et al., 2004), anacardo (Freire et al., 1999), pimienta y
nueces (Freire et al., 2000) entre otros hbitat. Se ha descrito como productor
de diferentes micotoxinas entre las que destaca el cido micofenlico, la
brevianamida A (Rundberget et al., 2004) y ms recientemente la patulina
(Paterson et al., 2003).
La mayora de los hongos filamentosos y entre ellos las especies de
*enicillium, se han clasificado mediante claves basadas en caracteres
morfolgicos (macro y micromorfologa, coloracin en diferentes medios, etc).
Muchos autores han puesto de manifiesto que estos criterios son subjetivos y
altamente variables y en muchos casos conllevan una clasificacin errnea o
ambigua (Frisvad y Filtenborg, 1983). Actualmente se estn introduciendo otros
criterios de clasificacin como perfiles de metabolitos secundarios, deteccin
de enzimas especficas, patrones de isoenzimas y ms recientemente la
caracterizacin genotpica (RFLPs, secuenciacin del rDNA, RAPDs)
En el presente trabajo se ha realizado un muestreo de uvas de la Rioja,
prestando especial atencin a los aislamientos de *enicillium ,revicompactum
en los que se ha puesto de manifiesto su capacidad de producir cido
micofenlico. Asimismo, dado que son hongos de gran inters con una
taxonoma difcil y controvertida, se ha desarrollado un mtodo de diagnstico
por PCR, especfico para *. ,revicompactum, basado en la regin TS del
rDNA. Esta tcnica aplicada a la caracterizacin y deteccin de cepas fngicas
ofrece rapidez, precisin y sensibilidad y permite obtener informacin sobre la
variabilidad a nivel intraespecfico y su seguimiento epidemiolgico.

Este trabajo ha sido financiado por el Ministerio de Educacin y Ciencia
mediante el proyecto AGL 2004-07549-C05-05/AL

Bau et al. (2005) nt. J. Food Prot. 98:125-130.
Freire et al. (1999) Mycopathol. 145:103-199.
Freire et al. (2000) Mycopathol. 149:13-19.
Frisvad y Filtenborg (1983) Appl. Environ. Microbiol: 46:1301-1310.
Kure et al. (2004) nt. J. food. Microbiol. 93:41-49.
Paterson et al. (2003) Food Microbiol. 20:359-364.
Rundberget et al. (2004) nt. J. Food. Microbiol. 90:181-188.
Wu et al. (2003) Appl. Environ. Microbiol. 69: 5389-5397.
+icro,iolog-a de Alimentos
A - 8
Acti"idad li&ol,tica de mic!oo!ani$mo$ ai$lado$ del inte!io! de *amn
cu!ado%
Sosa, M.J., Nez, F., Cava, R., Hernndez, D. y Crdoba, J.J.
Higiene ' 7ecnolog-a de los Alimentos, Facultad de Veterinaria. Universidad de Extremadura.
Apdo. correos 643. 10.01. !"ceres. sosa$uil%unex.es.
La accin de lipasas de origen microbiano en la carne puede contribuir al
incremento de cidos grasos libres (AGL) que pueden ser posteriormente
transformados e intervenir en la generacin de compuestos voltiles. Por tanto,
los microorganismos que se desarrollan en jamn curado pueden participar en
la formacin de compuestos voltiles derivados de la liplisis. El objetivo de
este trabajo fue estudiar la actividad lipoltica de microorganismos aislados del
interior del jamn curado, para conocer su contribucin a la liplisis durante la
maduracin del mismo.
Se evalu la actividad lipoltica, in vitro y en un sistema modelo crnico de 15
microorganismos (9 micrococceas, 4 lactobacilos y 2 levaduras) aislados
durante el procesado de jamn curado, previamente seleccionados por su
actividad proteoltica. En el ensayo in vitro se utilizaron los extracto celulares y
extracelulares, los cuales se incubaron, en agitacin a 30C durante 12 horas,
con una emulsin de triolena (0,5 mg/ml en buffer TRS-HCl 50 mM estril).
Posteriormente, se determin la concentracin de triolena a 326 nm. Para el
ensayo en el sistema crnico modelo, se inocularon los microorganismos en
carne estril adicionada con 5% de NaCl y se incub en condiciones de
humedad reducida durante 30 das a 18C. Tras este perodo se determin el
contenido en AGL por cromatografa de gases. Los resultados obtenidos se
compararon con muestras controles estriles.
Las actividad lipoltica in vitro fue muy dbil e incluso no se detect en la
mayora de los extractos. Slo destac la actividad extracelular de
&tap)'lococcus con)ii Sca16. Sin embargo, en el ensayo en carne madurada
se encontr actividad en la mayora de los microorganismos probados. En la
carne inoculada con *ic)ia carsonii Pca01 se detect una concentracin de
AGL mayor que en carne control estril y que en el resto de las muestras
inoculadas. Los dems microorganismos ensayados mostraron valores
significativamente mayores que la carne control en algn AGL. As, en la carne
inoculada con +icrococcus sp. Mce02 se observaron cantidades elevadas de
cido mirstico y en la inoculada con &. saprop)'ticus Ssg13, de cido
palmitoleico. La evaluacin real de la actividad lipoltica microbiana debe
realizarse en carne madurada, siendo til la determinacin de la actividad in
vitro slo como prueba de screening. Los microorganismos aislados del interior
jamn curado muestran una actividad lipoltica superior a la actividad muscular
residual, dependiendo la intensidad de la cepa aislada, por lo que pueden
contribuir a la liberacin de precursores de compuestos voltiles con gran
impacto en las caractersticas sensoriales del producto acabado.
Este trabajo ha sido realizado como parte del proyecto CAL02-085 financiado
por el nstituto Nacional de nvestigacin y Tecnologa Agraria y Alimentaria
dentro del Programa Nacional de Alimentacin.
A - 9
Secuenciacin y obtencin en lo$ $i$tema$ de e-&!e$in de E. coli y
Pichia del en)ima E+... obtenido de P. chrysogenum ai$lado de *amn
cu!ado
Benito, M.J., Connerton .F.
2
, Aranda, E., Hernndez, A. y Crdoba, J.J.
1
:utrici;n ' 6romatolog-a, Escuela de 1ngenier-as Agrarias, Universidad de Extremadura, !arretera
de !"ceres s<n, 0601 6ada=o$.
1
Higiene de los alimentos, Facultad de Veterinaria, Universidad de
Extremadura, Avda. Universidad s<n, 1001/!"ceres.
2
Food &ciences, Universit' o# :otting)am,
&utton 6onnington, >oug),oroug), >E1. 3?(, ?eino Unido.
*. c)r'sogenum Pg222 aislado de jamn curado muestra una intensa actividad
proteoltica sobre protenas crnicas que se traduce en una mayor generacin
de compuestos voltiles en los productos donde se inocula. Sin embargo, en
muchas ocasiones el crecimiento fngico sobre el producto no es deseado.
Una alternativa es la utilizacin durante la maduracin de enzimas
responsables de la actividad hidroltica del microorganismo. Se ha obtenido una
nueva proteasa (EPg222) de *. c)r'sogenum Pg222 (Benito y col., 2002) que
muestra elevada actividad proteoltica en carne y productos crnicos. El
objetivo del presente trabajo ha sido determinar los genes que codifican el
enzima para su expresin y obtencin en sistemas que permitan la produccin
a gran escala.
EPg222 purificada segn Benito y col. (2002) fue analizada en gel de
poliacrilamida con tincin coloidal, para su posterior caracterizacin mediante
espectrometra de masas con Micromass ES Q-TOF. As se obtuvo la
secuencia de diferentes pptidos con los que se disearon cebadores para la
amplificacin del gen mediante PCR. Los productos de la PCR obtenidos
fueron purificados de los geles de agarosa y clonados para su secuenciacin.
Para determinar el nmero de copias del gen en el ADN genmico de *.
c)r'sogenum se realiz digestin con los enzimas Eco R, 6am H y &ma y se
hizo un &out)ern ,lotting con la sonda diseada a partir de la secuencia del
gen encontrada.
La secuencia aminoacdica obtenida para la proteasa correspondi a
AMNDAAANVVK, LLFNGLNAK, SVMNMSLGGAFSR, ENVVQPNAPSWGL y
AWAVKDAK. La PCR realizada con los cebadores diseados a partir de los
pptidos ENVVQPNAPSWGL y AWAVKDAK gener un fragmento de 360 pb
que presenta alta homologa con las serin proteasas de *. c)r'sogenum. Se
disearon nuevos cebadores a partir de esta secuencia, de la regin homologa
del pptido seal y de la secuencia correspondiente al final de la protena
obtenida mediante espectrometra de masas. A partir de los productos de la
PCR fue obtenida la secuencia completa, que ha sido publicada en GenBank
database con el nmero de acceso AJ870492 y CA38757.1 para la secuencia
aminoacdica. El resultado de &out)ern 6lotting revel que solo hay una copia
de la proteasa en el genoma de *enicillium c)r'sogenum. La secuencia
encontrada se ha expresado en E. coli y *ic)ia pastoris comprobndose la
produccin de la proteasa, lo cual ser de gran utilidad para la expresin y
produccin a gran escala del enzima EPg222 para su uso en carne y productos
crnicos.
Benito, M.J.; Rodrguez, M.; Nuez, F.; Asensio, M.A.; Bermdez, M.E y Crdoba, J.J. (2002). Appl.
Environ. +icro,iol. 68, 3532-3536.
Este trabajo ha sido subvencionado con financiacin procedente de los proyectos del Ministerio de
Ciencia y Tecnologa AL98-0253 y AGL01-0804 y de la Junta de Extremadura 2PR04C022.
A - 15
De$a!!ollo de un m'todo de an#li$i$ del &e!fil de &!ote,na$ mic!obiana$
&a!a la ca!acte!i)acin de le"adu!a$ ai$lada$ de &!oducto$ c#!nico$
Colin, B., Martn, A., Rodrguez, M.
1
, Crdoba, J.J.
1
, Sosa, M.J.
1
y Crdoba,
M.G.
:utrici;n ' 6romatolog-a. Escuela de 1ngenier-as Agrarias, Universidad de Extremadura, !tra.
!"ceres s<n 0601/6ada=o$.
1
Higiene de los Alimentos, Facultad de Veterinaria. Universidad de
Extremadura. Apdo. correos 643. 10.01/!"ceres. mdeguia%unex.es
Las levaduras son microorganismos predominantes durante el perodo que
maduracin de los productos crnicos curados. Entre las especies ms
comnmente descritas se encuentran (e,ar'om'ces )ansenii, !andida
$e'lanoides, @arroAia lipol'tica y ?)odotorula spp. Aunque la mayor parte de
estas especies generan efectos beneficiosos, sin embargo, las especies de @.
lipol'tica y !. $e'lanoides y algunas cepas de (. )ansenii, han sido descritas
como alterantes de estos productos crnicos (Martnez y col., 2004). Sera
adecuado disponer de tcnicas de control de calidad que permitan diferenciar
de forma sensible y rpida aquellas levaduras alterantes de las beneficiosas.
Entre las tcnicas descritas para la identificacin de levaduras se encuentran la
caracterizacin morfolgica y bioqumica. Una posible alternativa es la
diferenciacin mediante anlisis del perfil de protenas por SDS-PAGE que est
siendo utilizado para la identificacin de numerosas especies microbianas
(Bjrkroth y col., 2000). El objetivo del presente trabajo es evaluar la capacidad
de este mtodo para diferenciar levaduras frecuentemente aisladas en
productos crnicos hasta nivel de cepa.
Se han estudiado 35 cepas de levaduras de la Coleccin Espaola de Cultivos
Tipo, pertenecientes a las especies ms frecuentemente aisladas de productos
crnicos. As mismo se evaluaron 86 aislados de levaduras procedentes de
jamn curado. Para la extraccin de las protenas extracelulares se utiliz el
mtodo descrito por Tunga y col. (1999) modificado. La extraccin de las
protenas celulares se realiz mediante la aplicacin de varios ciclos de
calentamiento y enfriamiento sucesivos. Tanto las protenas extracelulares
como celulares se visualizaron en geles de poliacrilamida al 12 % con SDS.
Con el mtodo descrito para la extraccin de protenas extracelulares se
obtuvieron perfiles de bandas protecas diferentes para las distintas especies
de levaduras patrn ensayadas. Por su parte, los perfiles de bandas de
protenas celulares obtenidos mostraron diferencias a nivel de cepa dentro de
las especies !. $e'lanoides, (. pol'morp)us, (. )ansenii, *. carsonii, ?.
mucilaginosa y &. cerevisiae. Adems, ambos mtodos permitieron agrupar los
aislados de levaduras a nivel de especie y cepa. El anlisis de protenas de
levaduras mediante electroferesis en gel de poliacrilamida es un mtodo
adecuado para la diferenciacin de las especies de levaduras ms
frecuentemente encontradas en productos crnicos, por lo que debe ser
considerado para el control de calidad de estos productos.
Bjrkroth, K.J., Geisen, R., Schillinger, U., Weiss, N., De Vos, P., Holzapfel, W.H.,
Korkeala, H. J. y Vandamme, P. 2000. Appl. Environ. Microbiol. 66, 3764-3772.
Martnez, J, Wrent, P., Quirs, M., Sotoca, R., Silniz, M.., Valderrama, M.J. 2004.
Alimentacin, Equipos y Tecnologa 193, 72-78.
Tunga, R., Banerjee, R. y Bhattacharyya, B.C. 1999. Biopr. Eng. 21, 447-452.
Este trabajo ha sido financiado con el proyecto del Ministerio de Ciencia y Tecnologa
AGL01-0804.
A - 24
Eficacia antimic!obiana de aluno$ t!atamiento$ de$contaminante$ en
ca!ne de &ollo
Del Ro, E., Alonso-Calleja, C., Panizo, M., Prieto, M. y Capita, R.
Escuela &uperior ' 75cnica de 1ngenier-a Agraria BE&71AC, Avenida de Astorga, s<n. .4400/
*on#errada, >e;n. d)trcg%unileon.es
La carne de pollo presenta una elevada carga microbiana superficial (CAPTA,
1998), hecho que conlleva importantes repercusiones sanitarias y econmicas.
La descontaminacin de la carne en los mataderos, que podr ser autorizada
en la Unin Europea a partir de enero de 2006 (Reglamento CE 853/2004),
puede proporcionar una importante reduccin de los niveles de contaminacin
microbiana de este alimento. No obstante, antes de su autorizacin, se
necesita contar con datos adicionales a los existentes hasta el momento en
nuestro entorno (SCVPH, 2003). El objetivo de este trabajo ha sido determinar
y comparar el efecto a lo largo del tiempo de dos compuestos qumicos de
previsible autorizacin como descontaminantes de las canales de ave en la
Unin Europea (fosfato trisdico FTS- y clorito sdico acidificado CSA-)
sobre microorganismos presentes en carne de pollo (flora aerobia mesfila
viable, microorganismos psicrotrofos, enterobactericeas, coliformes,
micrococceas, presuntos &tap)'lococcus aureus, enterococos, 6roc)ot)rix
t)ermosp)acta, *seudomonas spp., bacterias cido-lcticas y grupo de mohos
y levaduras).
El tratamiento con FTS redujo significativamente los niveles de todos los
grupos microbianos excepto 6roc)ot)rix t)ermosp)acta, oscilando las
reducciones, respecto a las muestras control, entre 0,550,51 (enterococos) y
1,740,73 (flora aerobia mesfila viable). Las reducciones por CSA, todas
significativas, variaron entre 0,690,47 (enterococos) y 1,970,68 (flora aerobia
mesfila viable). La eficacia de ambos compuestos fue similar, excepto en el
caso de las enterobactericeas y coliformes, donde el CSA produjo mayores
reducciones.
El efecto de los tratamientos descontaminantes se prolong a lo largo del
tiempo. As, las reducciones de enterobactericeas, pseudomonas y bacterias
cido-lcticas (FTS) y coliformes y mohos y levaduras (CSA) aumentaron
significativamente durante el almacenamiento. El ltimo da del estudio (da 5)
las reducciones microbianas oscilaron entre 0,340,95 (enterococos) y
2,400,71 (coliformes) en las muestras tratadas con FTS, y entre 0,420,41
(6roc)ot)rix t)ermosp)acta) y 2,360,73 (coliformes) en las sumergidas en
CSA. Al igual que en estudios previos, ambos tratamientos demostraron ser
ms eficaces frente a bacterias Gram negativas que Gram positivas.
Este estudio ha sido financiado por el Ministerio de Sanidad y Consumo (FS
P040722).
CAPTA, R. (1998). Calidad higinica y sanitaria de la carne de pollo con atencin especial a
>isteria monoc'togenes. Ensayos de descontaminacin. Tesis Doctoral. Universidad de Len,
Len.
SCVPH (2003). Dpinion o# t)e &cienti#ic !ommittee 0n Veterinar' +easures relating to *u,lic
Healt) 0n t)e evaluation o# antimicro,ial treatments #or poultr' carcasses. April 2003.
+icro,iolog-a de Alimentos 1.
A - 27
Ca!acte!i)acin de e-o&oli$ac#!ido$ &!oducido$ &o! Lactobacillus
pentosus L+S./ y o&timi)acin de $u &!oduccin
Snchez, J..
1
, Martnez, B.
1
, Guilln, R.
2
, Jimnez-Daz, R.
2
y Rodrguez, A.
1
1
1nstituto de *roductos >"cteos de Asturias B1*>A/!&1!C, !tra. 1n#iesto, s<n, 33300 / Villaviciosa,
Asturias E =isanc)e$%ipla.csic.es.
.
(epartamento de 6iotecnolog-a de Alimentos, 1nstituto de la
4rasa B!&1!C, Apartado 108, 4101. / &evilla
INTROD0CCI1N 2 OB3ETI4OS
La utilizacin de exopolisacridos (EPSs) producidos por bacterias del cido
lctico (BAL) en la elaboracin de alimentos, bien como aditivos naturales o
bien mediante el uso de cultivos productores de EPSs in situ, permite obtener
productos con texturas mejoradas y con propiedades potencialmente
beneficiosas para la salud del consumidor.
El objetivo de este trabajo ha sido la caracterizacin del polmero producido por
la cepa >,. pentosus LPS26, aislada de fermentaciones naturales de aceituna,
y la optimizacin de su produccin.
RES0LTADOS 2 DISC0SI1N
El anlisis del polmero mostr la presencia de dos exopolisacridos: EPS A,
con un tamao de 1.9 x 10
6
Da y compuesto por glucosa y ramnosa, y EPS B,
de 3.3 x 10
4
Da y compuesto por glucosa y manosa. Ambos presentaron una
estructura constituida por una cadena principal de glucosa con enlaces 1-4 y
sustituciones laterales.
La sntesis de EPS A dependi de la fuente de carbono utilizada, aunque fue
independiente de su concentracin. Temperaturas subptimas de crecimiento y
el control del pH aumentaron su produccin. Por el contrario, la sntesis de EPS
B slo se vi influenciada por el pH del medio. La mxima produccin de EPS
total (514 mg/L) se obtuvo utilizando glucosa (30 g/L) como fuente de carbono,
con una temperatura de incubacin de 20 C y a pH 6.
Mediante cultivo en quimiostato se comprob que EPS A se sintetiza casi
exclusivamente a bajas tasas de crecimiento comportndose como un
metabolito no asociado a crecimiento, mientras que la sntesis de EPS B no
dependi de esta variable. En este caso se obtuvo una produccin de EPS total
(354 mg/L) inferior a la detectada en cultivo discontinuo, aunque la
productividad efectiva se increment al disminuir los tiempos necesarios para la
limpieza y esterilizacin del sistema. La produccin in situ del polmero en
cultivos en leche no tuvo un efecto apreciable en la textura, probablemente
debido que en estas condiciones se produjo casi exclusivamente el EPS de
bajo peso molecular, de menor capacidad espesante.
CONCL0SIONES
>,. pentosus LPS26 produce dos EPSs capsulares de distinto tamao y
composicin y diferentes cinticas de produccin. Los niveles de produccin
son superiores a los observados generalmente en BAL, pudiendo
incrementarse la productividad mediante el uso de cultivo continuo.
A - 51
E$tudio mic!obiolico de la miel de Guadala*a!a 5E$&a6a7
Ortiz Martnez, M.L.
(1)
, Fernndez Monistrol, .
(1)
, Higes Pascual, M.
(2)
y Sanz
Lpez, A.
(2)
B1C
(epartamento de +icro,iolog-a ' *arasitolog-a. Universidad de Alcal". !ampus universitario.
Facultad de Farmacia. .881 Alcal" de Henares B+adridC.
B.C
!entro Ap-cola ?egional. +arc)amalo
B4uadala=araC. e/mail0 mluisa.orti$%ua).es
Int!oduccin8
La miel presenta una carga microbiana caracterstica, sin embargo, dadas su
baja actividad de agua y alta presin osmtica es un sustrato poco apto para la
multiplicacin microbiana.
Entre los contaminantes mas frecuentes de la miel se encuentran: esporas de
6acillusF patgenos de las abejas como *aeni,acillus larvae ' *aeni,acillus
alvei; hongos de los gneros *enicillium y +ucorF y los causantes de micosis
en las abejas, Acosp)aera apis y Acosp)aera ma=or.
Las levaduras osmfilas como &ac)arom'ces pueden producir la fermentacin
de la miel cuando las condiciones de humedad se lo permiten. Por
manipulaciones poco higinicas, pueden llegar a la miel diferentes gneros de
la familia Entero,acteriaceae.
En nuestro pas, se han citado casos de botulismo infantil aunque !lostidium
,otulinum no ha sido aislado de la miel. La Norma Microbiolgica vigente no
contempla la deteccin de Clostridios sulfito reductores, entre los que se
encuentran, el ya citado, !lostridium ,otulimun y !l. per#ringens.
Ob*eti"o$8
En este trabajo se ha estudiado la presencia, en diferentes muestras de miel
de: Costridios sulfito reductores; Mesofilos totales, Coliformes totales y fecales,
Hongos y levaduras. Se estudi tambin la presencia de *aeni,acillus larvae.
Re$ultado$8
La carga microbiana fue variable; solo se detectaron coliformes en una de las
muestras; ninguna contena Clostridios sultifo reductores. Se detect la
presencia de *aeni,acillus larvae en varias de las muestras, lo que
recomendara incluir este parmetro como un criterio ms de calidad de la miel.
A - 54
A&licacin del di$e6o de e-&e!iencia$ en el e$tudio del com&o!tamiento
de Listeria monocytogenes%
Pons, A., Fernndez-Ruano, L. y Agut, M.
>a,oratorio de +icro,iolog-a, 1nstitut Gu-mic de &arriH BUniversitat ?amon >lullC. Via Augusta 360,
0801/6arcelona. montserrat.agut%iIs.edu
El cloruro sdico, el sorbato potsico y el polifosfato sdico son aditivos
alimentarios utilizados para la inhibicin de >isteria monoc'togenes. A partir de
un diseo ortogonal propuesto por G. Taguchi (1987), se quiere determinar el
grado de inhibicin de estos aditivos sobre la bacteria mediante tres mtodos
diferentes: tcnicas de difusin en agar, espectrofotometra U.V.-Vis y recuento
de viables.
Los factores analizados son: cloruro sdico (0-1,5%(v/v)), sorbato potsico
(0,05-0,3%), polifosfato sdico (0,5-1%), temperatura (4-37C) y tiempo (1-6
das) a partir de una concentracin inicial aproximada de bacterias de 3,010
6
-
6,010
6
ufc/ml en S.S.E. (D.O.
=320nm
=0,390). Todos los factores se estudian a
tres niveles. La matriz del diseo L
27
(3
13
) nos permite a travs de la grfica
lineal estndar y la posterior asignacin de columnas mediante la matriz
triangular correspondiente, el estudio de todos los factores as como el estudio
de la interaccin del sorbato potsico con el resto de factores analizados.
La tcnica de difusin en agar no es suficientemente sensible como para dar
resultados cuantificables; no se observa crecimiento a 4C y los halos
generados en muchas de las experiencias no son totalmente transparentes.
El ANOVA de Pareto para los datos obtenidos por espectrofotometra muestra
que el polifosfato sdico, la temperatura y el tiempo son los factores que, por
este orden, contribuyen ms sobre la inhibicin del desarrollo bacteriano. Las
correspondientes interacciones entre el sorbato potsico y los anteriores
factores, en el mismo orden, se sitan de la 4 a la 6 posicin. Con la menor
contribucin, se tiene el efecto del cloruro sdico.
Los resultados correspondientes a los niveles que proporcionan un menor
crecimiento de la bacteria, obtenidos mediante las grficas de interaccin,
coinciden tras utilizar el mtodo de recuento de viables o el de
espectrofotometra. La experiencia ptima se sita en los niveles ms altos
para los aditivos y los niveles menores para la temperatura y el tiempo.
Cabe resaltar que las u.f.c./ml obtenidas son, en la mayora de los casos,
menores a las que se deberan obtener por espectrofotometra. Este hecho
confirma el estudio realizado por McClure y col. (1993) en el que supone que
dicho aumento puede ser causado por una elongacin de las clulas en
presencia de NaCl.

McClure, P.J., M.B. Cole, K.W. Davies, and W.A. Anderson. (1993). The use of
automated tubidimetric data for the construction of kinetic models. J. nt.
Microbiol. 12: 277-285.
Taguchi, G. (1987). &'stem o# experimental designs, Kraus, Nueva York.
A - 68
E$tudio de la &!oduccin de &!ecu!$o!e$ de ca!bamato de etilo &o!
bacte!ia$ l#ctica$ del "ino9 e identificacin de lo$ ene$ in"oluc!ado$%
Araque, ., Gil, J., Reguant, C., Carret, R. y Bordons, A.
(epartament de 6ioIu-mica i 6iotecnologia, Unitat dJEnologia del !entre de ?e#erKncia en
7ecnologia dJAliments, Facultats de Gu-mica i Enologia, !ampus &escelades, Universitat ?ovira i
Virgili, 4300 7arragona. e/mail0 mariaisa,el.araIue%estudiants.urv.es
El carbamato de etilo (CE) es un compuesto carcingeno que se ha podido
detectar ocasionalmente en un gran nmero de alimentos fermentados
incluyendo el vino, aunque en pequeas concentraciones. En el vino se
encuentran diversos compuestos carbamlicos, como urea, citrulina y fosfato de
carbamilo, que potencialmente podran reaccionar con el etanol, originando el
CE. La citrulina y el fosfato de carbamilo pueden aparecer como productos de
degradacin de la arginina por las bacterias lcticas (BL).
Este estudio se ha realizado en diversas especies de BL, diferentes de
Denococcus oeni, principal bacteria implicada en el desarrollo de la
fermentacin malolctica (FML). Se ha trabajado con cepas de >acto,acillus,
*ediococcus y >euconostoc, que podran estar implicadas en las primeras
etapas de la fermentacin alcohlica, o bien estar involucradas directamente en
el desarrollo de la FML en segn que condiciones de vinificacin.
Las BL degradan la arginina por la va de la arginina deiminasa (AD),
compuesta de 4 enzimas codificadas por un opern: AD (arcA), ornitina
transcarbamilasa (OTC, arc6), carbamato quinasa (CK, arc!) y protena
transportadora de arginina (arc(). Para identificar estos genes en diferentes
especies implicadas en vinificacin, se han diseado cebadores degenerados a
partir de alineamientos de las secuencias proteicas conocidas en otras
bacterias lcticas. La deteccin de arcA, arc6 y arc! se hizo en unas 20 cepas
de diferentes BL, entre las que habian cepas degradadoras y no degradadoras
de arginina. Los fragmentos amplificados obtenidos (266, 181 y 343 pb,
respectivamente) se han secuenciado y comparado con las secuencias
publicadas de estos genes de BL relacionadas, confirmndose su homologa,
que oscila del 75 al 90%.
Tambin se ha estudiado la influencia del pH, etanol, glucosa y arginina sobre
la cintica de degradacion de arginina por clulas en reposo metablico de
cepas de >a. )ilgardii, >a. ,revis, >a. ,uc)nerii, *. pentosaceus, *. parvulus y
>e. mesenteroides. Se han cuantificado la arginina y sus productos citrulina y
ornitina por HPLC, y el amonio enzimticamente. Se ha observado una mayor
produccin de citrulina (precursor de CE) a mayor concentracin de arginina o
de etanol y a pH ms alto. Por otro lado, la presencia de glucosa inhibe la
degradacin de arginina y con ello la aparicin de citrulina.
A - 69
An#li$i$ de la e-&!e$in de lo$ ene$ im&licado$ en la !uta a!inina
deimina$a9 en !elacin con la de!adacin de a!inina &o! Oenococcus
oeni.
Gil, J., Araque, ., Reguant, C., Carret, R. y Bordons, A.
(epartament de 6ioIu-mica i 6iotecnologia, Unitat dJEnologia del !entre de ?e#erKncia en
7ecnologia dJAliments, Facultats de Gu-mica i Enologia, !ampus &escelades, Universitat ?ovira i
Virgili, 4300 7arragona. e/mail0 =uana.gil%estudiants.urv.net
La arginina que permanece en el vino despus de la fermentacin alcohlica
puede ser degradada por algunas bacterias lcticas que realizan la
fermentacin malolctica, a travs de la ruta de la arginina deiminasa (AD). En
esta va participan tres enzimas y una protena de trasporte intercambiadora de
arginina y ornitina, codificadas por sus correspondientes genes. Se generan
unos intermediarios como la citrulina y el carbamil fosfato que pueden
reaccionar con el etanol generando carbamato de etilo, compuesto
potencialmente carcingeno.
El objetivo es evitar la aparicin del carbamato de etilo en vinos, por lo que
conviene estudiar la degradacin de arginina, la aparicin de precursores del
carbamato de etilo y la expresin de los genes de la ruta AD en diferentes
condiciones.
Se ha estudiado la expresin gnica en cepas degradadoras de arginina. Para
ello en primer lugar se ha fijado el tiempo mnimo de expresin. Para un
anlisis cualitativo se ha probado una RT-PCR en diferentes tiempos de
induccin con 5 g/l de arginina. A las 7 y 24 horas el amplificado resultante
daba la misma intensidad en un gel de agarosa. El tiempo mnimo de expresin
de 7 h se comprob mediante una real time PCR, dando lugar al mismo ciclo
de amplificacin que tras 24 h de induccin, corroborando as el resultado del
mtodo cualitativo.
La expresin gnica por PCR a tiempo real se prob con la cepa mto1 de
Denococcus oeni, degradadora de arginina en estudios previos. Para ello se
hizo crecer a diferentes pH y concentraciones de etanol y se analiz la
expresin de los cuatro genes relativa a un gen constitutivo, en este caso el
gen 16 S. A pH 4,5 sin etanol se produjo una induccin en la expresin de los
genes por la arginina, siendo sta superior para el gen arcA (gen que codifica
para el enzima AD). En cambio a pH 3,6 sin etanol o a pH 4,5 con 6 % de
etanol hay una disminucin de la expresin.
Tambin se estudi la degradacin de arginina y aparicin de los otros
aminocidos implicados en la va AD como son la ornitina y la citrulina, por
HPLC, en una serie de cepas de D. oeni y se observ una amplia variabilidad.
A su vez se analiz el amonio excretado, comprobando su correlacin con la
degradacin de arginina en diferentes condiciones.
A - 72
Efecto de la acidificacin $ob!e lo$ &a!#met!o$ de c!ecimiento y la
te!mo!!e$i$tencia de Enterococcus faecium
Fernndez, A., lvarez, A., Bernardo, A. y Lpez, M.
(pto. Higiene ' 7ecnolog-a de los Alimentos. Universidad de >e;n. !ampus de Vega$ana s<n.
.401 >e;n. EspaLa. a#rve%)otmail.comF Fax0 98 .91.84F 7el0 98 .91183
Enterococcus #aecium es considerado por sus especiales caractersticas un
microorganismo apropiado para evaluar la calidad higinica de los alimentos
que sufren un tratamiento trmico moderado. Sin embargo, la informacin que
existe acerca de su comportamiento frente al calor es escasa, especialmente la
relacionada con la respuesta frente a su inactivacin trmica en condiciones de
acidez.
El objetivo de este trabajo fue estudiar el efecto del pH del medio de cultivo
(BH, pH 7,4; 6,4 y 5,4) y del agente acidificante empleado (cidos actico,
mlico, ctrico y HCl) sobre los parmetros de crecimiento de E. #aecium (ATCC
49624), y evaluar la influencia que ejerce la obtencin de las suspensiones en
las diferentes condiciones sobre la respuesta al calor de este microorganismo,
determinando en cada caso los valores D
70
utilizando como medio de
calentamiento tampn Sorensen de diferentes pHs (7,8; 7,0; 6,2 y 5,5) para
poder conocer si el nivel de acidez en el que los microorganismos han crecido
condicionaba el pH del medio de calentamiento en el que muestran la mxima
termorresistencia.
Los resultados obtenidos pusieron de manifiesto que el cido actico result el
ms eficaz en la inhibicin del crecimiento, no produciendo el resto de los
cidos ensayados prcticamente ninguna influencia sobre el mismo. En
relacin al estudio de inactivacin trmica se comprob que la acidificacin del
medio de crecimiento con los diferentes cidos ensayados origin, en lneas
generales, una disminucin en la termorresistencia de las clulas obtenidas,
aunque la magnitud del efecto estuvo condicionada por la naturaleza del
agente acidificante. La acidificacin del medio de calentamiento dio lugar en
todos los casos a una termorresistencia ms elevada, de tal forma que los
valores D
70
obtenidos se incrementaron entre 4 y 8 veces al acidificar el medio
desde pH 7,8 a 5,5, en funcin de la naturaleza del cido al que las clulas
fueron expuestas durante su crecimiento. Este comportamiento que ya ha sido
descrito para otros microorganismos, incluyendo algunos patgenos, podra
justificarse por los mecanismos de proteccin que stos desarrollan frente a
situaciones adversas.
A - 74
Influencia de la tem&e!atu!a de c!ecimiento $ob!e la te!mo!!e$i$tencia de
Listeria innocua
lvarez, A., Fernndez, A.,

Bernardo, A. y Lpez, M.
(pto. Higiene ' 7ecnolog-a de los Alimentos. Universidad de >e;n. !ampus de Vega$ana s<n.
.401 >e;n. EspaLa. avalordvet%)otmail.com F Fax0 98 .91.84F 7el0 98 .91184
>isteria innocua es una bacteria gram positiva ampliamente difundida en la
naturaleza, por lo que se asla con gran frecuencia en una amplia gama de
alimentos frescos y procesados como leche, pollo y diversos derivados
crnicos y lcteos. Aunque este microorganismo no est considerado como
patgeno, posee gran inters, ya que ha sido propuesto en ocasiones como
indicador biolgico para controlar la inactivacin de >. monoc'togenes
basndose en su mayor termotolerancia. Sin embargo, son muy escasos los
trabajos encaminados a conocer si ambos microorganismos exhiben una
respuesta similar frente al calor en determinadas condiciones.
El objetivo de este trabajo fue estudiar la influencia que la temperatura de
crecimiento (20, 30, 37, 45 y 48 C) ejerce sobre la termorresistencia de
>isteria innocua (CECT 910). Las suspensiones microbianas se obtuvieron en
caldo BH a las temperaturas que permitieron su crecimiento (20, 30, 37 y 45
C), incubando hasta que alcanzaron un estado avanzado de la fase
estacionaria (12-24 horas). Las determinaciones de termorresistencia se
realizaron en un termorresistmetro TR-SC a diferentes temperaturas de
tratamiento (56, 59, 62 y 65 C), utilizando como medio de calentamiento
tampn Sorensen pH 7,0.
Los valores D
62
hallados para las clulas crecidas a 20 C (D
62
= 0,10 min)
fueron aproximadamente 1,5; 3 y 4 veces menores que los obtenidos para las
clulas incubadas a 30, 37 y 45 C, respectivamente. Este efecto result ser
independiente de la temperatura de tratamiento, obtenindose un valor z medio
de 5,34 0.21 C. El aumento de termorresistencia observado para >. innocua
con la temperatura de incubacin result ser de la misma magnitud que el
previamente descrito para >. monoc'togenes. El hecho de que estos dos
microorganismos presenten la misma respuesta frente a uno de los parmetros
que ejercen una influencia ms marcada sobre la termorresistencia microbiana
revela la utilidad de la eleccin de >. innocua como indicador biolgico para
garantizar la inactivacin de este patgeno.
A - 80
E$tudio de lo$ &a!#met!o$ :ue &!omue"en la li$oenia de bacte!ifao$
ai$lado$ de Escherichia coli &!oducto!a$ de to-ina $;ia 5STEC7%
Serra-Moreno R.*, Muniesa M. y Jofre J.
Facultad 6iolog-a. (pto. +icro,iolog-a. Universitat 6arcelona. Avda. (iagonal, 643. 080.8.
6arcelona. Mrserramo8%,io.u,.edu
Esc)eric)ia coli productora de toxina shiga (STEC) acta como agente causal
de enfermedades como colitis hemorrgica y sndrome de uremia hemoltica.
La principal fuente de infeccin por estos patgenos es el consumo de agua y/o
de alimentos contaminados, siendo el principal reservorio de STEC el ganado
vacuno. STEC son especialmente virulentas debido a la presencia de factores
de patogenicidad en su genoma, uno de los ms importantes es el gen que
codifica la toxina Shiga. sta puede ser de dos tipos: Stx1 y Stx2. Ambas se
hallan codificadas en el genoma de fagos lambdoides, que se encuentran en
estado de profago en las STEC, y al activarse su ciclo ltico se promueve la
expresin de dicha toxina.
Nuestros ob*eti"o$ eran caracterizar los fagos-stx. de STEC procedentes de
aislamientos de origen vacuno, con el fin de establecer las propiedades de los
mismos como vectores de transduccin gnica entre diferentes enterobacterias
y transducirlos a cepas de laboratorio para estudiar los mecanismos que
regulan la lisogenia. Para ello se han determinado 1) las caractersticas
genticas de los fagos aislados de origen vacuno mediante sout)ern ,lot,
anlisis de espectro de huspedes, morfologa y secuenciacin. 2) Se han
obtenido lisgenos de estos fagos usando las cepas E. coli DH5, C600 y
&)igella sonnei como huspedes y 3) se han obtenido dobles lisgenos que
contienen los fagos aislados de cepas de origen vacuno y un segundo fago
(3538) modificado genticamente (Stx2:cat), al que se le sustituy la ORF de
la stx. por una resistencia al cloranfenicol.
Los !e$ultado$ obtenidos nos indican que: 1) La obtencin de lisgenos en
cepas de laboratorio depende tanto del fago como de la cepa husped
utilizada, y que, la mayora de lisgenos simples, son inestables con una gran
facilidad de prdida del fago. 2a) Los estudios de inmunidad muestran que un
lisgeno es resistente a la infeccin por su propio fago, pero que no
necesariamente ha de serlo de los otros fagos-stx. estudiados. 2b) El
establecimiento de lisogenia del 3538 juntamente con otro de los fagos-stx.
de nuestro estudio (dobles lisgenos), se da con mayor probabilidad que si sta
se estableciera por el 3538 slo. Las ufc/ml recuperadas en el primer caso
suelen ser de un orden mayor de magnitud que en el segundo. Los estudios
sobre propiedades lticas de los profagos, muestran mayor predisposicin de
las cepas para establecer doble lisogenia, lo que corresponde con la menor
activacin del ciclo ltico del fago (de entre uno a cuatro logaritmos menos,
calculado en pfu/ml) si se compara la induccin de un lisgeno doble con uno
simple.
Las conclu$ione$ que se derivan son: El establecimiento de la lisogenia de
fagos-stx. en cepas de laboratorio es posible, pero requiere estabilizacin de
stos. La inmunidad fgica se cumple siempre, aunque, en contra de lo que se
esperara, la doble lisogenia se favorece ms que la simple. Esto explicara el
gran nmero de cepas STEC lisgenas para ms de un fago, y, por tanto,
productoras de ms de una variante de la toxina Stx, que se detectan en el
ambiente.
+icro,iolog-a de Alimentos .0
A - 83
Em&leo de bacte!ia$ &!omoto!a$ del c!ecimiento "eetal &a!a la me*o!a de
la calidad en calaba)a
Reguera Useros, J..
1
; Sacristn Prez-Minayo, G.
1
y Lpez Robles, D.J.
2
1Nrea de +icro,iolog-a, .Nrea de Eda#olog-a ' Gu-mica Agr-cola, Facultad de !iencias,
Universidad de 6urgos, *la$a de +isael 6aLuelos s<n, 09001 6urgos, EspaLa. E/mail0 =iru%u,u.es
Los microorganismos antagonistas se suelen usar en cultivos vegetales, tanto
para proteger las plantas de enfermedades vegetales y plagas, como para
proporcionarlas sustancias nutritivas. Las bacterias promotoras del crecimiento
vegetal (Plant Growth Promoting Rhizobacteria, PGPR) pueden presentar
antagonismo frente a patgenos y/o producir metabolitos, reguladores del
crecimiento o precursores de stos. En este estudio se ha evaluado la
capacidad de *seudomonas sp. como PGPR, observando el efecto estimulador
sobre calabaza (!ucur,ita pepo).
Se inocularon semillas de calabaza con un cultivo (coleccin propia) de
*seudomonas sp. (3x10
8
ufc/ml) durante 5 h, sembrndose a continuacin en
vermiculita previamente autoclavada. Asimismo se sembraron otras semillas
inoculadas slo con caldo BH sin cepa antagonista. En todos los casos se
mantuvieron en cmara de climatizacin (fotoperodo de 14/10 h, temperatura
de 22/15 C y luminosidad del 75%).
Mediante la inoculacin de *seudomonas sp. se apreci un incremento en la
biomasa de la plntula de calabaza del 22.26%, del 14.41% en el peso
radicular, 28.97% en el peso de la parte area y 13.03% en la longitud de la
parte area, respecto al ensayo testigo. Estos resultados corresponden al da
26 despus de la siembra, disminuyendo, al cabo de este periodo, los
recuentos de las poblaciones microbianas presentes en vermiculita en una
unidad logartmica. No obstante, se puede considerar *seudomonas sp. como
una PGPR en el cultivo de calabaza.
Se ha comprobado con anterioridad el efecto inhibidor de esta PGPR frente a
?)i$octonia solani, hongo patgeno que afecta a gran nmero de cultivos
vegetales. As, en otros ensayos, se han obtenido incrementos productivos
relevantes en remolacha azucarera. Estos hechos ponen de manifiesto la
utilidad de las PGPR para la mejora de la calidad en alimentos vegetales
procedentes del sector primario, de manera compatible con el desarrollo
sostenible, sin perjuicio del medio ambiente ni de la salud de los consumidores.
A - 90
E"olucin de lo$ en)ima$ ;id!ol,tico$ du!ante el en"e*ecimiento de
di$tinta$ "a!iedade$ de "ino
Blasco, L., Veiga-Crespo, P., Feijoo-Siota, L., Poza, M. y Villa, T.G.
(epartamento de +icro,iolog-a ' *arasitolog-a. Facultad de Farmacia. Universidad de &antiago de
!ompostela. lucia,lasco%gmail.com
El vino es la bebida resultante de la fermentacin alcohlica completa o parcial
de la uva fresca o del mosto. La elaboracin del vino es un proceso
microbiolgico en el que intervienen diferentes especies de levaduras as como
de bacterias lcticas.
La base de las caractersticas organolpticas del vino es la composicin
qumica del mismo, que va a variar dependiendo de la variedad de uva, la
regin geogrfica, la ecologa microbiolgica y los mtodos de elaboracin del
vino.
En el vino existen enzimas hidrolticos que provienen tanto de la uva como de
la levadura responsable de la fermentacin. Los niveles de estos enzimas
varan durante el proceso de elaboracin y envejecimiento de los vinos. De los
enzimas estudiados, la invertasa y la poligalacturonasa son los ms resistentes
a la inactivacin. La invertasa se puede utilizar como marcador de la edad del
vino dentro de una misma variedad de vino independientemente de la regin y
de la cosecha a la que pertenezca, mientras que la poligalacturonasa permite
diferenciar vinos de la misma variedad de distinta cosecha y regin de origen.

+icro,iolog-a de Alimentos ..
A - 91
A&licacin de RA+D$ &a!a la ti&ificacin de e$&ecie$ de BAL alte!ante$ de
&!oducto$ c#!nico$ en"a$ado$ al "ac,o y !ef!ie!ado$
Chenoll, E.
1
y Aznar, R.
1,2*
1
1nstituto de AgroIu-mica ' 7ecnolog-a de Alimentos, !&1!. Ap. correos 3, 6ur=assot, Valencia,
.
(epartamento de +icro,iolog-a, Univ. Valencia.
M
rosa.a$nar%uv.es
Las alteraciones microbiolgicas de productos crnicos envasados al vaco y
refrigerados se caracterizan por una bajada de pH, aparicin de limos, aroma
acidificado y una hinchazn del envase por la acumulacin de gas. Las
especies psicrotrofas de bacterias lcticas son las principales responsables, y
de ellas >euconostoc mesenteroides, >acto,acillus saOei y >act. curvatus son
las que se aslan con mayor frecuencia en este tipo de productos alterados.
Aunque en el momento del envasado se encuentran por debajo del nivel de
deteccin, las poblaciones de BAL acaban dominando durante el
almacenamiento. Por ello, es importante tener herramientas que nos permitan
una identificacin rpida y precisa a nivel intraespecfico en aquellas especies
de BAL que ya se han demostrado como alterantes de productos crnicos, con
el fin de monitorizar su presencia en la cadena de produccin y poder rastrear
la fuente de contaminacin.
En este trabajo se ha aplicado la tcnica RAPD para estudiar la evolucin de
las poblaciones de BAL en dos productos crnicos, morcilla y fiambre de magro
adobado, que con frecuencia presentan la alteracin por hinchazn del envase.
Los aislamientos se identificaron mediante tcnicas moleculares basadas en el
rDNA y se han tipificado mediante RAPD los correspondientes a las especies
dominantes: >act. curvatus (14), >act. plantarum (68), >act. saOei (33) y >euc.
mesenteroides (151). As mismo se han analizado 108 cepas de BAL de
referencia incluyendo 63 >acto,acillus (con 2 >act. curvatus, 7 >act. plantarum
y 2 >act. saOei) y 13 >euconostoc (con 3 representantes de >euc.
mesenteroides). La amplificacin con los cebadores M13 y T3 se realiz bien a
partir de colonia o de DNA total extrado mediante el mtodo de Pitcher et al.
(1989) segn describen Aznar y Alarcn (2003).
Los perfiles RAPD obtenidos para el total de cepas se han almacenado y
analizado con ayuda del programa informtico BioNumerics (Applied Maths). El
anlisis de los perfiles RAPD-M13 ha revelado en >euc. mesenteroides y >act.
plantarum patrones que son caractersticos de especie y que han resultado de
gran utilidad para la identificacin rpida y precisa de aislamientos de
productos crnicos alterados. Los perfiles RAPD-T3 en ambas especies,
muestran una diferenciacin a nivel intraespecfico, por lo son adecuados para
el seguimiento de cepas. Por el contrario, en el caso de >act. saOei se observa
un perfil RAPD-T3 caracterstico de especie que permite su diferenciacin de
>act. curvatus, y se observa una mayor diversidad en los perfiles RAPD-M13.
No obstante con estos ltimos, tanto en >act. curvatus como en >act. saOei, se
pueden distinguir perfiles caractersticos de subespecie.
Pitcher et al., 1989. Lett. Appl. Microbiol. 8, 151-156
Aznar y Alarcn, 2003. J. Appl. Microbiol. 95, 958-966.
A - 93
Deteccin de ce&a$ to-i'nica$ de usarium en ma,) e$&a6ol
Jurado, M.;
1
Patio, B.;
1
Lpez-Errasqun, E.; Gonzlez-Salgado, A.; Gonzlez-
Jan, M.T.;
2
Sanchs, V.;
1
Vzquez, C.
(epartamento de 4en5tica.
1
(epartamento de +icro,iolog-a 111. Facultad de 6iolog-a. Universidad
!omplutense de +adrid. !< 2os5 Antonio :ovais ., .8040/+adrid.
.
(epartamento de 7ecnolog-a
de los Alimentos, U7*V/!e?7A, Universidad de >leida. m=uradog%,io.ucm.es
Fusarium es un hongo fitopatgeno capaz de colonizar el maz, donde puede
acumular una gran variedad de micotoxinas, entre ellas los tricotecenos y las
fumonisinas. Las principales especies de Fusarium productoras de fumonisinas
en maz son F. verticillioides y F. proli#eratumF F. graminearum, es la principal
especie productora de tricotecenos en el maz, aunque se han descrito otras
especies como F. culmorum, F. eIuiseti, F. poae ' F. sporotric)ioides. La
identificacin de Fusarium se ha basado tradicionalmente en caractersticas
morfolgicas y fisiolgicas, pero estas tcnicas son lentas al necesitar el cultivo
del hongo; son poco especficas pues no permiten discriminar entre especies
filogenticamente prximas, y en el caso del anlisis de muestras secas de
maz, son poco sensibles, al necesitar la presencia de micelio viable, que en el
caso de Fusarium, patgeno de campo, decrece rpidamente cuando la planta
es recolectada y procesada.
En este trabajo se ha analizado la presencia de especies micotoxignicas de
Fusarium en 150 muestras de maz espaol (75 de grano y 75 de harina)
contaminado con fumonisinas, en unos rangos que oscilan desde 0.5 hasta 70
ppm. Para ello se ha realizado una identificacin molecular mediante una
batera de cebadores especficos de especie, previamente diseados por
nuestro grupo, correspondientes a las principales especies de Fusarium
asociadas a maz. Los cebadores fueron diseados a partir del anlisis de
secuencias de la regin espaciadora intergnica del rDNA (GS), cuyo carcter
multicopia aumenta la sensibilidad con respecto a las secuencias de copia
nica. La reaccin de PCR se lleva a cabo con el DNA extrado de la muestra
de maz sin ser sometida a un tratamiento de enriquecimiento fngico por
incubacin. Paralelamente se han llevado a cabo ensayos de PCR para
detectar la presencia de los genes de copia nica Fum3 y 7ri13, necesarios
para la sntesis de fumonisinas y tricotecenos respectivamente.
El mtodo empleado ha permitido determinar la presencia de F. verticillioides,
F. proli#eratum ' F. graminearum como especies mayoritarias. Los ensayos de
PCR con genes multicopia han detectado un mayor nmero de muestras
positivas que los ensayos con genes de copia nica. El mtodo propuesto es
rpido y tiene una gran sensibilidad, al ser capaz de detectar como positivas el
100% de las muestras de maz contaminadas con valores por encima de 10
ppm de fumonisinas.

mediante el proyecto AGL 2004-07549-C05-05/AL.
A - 95
+!oduccin de micoto-ina$ &o! !spergillus parasiticus y !spergillus
versicolor inoculado$ en :ue$o
Bermdez, E., Asensio, M.A., Rodrguez, M., Acosta, R. y Nez, F.
Higiene de los Alimentos, Facultad Veterinaria. Universidad de Extremadura. Apdo. correos 643.
10.01 !"ceres. ,ermude$%unex.es
Muchos tipos de queso son un substrato adecuado para el crecimiento de
mohos, producindose durante su maduracin un abundante crecimiento
fngico. Entre los mohos aislados de quesos se encuentran Aspergillus
parasiticus y A. versicolor, capaces de elaborar aflatoxinas o esterigmatocistina
respectivamente. Dada la peligrosidad de estas toxinas preocupa la posibilidad
de que los mohos productores las elaboren cuando se desarrollan en queso.
El objetivo del trabajo ha sido investigar la produccin de aflatoxinas B
1
y G
1
por A. parasiticus y esterigmatocistina por A. versicolor tras su inoculacin en
queso en condiciones similares a las alcanzadas durante la maduracin.
Se inocularon suspensiones de esporas de A. parasiticus CECT 2682 y CECT
2688 y de A. versicolor CECT 2664 y CECT 2903, en lonchas de queso fresco
obtenido en condiciones aspticas y se incubaron a 18C y 85% de humedad
relativa durante 38 das. Se utiliz un lote de queso control sin inocular. Tras la
incubacin las muestras se homogenizaron con 60 ml de 0,1% de cido frmico
en acetonitrilo:agua (9:1) y 50 ml de hexano. Tras 1 h en agitacin se pasaron
a embudo de decantacin y se separ la fase del acetonitrilo, que se evapor.
El extracto se resuspendi en 0,5 ml de acetonitrilo y se analiz por HPLC-MS
con un mtodo de 40 min de duracin con flujo de 0,8 ml/min utilizando como
fases mviles agua y 0,05% cido trifluoroactico en acetonitrilo en gradiente.
Las micotoxinas se identificaron comparando tiempo de retencin y peso
molecular con patrones comerciales de las mismas.
Se detectaron aflatoxinas B
1
y G
1
en todas las muestras de queso inoculado
con A. parasiticus. Las dos cepas mostraron un potencial toxignico similar y
produjeron una concentracin mayor de aflatoxina G
1
que de B
1
, en ambos
casos a niveles de mg/g. Asimismo, las dos cepas de A. versicolor sintetizaron
esterigmatocistina en queso en concentraciones similares (niveles de mg/g).
En consecuencia, dada la capacidad de las especies estudiadas de sintetizar
micotoxinas cuando se desarrollan en queso, es necesario prevenir la
colonizacin por mohos toxignicos de este alimento durante su maduracin.
Para ello pueden tomarse medidas para evitar el crecimiento de cualquier
moho en quesos que no lo requieran para su maduracin o de cultivos
iniciadores no toxignicos cuando la contribucin de la poblacin fngica sea
indispensable para alcanzar las caractersticas especficas de los mismos.

Agradecimientos: Este trabajo ha sido realizado dentro del proyecto
2PR02A051, cofinanciado por la Consejera de Educacin, Ciencia y
Tecnologa de la Junta de Extremadura y el Fondo Social Europeo. R. Acosta
es beneficiaria de una beca FP del Ministerio de Ciencia y Tecnologa.
A - 98
Au$encia de co!!elacin ent!e antibio$i$ in vitro e in vivo &o! lactobacilo$
&!obitico$%
Bujalance, M.C., Jimnez-Valera, M., Moreno, E. y Ruiz-Bravo, A.
(epartamento de +icro,iolog-a, Facultad de Farmacia, Universidad de 4ranada. 1801, 4ranada.
E/mail0 ratoncillos%'a)oo.es
Una de las propiedades que caracteriza a los microorganismos probiticos es
la produccin de sustancias que inhiben el crecimiento de otros
microorganismos. Adems de contribuir a la capacidad de colonizacin in vivo
del probitico, esta antibiosis debe jugar un papel en su efecto sobre el balance
de poblaciones microbianas constituyentes de la microbiota intestinal, y en su
efecto protector frente a infecciones por bacterias enteropatgenas. El presente
estudio se plantea investigar si la antibiosis demostrada in vitro por lactobacilos
probiticos se correlaciona con efectos in vivo.
Se han estudiado dos cepas aisladas de productos lcteos fermentados
comerciales y clasificadas como >acto,acillus plantarum y >acto,acillus casei.
Ambas renen los criterios in vitro para el status de probitico, inlcuyendo la
capacidad para inhibir el crecimiento de enteropatgenos como &almonella
enterica var. Typhimurium, >isteria monoc'togenes y @ersinia enterocolitica.
Sin embargo, ninguna de ellas fue capaz de colonizar de forma persistente el
intestino de ratones BALB/c; tras administracin intragstrica de dosis altas,
solo se detectaron lactobacilos exgenos en coprocultivo durante el periodo de
administracin desapareciendo los lactobacilos exgenos a los dos a tres das
despus de finalizar su ingestin. La presencia de ambos probiticos en el
intestino no alter los recuentos de enterobacterias fecales. Finalmente, la
infeccin experimental por salmonelas, listerias o yersinias tampoco se vi
afectada por la ingesta previa de lactobacilos probiticos.
Se concluye que la antibiosis in vitro no se correlaciona necesariamente con
efectos in vivo. Discrepancias similares se han descrito entre la capacidad de
adherencia a clulas epiteliales in vitro y la capacidad de colonizacin in vivo.
La validez de las bateras de pruebas in vitro propuestas para evaluar el
potencial probitico de bacterias fermentadoras del cido lctico debe ser
revisada a la luz de estos hechos.
A - 101
De$a!!ollo de un $i$tema de ti&ado ba$ado en la t'cnica MLST &a!a ce&a$
de Lactobacillus plantarum
De las Rivas, B., Marcobal, A. y Muoz, R.
(epartamento de +icro,iolog-a, 1nstituto de Fermentaciones 1ndustriales, !&1!, !< 2uan de la
!ierva 3, .8006 +adrid. rmuno$%i#i.csci.es
>acto,acillus plantarum es una especie de gran inters en microbiologa de
alimentos puesto que se utiliza como cultivo iniciador en numerosos sustratos.
Adems, recientemente se han descrito cepas de esta especie que presentan
actividades probiticas. La falta de unos mtodos moleculares fiables ha
impedido realizar estudios para conocer la estructura que presentan las
poblaciones en esta especie. El objetivo de este trabajo ha sido desarrollar un
sistema de tipado basado en la tcnica MLST (multilocus seIuence t'ping) y
que adems nos permita conocer las interrelaciones existentes entre los
aislados de >. plantarum.
Se han estudiado 16 cepas de >. plantarum mediante MLST. Los genes
seleccionados han sido: pgm (codifica una fosfoglucomutasa), ddl (D-alanina-
D-alanina ligasa), g'r6 (subunidad B de la DNA girasa), purP1
(fosforibosilaminoimidazol carboxilasa), gd) (glutamato deshidrogenasa) y
mut& (protena de reparacin de errores en el DNA). Adems estas cepas se
han caracterizado mediante ribotipia y anlisis de SR (16&/.3& r(:A
intergenic spacer region). Mediante ribotipia las cepas se engloban en 4
grupos, sin embargo mediante el anlisis de SR no se ha observado ninguna
diferencia en las cepas analizadas. Por el contrario, la tcnica de MLST en >.
plantarum presenta una alta capacidad discriminante encontrndose una alta
diversidad gentica entre las cepas estudiadas. Los anlisis filogenticos
realizados indican que la poblacin de >. plantarum no presenta una estructura
clonal. Adems, la recombinacin desempea un importante papel en crear
heterogeneidad gentica. Hemos demostrado que la tcnica de MLST permite
una identificacin precisa de las cepas de >. plantarum por lo que representa
un mtodo til para la tipificacin de cepas de esta especie.

A - 102
Ca!acte!i)acin de "SLpl#9 una $ecuencia de in$e!cin funcional en
Lactobacillus plantarum
De las Rivas, B., Marcobal, A., Gmez, A. y Muoz, R.
(epartamento de +icro,iolog-a, 1nstituto de Fermentaciones 1ndustriales, !&1!, !< 2uan de la
!ierva 3, .8006 +adrid. a.marco,al%i#i.csic.es
Las secuencias de insercin (S) son elementos mviles que se encuentran en
el genoma de numerosas bacterias. En el genoma de >acto,acillus plantarum
CECT 4645 se ha encontrado una S, S>pl4, de 985 pb de longitud insertada
en al menos 8 loci. El objetivo de este trabajo ha sido la caracterizacin de
S>pl4.
S>pl4 posee un marco de lectura abierto que codifica una posible protena de
292 aminocidos de longitud y que presenta una alta similitud con posibles
transposasas de estreptococos. En los extremos de S>pl4 se encuentran
secuencias invertidas repetidas (R) de 16 pb. Se ha estudiado tanto la
secuencia como el sitio de insercin en el genoma de >. plantarum CECT 4645
de las diferentes copias de S>pl4. Se ha comprobado que la insercin de
S>pl4 a veces genera repeticiones directas de 8 pb en la secuencia diana,
aunque no se han podido identificar secuencias consenso en los sitios de
insercin. Se ha comprobado que el patrn de copias de S>pl4 en >.
plantarum CECT 4645 no es estable y que se modifica despus de sucesivas
generaciones. Esta inestabilidad parece indicar que algunas de las copias de
S>pl4 son funcionales en >. plantarum CECT 4645.
Se han detectado copias de S>pl4 en >euconostoc mesenteroides,
Denococcus oeni y >acto,acillus saOei. Algunos de estos elementos parecen
ser crpticos, puesto que se han encontrado mutaciones puntuales que originan
transposasas truncadas. Sin embargo, se ha encontrado una copia de S>pl4
que contiene una insercin que origina un posible cambio de fase +1. Mediante
un diseo experimental hemos demostrado que con baja frecuencia ocurre este
cambio de fase. Esta descripcin representa el primer caso de un cambio de
fase +1 funcional en una secuencia de insercin.
A - 111
E$tudio de la din#mica &oblacional de la$ bacte!ia$ del #cido l#ctico en el
:ue$o Cue"a de la Maa;# mediante t'cnica$ de&endiente$ e
inde&endiente$ de culti"o%
Martn-Platero, A., Martn-Snchez, ., Fernndez-Vivas, A., Maqueda, M.,
Valdivia, E. y Martnez-Bueno, M.
(pto. +icro,iolog-a. Facultad de !iencias. Universidad de 4ranada. ammartin%ugr.es
Se ha realizado un estudio polifsico de la dinmica poblacional a lo largo del
proceso de maduracin (6-8 meses) del queso denominado Cueva de la
Magah (Jayena, Granada), elaborado con leche cruda de cabra malaguea
inoculada con cultivos iniciadores.
Se han aislado un total de 126 cepas bacterianas en diferentes medios de
cultivo, que posteriormente han sido tipificadas mediante amplificacin al azar
del ADN polimrfico, establecindose al principio de la maduracin (1 semana)
un total de 29 grupos y 31 grupos al final de la misma. La identificacin
posterior de los grupos se ha realizado sobre la base de criterios fenotpicos-
genotpicos y finalmente mediante secuenciacin del ADNr.
La comunidad microbiana est representada mayoritariamente por cepas del
gnero >acto,acillus, siendo las especies >acto,acillus casei<paracasei los
microorganismos ms abundantes. As, al inicio del proceso de maduracin >,.
casei<paracasei ' >,. plantarum<pentosus constituyen el 48,2 % y 37,3 %
respectivamente del total de microorganismos aislados. Tambin se ha
detectado la presencia, aunque minoritaria, de otros lactobacilos, como >,.
,revis (12,7 %) y >,. #arciminis (0,02 %). Al final de la maduracin, >,.
casei<paracasei, siguen siendo los microorganismos preponderantes (58,8%),
aunque el nmero de clulas totales experimenta una ligera disminucin.
Tambin destaca >,. ,revis cuya representacin se incrementa a lo largo del
proceso hasta alcanzar un 19,8%. En cambio, especies como >,. plantarum
disminuyen de forma importante, no pudiendo ser detectadas por tcnicas de
cultivo. Comportamiento contrario al de >,. para,uc)eneri que alcanza el 15,1
% de la poblacin final.
Al final de la etapa de maduracin se han detectado otros tipos bacterianos no
pertenecientes a las BAL, como cocos gram positivos-catalasa positivos
identificados como &tap)'lococcus eIuorum (4,8 %), &. epidermidis, PoOuria
sp. que en conjunto representan aproximadamente el 5% del total de
microorganismos.
En paralelo, se ha seguido la dinmica poblacional mediante tcnicas
moleculares independientes de cultivo, empleando la electroforesis en
gradiente temporal de temperatura (TTGE). Ello ha permitido poner de
manifiesto la presencia de otros microorganismos no detectados por las
tcnicas clsicas, entre los que cabe mencionar >actococcus lactis, al principio
de la maduracin, as como >,. plantarum<pentosus al final de la misma.
De los resultados presentados se deduce la importancia de complementar
ambas metodologas para estudiar la biodiversidad de ecosistemas tan
complejos como los quesos elaborados con leche cruda.
A - 112
E$tudio de la di"e!$idad en'tica de ente!ococo$ &!e$ente$ en un :ue$o
elabo!ado con lec;e c!uda de cab!a
Pelegrn, A., Martn-Snchez, ., Fernndez-Vivas, A., Martn-Platero, A.,
Valdivia, E., Maqueda, M. y Martnez-Bueno, M.
(pto. +icro,iolog-a. Facultad de !iencias. Universidad de 4ranada. Fuentenueva s<n. 1801/
4ranada. E/mail0 mmartine%ugr.es
Los enterococos, son microorganismos ubicuos que habitan el tracto
gastrointestinal del hombre y animales. Se aslan adems de alimentos
fermentados, embutidos, quesos y encurtidos, en los que su presencia se ha
referido en varias ocasiones como deseable, por estar directamente implicados
en las caractersticas organolpticas del producto. Sin embargo, su existencia
en alimentos es controvertida, dado que son considerados como indicadores de
contaminacin fecal y algunas cepas, poseedoras de determinantes de
virulencia (adhesinas, proteasas, citolisinas), han sido sealadas como posibles
agentes etiolgicos de infecciones oportunistas. Adems, los enterococos han
desarrollado resistencias a un gran nmero de antibiticos, lo que puede
representar un riesgo serio de expansin de las mismas a travs de la cadena
alimentaria.
Estos datos ponen de manifiesto que la utilizacin de cepas de enterococos en
la fabricacin de alimentos requiere una cuidadosa seleccin de las mismas,
siendo de gran importancia la tipificacin de las que se encuentran de forma
natural en los productos alimentarios al objeto de seleccionar, sin equvoco, las
que puedan considerarse como GRAS.
Se ha realizado un estudio para determinar la biodiversidad en un queso
artesanal de la provincia de Granada elaborado con leche cruda de cabra
(queso Montefrieo), centrado especialmente en establecer la dinmica
poblacional de los enterococos a lo largo del proceso de maduracin. Su
deteccin y posterior caracterizacin, se llev a cabo como parte del recuento
del nmero total de microorganismos. En el inicio de la maduracin (semana 1)
se alcanz una poblacin microbiana total de 1,48x10
8
ufc/gr, que se redujo
paulatinamente hasta 1,96x10
6
ufc/gr al final del proceso. En cambio el nmero
de enterococos se mantuvo casi constante a lo largo de la maduracin,
oscilando entre 6x10
4
ufc/gr al inicio y 1x10
4
ufc/gr al final del proceso.
Mediante anlisis del ADN polimrfico se estableci un solo grupo identificado
como Enterococcus #aecalis. Estos datos fueron confirmados tambin mediante
PCR especficas. Sin embargo el anlisis de otros caracteres investigados y la
presencia de determinantes de virulencia mediante multiple PCR, puso de
manifiesto la existencia de varios subgrupos.
El anlisis de produccin de bacteriocinas y proteasas ha mostrado que el 48%
del total de los enterococos eran productores de bacteriocinas, el 36,8% de
proteasas, el 2,5% producen ambas sustancias y el 11,9% ninguna de las dos,
aunque ninguna de las cepas era hemoltica. El estudio de los determinantes
de virulencia realizado ha arrojado los siguiente resultados: CylA (citolisina)
estaba presente en el 26,75% de las cepas analizadas; Esp (protena de
superficie) en el 48,5 %; Asa1 (sustancia de agregacin)en el 66,2 % y GelE
(gelatinasa) en el 90,4 % de los casos y todas dieron negativo para el gen de la
hialuronidasa.
A - 114
Acti"idad antimic!obiana de aceite$ e$enciale$ &!ocedente$ de &lanta$ de
la &!o"incia de 3a'n8 em&leo &otencial en alimentacin%
Ortega, E., Camacho, A., Ben Omar, N., Lucas, R., Abriouel, H., Martnez-
Caamero, M. y Galvez A.
Nrea de +icro,iolog-a. (epartamento de !iencias de la &alud. Facultad de !iencias
Experimentales. Universidad de 2a5n. *ara=e >as >agunillas s<n. .301. 2AQ:. e/mail0
eortega%u=aen.es
La utilizacin de plantas superiores en el tratamiento de procesos infecciosos
ha constitudo una de las prcticas ms habituales a lo largo de la historia del
hombre. El inters por el posible potencial antimicrobiano presente en algunas
de estas plantas resurge ahora como consecuencia de los problemas de
resistencia y escasa actividad asociados al empleo de ciertos antibiticos. El
objetivo del presente trabajo fue realizar un rastreo entre las plantas
habitualmente empleadas en la medicina popular de la provincia de Jan a fin
de localizar aqullas con una actividad antimicrobiana que justificara su empleo
tradicional, as como su posible empleo en la industria farmacutica, cosmtica
o alimentaria como fuente de compuestos activos.
Tras analizar ms de 60 especies vegetales se observ que los aceites
esenciales presentan una mayor actividad antimicrobiana, as como un
espectro ms amplio de accin que los extractos alcohlicos procedentes de
las mismas plantas. De igual forma se detect una especial actividad en
plantas de las familias !ompositae (especie (ittric)ia viscosa) y Um,elli#erae
(especie 6upleurum gi,raltaricum).
En el presente estudio se han realizado ensayos con objeto de determinar las
concentraciones mnimas inhibitorias (MCs) de los aceites esenciales
procedentes de dos variedades de la especie (ittric)ia viscosa, as como de
una variedad de la especie 6upleurum gi,raltaricum frente a 5 especies
bacterianas as como frente a !andida al,icans.
Se han encontrado diferencias significativas en la actividad de los aceites
esenciales de distintas variedades de la misma planta, de distintas fracciones,
as como dependientes de la poca de recoleccin de las mismas. No obstante,
la inmensa mayora de los aceites esenciales analizados presentaron actividad
frente a los microorganismos empleados: *seudomonas aeruginosa,
&tap)'lococcus aureus, 6acillus su,tilis, +'co,acterium p)lei, Esc)eric)ia coli
y !andida al,icans, destacando por su mayor sensibilidad la especie +. p)lei,
para la que se obtuvieron los menores valores de MCs (0,0078 y 0,0002 g/l
para (ittric)ia viscosa y 6upleurum gi,raltaricum respectivamente).
El amplio espectro de accin detectado en los aceites esenciales procedentes
de estas plantas justifica posteriores estudios con objeto de determinar los
principios activos responsables de estas actividades, as como su empleo
potencial en las industrias farmacutica, cosmtica o alimentaria, donde
podran utilizarse como conservantes de origen natural.
A - 130
+!oduccin de micoto-ina$ e$t!o'nica$ y t!icoteceno$ &o! e$&ecie$ de
usarium $ob!e a!!o) y ma,)
Anaya, ., Segura, C., Ventura, M., Comellas, L. y Agut M.
1nstitut Gu-mic de &arri" BU?>C, Via Augusta 390, 0801, 6arcelona E EspaLa. ivana'a%iIs.es
Int!oduccin% Muchos de los 12,13-epoxitricotecenos, tales como el
desoxinivalenol (DON), el diacetoxiscirpenol (DAS), la toxina T-2, y tambin las
lactonas estrognicas zearalenona (ZEA), -zearalenol (-ZOL) y su epmero
-zearalenol (-ZOL), pueden ser producidos por una gran variedad de cepas
de Fusarium. En la literatura se hallan diferentes artculos acerca de los
mtodos de produccin y deteccin de estos metabolitos secundarios, referidos
a medios de cultivo slidos y lquidos, observndose una produccin
relativamente baja de toxinas. En este estudio se describen las condiciones
para el anlisis y la evolucin de la produccin de las micotoxinas mencionadas
en funcin del tiempo, prestando especial atencin a su comportamiento tras la
inoculacin de las cepas en forma individual y conjunta, para evaluar el
sinergismo o antagonismo entre ellas. Los substratos de cultivo sobre los que
se desarrollaron las cepas de Fusarium fueron arroz y maz. Adems se ha
evaluado la produccin de estas micotoxinas por parte de especies de
Fusarium aisladas de alimentos a base de maz.
Metodolo,a% Se ha evaluado la produccin de estas micotoxinas por parte de
las cepas F. culmorum CECT-2148, F. eIuiseti CECT-2149 y F. graminearum
CECT-2150 descritas como productoras. Las especies de Fusarium aisladas de
los alimentos a base de maz de las que se evalu la capacidad micotoxignica
fueron F. verticillioides, F. tricinctum, F. proli#eratum, F. solani, F. ox'sporum y
Fusarium spp. En cuanto a las condiciones de cultivo, se colocan en sendos
erlenmeyer 5g de arroz ms 5ml de agua y 5g de maz ms 15ml de agua, que
fueron autoclavados por 15min a 121C. Los substratos se inocularon con
esporas a niveles de 1x10
7
conidios/g y se incubaron a 27C por 7, 14 y 21 das
en oscuridad. Los cultivos se filtraron y los extractos crudos se sometieron a la
etapa de purificacin de muestra mediante el empleo de un cartucho de
extraccin en fase slida para luego cuantificar las micotoxinas mediante
cromatografa de gases acoplada a espectrometra de masas (HRGC-MS)
previa trimetilsilil-derivatizacin.
Re$ultado$% Tanto sobre arroz como en maz, las cepas de la CECT producen
las toxinas DON, DAS, ZEA, -ZOL y -ZOL, no as la toxina T-2. Los
mrgenes de produccin se encuentran entre los ppb hasta los miles de ppm
dependiendo de la toxina. Las cepas de Fusarium aisladas de los alimentos a
base de maz producen micotoxinas en niveles de las decenas de ppm,
especialmente para las toxinas estrognicas.
Di$cu$in% El empleo de maz ha favorecido la produccin de micotoxinas y
podra constituirse en un medio alternativo al sugerido por la FDA (arroz). Las
cepas halladas en alimentos a base de maz, demostraron poseer una
capacidad micotoxignica a ser tenida en cuenta.
A - 135
+!o!ama +ISCECAE<8 e$tudio mic!obiolico de la$ mue$t!a$ de
comida$ &!e&a!ada$
Gonzlez Ruibal, L., Galn Castao, F., Guerra Maestre, M.J. y Fernndez
Vecino, A.
>a,oratorio de &alud *R,lica de !"ceres. (irecci;n de &alud del "rea de !"ceres. &ervicio
ExtremeLo de &alud.c< Al#5reces provisionales s<n. 10001 !N!E?E&.
lidia.gon$ale$%sc.=untaex.es
La Consejera de Sanidad y Consumo de la Junta de Extremadura, en el ao 2003,
elabor el Programa PSCECAEX intentando adecuar las normas legislativas de
alimentacin y salud a los centros educativos gestionados directa o indirectamente por
la Consejera de Educacin, Ciencia y Tecnologa, con el fin de poner en marcha los
principios del Sistema de Anlisis de Peligros y Puntos de Control Crtico (Sistema
APPCC). Uno de los objetivos de este programa fue la recogida de muestras de
comidas preparadas en los comedores escolares para su envo y posterior anlisis en
los Laboratorios de Salud Pblica.
OBJETVOS
- Obtener informacin respecto al estado sanitario de las comidas preparadas en los
centros escolares dependientes de la junta de Extremadura.
- Verificar la aplicacin, desde el punto de vista microbiolgico, del Sistema de Anlisis
de Peligros y Puntos de Control Crtico (APPCC) en los centros escolares dependientes
de la Junta de Extremadura de la provincia de Cceres.
- Establecer los parmetros microbiolgicos que afectan y deterioran las comidas
elaboradas en los centros escolares mencionados de acuerdo con el R.D. 3484/2000 de
29 de Diciembre, por el que se establecen las normas de higiene para la elaboracin,
distribucin y comercio de comidas preparadas.
RESULTADOS
- El Laboratorio de Salud Pblica de Cceres recepcion un total de 134 muestras de
comidas preparadas recogidas en diferentes centros escolares dependientes de la Junta
de Extremadura (Programa PSCECAEX).
- El 7,46% de las 134 muestras analizadas superaron alguno de los lmites
microbiolgicos establecidos en el R.D. 3484/2000, mientras que el 92,54% restante no
lo hicieron.
- Los parmetros que superaron los lmites microbiolgicos fueron: Aerobios mesfilos
1,49%, &tap)'lococcus aureus 1,49%, Enterobactereaceas 3,73% y Esc)eric)ia coli
5,97%.
- Los porcentajes de los parmetros microbiolgicos respecto al nmero de muestras
que superaron los lmites microbiolgicos fueron: Aerobios mesfilos 20%,
&tap)'lococcus aureus 20%, Enterobactereaceas 50%, Esc)eric)ia coli 80%.
CONCLUSONES
-En tan slo siete centros escolares las comidas preparadas superaron los lmites
microbiolgicos.
-No se detectaron grmenes patgenos en ninguna de las muestras.
-En todos los casos los parmetros que superaron los lmites establecidos fueron
grmenes indicadores y testigos de falta de higiene.
-El porcentaje de grmenes testigo de falta de higiene (7,46 %) fue superior al de
grmenes indicadores (5,22 %).
AGRADECMENTOS
A la Gerencia y a la Direccin de Salud del rea de Cceres del Servicio Extremeo de Salud
(SES). A los Facultativos Sanitarios Veterinarios, de las cuatro reas de Salud de la provincia de
Cceres que recogieron las muestras.
BBLOGRAFA
-Plan de nspeccin Sanitaria de los Centros Educativos de la Comunidad Autnoma de
Extremadura (PSCECAEX).
-R. D.3484/2000, de 29 de Diciembre, por el que se establecen las normas de higiene para la
elaboracin, distribucin y comercio de comidas preparadas.
A - 141
E$tudio de la ca&acidad antimic!obiana de &'&tido$ y e-t!acto$ fenlico$
f!ente a le"adu!a$ alte!ante$ de "ino%
Enrique, M.
1
, Valls, S.
1
, Marcos, J.F.
2
, bez, E.
1
, Yuste, M.
3
, Esteve-Zarzoso,
B.
3
y Manzanares, P.
1
1
(epartamento de 6iotecnolog-a de Alimentos '
.
(epartamento de !iencia de los Alimentos,
1nstituto de AgroIu-mica ' 7ecnolog-a de Alimentos, !onse=o &uperior de 1nvestigaciones
!ient-#icas B!&1!C, Apartado de !orreos 3, 46100, 6ur=assot, ValenciaF
3
6odegas +iguel 7orres
&.A., Villa#ranca del *ened5s, 6arcelona. E/mail0 mariaenlo%iata.csic.es.
La vinificacin incluye varios estados en los que el crecimiento microbiano no
deseado puede producirse. Las principales levaduras alterantes pertenecen a
los gneros 6rettanom'ces, !andida, Hanseniaspora, *ic)ia y
S'gosacc)arom'ces. Esta alteracin influye tanto en la calidad organolptica
como en el estado sanitario del vino llegando incluso a hacerlo no apto para el
consumo. Tradicionalmente, se emplea el anhdrido sulfuroso (SO
2
) como
conservante, ya que inhibe el crecimiento microbiano y preserva de la
oxidacin. Aunque el SO
2
es utilizado de forma racional, existe una tendencia
mundial hacia la reduccin del uso de conservantes qumicos en la industria
agroalimentaria. Por este motivo resulta importante buscar alternativas, con el
objeto de asegurar un vino ms acorde con las demandas actuales del
consumidor. Entre ellas destacan el empleo de una tecnologa de vinificacin
ms refinada y el uso de bioconservantes.
En este estudio se han utilizado, por un lado, una coleccin de 11 pptidos, con
capacidad antifngica probada, y tambin extractos fenlicos procedentes de
brisas de las variedades Tempranillo y Parellada. Los fenoles se han extrado
empleando una solucin etanlica al 50% en agua, siendo posteriormente
fraccionados empleando metanol, eter dietlico, diclorometano y acetato de
etilo. Su efecto antimicrobiano fue testado frente a cinco especies de levaduras
alterantes de vino (S'gosacc)arom'ces ,ailii, (eOOera ,ruxellensis, *ic)ia
mem,ranae#aciens, S'gosacc)arom'ces ,isporus y !r'ptococcus spp.) y una
cepa comercial de &acc)arom'ces cerevisiae, levadura responsable de la
elaboracin del propio vino, pero que puede actuar como alterante si crece en
vinos blancos jvenes embotellados que contienen una cantidad de azcar
residual.
Los resultados obtenidos permiten seleccionar tres pptidos con una buena
capacidad antimicrobiana frente a las especies S. ,ailii y *. mem,ranae#aciens.
Con respecto a los extractos fenlicos, las fracciones ms activas son las
obtenidas con acetato de etilo y metanol, capaces de inhibir totalmente el
crecimiento de !r'ptococcus spp., S. ,ailii y *. mem,ranae#aciens. La cepa de
&. cerevisiae no ha visto afectado su crecimiento por la accin de ninguno de
los antimicrobianos ensayados.

Este trabajo se ha realizado en el marco del proyecto NA VN03-007-C21.
A - 147
Identificacin de ;ono$ filamento$o$ ai$lado$ de mue$t!a$ de Ca"a
Gallardo, J.J., Castro, O., Rius, N. y Calvo M.A.
(1)
(epartament de +icro,iologia i *arasitologia &anitHries. Facultat de FarmHcia. Universitat de
6arcelona. nrius%u,.edu.
B1C
(epartament de &anitat i dTAnatomia Animals. Facultat de VeterinHria.
Universitat AutUnoma de 6arcelona
El cava es un derivado de la uva. Para su elaboracin, son necesarios dos
procesos de fermentacin; el primero termina con la obtencin del vino base y
el segundo tiene como principal caracterstica la produccin del dixido de
carbono que permanece disuelto en el lquido hasta que se libera la presin de
la botella apareciendo el burbujeo tpico de los espumosos.
La elaboracin de cava por el mtodo !)ampenoise consiste en la
refermentacin de una mezcla de vinos base, a la que se ha aadido azcar y
levaduras, en la caracterstica botella de vidrio. Las botellas hermticamente
cerradas, se almacenan en la cava en posicin horizontal (en rima). A partir de
este momento tiene lugar la segunda fermentacin en botella, aumentando la
presin del vino al generarse CO
2
. El envejecimiento del cava se produce
despus de la fermentacin, y se debe al contacto del vino con las levaduras
antes de su eliminacin. El Consejo Regulador del Cava establece un perodo
mnimo de 9 meses desde el embotellado hasta la eliminacin de las las.
Castro y Rius (2005) han estudiado la evolucin de la microbiota de dos
muestras de cava en fase de rima, y han aislado distintas cepas de levaduras,
bacterias Gram positivas y Gram negativas, y hongos filamentosos, entre los
meses 9 y 17 de la segunda fermentacin.
Aunque las levaduras juegan un papel muy importante en la composicin del
vino, algunos cambios que influyen en la calidad sensorial y en la aceptabilidad
del consumidor pueden ser debidos a la actividad y a la interaccin de los
distintos microorganismos presentes en el cava.
En este trabajo se presentan los resultados obtenidos en la identificacin de las
cepas de mohos aisladas. La identificacin se realiz por observacin
macroscpica de las cepas desarrolladas en los medios de cultivo siguientes:
Agar Sabouraud, Agar Czapex, Agar Rosa de Bengala, OGYE e YPD con 2%
de glucosa. Asimismo, se procedi a la observacin microscpica de las cepas
mediante la tcnica de la cmara clara, empleando azul de lactofenol como
colorante de contraste
Se aislaron hongos pertenecientes a las especies Aspergillus niger, A. #lavus,
A. #umigatus, A. versicolor, *enicillium citrinum, *. c)r'sogenum y 4liomastix
murorum, que forman parte de la microbiota tpica del suelo y la via. Estas
especies pueden sintetizar micotoxinas y otros metabolitos en los frutos
daados. Aunque el vino se somete a un proceso de filtracin, el sistema
utilizado probablemente no retiene los conidios de estos microorganismos o
bien se produce una contaminacin ambiental en alguna de las etapas de la
produccin.
Castro O. and Rius N. 2005. +icro,ial (iversit' during &parOling Vine
*roduction ,' t)e 7raditional +et)od. ASM105
th
General Meeting. Atlanta
(USA)
A - 153
E$tudio de la micobiota contaminante de u"a$ culti"ada$ en E$&a6a y
ca!acte!i)acin de !spergillus tubingensis como &!oducto! de oc!ato-ina
A mediante +CR= R>L+ de la !ein ITS ?=@%AS=ITS. del !DNA y LC=MS=MS
Medina, .
1
, Valle-Algarra, F.M.
2
, Mateo, R.
2
, Lpez-Ocaa, L.
3
, Jimnez, M.
1*
1(pto.+icro,iolog-a ' Ecolog-a. Facultad de 6iolog-a, Universitat de ValKncia. .(pto. Gu-mica
Anal-tica. Facultad de Gu-mica, Universitat de ValKncia. 3!olecci;n EspaLola de !ultivos 7ipo
B!E!7C. Universitat de ValKncia. (r. +oliner 30, E/46100, 6ur=assot, Valencia, EspaLa.
La incidencia de ocratoxina A (OTA) en vino ha despertado un gran inters en
los ltimos aos. Estudios realizados en nuestro laboratorio han puesto de
manifiesto que la toxina se encuentra en un 64% de los vinos comercializados
en Espaa. En consecuencia, la caracterizacin y control de los hongos
responsables de su produccin en uva es una tarea prioritaria.
En este trabajo se estudia la micobiota de cinco variedades de uvas cultivadas
en Espaa, todas ellas empleadas en la elaboracin de vinos de reconocidas
denominaciones de origen. Cuatro variedades fueron de uva roja (Bobal,
Tempranillo, Garnacha y Monastrell) y una de uva blanca (Moscatel).
Los hongos que presentaron mayor incidencia fueron Alternaria spp,
!ladosporium spp y Aspergillus spp. En base a los perfiles de produccin de
OTA fue, sin duda, muy destacable la incidencia de Aspergillus de la seccin
:igri ya que el 82% de las muestras estuvieron contaminadas con estos
hongos. Por ello, el estudio se centr en esta seccin de Aspergillus.
La caracterizacin de las especies del agregado A. niger (A. niger, A.
tu,ingensis) se realiz mediante amplificacin por PCR de la regin TS1-5.8S-
TS2 del rDNA seguido de su digestin con la endonucleasa Rsa1. Esta
caracterizacin fue confirmada mediante secuenciacin. La produccin de OTA
por los diferentes aislamientos fue ensayada utilizando como medio de cultivo
sacarosa-extracto de levadura (YES) suplementado con un 5% de polen de
abeja para favorecer la biosntesis de la toxina. El anlisis de OTA en los
cultivos fue realizado mediante cromatografa lquida con detector de
fluorescencia (LC-FLD). La confirmacin de la presencia de la toxina se llev a
cabo mediante cromatografa lquida con detector de espectrometra de masas
con trampa de iones (LC-MS-MS).
Los resultados obtenidos a partir de los cultivos in vitro de 205 aislamientos de
Aspergillus de la seccin :igri mostraron que el 74,2% de los aislamientos de
A. car,onarius y el 14,3 % de los aislamientos de A. tu,ingensis eran capaces
de producir OTA a niveles comprendidos entre 1,2 y 3531 ng/ml, y entre 46,4 y
111,5 ng/ml, respectivamente. Sin embargo, ningn aislamiento de A. niger
present capacidad productora de OTA en las condiciones empleadas. Los
resultados obtenidos tambin indicaron la existencia de diferencias
significativas en los niveles de incidencia de hongos ocratoxignicos en funcin
de la variedad de uva.
En este trabajo se describe por primera vez a la especie Aspergillus
tu,ingensis como productora de OTA as como la influencia de la variedad de
uva en la incidencia de hongos productores de esta toxina.
Este trabajo ha sido financiado por el Ministerio de Educacin y Ciencia, proyecto AGL
2004-07549-C05-02/AL y por la Generalitat Valenciana, proyecto GV04B-111 y beca
FP, por lo que los autores manifiestan su agradecimiento.
A - 158
+otencial del &l#$mido c!,&tico &RSB de Pe$iococcus pentosaceus como
"ecto! de clonacin de bacte!ia$ l#ctica$
Alegre, M.T.
a
, Rodrguez, M.C.
b
y Mesas, J.M.
c
a
(epartamento de +icro,iolog-a ' *arasitolog-a,
,
(epartamento de Fisiolog-a Vegetal,
c
(epartamento de Gu-mica Anal-tica, :utrici;n ' 6romatolog-a B7ecnolog-a de AlimentosC. Escuela
*olit5cnica &uperior, Universidad de &antiago de !ompostela, .00./>ugo. E/mail0
mtalegre%lugo.usc.es
Las bacterias cido-lcticas (BAL) son tiles para la industria alimentaria por su
contribucin a las propiedades organolpticas de alimentos fermentados y por
su capacidad de producir bacteriocinas [1]. Los esfuerzos encaminados a
aumentar la disponibilidad de vehculos de clonacin plasmdicos para las BAL,
suponen un incremento en las posibilidades de manipulacin gentica de las
mismas. Los plsmidos pRS4C1, pRS4C2 y pRS4C3 [2, 3], construidos con
pRS4, pUC19 y el gen de resistencia a cloranfenicol procedente de pLP825, se
introdujeron por electroporacin en >acto,acillus plantarum, >acto,acillus
casei, *ediococcus pentosaceus y *ediococcus acidilactici en donde se
mantienen establemente lo que, hasta el presente [1], convierte a pRS4 en el
primer plsmido de *. pentosaceus, replicativo por crculo rodante, que ha sido
empleado como vector de clonacin en BAL. Los infructuosos intentos de
electrotransformacin de Enterococcus #aecalis con los derivados de pRS4 bajo
las mismas condiciones en las que otros plsmidos de Gram-positivas (pCU1 y
pBT2 [2]) transforman y se mantienen de forma estable en E. #aecalis, sugieren
que pRS4 funciona selectivamente en algunas especies de BAL concretamente
en el super-cluster de los Lactobacilos pero no en todas las BAL. Estos
resultados parecen indicar que las construcciones derivadas de pRS4 podran
servir como vehculos de clonacin selectivos para determinadas BAL
alimentarias sin riesgo de transferencia horizontal a otras bacterias como E.
#aecalis, que es considerada patgena o cuando menos indeseable y que
potencialmente puede estar presente en algunos productos alimenticios.

Los autores agradecen a la XUNTA de Galicia (PGDT02BTF29101) la
financiacin del presente trabajo.

[1]Shareck, J., Choi, Y., Lee, B. and Miguez, C.B. (2004) Cloning vectors based
in cryptic plasmids isolated from lactic acid bacteria: their characteristics and
potential applications in biotechnology. Crit. Rev. Biotechnol. 24: 155-208.
[2]Alegre, M.T., Rodrguez, M.C. and Mesas, J.M. (2004) Transformation of
>acto,acillus plantarum by electroporation with in vitro modified plasmid DNA.
FEMS Microbiol. Lett. 241, 73-77.
[3]Alegre, M.T., Rodrguez, M.C. and Mesas, J.M. (2005) Nucleotide sequence,
structural organization and host range of pRS4, a small cryptic *ediococcus
pentosaceus plasmid that contains two cassettes commonly found in other
lactic acid bacteria. FEMS Microbiol. Lett. (Enviado).
A - 163
Bacte!ia$ l#ctica$ 5lactococo$7 ai$lada$ del :ue$o de Gene$to$o du!ante
$u madu!acin8 acti"idad antimic!obiana f!ente a ce&a$ de !efe!encia
Gonzlez Arias, L., Arenas, R., Sacristn, N., Gonzlez Prieto, J., Fresno, J.M.
y Tornadijo, M.E.
(pto. de Higiene ' 7ecnolog-a de los Alimentos. Universidad de >e;n, .401/>e;n. E/mail0
d)tmet%unileon.es
El queso de Genestoso recibe su nombre del municipio en el que se elabora,
perteneciente al concejo de Cangas de Narcea, localizado en el Principado de
Asturias. Su elaboracin se lleva a cabo de forma exclusivamente artesanal a
partir de leche cruda y la produccin es muy limitada. Uno de los principales
problemas que plantea la distribucin de este queso es la ausencia de
garantas de calidad higinica y la falta de homogeneidad. Estos problemas
podran paliarse pasterizando la leche y adicionando fermentos integrados por
bacterias lcticas con aptitud tecnolgica demostrada y con capacidad para
producir bacteriocinas.
El objetivo de este trabajo fue comprobar la actividad antimicrobiana de las
cepas de bacterias lcticas aisladas en agar MSE durante la elaboracin y
maduracin del queso de Genestoso frente a 5 cepas de referencia, algunas de
las cuales tienen carcter patgeno o pueden actuar como agentes alterantes
de los alimentos.
Durante la elaboracin y maduracin el queso de Genestoso se aislaron en
agar MSE un total de 140 cepas, de las cuales 138 fueron identificadas como
bacterias lcticas. Se comprob la actividad antimicrobiana de 133 cepas de
bacterias lcticas (5 cepas no crecieron en cultivos sucesivos). Las cepas
indicadoras empleadas para ensayar la actividad antimicrobiana fueron
obtenidas de la Coleccin Espaola de Cultivos Tipos (CECT) (Universidad de
Valencia): >isteria monoc'togenes (CECT 4031), &tap)'lococcus aureus
(CECT 240), Enterococcus #aecalis (CECT 481) y !lostridium t'ro,ut'ricum
(CECT 4011). Adems, se comprob la actividad inhibidora frente a una cepa
de referencia >acto,acillus plantarum (CECT 748).
Para detectar la actividad antimicrobiana de las cepas se emple el "mtodo de
siembra de gota en superficie y el "mtodo de difusin en placa para detectar
las cepas productoras de bacteriocinas, tras obtener por centrifugacin el
extracto libre de clulas que contiene la actividad antimicrobiana.
Se detectaron 6 cepas como posibles productoras de bacteriocinas, una de las
cuales pertenece al gnero >actococcus y produjo inhibicin frente a
!lostridium t'ro,ut'ricum (CECT 4011); las cinco restantes pertenecen al
gnero Enterococcus y produjeron inhibicin frente a !lostridium t'ro,ut'ricum
(CECT 4011), >isteria monoc'togenes (CECT 4031), Enterococcus #aecalis
(CECT 481) y >acto,acillus plantarum (CECT 748).
El efecto inhibitorio que presentan estas seis cepas podra deberse a la
produccin de bacteriocinas o metabolitos similares a ellas. El paso siguiente
ser comprobar su naturaleza proteica y proceder, en su caso, a la purificacin
y caracterizacin de las bacteriocinas detectadas.
A - 165
Identificacin y cuantificacin de la e$&ecie Saccharomyces cerevisiae
di!ectamente en "ino mediante la t'cnica de +CR a tiem&o !eal%
Fernndez-Espinar, M.T., Martorell, P. y Querol, A.
(epartamento de 6iotecnolog-a de los Alimentos, 1nstituto de AgroIu-mica ' 7ecnolog-a de
Alimentos B!&1!C, Apdo. 3, 46100 6ur=assot, Valencia, &pain. t#er%iata.csic.es
&acc)arom'ces cerevisiae se ha usado desde hace siglos en la produccin de
alimentos y bebidas fermentadas como el pan, la cerveza el vino y la sidra.
Pero adems de su claro papel beneficioso, &. cerevisiae tambin es capaz de
alterar los alimentos an cuando estos hayan sido procesados y empaquetados
correctamente (1). En concreto, &. cerevisiae se ha asociado con alteracin
fermentativa de bebidas no alcohlicas y alcohlicas as como de productos
lcteos y de panadera (2).
En el presente trabajo, hemos desarrollado un mtodo basado en la tcnica de
PCR a tiempo real para detectar y cuantificar esta levadura directamente en
muestras de vino. El principal objetivo de este trabajo es dotar a los
bodegueros de un mtodo rpido y sensible para prevenir la alteracin del vino.
La clonacin y secuenciacin de una banda de RAPDs (3) que diferenciaba &.
cerevisiae del resto de especies del complejo &acc)arom'ces sensu stricto nos
permiti el diseo de un par de cebadores especficos de &. cerevisiae. La
especificad de los cebadores fue demostrada utilizando DNA de las levaduras
consideradas como tpicamente alterantes de vino. Se mostr la utilidad del
mtodo para estimar el nivel de contaminacin de &. cerevisiae directamente
en vinos dulces y tintos sin preenriquecimiento previo y se mejor la
sensibilidad con un preenriquecimiento previo de 12h. Se llevaron a cabo
ensayos de cuantificacin en muestras de medio GPY contaminadas
artificialmente y se establecieron los lmites para una cuantificacin fiable.
En conclusin, la deteccin de &. cerevisiae en vino fue cuantitativa y
reproducible. No existe una legislacin nacional o internacional al respecto pero
el lmite de deteccin obtenido es suficiente para detectar los niveles
recomendados por la OV (Office nternational de la Vigne et du Vin) y la
tcnica satisface las necesidades de la industria vnica (4). Aunque el mtodo
ha sido puesto a punto para la deteccin en vino, puede ser adaptado a otro
tipo de alimentos donde &. cerevisiae puede tambin causar una alteracin.

Biblio!af,a
(1)Pitt, J.L. and Hocking, A.D. n: Fungi and food spoilage. Acad. Press. 1985.
(2)Deak, T. and Beuchat, L.R. n: Handbook of food spoilage yeasts. CRC
Press. 1996
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2003.
(4)Loureiro, V. and Malfeito-Ferreira, M. nt. J. Food Microbiol. 86: 23-50. 2003
A - 170
>!ee)in effect$ on t;e mic!obioloical :uality of oat c;ee$e
Pereira, R.M.*
1
; SalesGomes, M.*
1
; Lima-Costa, E.*
1
; Cassinello, J.*
2
and
Dionsio, L.*
1

M
1
Universidade do AlgarveEFE?: !ampus de 4am,elas 8003/139 Faro *ortugal M
.
(irecWXo
?egional de Agricultura do AlgarveE(?AA>4 *atacXo 8001/904 Faro *ortugal. E/mail0
ldionis%ualg.pt
Seasonal nature of goat milk production induces the cheese producers to keep
some over production, under frozen storage (-202C). Traditional Portuguese
cheesemaking uses flowers of !'nara cardunculus L., widely known by their
coagulant properties. These flowers may also lead to microbiological
contamination of the final product. The evaluation of the effects of frozen
storage on microbiological quality of goat cheese was the aim of this study. n
the present work we have determined the number of aerobic heterotrophic
microorganisms that grows at 30C, >acto,acillus, total and fecal coliforms, on
three batches of goat fresh cheese produced from raw milk. &tap)'lococus
aureus, moulds and yeasts were also enumerated in two of the three bacthes.
n order to monitor the microbiological quality of goat fresh cheese, submitted to
frozen conditions the samples were kept at -202C and were taken weekly
along 56 days. Decimal dilutions were prepared with sterile Ringer solution
(Oxoid). The first dilution was homogenized for two minutes in a Stomacher
Lab-Blender 400 (Seward Medical, London, UK). Aliquots were plated in
triplicate on complex and selective media. Aerobic heterotrophic
microorganisms were cultivated on Plate Count Agar (Merck) supplemented
with skimming milk at 301C for 48 hours, by pour plate technique. Total and
fecal coliforms were incorporated on Violet Red Bile Glucose Agar (Merck), and
incubated in anaerobic conditions at 301C for 48 hours and at 44.5C for 24
hours, respectively. >acto,acilli were grown in Rogosa Agar (Biokar) at 361C
for 48 hours. &tap)'lococcus aureus were enumerated in Baird-Parker Agar
base supplemented with Rabbit Plasma Fibrinogen (Oxoid). Moulds and yeast
were isolated by spreading on Cook Rose Bengal (Oxoid) at 251C for 5 days.
Along the freezing treatment, fecal coliforms, moulds and yeasts counting were
reduced, being, at the end, two orders of magnitude less. >acto,acillus showed
one order less. &tap)'lococcus aureus, total coliforms and aerobic
heterotrophic microorganisms did not show significant reduction during frozen
storage.
The present work was partially financed by the AGRO 281 Project (Ministrio da
Agricultura Portugal.
References:
Sales-Gomes, M., Lima-Costa, E., Dias, J., Dionsio, L. (2003) Microbiological
Characterization of cardoon (!'nara cardunculus L.) Congresso Nacional de
Microbiologia, Tomar. (Painel)
Tejada, L.; Snchez, E.; Gmez, R.; Vioque, M.; Fernandez-Salguero, J. (2002) Effect of
freezing and frozen storage on chemical and microbiological characteristics in sheep
milk cheese. Food Chemistry and toxicology. 67:126-129.
Directiva 92/46/CEE do Conselho das Comunidades Europeias de 16 de Junho de 1992
do Jornal Oficial das Comunidades Europeias.
A - 179
0na ce&a come!cial de &anade!,a como &o$ible o!ien de coloni)acin de
ai$lado$ cl,nico$ de S. cerevisiae
De Llanos, R., Querol, A., Panadero, J., Prieto, J.A., Fernndez-Espinar, M.T.
(epartamento de 6iotecnolog-a, 1nstituto de AgroIu-mica ' 7ecnolog-a de Alimentos B!&1!C, *D
6ox 3, 46100 6ur=assot, ValKncia, EspaLa.
La levadura &acc)arom'ces cerevisiae es la especie ms utilizada desde un
punto de vista biotecnolgico y en la industria agroalimentaria. Aunque &.
cerevisiae siempre se ha considerado un microorganismo seguro, en los
ltimos 50 aos se han descrito en la literatura clnica distintos tipos de
infecciones causadas por esta levadura. Cabe destacar los casos de levaduras
industriales que se han relacionado con vaginitis, como cepas de panadera (1)
y con otras infecciones como cepas cerveceras (2) y &. ,oulardii, una cepa
utilizada como probitico (3).
En un trabajo previo (4), donde aplicamos tcnicas moleculares para diferenciar
aislados clnicos de aislados de alimentos, encontramos que dos cepas
panaderas comerciales, junto con &. ,oulardii, eran las nicas cepas de
alimentos que compartan el mismo patrn molecular que un grupo de aislados
clnicos de heces y vagina. Lo que estos resultados indican es que las cepas
panaderas podran ser el origen de colonizacin de los aislados clnicos con su
mismo patrn. Para confirmarlo, en el presente trabajo se ha abordado un
estudio de rasgos fisiolgicos caractersticos de cepas de panadera en estos
aislados. En concreto, se ha estudiado: (i) crecimiento rpido y alto rendimiento
en la produccin de biomasa en melazas y (ii) elevada actividad fermentativa
en masas panarias (5). Adems, se ensayaron actividades enzimticas muy
relacionadas con las cepas panaderas: actividad maltasa e invertasa.
Ya que cepas de panadera son frecuentemente ingeridas, sera de gran
inters poder conocer su potencial patgeno. Por este motivo, hemos estudiado
rasgos fenotpicos asociados con la virulencia (capacidad de crecimiento a
42C, la produccin de enzimas hidrolticas y el crecimiento pseudofilamentoso)
en una cepa panadera comercial. Los resultados, que apuntan a la presencia
de rasgos fenotpicos de virulencia en la cepa panadera, fueron adems
comparados con los obtenidos para otras cepas tanto de alimentos como
clnicas. Estos resultados se han apoyado con ensayos de patogenicidad en
sistemas "in vivo (modelo murino) que muestran que la cepa panadera caus
mortalidad en ratones BALB/c.
Referencias:
1. Nyirjesy P., Vazquez J.A., Ulfberg D.D., Sobel J.D., Bolkov D.A., Buckley
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A - 180
Ca!acte!i)acin biotecnolica de e$&ecie$ de ;ono$ filamento$o$ de
inte!'$ a!oalimenta!io%
Ortiz, J.
1,2
, Cabel, .
1
, Ramn, D.
1,2
y Gil, J.V.
1,2
1
(epartamento de +edicina *reventiva ' &alud *R,lica, 7oxicolog-a, 6romatolog-a ' +edicina
>egal. Facultad de Farmacia, Universitat de ValKncia. Avda. Vicent Andr5s Estell5s s<n. 6ur=assot
46100 BValenciaC.
.
1nstituto de AgroIu-mica ' 7ecnolog-a de Alimentos. !onse=o &uperior de
1nvestigaciones !ient-#icas / *ol-gono de la !oma s<n. *aterna 46980 BValenciaC
Los hongos filamentosos tienen una gran importancia en agroalimentacin. Por
un lado tienen un posible efecto negativo sobre los animales de granja, las
cosechas o los alimentos y, por otro, un efecto positivo al usarse como
iniciadores de la fermentacin o como factoras celulares donde producir
sustancias de inters, destacando sobre todas ellas los enzimas. A pesar de
los miles de enzimas identificados hasta la fecha, tan slo unos pocos de ellos
se producen a nivel industrial, siendo la mayora de ellos producidos por
hongos filamentosos de los gneros Aspergillus y 7ric)oderma.
En el presente trabajo se muestra la caracterizacin de la capacidad de
crecimiento de 20 cepas del gnero Aspergillus y el posterior escrutinio de las
mismas para la produccin de actividades enzimticas de inters
agroalimentario.
En un primer escrutinio, las cepas se sometieron a ensayos de crecimiento en
4 medios slidos distintos: medio rico (MEA), medio mnimo con glucosa
(CZAPEK), medio mnimo con fuentes de carbono de origen vegetal (xilano y
pectinas) (CZ-VG) y medio mnimo con fuente de carbono de origen animal
(extracto de carne) (CZ-CARNE). La capacidad de crecimiento se analiz a 5
temperaturas entre 4 y 50C. Ninguna cepa fue capaz de crecer a 4 50C.
Slo 10 cepas fueron capaces de crecer a 12C, siendo 2 cepas de A.
tu,ingensis las nicas que lo hicieron en los 4 medios de cultivo. De forma
general se observ que el crecimiento se produjo antes y ms rpido a 37C
que a 21C. Sin embargo, a 21C todas las cepas crecieron en los 4 medios de
cultivo excepto una que slo lo hizo en MEA y CZ-CARNE. Por otro lado, a
37C, 3 cepas no crecieron en ningn medio, 2 cepas slo crecieron en MEA y
una cepa creci slo en MEA y CZ-VEGETAL. Por ello se puede concluir que la
temperatura de 37C result ms limitante para el crecimiento de estas cepas
que la de 21C.
Conocido el comportamiento de las cepas en funcin del medio de cultivo y la
temperatura, se llevaron a cabo ensayos de actividades enzimticas capaces
de liberar de aromas (arabinofuranosidasa, glucosidasa y ramnosidasa) y de
mejorar de la digestibilidad de los piensos (fitasa). Se encontraron cepas
productoras de todas las actividades ensayadas aunque con diferentes perfiles
en funcin de la temperatura de incubacin. A 12C no se detectaron
actividades glicosdicas mientras que en seis cepas s se detect actividad
fitasa. A 25C y 37C se detectaron actividades fitasa y glicosdicas aunque con
variaciones en funcin de la temperatura de crecimiento y en dos de las cepas
no se detect ninguna de las actividades ensayadas.
A - 183
Incidencia de ce&a$ de !spergillus &otencialmente &!oducto!a$ de
oc!ato-ina A en ce!eale$
Gonzlez-Salgado, A.
1
, Patio, B.
2
, Jurado, M.
1
, Lpez-Errasqun, E.
2
,
Gonzlez-Jan, M.T.
1
y Vzquez, C.
1
1
(pto. de 4en5tica ' de
.
+icro,iolog-a 111. Facultad de 6iolog-a. Universidad !omplutense de
+adrid. covi%,io.ucm.es
Los hongos productores de micotoxinas se encuentran habitualmente como
parsitos de vegetales incluyendo semillas y frutos. Se ha estimado que un
25% de los cultivos destinados a la elaboracin de alimentos contienen
cantidades detectables de micotoxinas.
Las ocratoxinas ocupan un lugar destacado dentro de este conjunto de
metabolitos secundarios por su elevada toxicidad para humanos y animales
superiores. Una de las toxinas ms importantes de este grupo es la ocratoxina
A (OTA). Dentro del gnero Aspergillus las especies descritas como
productoras son A. oc)raceus principalmente, A. #umigatus y en la seccin
:igri A. car,onarius y A. niger. La contaminacin inicial puede producirse en los
ltimos momentos del cultivo, aunque son principalmente las condiciones en
que se almacena o procesa cuando la colonizacin es mayor.
El objetivo del trabajo que se presenta es el estudio de la presencia de cepas
de Aspergillus productoras de OTA en cereales mediante tcnicas tradicionales
y moleculares desarrolladas en nuestro laboratorio (Gonzlez-Salgado et al.,
2005), con el fin de identificar las especies que constituyen un riesgo por su
capacidad de producir OTA.
En este estudio se analizan 98 muestras de cereales entre los que se incluyen
trigo, trigo blando, cebada y centeno, procedentes de diversas zonas
geogrficas espaolas, principalmente Castilla-Len. Se identificaron especies
de Aspergillus mediante caracteres morfolgicos. La especie de Aspergillus
considerada como principal productora de OTA, A. oc)raceus, no se ha
detectado en las muestras analizadas, aunque s se determin la presencia de
A. #umigatus y Aspergillus de la seccin :igri. Se obtuvieron 450 aislamientos
de Aspergillus la seccin :igri, cuya identificacin precisa se llev a cabo
mediante protocolos de deteccin especficos para las especies de Aspergillus
basados en PCR y digestiones con enzimas de restriccin. De los 126
aislamientos analizadas hasta el momento, un 100% fueron A. tu,ingensis,
descrito como no productor de OTA. Esto concuerda con los bajos niveles de
contaminacin por esta toxina revelados para el conjunto de muestras
analizadas, los cuales podran deberse a la presencia de A. #umigatus.
Trabajos previos han revelado alto nivel de contaminacin en Espaa en
productos elaborados a base de cereales. El anlisis directo de cereal
almacenado y harinas permitir establecer el punto crtico en el que se produce
la contaminacin.
mediante el proyecto AGL 2004-07549-C05-05/AL.
Gonzlez-Salgado et al., 2005. FEMS Letters in Microbiology 245: 353-361.
A - 184
E$tudio de la acti"idad antimic!obiana de la$ bacte!ia$ l#ctica$ ai$lada$
du!ante el &!oce$o de madu!acin del CC;o!i)o de cebollaC9 un embutido
t!adicional elabo!ado en Galicia%
Garca Fontn, M.C.
1
, Franco, .
1
, Pastrana, L.
2
y Carballo, J.
1
1Nrea de 7ecnolog-a de los Alimentos ' .Nrea de 6ioIu-mica ' 6iolog-a +olecular. Facultad de
!iencias de Durense. Universidad de Vigo. !ampus Universitario, s<n. 3.004 Durense. EspaLa. E/
mail0 car,atec%uvigo.es.
El "Chorizo de cebolla" es un embutido crudo-curado tradicional elaborado en
toda la Comunidad Autnoma de Galicia, fundamentalmente en las provincias
de Lugo y Ourense.
Durante la maduracin de 6 partidas de este embutido, tres elaboradas por
procedimientos artesanales en domicilios particulares y otras tres fabricadas en
otras tantas industrias chacineras, se aislaron un total de 428 cepas de
bacterias lcticas que, con posterioridad, se identificaron a nivel de especie
utilizando la metodologa clsica. Tras su identificacin se evalu su actividad
antimicrobiana, mediante el mtodo de difusin en agar, empleando como
indicadores Enterococcus #aecalis, Enterococcus #aecium y >isteria
monoc'togenes. >. monoc'togenes se revel como la cepa indicadora ms
sensible a la accin de los extractos producidos por las cepas de las bacterias
lcticas, tanto aisladas de los lotes de chorizo de elaboracin artesanal
(sensible al 25% de los extractos), como de los de fabricacin industrial
(sensible al 39% de los extractos). A pesar de que esta especie mostr una
mayor sensibilidad a los extractos originados por las cepas de bacterias
lcticas aisladas de los lotes de embutido de fabricacin industrial, los ndices
de inhibicin relativos (potencia de inhibicin de los extractos) fueron ms
elevados para las cepas aisladas de los lotes de elaboracin artesanal.
Entre las cepas aisladas de las partidas de chorizo artesanales, 5 cepas
pertenecientes a la especie >acto,acillus saOei fueron las que mostraron los
espectros de inhibicin ms amplios, claros e intensos, y los ndices de
inhibicin relativos ms elevados. Entre las cepas aisladas a partir de los lotes
industriales, 3 identificadas como >acto,acillus plantarum fueron las que
mostraron accin inhibitoria frente a las tres especies indicadoras empleadas,
aunque con halos tenues y menos intensos que los observados en las cepas
anteriores. Los ndices de inhibicin relativos fueron tambin ms bajos.
Para cuantificar y comparar la actividad antimicrobiana de los extractos de las
diferentes cepas se construyeron curvas dosis-respuesta utilizando el mtodo
descrito por Cabo (Cabo, M.L., 1998, Tesis Doctoral, Univ. de Santiago de
Compostela). Con el fin de aislar los efectos inhibitorios debidos a los cidos
presentes en los extractos crudos, de aquellos debidos a las posibles
bacteriocinas existentes en ellos, se procedi a dializar los extractos para
eliminar los cidos y las sustancias de menor peso molecular con un potencial
papel nutriente. Solamente los dializados de las 5 cepas de >. saOei mostraron
actividad antimicrobiana atribuible, en principio, a la presencia de una molcula
especfica de alto peso molecular que pudiera ser una bacteriocina.
A - 196
Efecto de la tem&e!atu!a9 ti&o de en"a$ado y tiem&o de almacenamiento
en lo$ ni"ele$ mic!obiano$ de filete$ de a"e$t!u)
Daz-Rodrguez, N., Capita, R., Rojas-Paz, C., Prieto, M. y Alonso-Calleja, C.
Escuela &uperior ' 75cnica de 1ngenier-a Agraria BE&71AC, Avenida de Astorga, s<n. .4400/
*on#errada, >e;n. d)tcac%unileon.es
La carne de avestruz es percibida como "saludable por el consumidor debido a
su valor nutritivo, y es una alternativa para determinados grupos de poblacin
con alimentos restringidos, como musulmanes o hindes. Es en el contexto
sealado donde esta carne ha encontrado su pequea cuota de mercado (el
consumo actual es de aproximadamente 6 g/persona y ao). No obstante,
debido a sus elevados grados de contaminacin microbiana y pH, se trata de
un alimento de reducida vida til, siendo ste uno de los principales frenos a la
hora de su comercializacin (ALONSO-CALLEJA et al., 2004). Con el objetivo
ltimo de obtener datos que contribuyan a prolongar la vida til de este
alimento, el presente trabajo ha tenido como finalidad conocer la evolucin a lo
largo del tiempo de diferentes grupos de microorganismos presentes en carne
de avestruz en funcin de la temperatura de almacenamiento (4 C 10 C) y
del tipo de envasado (aire vaco). Las determinaciones microbiolgicas (flora
aerobia viable FAV-, microorganismos psicrotrofos, enterobactericeas,
bacterias cido-lcticas, *seudomonas y *seudomonas fluorescentes) y de pH
se realizaron los das 0 (inmediatamente despus del envasado), 3, 6 y 9 de
almacenamiento.
Los niveles de todos los grupos microbianos se incrementaron
significativamente a lo largo del tiempo en los cuatro grupos de muestras. El
ltimo da del estudio (da 9) se observaron elevados niveles de
microorganismos (8,02-10,17 log
10
ufc FAV/g), posiblemente como
consecuencia de los elevados niveles microbianos (4,89-5,44 log
10
ufc FAV/g) y
pH (6,66) iniciales. La temperatura de almacenamiento, el tipo de envasado y el
da del anlisis influyeron significativamente en los recuentos de la mayora de
los grupos considerados, con la excepcin de las enterobactericeas y de las
bacterias cido-lcticas, donde la presencia de oxgeno no influy en la carga
microbiana. Para la mayora de los grupos considerados, la temperatura fue un
factor significativo en los niveles microbianos hasta el da 6 de
almacenamiento, mientras que el tipo de envasado estuvo significativamente
asociado a los recuentos en los das 6 y 9. Ambas variables ejercieron una
influencia significativa en los niveles microbianos desde el da 0 en el caso de
las *seudomonas fluorescentes. Al final del almacenamiento (da 9) los
menores recuentos se observaron en los filetes envasados a vaco y
almacenados a 4 C. Fue ste el nico grupo de muestras en que no se
observ rechazo sensorial al final del periodo de duracin del estudio.
Este trabajo ha sido subvencionado por el Ministerio de Ciencia y Tecnologa
(NA, Proyecto CAL-00-30).
ALONSO-CALLEJA, C., MARTNEZ-FERNNDEZ, B., PRETO, M. y CAPTA,
R. (2004). Microbiological quality of vacuum-packed retail ostrich meat in Spain.
Food +icro,iolog' .?(2), 241-246.
A - 197
Efecto de la tem&e!atu!a9 &D y concent!acin de NaCl $ob!e la cin'tica de
c!ecimiento de %acillus cereus en e-t!acto de ca!ne9 t!a$ un t!atamiento
t'!mico mode!ado%
Martnez, S., Borrajo, R., Franco, . y Carballo, J.
Nrea de 7ecnolog-a de los Alimentos. Facultad de !iencias de Durense. Universidad de Vigo.
!ampus Universitario, s<n. 3.004 Durense. EspaLa. E/mail0 sidonia%uvigo.es
En los ltimos aos se han desarrollado nuevas tecnologas de procesado
basadas en la utilizacin de "mtodos suaves" de conservacin en respuesta a
la creciente demanda de alimentos frescos o poco transformados. El aumento
de enfermedades asociadas a este tipo de productos se ve propiciado por la
baja intensidad de los tratamientos trmicos aplicados, los altos valores de pH
y las bajas concentraciones de aditivos utilizadas. Uno de los microorganismos
patgenos y/o alterantes que se aisla con mayor frecuencia en estos alimentos
mnimamente procesados es 6acillus cereus. Sus esporos son capaces de
resistir tratamientos trmicos moderados y, posteriormente, germinar y
multiplicarse en determinadas condiciones. No obstante, y a pesar de su
importancia, existen pocos estudios sobre el comportamiento de 6. cereus tras
el tratamiento y sobre los factores que condicionan su crecimiento en alimentos
durante el almacenamiento.
El objetivo de este trabajo fue comprobar el efecto combinado de la
temperatura, el pH y la concentracin de sal sobre los parmetros cinticos de
crecimiento de 6. cereus ATCC 7004 en extracto de carne, tras un tratamiento
trmico moderado.
Los esporos de 6. cereus, obtenidos en agar nutritivo suplementado con 1 ppm
de Mn
++
a 35 C, fueron resuspendidos en un extracto de carne estril hasta
alcanzar una concentracin de 10
4
-10
5
ufc/mL, sometindolos posteriormente a
un tratamiento trmico de 90 C durante 10 minutos. Alcuotas de la suspensin
tratada (0,3 mL) se inocularon por duplicado en frascos estriles conteniendo
150 mL de extracto de carne con diferentes valores de pH (5,9; 5,0; 4,5 y 4,0) y
concentraciones de NaCl (1, 2 y 3%), incubndolos posteriormente a 10, 12,
30, 40 y 50 C. En cada una de las condiciones de cultivo en estudio se
obtuvieron las correspondientes curvas de crecimiento mediante recuentos en
placas de agar nutritivo. Los parmetros cinticos se calcularon utilizando el
"Modelo de Gompertz" y empleado el programa estadstico 4rap)*ad.*rism
(GraphPad Software c., San Diego).
Los resultados obtenidos pusieron de manifiesto que 6. cereus ATCC 7004 es
capaz de sobrevivir a un tratamiento trmico de 90 C durante 10 minutos y
multiplicarse posteriormente en un extracto de carne entre 12 y 40 C. En este
intervalo de temperaturas la capacidad de recuperacin se vio condicionada
por el pH del medio, disminuyendo con la acidificacin. En todas las
condiciones en estudio la multiplicacin se vio inhibida a valores de pH de 4.
Por otra parte, la magnitud del efecto del NaCl dependi de la temperatura y
del pH del medio. La combinacin de temperaturas de almacenamiento
menores de 12 C, bajos valores de pH (inferiores a 4,5) y concentraciones de
NaCl superiores al 2% permiten inhibir el crecimiento de 6. cereus ATCC 7004
durante al menos 50 das, tras un tratamiento trmico moderado (90 C-10 min)
en extracto de carne.
A - 198
E$tudio en)im#tico y acti"idad antimic!obiana de la$ ce&a$ de Penicillium
sp% em&leada$ en la elabo!acin de $umaia%
Adelantado, C., Corbaln, S., Mora, M.T. y Calvo, M.A.
(epartament de &anitat i Anatomia Animals E Facultat de VeterinHria. Universitat AutUnoma de
6arcelona. 08193 6ellaterra B6arcelonaC. !arles.Adelantado%ua,.es
Se denomina sumaia a un tipo de embutido tpico de Catalunya, elaborado con
carne de cerdo, sal, azcar y pimienta. En la elaboracin del mismo, se
inoculan en su superficie cepas del gnero *enicillium que contribuyen a la
maduracin y conservacin del producto, al mismo tiempo que le confieren su
apariencia y sabor caracterstico.
Este estudio tiene como objetivos evaluar el patrn enzimtico de las cepas
utilizadas en la elaboracin del producto, as como la posible capacidad
antimicrobiana que pueda derivarse de las mismas.
La metodologa utilizada se basa fundamentalmente en la inoculacin de las
cepas en estudio en los sustratos que constituyen el sistema de valoracin
enzimtica AP-ZYM
, modificada para adaptarla a las condiciones favorables

para el desarrollo de los hongos.
Asimismo se detect la capacidad antimicrobiana frente a diversas cepas de
microorganismos seleccionados como representativos de los principales grupos
bacterianos capaces de alterar a los derivados crnicos.
A raz de los resultados obtenidos, se puede afirmar que estas cepas poseen
una marcada actividad fosfatasa, hidrolasa y glucosidasa, directamente
relacionadas con su capacidad antimicrobiana, que se detect
fundamentalmente frente a bacterias Gram positivas. Este hecho permite
considerar que su adicin en la elaboracin de productos crnicos ayuda a
controlar la presencia de microbiota no deseable.
A - 200
Deteccin de Salmonella spp en mue$t!a$ fecale$ de &ollo mediante +CR
"$% m'todo$ inmunolico$ 54IDAS7
Rodrigo Gil, A.
1
, Moreno Temprado, R.
2
, Corujo Fernndez, A.
2
, Toms Forns,
D.
1
, Monz Snchez, JL.
1
1
Ainia, *arIue 7ecnol;gico de Valencia, *aterna BValenciaC '
.
:utreco Food ?esearc) !enter,
!asarru,ios del +onte B7oledoC. !orreo electr;nico0 argil%ainia.es
Las especies de &almonella son consideradas el principal agente de zoonosis
en humanos y un parmetro microbiolgico de gran importancia para el control
de la seguridad alimentaria. En muchos pases es el principal causante de
brotes e infecciones asociadas al consumo de alimentos. Por tanto, la
disponibilidad de mtodos rpidos, fiables y aceptados internacionalmente
tienen una gran importancia tanto en la industria de la alimentacin como en la
regulacin legislativa sobre seguridad alimentaria.
El objetivo de este estudio es la comparacin de 2 mtodos de deteccin
rpidos de &almonella (PCR y Minividas) en muestras reales de heces de pollo.
Para valorar ambos mtodos se utilizaron los mismos caldos de
enriquecimiento al objeto de facilitar las experiencias y lograr un material de
partida ms homogneo (recomendaciones de la norma SO 16140:2003 anexo
D.1), incubando las muestras 24 h en agua de peptona y posteriormente el
mismo tiempo en caldo manosa. No obstante, se valor el enriquecimiento de
24 horas vs. 48 horas para la tcnica de PCR, optando por esta ltima por su
mayor sensibilidad. En aquellos casos en los que los resultados no eran
coincidentes con ambas tcnicas se sembraron las muestras en agar
Rambach.
La deteccin de &almonella por PCR se realiz amplificando un fragmento
especfico del gen nvA ampliamente conservado en este gnero, mientras que
en el caso del ELSA se utilizaron anticuerpos especficos.
Se analizaron un total de 75 muestras de heces de pollo procedentes de lotes
experimentales, obtenindose un 25% de muestras positivas y un 75% de
negativas tanto con un mtodo como con el otro. En el 84% de los casos (63
muestras) los resultados con ambos mtodos fueron coincidentes (eficiencia
relativa). En el 16% (12 muestras) los valores fueron discrepantes, no
pudindose confirmar la presencia de &almonella en ningn caso mediante
cultivo microbiolgico, lo que parece indicar que los niveles de &almonella en
estas muestras seran muy bajos y cercanos al lmite de deteccin de las
tcnicas estudiadas.
El estudio estadstico de los resultados se realiz evaluando ambos mtodos
sin considerar ninguno como "mtodo de referencia, ya que lo que
pretendemos es estudiar la bondad de los mismos evaluando los resultados en
su conjunto. Basndonos en el mtodo del Chi Cuadrado (SO 16140:2003),
podemos considerar que no existen diferencias significativas entre ambos
mtodos de deteccin.
A - 203
Mic!obiolo,a del &!oce$o de obtencin del a)(ca! de !emolac;a8
&!inci&ale$ 'ne!o$ y e$&ecie$
Robles Gancedo, S., Lpez Daz, T.M. y Otero, A.
(pto. (e Higiene ' 7ecnolog-a de los Alimentos, Facultad de Veterinaria, U. de >e;n, !ampus de
Vega$ana, s<n, .401, >e;n. d)ttld%unileon.es
La obtencin de azcar a partir de la remolacha es un proceso industrial
complejo en el que el producto original pasa por mltiples fases, en muchas de
las cuales existe una recirculacin de materiales o de elementos esenciales en
la extraccin como el agua. Durante este complicado proceso tiene lugar el
desarrollo de diversos microorganismos procedentes tanto de la materia prima
como del equipo y del ambiente. Parte de esta microbiota es responsable de
considerables prdidas econmicas en la industria azucarera, bien por el
consumo directo de sacarosa, bien por una prdida de la eficacia en el proceso
industrial.
En estudios anteriores llevados a cabo por los autores, se haba llevado a cabo
el recuento y aislamiento de diversos grupos microbianos (flora aerobia y
anaerobia, mesfila y termfila, flora cido-lctica, mohos y levaduras) en
distintas etapas del proceso de obtencin de azcar en cuatro fbricas. Una
vez comprobada la importancia cuantitativa de cada grupo microbiano en cada
muestra, en el presente trabajo se ha llevado a cabo la identificacin de una
seleccin de cepas pertenecientes a los grupos microbianos cuantitativamente
ms importantes. En fases posteriores se evaluar su potencial como
alterantes durante el proceso y se disearn medidas de control.
En base a pruebas bioqumicas y morfolgicas y segn los esquemas de
clasificacin de Harrigan y MacCance y de Cowan y Steel, las cepas se
distribuyeron del modo siguiente. Entre la flora mesfila, 183 cepas se
consideraron bacterias cido-lcticas, identificndose 94 cepas de
>euconostoc y 39 como >acto,acillus spp., entre otros gneros hallados; entre
la flora aerobia termfila destac el gnero 6acillus (65 cepas). Adems, se
aislaron 40 cepas de levaduras y 45 de mohos, perteneciendo stos ltimos a
los gneros *enicillium, !ladosporium, Aspergillus y Alternaria, entre otros.
En la identificacin a nivel de especie, cabe destacar que las 94 cepas de
>euconostoc aisladas son formadoras de gomas (>. mesenteroides y/o >.
dextranicum). Con respecto al gnero 6acillus, la principal especie hallada fue
6. lic)eni#ormis, seguida de 6. stearot)ermop)ilus y 4eo,acillus B6acillusC
t)ermodenitri#icans, hallndose, asimismo, 6. coagulans, 6. ,revis, 6.
coagulans<6. ,revis.

Agradecimientos: Proyecto CTYTAGL2002-01964.

Bibliografa
Robles Gancedo, S. et al. 2004. Microbiological counts during beet sugar
extraction. 19 nternational CFMH Symposium Food Micro 2004 (Portoroz,
Eslovenia) Book of Abstracts, p. 125.
A - 213
O!ien y di$t!ibucin de Saccharomyces cerevisiae a$ociada$ a la
fe!mentacin e$&ont#nea en "ino$ Malbec de A!entina
Mercado, L.
1,2
, Massera, A.
1
, Dalcero, A.
2
, Masuelli, R.
3,2
, Combina, M.
1,2
1
!entro de Estudios Enol;gicos, EEA/+endo$a, 1:7A. &an +art-n 3833 B330C >u="n de !u'o,
+endo$a, Argentina. E/mail0 lmercado%mendo$a.inta.gov.ar.
.
!onse=o :acional de
1nvestigaciones !ient-#icas ' 75cnicas, Argentina B!D:1!E7C.
3
>a,oratorio de 6iolog-a +olecular,
F!A, Universidad :acional de !u'o, Argentina.
La fermentacin espontnea de vinos (sin adicin de inculos comerciales) es
una prctica ampliamente utilizada en la industria enolgica. El origen de las
levaduras responsables de este tipo de fermentacin, tanto como su
distribucin y colonizacin de superficies en bodega es objeto de actual
discusin. El objetivo del presente trabajo fue evaluar la presencia de cepas
nativas de &. cerevisiae asociadas a la uva y la bodega, y conocer la
participacin de las mismas en las fermentaciones espontneas de los mostos.
El estudio se realiz durante dos aos consecutivos en un mismo viedo
Malbec y bodega. Se aislaron las levaduras presentes en uvas, superficies del
equipamiento de bodega en dos momentos diferentes de muestreo (antes del
inicio de la vendimia y momentos antes de la molienda de la uva en estudio),
mosto fresco y en diferentes estadios de la fermentacin. Se identificaron los
aislados pertenecientes a la especie &. cerevisiae mediante taxonoma clsica
y molecular. Para la diferenciacin intraespecfica se aplicaron dos tcnicas:
PCR secuencias delta (1) y anlisis de restriccin de ADN mitocondrial (2). La
aplicacin de ambos marcadores moleculares gener distintos agrupamientos,
los cuales fueron combinados para diferenciar entre grupos de cepas. Los
resultados mostraron una gran diversidad de cepas presentes en las distintas
superficies de bodega, algunos de estos patrones estuvieron presentes en la
bodega en las dos etapas del muestreo y 8 de ellos fueron encontrados en
ambas vendimias consecutivas. Estas cepas pueden considerarse como flora
residente de la bodega. Los resultados confirmaron la extrema escasez de &.
cerevisiae sobre las uvas, ya que su presencia no pudo ser probada por medio
de siembra directa y las cepas aisladas por mtodos indirectos
(enriquecimiento) no tuvieron participacin en la fermentacin. En las distintas
etapas de la fermentacin se observ una sucesin de poblaciones de &.
cerevisiae, con un incremento del nmero de cepas hacia el final de la misma.
Dependiendo de la etapa y ao considerado, entre 35 y 73 % de la poblacin
fermentativa provino de la bodega, incluyendo tanto cepas halladas en los
equipos como cepas comerciales, las cuales pueden haber sido incorporadas a
partir de las prcticas de elaboracin de la bodega.

1. Ness C., Lavalle F., Dubourdieu D., Aigle M., Dulau L. (1993) 2. &c.
Food Agric. E.: 89-94
2. Querol A., Barrio E. Ramon D. (1992). &'st. Appl. +icro,iol. ?@8 439-446.
A - 220
La lec;e de anado o"ino y ca&!ino como "e;,culo de Escherichia coli
"e!oto-i'nico$ y ente!o;emo!!#ico$8 in"e$tiacin de la contaminacin
de la lec;e y &o$ible$ !e&e!cu$ione$ $anita!ia$ &a!a la elabo!acin de
:ue$o%
Snchez, S., Alonso, J.M., Rubio, R., Tejero, N., Pereira, G., Hermoso de
Mendoza, J., Hermoso de Mendoza, M. y Rey, J.
Unidad de *atolog-a 1n#ecciosa ' Epidemiolog-a. (epartamento de +edicina ' &anidad Animal.
Facultad de Veterinaria. Universidad de Extremadura. Avenida de la Universidad, s<n. 1001/
!"ceres. 7el.0 9. .3 114. Fax0 9. .3 110. sergiosp%unex.es
Los Esc)eric)ia coli verotoxignicos y enterohemorrgicos (ECVT-ECEH)
constituyen un importante grupo de patgenos emergentes para la especie
humana, particularmente el serotipo enterohemorrgico altamente virulento
O157:H7. Son responsables de innumerables brotes de colitis hemorrgica
(CH) y sndrome urmico hemoltico (SUH), ampliamente descritos en pases
anglosajones y Japn, aunque con referencias tambin en nuestro pas.
Como reservorio natural actan diversas especies de animales domsticos,
destacando el ganado bovino y los pequeos rumiantes. Se trata de especies
que no sufren ninguna patologa relacionada con este estado portador, si bien
actan como eficaces transmisores.
La principal va de transmisin al hombre es el consumo de alimentos
contaminados con heces de portadores, en particular carne y leche.
Los brotes de CH y SUH por ECVT ocurridos en Espaa han sido atribuidos al
consumo de productos crnicos o agua de bebida, no existiendo constancia de
la presencia de estos microorganismos en leche ni derivados lcteos.
Los objetivos perseguidos en este estudio son: determinar la prevalencia de
ECVT, y de O157:H7, en particular, en muestras de leche cruda, cuajada y
queso, de origen ovino y caprino; caracterizar las cepas obtenidas, e investigar
la dinmica de la contaminacin en estos productos as como el riesgo
potencial para el consumidor.
Con estos fines se investigaron 502 muestras de leche cruda, cuajada y queso,
407 de oveja y 95 de cabra, mediante la metodologa recogida en la norma SO
16654:2001 y complementada con la aplicacin de la PCR, para deteccin de
ECVT O157:H7; y la PCR de forma consecutiva a enriquecimiento y
aislamiento en medio selectivo, para ECVT en general.
En total se detectaron ECVT en el 9% de las muestras, 8,1% en ganado ovino
y 12,6% en ganado caprino (10,1% y 13,7%, respectivamente, si nos referimos
exclusivamente a leche). El ECVT O157:H7 slo se aisl en 1 muestra de leche
de cabra (0,2%). 7 muestras de leche (1,4%) proporcionaron cepas
individuales, 8 en total, 3 en ganado ovino y 5 en caprino. Los serotipos de los
aislados fueron onT:H7, onT:H9, O45:H38, O27:H18, O91:H28, O76:H19 y
onT:H21, adems del O157:H7.
Aunque la contaminacin de la leche y sus derivados muestra un carcter
espordico, se han aislado ECVT pertenecientes a serotipos asociados
previamente con enfermedades graves en el hombre, incluido el serotipo
altamente virulento O157:H7. Por tanto, podemos concluir que la leche y
derivados de oveja y cabra pueden vehicular cepas de ECVT, potencialmente
patgenas para el hombre, y que existe un peligro real de infeccin humana
asociado al consumo de este tipo de productos.
El presente trabajo ha sido financiado por el Plan Regional de nvestigacin
(Consejera de nfraestructuras y Desarrollo Tecnolgico, FEDER, Ref. 2PR02A007).
A - 221
E$tudio de lo$ $ubti&o$ de Listeria monocytogenes de un matade!o de
&ollo$ mediante elect!ofo!e$i$ en cam&o &ul$ante
Lpez Alonso, V.
1
, Ortiz Jareo, S.
1
, Corujo Fernndez, A.
2
, Lpez Abarquero,
P.
1
, Moreno Temprado, R.
2
y Martnez-Surez, J.V.
1

1
7ecnolog-a de Alimentos, 1:1A, !tra. de >a !oruLa Om T3, .8010 +adrid.
.
Food ?esearc)
!entre B:utrecoC, 43930 !asarru,ios del +onte, 7oledo. !orrespondencia0 victorialop%inia.es
>isteria monoc'togenes es uno de los patgenos que ms preocupa a la
industria alimentaria. Una medida preventiva para controlar la contaminacin
causada por >. monoc'togenes en los productos crnicos es identificar las
posibles fuentes y rutas de dicha contaminacin desde los mataderos. Con
dicho objetivo se realizaron 3 muestreos en meses consecutivos en un
matadero de pollos estudiando la incidencia y distribucin espacial y temporal
de los subtipos de >. monoc'togenes aislados. Los subtipos de >.
monoc'togenes se identificaron mediante electroforesis en campo pulsante
(pulsotipos) y mediante el estudio de sus serotipos por PCR.
De un total de 98 aislados de >. monoc'togenes se identificaron 12 pulsotipos
(o cepas) diferentes combinando los patrones generados por las enzimas Asc
(7 patrones) y Apa (9 patrones). Los 12 pulsotipos se agrupaban en tres
clusters o grupos de pulsotipos semejantes.
En la piel de las canales se aislaron solamente 4 pulsotipos diferentes,
mientras que la mayor variabilidad se encontr en las superficies ambientales
(9 perfiles). Dos de los pulsotipos obtenidos en las canales aparecen y
predominan en todos los muestreos, incluyendo las muestras ambientales y las
superficies que estn en contacto con las canales.
En conjunto, se encontr un predominio del serotipo 1/2b (9 pulsotipos) y
presencia minoritaria del 1/2a (3 pulsotipos), nicamente aislado en muestras
ambientales de superficies que no estn en contacto con las canales. Los
subtipos de las cepas ambientales resultaron generalmente distintos de los de
las cepas aisladas de superficies que estn en contacto con las canales y de
las propias canales, lo que sugiere que existen diferentes tipos de
contaminacin. Las cepas ambientales de serotipo 1/2a forman un cluster. Los
clusters, sin embargo, no estn relacionados con el origen de las cepas.
Este estudio ha permitido conocer la diversidad gentica de las cepas de >
monoc'togenes del matadero. Existe un nmero reducido de cepas de >.
monoc'togenes (2 pulsotipos mayoritarios) que contaminan determinadas
superficies que estn en contacto con las canales y estas cepas son las que
aparecen en la mayora de las canales de los diferentes lotes de pollos
sacrificados en un mismo da y que proceden de diferentes granjas. La
presencia de unas pocas cepas predominantes y su persistencia durante varios
meses indica que se tienen que localizar los focos especficos de estas cepas
para dirigir de forma selectiva las medidas de limpieza y desinfeccin.
Trabajo financiado por Nutreco Servicios, S. A. y los proyectos CAL03-027-C2
y PTR1995-0789-OP.
A - 222
Lec;e$ fe!mentada$ como "e;,culo &a!a la admini$t!acin de
Lactobacillus $elbruec&ii $ub$% lactis 0O FFB9 una bacte!ia &!obitica%
Fernndez, M. F.
1
, Rodrguez, A.
2
, Hernndez, A.
2
y Barbs, C.
1
*.
1
Universidad de Dviedo. Nrea de +icro,iolog-a. c< 2uli"n !laver-a s<n. 33006. Dviedo. Asturias.
.
1nstituto de *roductos >"cteos de Asturias B1*>A/!&1!C. !arretera de 1n#iesto, s<n. 33300.
Villaviciosa. Asturias. Mc,ar,es%uniovi.es
Los productos lcteos fermentados, especialmente las leches fermentadas,
constituyen la mayor parte de los productos probiticos comercializados. Esto
se debe a que tienen una imagen de alimentos saludables y son de consumo
habitual. Adems existen razones importantes desde el punto de vista
tecnolgico, ya que muchos de ellos se han optimizado para mantener la
viabilidad de los microorganismos fermentadores.
En este trabajo se han evaluado las aptitudes tecnolgicas de una nueva cepa
potencialmente probitica para su incorporacin en leches fermentadas.
La cepa estudiada ha sido aislada a partir de heces de nio por el grupo de
investigacin de la Dra. Barbs en la Universidad de Oviedo. Ha sido
identificada como >acto,acillus del,ruecOii subsp. lactis UO 004, muestra
propiedades probiticas "in vitro (Fernndez, 2003) y ha sido evaluada
favorablemente desde el punto de vista de su seguridad para uso en humanos
(Fernndez et al., 2005).
En el trabajo se han elaborado leches fermentadas con y sin la cepa probitica
como cultivo adjunto.
Mediante el anlisis microbiolgico se ha comprobado que la presencia del
probitico no afecta a la evolucin del cultivo iniciador durante la fermentacin y
posterior refrigeracin. Por otro lado, la poblacin de >acto,acillus del,ruecOii
UO 004, inicialmente en torno a 10
7
UFC/ml no experiment cambios
significativos hasta los 28 das de refrigeracin.
No se encontraron diferencias significativas entre los dos tipos de leches en
cuanto a pH, acidez y composicin global
Aunque la evolucin de la lactosa, cidos orgnicos y compuestos voltiles
sigui un patrn similar en los dos tipos de leches fermentadas, se observaron
diferencias en los niveles de algunos de ellos que indican una mayor actividad
metablica en los productos probiticos y que puede determinar el hecho de
que en el anlisis sensorial a los 2 y 23 das de refrigeracin se haya
observado preferencia por stos ltimos (56 y 75% respectivamente).
Estos resultados indican que las leches fermentadas son un buen vehculo para
la administracin de >acto,acillus del,ruecOii subsp. lactis UO 004 y que la
presencia de esta cepa no interfiere en el proceso de elaboracin de las
mismas, obtenindose un producto adecuado al consumo desde un punto de
vista organolptico.
Fernndez, M. F. 2003. "Propiedades probiticas de >acto,acillus del,ruecOii
subsp. lactis UO 004, un aislado intestinal humano. Tesis doctoral.
Fernndez, M. F., S. Boris and C. Barbs. 2005. Safety evaluation of
>acto,acillus del,ruecOii subsp. lactis UO 004, a probiotic bacterium. Res.
Microbiol.156(2):154-160.
A - 225
Re:ue!imiento$ bio$int'tico$ &a!a la !e&a!acin de lo$ da6o$ $ubletale$
$ob!e la memb!ana celula! de Escherichia coli t!a$ la a&licacin de +ul$o$
El'ct!ico$ de Alto 4olta*e
Garca, D., Maas, P., Raso, J. y Pagn, R.
(epartamento de *roducci;n Animal ' !iencia de los Alimentos. Facultad de Veterinaria.
Universidad de Sarago$a. c< +iguel &ervet, 1, 30013, Sarago$a, EspaLa. pagan%uni$ar.es
El tratamiento mediante Pulsos Elctricos de Alto Voltaje (PEAV) est
considerado como uno de los mtodos no trmicos ms prometedores para la
conservacin de los alimentos.
La inactivacin microbiana mediante PEAV se cree debida a sus efectos sobre
las envolturas celulares. Recientemente nuestro grupo de investigacin ha
demostrado la presencia de dao subletal tras los tratamientos PEAV.
El estudio de los mecanismos implicados en la reparacin de las clulas
subletalmente daadas contribuira a determinar qu componentes de las
membranas celulares se ven afectados por los PEAV, y as describir con mayor
precisin el mecanismo de inactivacin de los PEAV. Por otra parte, facilitara
el diseo de procesos combinados ms adecuados que evitasen la reparacin
de estos daos y permitiesen alcanzar un mayor nivel de inactivacin.
El objetivo de este trabajo fue evaluar los requerimientos biosintticos para la
reparacin de los daos subletales sobre la membrana celular de Esc)eric)ia
coli tras la aplicacin de PEAV.
Se examin la prdida parcial de las propiedades de barrera de la membrana
citoplasmtica mediante la adicin de cloruro sdico al medio de recuperacin.
Ms de 4 ciclos logartmicos decimales de supervivientes resultaron daados
subletalmente tras la aplicacin de losPEAV.
La reparacin de estos daos subletales de membrana se produjo tras la
incubacin de los supervivientes a los PEAV en agua de peptona durante 2
horas a temperatura ambiente. Se detectaron dos tipos diferentes de clulas
daadas. Mientras que una pequea proporcin de las clulas daadas (menos
del 5%) se repararon en menos de 2 minutos tras los PEAV, la reparacin del
95% de clulas restantes se prolong durante 2 horas y dependi de la sntesis
de nuevos componentes. La adicin de inhibidores tales como cloranfenicol,
cerulenina, penicilina G, rifampicina y azida sdica al medio lquido de
reparacin mostr que la reparacin de las membranas era dependiente de la
produccin de energa y sntesis de lpidos, pero no requiri de la sntesis de
RNA, de peptidoglicano o de protenas.
La supervivencia de las clulas tras la aplicacin de los PEAV fue dependiente
de la reparacin de la membrana citoplasmtica. El requerimiento de sntesis
lipdica para la reparacin de la clulas subletalmente daadas confirma que la
membrana citoplasmtica es una estructura diana implicada directamente en el
mecanismo de inactivacin microbiana por PEAV.
A - 230
Incidencia de oc!ato-ina A y ce&a$ &!oducto!a$ de OTA en caf' "e!de%
Modelo$ &!edicti"o$ &a!a el c!ecimiento de !spergillus ochraceus%
Pardo, E., Marn, S., Sanchis, V. y Ramos, A.J.
(pto. 7ecnolog-a de Alimentos, E7&EA, Universidad de >leida. Av. ?ovira ?oure, 191, .3198
>leida BEspaLaC. E.mail0 a=ramos%tecal.udl.es
La ocratoxina A (OTA) es una micotoxina producida por mohos de los gneros
Aspergillus y *enicillium, los cuales pueden infectar una amplia variedad de
productos alimenticios, entre ellos el caf verde. La contaminacin con OTA del
caf verde se ha relacionado con la presencia, principalmente, de cepas
ocratoxignicas de A. oc)raceus.
El primer objetivo de este trabajo fue determinar la infeccin fngica y la
presencia de OTA en muestras de caf verde de diferentes orgenes.
Posteriormente se identificaron los aislados fngicos capaces de producir OTA,
se seleccionaron 3 cepas ocratoxignicas de A. oc)raceus y se llevaron a cabo
estudios de la influencia de la temperatura (10-30 C) y la actividad de agua
(a
w
: 0,80-0,99) en su crecimiento y produccin de OTA sobre granos de caf
verde irradiado. Con las fases de latencia y tasas de crecimiento obtenidas se
obtuvieron modelos predictivos del crecimiento miceliar bajo las diferentes
condiciones de ensayo.
El 72% de los granos de caf verde analizados presentaron infeccin fngica,
siendo Aspergillus, *enicillium y ?)i$opus los principales gneros encontrados.
El gnero Aspergillus se encontr en ms del 90 % de los granos de caf
infectados. 260 aislados de A. seccin :igri y 19 A. oc)raceus fueron
analizados para determinar su capacidad ocratoxignica, dando resultado
positivo el 6 % de A. seccin :igri y el 16 % de los aislados de A. oc)raceus.
La produccin de OTA fue cuantificada por cromatografa lquida de alta
resolucin (HPLC).
La contaminacin natural con OTA de las muestras de caf verde se analiz
mediante un inmunoensayo enzimtico (ELSA). El nivel de OTA detectado en
todas las muestras fue superior al lmite de deteccin (0,6 g/kg), con un nivel
medio de contaminacin de 6,7 g/kg.
Los dos factores abiticos ensayados (a
w
y temperatura) influyeron
significativamente tanto en el crecimiento miceliar como en la produccin de
OTA por A. oc)raceus. El mximo crecimiento miceliar se encontr a 20-30 C
y 0,95-0,99 a
w
, observndose un marcado descenso de las tasas de
crecimiento con la reduccin de los niveles de a
w
y temperatura. Al nivel ms
bajo de a
w
ensayado (0,80) solamente se encontr crecimiento miceliar visible a
30 C para los 3 aislados y a 20 C para uno de ellos. La mxima produccin de
OTA se encontr a 20 C y 0,99 a
w
, mientras que las condiciones mnimas para
la produccin fueron de 0,85 a
w
y 20 C.
Los modelos predictivos obtenidos para las fases de latencia previas al
crecimiento miceliar de A. oc)raceus, bajo las diferentes condiciones de a
w
y
temperatura ensayadas, podran utilizarse para determinar las condiciones de
secado y almacenamiento del caf verde que evitaran la contaminacin con
OTA del producto.
A - 234
+od!edumb!e$ en l,nea$ ca$i i$o'nica$ de meln 5'ucumis melo9 L%7
du!ante $u !ef!ie!acin
Martnez, J.A.
1
, Monforte, A.J.
2
, Eduardo, .
2
y Fernndez-Trujillo, J.P.
3
1
(pto. *roducci;n Vegetal. Universidad *olit5cnica de !artagena. !ampus *aseo Al#onso Y111 3..
E7&1A. 30.03 !artagena B+urciaC

=uanantonio.martine$%upct.es.
.
>a,. !&1!/1?7A de 4en5tica
+olecular Vegetal, !tra. de !a,rils s<n, 08348, !a,rils. 6arcelona.
3
(pto. 1ngenier-a de Alimentos '
EIuipamiento Agr-cola. E7&1A. !artagena
El uso de la refrigeracin durante el transporte y la conservacin del meln 'Piel
de Sapo' presenta un riesgo importante de proliferacin de podredumbres que
pueden estar asociadas a otras alteraciones que implican una rotura de la
epidermis de los frutos. Estas alteraciones son fundamentalmente los daos
por fro (DF). El objetivo de este trabajo ha consistido en caracterizar las
podredumbres postcosecha y su relacin con otras alteraciones de origen fsico
o fisiolgico en una coleccin de lneas casi isognicas de meln desarrolladas
por el RTA de Barcelona con introgresiones de un parental extico, las cuales
poseen un segmento de un cromosoma homocigoto de un padre donador
seleccionado intencionalmente (la lnea P 161375 de meln coreano) dentro
del genoma parental 'Piel de Sapo'. Como consecuencia, estas lneas poseen
un alto porcentaje del genoma parental recurrente por lo que se les ha definido
como lneas casi isognicas (NL's: Near sogenic Lines). El fin ltimo del
proyecto es la bsqueda de poligenes o QTL's: Quantitative Trait Loci)
implicados en la resistencia a las bajas temperaturas y por ende a las
podredumbres asociadas a los DF, y establecer eficientemente el efecto de
cada uno de ellos.
Las principales podredumbres fngicas desarrolladas sobre los frutos
conservados a 8 C durante un mes fueron ocasionadas por: Alternaria,
!ladosporium, &temp)'lium, Fusarium, y espordicamente apareci 6otr'tis
sp. Estos microorganismos son saprfitos o necrtrofos que precisan
generalmente heridas en la epidermis para poder colonizar los tejidos de los
frutos. La escaldadura o el picado epidrmico ocasionado por DF puede
constituir una va de colonizacin. Otros daos mecnicos y las fracturas por
las zonas del escriturado de la epidermis constituyen, del mismo modo, vas
fciles de colonizacin. No obstante, no se ha encontrado una relacin clara
entre la incidencia de daos por fro y las podredumbres, lo que sugiere que
han habido otros factores intrnsecos de los frutos que han impedido la
proliferacin del hongo, y entre ellos el estado de madurez del fruto. En algunas
lneas se ha establecido una relacin entre la tasa de emisin de etileno y la
presencia de podredumbres. Se ha comprobado que en los DF que presentan
tambin podredumbres, stas son debidas a Alternaria o !ladosporium que
generalmente se presentan como podredumbre mixta. Las podredumbres por
Fusarium han aparecido generalmente en la zona peduncular sin tener relacin
alguna con daos externos por fro.
A - 235
Deteccin del da6o celula! $ubletal en Listeria monocytogenes $ometida
a t!atamiento de alta$ &!e$ione$ ;id!o$t#tica$ en ca!ne de &ollo
Monks Jantzen, M
1,2
, Navas Fernndez, J
1
, De Paz Videla, M
1
, Rodrguez
Snchez, B
1
, Padilha da Silva, W
2
, Nuez Gutirrez, M
1
y Martnez Surez, JV
1

1
7ecnolog-a de Alimentos, 1:1A, !tra. de >a !oruLa Om T3, .8010 +adrid.
.
Universidade Federal
de *elotas, ?io 4rande do &ul, 6rasil. !orrespondencia0 m=ant$en%u#pel.tc)e.,r
El dao subletal que sufren las clulas bacterianas es un fenmeno a tener en
cuenta con cualquier tecnologa de conservacin de alimentos. Su deteccin es
importante porque las clulas pueden reparar este dao, lo que afectara tanto
a la calidad como a la seguridad de los alimentos. El objetivo de este trabajo
fue determinar el efecto del tratamiento con altas presiones hidrostticas sobre
la mortalidad y el dao celular subletal que sufre >isteria monoc'togenes EGD-
e (serotipo 1/2a). La inactivacin de esta cepa se analiz en carne picada de
pollo comercial, contaminada artificialmente con 10
6
UFC/g y sometida a un
tratamiento de 400 MPa a 12C durante 5-15 minutos. Tras el tratamiento, las
muestras se enriquecieron a 30C para detectar la reparacin del dao celular
causado por la presurizacin. Antes y despus del enriquecimiento se
compararon los recuentos de >. monoc'togenes en placas del medio selectivo
y diferencial ALOA y del mismo medio suplementado con NaCl al 4%.
A 400 MPa y 12C la prdida de viabilidad aument de forma lineal con el
tiempo empleado: entre 5 y 15 minutos se obtuvo una reduccin en los
recuentos de >. monoc'togenes de una unidad logartmica cada 2,5 minutos.
Los recuentos realizados antes y despus del enriquecimiento, comparando los
controles no tratados y las muestras tratadas con altas presiones, sugeran que
en ALOA crecan la totalidad de clulas de >. monoc'togenes (daadas y no
daadas) presentes en la muestra. Para confirmarlo, se compararon los
recuentos de las mismas muestras realizados en ALOA y en ALOA
suplementado con NaCl al 4%. Las muestras no tratadas dieron recuentos
similares en ambos medios, pero las muestras tratadas con altas presiones
presentaban recuentos inferiores en el medio suplementado, que indicaban que
ms del 99% de las clulas estaban daadas subletalmente y eran incapaces
de crecer en presencia de una concentracin elevada de NaCl.
Con este estudio se comprob que un tratamiento con altas presiones
relativamente suave (400 MPa, 12C), puede inactivar en menos de 15 minutos
una poblacin de >. monoc'togenes de ms de 10
5
UFC/g de carne de pollo,
aunque persisten clulas viables daadas que no se detectan en los medios
selectivos convencionales. El ALOA, por el contrario, permite la deteccin de
las clulas daadas subletalmente por altas presiones, lo que supone una
ventaja adicional de este medio.

Trabajo financiado por los proyectos RTA02-034, CAL03-027-C2-1 y PTR1995-
0789-OP y becas del CNPq de Brasil (MMJ) y del NA (JNF).

A - 236
An#li$i$ de la com&o$icin mic!obiana en embutido$ c!udo$ cu!ado$
adicionado$ de culti"o$ iniciado!e$ y biocon$e!"ado!e$
Mata, C., Lpez, M.C., Silvestre, D. y Fernndez, C.
Universidad !ardenal Herrera/!EU. Edi#icio &eminario s<n. 46113 +oncada BValenciaC. e/mail0
cmata%uc).ceu.es
La composicin de la biota de los embutidos crudos curados es uno de los
factores determinantes de la calidad de estos productos, influyendo en la
definicin de sus caractersticas organolpticas: aroma, sabor, textura. La
utilizacin de cultivos microbianos iniciadores en la elaboracin de este tipo de
productos es una prctica habitual que permite al industrial dirigir la
fermentacin y homogenizar la calidad del producto final. En los ltimos aos
se han ensayado nuevos productos, incluidos bajo la denominacin de
bioconservadores, que favorecen el desarrollo de los grupos microorganismos
responsables de la fermentacin en detrimento de otros patgenos y/o
alterantes.

El objetivo de este trabajo es evaluar el efecto que ejerce la adicin de distintos
cultivos iniciadores y bioconservadores sobre los diferentes grupos microbianos
presentes en un embutido crudo curado.
Se elaboraron cinco lotes de salchichones diferentes. A dos de ellos se les
inocularon sendos cultivos iniciadores comerciales, a otros dos se les
adicionaron dos bioconservadores y el quinto, sin ningn tratamiento, se
consider el control. A lo largo del proceso de maduracin (28 das en
condiciones controladas) se investigaron los recuentos de los siguientes grupos
microbianos: bacterias aerobias mesfilas, lactobacilos, micrococos,
estafilococos, enterobacterias, coliformes, enterococos, &tap). aureus y mohos
y levaduras.
Sobre los resultados obtenidos se realiz un anlisis multidimensional de
componentes principales con objeto de determinar las fuentes de variacin ms
importantes que han provocado la diferenciacin entre los distintos lotes de
embutidos analizados.
Los recuentos de enterobacterias, coliformes y enterococos fueron
significativamente menores (p< 0,001) en los embutidos inoculados con los
cultivos iniciadores que en el resto de embutidos. Uno de los lotes adicionados
de un bioconservador mostr menores recuentos de coliformes y enterococos
que el lote control y el adicionado del otro bioconservador (p < 0,001).
Los salchichones inoculados con cultivos iniciadores mostraron recuentos
significativamente ms elevados de lactobacilos (p< 0,001) que el resto durante
toda la maduracin. As como, los recuentos de micrococceas (micrococos y
estafilococos) tambin fueron superiores en estos lotes (p< 0,001).
En base al anlisis de componentes principales efectuado sobre los resultados
se puede establecer que los grupos de bacterias aerobias mesfilas,
estafilococos, enterobacterias y coliformes han sido la mayor fuente de
variacin entre embutidos con diferentes tratamientos.
A - 252
Con$t!uccin y ca!acte!i)acin de ce&a$ GRAS de la le"adu!a indu$t!ial
T
GE
:ue $ob!e&!oducen lico$ida$a$ de inte!'$ en enolo,a
Herrero, O.
1,2
; Ramn, D.
1,2
y Orejas, M.
1
1
(epartamento de 6iotecnolog-a. 1nstituto de AgroIu-mica ' 7ecnolog-a de Alimentos. !onse=o
&uperior de 1nvestigaciones !ient-#icas. Apartado de correos 3, 6ur=assot 46100 BValenciaC.
.
(epartamento de +edicina *reventiva ' &alud *R,lica, 6romatolog-a, 7oxicolog-a ' +edicina
>egal. Facultad de Farmacia, Universitat de ValKncia. Avda. Vicent Andr5s Estell5s s<n. 6ur=assot
46100 BValenciaC. o)errero%iata.csic.es
En la produccin del vino, para evitar cambios de calidad en diferentes aadas,
la inoculacin de cepas seleccionadas de la especie &acc)arom'ces
cerevisiae, que se imponen durante la vinificacin, es habitual en zonas
enolgicamente desarrolladas. Desde el punto de vista biotecnolgico, la
importancia de este resultado es evidente: es posible introducir modificaciones
genticas en estas levaduras que impliquen una mejora de las caractersticas
organolpticas del vino.
El aroma de los vinos es una de las caractersticas ms importantes en la
valoracin de su calidad. La fraccin voltil responsable del mismo est
constituida fundamentalmente por alcoholes superiores, monoterpenos y
steres. La mayora de los monoterpenos de la uva no contribuyen al aroma, ya
que estn ligados, por enlaces glicosdicos, a disacridos. Nuestro grupo ha
demostrado con anterioridad que es posible aumentar los componentes
aromticos de los vinos en fermentaciones llevadas a cabo con levaduras
vnicas transgnicas que producen y secretan, de novo, diferentes enzimas
hidrolticas durante la vinificacin. As, los vinos producidos en co-
fermentaciones llevadas a cabo con dos levaduras recombinantes que
expresan el gen ,gln, que en !andida molisc)iana codifica una -glucosidasa,
y el gen r)aA, que en Aspergillus aculeatus codifica una -L-ramnosidasa,
mostraban un incremento en el contenido del monoterpeno linalol. Sin
embargo, en estos experimentos se utilizaron levaduras transformadas con
plsmidos multicopia portadores de genes de resistencia a antibiticos y por
tanto su utilizacin en la industria no es factible.
En esta comunicacin se presenta la caracterizacin gentica y fisiolgica de
dos nuevas cepas de la levadura vnica T
73
, modificadas genticamente, de
manera GRAS, que tienen integrada bien una copia del cassette de expresin
7(H300,gl:00*4P1 en el locus >EU. o bien el cassette 7(H300r)aA00*4P1 en
el locus U?A3. Para ello se ha utilizado un fragmento en el que adems se ha
incluido un cassette de integracin/escisin con el marcador de resistencia a
kanamicina (lox*/Pan:Y/lox*), de modo que la cepa final carece de genes de
resistencia a antibiticos. La capacidad fermentativa de estas levaduras, as
como los perfiles de voltiles y las actividades enzimticas se han evaluado en
microvinificaciones realizadas con mosto Moscatel.

Trabajo financiado por el proyecto AGL2002-01906 (CCYT/FEDER)
A - 257
A&licacin de la t'nica NASBA 5(ucleic !ci$ Se)uence*%ase$
!mplification7 a tiem&o !eal &a!a la deteccin de RNA !ibo$mico de
'ampylobacter +e+uni en mue$t!a$ de &ollo
Churruca, E., Girbau, C., Mateo, E., Martnez, ., Colom, K., Alonso, R. y
Fernndez-Astorga, A.
(pto. 1nmunolog-a, +icro,iolog-a ' *arasitolog-a. Facultad de Farmacia. Universidad del *a-s
Vasco/EusOal HerriOo Uni,ertsitatea. *aseo de la Universidad nZ , 01006 Vitoria/4astei$. E/mail0
oi,c)ore%vc.e)u.es
El trmino campilobacterias hace referencia a bacterias espirales
microaerbicas de difcil cultivo en laboratorio, e incluye patgenos emergentes
de los gneros !amp'lo,acter, Arco,acter y Helico,acter. A pesar de no
multiplicarse fuera de su husped habitual, son capaces de sobrevivir periodos
largos de tiempo en el ambiente (agua y alimentos), desarrollando el estado
viable no cultivable (VNC). Dado el lento crecimiento, los requerimientos de
cultivo y la dificultad de interpretacin de las escasas pruebas bioqumicas
disponibles para la deteccin e identificacin de las campylobacterias, se hace
necesario desarrollar metodologas alternativas basadas en la amplificacin de
los cidos nucleicos.
Ahora bien, la correlacin entre viabilidad celular y persistencia de cidos
nucleicos debe estar bien caracterizada antes de que las tcnicas moleculares
puedan sustituir a los mtodos de cultivo tradicionales.

El objetivo de este trabajo es estudiar el uso del RNA ribosmico como
marcador de viabilidad a lo largo de la supervivencia de !amp'lo,acter =e=uni.
Nuestra hiptesis es que tras un proceso de supervivencia, las clulas
bacterianas VNC mantendrn niveles de RNA similares a los de las cultivables,
mientras que en las no viables los niveles de RNA sern no detectables.

Mediante la tcnica NASBA a tiempo real con sondas ,eacon se ha procedido
a detectar rRNA de !. =e=uni directamente en muestras de pollo exentas de
!amp'lo,acter y artificialmente contaminadas con clulas de !. =e=uni en tres
estados bsicos: cultivables, VNC y muertas por calor en autoclave.

Las muestras inoculadas con clulas muertas dieron seal negativa, mientras
que las inoculadas con clulas cultivables y VNC dieron seal positiva. Estos
resultados indican que el RNA nicamente se conservara en los casos en los
que la clula bacteriana mantiene su integridad. De esta forma queda
establecida la correlacin entre la deteccin de RNA y la viabilidad celular.
Adems, la deteccin por NASBA a tiempo real es compatible con la deteccin
directa sobre la muestra alimentaria.

Este trabajo forma parte del proyecto AGL2002-04480-C03-02 subvencionado
por el Ministerio de Ciencia y Tecnologa (MCyT).

A - 266
E"aluacin de $i$tema$ de biocon$e!"acin en f!uta y ;o!tali)a$ f!e$ca$
f!ente a &ateno$ de t!an$mi$in alimenta!ia
Badosa, E.
(1

)
; Trias, R.
(1)
; Baeras, L.
(2)
; Pars, D.
(1)
; Pla, M.
(1)
y Montesinos, E.
(1)
,1-
1nstituto de 7ecnolog-a Agroalimentaria/!er7A/!1(&AV. Universitat de 4irona. !ampus +ontilivi,
101. 4irona. E/mai0 emilio.montesinos%udg.es.
,2-
1nstituto de Ecolog-a Acu"tica. Universitat de
4irona. !ampus +ontilivi, 101. 4irona.
En los productos vegetales de consumo en fresco, se est detectando como un
problema emergente la contaminacin de la fruta y hortalizas frescas por
bacterias patgenas asociadas a toxiinfecciones alimentarias causadas
principalmente por Salmonella spp. y >isteria monoc'togenes. El objetivo del
presente trabajo es doble, por una parte se ha realizado una prospeccin de la
incidencia en el mercado de estas contaminaciones y por otro lado, se evala
la viabilidad del control biolgico en fruta y hortalizas procesadas para el
consumo en fresco.
Se ha llevado a cabo un estudio prospectivo de la calidad microbiolgica en
frutas y hortalizas frescas (envasadas, no envasadas, productos de cuarta
gama) de distintas procedencias, mediante recuento de aerobios mesfilos,
coliformes totales, hongos y levaduras. Para detectar la presencia de
Salmonella spp. y >isteria spp. en las muestras se han optimizado protocolos
de deteccin de Salmonella spp. y >isteria spp. basados en el uso de PCR
convencional y a tiempo real acopladas a enriquecimiento de Salmonella spp. y
>isteria spp. en distintos productos vegetales (uva, manzana, tomate, soja
germinada y cannigos). Utilizando los protocolos de deteccin por PCR
puestos a punto en este trabajo, se ha estudiado la presencia de &almonella
spp., >isteria spp. y >. monoc'togenes en aproximadamente 500 muestras del
mercado.
Paralelamente, se han aislado y seleccionado bacterias de distintas especies
presentes en las plantas de origen y productos vegetales para estudiar la
posibilidad de su uso como agentes bioprotectores. La capacidad antagonista
de los aislados se ha determinado in vitro y ex vivo frente a >. monoc'togenes
y &almonella spp. De un total de 523 aislados, solamente un 2% mostraron una
elevada actividad antagonista in vitro frente a los dos patgenos en distintos
medios de cultivo. Una seleccin de 3 aislados antagonistas frente a >.
monoc'togenes y 6 aislados antagonistas de &almonella spp. fueron
seleccionados para la realizacin de pruebas de inhibicin ex vivo en productos
vegetales.

A - 269
Acti"idad Hille! de le"adu!a$ ai$lada$ du!ante el &!oce$o de elabo!acin
de aceituna$ de me$a
Hernndez, A., Prez-Nevado, F., Aranda, E., Benito, M.J., Coln, B. y Martn,
A.
Nrea :utrici;n ' 6romatolog-a, (pto. Sootecnia. Escuela de 1ngenier-as Agrarias, UEY. !tra.
!"ceres s<n 0601, 6ada=o$. E/mail0 a)ernande$%unex.es
En la fermentacin de aceitunas de mesa interviene una microflora
caracterstica, habindose hallado diversas especies de levaduras como
participantes en este proceso. La seleccin como cultivo iniciador de cepas de
levaduras con adecuadas propiedades tecnolgicas puede conducir a la
obtencin de productos homogneos y seguros. Una de estas caractersticas
deseables es la produccin de toxinas killer. Las levaduras killer son capaces
de producir protenas o glicoprotenas txicas (toxinas killer) que provocan la
muerte en cepas de levaduras killer-sensibles, pudiendo servir para controlar
alteraciones en alimentos. Gracias a esta habilidad, levaduras con buenas
aptitudes tecnolgicas y con fenotipo killer frente a levaduras alterantes podran
ser adecuadas para su empleo como cultivo iniciador.
En la realizacin de este trabajo se utilizaron cepas de levaduras aisladas
durante el procesado de aceitunas de mesa. Tras su identificacin y seleccin
en base a diversas caractersticas deseables, se estudi su capacidad de
inhibir el crecimiento de cuatro cepas patrn de levaduras killer-sensibles en
diferentes condiciones de pH (de 3 a 9) y de NaCl (5, 8 y 10%). Adems, las
cepas se caracterizaron en base a su sensibilidad o resistencia a varias cepas
killer patrn.
Los resultados de la inhibicin de levaduras killer-sensible mostraron que
aproximadamente el 50% de las cepas estudiadas inhiban el crecimiento de
alguna de las cepas sensibles en el rango de pH estudiados. En algunos casos,
las levaduras killer mostraron una actividad inhibitoria en amplios rangos de pH.
Adems, se observ que la actividad killer estaba favorecida por altas
concentraciones de NaCl, al presentar halos de inhibicin de mayor tamao en
estas condiciones.
A - 274
E$tudio$ de "ida (til de &ec;ua$ de &ollo %roiler en"a$ada$ en
atm$fe!a$ modificada$
Clavijo Olmos,C.M.* y Cantalejo Dez, M.J.**.
MUniversidad de *amplona B!olom,iaC.Facultad de !ienciasF MMUniversidad *R,lica de :avarra.
Escuela &uperior de 1ngenieros Agr;nomos. Nrea 7ecnolog-a de Alimentos. !ampus de Arrosad-a,
E/31006, *amplona B:avarraC. e/mail0cclaviol%)otmail.com
El uso de atmsferas modificadas con alto contenido de dixido de carbono es
efectivo para alargar la vida til de productos frescos como pescados, cerdo y
pollo. Para la carne de pollo existen estudios que han mostrado que es posible
alargar la vida til, pero no se ha determinado an cul es la concentracin
ptima de gases. Por lo que en este trabajo se plantearon los siguientes
objetivos: Ensayar diferentes concentraciones de dixido de carbono para
poder determinar cul es la mejor de acuerdo a los resultados de los anlisis
microbiolgicos, sensoriales y fsico-qumicos; establecer el efecto del dixido
de carbono sobre las caractersticas organolpticas y si el tratamiento afecta a
la oxidacin de las grasas de la carne.
Para este estudio se trabaj con pechugas de pollo fileteadas que se
envasaron en atmsfera modificada con tres mezclas de gases: 98% de dixido
de carbono; 75% de dixido de carbono, 5% de oxgeno y 20 % de nitrgeno y,
finalmente, 40% de dixido de carbono y 60% de nitrgeno. Todas las
pechugas se almacenaron en un rango de temperatura de 2-3C. Las pechugas
control se envasaron a vaco y se mantuvieron a la misma temperatura. A todas
muestras se les realizaron los siguientes anlisis a lo largo de su vida til:
recuento de aerobios mesfilos, &tap)'lococcus aureus coagulasa positiva,
!lostridium spp, psicrtrofos, mohos y levaduras, >acto,acillus spp, NMP de
coliformes totales y Esc)eric)ia coliF determinaciones de aspecto, olor y
decoloracin realizadas por un panel de cata entrenado; determinaciones de
pH y color, y por ltimo, anlisis de protenas, humedad y los ndices de
perxido y cidos grasos libres al inicio y al final de la vida til de las muestras.
Se vio que la vida til de las pechugas tratadas con mezclas de 98% y 75 % de
dixido de carbono fue de 15 das de acuerdo a los resultados microbiolgicos
y a la valoracin realizada de las caractersticas sensoriales por el panel de
cata; mientras que, para la otra mezcla, la vida til fue de 10 das.
No se produjo alteracin de las grasas en las muestras tratadas de acuerdo a
los anlisis de ndice de perxidos y cidos grasos libres; tampoco se observ
alteracin en el contenido de protenas. En cuanto al color se observ que las
muestras tratadas presentaron disminucin en los valores de a* (rojo) y
aumento en los valores de b* (amarillo) al compararlas con los valores de las
muestras control.

Se puede concluir que no se presentaron diferencias significativas en los
resultados de los diferentes anlisis con los tratamientos de 98% y 75% de
dixido de carbono y que el tratamiento con 40% fue menos efectivo.

A - 277
4a!iante$ en'tica$ del en stx2 de Escherichia coli O?@G8DG ai$lada de
lec;e de o"e*a%
Caro, .
1
. Mateo, J.
2
y Garca-Armesto, M.R.
2
1
Universidad Aut;noma del Estado de Hidalgo, 1nstituto de !iencias Agropecuarias, 7ulancingo
Hgo., 43600, +5xico.
.
(pto. de Higiene ' 7ecnolog-a de los Alimentos, Universidad de >e;n, .400
>e;n, EspaLa. d)ticc%unileon.es
Esc)eric)ia coli O157:H7 se ha aislado en numerosas ocasiones de la leche y
de quesos elaborados a partir de leche cruda (Padhye et al., 1991). Sin
embargo son pocos los trabajos que hayan realizado el aislamiento de este
microorganismo en la leche de oveja (Rubini et al., 1999). Una de las
caractersticas ms peculiares de E. coli O157:H7 es su capacidad de producir
verotoxinas. Tradicionalmente se distinguen dos tipos: VT
1
y VT
2
, codificadas
por los genes stx
1
y stx
.
, y recientemente se han descrito diferentes variantes
para ambas toxinas. El objetivo del presente estudio ha sido conocer las
variantes genticas del gen stx
2
de las cepas de E. coli O157:H7 aisladas de la
leche de oveja.
La caracterizacin de las variantes del gen stx
.
se realiz segn lo descrito por
Bastian et al. (1998).
De un total de 24 cepas analizadas, 17 de ellas mostraron una amplificacin del
gen stx
.
. La variante predominante del gen stx
.
fue stx
2vhba
(presente en las 17
cepas), mientras que la variante stx2vha slo la presentaron 2 cepas.
Estos resultados no fueron coincidentes a los observados por Ramachandran
et al. (2001), quienes estudiaron las variantes del gen stx
.
de E. coli O157:H7
aisladas a partir de heces del ganado ovino, encontrando que la variante
predominante fue stx
.d
y concluyendo que las cepas de E. coli O157:H7
presentes en el ganado ovino podran presentar un menor grado de
patogenicidad. Sin embargo, la variante de encontrada en este estudio ha sido
una de las encontradas ms frecuentemente en los ECVT aislados del ganado
bovino (Bertin et al., 2001).
Bibliografa
Bastian, S. N., Carle, & F. Grimont. (1998). Comparison of 14 PCR systems for the
detection and subtyping of stx genes in Shiga-toxin-producing Esc)eric)ia coli. Res
Microbiol., ?BI, 457-472
Bertin, Y., K. Boukhors, V. Livrelli, & C. Martin. (2001). Stx2 usbtyping of shiga toxin-
producing Escherichia coli isolated from cattle in France detection of new stx2 subtype
and correlation with additional virulence factors. J. Clin. Microbiol., EI, 3060-3065.
Padhye, N. V. & M. P. Doyle. (1991b). Rapid procedure for detecting enterohemorrhagic
Esc)eric)ia coli O157:H7 in food. Appl. Environ. Microbiol., @G, 2693-2698.
Rubini, S., G. Cardeti, S. Amiti, G. Manna, R. onorati, A. Caprioli, & S. Morabito. (1999).
Verocytotoxin-producing Esc)eric)ia coli O157 in sheep milk. Vet. Rec., ?BB, 56
Ramachandran, V., M. A. Hornitzky, K. A. Bettelheim, M. J. Walker, & S. P. Djordjevic.
(2001). The common ovine Shiga toxin 2-containing Esc)eric)ia coli serotypes and
human isolates of the same serotypes possess a Stx2d toxin type. J. Clin. Microbiol., EI,
1932-1937.
A - 282
Co&!oduccin de ni$ina y lacticina BA? &o! nue"o$ ai$lado$ de
Lactococcus lactis
Bravo, D. y Medina, M.
(pto. 7ecnolog-a de Alimentos, 1:1A, !tra. de >a !oruLa Om , .8040 +adrid d,ravo%inia.es
La produccin de bacteriocinas es una de las caractersticas deseables en la
bsqueda de bacterias lcticas de inters para la industria alimentaria. Las
bacteriocinas, aplicadas individualmente o en combinacin con otros
antimicrobianos, representan una de las estrategias de mayor inters en
seguridad microbiolgica de alimentos.
Se ha investigado la produccin de bacteriocinas de 13 aislados obtenidos de
leche cruda de oveja procedente de la zona de produccin de queso Zamorano
DO. Las muestras de leche se transformaron en cuajadas y se sembraron en
placas de agar MRS--glicerofosfato inoculadas con >acto,acillus ,uc)neri
ST2A como indicador.
Los 13 aislados con actividad antimicrobiana se identificaron como
>actococcus lactis. Mediante la amplificacin de los genes estructurales de
bacteriocinas conocidas de >actococcus se comprob la presencia de los
determinantes de nisina en 10 aislados y de lacticina 481 en los 13 aislados.
Utilizando electroforesis en campos pulsados (PFGE) con &ma y Apa para las
digestiones, se establecieron 4 pulsotipos distintos: (aislado Za-11),
(aislados Za-105 y Za-113), (aislados Za-103 y Za-106) y V (aislados Za-
101, Za-102, Za-108, Za-109, Za-110, Za-111, Za-112 y Za-114).
El sobrenadante de los cultivos en M17, MRS y leche se aplic en placas de
agar MRS--glicerofosfato con >. ,uc)neri ST2A (sensible a nisina y resistente
a lacticina 481) y >. lactis subsp. cremoris HP (sensible a las dos
bacteriocinas). Se comprob la produccin de lacticina 481 en los aislados de
los pulsotipos y y la coproduccin de las dos bacteriocinas en los aislados
de los pulsotipos de y V.
Los genes precursores de las actividades tipo nisina y tipo lacticina 481 del
aislado Za-108 fueron secuenciados y comparados con la secuencia original de
nisina Z y lacticina 481. La secuencia del precursor de actividad tipo lacticina
del aislado Za-108 present una identidad del 100% con la secuencia de la
lacticina 481 y la secuencia de la actividad tipo nisina un 96% de identidad con
la nisina Z. Tan solo se observaron dos cambios polimrficos (N
17
por D
17
y V
39
por L
39
).
Las dos bacteriocinas producidas por un mismo aislado se separaron mediante
SDS-PAGE. La actividad antimicrobiana se detect en el gel con sobrecapa de
agar inoculado con los respectivos indicadores. Las actividades tambin se
separaron con columnas C
18
Sep-Pak. La actividad nisina se recuper eluyendo
con metanol al 10% y la lacticina 481 con metanol al 75%.
A - 285
O!ien y di"e!$idad de ce&a$ de Staphylococcus aureus &!e$ente$ en
ca!ne de cone*o
Rodrguez-Calleja, J.M., Garca-Lpez, ., Otero, A., Santos, J.A. y Garca-
Lpez, M.L.
Nrea de :utrici;n ' 6romatolog-a. (epartamento de Higiene ' 7ecnolog-a de los Alimentos.
Facultad de Veterinaria. Universidad de >e;n. !ampus de Vega$ana, .401 / >e;nF
d)t=rc%unileon.es
&tap)'lococcus aureus es una bacteria capaz de colonizar al hombre y los
animales de abasto as como la industria alimentaria. Adems, es un agente de
infecciones humanas y animales y de intoxicaciones alimentarias. Con
frecuencia se asla de carne fresca, siendo su origen los animales enfermos y
portadores, los manipuladores y el ambiente de los mataderos y salas de
despiece. El objetivo de este estudio ha sido determinar el origen y diversidad
de 27 cepas de &. aureus presentes en canales y cortes de conejo utilizando
tres sistemas fenotpicos (sensibilidad a antibiticos, fagotipificacin y
biotipificacin), y tres moleculares (PFGE, RAPD y ribotipado). Las cepas
procedan de muestras obtenidas en cinco establecimientos localizados en
provincias diferentes pertenecientes a dos comunidades autnomas; tres eran
mataderos con salas de despiece y dos slo mataderos. PFGE fue la tcnica
con un mayor ndice de discriminacin (D = 0,966) seguida de RAPD (D =
0,877) y ribotipado (D = 0,786). Los valores D para sensibilidad a los
antibiticos, fagotipo y ecotipo fueron 0,763, 0,761 y 0,644, respectivamente.
Utilizando la tcnica PFGE (&ma) se obtuvieron 10 pulsotipos (A-J), siendo el
ms frecuente el tipo A que inclua 10 cepas aisladas en las cuatro provincias.
Salvo cuatro cepas que presentaron un patrn nico, el resto de los tipos se
detectaron en ms de un establecimiento o ms de una vez en un nico
establecimiento. El anlisis por RAPD (similitud <90%) mostr diez patrones
que, en su mayora, contenan cepas relacionadas. El ribotipado (EcoR)
produjo siete patrones (similitud <90%), perteneciendo al patrn ms comn
ocho cepas del pulsotipo A y otra posiblemente relacionada. Slo siete cepas
fueron sensibles a los 20 antibiticos ensayados. El resto mostraron 7 patrones
R, siendo el ms frecuente tetraciclina (11 cepas). Utilizando el set
internacional de bacterifagos, se tipificaron 18 cepas (grupos , , / y V) y
otras 8 lo hicieron cuando se llev a cabo la tipificacin inversa. Doce cepas
pertenecan a ecovares humanos y el resto a los biotipos NHS1 y NHS5 ("non
host specific). Ninguna cepa perteneca a los ecovares bovino, ovino o aviar.
La mayora de las cepas del pulsotipo A presentaba el patrn "ecovar
NHS1/fagotipo 3A/3C/55/71 que es propio de cepas muy virulentas para
conejos. Se puede concluir que las cepas de &. aureus presentes en carne de
conejo son de origen humano o pertenecen a los biotipos NHS frecuentemente
asociados con lagomorfos y que, la mayora, son clones relacionados entre s y
ampliamente distribuidos entre los animales y/o los establecimientos.
A - 294
De$a!!ollo de un $i$tema de +CR a tiem&o !eal &a!a la deteccin y
cuantificacin de Staphylococcus aureus en alimento$%
Elizaquvel, P.
1
, Martinez-Blanch, J.F.
2
, Alarcn, B.
1,2
, Viedo, B.
1,2
y Aznar,
R.
1,2*
1
(epartamento de +icro,iolog-a ' Ecolog-a, Universitat de ValKncia.
.
1nstituto de AgroIu-mica '
7ecnolog-a de Alimentos, !&1!. Mrosa.a$nar%uv.es
&tap)'lococcus aureus es la especie ms comnmente asociada a la
intoxicacin alimentaria estafiloccica, una de las toxiinfecciones transmitidas
por alimentos con mayor repercusin econmica a nivel mundial.
Habitualmente su deteccin en alimentos se realiza por tcnicas culturales
basadas en el uso de medios selectivos y la posterior identificacin mediante
pruebas bioqumicas. Dichas tcnicas consumen mucho tiempo y en ocasiones
llevan a identificaciones errneas. Como alternativa, las tcnicas moleculares
basadas en la PCR tienen como ventaja una mayor rapidez y seguridad en la
identificacin e incluso la PCR a tiempo real (RTi-PCR), permite la deteccin y
cuantificacin automatizada, con una mayor sensibilidad y rapidez. La RTi-PCR
se basa en la deteccin de una seal fluorescente emitida bien por un
fluorforo que se une al ADN de doble cadena (SYBR Green ), bien mediante
sondas marcadas que hibridan en el amplificado y emiten fluorescencia al ser
separadas debido a la actividad 5' nucleasa de la polimerasa. La monitorizacin
de la reaccin, permite determinar el ciclo en el cual se inicia la fase
exponencial de la amplificacin (ciclo umbral, Ct), parmetro que permite la
cuantificacin.
En este trabajo se ha puesto a punto un sistema de RTi-PCR para la deteccin
y cuantificacin de &. aureus. Mediante el programa informtico Primer
Express
TM
versin 1.0 (Applied Biosystems), y utilizando como diana el gen de
la nucleasa termoestable (nuc), se disearon cebadores especficos para su
utilizacin con SYBR Green , y una sonda TaqMan para ensayos de tipo 5'
nucleasa. Se ajustaron las condiciones de reaccin con ambos sistemas y se
comprob la especificidad de los cebadores y la sonda en 36 cepas de
referencia (11 de la especie &. aureus, 15 de otras especies del gnero, 10 de
otros gneros) y 56 aislados de &. aureus procedentes de distintos alimentos.
Se establecieron las curvas patrn para cuantificacin, a partir de diluciones
decimales seriadas de DNA purificado y de suspensiones celulares calibradas
de la cepa &. aureus CECT 86
T
. Los resultados obtenidos en cuanto a
sensibilidad fueron de 1 clula por reaccin, con SYBR Green y de 10 clulas
con TaqMan, utilizando cultivos puros. En ensayos con ternera inoculada
artificialmente, y mediante la extraccin de DNA total con el sistema DNeasy
Tissue Kit (Qiagen), los lmites de deteccin obtenidos fueron de 10
2
clulas/g
con SYBR Green y de 10
3
clulas/g con TaqMan.
El procedimiento de RTi-PCR con SYBR Green desarrollado permite la
deteccin especfica, rpida y cuantitativa de &. aureus, con un nivel de
sensibilidad adecuado para su aplicacin en alimentos y, con la ventaja
adicional de un coste menor respecto al sistema TaqMan, dado que no requiere
de la sonda.
A - 295
Identificacin de le"adu!a$ &!e$ente$ en "ino$ tinto$ de la !ein
&o!tuue$a del DJo
Silva, L. R.
1,2
, Trujillo, M. E.
1
y Velzquez, E.
1
1
(epartamento de +icro,iolog-a ' 4en5tica. Universidad de &alamanca. Edi#icio (epartamental de
6iolog-a. >a,. .09. !ampus +iguel de Unamuno. 300 &alamanca. email0luis%esav.pt.
.
(epartamento das 1ndRstrias Agro/Alimentares. Escola &uperior Agr"ria de Viseu. *ortugal.
La regin del Do est situada al norte de Portugal, en la provincia de la Beira
Alta; caracterizada por un terreno accidentado al norte y una topografa plana al
sur, su centro es la ciudad de Viseu. En la elaboracin de los vinos tintos de
esta regin, la variedad ms importante es la 7ouriga/nacional.
La transformacin de las uvas en vino es esencialmente un proceso
microbiolgico, en el que participan levaduras, bacterias, hongos, etc (Fleet,
1993). En el caso de los vinos tintos la fermentacin malolctica, llevada a cabo
por bacterias, se da con posterioridad a la fermentacin alcohlica realizada
por levaduras.
En este estudio se ha llevado a cabo un anlisis de las especies de levaduras
presentes en vinos tintos de la regin portuguesa del Do despus de la
fermentacin malolctica. Para ello se utilizaron tres muestras de vino tinto
7ourigo/nacional de la cosecha de 2000, procedentes de barricas de madera
de roble a partir de las cuales se llev a cabo el aislamiento de levaduras sobre
medio Sabouraud con cloranfenicol.
Las levaduras fueron identificadas utilizando mtodos fenotpicos, que
incluyeron estudios morfolgicos, fisiolgicos y bioqumicos y mtodos
genotpicos, incluyendo la secuenciacin del dominio D1/D2 del gen ribosmico
28S y del fragmento intergnico situado entre los genes 18S y 28S (TS1/TS2),
as como los perfiles de restriccin de este fragmento obtenidos con la enzima
Hae 111 (Silva, 2004).
Los resultados de este estudio mostraron que los patrones de restriccin
obtenidos con esta enzima junto con el tamao del fragmento de TS
amplificado permiten la agrupacin de las cepas a nivel de especie. Las cepas
fueron posteriormente identificadas mediante secuenciacin tanto de este
fragmento intergnico como del dominio D1/D2 del gen ribosmico 28S.
De acuerdo con los resultados obtenidos, la poblacin dominante en los vinos
analizados est constituida por cepas de la especie &acc)arom'ces cerevisiae
aunque tambin se identificaron otras especies como (e,ar'om'ces )ansenii y
*ic)ia mem,rani#aciens.

Referencias:

Fleet, G. H. (1993). Vine micro,iolog' and ,iotec)nolog', Harwood Academic
publishers, pp. 1-26.
Silva, L. R. (2004). Caracterizacin de los microorganismos presentes en vinos
tintos de la regin del Do en Portugal. dentificacin de los microorganismos
productores de fenoles voltiles. Tesis Doctoral, Universidad de Salamanca.
A - 296
La$ le"adu!a$ ",nica$ de$a!!ollan autofaia du!ante la $eunda
fe!mentacin de lo$ "ino$ e$&umo$o$
Cebollero E. y Gonzlez R
1nst. Ferment. 1nd. B!&1!C !. 2uan de la !ierva 3, .8006 +adrid. lta,era%i#i.csic.es
La elaboracin del cava consta de dos fermentaciones, durante la primera el
mosto es transformado en vino base al que se aaden levaduras seleccionadas
para que tenga lugar la segunda fermentacin o toma de espuma,
obtenindose cava como producto final del proceso. Legalmente las levaduras
deben permanecer en contacto con el vino un mnimo de 9 meses, para
permitir la autolisis de las levaduras. La autolisis conlleva la liberacin al vino
de compuestos provenientes de la degradacin de las macromolculas de las
levaduras, estando estos productos directamente relacionados con la calidad
del cava. Con el fin de economizar el proceso de produccin se ha intentado
por diferentes medios, y sin demasiado xito, acelerar la autolisis de las
levaduras. En nuestro laboratorio estamos interesados en obtener levaduras
industriales con un fenotipo de autolisis acelerada empleando tcnicas de
ingeniera gentica y tenemos evidencias de que la manipulacin de genes que
afectan a la autofagia tienen influencia sobre el comportamiento autoltico en
cepas de laboratorio (1). La autofagia es un proceso generalizado en los
organismos eucariotas y en las levaduras se induce en respuesta a situaciones
de ayuno, principalmente ante carencia de nitrgeno. Durante la autofagia,
parte del citoplasma es incorporado en vesculas de doble membrana, los
autofagosomas, y transportado hasta la vacuola donde tiene lugar su
degradacin. Esto permite la supervivencia celular en condiciones de ayuno
mediante el reciclaje de los productos de la hidrlisis. En este trabajo
demostramos mediante anlisis bioqumicos y morfolgicos cmo las levaduras
industriales sufren autofagia cuando son sometidas a condiciones de segunda
fermentacin como las que tienen lugar durante el proceso de elaboracin del
cava. Previamente demostramos cmo las levaduras de laboratorio desarrollan
autofagia bajo unas condiciones similares a las industriales (2). La desaparicin
de una isoforma de la acetaldehdo deshidrogenasa (Ald6) fue utilizada como
marcador bioqumico para demostrar el desarrollo de la autofagia bajo
condiciones enolgicas. Como criterio morfolgico se utiliz la acumulacin de
cuerpos autofgicos, vesculas del lumen vacuolar resultantes de la fusin de la
membrana externa de los autofagosomas con la vacuola, en presencia de un
inhibidor de serina treonina proteasas. Estas son las primeras evidencias que
muestran cmo las condiciones dadas durante la segunda fermentacin
inducen la autofagia en las levaduras, y estos conocimientos estn siendo
empleados en nuestro laboratorio para disear una cepa industrial con un
fenotipo constitutivo en autofagia, que a escala de laboratorio, ha demostrado ir
acompaado de una aceleracin de la autolisis.
1. Cebollero E, Martinez-Rodriguez A, Carrascosa AV, Gonzalez R. 2005.
FEMS Microbiol Lett. 246:1-9.
2. Cebollero E, Carrascosa AV, Gonzalez R. 2005. Biotechnol Prog. 21, 614-6.
A - 298
Modificacin en'tica de le"adu!a$ &a!a acele!a! el &!oce$o de autoli$i$%
Tabera L., Muoz R. y Gonzlez R.
1nst. Ferment. 1nd. B!.&.1.!.C !. 2uan de la !ierva 3, .8006, +adrid
La autolisis de las levaduras durante la elaboracin de los vinos espumosos
implica la liberacin de compuestos procedentes de la degradacin de las
levaduras al medio vnico con la consecuente mejora de la calidad final del vino
obtenido. Dicho proceso es extremadamente lento e implica largos tiempos de
almacenamiento. La obtencin de levaduras mejoradas genticamente que
posean un fenotipo de autolisis acelerado supondra una mejora en el proceso
de elaboracin de vinos espumosos, pudiendo obtener en tiempos ms cortos
vinos de igual o mejor calidad, evitando los problemas que acarrea modificar
tecnolgicamente el proceso de elaboracin.
Mediante ingeniera gentica pretendemos obtener una cepa de levadura que
presente un proceso de autolisis acelerado pero requerimos que sea capaz de
finalizar el proceso fermentativo. Por esto, nos fijamos en los mutantes de
delecin del gen 6!@1 (subunidad reguladora de la PKA) que muestran una
prdida acelerada de viabilidad, requisito previo al proceso de autolisis, al
agotarse la glucosa del medio. Se han descrito dos tipos de mutantes: los
mutantes de prdida total de funcin, que tambin presentan otra serie de
caractersticas fenotpicas, entre las cuales se encuentra una elevada
sensibilidad al etanol que supone una desventaja para nuestros objetivos; y
mutantes de prdida parcial de funcin (generalmente por el extremo C
terminal), denominados mutantes de accin lenta, que no muestran algunas de
las deficiencias fenotpicas encontradas en los mutantes de delecin total (1).
En este trabajo hemos construido una batera de levaduras de laboratorio
haploides y diploides para la delecin total y parcial de 6!@1 y hemos
realizado el estudio fenotpico de estas levaduras. Entre los resultados
obtenidos encontramos que la cepa diploide heterocigota para la delecin total
de 6!@1 muestra fenotipo autoltico, aunque menos acusado que el mutante
haploide, demostrando el carcter semidominante de esta delecin,
anteriormente descrita como recesiva (2). Dicha cepa muestra prdida
acelerada de viabilidad pero una menor tolerancia al etanol con respecto a la
cepa salvaje. La cepa diploide heterocigota para la delecin parcial de 6!@1
tambin muestra prdida acelerada de viabilidad en ausencia de fuentes de
carbono pero un comportamiento similar a la cepa salvaje para el resto de las
caractersticas analizadas. Para determinar la velocidad de la autolisis sufrida
por las levaduras hemos medido la cantidad de aminocidos liberados en
condiciones que emulan la segunda fermentacin. Todas las cepas mutantes
estudiadas muestran una liberacin de aminocidos acelerada con respecto a
la cepa salvaje. Dado que la cepa diploide heterocigota para la delecin parcial
de 6!@1 muestra una liberacin de aminocidos acelerada y no muestra una
menor tolerancia al etanol podra ser la mutacin adecuada para aplicar en
cepas de levadura industrial.
1. Peck, V. M. et al. (1997) Current Genetics 32 , 83-92
2. Toda, T. et al. (1987) Molecular and Cellular Biology 7, 1371-1377
A - 299
E$tudio mic!obiolico de miele$ m#$ comune$ de la &!o"incia de Len9
t!a$ un almacenamiento a tem&e!atu!a ambiente y ba*o !ef!ie!acin
Garca Alonso, E.J., Fernndez, A., Bernardo, A., Lpez, M. y Tornadijo, M.E.
(pto. de Higiene ' 7ecnolog-a de los Alimentos. Universidad de >e;n, .401/>e;n. E/mail0
d)tml#%unileon.es
La miel se puede definir como una sustancia compleja que elaboran las abejas
a partir del nctar y los mielatos, a los que aaden sus propias secreciones
glandulares enzimticas. En Espaa, la apicultura es un sector poco
profesionalizado en el que abundan los pequeos apicultores. Castilla y Len
es una de las comunidades autnomas con mayor produccin de miel, y dentro
de la Comunidad, Len es la segunda provincia en produccin, con ms de
1000 tm, situndose el consumo en 06 kg/habitante/ao.
El objetivo de este estudio fue conocer la evolucin experimentada por las
principales poblaciones microbianas durante el almacenamiento de mieles de la
provincia de Len a temperatura ambiente y bajo refrigeracin e identificar la
poblacin fngica desarrollada en dichas mieles. Este trabajo forma parte de un
proyecto ms amplio en el que se estudian adems las caractersticas qumicas
y fsico-qumicas de las mieles almacenadas en las condiciones mencionadas
con el objetivo ltimo de conocer qu condiciones resultan ms adecuadas
para conservar sus caractersticas de calidad.
Se estudiaron los tres tipos principales de miel existentes en la provincia de
Len (miel de bosque, multifloral y unifloral de brezo) correspondientes a la
produccin del ao 2003. Los anlisis se llevaron a cabo tras su obtencin y a
los 3, 6 y 12 meses de almacenamiento a temperatura ambiente y refrigeracin.
En cada muestra se llev a cabo el recuento de los siguientes grupos
microbianos: flora aerobia mesfila total (en PCA, 30C/48 h),
Entero,acteriaceae (en VRBGA, 37C/18-24 h), Esc)eric)ia coli (en BGBL,
44,5C 0,5C/24-48 h), &almonella-&)igella (en agar XLD, HE y SS, 37C/24
h, a partir de RVS, 42C 1C/24 h, tras un preenriquecimiento en A.P.,
37C/24 h) y mohos y levaduras (en OGYEA, 22C/5 das).
Los recuentos efectuados en PCA y VRBGA fueron insignificantes y en ninguna
de las muestras analizadas se detect presencia de E. coli o &almonella-
&)igella. En OGYEA los recuentos fueron tambin muy bajos (menos de 30
colonias por placa). No obstante se aislaron algunas cepas de mohos con el
objetivo de conocer las especies dominantes en cada punto de muestreo.
La especie aislada en mayor proporcin en las diferentes muestras analizadas,
tanto conservadas a refrigeracin como a temperatura ambiente, fue
*enicillium cor'lop)ilum que se mantuvo como dominante durante todo el
periodo de almacenamiento. *. citrinum, *. italicum, *. gla,rum, Aspergillus
penicilloides, se aislaron tambin de forma espordica.

A - 301
Inte!'$ enolico de la libe!acin de mano&!ote,na$ &o! di"e!$o$
mutante$ de Saccharomyces cerevisiae %
Ramos D.G. y Gonzlez R.
1nst. Ferment. 1nd. B!.&.1.!.C !< 2uan de la !ierva, 3F .8006 +adrid. email0 danireimos%i#i.csic.es
Las manoprotenas de la pared celular de &acc)arom'ces cerevesiae son de
especial inters en enologa debido a las propiedades que se les atribuyen:
favorecer el desarrollo de la fermentacin malolctica, contribuir a la estabilidad
proteica y tartrica de vinos blancos, interaccionar con compuestos fenlicos y
del aroma en vinos tintos, etc (1).
En el presente trabajo se ha estudiado el efecto de la delecin de varios genes
sobre la liberacin de polisacridos en cepas mutantes de laboratorio. Tambin
se ha estudiado la estabilizacin proteica de un vino blanco por parte de los
polisacridos liberados por varias de estas cepas. Los genes delecionados
sobre cepas de diferente fondo gentico han sido los siguientes: YLR342w
(Fks1), YMR342w (Gas1), YJL062w (Gpi7), YBR183w, YDL231c, YNL080c,
YOL092w, YGR229c (Knr4), YPL133c e YNL294c.
Las levaduras se crecieron en un medio rico hasta alcanzar la fase
estacionaria, y se centrifugaron los cultivos para recoger el sobrenadante. Se
eliminaron las molculas pequeas presentes en los sobrenadantes mediante
columnas de cromatografa de exclusin molecular Econo-Pac
TM
. La
concentracin de los polisacridos totales se midi mediante el mtodo del
fenol/sulfrico (.), y se estim la concentracin de polisacridos. Los datos
obtenidos para los diferentes mutantes, se compararon con los de la cepa
control correspondiente. Paralelamente, con los sobrenadantes de los cultivos
se realiz una electroforesis SDS-PAGE con una posterior electrotransferencia
a una membrana de nitrocelulosa. La membrana se hibrid con Concanavalina
A marcada con Peroxidasa y se revel con el substrato de la Peroxidasa ECL.
Se compararon el patrn y la intensidad de bandas obtenida para los diferentes
mutantes y sus controles.
Los resultados mostraron una mayor concentracin de polisacrido liberado y/o
una mayor intensidad de bandas de manoprotenas para la delecin de los
genes YLR342w (Fks1), YMR342w (Gas1), YJL062w (Gpi7), YNL080c, e
YGR229c (Knr4).
A un vino susceptible de sufrir quiebra proteica, se le aadi el liofilizado de la
fraccin macromolecular correspondiente a los cultivos de las cepas
delecionadas en estos genes. El resultado fue que todos los extractos
estabilizaban el vino y adems los extractos de las cepas delecionadas en los
genes YMR342w (Gas1), YJL062w (Gpi7) e YGR229c (Knr4), presentaban una
capacidad estabilizadora significativamente mayor que la de las cepas control.
1. Feuillat,M; (2003) Am. J. Enol. Vit. 54: 211-213
2. Segarra, .; Lao, C.; Lpez-Tamames, E.; de la Torre-Boronat, M.C. (1995)
Am. J. Enol. Vit. 46: 564-570
A - 303
Deteccin &o! +CR de bacte!ia$ )oontica$ !am &o$iti"a$ en ;a!ina$ de
&e$cado
Tejedor, J.L., Vela, A.., Gibello, A., Fernndez-Garayzabal, J.F. y Domnguez,
L.
>a,oratorio Visavet. Facultad de Veterinaria. Universidad !omplutense +adrid. Hospital !l-nico
Veterinario/*lanta &;tano. Avda. *uerta de Hierro &<:. .8040. +adrid. =lte=edor%vet.ucm.es
Las materias primas utilizadas para fabricar piensos compuestos, as como el
producto final acabado (si no es sometido a tratamientos trmicos eficaces
durante la fase de fabricacin), pueden suponer una importante va de
transmisin de bacterias zoonticas en produccin animal. Por esta razn es
necesario establecer medidas eficaces, rpidas y especficas destinadas a la
deteccin de estos patgenos, hecho que evitar su transmisin a travs de
estos alimentos a los animales.
La mayora de las tcnicas actuales han sido diseadas para la deteccin de
&almonella spp. y otras bacterias gram negativas causantes de clsicas
toxiinfecciones alimentarias. Sin embargo, los resultados preliminares
obtenidos en nuestro laboratorio sugieren que otros microorganismos, tales
como >actococcus garvieae, &treptococcus iniae, &treptococcus parau,eris '
Er'sipelot)rix r)usiopat)iae, pueden infectar a los animales a travs de las
materias primas y piensos compuestos con tratamientos trmicos deficientes y
pasar as a la cadena alimentaria y al hombre.
En el presente estudio hemos evaluado la eficacia y sensibilidad de una tcnica
de PCR, para la deteccin de estos cuatro patgenos en harinas de pescado.
Para ello hemos contaminado artificialmente estos productos con diferentes
suspensiones de bacterias en concentraciones seriadas con el objetivo de
establecer el lmite de deteccin y el nivel de sensibilidad de nuestra tcnica.
Las harinas contaminadas (25g) fueron incubadas en 225 ml de un medio de
enriquecimiento especfico y compuesto por Brain Heart nfusin (Difco 37 g/l),
acetato de sodio (Panreac, 1.5 g/l), colistina g/ml y cido nalidxico g/ml.
Las condiciones de incubacin fueron: 30C durante 48 h en agitacin. La
extraccin de ADN se realiz a partir de una alcuota de 100l del caldo
incubado, purificndolo mediante la aplicacin de los ltimos pasos incluidos en
el protocolo del kit "DNA extraction Kit for soil (Qbiogene). Este sistema
tambin permiti la eliminacin de los inhibidores que existen naturalmente en
las harinas de pescado. Finalmente, el ADN fue amplificado mediante una PCR
mltiple especialmente diseada para la deteccin de >. garvieae, &. iniae ' &.
parau,eris (Mata y col. 2004. Appl Environ Microbiol. 70:3183-7) y una PCR
simple para la deteccin de E. r)usiopat)iae BMakino y col. 1994. J Clin
Microbiol. 32:1526-31).
Esta metodologa fue puesta a punto con diferentes cepas procedentes de
distintos orgenes animales y geogrficos, consiguiendo detectar, en el caso de
>.garvieae ' &.parau,eris una sola UFC en 25 gramos de harina de pescado.
Estos resultados sugieren que nuestra tcnica puede ser una herramienta
eficaz para el control de calidad de materias primas en la fabricacin de
piensos compuestos destinados a la nutricin animal.
A - 313
Acti"idad ;id!ol,tica de $ale$ bilia!e$ y &!eci&itacin de cole$te!ol de
bacte!ia$ l#ctica$ y bifidobacte!ia$ con &otencial &!obitico
Gaya P., Gonzlez E.M., Rodrguez R., Rodrguez E. y Medina M.
(pto. 7ecnolog-a de Alimentos, 1:1A, !tra. de >a !oruLa Om , .8040 +adrid mmedina%inia.es
Las sales biliares son sintetizadas en el hgado a partir de colesterol y
secretadas al intestino delgado como conjugados con glicina o taurina. Su
desconjugacin por la actividad enzimtica de bacterias intestinales se ha
relacionado con la reduccin de los niveles de colesterol srico. Nuestro
objetivo ha sido investigar la actividad hidrolasa de sales biliares (BSH) de
bacterias lcticas y bifidobacterias aisladas de heces de lactante y su
capacidad para coprecipitar el colesterol en medio de cultivo con sales biliares.
Se parti de aislados de lactobacilos (11), enterococos (1) y bifidobacterias (14)
y 4 cepas probiticas comerciales. La actividad BSH se determin mediante un
ensayo en placa de agar MRS o RCM con un 0.5% de la sal sdica del cido
taurodesoxiclico (TDC) y 0.37 g/l de CaCl
2
. La cuantificacin de la actividad en
caldo con 5 mM de TDC o GDC (sal sdica del cido glicodesoxiclico) tras 24
h de incubacin en anaerobiosis se realiz por HPLC, analizando el contenido
de la sal biliar correspondiente en el sobrenadante de los cultivos.
La coprecipitacin de colesterol en caldo con y sin sales biliares (TDC o GDC)
se determin mediante un ensayo colorimtrico despus de la extraccin de los
cultivos, con reactivo de OPA y lectura a 550 nm. El colesterol coprecipitado se
calcul como la diferencia entre el colesterol en el sobrenadante del caldo sin
sales biliares despus de la incubacin y el colesterol presente en el
sobrenadante del caldo con las sales biliares.
En los ensayos en placa, nicamente se detect actividad BSH en
Enterococcus #aecalis PRO 289, as como en 11 de los 14 aislados de
6i#ido,acterium. Cuando se investig la actividad BSH en caldo con TDC, tanto
>acto,acillus mucosae PRO 459 como E. #aecalis PRO 289 redujeron
drsticamente el TDC presente. El resto de lactobacilos crecieron en dicho
medio, aunque no hidrolizaron el TDC. Sin embargo, en caldo con GDC,
nicamente crecieron los aislados mencionados, que como en el caso anterior
redujeron el GDC a valores inferiores a 0.1 mM. Todas las bifidobacterias
hidrolizaron las dos sales biliares, con valores residuales entre 1-50% de los
valores iniciales.
Se observ la reduccin de colesterol hasta aproximadamente un 50% en el
medio de cultivo con E. #aecalis PRO 289 y >. mucosae PRO 459 en presencia
de TDC o GDC. Esta disminucin fue del 40-90% para las bifidobacterias en
caldo con TDC y del 80-90% en caldo con GDC.
La capacidad de nuestros aislados de hidrolizar sales biliares y reducir el
colesterol deber investigarse in vivo para determinar su potencial probitico.
A - 322
E$tudio de la ca&acidad antimic!obiana de &el,cula$ obtenida$ a &a!ti! de
:uito$ano
Fernndez, P.
1
, Hernndez-Muoz, P.
1
, Lagaron, J.M.
1
y Ocio, M.J.
1,2
1
1nstituto de AgroIu-mica ' 7ecnolog-a de Alimentos, !&1!, Apartado de correos, 3, 46100
6ur=assot, Valencia.
.
(pto. +edicina *reventiva, Facultad de Farmacia, Universidad de Valencia,
Vicente Andr5s Estell5s, s<n, 46100 6ur=assot, Valencia. E/mail0 a=o%iata.csic.es
El quitosano (poly -(1,4)N-acetil-D-glucosamina) es un poliaminosacrido
biodegradable de origen natural. Entre los diversos atractivos que presenta
dicho polmero se encuentra su carcter antimicrobiano, aunque su mecanismo
de accin no ha sido dilucidado. ste depende en gran media del pH del medio
ya que presenta muy baja solubilidad en agua a pH > 6.5, mientras que a pH
inferiores es soluble en forma de policatin. El quitosano posee excelentes
propiedades filmgenas pudiendo ser procesado en pelculas homogneas y
de gran transparencia. De ah que presente un elevado potencial en el
desarrollo de nuevos sistemas de envasado que controlen el crecimiento
microbiano ya que el nmero de toxiinfecciones alimentarias se ha
incrementado en los ltimos aos.
El objetivo de este estudio fue determinar la concentracin mnima inhibitoria
(CM) y bactericida (CMB) de (1) quitosano suspendido en una solucin
acuosa, (2) acetato de quitosano (1.5 g de quitosano en cido actico al 0.5%),
(3) pelculas de acetato de quitosano obtenidas mediante la tcnica de casting
y (4) pelculas de quitosano obtenidas a partir de la neutralizacin de las
anteriores. Los estudios se realizaron aadiendo cada una de las muestras de
quitosano en tubos que contenan caldo de cultivo Mueller Hinton inoculado con
de 5 x 10
5
UFC/ml de &tap)'lococcus aureus en fase logartmica.
Posteriormente se incubaron los tubos a 37C durante 24h. Tras el perodo de
incubacin se procedi a la siembra en placa y posterior recuento de los
microorganismos.
Los resultados obtenidos mostraron que 0,06g de acetato de quitosano en
forma de solucin redujo la poblacin viable a cero (CMB), mientras que con
esta misma cantidad procesada en forma de pelcula se observ una inhibicin
del crecimiento (CM). No se observ inhibicin del crecimiento microbiano en
las pelculas de quitosano neutralizadas ni cuando el quitosano fue suspendido
en agua.
Estos resultados sugieren que el quitosano ejerce su mxima capacidad
antimicrobiana cuando se encuentra en forma de policatin en solucin acuosa.
+icro,iolog-a de Alimentos
A - 330
In;ibition of Listeria monocytogenes and Staphylococcus aureus by
acidic ;eat=!e$i$tant bacte!iocin$ &!oduced by lactic acid bacte!ia i$olated
f!om tu!bot 5Psetta maxima7
Campos C.A.
1
, Rodrguez .
2
, Calo-Mata P.
2,3
, Prado M.
2
, Poza M.
3
, Villa T.G.
3
,
and Barros-Velzquez J.
2,3*
.
1
(epartment o# 1ndustries, &c)ool o# Exact and :atural &ciences, Universit' o# 6uenos Aires,
!iudad Universitaria B14.8C 6uenos Aires, ArgentinaF
.
(epartment o# Anal'tical !)emistr', :utrition
and Food &cience, >H1!A, &c)ool o# Veterinar' &ciences, Universit' o# &antiago de !ompostela,
E/.00. >ugo, &painF and
3
!ollege o# 6iotec)nolog', 1nstitute o# AIuaculture, Universit' o#
&antiago de !ompostela, E/138. &antiago, &pain. E/mail0 =,arros%lugo.usc.es
The characterisation of new strains of lactic acid bacteria (LAB) from farmed
fish and with potential application as biopreservatives against both >isteria
monoc'togenes and &tap)'lococcus aureus.

Twenty-five strains of LAB isolated from the muscle of farmed turbot were
investigated. Genetic identification of the bacteriocin-producing LAB strains was
performed by means of a new PCR method using novel BAL1/BAL2 and
BAL5/BAL6 16S-rRNA-targeted primers. Maximum bacteriocin production by
>actococcus lactis ssp. lactis USC-39, Enterococcus #aecium USC-46 and
Enterococcus mundtii USC-51 was detected in the stationary phase of growth.
Both acidification and the production of hydrogen peroxide by LAB were ruled
out as source of the inhibition. n contrast, the antimicrobial activity of all three
LAB strains was inactivated by the addition of proteinase K, this confirming the
proteinaceous nature of the inhibition. The activity against >. monoc'togenes
was maintained in the 3.5-5.5 or 3.5-6.5 pH range, depending on the LAB
strain. Likewise, inhibition of &. aureus strains was observed in the 3.5-4.5 and
in the 3.5-5.5 pH ranges, depending on the LAB strain and on the &. aureus
strain tested. Bacteriocin activity was stable in all three strains after heating the
cell-free extract for 60 min at 100C, or even for 15 min at 121C, in all the three
LAB strains, and after extended refrigerated storage for 21 days at 4C.

The acidic and heat-resistant bacteriocins produced by the three LAB strains
isolated from turbot, able to inhibit the growth of both >. monoc'togenes and &.
aureus to our knowledge a not widely reported feature may find application
as biopreservatives in fermented and/or heated food products.
A - 331
E"aluation of t;e effect$ of a no"el o)oni$ed=$lu!!y ice combined $y$tem
on t;e mic!obial :uality of comme!cial fi$; $&ecie$
Campos C.A.
a,b
, Rodrguez .
a
, Losada V.
c
, Aubourg S.P.
c
, Veiga P.
a
, and
Barros-Velzquez J.
a,K
.
a
(epartment o# Anal'tical !)emistr', :utrition and Food &cience, &c)ool o# Veterinar' &ciences,
Universit' o# &antiago de !ompostela, E/.00. >ugo, &painF
,
(epartment o# 1ndustries, &c)ool o#
Exact and :atural &ciences, Universit' o# 6uenos Aires, !iudad Universitaria B14.8C 6uenos Aires,
ArgentinaF and
c
(epartment o# &ea#ood !)emistr', 1nstitute #or +arine ?esearc) B11+/!&1!C, !<
Eduardo !a,ello 6, E/36.08 Vigo, &pain. E/mail0 =,arros%lugo.usc.es
A novel ozonised-slurry ice system was developed and evaluated with respect
to both slurry ice and traditional flake ice, as a new refrigeration system for the
storage of three different commercial fish species.

The composition of the slurry ice binary mixture was 40% ice and 60% water,
prepared from filtered seawater. The concentration of ozone in the flow ice
mixture was 0.17 mg/l. Sensory assessment of the fish included the
examination of skin, external odor, gills, consistency and flesh odor.
Microbiological analyses included the investigation of both surface and muscle
microorganisms, the following microbial groups being considered: total aerobes,
psychrotrophic bacteria, anaerobes, coliforms, lipolytic bacteria, proteolytic
bacteria, H
2
S-producing bacteria and histamine-producing bacteria.
Complementary analyses included the investigation of pH, TMA-N and TVB-N.
Statistical analyses were considered at the p<0.05 level.

According to sensory analyses, the fish specimens stored in ozonised slurry ice
exhibited an extended shelf life as compared with counterpart batches stored in
slurry ice or flake ice. Storage in ozonised slurry ice led to significantly (p<0.05)
lower counts of aerobic mesophiles, psychrotrophic bacteria, anaerobes,
coliforms, and both lipolytic and proteolytic microorganisms in muscle, and of
surface counts of mesophiles and psychrotrophic bacteria in skin, as compared
with the slurry ice and the flake ice batches. The combination of slurry ice with
ozone also allowed a better control of pH and TMA-N formation as compared
with slurry ice alone or flake ice, thus indicating a reduction in the microbial
activity in such batch.

This work demonstrates that the combined use of slurry ice and ozone for the
storage of different fish species is recommended in the seafood industry, to
slow down microbial growth thus improving the quality and shelf life of seafood
products.
A - 333
Efecto de la utili)acin de un con$e!"ante #cido en madalena$
$ometida$ a dife!ente$ condicione$ de almacenamiento
De la Rosa P.
1
, Crdoba M G.
2
, Martn A.
2
, Medina L.M.
1
y Jordano R.
1
1
(epartamento de 6romatolog-a ' 7ecnolog-a de los Alimentos B4rupo +icro,iolog-a de los
AlimentosC, Universidad de !;rdo,a, !ampus de ?a,anales, 1401 !;rdo,a
.
(epartamento de
Sootecnia BNrea de :utrici;n ' 6romatolog-aC, Escuela de 1ngenier-as Agrarias, Universidad de
Extremadura, !tra. !"ceres s<n, 0601 6ada=o$. E/mail0 al1mecal%uco.es
Los productos de pastelera y repostera, de baja a
w
y elevada concentracin de
azcar, se podran considerar estables desde el punto de vista microbiano.
Adems son sometidos a un tratamiento trmico de temperatura y tiempo, que
garantiza la eliminacin de la prctica totalidad de la biota microbiana
inicialmente presente. Sin embargo, una contaminacin post-coccin e
inadecuadas condiciones de almacenamiento pueden acortar la vida til o
comercial de dichos productos.

El objetivo de este trabajo ha sido el ensayo, en planta piloto, de la utilizacin
de un conservante cido, adicionado a magdalenas almacenadas a diferentes
condiciones de temperatura y humedad relativa (RH).

Se han estudiado 240 muestras, agrupadas en cuatro lotes (uno control),
elaboradas segn su procedimiento industrial, a las cuales se les adicionaron
distintas concentraciones del conservante problema (10g/kg, 14g/kg y 18g/kg),
desarrollado a base de cido lctico y propilenglicol, fundamentalmente. Cada
lote fue sometido a tres condiciones de temperatura y RH diferentes: A,
15C/51% RH; B, 30C/70% RH y C, 15C/80% RH. Las muestras fueron
controladas inicialmente y tras 15, 30, 45, 60, 75, 90, 105 y 120 das de
almacenamiento.

Los resultados de los recuentos de bacterias aerobias mesfilas,
Enterobacteriaceae, Enterococcus spp., &tap)'lococcus spp., !lostridium spp.,
bacterias acidolcticas y levaduras fueron, en todos los casos, inferiores a 1 log
ufc/g. Los recuentos de mohos estuvieron comprendidos, segn lotes y
condiciones, entre <1 y 6'40 log ufc/g, detectndose la presencia de los
gneros *enicillium, Aspergillus, Eurotium y Vallemia, en dos casos
potencialmente micotoxignicos.

El conservante problema, adicionado a razn de 18g/kg produjo el mayor
efecto conservante, prolongando la vida til de las magdalenas durante ms de
cuatro meses, mostrndose tambin efectivo a otras concentraciones,
especialmente a 15C y a 80C y 51% de RH. En cualquier caso, el uso del
conservante mostr mayor influencia sobre el control de la biota fngica que las
distintas condiciones de almacenamiento ensayadas.
A - 339
Ente!ococo$ en :ue$o$ e$&a6ole$8 &!e$encia de ente!ococo$ !e$i$tente$
a "ancomicina
rigoyen, A., Ortigosa, M., Villacastn, E., Urdn, M., Garca, S. y Torre, P.
Nrea de :utrici;n ' 6romatolog-a. Universidad *R,lica de :avarra. !ampus Arrosad-a s<n. 31006
*amplona. e/mail0 aurora.irigo'en%unavarra.es
El gnero Enterococcus, es un grupo heterogneo de bacterias gram (+),
perteneciente al grupo de las bacterias lcticas. Son microorganismos ubicuos,
su hbitat predominante es el tracto gastrointestinal de humanos y animales
pero debido a su capacidad de crecer en presencia de temperaturas y
concentraciones de sal elevadas, los enterococos aparecen en vegetales y en
alimentos, especialmente en aquellos de origen animal como los quesos
(Giraffa et al., 1997).
Desde finales de los ochenta, los enterococos resistentes a los antibiticos han
emergido como una importante causa de infecciones nosocomiales,
convirtiendose en una desafiante amenaza en la medicina humana (Morrison et
al., 1997). Una de las razones del incremento de enterococos resistentes a los
antibiticos, ha sido el uso de antibiticos como promotores del crecimiento en
la alimentacin animal, ya que la mayora de estos pertenecen a la gama de
antibiticos de uso humano. As, se indic una asociacin entre el uso de
avoparcina y el predominio de enterococos resistentes a la vancomicina (ERV),
un glicopptido que es usado en los humanos como antibitico con amplio
espectro de actividad antimicrobiana (Bates et al., 1994). La resistencia a los
glicopptidos en el gnero Enterococcus ocasiona la prdida de una importante
alternativa terapetica en un gnero que presenta resistencia intrnseca a
muchos antibiticos y que muestra una gran capacidad para adquirir nuevas
resistencias.
El objetivo general de este trabajo ha sido identificar las distintas especies de
enterococos y evaluar el riesgo real de la presencia de enterococos ERV en
quesos comerciales espaoles.
Se han recogido 30 quesos comerciales espaoles de diferentes regiones del
pas, 10 de cada tipo de leche (oveja, cabra y vaca), 5 de los cuales eran
elaborados con leche cruda y 5 con leche pasterizada.
Como metodologa se utilizaron distintas tcnicas moleculares (REP-PCR y
PCR mltiple).
Las especies de enterococcus identificadas fueron, en orden de importancia: E.
#aecium, E. #aecalis, E. durans, E. )irae y E. pseudoavium. La mayor
variabilidad de especies de enterococos se encontraron en los quesos de cabra
y vaca elaborados con leche cruda, sin embargo esto no ocurri en los quesos
elaborados con leche de oveja.
nicamente en un queso elaborado con leche de cabra pasteurizada se
aislaron tres cepas de Enterococcus resistentes a vancomicina.
Como conclusin principal, los quesos espaoles no contribuyen de manera
significativa a la difusin en la cadena alimentaria de enterococos resistentes a
la vancomicina.
Este proyecto ha sido financiado por el Departamento de Educacin y Cultura
del Gobierno de Navarra.
Bates, J.; Jordens, J.Z.; Griffiths, D.T. 1994. J. Antimicrobiol. Chemother, 34, 507-514.
Giraffa, G., Sisto, F. 1997. Lett. Appl. Microbiol. 25, 335-338.
Morrison, D.; Woodford, N.; Cooksin, B. 1997. J. Appl. Microbiol. Symposium
Supplement, 83, 89S-99S.
A - 343
Deteccin de Salmonella spp &o! el $i$tema de +CR A=BA< en &!oducto$
alimenticio$%
Bances Gonzlez, M., Lobato Alvarez, M.J., Gutirrez Fernndez, F. y
Gonzlez Hevia M.A.
>a,oratorio de &alud *R,lica del *rincipado de Asturias. !amino de ?u,-n s<n. 33011 Dviedo.
Asturias. marga,g%princast.es.
Los mtodos convencionales de deteccin e identificacin de patgenos en
alimentos requieren un mnimo de 4 5 das en su ejecucin. El sistema A-
BAX desarrollado por DuPont-Qualicon est basado en la amplificacin en
cadena de la polimerasa (PCR) y acorta su deteccin a 24-48 horas. El objeto
de este estudio es evaluar la eficiencia de este sistema en un programa de
Salud Pblica para la investigacin de &almonella spp. en diversos productos
alimenticios.
Durante los aos 2004 y 2005 se han analizado en el Laboratorio de Salud
Pblica del Principado de Asturias 263 muestras de alimentos por el sistema A-
BAX (198 en 2004 y 65 en 2005). Con el fin de evaluar la eficiencia del sistema
para utilizarlo como mtodo de cribado, en el ao 2004 se procesaron 46
muestras de alimentos (23 crudos y 23 elaborados) en paralelo con el equipo
A-BAX y con tcnicas de cultivo, basadas en la Norma SO.6579:1993
modificada.
El protocolo de trabajo con el sistema A-BAX, se resume en los siguientes
pasos: Enriquecimiento selectivo de acuerdo a las tcnicas del Laboratorio (18
horas), enriquecimiento secundario en BH (3 horas), extraccin con una
proteasa (30 minutos), amplificacin y deteccin en el equipo (3 horas y media)
y por ltimo visualizacin de los resultados en la pantalla. Todos los reactivos
utilizados en la realizacin de la PCR (iniciadores, enzima y
desoxiribonucleotidos) estn incluidos en una tableta liofilizada. La tableta
tambin incluye un control interno de amplificacin y un colorante fluorescente
que se une al ADN problema emitiendo una seal en respuesta a la luz,
detectada por el equipo A-BAX. Durante la fase de deteccin se eleva la
temperatura de las muestras hasta la desnaturalizacin disminuyendo la
fluorescencia emitida. Este cambio en la seal se puede representar frente a la
temperatura y generar unas curvas de fusin nicas y caractersticas de cada
microorganismo que son interpretadas por el software del A-BAX.
El equipo A-BAX emite los resultados como positivo/negativo. En este estudio
los resultados positivos fueron confirmados a partir del caldo BH para ser
considerados como verdaderos positivos. De las 46 muestras analizadas con
los dos mtodos, 23 fueron positivas y 22 negativas con ambos, solo una tuvo
un resultado con discrepancias. El sistema A-BAX mostr un 100% de
sensibilidad con respecto al mtodo clsico, un 95,7% de especificidad, 4,2%
de falsos positivos, 0% de falsos negativos y una eficiencia global del 97,8%.
A la vista de estos resultados, consideramos el sistema A-BAX (DuPont-
Qualicon) vlido para el screening de &almonella en alimentos por su alta
sensibilidad, con el valor aadido de utilizar una tecnologa moderna, su
rapidez (25 horas) y no necesitar el usuario conocimientos de Biologa
Molecular por su sencillez en el manejo y ser un equipo cerrado a cualquier
influencia externa.
A - 344
Deteccin de Listeria monocytogenes en ca!ne de &ollo mediante +CR a
tiem&o !eal8 com&a!acin de mue$t!a$ a!tificiale$ y natu!ale$
Navas Fernndez J., Monks Jantzen M., Ortiz Jareo S., Lpez Abarquero P. y
Martnez Surez J.V.
7ecnolog-a de Alimentos, 1:1A, !tra. de >a !oruLa Om T3, .8010 +adrid. !orrespondencia0
=aimen#%inia.es
El objetivo de este trabajo fue disear un mtodo sencillo, rpido y barato de
PCR para detectar de forma especfica y cuantitativa el patgeno alimentario
>isteria monoc'togenes en carne cruda de pollo.
El mtodo se basa en la concentracin de las clulas bacterianas por
centrifugacin, la purificacin del DNA con la resina Chelex-100 y su
amplificacin mediante PCR a tiempo real, utilizando como diana el gen inlA
exclusivo de >. monoc'togenes e implicado en su virulencia. Los productos de
PCR se detectan con SYBR Green en un equipo Mx3000P.
Muestras artificiales
nicialmente, se comprob que con cultivos puros la respuesta del ensayo era
lineal para 5 unidades logartmicas. En carne cruda y picada de pollo, obtenida
comercialmente y contaminada artificialmente con diluciones decimales de un
cultivo del patgeno, el mtodo reproduca la misma respuesta, desde 10
2
a 10
6
UFC de >. monoc'togenes por g de carne. Antes del enriquecimiento, por
tanto, el lmite de deteccin era 10
2
UFC/g y el de cuantificacin 10
3
UFC/g. El
tiempo necesario para llevar a cabo el ensayo fue inferior a 6 h. Tras 24 h de
enriquecimiento el ensayo permita detectar menos de 1 UFC de >.
monoc'togenes por g de carne, y el tiempo total necesario para completar el
ensayo fue inferior a 30 h.
Muestras naturales
Con muestras de carne cruda y picada de pollo obtenida comercialmente y
contaminada de forma natural con >. monoc'togenes, se comprob que el
grado de contaminacin era bajo (menos de 10 NMP/g) y que se precisaba un
enriquecimiento de 24 h en medio selectivo para obtener un resultado positivo
por PCR. El resultado negativo de la PCR de algunas muestras con cultivo
positivo no se deba, aparentemente, a la presencia de inhibidores sino al
abundante crecimiento de flora bacteriana en el enriquecimiento selectivo: si
los niveles de >. monoc'togenes tras 24 h no superaban 10
4
UFC/mL (debido a
la flora bacteriana de la carne, includas otras especies de >isteria), el resultado
poda ser negativo.
A pesar del resultado favorable obtenido con las muestras artificiales, los
niveles de la contaminacin natural estaban por debajo del lmite de deteccin
por PCR y se necesit siempre realizar un enriquecimiento.
Trabajo financiado por los proyectos RTA02-034 y PTR1995-0789-OP, y becas
del NA (JNF) y del CNPq de Brasil (MMJ).
A - 352
Identificacin molecula! de ce&a$ de !spergillus &!oducto!a$ de
Oc!ato-ina A en "ino%
Martnez -Culebras P.V., Desco N. y Ramn D.
(epartamento +edicina *reventiva, Universidad de Valencia, !ampus de 6ur=asot, 46100,
Valencia. pmartine$%iata.csic.es
La ocratoxina A (OTA) es una micotoxina que preocupa cada vez ms a los
responsables de salud pblica. Recientemente se han detectado grandes
concentraciones de OTA en productos derivados de la uva como el vino, zumo
de uva y las uvas pasas, lo que ha motivado que la Comisin Europea (ver
Reglamento CE N 123/2005) haya establecido un mximo tolerable de OTA de
2 ppb, tanto en vino como en otros productos derivados de la uva. La
prevencin de la contaminacin de las uvas en el campo por los hongos
productores se considera la medida ms eficaz para reducir el nivel de OTA en
el vino. Para ello es necesario llevar a cabo estudios de identificacin y control
de la micoflora contaminante,
Los ltimos estudios demuestran que las especies de Aspergillus de la seccin
:igri (Aspergillus negros) son la principal fuente de contaminacin del vino por
OTA. La taxonoma de este grupo de hongos, basada fundamentalmente en
criterios morfolgicos, es una de las ms complejas del gnero. La mayora de
las especies incluidas en este grupo son morfolgicamente indistinguibles, por
lo que es difcil conocer su distribucin e incidencia en la naturaleza. Este
trabajo tiene por objetivo generar un protocolo complementario a la morfologa,
y que permita diferenciar entre las especies de Aspergillus negros que
aparecen con mayor frecuencia en las uvas. Se analizaron un total de 150
cepas de Aspergillus de la seccin :igri aisladas de 9 variedades de uva en los
momentos previos a la vendimia, procedentes de 22 parcelas localizadas en las
provincias de Valencia y Alicante, y que representan a tres denominaciones de
origen (Valencia, Alicante y Utiel-Requena). La identificacin se llev a cabo
mediante anlisis de restriccin de un fragmento de DNA ribosomal9 que
incluye las dos regiones intergnicas TS1 e TS 2 y el gen que codifica para el
RNA 5.8 S (TS-5.8S), utilizando tres enzimas de restriccin. Los resultados
indicaron que es posible la discriminacin de cinco patrones moleculares que
se corresponden con especies de Aspergillus de la seccin :igri. El 61,2 % de
las identificaciones correspondieron con A. n-ger, el 15,5 % con A. car,onarius,
el 11,3 % con A. tu,igensis, el 12 % con una variante de A. tu,igensis y el 1,5
% con A. aculeatus. Es de destacar la alta incidencia encontrada para la
especie A. car,onarius, mayor responsable de la presencia de OTA en vino
segn los ltimos estudios. La tcnica molecular desarrollada en este trabajo
es una herramienta alternativa a la taxonoma morfolgica en este grupo de
hongos de difcil identificacin. El poder de discriminacin de esta tcnica junto
con la rapidez en su empleo, permitira analizar un gran nmero de muestras y
llevar a cabo estudios de distribucin en la naturaleza de las principales
especies ocratoxignicas de Aspergillus asociadas al vino.
A - 353
A&licacin de !ede$ neu!onale$ a!tificiale$ a la identificacin de
'ampylobacter coli y '. +e+uni mediante e$&ect!o$co&,a de inf!a!!o*o$ con
t!an$fo!mada de >ou!ie!
Mouwen, D.J.M.; Capita, R.; Alonso-Calleja, C.; Prieto-Gmez, J.; Prieto, M.
(pto. de Higiene ' 7ecnolog-a de los Alimentos. Universidad de >e;n, .401 >e;n, EspaLa. 7el0
98.91.83. Fax0 98.91.84. email0 d)tmpm%unileon.es
El espectro infrarrojo medio de clulas microbianas intactas obtenido mediante
espectroscopa de infrarrojos con transformada de Fourier (FT-R) tiene
caractersticas de "huella dactilar altamente especfica y puede usarse para la
identificacin microbiana ya que comprende informacin de todas sus
molculas, incluyendo cidos grasos, protenas, azcares y cidos nucleicos
(Mouwen et al., 2005). El espectro est compuesto de bandas de absorcin
complejas y solapadas, y recoge la vibracin y rotacin de ciertos enlaces
qumicos al ser excitados por radiacin R. Para su estudio se usan mtodos de
reconocimiento de patrones como redes neuronales artificiales (RNA). Las RNA
simulan la estructura y el comportamiento de las redes neuronales biolgicas,
componindose de un n elevado de neuronas (unidades de procesado),
dispuestas en capas y conectadas mediante sinapsis que almacenan
informacin aprendida. Las neuronas de la capa de entrada reciben los datos
experimentales (inputs), mientras que las neuronas de las capas oculta(s) y de
salida procesan la informacin.
Para comprobar la capacidad de identificacin de las RNA, se obtuvo el
espectro R de un grupo de cepas mediante un espectroscopio Perkin-Elmer
System 2000 FTR, en el rango 4000-500 cm
-1
, promediando 20 scans y con
resolucin 1 cm
-1
. Se analizaron 149 patrones de las especies !. coli y !.
=e=uni, tipificadas mediante ERC-PCR en 6 subtipos diferentes, y 6 espectros
de los gneros >acto,acillus y Veissella, para la deteccin de patrones
atpicos. Previamente a su anlisis por las RNA, los espectros R se procesaron
(normalizacin, alisado, 1 derivada). Se compararon dos ventanas espectrales
del espectro R medio (w4 y w5, de 300 y 200 puntos). Los patrones se
dividieron en tres grupos (aprendizaje, verificacin y test). Los datos
transformados se presentaron como modelos de reconocimiento para dos tipos
de RNA supervisadas (Probabilistic, Multilayer Perceptron). Se emple el
programa Statistica Neural Networks, v. 4.0. para elaborar los prototipos de
RNA. La capa de entrada const de 200 300 puntos segn la ventana
empleada y la de salida de 2 6, segn si se realizaba identificacin a nivel de
especie o subespecie.
La ventana w4 fue superior en capacidad de identificacin. El porcentaje de
identificacin a nivel de especie fue del 100% independientemente de la RNA
empleada. Para las identificaciones a nivel de subespecie, los porcentajes
superaron siempre el 90% en el grupo de verificacin y test, siendo del 100%
para el grupo de aprendizaje. Las RNAs se mostraron asimismo totalmente
efectivas en la deteccin de patrones no pertenecientes a !. =e=uni o !. coli.
Mouwen, D.J.M. et al. 2005. Discrimination of !amp'lo,acter coli and !. =e=uni
ERC-PCR types by Fourier-transform infrared (FT-R) spectroscopy. Appl.
Environ. Microbiol. (in press).
A - 354
E$tudio mo!folico y ult!ae$t!uctu!al de la acti"idad antif(nica en
;ono$ filamento$o$ &o! metabolito$ e-c!etado$ &o! %acillus $&&%
$il"e$t!e$
Lpez Prez, J.P.*, Almela Ruiz L.** y Torrella Mateu F.*
(epto. 4en. ' +icro,iolog-aM ' (epto. Gu-mica Agr-colaMM. Universidad de +urcia. 30100
Espinardo/+urcia. torrella%um.es
En el estudio de la microbiota acompaante de mohos micotoxignicos en el
pimentn (vase Lpez Prez, J.P. et al. en este mismo congreso) se aislaron
diversas bacterias inhibidoras del crecimiento fngico, seleccionndose la cepa
BAC-32 para un estudio ms detallado de la morfologa y ultraestructura del
proceso inhibidor. Bac-32 es un bacilo grampositivo, aerobio, endosporulado,
productor de uno o ms inhibidores del crecimiento de mohos ocratoxignicos
(Aspergillus oc)raceus, A. niger ' A. car,onariusC y hongos parsitos
(Alternaria spp).
Con microscopa ptica, las hifas en crecimiento que contactan con las
sustancias inhibidoras secretadas por el bacilo desarrollan clulas globosas
(GoC) de hasta 20 mm de dimetro, muy vacuolizadas y con abundantes
inclusiones de glucgeno, todo ello indicio de la descompensacin metablica
pero no de la inhibicin total de la biosntesis celular. Las GoC se observan
tanto en Aspergillus como en Alternaria sujetos a la accin del o los inhibidores.
Otras clulas hifales de la zona del micelio afectada adoptan formas
elipsoidales de diferentes tamaos, muy vacuolizadas. Las clulas globulares
terminan lisndose a los tres das de cultivo a 30C, perdiendo entonces su
contenido citoplasmtico.
La ultraestructura de las clulas GoC muestra un citoplasma poco
electronodenso, con el retculo endoplasmtico y mitocondrias desorganizados
o ausentes. Gran cantidad de vesculas y fragmentos de membrana se
observan en el citoplasma. El contenido ribosomal es muy escaso, tanto ms,
cuanto mayor es el tamao de las GoC. Grandes inclusiones de glucgeno
ocupan el citoplasma celular. El grosor de la pared de las GoC se mantiene
hasta la fase final de "gran clula, previa a la lisis, y presenta gran cantidad de
materiales polimricos exoparietales en el inmediato entorno celular. Este
material tiene alta afinidad para con el acetato de uranilo y el citrato de plomo.
Algunos fantasmas celulares, restos de las GoC, son atravesados por hifas
jvenes de nuevo crecimiento. Las imgenes morfolgicas y ultraestructurales
se discutirn en el contexto de la caracterizacin del o los compuestos
antifngicos producidos por Bac-32.
Agradecimientos: Servicio de Microscopa Electrnica, Universidad de Murcia y
proyecto NA CAL01-026.
A - 355
Ca!acte!i)acin de metabolito$ antif(nico$ in;ibido!e$ de mo;o$
&!oducto!e$ de micoto-ina$
(epto. 4en. ' +icro,iolog-aM ' (epto. Gu-mica Agr-colaMM, Universidad de +urcia, 30100 +urcia.
torrella%um.es
La caracterizacin de la microbiota bacteriana asociada a hongos
ocratoxignicos en uva y pimentn, revel la presencia de bacterias inhibidoras
del crecimiento fngico. 10 de entre 60 estirpes de procariotas probadas,
demostraron actividad antagnica respecto de hongos filamentosos. La cepa
Bac-32, un bacilo grampositivo aerobio endosporulado del gnero 6acillus fue
seleccionado para posterior estudio. En esta comunicacin se presentan los
resultados de la caracterizacin preliminar de un compuesto o compuestos
activos frente a diversas especies de Aspergillus BA. niger, A. oc)raceus, A.
car,onariusC sintetizados por Bac-32.
La produccin del antifngico por Bac-32 depende en gran medida del medio
de cultivo y la fase de crecimiento: determinados medios pobres en nutrientes
as como los ensayos realizados con material procedente de cultivos en fase
final del crecimiento exponencial mostraron mayor actividad antifngica.
Aunque Bac-32 produce varios compuestos antimicrobianos, incluyendo uno o
ms antibacterianos, mediante la tcnica de Leifert et al. (1995) en placas de
TLC, se pudo localizar y revelar la presencia de un compuesto con actividad
antagnica especfica frente a los Aspergillus bajo estudio y purificarla. La
caracterizacin preliminar de la sustancia apunta a un compuesto polipeptdico
unido a un polipptido de pm> 9500 dalton, capaz de difundir en geles de agar,
precipitable con sulfato amnico al 40%, resistente al tratamiento trmico
(100C, 20 min) y pH extremo (pH=2,5 y pH=10,5 30 min a T amb), resistente
a pronasa E y con marcados picos de absorcin a 280 y 210 nm.
Esta sustancia no muestra una actividad antifngica generalizada ya que no
inhibe el crecimiento de algunas cepas de *enicillium ni de !andida probadas,
y presenta una dbil actividad frente a &acc)arom'ces. Por el contrario, de
siete estirpes de Aspergillus probadas slo una cepa de A. #umigatus fue
resistente a la sustancia.

Referencias:
Leifert, C., H. Li, S. Chidburee, S. Hampson, S. Workman, D. Sigee, H.A.
Epton, A. Harbour. 1995. Anti,iotic production and ,iocontrol activit' ,' 6acillus
su,tilis !>. and 6acillus pumilus !>43. J Appl Bacteriol.78:97-108.

Agradecimientos:
Proyecto NA CAL01-026.
A - 357
Lactobacilli a$ &!obiotic bacte!ia
Nowroozi J. (Ph.D.), Mehdi Mirzaii, Kargar M. (Ph.D.), Razeghi R. (MSc).
2[:oAroo$i%)otmail.com
Int!oduction: Lactobacilli are the most frequent bacteria in human's
gastrointestinal tract normal microflora and is found in sausage, dairy products
and feces. The aim of this study was to isolate lactobacilli from sausage, dairy
products and feces of children whose age were between 6 to 24 months and
determine their inhibitory effect on enteric pathogens (E. coli, &almonella,
&)igella).
Met;od$8 Different samples of sausage, dairy products and infant feces were
collected and cultured on MRS medium. Lactobacilli were isolated and identified
by standard methods (morphology, microscopic shape, fermentation of
carbohydrates and biochemical tests). The growth of isolated bacteria at
different temperature, pH and the inhibitory effect by spot on the lawn, blank
disk and well diffusion on enteric pathogens (E. coli, &almonella, &)igella),
resistance to common antibiotics and bile of isolated bacteria were examined.
Re$ult$8 From 150 samples, the isolated bacteria were >acto. #ermentum,
>acto. plantarum, >acto. r)amnosus, >acto. gasseri, >acto. reuteri, >acto.
crispatus, >acto. acidop)ilus.The inhibitory effect of substances from isolated
lactobacilli from infant feces with breast fed children were more stable than
the other isolated from sausage and dairy products at low pH, high temperature,
different concentration of bile salts
Di$cu$$ion8 Because of inhibitory effect, probiotic lactobacilli or their purified
bacteriocin can use as biological preservative in sausage fermentation, dairy
products. Our results showed that the number of lactobacilli in the feces of
breast fed children was predominant. t might be substances in breast milk that
help the better growth of lactobacilli and by producing more inhibitory
substances can change the entric pH that inhibit the growth and prevent the
incidence of disease such as diarrhea. So, breast fed is recommended, and
they might be considered as probiotic bacteria.

Key words: Lactobacillus, Sausage, dairy products, nfant feces, Probiotics
A - 361
+!obitico$ y enfe!medad inflamato!ia inte$tinal8 monito!i)acin
molecula! de $u im&acto en el t!acto a$t!ointe$tinal de !atone$%
1,2
Fuentes, S. ,
1
Bujalance, C.,
2
Smidt, H.,
1
Ruiz-Bravo, A.,
1
Monteoliva-Snchez,
M. y
1
Ramos-Cormenzana, A.
1
(epartamento de +icro,iolog-a, Facultad de Farmacia, Universidad de 4ranada, EspaLa.
.
>a,orator' o# +icro,iolog', Vageningen Universit', 7)e :et)erlands.
Son muchas las propiedades que se le atribuyen a los microorganismos
probiticos, entre las que destacan aquellas asociadas con el sistema
gastrointestinal a travs de su interaccin con la microbiota del hospedador.
Una de las aplicaciones que actualmente presenta mayor inters es su uso en
la enfermedad inflamatoria intestinal o BD ("inflammatory bowel disease),
afeccin crnica que causa inflamacin en el tubo o las paredes del tracto
gastrointestinal, pudiendo provocar lceras, dolor abdominal y diarrea entre
otros sntomas. Los tipos ms comunes de BD son la colitis ulcerosa y la
enfermedad de Crohn.
El objetivo de este estudio es el anlisis del efecto probitico de una cepa de
>acto,acillus plantarum aislada de productos lcteos comerciales, en un
modelo murino de BD. Se dividieron de manera aleatoria hembras de ratones
BALB/c de 8-10 semanas de edad en dos grupos, uno de los cuales recibi una
dosis diaria durante 10 das de 10
9
UFC de >acto,acillus plantarum mediante
sonda intraesofgica. El da 9 estos grupos se dividieron a su vez en dos, y a
uno se le administr por va rectal una dosis 3mg del agente qumico TNBS
(cido trinitrobenceno sulfnico) el cual provoca un efecto inflamatorio similar al
estado agudo en la enfermedad de Crohn. Se analiz tanto la capacidad de
colonizacin de la cepa probitica administrada como el efecto sobre la
composicin de la microbiota endgena del sistema gastrointestinal de ratones,
con especial inters en la comunidad de lactobacilos, mediante el anlisis del
gen rRNA 16S por electroforesis en gel con gradiente desnaturalizante de DNA
(DGGE). Para ello se tomaron muestras fecales los das 0, 8 y 10 as como
biopsias del tracto gastrointestinal completo el ltimo da del tratamiento. Para
la determinacin del proceso inflamatorio se procedi tanto a la observacin
macroscpica como a la cuantificacin de citoquinas inflamatorias mediante
RT-PCR cuantitativa del mRNA aislado de colon.
Mediante el anlisis por DGGE se observ una gran excrecin de la cepa
probitica en heces en aquellos animales que recibieron la dosis de agente
inflamatorio, no siendo as en los que no la recibieron, pudiendo esto indicar la
influencia del proceso inflamatorio en la capacidad de colonizacin o
multiplicacin de la cepa probitica. Si bien el perfil de lactobacilos es muy
estable a lo largo del tubo digestivo, en aquellos animales con el proceso de
inflamacin se observ una gran reduccin en la abundancia de cepas de la
microbiota normal, as como una extensa colonizacin de la cepa probitica,
colonizacin no observada en animales en condiciones normales.
Mediante la cuantificacin de las citoquinas L-1B, L-6 y TNF-a se determin el
proceso agudo de inflamacin, observando cierta disminucin en los nmeros
de L-6 en aquellos animales que recibieron la cepa probitica.
A - 371
Identificacin de bacte!ia$ en "ino mediante T=R>L+%
Rodrguez, M.
1
, Andrade, M.J.
1
, Snchez, B.
1
, Mena, O.
1
y Mills, D.A.
2
1
Higiene de los Alimentos. Facultad de Veterinaria. Aptdo. de !orreos 643. 1001/!"ceres.
.
Viticulture and Enolog'. Universit' o# !ali#ornia, (avis. E/mail0 marrodri%unex.es.
Las bacterias cido lcticas y las bacterias acticas pueden formar parte de la
microbiota natural de los procesos de fabricacin del vino. Estas bacterias
transforman una gran variedad de compuestos orgnicos presentes en el
mosto y en el vino originando productos que afectan a las caractersticas
organolpticas finales del vino. El desarrollo de estos microorganismos, por
tanto, puede tener efectos beneficiosos (fermentacin malolctica) o
perjudiciales (picado lctico y actico, enturbiamiento, olores anmalos, etc.)
dependiendo de las especies y de la etapa de la vinificacin en que se
desarrollen. Por tanto es fundamental disponer de mtodos rpidos que
permitan identificar las bacterias lcticas y acticas presentes durante la
produccin del vino para mantener el control de la calidad microbiolgica.
El T-RFLP (terminal restriction fragment length polymorphism) es un mtodo
que combina las tcnicas de PCR y RFLP para identificar de forma fiable y
rpida las diferentes especies de microorganismos presentes en una
comunidad bacteriana. En este trabajo se ha optimizado una tcnica de T-
RFLP para detectar las principales bacterias que pueden encontrarse a lo largo
de la fermentacin del vino.
Se utilizaron 25 cepas de las especies ms frecuentemente encontradas en
vinos, pertenecientes a los gneros >actoco,acillus, Denococcus,
>euconostoc, *ediococcus, Aceto,acter, 4lucono,acter y 4luconoaceto,acter.
Se desarroll una PCR utilizando los cebadores 6-FAM-63F (marcado en el
extremo 5' con 6-carboxyfluorescena) y WBAC2. Estos fragmentos
amplificados fueron digeridos por separado con los enzimas de restriccin, Hae
, 6sr , &au 96 y Hin# . El primer fragmento de restriccin marcado con
fluorescena de cada digestin fue visualizado y analizado con un secuenciador
Abi Prism 3100 determinando el tamao del fragmento con el programa
GeneScan analysis v 3.5.2. El anlisis del tamao en pares de bases de los
fragmentos de restriccin marcados, permiti establecer un patrn para cada
una de las especies ensayadas, lo cual fue utilizado para identificar todas las
especies de forma fiable.
Se comprob la sensibilidad de la reaccin de PCR diseada en mezclas de
distintas concentraciones de microorganismos con la levadura &acc)arom'ces
cerevisiae, pudiendo detectar algunas de estas bacterias a niveles entre 100 y
10 ufc/ml.
En conclusin, estos resultados demuestran la fiabilidad y sensibilidad del
mtodo puesto a punto, puesto que permite la identificacin a nivel de especie
de la mayor parte de las bacterias presentes en el vino.
Este trabajo ha sido realizado gracias a la ayuda concedida por el Ministerio de
Educacin, Cultura y Deporte para estancias de profesores de universidad en
centros extranjeros.
A - 374
Influencia del &D $ob!e la te!mo!!e$i$tencia de Listeria monocytogenes y
Pseu$omonas aeruginosa t!a$ c;o:ue$ i$ot'!mico$ de di$tinta inten$idad
Hassani, M., Maas, P., Condn, S. y Pagn, R.
(epartamento de *roducci;n Animal ' !iencia de los Alimentos, Facultad de Veterinaria.
Universidad de Sarago$a.!< +iguel &ervet, 1, 30013 Sarago$a, EspaLa, 7el 349661381, Fax
349661390. Email0 pagan%posta.uni$ar.es
La resistencia microbiana frente al calor vara ampliamente entre las distintas
especies, pero a su vez, puede estar influida por multitud de factores. La
exposicin de los microorganismos a temperaturas subletales por encima de la
mxima de crecimiento (choques trmicos) permite que stos adquieran cierto
grado de proteccin contra los efectos letales de un posterior tratamiento
trmico ms intenso. Si bien la mayora de los estudios han evaluado la
influencia de la temperatura y el tiempo del choque, apenas se conocen los
efectos de otros factores tan determinantes de la termorresistencia microbiana
como son la actividad de agua o el pH del medio sobre la respuesta
microbianaa los choques trmicos.
El objetivo de este trabajo consisti en determinar la influencia del pH del
medio de choque (7,4, 5,5 y 4) sobre la termorresistencia de >isteria
monoc'togenes y *seudomonas aeruginosa tras choques trmicos de distinta
duracin (0,08, 0,25, 0,5, 1 y 2 h) a distinta temperatura (35, 40, 45, y 50C).
Los choques trmicos y las determinaciones de termorresistencia se realizaron
en caldo TSBYE ajustado a pH 7,4, 5,5 y 4. Los tratamientos del choque
trmico se realizaron en tubos que contenan 5 ml de caldo sumergidos en un
bao termostatado. Las determinaciones de termorresistencia se efectuaron en
un termorresistometro TR-SC de 350 ml de capacidad.
Mientras que las curvas de supervivencia de >. monoc'togenes fueron
prcticamente lineales, las de *. aeruginosa presentaron hombros. Los dos
microorganismos fueron ms termorresistentes a pH 7,4 que a pH 5,5 o 4. La
respuesta a los choques isotrmicos de ambos microorganismos dependi del
pH del medio de choque. La magnitud de la respuesta fue mayor a pH 7,4 que
a pH 5,5 y 4. Mientras que a pH 7,4 la temorresistencia fue mayor a mayor
temperatura y duracin del choque, a pH 5,5 y 4 slo la mayor duracin del
choque determin incrementos significativos de la termorresistencia. El mayor
incremento de termorresistencia se observ en clulas de >. monoc'togenes
sometidas a un choque de 2 h a 45C: el valor D
68
fue 14 veces superior al de
las clulas no chocadas. Mientras que la exposicin a choques subletales
previos al tratamiento trmico no modific el perfil de las grficas de
supervivencia de >. monoc'togenes, las de *. aeruginosa mostraron hombros
ms prolongados tras choques trmicos de mayor intensidad.
El conocimiento de los factores que afectan a la termorresistencia microbiana
pretende contribuir al diseo de tratamientos trmicos ms adecuados que
permitan obtener un mayor nivel de inactivacin que garantice la estabilidad y
seguridad de los alimentos.

A - 375
+!oduccin de bacte!iocina$ &o! bacte!ia$ l#ctica$ ai$lada$ de ben
saalga9 un alimento t!adicional fe!mentado de Bu!Hina >a$o
Ben Omar N., Abriouel H., Prez Pulido R., Lucas R., Martnez-Caamero M. y
Glvez A.
Area de +icro,iolog-a. (epartamento de !iencias de la &alud. Facultad de !iencias
Experimentales. Universidad de 2a5n. !ampus >as >agunillas s<n. .301. 2AQ:. e/mail0
agalve$%u=aen.es
En muchos pases tropicales se elaboran alimentos fermentados tradicionales
hechos a base de cereales. Entre estos productos podemos citar el ,en saalga
producido en Burkina Faso. Este alimento constituye un componente esencial
en la dieta de este pas, por lo que la mejora de sus cualidades nutricionales y
su seguridad desde el punto de vista microbiolgico son dos aspectos de gran
importancia.
El objeto de este trabajo consiste en la caracterizacin de bacterias lcticas
productoras de sustancias antimicrobianas, de cara a su posterior aplicacin
como cultivos iniciadores en la fermentacin de alimentos tradicionales
Africanos.
Un total de 99 cepas de bacterias del cido lctico fueron aisladas de diferentes
muestras de ,en saalga. La produccin de sustancias antimicrobianas se
valor mediante antagonismo directo en medio slido sobre placas de agar
MRS.
Seis de las cepas ensayadas producan una fuerte actividad inhibidora frente a
6acillus cereus, &tap)'lococcus aureus y >isteria monoc'togenes. La mayora,
tambin mostraron actividad sobre &almonella c)oleraesuis o Esc)eric)ia coli.
Las 6 cepas bacteriocinognicas fueron identificadas mediante amplificacin
por PCR como >acto,acillus plantarum. El estudio comparativo de los perfiles
obtenidos mediante RAPD-PCR indica que todas ellas son cepas diferentes.
Mediante amplificacin por PCR para distintos genes codificadores de
plantaricinas ya descritas, se ha puesto de manifiesto la presencia de algunos
de dichos genes en las cepas bacteriocinognicas aisladas de ,en saalga.
Agradecimientos: Este trabajo ha sido subvencionado con fondos de la Unin
Europea (Proyecto CEREFER: www.mpl.ird.fr/cerefer/; Programa NCO-DC,
Contrato N CA4-CT-2002-10047).
A - 377
Recuento de "i!u$ bacte!ifao$ f=RNA y colifo!me$ fecale$ en molu$co$
bi"al"o$ de la$ !,a$ allea$%
Ramilo, G.
1
, Lago, J.
1
, Alvrez, C.
2
, Vieites, J. M.
1
y Cabado, A. G.
1
1 Nrea de micro,iolog-a ' ,iotoxinas. A:FA!D/!E!D*E&!A. !ampus Univ Vigo 36310, Vigo.
&pain. agca,ado%an#aco.es. . Unidade de +icro,iolox-a. 1nstituto 7ecnol;xico do +edio +ariLo.
Vilaxo"n 36611, Vilagarc-a de Arousa . 4alicia.
Los virus somticos, los bacterifagos que infectan 6acteroides #ragilis y los
bacterifagos RNA F-especficos han sido propuestos como indicadores
potenciales de virus infecciosos humanos. Estos virus pertenecen a la familia
>eviviridae y son abundantes en aguas residuales y fecales. Poseen una
cadena simple de RNA y propiedades fsicas y genmicas similares a NV y a
HAV, por ello son buenos indicadores de contaminacin viral. En el borrador
del Reglamento de la Comisin "relativo a los criterios microbiolgicos
aplicables a los productos alimenticios (SANCO/4198/2001) se propona el
control de virus bacterifagos f-RNA para moluscos bivalvos vivos como
indicadores de virus patgenos de eliminacin fecal. Sin embargo, en la ltima
revisin de este documento se elimina el criterio propuesto por falta de
argumentos cientficos.
Tradicionalmente, se estudiaron las bacterias coliformes y Esc)eric)ia coli
como indicadores de la calidad sanitaria de los bivalvos. Sin embargo, stos no
siempre revelan la presencia de virus. Por otro lado, existen datos
contradictorios referentes al efecto de la depuracin sobre la disminucin de
virus presentes en bivalvos. En este contexto hemos puesto a punto la tcnica
de recuento de virus bacterifagos en bivalvos basndonos en la norma SO
10705-1: (Water quality Detection and enumeration of bacteriophagues).
Hemos analizado un total de 100 muestras de moluscos bivalvos recogidos en
las ras gallegas y en algunos de ellos se han realizado tambin anlisis de
coliformes, E coli y otras enterobactericeas. Los datos efectuados en bivalvos
ponen de manifiesto que un 7.5 % de las muestras presentan un recuento de
bacterifagos >30 pfp/g y que este resultado no guarda relacin con la
contaminacin microbiana. Adems, el porcentaje de descontaminacin de los
bivalvos depende de la carga inicial de bacterifagos.
A - 379
E$tudio en'tico de la$ comunidade$ mic!obiana$ en alimento$
amil#ceo$ fe!mentado$ de &a,$e$ Af!icano$
Abriouel H., Ben Omar N., Lucas

R., Martnez-Caamero

M . y Glvez

A.
Area de +icro,iolog-a. (epartamento de !iencias de la &alud. Facultad de !iencias
Experimentales. Universidad de 2a5n. !ampus >as >agunillas s<n. .301. 2AQ:. e/mail0
canamero%u=aen.es
La elaboracin de alimentos Africanos mediante fermentacin se realiza, en la
mayora de los casos, de acuerdo con prcticas artesanales transmitidas a
nivel familiar de generacin en generacin. La microbiota presente de forma
natural en el ambiente y en las materias primas es a menudo la responsable de
llevar a cabo dichos procesos, lo que origina variaciones importantes en las
caractersticas organolpticas y nutricionales del producto, as como en su
seguridad desde el punto de vista microbiolgico. La ausencia de una base
tecnolgica capaz de resolver los diversos problemas asociados a la
elaboracin de alimentos tradicionales y el rechazo de los consumidores al
empleo de mtodos alternativos de produccin hacen que sea necesario
conocer de forma detallada los microorganismos responsables de la
elaboracin de estos alimentos, a fin de desarrollar fermentos que puedan ser
introducidos paulatinamente en los sistemas de produccin.
En este trabajo hemos empleado la electroforesis en gradiente temporal de
temperatura (TTGE) para la separacin de fragmentos de ADN codificadores
para el ARN ribosmico16S, como mtodo independiente de cultivo para el
anlisis gentico de la diversidad microbiana de dos alimentos tradicionales
fermentados: poto poto (Congo) y degu5 (Burkina Faso). Se han comparado
tres mtodos diferentes de extraccin del ADN. Los resultados del estudio
realizado han permitido demostrar la presencia de al menos 10 grupos
microbianos diferentes en el conjunto de alimentos analizados, y comparar los
perfiles caractersticos de cada alimento.
El mtodo de anlisis empleado permite abrir nuevos horizontes en el estudio
de las comunidades microbianas de los alimentos tradicionales, solventando
gran parte de las dificultades asociadas a los mtodos dependientes de cultivo.
Agradecimientos: Este trabajo ha sido subvencionado con fondos de la Unin
Europea (Proyecto CEREFER: www.mpl.ird.fr/cerefer/; Programa NCO-DC,
Contrato N CA4-CT-2002-10047).
A - 386
Riboti&ado de ce&a$ de Plesiomonas shigelloi$es de di$tinto$ o!,ene$
Martnez Arias, O.; Herrera Arias, F.C.; Garca Lpez, .; Garca Lpez, M. L. y
Santos Buelga, J.
Nrea de :utrici;n ' 6romatolog-a. (pto. de Higiene ' 7ecnolog-a de los Alimentos. Facultad de
Veterinaria. Universidad de >e;n .401, >e;n. d)toma%unileon.es
*lesiomonas s)igelloides es una bacteria gram-negativa perteneciente a la
familia de las enterobactericeas. Sus principales reservorios son el agua y el
pescado, pero tambin se ha encontrado en otras especies de animales y en el
hombre, para el cual es un patgeno oportunista causante de diarrea de leve a
severa, especialmente en nios, ancianos y personas inmunodeprimidas.
El objetivo del presente estudio es caracterizar y comparar ocho cepas de
*lesiomonas s)igelloides de distintos orgenes mediante el mtodo del
ribotipado. Dichas cepas fueron aisladas de mero (P1, P35), fletn (P2, P3),
hombre (C1, C2), lucio (313) y heces de perro (ATCC 14029
T
). Para ello las
distintas cepas fueron analizadas con el equipo ?i,oprinter
7+
+icro,ial
!)aracteri$ation &'stem y la presencia o ausencia de las bandas de ADN
obtenidas de las distintas cepas fue sometida a un anlisis de conglomerados
jerrquico, utilizando el coeficiente de Dice.
Las dos cepas de origen humano mostraron un 100% de similitud entre s. Las
cepas aisladas de pescado marino (mero y fletn) mostraron un elevado grado
de similitud entre ellas y con las de origen clnico. La cepa tipo, aislada de
heces de perro, as como la cepa aislada de lucio, mostraron una menor
similitud con el resto de las cepas.
Todas estas cepas de *lesiomonas s)igelloides poseen caractersticas
fenotpicas muy similares. Por el contrario, los resultados del ribotipado
pusieron de manifiesto una mayor variabilidad entre cepas, excepto en el caso
de las cepas de origen humano. En estudios previos estas cepas (C1 y C2)
mostraron un patrn RAPD idntico pero distintos patrones PCR-RFLP con la
enzima !#o1 y distintas morfologas de sus colonias.

Este trabajo ha recibido financiacin del proyecto AGL-2002-00762. Oscar
Martnez Arias es beneficiario de una beca FPU del Ministerio de Educacin y
Ciencia.

A - 391
Efecto de la com&o$icin del medio de deteccin en la $en$ibilidad a
"a!io$ antibitico$ de .eobacillus stearothermophilus
Marquina, P.; Sanz, D.; Pagn, R. y Condn, S.
*roducci;n Animal ' !iencia de los Alimentos. Facultad de Veterinaria de Sarago$a. !< +iguel
&ervet, 1, 30013. e/mail0 pmarIuin%uni$ar.es
A pesar de que 4eo,acillus stearot)ermop)ilus es un microorganismo utilizado
como referencia en muchos tests de deteccin de antibiticos, apenas existen
estudios que describan cmo vara su sensibilidad a distintos antibiticos
cuando se modifican las condiciones del medio de deteccin. Un estudio de
cmo aumenta o disminuye su sensibilidad permitira interpretar los resultados
publicados as como proporcionar los datos necesarios para redisear algunos
de estos tests de deteccin, mejorando su efectividad.
El objetivo del presente trabajo ha sido estudiar la influencia de: concentracin
de sal (3, 2, 1, 0,75, 0,50 y 0,25 %) y de EDTA (10, 1 y 0,1 mM), pH del medio
(6, 7 y 8,4) y temperatura de incubacin (45, 50, 55 y 65 C), en la sensibilidad
de 4eo,acillus stearot)ermop)ilus a los siguientes antibiticos: betalactmicos
(penicilina y cefazolina), quinolonas (norfloxacina y cido nalidxico),
tetraciclinas (oxitetraciclina y tetraciclina), aminoglicsidos (gentamicina y
neomicina), macrlidos (eritromicina), polimixina y estreptomicina.
El estudio se ha desarrollado a partir de un medio de cultivo de deteccin
estndar (agar nutritivo). La evaluacin de la sensibilidad se realiz por medio
de la tcnica del disco en placa, utilizando discos control comerciales de cada
antibitico testado, y midiendo el halo de inhibicin producido.
Concentraciones altas de sal (3 y 4 %), EDTA (10 y 1 mM), pH 8,4 o
temperatura baja (45 C) no permitieron el crecimiento del microorganismo. El
nmero de ufc/placa despus de la incubacin disminuy con el aumento de la
concentracin de sal.
La concentracin de sal no modific sensiblemente la sensibilidad del
microorganismo a los betalactmicos y a la norfloxacina, por el contrario
aument enormemente la sensibilidad al cido nalidxico, los aminoglicsidos,
las tetraciclinas y la polimixina, llegando en algunos casos a duplicar el halo de
inhibicin. La concentracin de EDTA en general no afect a la sensibilidad a
los antibiticos, excepto en el caso de las tetraciclinas y el cido nalidxico,
donde los halos de inhibicin llegaron a aumentar de hasta 20 mm (de 35 a 55
mm en el caso de la tetraciclina).
El pH apenas tuvo efecto sobre la sensibilidad a los antibiticos, excepto a los
aminoglicsidos y a la estreptomicina, siendo mayor la sensibilidad a pH 7 que
a 6 (salvo para el cido nalidxico, que present menor halo de inhibicin a pHs
ms altos).
Finalmente se ha observado un aumento de la sensibilidad a temperaturas de
incubacin bajas, siendo el efecto ms acusado en las tetraciclinas y en el
cido nalidxico, donde los halos de inhibicin pueden reducirse en 10 mm al
bajar la temperatura.
A - 394
Ca!acte!i)acin molecula! de beta=lactama$a$ de e$&ect!o e-tendido en
ce&a$ de Salmonella enterica de mue$t!a$ fecale$ de animale$ $ano$
Riao, .
1
, Moreno, M.A.
2
, Teshager, T.
2
, Domnguez, L.
2
, Torres, C.
1
1
(epartamento Agricultura ' Alimentaci;n, Facultad !iencias, Universidad >a ?io=a, >ogroLoF
.
(epartamento de &anidad Animal, Facultad de Veterinaria, Universidad !omplutense, +adrid
Be.mail0 ioana[riano%'a)oo.esC
Las beta-lactamasas de espectro extendido (BLEEs) confieren resistencia a
cefalosporinas de amplio espectro (cefotaxima o ceftazidima) y poseen una
gran trascendencia clnica tanto en Medicina como en Veterinaria. El objetivo
del trabajo es caracterizar a nivel molecular la presencia de BLEEs en cepas de
&almonella enterica pertenecientes a la Red Espaola de Vigilancia Veterinaria
de resistencia a los antimicrobianos (Red VAV) y obtenidas en los programas
de seguimiento en matadero en 2003 (129 cepas de cerdos y 44 de ponedoras)
y 2004 (36 cepas de pollos). Entre estas 209 cepas se detectaron cuatro con
sensibilidad disminuida o resistencia frente a cefotaxima y/o ceftazidima cuyos
serovares son Rissen (cepa porcina) Enteritidis (una de las cepas de pollo) y
Virchow (cepa de gallina y segunda cepa de pollo).
Se estudi la sensibilidad frente a 29 antimicrobianos por las tcnicas de
difusin en agar y por dilucin en agar. Se analiz asimismo la presencia de
distintos tipos de BLEEs mediante PCR especificas y secuenciacin, y su
posible asociacin con integrones. Las cuatro cepas de &. enterica fueron
resistentes a ampicilina, cefalotina, cefotaxima, estreptomicina y sulfamidas;
tres de ellas tambin a trimetoprim+sulfametoxazol y cido nalidxico, dos de
ellas presentaron resistencia a ceftazidima y tetraciclina y una a aztreonam. Se
detect la presencia de BLEEs en las cuatro cepas de &. enterica (,la
CTX-M-9
en
las tres cepas de aves y ,la
SHV-12
en la cepa porcina), en todos los casos
asociadas al gen ,la
TEM1b.
Otros genes de resistencia detectados fueron d#r16
(confiere resistencia a trimetoprim), aadA. (produce resistencia a
estreptomicina) y sul1+ sul. (confiere resistencia a sulfamidas) en tres de las
cepas (ausente en la cepa porcina). Adems dos de las cepas (serovares
Rissen y Enteritidis) portaban el gen tetA que confiere resistencia a tetraciclina.
Las tres cepas portadoras del gen ,la
CTX-M-9
presentaron integrones de tipo 1
con la siguiente organizacin (determinada mediante secuenciacin): int11 +
d#r16 + aadA. + IacE1 + sul1 + or#313 + bla
CTX-M9
. No se detect presencia de
integrones en la cepa porcina portadora de ,la
SHV-12
. La presencia de BLEEs del
grupo CTX-M es relativamente frecuente en cepas de &. enterica de distintas
especies de animales sanos, en especial la variante CTX-M-9. Es importante
destacar la inclusin del gen codificante de dicha beta-lactamasa en integrones
de tipo 1 que portan otros genes de resistencia a antimicrobianos ms
habituales como sulfamidas, trimetoprim y estreptomicina que podran ser
importantes en los procesos de seleccin y de diseminacin de la resistencia.
A - 395
Ca!acte!i)acin de mo;o$ ai$lado$ de &imentn mediante +CR=R>L+
Ruiz-Moyano, S., Aranda, E., Benito, M.J., Velzquez, R., Bartolom, T. y
Crdoba, M.G.
Escuela de 1ngenier-as Agrarias, (pto. Sootecnia, Nrea de :utrici;n ' 6romatolog-a Universidad de
Extremadura, !tra. !"ceres s<n 0601 6ada=o$. srms)%)otmail.com.
El pimentn presenta unas caractersticas fisico-qumicas que impide desarrollo
de la mayor parte de microorganismos, aunque si pueden crecer mohos y
levaduras. Entre los mohos se pueden encontrar cepas capaces de producir
micotoxinas. La caracterizacin de la poblacin fngica mediante mtodos
clsicos presenta entre otros inconvenientes, elevado tiempo de anlisis, gran
subjetividad y alto grado de entrenamiento. La tcnica de PCR-RFLP es
adecuada para la caracterizacin de los mohos por su sensibilidad,
especificidad y rapidez. Dentro de la informacin gentica de los mohos, las
regiones TS son fciles y rpidas de amplificar y presentan variabilidad
interespecfica, por lo que seran adecuadas para la caracterizacin de los
mohos a nivel de gnero y especie. Por tanto, los objetivos de este trabajo son:
- Optimizar la tcnica de PCR-RFLP para la identificacin de especies fngicas.
- dentificacin mediante PCR-RFLP de los mohos aislados de pimentn
Para realizar el presente trabajo se aislaron 23 cepas de mohos mayoritarios,
procedentes de cinco variedades de pimentn. Adems para optimizar la
tcnica de PCR-RFLP se utilizaron 17 cepas patrn de la CECT. Para la PCR
se utilizaron la pareja de cebadores TS1-TS4 e TS4-TS5. Posteriormente se
realiz el corte con las enzimas de restriccin Eco ?1, &ma 1, Hin# 1, &au 3A1 '
7aI 1.
El mayor nmero de bandas y de mayor intensidad se obtuvo con la enzima
7aI 1. La tcnica de PCR-RFLP con los cebadores TS1-TS4 permiti
diferenciar los gneros *enicillium, Aspergillus y Fusarium, pero no mostr
perfiles de bandas diferentes entre los gneros Alternaria y !ladosporium.
Adems especies del gnero *enicillium y del gnero Fusarium mostraron
perfiles de bandas idnticos. Por su parte la tcnica de PCR-RFLP con la
pareja de cebadores TS4-TS5 mostr perfiles de bandas diferentes entre los
distintos gneros de cepas patrn de la CECT ensayadas, tambin se
observaron perfiles de bandas diferentes entre especies del mismo gnero. Por
ltimo, con los cebadores TS4-TS5 los 23 mohos aislados fueron
identificados: como *enicillium raistricOii, *. griseo#ulvum, *. ,revicompactum,
*. expansum, Fusarium tricintum, F. verticillioides, F. sporotric)um, F.
graminearum y !ladosporium cladiosporoide. Conclusiones obtenidas:
1. Las mayores diferencias a nivel de gnero y de especie de las cepas patrn
ensayadas se obtuvieron con la pareja de cebadores TS4-TS5 y con la
enzima 7aI 1.
2. La tcnica de PCR-RFLP con los cebadores TS4-TS5 y la enzima 7aI1
permiti caracterizar adecuadamente los aislamientos obtenidos del pimentn.
3. La tcnica de PCR-RFLP, por su especificidad y sensibilidad, puede ser
utilizada como mtodo de monitorizacin en un sistema APPCC para detectar
mohos toxignicos durante el procesado.
A - 402
Cont!ol mic!obiolico de comida$ &!e&a!ada$ &!ocedente$ de
comedo!e$ colecti"o$ de la &!o"incia de Bada*o)
Hidalgo Romero, A., Villalba Doblas, A.M., Cubero Chvez, A.,

Montes
Calatayud, Y., Caada Moreno, P. y Quintana Carrizosa, M.
>a,oratorio &alud *R,lica 6ada=o$. !<?onda del *ilar nZ ... 6ada=o$ 0600.. e/mail0
aurora.cu,ero%ses.=untaex.es
El sector de la restauracin en Espaa ha estado regulado por diversas
disposiciones de carcter especfico que han permitido tanto la mejora de las
condiciones higinico-sanitarias de los establecimientos de restauracin, como
el desarrollo de unas prcticas correctas de manipulacin de los alimentos y
una formacin adecuada en higiene alimentaria.
Durante el ao en curso se ha llevado a cabo un Programa de Calidad,
Vigilancia y Control en establecimientos de comidas preparadas.
Se han recogido 248 muestras en establecimientos de restauracin y
comedores colectivos pertenecientes a las cuatro reas de Salud de la
provincia de Badajoz, por parte de los Veterinarios Facultativos Sanitarios,
segn su criterio inspector, remitiendo las muestras, en condiciones adecuadas
al Laboratorio de Salud Pblica de Badajoz, donde se han llevado a cabo los
ensayos en la Unidad de Microbiologa de Alimentos. Muestras
correspondientes por rea: Badajoz: 194, Don Benito: 18, Mrida: 18, Llerena-
Zafra: 18.
Las muestras vienen acompaadas de una "Hoja de Solicitud de Anlisis "en la
que se establece al grupo de alimentos al que pertenece: Grupo A: sin
tratamiento o con tratamiento trmico, que lleven ingredientes no sometidos a
tratamiento trmico. Grupo B: con tratamiento trmico.
Los parmetros microbiolgicos investigados se clasifican en:
- indicadores: Recuentototal de aerobios mesfilos y Enterobacteriaceas
lactosa positivo
- testigos de falta de higiene: Esc)eric)ia coli ' &tap)'lococcus aureus
- patgenos: &almonella spp y >isteria monoc'togenes
Aproximacin de resultados: el 16% de las muestras analizadas incumplen las
normas microbiolgicas establecidas en el Programa de Calidad de Vigilancia y
control de establecimientos de comidas preparadas, basado en el R.D.
3484/2000. De estas muestras positivas: el 85% supera los lmites establecidos
para los microorganismos indicadores, el 31% supera los lmites establecidos
para los microorganismos testigos de higiene y en el 7% se detecta la
presencia de patgenos; por lo que respecta a su procedencia: el 56% fue
recogida en restaurantes y el 13 % en residencias de ancianos.
Bibliografa:
(1)Real Decreto 3484/2000, de de 29 de diciembre, por el que se establecen
las normas de higiene para la elaboracin , distribucin y comercio de comidas
preparadas
(2)Programa de Calidad en Vigilancia y Control en Establecimientos de
comidas preparadas. JUNTA DE EXTREMADURA
A - 405
Identificacin &o! +CR de e$&ecie$ de usarium micoto-i'nica$
Gmez, E. D.; Cuesta., G.; Montes, R. y Hernandez, E.
(epartamento de 6iotecnolog-a, Universidad *olit5cnica de Valencia. 460.. VA>E:!1A, E&*A\A.
rmontes%,tc.upv.es
Las micotoxinas son producidas por un grupo de hongos, entre ellos Fusarium
ssp. que pueden causar una variedad de sntomas hepatotoxicologcos,
nefrotoxicologas o efectos carcinognicos. Se debe tener en cuenta que los
mtodos tradicionales de aislamiento e identificacin de Fusarium sp. son
tediosos, caros y consumen mucho tiempo. Adems, para comprobar si son
productores de micotoxinas, se deben incubar en sustratos y condiciones
adecuadas y para su deteccin se hacen necesarios mtodos cromatogrficos.
La identificacin basada en PCR es una alternativa eficaz que puede ser usada
en la deteccin de genes implicados en la produccin micotoxinas as como en
la identificacin de gnero y especie.
El objetivo de este trabajo es la identificacin por PCR de especies del gnero
Fusarium aisladas de grano de maz y la deteccin de especies productoras de
tricotecenos y especialmente deoxynivalenol (DON). En este estudio se
utilizaron como cepas de referencia: Fusarium culmorum, F. ox'sporum #sp.
l'copersici, F. poae, F. roseum, F. solani, F. sporotric)ioides, F. tricinctum, F.
verticillioides, 4i,,erella intricans, 4. $eae. Todas estas especiesfueron
suministradas por CECT.
La extraccin de DNA fue realizada moliendo el micelio con nitrgeno lquido y
siguiendo el procedimiento del CTAB. Los iniciadores FF2 y FR1 son usados
para amplificar 425-bp del gen18S rRNA, fragmento que esta relacionado en la
produccin de tricotecenos son especficos para el gnero Fusarium. Las
condiciones de amplificacin de la PCR son: un ciclo en 94 C durante 4
minutos, seguido de 35 ciclos de 94 C durante 1 minuto, 58 C para 30 s, y
72 C durante 45 segundos, y finalmente, un ciclo de elongacinen72 C de 5
minutos.
Para el iniciador Tox5-1 y Tox5-2 usado para amplificar un fragmento de658-
bp, el cual es relacionado con la produccin DON. Las condiciones para PCR
son: un ciclo de 94 C durante 2 minutos seguido de 35 ciclos de 95 C
durante 1 minuto, 63 C para 50 s, y la extensin en 72 C para 30 s, y
finalmente, un ciclo de elongacin de 72 C por 5 minutos.
Los iniciadores FF2 y FR1 mostraron buena especificidad para cepas de
Fusarium y amplific el fragmento 425-bp en las cepas de referencia
productoras de tricotecenos. Estos iniciadores amplificaron el mismo fragmento
en 63 cepas de Fusarium de 174 aisladas en este trabajo. Los iniciadores
Tox5-1 y Tox5-2 amplificaron el fragmento 658-bp en las cepas de referencia
que estn catalogadas como productoras de DON, como tambin en 19 de
aislados de los 174.
El uso de la PCR permite una rpida y especfica identificacin de cepas de
Fusarium. Con esta tcnica se pueden detectar, adems, genes que codifican
la produccin de tricotecenos y DON.
A - 409
E"olucin de la flo!a l#ctica y de la$ ca!acte!,$tica$ f,$ico=:u,mica$
du!ante la madu!acin del :ue$o de Mu!cia al "ino%
Cayuela, JM., Martnez-Cach, A., Abelln, A. y Tejada, L.
(epartamento de !iencias de la &alud. Nrea de (iet5tica ' :utrici;n. Facultad de !iencias de la
&alud. Universidad !at;lica &an Antonio. !ampus los 2er;nimos s<n. 3010 4uadalupe B+urciaC.
e/mail0 =mca'uela%pdi.ucam.edu
A mediados de los aos ochenta en la Regin de Murcia se apost
decididamente por la potenciacin del sector quesero, establecindose el 11 de
julio de 2001 el Reglamento de la Denominacin de Origen "Gueso de +urcia
al vino y su Consejo Regulador. A pesar de la importancia que va adquiriendo
esta variedad de queso en los mercados nacionales e internacionales, no se
tiene constancia de la publicacin de ningn estudio que revele sus
caractersticas fsico-qumicas, bioqumicas, microbiolgicas. El objetivo de
esta comunicacin es publicar algunos de los resultados ya obtenidos.
Como era de esperar se observ un descenso de la humedad hasta alcanzar a
los 60 das de maduracin un 37 %. Los resultados muestran un incremento
continuado de la acidez y de la sal, hasta alcanzar a los 60 das de maduracin
valores de 1,42 g de cido lctico por 100 g de queso y de 1,66 g/100 g queso,
respectivamente.
La evolucin del pH fue bastante irregular, as durante los primeros das de
maduracin se produce una fuerte acidificacin del queso por la actividad de
las bacterias cido-lcticas, que se refleja en un importante descenso del pH. A
partir de los 45 das los valores de pH aumentan hasta los 60 das de
maduracin.
Los aminocidos libres totales experimentaron un incremento importante
durante la maduracin del queso, pasando de 30 a 168 mg leu/100 g queso.
Esta aumento observado se corresponde con la accin proteoltica desarrollada
por la flora cido-lctica cuyos recuentos (gneros >euconostoc, >acto,acillus,
>actococcus y EnterococcusC se mantienen elevados durante todo el proceso
de maduracin. Dentro de las bacterias lcticas analizadas no se encuentran
diferencias significativas en ninguno de los das analizados, aunque los
recuentos de lactococos son los ms altos hasta el final de la maduracin. En
cuanto a su evolucin durante la maduracin no se aprecian crecimientos
significativos durante la maduracin, alcanzndose los valores mximos entre
los 30 y 45 das.
A - 425
Di"e!$idad mic!obiana en fe!mentacione$ e$&ont#nea$ de mo$to$ de u"a8
!elacin con la calidad
Maqueda M.
1
, Depuydt L.
1
, lionnet D.
1
, lvarez M.L.
2
, Cceres P.
1
y Ramrez
M.
1
1
(epartmento de +icro,iolog-a, Universidad de Extremadura, Avda Elvas s<n, 6ada=o$, EspaLa.
7l#no0 9.4.89363. pcaceres%guadiana.unex.es .
.
Estaci;n Enol;gica, !onser=er-a Agricultura '
+edio Am,iente. 2unta de Extremadura. Almendrale=o, 6ada=o$, EspaLa.
La fermentacin espontnea de mosto es un proceso complejo que implica el
desarrollo secuencial de distintas poblaciones microbianas, afectadas por el
ambiente especfico de cada vinificacin. Aunque el aroma del vino se
fundamenta en los aromas varietales de la uva, las levaduras contribuyen
produciendo compuestos aromticos (2). Nuestro objetivo ha sido analizar la
diversidad y dinmica de las poblaciones microbianas y determinar su relacin
con la calidad del vino. Se estudiaron 53 vinificaciones espontneas realizadas
con 14 variedades de uva en diferentes bodegas extremeas. Durante la
fermentacin se determinaron los parmetros fsico-qumicos y se realizaron
anlisis microbiolgicos de microorganismos viables totales, levaduras
(&acc)arom'ces sp., no-&acc)arom'ces y apiculadas) y bacterias. Tras el
anlisis organolptico de los vinos se hizo el tratamiento estadstico de los
resultados con el test no paramtrico de Mann-Whitney y test de correlacin de
Spearman. Con los datos obtenidos agrupamos las 53 vinificaciones en tres
tipos: a) &. cerevisiae dominaba desde inicio hasta final de fermentacin debido
bien a la contaminacin ambiental de levaduras residentes en bodega (1) o al
estado avanzado de fermentacin de los mostos al encubar. En estos casos, al
ser la poblacin inicial microbiana alta, la velocidad de fermentacin fue ms
rpida producindose un cierto detrimento en las cualidades organolpticas de
los vinos blancos. b) Sucesin de subpoblaciones microbianas con predominio
inicial de levaduras apiculadas reemplazadas al final de la fermentacin por &.
cerevisiae. Este tipo representa las fermentaciones espontneas ms
frecuentes (1). c) Durante la fermentacin no se detect &. cerevisiae, debido o
a contaminacin ambiental de levaduras apiculadas y otras no-&acc)arom'ces
predominantes en bodegas o bien al estado deteriorado de las uvas, donde las
levaduras apiculadas realizaron fundamentalmente la fermentacin. En este
caso, al no agotar totalmente los azcares, las levaduras apiculadas
favorecieron el desarrollo bacteriano. Podemos concluir que, aunque el
predominio de &. cerevisiae favorece tecnolgicamente la fermentacin, la
presencia de levaduras apiculadas al inicio de la fermentacin mejor
significativamente la calidad de los vinos tintos.
A!adecimiento$
Este trabajo ha sido financiado por el proyecto 2PR01B002 concedido por la Junta de
Extremadura. Matilde Maqueda es becaria del Ministerio de Educacin y Ciencia.
Biblio!af,a
1.Ribreau-Gayon, P., D. Dubourdieu, B. Donche, and A. Lonvaud. 2003. Tratado de
Enologa: Microbiologa del vino. Vinificaciones. Hemisferio Sur S.A., Buenos Aires.
2.Vianna, E., and S. E. Ebeler. 2001. J. Agric. Food Chem. 49 (2):589 - 595.
A - 427
Deteccin de ce&a$ de Psychrobacter mediante la deteccin del en lip ?
&o! la t'cnica de +CR%
Garca-Lpez, ., Rodriguez- Calleja, J.M., Martinez-Arias, O., Santos, J.A. y
Garca-Lpez, M.L.
Nrea de :utrici;n ' 6romatolog-a. (pto de Higiene ' 7ecnolog-a de los Alimentos.Facultad de
Veterinaria. Universidad de >e;n. .401/>e;n. d)tigl%unileon.es
*s'c)ro,acter spp, gnero perteneciente a la familia +oraxellaceae, est
formado por cocobacilos Gram-negativos, inmviles, aerobios estrictos que se
encuentran en ambientes naturales y alimentos proteicos refrigerados como
agentes alterantes de stos. En cuanto a su aislamiento a partir de alimentos,
aparecen junto con el resto de la microbiota psicrotrofa en los medios para
recuentos generales pero pasan fcilmente desapercibidos al no poseer las
colonias caractersticas diferenciales. Adems, por sus caracteres fenotpicos
se confunden fcilmente con cepas de *seudomonas aparentemente
inmviles. Por tanto, son necesarias tcnicas microbiolgicas que faciliten su
deteccin con el fin de poder llevar a cabo estudios en profundidad sobre su
papel en la alteracin de los alimentos.
El objetivo de este trabajo es disear una tcnica de PCR que nos permita
detectar el gen lip 1 en cepas de *s'c)ro,acter immo,ilis y as poder
diferenciar este gnero de posibles competidores.
A partir de la secuencia del gen lip 1 que codifica la produccin de lipasa en la
cepa *s'c)ro,acter immo,ilis B10 (Arpigny et al., 1993. Biochim. Biophys Acta.
1171:331-333). se disearon varios pares de cebadores algunos de los cuales
mostraron gran especificidad para las especies del gnero *s'c)ro,acter.
Se estudiaron 28 cepas, 15 de las cuales procedan de la Coleccin Belga
(BCCM/LMG), 10 fueron aisladas por nosotros a partir de muestras de carne de
conejo y moluscos bivalvos, la cepa tipo de Aeromonas )'drop)ila
(microorganismo psicrotrofo y lipoltico) y 2 cepas de *seudomonas #ragi que
por sus caractersticas fenotpicas se confunden fcilmente con cepas de
*s'c)ro,acter immo,ilis.
Utilizando los cebadores si36 (cgg cgc aat cag tgt ggc tta tg) y si37 (act tgt gct
tgc ggg atg att ttt) que amplifican un fragmento de 420 pares de bases del gen
lip 1, se detect la presencia de dicho gen en 12 de las 15 cepas de coleccin y
en todas las que fueron aisladas por nosotros. Por el contrario, todas las cepas
de Aeromonas y *seudomonas resultaron ser negativas.
La tcnica de PCR diseada en este trabajo permite la deteccin rpida y
especfica de cepas de *s'c)ro,acter potencialmente alterantes de alimentos.
Este trabajo ha recibido financiacin de la CCYT (Proyecto AGL2000-1159)
A - 429
A&licacin de &!oducto$ de!i"ado$ de /!lliaceas/ en de$infeccin
ambiental de indu$t!ia$ alimenta!ia$
Garca-Pareja M.P., Lara Cambil A. y Snchez Vaquero E.
(pto. 1](< (+! ?E&EA?!H !E:7E? &.>. !amino de 2a'ena s<n Al)end-n. 186.0 B4ranadaC
pilarg%domca.com
DMC RESEARCH CENTER, es una joven PYME nacida hace unos meses a
partir del Dpto. de +D de DOMCA SA, el cual contaba a su vez con ms de
12 aos de experiencia. Durante ese tiempo una de las lneas de investigacin
fundamentales se ha centrado en la bsqueda de principios activos de origen
natural con capacidad antimicrobiana. As se han desarrollado una serie de
productos derivados de plantas con un potencial conservador en diferentes
sectores de la industria alimentaria (lcteos, crnicas, agrcola, etc.).

En este estudio se muestran los resultados obtenidos en la aplicacin de uno
de estos productos en la desinfeccin de cmaras y salas de fbricas en
diferentes tipos de industrias alimentarias. gualmente se detallan los ensayos
previos "in vitro" realizados para la seleccin del mismo. Dicho producto es un
derivado de compuestos presentes en plantas del gnero Allium.
En una primera fase "in vitro" se han realizado, a modo de screening, una
serie de ensayos encadenados en los que se estudia la capacidad
antimicrobiana en funcin de la dosis. Para ello se ha utilizado el test de
difusin en agar de las muestras, frente a diferentes cepas potencialmente
patgenas de distintos sectores alimentarios. As se han valorado tanto cepas
de coleccin de cultivos tipo como cepas salvajes aisladas de diferentes tipos
de alimentos y frutos (E. coli., &. t'p)imurium, >. monoc'togenes, >. innocua,
&. aureus, 4. candidum, *. italicum, *. digitatum, *. expansum, A. niger, +.
roseus, ?. stoloni#er, +. laxa, !ladosporium spp., Alternaria spp., Fusarium
spp., entre otras). Dicho producto desarroll halos de inhibicin bastante
aparentes para la mayora de las cepas utilizadas, mostrando un amplio
espectro antimicrobiano (antibacteriano y antifngico).
Dada la gran potencia y amplitud de espectro, en una segunda fase se aplic
este producto para la desinfeccin ambiental de instalaciones en diferentes
industrias alimentarias (lcteas, crnicas, hortofrutcolas etc.). Como resultado
de los tratamientos realizados, se han obtenido porcentajes de desinfeccin
entre el 50-80% de la microbiota inicial global (en funcin del grado de
contaminacin inicial y tipo de contaminante de cada industria) .

Se proponen este tipo de productos como una alternativa menos agresiva a los
tratamientos tradicionales (tipo amonios cuaternarios, bifenilos, etc), dada la
gran eficacia obtenida en los ensayos de desinfeccin ambiental realizados. La
fase actual en la que nos encontramos es la del registro de los mismos.

Agradecemos la financiacin recibida del FA (Ref. proyecto: 4SU0103157).
A - 433
Gene!acin de com&ue$to$ "ol#tile$ &o! le"adu!a$ ai$lada$ de *amn
ib'!ico
Andrade, M.J., Casado, E.M., Martn, A.
1
, Rodrguez, M. y Crdoba J.J.
Higiene de los Alimentos. Facultad de Veterinaria. Aptdo. de correos 643. 1001/!"ceres. E/mail0
m=andrad%unex.es.
1
:utrici;n ' 6romatolog-a. !iencia ' 7ecnolog-a de los Alimentos. Escuela de
1ngenier-as Agrarias. 0601/6ada=o$.
Las levaduras aisladas de jamn ibrico parecen contribuir de una forma
destacada al desarrollo del aroma del producto acabado. Entre las especies
ms frecuentemente aisladas en este producto se encuentra fundamentalmente
(e,ar'om'ces )ansenii, pero tambin otras como ?)odotorula sp y !andida
sp. En las diferentes zonas geogrficas de produccin se han encontrado
diversos biotipos dentro de estas especies, que podran provocar diferencias en
el aroma del jamn curado. El objetivo de este trabajo ha sido evaluar la
capacidad de generacin de compuestos voltiles de los biotipos de levaduras
ms frecuentemente aislados en jamn ibrico, lo cual sera de gran utilidad
para las Denominaciones de Origen.
Se han analizado 56 aislados de levaduras agrupados en 7 biotipos (A, B, C, D,
E, H y K) en funcin del anlisis de restriccin del ADN mitocondrial. Los
aislados se han inoculado en un medio mnimo (tampn Na
2
HPO
4
0,1M), pH 6 y
composicin en NaCl (5 g/l), aminocidos libres (4 g/l de alanina, triptfano,
lisina, glicina, cido glutmico, valina, leucina, isoleucina, metionina, y
fenilalanina) y cido oleico (4 g/l), similar a la encontrada en jamn durante la
maduracin. Los medios inoculados, junto con los controles sin inocular, fueron
incubados en agitacin durante 30 das a 25C. Seguidamente, se han
analizado los compuestos voltiles del espacio de cabeza mediante
microextraccin en fase slida (PDMS) utilizando una fibra de carboxen-
polidimetilsiloxano. La separacin, identificacin y cuantificacin de los
compuestos extrados se realiz mediante GC-MS.
En la mayora de las muestras inoculadas se encontraron concentraciones
mayores que en los controles de compuestos derivados del catabolismo de los
aminocidos como los alcoholes ramificados 3 y 2-metil-butanol. Los cidos
ramificados 3 y 2-metil butanoico y 2-metil propanoico slo se detectaron en
muestras inoculadas con levaduras pertenecientes a los biotipos B, C y D. Las
cetonas ramificadas 3-metil-2-pentanona, 3-metil-2-butanona, 3,3-dimetil-2-
butanona slo fueron encontradas en muestras inoculadas con levaduras.
Algunos aislados dan lugar a la generacin de steres, no detectados en los
controles. Los compuestos derivados del catabolismo de la metionina como
trimetil y dimetildisulfuro slo se encontraron en muestras inoculadas y slo en
determinados aislados. No se observaron diferencias relevantes entre medios
inoculados y muestras control en compuestos derivados de la oxidacin
lipdica. Los aislados que generan mayores diferencias con el control
pertenecen a los biotipos C y D caracterizados como (. )ansenii, que pueden
ser propuestos para su utilizacin como cultivos iniciadores.
Este trabajo ha sido financiado con el proyecto del Ministerio de Ciencia y Tecnologa
AGL01-0804. M.J. Andrade es beneficiaria de una beca FP de la Junta de Extremadura.
A - 434
Ti&ificacin de ai$lamiento$ de Debaryomyces hansenii obtenido$ de
*amn ib'!ico mediante RA+D=+CR con cebado!e$ mini y mic!o$at'lile$
Snchez, B., Andrade, M.J., Crdoba, M.G.
1
, Prez, F.
1
y Crdoba, J.J.
Higiene de los Alimentos. Facultad de Veterinaria. UEY. 1001/!"ceres. e/mail0
,easanna%unex.es.
1
:utrici;n ' 6romatolog-a. !iencia ' 7ecnolog-a de los Alimentos. Escuela de
1ngenier-as Agrarias. 0601/6ada=o$.
Durante el proceso de maduracin de jamn ibrico se desarrolla una
poblacin de levaduras, representada fundamentalmente por (e,ar'om'ces
)ansenii. Algunos aislamientos de esta especie participan en la formacin de
compuestos voltiles relacionados con el aroma a producto curado. La
diferenciacin de este tipo de aislamientos es de gran utilidad para la seleccin
y control de la implantacin de cultivos iniciadores. Mediante el anlisis de
restriccin del ADN mitocondrial (ADNmt) es posible diferenciar levaduras a
nivel de especie e incluso a nivel de cepa. Sin embargo, cepas con igual perfil
de restriccin mitocondrial pueden presentar diferencias en la capacidad de
formacin de compuestos voltiles. La utilizacin de RAPD-PCR podra ser
adecuado para conseguir un mayor nivel de diferenciacin dentro de los
biotipos establecidos con el ADNmt. El objetivo del presente trabajo es
optimizar protocolos de RAPD-PCR con micro y minisatlites que permitan
diferenciar biotipos de (. )ansenii obtenidos mediante anlisis del ADNmt.
Para el desarrollo de este trabajo se han utilizado 3 cepas de (. )ansenii
pertenecientes a la CECT y 45 aislamientos de (. )ansenii procedentes de 3
Denominaciones de Origen diferentes. Los aislamientos procedentes de jamn
ibrico han sido previamente clasificados en 9 biotipos mediante el anlisis de
restriccin del ADNmt. Se optimizaron tres protocolos de RAPD-PCR con el
minisatlite (GACA)
4
y los microsatlites (GTG)
5
y (GAC)
5
.
Con los 3 cebadores se obtuvieron perfiles de 3 a 11 bandas que oscilaron
entre 6 y 0,1 kb. Los protocolos que generaron un perfil repetitivo con mayor
nmero de bandas de amplificacin se obtuvieron con concentraciones de 3-4
mM de MgCl
2
y temperatura de amplificacin de 55 a 60C. El anlisis de los
perfiles de RAPD-PCR permite establecer diferencias entre aislamientos dentro
de cada uno de los 9 biotipos ensayados. Los cebadores (GACA)
4
y (GAC)
5
son
los que producen un mayor nivel de discriminacin.
El anlisis de RAPD-PCR utilizando los cebadores (GACA)
4
y (GAC)
5
permite
establecer diferencias a nivel de cepa dentro de cada biotipo de la especie de
(. )ansenii, lo cual es de gran utilidad para la seleccin y control de
implantacin de cultivos iniciadores.
Este trabajo ha sido financiado con el proyecto del Ministerio de Ciencia y
Tecnologa AGL01-0804.
A - 440
E$tudio de la ca&acidad antio-idante y antimic!obiana de e-t!acto$ de P.
bla&esleeanus y ot!o$ antio-idante$ u$ado$ en la indu$t!ia alimenta!ia
a
Fernndez, L.,
a
Ra, J.,
a
Valle, P.,
a
de Cima, S.,
a
Gutirrez, M.,
a
de Arriaga, D.
y
b
Garca-Armesto, M.R.
a
(pto. de 6ioIu-mica ' 6iolog-a +olecular.
,
(pto de Higiene ' 7ecnolog-a de los Alimentos.
Universidad de >e;n. .400. >e;n. EspaLa. Be/mail0 d,,=ra%unileon.esC
En este trabajo analizamos las actividades antioxidante y antimicrobiana de un
conjunto de compuestos antioxidantes, alguno de ellos empleados en la
industria alimentaria, as como de extractos miceliales de *)'com'ces
,laOesleeanus, en los cuales habamos determinado previamente la presencia
de D-eritroascorbato (EAA), un anlogo de ascorbato, as como de la forma
glicosilada del mismo (EAAG). Tambin se haba descrito en este hongo la
produccin de cido glico.
El efecto antioxidante de ascorbato, isoascorbato, BHT, resveratrol, -tocoferol,
cido glico, trolox, L-cistena y extractos de *. ,laOesleeanus (24 h de cultivo
en oscuridad o 96 h en luz) se analiz por medio de ensayos colorimtricos,
determinando su actividad secuestrante de radicales libres hidroxilo, o de
radicales DPPH
L
. El efecto antibacteriano se prob por la tcnica del disco
sobre placas cultivadas con cepas de coleccin de &tap)'lococcus aureus,
*seudomonas putida, *seudomonas lundensis, Esc)eric)ia coli, 6acillus
cereus y Entero,acter aerogenes; asimismo se emplearon cepas de &. aureus
aisladas de leche de oveja. Se utilizaron concentraciones de 200 o 500 mg de:
cido glico (en presencia o ausencia de EDTA 1 mM), cido L-ascorbico
(disolucin cida o neutralizada), BHT, extractos de *. ,laOesleeanus de 24 h
(oscuridad) o 96 h (luz), o bien combinaciones de cido glico con estos
extractos o con cido ascrbico.
Los resultados obtenidos sobre la actividad antioxidante indicaron que el -
tocoferol y los extractos miceliales de *. ,laOesleeanus inhiben
significativamente la oxidacin de -caroteno por radicales hidroxilo. Por otra
parte, el cido glico y los extractos miceliales de 96 h fueron los ms efectivos
en cuanto a la capacidad secuestrante de radicales DPPH
L
, siendo necesarias
concentraciones de 3,5 mM de EAAG (extracto de 96 h) y de 7,4 mM de cido
glico para obtener el 50% de la actividad secuestrante de radical DPPH
L
(100
mM), mientras que para cistena y ascorbato fue necesaria una concentracin
de alrededor de 20 mM y para -tocoferol, BHT, trolox y resveratrol se
necesitaron en torno a 30 35 mM.
En cuanto al efecto antibacteriano, tan slo las cepas de &. aureus se
mostraron sensibles al cido glico, slo o en combinacin con los extractos de
*. ,laOesleeanus. La inhibicin del crecimiento se observ tanto en cuatro
cepas de coleccin como en seis cepas aisladas de leche de oveja. La
presencia de EDTA facilit el efecto inhibidor del cido glico para la mayora
de las cepas; sin embargo el cido ascrbico impidi el efecto antimicrobiano
del cido glico sobre &. aureus. Los halos de inhibicin oscilaron entre los 8-
10 mm para las cepas menos sensibles y los 19-21 mm para las cepas ms
sensibles.
A - 444
Deteccin de 'ampylobacter sp. en mue$t!a$ de ca!ne$ de a"e$ en la I$la
de Tene!ife
Lpez Gonzlez-Coviella, N.; Arocha Henrquez, F.J.; Prez Prez, M.N.;
Jimnez Martn, M. y Del Arco Aguiar, A.L.
&ervicio de &alud *R,lica ' >a,oratorio. ?am,la 4ral. Franco,33 / 38006 &<! 7eneri#e.
nlopgon%go,iernodecanarias.org
Algunos alimentos de origen animal contaminados por !amp'lo,acter
patgenos son causa de enfermedad en el hombre. Las aves constituyen el
principal reservorio de !amp'lo,acter en heces y canales recin sacrificadas
Durante el sacrificio, se difunden los microorganismos a las canales a partir del
contenido intestinal. Las prcticas tecnolgicas que la industria alimentaria
aplica en la elaboracin de distintos alimentos contribuye, sin duda, a la
dispersin del microorganismo entre estos productos.
Este trabajo pretende detectar la presencia de !amp'lo,acter sp. en muestras
de carnes de aves en la sla de Tenerife, en los meses de primavera (mayo y
junio de 2004).
Se procedi al estudio de un nmero de 51 muestras de carnes de aves (47 de
pollo y 7 de pavo) procedentes de mataderos (12), carniceras (6) y
establecimientos de consumo (33). Las carnes procedan de distintas partes del
animal (pechuga, muslos, cuartos traseros, contramuslo) y que se encontraban
tanto en congelacin como frescas.
Una vez realizada la toma, las muestras permanecieron en refrigeracin, hasta
su posterior traslado y procesamiento en el Laboratorio. En cuanto a la tcnica,
se tomaron 25 gramos de muestra y se aadieron 225 ml de caldo de
enriquecimiento selectivo Bolton (Oxoid), previamente activado con suplemento
selectivo y adicionado de sangre de caballo lisada. Se incub en aerobiosis a
37C durante 243 horas. Tras este perodo, se procesa por el sistema
automatizado Minividas (BioMeriux) especfico para este microorganismo.
Las muestras que resulten positivas en el sistema automatizado Minividas, se
pasan a un medio selectivo (Agar Campylosel. BioMeriux), incubndose en
microaerobiosis a 37C, durante 24-48 horas y posteriormente se procede a la
confirmacin utilizando un sistema estandarizado de identificacin (apiCampy
BioMeriux).
La tasa de contaminacin por !amp'lo,acter sp. en los productos aviares
analizados fue de 15,69%0,37, lo que nos indica una tasa elevada en relacin
con las muestras estudiadas. Todas las muestras positivas fueron de carne de
pollo, no detectndose ninguna en las carnes de pavo. En relacin, a la
procedencia de las muestras, se encontr un porcentaje similar entre las
muestras de mataderos (16,67%0,41) y carniceras (16,67%0,39), no
existiendo una diferencia significativa con las encontradas en los
establecimientos de consumo (15,15% 0,36).
No existe una marcada diferencia entre los establecimientos donde se produce
el sacrificio y despiece de las aves, con los establecimientos de consumo, por
lo que se observa que la contaminacin se mantiene en la cadena alimentaria.
Es importante que se adopten las medidas preventivas oportunas en
mataderos y carniceras, cuando se contacta con carnes de aves de corral y
sus despojos y realizar posteriormente, una manipulacin higinica y cuidadosa
para evitar la contaminacin cruzada de otros productos.
A - 447
Ca!acte!i)acin de mic!ococacea$ ai$lada$ de embutido$ de ce!do ib'!ico
mediante &e!fil de &!ote,na$ e-t!acelula!e$
Serradilla, M., Benito, M.J., Aranda, E., Prez-Nevado, F., Colin, B. y Crdoba,
M.G.
Escuela de 1ngenier-as Agrarias, (pto. Sootecnia, Nrea de :utrici;n ' 6romatolog-a Universidad de
Extremadura, !tra. !"ceres s<n 0601 6ada=o$. mdeguia%unex.es
Las micrococaceas son junto con las bacterias cido lcticas los
microorganismos ms importantes usados como cultivo iniciador en los
embutidos crudos curados. Ha sido ampliamente documentada la participacin
de las micrococaceas en el control de la rancidez o en el desarrollo del color
rojo tpico de estos productos crnicos. De la misma manera, varios trabajos
han mencionado el papel de estos microorganismos en la proteolisis, liplisis y
en la generacin de compuestos voltiles que influyen en el sabor de los
embutidos crudos curados. Adems algunas micrococaceas son capaces de
generar sustancias con capacidad antimicrobiana. Sin embargo, tambin se ha
descrito en algunas especies de micrococaceas la presencia de genes que
codifican la produccin de enterotoxinas, as como la capacidad de generar
aminas bigenas en los embutidos. En este sentido, sera adecuado disponer
de tcnicas de control de calidad que permitan diferenciar de forma sensible y
rpida las micrococaceas patgenas de las beneficiosas. El objetivo del
presente trabajo es poner a punto un mtodo de anlisis del perfil de protenas
extracelulares por SDS-PAGE para diferenciar micrococaceas, aisladas de
embutidos de cerdo ibrico, hasta nivel de cepa.
Se han estudiado 9 cepas de micrococaceas de la Coleccin Espaola de
Cultivos Tipo, pertenecientes a las especies ms frecuentemente aisladas de
embutidos. As mismo se evaluaron 81 aislados de micrococaceas procedentes
de tres etapas del proceso de elaboracin de chorizos y salchichones de cerdo
iberico. Para la extraccin de las protenas extracelulares se utiliz el mtodo
descrito por Tunga y col. (1999) modificado. La visualizacin de las protenas
se realiz en geles de poliacrilamida al 12 % con SDS. Para la identificacin
bioqumica se utilizaron las galeras AP Staph.
Las 9 cepas patrn estudiadas mostraron perfiles de bandas caractersticos,
por lo que con este mtodo se obtuvieron diferencias a nivel de gnero,
especie e incluso a nivel de cepa. Con la tcnica de protenas extracelulares
descrita, de los 81 aislados, 55 fueron agrupados como &. x'losus, 18 como &.
aureus y 4 como &. epidermidis. El resto de los aislados mostraron perfiles de
bandas diferentes a los de las cepas patrn ensayadas. Mediante la
identificacin bioqumica los aislamientos fueron caracterizados como &.
x'losus, &. lugdunensis, &. saprop)'ticus, &. capitis, &. c)romogenes, &.
aureus y +icrococcus spp. Slo 49 de los aislados mostraron la misma
identificacin con los dos mtodos estudiados, lo que puede ser debido a que
no todos los perfiles bioqumicos obtenidos mostraron elevados porcentajes de
aceptabilidad en la identificacin. En este sentido, el anlisis de protenas
extracelulares mediante electroforesis en gel de poliacrilamida es un mtodo
adecuado para la identificacin de micrococaceas aisladas de embutidos de
cerdo ibrico y puede se aplicado para el control de calidad en la industria
crnica.
Bibliografa
Tunga, R., Banerjee, R. y Bhattacharya, B.C. 1999. Bioprocess Engineering 21, 447-452.
A - 448
Relacin ent!e la &oblacin mic!obiana y el !ado de ;id!oli$i$ de la$
&!oteina$ miofib!ila!e$ en *amone$ ib'!ico$ alte!ado$
Moreno H., Prez-Nevado F., Benito M.J., Aranda E., Ruiz-Moyano S. y Martn
A.
Nrea de :utrici;n ' ,romatolog-a. Escuela de 1ngenier-as Agrarias. UEY. 6ada=o$.
)ermogon%'a)oo.es
Actualmente, la implicacin de los microorganismos en la alteracin del jamn
denominada "cala est generalmente aceptada, y son varios los autores que
sealan a las enterobacterias como las principales responsables. No obstante,
se han descrito otros grupos microbianos que podran estar involucrados en
dicha alteracin, como son bacterias Gram negativas no entricas (GNNE),
micrococaceas y lactobacilos. Por otro lado, la textura est entre los
parmetros que se modifican en jamones afectados por "cala. Ello es debido,
en parte, a un mayor grado de hidrlisis de las protenas estructurales del
msculo.
El objetivo de este estudio es relacionar los recuentos de los grupos
microbianos encontrados en los jamones alterados, con el grado de hidrlisis
de las protenas miofibrilares de dichos jamones.
Treinta jamones con la alteracin conocida como "cala y divididos en 2 lotes
(12 y 24 meses de maduracin) fueron utilizados para este estudio. Para la
toma de muestras internas de jamn, extraccin de protenas con tampn de
fuerza molar alta y su anlisis mediante PAGE se utiliz el mtodo descrito por
Martn y col. (2004).
Tras el anlisis, se observaron un total de 23 bandas, algunas de las cuales
fueron identificadas como protenas miofibrilares. En jamones alterados con 12
meses de maduracin, los recuentos de enterobacterias se correlacionan
significativamente con la degradacin de la tropomiosina, al mismo tiempo que
producen un aumento de las bandas correspondientes a pptidos de 63 y 247
KDa. Las micrococaceas y los lactobacilos mostraron una actividad proteoltica
inferior a la de los otros grupos estudiados en este lote de jamones,
observndose una menor intensidad en bandas de protenas provenientes del
citoesqueleto de las miofibrillas (247 y 55 KDa), probablemente debido a una
menor degradacin de la estructura de las miofibrillas. Resultados similares
fueron observados en las muestras de jamones alterados con 24 meses de
maduracin. Las enterobacterias demostraron una correlacin inversa con la
mayora de las protenas miofibrilares (ms evidente para la protena C), y
positiva con los pptidos de 49, 24 y 23 KDa. Los recuentos de las
micrococceas y bacterias GNNE se correlacionan inversamente con
polipptidos inferiores a 100 KDa (93, 49 y 9 KDa) debido, probablemente, a
una mayor degradacin de los mismos por parte de estos grupos microbianos.
Respecto a los lactobacilos, grupo escasamente proteoltico, y mostraron una
correlacin inversa con el polipptido de 400 KDa, producto de la degradacin
de protenas del citoesqueleto de la miofibrilla. Por tanto, de los grupos
microbianos encontrados en jamones con "cala" son principalmente las
enterobacterias los microorganismos implicados en la degradacin de las
protenas miofibrilares.
Martn, A.; Crdoba, J.J.; Nez, F.; Benito, M.J. y Asensio, M.A. (2004). 1nternational
2ournal o# Food +icro,iolog' IB, 55-66.
A - 457
O&timi)acin de una t'cnica de +CR &a!a la deteccin !#&ida 5/ ; de
en!i:uecimiento7 de EC4T en &!oducto$ l#cteo$ de o"ino $ometido$ a
!ef!ie!acin%
a
Caro, .;
b
Mateo, J.;
c
Ra, J. y
b
Garca-Armesto, M.R.
a
Universidad Aut;noma del Estado de Hidalgo, +5=icoF
,
(pto. Higiene ' 7ecnolog-a de los
Alimentos '
c
(pto. 6ioIu-mica ' 6iolog-a +olecular, Universidad de >e;n. .400 >e;n. EspaLa. E/
mail0 d)tmga%unileon.es
Hasta el momento actual, no existe un consenso sobre la metodologa ms
efectiva para la deteccin rpida de Esc)eric)ia coli verotoxignicos (ECVT) a
partir de alimentos. Con el presente trabajo se pretente investigar el efecto de
diferentes tiempos de incubacin (0, 6 y 22 h) y medios de cultivo
(mTSB+novobiocina y TSB+extracto de levadura) sobre la eficacia de una
tcnica de PCR mltiple para la deteccin de ECVT, as como el efecto que
sobre la sensibilidad de la tcnica de PCR rpida (6 h de enriquecimiento a
42C) pudiera tener la refrigeracin de la leche inmediatamente despus de su
obtencin.
El lmite de deteccin de la PCR mltiple desarrollada en leche de oveja para
detectar los genes stx
1
y stx
.
que codifican la produccin de verotoxinas en los
dos caldos de enriquecimiento antes mencionados (Caro et al., 2002), se
increment en 3-4 log
10
despus de una etapa de enriquecimiento de 6 h de
incubacin a 42C con respecto a los resultados obtenidos a tiempo 0 h
(ausencia de incubacin). Por lo que se refiere al efecto de la composicin del
medio de enriquecimiento sobre el lmite de deteccin de ECVT, la tcnica de
PCR mltiple mostr una sensibilidad ligeramente superior (de
aproximadamente media unidad logartmica) cuando se utiliz TSB+extracto de
levadura, que cuando se emple mTSB+novobiocina. En relacin con el efecto
de la refrigeracin de la leche de oveja a 4C durante 72 h previamente a la
deteccin de ECVT, no se apreci efecto alguno sobre la sensibilidad de la
tcnica rpida de PCR cuando el enriquecimiento (6 h de incubacin a 42C) se
hizo en caldo no selectivo (TSB+extracto de levadura).
La tcnica de PCR mltiple despus de 6 h de enriquecimiento a 42C fue lo
suficientemente sensible para detectar niveles de ECVT < 0,02 ufc/ml de leche
de oveja. Estos niveles coinciden con los ms bajos encontrados en muestras
de leche de oveja naturalmente contaminadas (Caro, 2004). Por otra parte, la
presencia de agentes selectivos y, en particular, la presencia de sales biliares
puede haber influido en la menor sensibilidad de la tcnica de PCR partiendo
de mTSB+novobiocina. Finalmente, los resultados obtenidos al reproducir en el
laboratorio las condiciones de almacenamiento a refrigeracin a que se somete
habitualmente la leche de oveja en la explotacin, indicaron que dichas
condiciones parecen no afectar a la viabilidad de los ECVT estudiados (origen
lcteo ovino) y, por tanto, al lmite de deteccin de la tcnica rpida de PCR
(enriquecimiento a 42C durante 6 h).
Caro, .; Santos, J.A.; Alonso, A. Ra, J. y Garca-Armesto, M.R. (2002). XXV Congreso
de la Sociedad Espaola de Bioqumica y Biologa Molecular. Libro de Comunicaciones,
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Caro, . (2004). Tesis Doctoral. Universidad de Len.
BIODEGRADACI1N 2 BIODETERIORO
B - 2
Biode!adacin de emul$ione$ foto!#fica$ &o! bacte!ia$% E$tudio
mediante el m'todo indi!ecto de im&edancia%
Abrusci, C.
1
; Marquina, D.
1
; Santos,A.
1
, Del Amo, A.
2
; Catalina, F.
3
1
(epartamento de +icro,iolog-a 111, Facultad de 6iolog-a, Universidad !omplutense de +adrid, !<
2os5 Antonio :ovais, ., .8040/+adrid.
.
Filmoteca EspaLola, 1nstituto de la !inematogra#-a ' de las
Artes Audiovisuales, !< +agdalena 10, .801./+adrid.
3
(epartamento de FotoIu-mica, 1nstituto de
!iencia ' 7ecnolog-a de *ol-meros, !&1!, !<2uan de la !ierva 3, .8006/+adrid.
ca,rusci%,io.ucm.es
El patrimonio cinematogrfico por su naturaleza requiere condiciones
adecuadas de conservacin
(1)
. En trminos de temperatura y humedad, stas
han sido muy estudiadas tanto en pelculas de nitrato de celulosa (celuloide)
como en las de triacetato de celulosa (sndrome del vinagre). No obstante, en
cuanto a su biodeterioro exista una laguna de conocimientos. En documentos
tcnicos de Kodak
(2)
, se especifica que a humedades relativas superiores al
60% puede producirse la aparicin de microorganismos en los materiales. Por
ello, promovidos por Filmoteca Espaola y patrocinados por los laboratorios
Fotofilm-Madrid se llevaron a cabo, en una primera fase, trabajos
(3)
de
aislamiento e identificacin de bacterias y hongos presentes en muestras de
pelculas procedentes de archivos de Barcelona, Gran Canaria y Madrid, as
como, estudios de su eficiencia de biodegradacin sobre gelatinas en
disolucin
(4)
. En esta segunda fase del trabajo se ha puesto a punto la tcnica y
la metodologa necesaria para la valoracin de CO
2
por medidas indirectas de
impedancia, as como su aplicacin al estudio de biodegradacin de
emulsiones cinematogrficas. Los estudios de impedancia se emplean en
microbiologa tanto de forma directa como indirecta en muchas aplicaciones de
la industria farmacutica y de alimentacin, sin embargo no se haba empleado
dentro del campo del biodeterioro y biodegradacin de materiales de inters en
el patrimonio. A travs del aumento de la impedancia con el tiempo de una
disolucin de KOH por captura del CO
2
producido por el metabolismo
microbiano, se ha podido calcular la velocidad de biodegradacin de la
emulsin fotogrfica para las bacterias gelatinasa positivas (&tap)'lococcus
)ominis, 6acillus am'loliIue#aciens, 6.su,tilis, 6.megaterium, 6.pic)inot'i,
6.pumilus) presentes en los materiales.
Refe!encia$8 (1) Catalina, F., Del Amo, A., 1999. Soportes cinematogrficos
basados en triacetato de celulosa. Filmoteca Espaola, Ed. bilinge, SBN: 84-
86877-21-0, Madrid; (2) Kodak publication AE-22. Prevention and Removal of
Fungi: Prints and Films; (3) Abrusci, C., Martin-Gonzlez, A., Del Amo, A.,
Catalina, F., Collado, J., Platas,G. 2005. solation and identification of bacteria
and fungi from cinematographic films. ntern. Biodet. Biodegrad. (in press); (3)
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Biodegradation of type-B gelatine by bacteria isolated from cinematographic
films. A viscosimetric study. Pol. Deg. Stab., A/8 283-291.
6iodegradaci;n ' 6iodeterioro 116
B - 29
Eficacia de la A$ociacin S.FFC = Bio$u!factante AD. en la
biode!adacin de ;id!oca!bu!o$ de un c!udo ti&o Mi!HuH
Calvo C, Toledo FL and Gonzlez-Lpez J
(epartamento de +icro,iolog-a, Facultad de Farmacia, 1nstituto del Agua Universidad de 4ranada.
!< ?am;n ' !a=al nZ 4. 1801 4ranada. ccalvo%ugr.es
La biorrecuperacin de sistemas contaminados con fuel es posible gracias a la
biodegradabilidad de los hidrocarburos que lo componen y al hecho de que los
microorganismos degradadores pueden ser enriquecidos en la mayora de los
ambientes o ecosistemas. Los componentes del petrleo se caracterizan por su
baja solubilidad en agua y en consecuencia estar poco disponible. Los
biosurfactantes bacterianos capaces de inducir la formacin de emulsiones
aumentan la tasa de biodegradacin. Adems, al ser biodegradables y
ambientalmente compatibles poseen un inters creciente para su aplicacin en
la biorrecuperacin de zonas contaminadas por hidrocarburos.
El objetivo de este estudio ha sido evaluar a escala de laboratorio, la capacidad
de estimulacin del producto S200 C asociado al biosurfactante AD2, sobre la
biodegradacin de un crudo de petrleo tipo Kirkuk. Para ello, se disearon
microcosmos a escala de laboratorio donde se compar la biodegradacin
intrnseca (modelo control) con la biodegradacin de los modelos tratados con
S200 C y con S200 C + Biosurfactante AD2. Dicha valoracin se ha realizado
atendiendo a dos parmetros:
1. Evolucin de la microbiota autctona durante las 8 semanasque duraron las
experiencias. 2. Reduccin de la concentracin de hidrocarburos. En estos
anlisis se han determinado los TPH (hidrocarburos totales del petrleo) por
gravimetra y por cromatografa de gases/ espectrometra de masas.
gualmente se compararon los ndices pristano/C17 y C18/Fitano.
Los resultados obtenidos mostraron que el tratamiento con S200C +
biosurfactante AD2 supona una estimulacin del crecimiento microbiano en un
logaritmo, desde la primera semana de incubacin. Sin embargo, no hubo
diferencias apreciables entre los ensayos tratados con S200C y el control.
La determinacin gravimtrica de TPH mostr una evolucin similar entre el
control y el S200C, con una disminucin de 68 a 38 mg TPH, mientras que el
tratamiento combinado la disminucin fue de 68 a 12 mg de TPH. La
cromatografa mostr una elevada eficacia, prxima al 100%, en la eliminacin
de hidrocarburos totales, alcanos e isoalcanos. Los ndices pristano/C17 y
C18/Fitano, indicaron tambin una notable estimulacin del proceso de
biorremediacin tras el tratamiento combinado. S200C Biosurfactante AD2.
El S200C no es un sustitutivo de los nutrientes sino que estimula de forma
especfica el crecimiento de las bacterias degradadoras. Los resultados
obtenidos muestran la gran eficacia de la asociacin S200C- Biosurfactante
como acelerador del proceso de biorremediacin.
Refe!encia$
1. Ron E and Rosenberg E.2002. Curr. Opinion Biotechnol. 13:249-252
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B - 70
+!o&iedade$ bacte!icida$ de ace!o$ ino-idable$ aleado$ con cob!e y
niobio
Baena, M..
1
, Mrquez, M.C.
1
, Matres, V.
2
, Guio, M.J.
2
, Botella, J.
2
y Ventosa,
A.
1
1
(epartamento de +icro,iolog-a ' *arasitolog-a, Facultad de Farmacia, Universidad de &evilla,
4101. &evilla. E/mail0 cmarIue$%us.es.
.
!entro de 1nvestigaci;n ' Ensa'os, Acerinox &.A. Villa de
*almones, 1139 >os 6arrios B!"di$C
Los estudios relativos al efecto de los microorganismos en los procesos de
corrosin de los aceros inoxidables son muy escasos y requieren de una
perspectiva pluridisciplinar. Uno de los mayores problemas que existen es la
necesidad de disponer de mtodos estandarizados de determinacin de la
accin biocida de distintos elementos metlicos que forman parte de los aceros
inoxidables sobre los microorganismos.
El objetivo de este trabajo ha sido el estudio de la actividad bactericida de
nuevos aceros inoxidables que sean resistentes a la accin de los
microorganismos debido al carcter biocida que, bajo ciertas circunstancias,
tendran adiciones de elementos tales como el cobre con pequeas cantidades
de niobio. Para ello se ha modificado la composicin elemental de los aceros
inoxidables convencionales (AS 304), agregndoles las cantidades adecuadas
de cobre y niobio, sometindolos posteriormente a distintos tratamientos
trmicos de envejecimiento que implican la formacin de precipitados
intermetlicos de cobre en la matriz de los aceros. Este cobre es capaz de
liberarse al medio externo a travs de la capa pasiva y producir su efecto
bactericida. Si no se realizara este tratamiento, el cobre se encontrara disuelto
en la matriz del acero, dificultndose la accin favorable de los iones cobre.
Una vez obtenidas las muestras de acero inoxidable aleadas con un 3'8% de
cobre y un 0'1% de niobio, se estudi la posible capacidad bactericida de los
mismos y se observ que slo las muestras tratadas a 700 y 800 C durante
100, 200, 300 y 400 horas, son capaces de inhibir el crecimiento bacteriano
sobre su superficie y en el plancton. Los porcentajes obtenidos en todas estas
muestras de acero inoxidable oscilan entre el 99 y el 100% en la mayora de las
cepas bacterianas estudiadas. Se ha determinado que dichos aceros
inoxidables liberan al medio una cantidad de cobre superior a 0'1 ppm, la cual
es necesaria para que stos ejerzan un efecto de inhibicin microbiana.
Adems, se han detectado mediante microscopa electrnica de barrido,
precipitados de cobre en la matriz de estos aceros que aumentan en nmero y
tamao cuanto mayor es la temperatura y el tiempo de tratamiento trmico de
los mismos.
B - 88
Rol fi$iolico de una $alicilato ;id!o-ila$a adicional (nica en
Pseu$omonas stut0eri
Lanfranconi,M.P., Martn-Cardona C., Christie-Oleza J.A., Nogales B., Lalucat
J. y Bosch R.
+icro,iolog-a, (to 6iolog-a, Universitat de les 1lles 6alears BU16C !ta Valldemossa Pm ,3 E 01..
*alma de +allorca. e/mail0 marianalan#ranconi%'a)oo.com.ar
El naftaleno es uno de los componentes principales del petrleo y puede llegar
fcilmente al medio ambiente por vertidos accidentales durante la extraccin o
transporte de combustibles fsiles. Entre los microorganismos degradadores de
este contaminante se encuentra *seudomonas stut$eri AN10, cepa aislada a
partir de sedimentos marinos del Mediterrneo Occidental. En esta bacteria, al
igual que en los arquetipos *. putida G7 y *. putida NCB9816, los genes
implicados en la degradacin de naftaleno se encuentran organizados en tres
operones: na)A6F!E( (degradacin de naftaleno a salicilato)
na)47H1:>D+P2 Bdegradacin de salicilato a piruvato y acetil CoA) y na)?
(regulador de ambos operones). Adicionalmente a la ruta "clsica de
degradacin, en *. stut$eri AN10 se ha encontrado un gen catablico, na)V,
que codifica para una nueva salicilato hidroxilasa. Este gen, presente en todas
las cepas de *. stut$eri degradadoras de naftaleno analizadas, est flanqueado
por dos secuencias de tipo S5 que le confieren una estructura de tipo
transposn y que podran estar involucradas en procesos de transferencia
gentica horizontal.
En este trabajo se pretende determinar el papel fisiolgico que pudiera
representar la presencia de la salicilato hidroxilasa NahW, en *. stut$eri. Para
ello se han generado mutantes por insercin de uncasete de LacZ-Km en el
gen na)V de dos cepas de *. stut$eri: cepa AN10 y cepa AN11. Los
resultados ponen de manifiesto que el tiempo de duplicacin de los mutantes
es mayor que el obtenido para las cepas salvajes. Esto revelara la importancia
de poseer dos salicilato hidroxilasas como son NahG y NahW. La adquisicin
de una nueva salicilato hidroxilasa representara una ventaja metablica para la
bacteria frente a condiciones ambientales extremas, por ejemplo, altas
concentraciones de hidrocarburos aromticos.
Actualmente se estn llevando a cabo experimentos que puedan explicar las
diferencias observadas en curvas de crecimiento entre las cepas salvajes y los
mutantes NahW
-
.
6iodegradaci;n ' 6iodeterioro 1.0
B - 152
La biot!an$fo!macin de aceite$ t-ico$ y &eli!o$o$ !educe la
concent!acin de &olifenole$%
Jimnez P.A.; Llinares F., Montadas A., Garca de los Ros J., Redondo, P.,
Daz R.
Universidad &an *a,lo !EU., Fac. Farmacia, *.D. 6ox 6 6oadilla del +onte, +adrid.
pgimgom%ceu.es
La produccin de residuos en Espaa supera los 280 millones de
toneladas/ao, de las cuales, aproximadamente el 5% se deben a los
generados en la industria. Una gran parte procede de la industria olecola. Tan
slo en Andaluca, se recogenms de13.000 toneladas/ao de aceites usados.
El material en estudio es el producto final de una emulsin de aceites de
desecho del sector hostelero, extrado por un gestor de Residuos Txicos o
Peligrosos. Este residuo est legalmente considerado como peligroso (Ley
10/98 de Residuos; Directiva Comunitaria del Consejo 91/156).
Algunos de los componentes sustancialmente txicos son los polifenoles, con
baja tasa de degradacin, principalmente biodegradables por microorganismos.
Los objetivos de nuestro trabajo han sido la identificacin de los
microorganismos presentes en el residuo y la determinacin su capacidad para
minimizarla concentracin fenlica.
Se sembraron muestras del residuo en un medio slido de agar con el propio
aceite como material degradable a pH 7 (5 puntos por encima del pH de
origen). Las colonias aisladas se identificaron mediante secuenciacin de la
fraccin de ADN que codifica para RNA 16S y posterior blasteo en GenBanK
database del NCB, resultando 8 aislados de 6acillus su,tilis y 6 de 6.
lic)eni#ormis. Se encontraron adems 4 cepas de la levadura !andida curvata,
identificada segn sistema automatizado de BioMrieux (D 32 C).
Homogeneizados de 100ml del residuo, ajustados a pH7, se sembraron
individualmente con estos aislados. Se realizaron controles sin inocular y
controles del residuo donde se inocul un suelo no estril de pastizal nitrfilo
(T) y un segundo en el que se inocul una cepa de *seudomonas aeruginosa
procedente de suelo libre. Tras 2 semanas de incubacin en agitacin a 28C,
las muestras se filtraron y se determin la concentracin total de fenoles por el
mtodo de Folin-Ciocalteau (Orthofer y Lamela, 1999). El anlisis de la
varianza de los resultados muestra que 17 de las cepas utilizadas, reducen
significativamente (p>0.05) el contenido de fenoles, con una disminucin del
2055% de la concentracin inicial. El inculo realizado con el suelo no produjo
un descenso significativo.
Se ha comprobado existen cepas de bacterias y levaduras aisladas del residuo
que son eficaces en la reduccin del contenido fenlico del mismo, no as el
suelo control. En conclusin, se aconseja aplicar un tratamiento microbiolgico
en este tipo de residuos para su transformacin, anterior a sus usos definitivos,
entre los que se propone biocompost.
B - 205
0$o de 1yxococcus xanthus &a!a la con$olidacin de &ied!a o!namental%
A&!o-imacin al t!atamiento Nin $ituO%
Jimnez Lpez C.
1
, Pascolini C.
1
, Carrillo Rosa, F.J.
2
, Rodrguez Navarro
C.M.
2
, Rodrguez Gallego M.
2
y Gonzlez-Muoz, M.T.
1
1
(pto. +icro,iolog-a '
.
(pto. +ineralog-a ' *etrolog-a. Facultad de !iencias. Universidad de
4ranada. !ampues de Fuentenueva s<n. 1801 4ranada
El deterioro de las piedras arquitectnicas y escultricas es consecuencia de la
accin de fenmenos fsicos, qumicos y/o biolgicos que inducen su
progresiva destruccin, ocasionando la prdida de elementos del patrimonio
histrico-artstico de valor incalculable. Nuestro grupo de trabajo de la
Universidad de Granada, que desde hace aos investiga la produccin de
minerales inducidos por +'xococcus xant)us, describi en 2003 (Rodriguez-
Navarro et al.) un tratamiento para consolidar-proteger calcarenita utilizando
esta bacteria, que por sus excelentes resultados tuvo un notable impacto en la
comunidad cientfica interesada en estos temas. Basndonos en los resultados
de este trabajo, se ha estudiado el efecto de la microbiota autctona de la
piedra cuando el tratamiento se realiza al aire libre, en una aproximacin al
tratamiento "in situ de rocas ornamentales alteradas. Con esta finalidad se
realizaron ensayos con piedra de calcarenita alterada procedente de un
pinculo de la Catedral de Granada. Lminas de este pinculo, estriles y sin
esterilizar se introdujeron verticalmente en placas Petri conteniendo medio de
cultivo, en ambos casos, inoculado con +. xant)us y sin inocular. La parte
inferior de la piedra estaba inmersa en el medio de cultivo y la parte superior se
humedeci una vez al da con medio de cultivo, inoculado o sin inocular, segn
el caso, durante los 7 das que dur el experimento. Los ensayos, para evitar la
exposicin a la luz y al viento, se hicieron protegiendo las lminas de piedra
con una cmara de corchopn. Se hizo un seguimiento del desarrollo de la
poblacin microbiana tomando muestras del medio de cultivo cada da y, al
finalizar el ensayo, se analizaron las lminas de piedra para conocer la
mineraloga y morfologa del nuevo precipitado y su efecto sobre la porosidad
de la piedra. Las lminas de piedra se estudiaron mediante difraccin de Rayos
X, Microscopio Electrnico de Barrido y porosimetra. Los resultados obtenidos
indican que: a) +. xant)us ejerce algn tipo de control sobre el desarrollo de la
microbiota autctona de la piedra; b) los microorganismos que se desarrollan
en las condiciones ensayadas fueron mayoritariamente bacterias Gram
positivas, esporuladas y no esporuladas, y que presentan, en condiciones de
cultivo puro, diversos grados de capacidad carbonatognica; c) el material de
nueva formacin es calcita; d) existe un efecto sinrgico entre +. xant)us y la
microbiota autctona de la piedra que potencia el proceso de carbonatognesis
y la compactacin de nuevo cemento calctico, a la vez que respeta los poros
de la piedra original. Por todo ello se concluye que la microbiota autctona de
la piedra, en las condiciones ensayadas y en presencia de +. xant)us,
contribuye de forma positiva al efecto buscado.
Rodriguez-Navarro C, Rodriguez-Gallego M, Ben Chekroun K, and Gonzalez-Munoz MT
(2003). Appl. Environ. Microbiol. 69 (4): 2182-2193.
6iodegradaci;n ' 6iodeterioro 1..
B - 281
De!adacin in vitro de lo$ com&onente$ de lo$ di$co$ com&acto$ &o! un
;ono ai$lado de un CD biodete!io!ado
Romero, E.
1
, Garca-Guinea J.
2
, Martnez, A.T.
1
y Martnez, M.J.
1
1
!entro de 1nvestigaciones 6iol;gicas, !&1!, ?amiro de +ae$tu 9, .8040 +adrid,
.
+useo :acional
de !iencias :aturales, !&1!, 2os5 4uti5rre$ A,ascal ., .8006 +adrid Be/mail0
eromero%ci,.csic.esC
Este estudio comenz con el aislamiento de un hongo a partir de un disco
compacto (CD) biodeteriorado encontrado en Belice. En este CD se
observaban a simple vista varias zonas deterioradas que comenzaban desde
los bordes y afectaban principalmente a la capa de metal reflectante,
permaneciendo intacta la capa de laca y pintura.Tras esterilizar en superficie
este CD, el nico microorganismo que creci en diferentes medios de cultivo
fue un hongo, identificado morfolgicamente como un hongo de tipo
4eotric)um, que corresponde probablemente a la forma imperfecta de un
basidiomiceto del gnero 6=erOandera (por su homologa en la secuencia de
DNA ribosmico).
Utilizando diferentes tipos de CDs y condiciones de incubacin adecuadas, el
hongo aislado produjo en el laboratorio un patrn de degradacin similar al
observado en el CD de Belice. Todos los CDs estn constituidos por una base
de policarbonato, una capa metlica reflectora y una capa protectora de laca.
La principal diferencia es que en los CD-audio la informacin se encuentra
grabada en el policarbonato (informacin binaria en forma de "pits y "lands) y
en los CD-R existe una capa de colorante debajo de la capa de laca que es en
la que se graba la informacin mediante la quemadura de un lser. Los
resultados obtenidos mediante microscopa electrnica con microanlisis de
rayos X muestran que en los CD-R desaparece la capa de metal y se altera la
capa de colorante (la secrecin de cidos y enzimas producidas por los
basidiomicetos puede estar implicada en el proceso) y que en los CD-audio,
adems de desaparecer la capa de metal, se altera la estructura de los "pits y
"lands, sugiriendo que el policarbonato se est degradando. Estudios
realizados en cultivo lquido con fragmentos de CDs y diferentes tipos de
policarbonato han corroborado este resultado ya que, utilizando HPLC y una
columna de fase reversa, se ha detectado la presencia de bisfenol-A (precursor
del polmero) en los cultivos. Dado que existen muy pocos microorganismos
capaces de degradar este polmero, se pretende caracterizar el sistema
enzimtico implicado en el proceso y estudiar las posibles aplicaciones
biotecnolgicas que puede tener este microorganismo.

Agradecimientos: Este trabajo se est financiando con el proyecto BO2002-
12658. E. Romero agradece su financiacin BAYER-Polmeros S.L. y una beca
predoctoral 3P del CSC.
B - 283
0na nit!itoP$ulfito !educta$a :uim'!ica fo!ma &a!te del o&e!n de ene$
&a!a la !e$i$tencia al cianu!o en Pseu$omonas pseu$oalcaligenes
CECT@EBB%
Quesada A., Guijo M.., geo M.., Merchn F. y Blasco R.
(epartamento de 6ioIu-mica, 6iolog-a +olecular ' 4en5tica. Facultad de Veterinaria. Universidad
de Extremadura. Avenida de la Universidad &:. 1001/!"ceres.
El cianuro ha estado presente en la biosfera desde tiempos remotos, existiendo
organismos capaces de tolerar sus efectos txicos e incluso de asimilarlo
utilizndolo como fuente de nitrgeno. Como mecanismo de tolerancia al
cianuro se utilizan oxidasas terminales resistentes a este compuesto, mientras
que para su asimilacin se emplean enzimas capaces de atacar el triple enlace
C=N. La cepa CECT5344 de *seudomonas pseudoalcaligenes es capaz de
crecer en presencia de elevadas concentraciones de cianuro, utilizndolo como
fuente de nitrgeno en medios inorgnicos a pH alcalino y suplementados con
acetato como fuente de C.
La aparicin de un citocromo especial de tipo bd en bacterias conduce a la
induccin de la respiracin resistente al cianuro. Esta actividad es el producto,
al menos, de la expresin de los genes cioA y cio6, que se encuentran
agrupados en un opern cuya presencia es ubicua en procariotas, y con una
funcin natural que parece ser la de facilitar la respiracin bajo concentraciones
limitantes de O
2
.
En este trabajo se ha clonado la regin genmica de la cepa CECT5344 de
*seudomonas pseudoalcaligenes que contiene el opern de genes para el
citocromo bd de este organismo, y se ha comenzado la caracterizacin de este
sistema. En un fragmento de 7,0 Kb de DNA de esta bacteria se han
identificado 7 genes, entre los que se encuentra un opern que contiene cinco
marcos abiertos de lectura incluyendo los genes cioA y cio6. En su extremo 5',
el opern se inicia en un gen para una protena quimrica de 669 aminocidos,
que presenta en su extremo N-terminal la secuencia de 119 residuos de un
polipptido de funcin desconocida, seguida de los 550 aminocidos
correspondientes a una nitrito o sulfito reductasa dependiente de ferredoxina.
Estas enzimas catalizan la reduccin de nitrito (sulfito) hasta amonio (sulfuro)
mediante transferencia de 6 electrones utilizando ferredoxina como donador
reducido, estando por tanto implicadas en la asimilacin de formas oxidadas
del nitrgeno y del azufre. No obstante, su agrupamiento y co-expresin con los
genes de resistencia al cianuro de *seudomonas pseudoalcaligenes
CECT5344 sugiere un posible nuevo papel para la enzima quimrica. Se
presentan los primeros resultados referentes a la caracterizacin preliminar del
agrupamiento gnico, incluyendo estudios de mutagnesis y de regulacin de
la expresin de algunos de sus productos.
Trabajo financiado por el MEC, proyecto n BMC2002-04126-C03-01.
B - 332
+!o&iedade$ f,$ico=:u,mica$ y cin'tica$ de la en)ima laca$a inmo"ili)ada
de usarium proliferatum
Gonzlez Arzola K. y Falcn Sanabria M. A.
(epartamento de +icro,iolog-a ' 6iolog-a !elular. Facultad de Farmacia. Universidad de >a
>aguna. Avenida Astro#-sico Francisco &"nc)e$. 38.06. >a >aguna. 7eneri#e. !orreo electr;nico0
Oatiga%)otmail.com
Las lacasas (EC 1.10.3.2) son glicoprotenas producidas por algunos hongos y
bacterias, que catalizan la oxidacin de diferentes compuestos fenlicos. Son
enzimas excepcionalmente verstiles, que pueden ser empleadas en diversos
procesos industriales (bioblanqueo y depuracin de los efluentes de industrias
papeleras, degradacin de compuestos fenlicos contaminantes, etc).
Actualmente, los estudios van dirigidos a la bsqueda de nuevas lacasas con
mayor estabilidad, y, sobre todo, al empleo de enzimas inmovilizadas. La
inmovilizacin no solo contribuye a la estabilizacin de la protena, sino que
facilita la reaccin enzimtica a gran escala. Los soportes empleados para ello
son muy diversos: celulosas modificadas, chitosano, carbn activado, perlas de
vidrio, entre otros (1). La unin se puede efectuar a travs de enlaces
covalentes con el soporte o con un agente entrelazante, o bien por adsorcin
inica a la matriz. El objetivo de este trabajo consiste mejorar las propiedades
de la enzima lacasa de Fusarium proli#eratum a travs de su inmovilizacin
sobre perlas de vidrio, empleando glutaraldehido como agente de
entrecruzamiento (2).
La actividad lacasa inmovilizada present un pH ptimo ms bsico (4,5) que la
enzima libre (3,5), as como una temperatura ptima de reaccin superior (70C
frente a los 60C de la enzima libre). Asimismo, la enzima inmovilizada
mantuvo un 100% de su actividad tras 2 horas de incubacin en un rango de
pH de 5 a 9, y alrededor de un 90% a pH entre 2 y 4, en comparacin con la
lacasa libre (60 y 50%, respectivamente). De la misma forma, cuando se
someti durante 2 horas a 30 y 40C conserv ntegra su actividad enzimtica,
perdiendo solo un 40% de la misma cuando se trat a 50C. Cabe destacar que
la enzima resisti el tratamiento a 80C (15% de actividad). Por otra parte,
tambin se mejor la afinidad por el sustrato, ya que la constante de Michaelis
(Km) disminuy 3 veces en comparacin con la lacasa libre y la velocidad
mxima de la reaccin se increment 17 veces, lo que da lugar a una eficiencia
cataltica 38 veces superior. Este ltimo aspecto contrasta con los descritos
para otras lacasas fngicas.
En conclusin, la lacasa inmovilizada presenta una excelente estabilidad en
condiciones extremas de pH y temperatura, as como una mejora sustancial de
sus propiedades cinticas, lo que la convierte en un catalizador ideal para su
aplicacin industrial.
(1) Durn N., Rosa M. A., D'Annibale A. y Gianfreda L. (2002). Appications of
laccases and tyrosinases (phenoloxidases) immobilized on differents supports:
a review. Enz. Microbiol. Technol. 31: 907-931.
(2) Leonowicz a., Sarkar J. M. y Bollag J.-M. (1988). mprovements in stability
of an immobilized fangal laccase. Appl. Microbiol. Biotechnol. 29: 129-135.
B - 334
E$tudio del &otencial lininol,tico de do$ ce&a$ de usarium proliferatum
ai$lada$ de dife!ente$ ;#bitat$
Carnicero A.
1
, Gonzlez K.
1
, Anderson A.
2
, Kwon S-.
2
y Falcn M.A.
1
B1C (epartamento de +icro,iolog-a ' 6iolog-a !elular. Facultad de Farmacia. Universidad de >a
>aguna. Avda. Astro#-sico Fco. &"nc)e$ s<n. 38.06 >a >aguna 7eneri#e. E/mail ma#alcon%ull.es.
.C (epartment o# 6iolog'. U7AH &tate Universit'. >ogan, U7 843../3303, U.&.A.
Fusarium proli#eratum ocupa diversos nichos ecolgicos. La cepa MUCL 3197
(TF) fue aislada de suelos forestales, es ligninoltica (1) y est
taxonmicamente relacionada (2) con la cepa NRRL 31071 (UT), que se aisl
como un endofito de semillas de trigo, produciendo necrosis en plantas
sometidas a estrs. Durante el proceso infeccioso, UT produce diversas
isoenzimas de lacasa (intra y extracelulares), tambin detectadas en cultivos
realizados in vitro con fuente de carbono limitada (glucosa), as como en
medios con bajo contenido en nitrgeno o elevado contenido en ambos
elementos. Nuestro objetivo fue estudiar si la cepa TF tambin produce esas
isoenzimas de lacasa y establecer el potencial ligninoltico de la cepa UT.

Sus capacidades ligninolticas se estudiaron en medios definidos
suplementados con tres tipos de ligninas sintticas, marcadas en diferentes
posiciones con
14
C, as como con una lignina natural marcada con el mismo
radioistopo. Adems, dichos medios presentaron diferentes relaciones de C/N
(1,3 y 13) y en sus sobrenadantes se valor la enzima lacasa, as como otras
actividades ligninolticas. Tambin se estudi la produccin de lacasa en
extractos miceliares.

Ambas cepas mostraron similares capacidades para degradar las distintas
ligninas utilizadas, mostrando la mxima tasa de mineralizacin durante la fase
logartmica de crecimiento. Por otra parte, en las dos cepas se detect la
produccin de lacasas, especies activas de oxgeno y aril alcohol oxidasa. Sin
embargo, sus mximos valores de produccn no coincidieron en el tiempo con
la mxima tasa de mineralizacin por da.

Como conclusin se propone que la regulacin de la produccin de lacasas
esta condicionada por la relacin de C/N del medio, aspecto que tambin
influye en la aparicin y alcance de las tasas de mineralizacin a
14
CO
2
detectadas en los cultivos. Estos hechos pueden resultar ventajosos para
ambas cepas en sus hbitats naturales.

1.- Regalado V., Rodrguez A., Perestelo F., Carnicero A., De La Fuente G. and
Falcn M.A. (1997) Lignin degradation and modification by the soil-inhabiting
fungus Fusarium proliferatum. Appl. Environ. Microbiol. 63, 3716-3718.
2.- Kwon, S-., von Dohlen, C. and Anderson, A.J. (2001) Gene sequence
analysis of an opportunistic wheat pathogen, an isolate of Fusarium
proliferatum. Can. J. Bot. 79, 1115-1121.
B - 428
>e!mentacin en e$tado $lido de &ul&a de caf' con di$tinta$ ce&a$ de
Streptomyces% +o$ible$ a&licacione$ del !e$iduo fe!mentado
Orozco, A.L.
1
, Guevara, O.
1
, Prez Leblic, M..
2
, Arias, M.E.
2
y Rodrguez, J.
2
1
(epartamento de 6iolog-a. U:A: >e;n. :icaragua.
.
(epartamento de +icro,iolog-a '
*arasitolog-a. Facultad de Farmacia. .881 Alcal" de Henares. +adrid. EspaLa. E/mail0
=uana.rodrigue$%ua).es
El caf es uno de los principales cultivos de pases de Amrica Latina como es
el caso de Nicaragua. El 40% del peso hmedo de la cereza de caf
corresponde a una envuelta dura denominada pulpa de caf. Esta cubierta, que
se elimina durante el procesado del caf, constituye un residuo txico para el
medio ambiente, debido a su contenido en cafena, taninos y polifenoles. En los
ltimos aos, se ha incrementado notablemente el inters por la utilizacin de
este residuo para la obtencin de productos de alto valor aadido (i.e. etanol),
para la alimentacin animal y para la produccin de enzimas y aromatizantes.
Estudios preliminares realizados en nuestro Laboratorio demostraron la
capacidad de los actinomicetos para colonizar la pulpa de caf. El objetivo de
este trabajo es determinar los posibles usos de este residuo, tras su
fermentacin en estado slido con distintas cepas de estreptomycetos.
Los microorganismos utilizados en este estudio han sido &treptom'ces UAH
23, &. UAH 47 y &. UAH Nic. Matraces que contenan 3 gramos de pulpa de
caf y 0,5 gramos de yuca fueron inoculados con 10 mL de un preinculo de 48
horas crecido en Medio Basal Salino de Crawford. Los matraces de incubaron a
45 C (&. UAH Nic) y a 28 C (&. UAH 23 y &. UAH 47) durante 10 das.
Diariamente se estim el crecimiento de los microorganismos sobre los
sustratos mediante la medida del CO
2
desprendido. Tras 10 das de incubacin,
se determin la prdida de peso del sustrato, su contenido en nitrgeno y la
digestibilidad proteica. En los extractos enzimticos obtenidos a partir de los
sustratos transformados se valoraron los azcares reductores, las protenas y
las actividades enzimticas xilanasa, mananasa, amilasa y lacasa. Las
modificaciones producidas por las cepas sobre el sustrato se analizaron por Py-
GC-MS. As mismo se realizaron observaciones al microscopio electrnico de
barrido de los residuos fermentados.
Las tres cepas ensayadas produjeron una extensa colonizacin del residuo,
alcanzndose el mximo crecimiento de la cepa UAH Nic el 3
er
da de
incubacin (4,73% CO
2
) y el 4 da de incubacin para las cepas UAH 47 y
UAH 23 (4,06 y 3,64% CO
2
, respectivamente). El tratamiento de la pulpa de
caf con las distintas cepas de &treptom'ces produjo un enriquecimiento
proteico del sustrato, especialmente cuando se utiliz la cepa UAH Nic (33%).
En los extractos enzimticos obtenidos a partir de los residuos fermentados por
las tres cepas se han detectado las actividades enzimticas xilanasa y amilasa,
destacando los elevados niveles de actividad xilanasa producidos por las cepas
UAH 23 y UAH Nic (20,6 y 11,41 U/g de pulpa, respectivamente). Por el
contrario, slo la cepa UAH 47 produjo actividad mananasa.
6iodegradaci;n ' 6iodeterioro 1.
B - 435
Bio!!emediacin Nin $ituO de aua$ $ubte!!#nea$ contaminada$ con
;id!oca!bu!o$ del &et!leo
Menndez D.
1
, Pelez A..
1
, Gallego J.L.
2
y Snchez J.
1
1
Nrea de +icro,iolog-a. Facultad de +edicina. Universidad de Dviedo. !<2uli"n !laver-a, s<n E
33006 Dviedo BAsturias/EspaLaC, uo48609%uniovi.esF
.
!ampus de +ieres. Universidad de
Dviedo. !< 4on$alo 4ut. G., s<n E 33600 +ieres BAsturias/EspaLaC.
La biorremediacin "in situ se ha usado durante aos para eliminar
contaminantes orgnicos en suelos y aguas subterrneas. Concretamente, la
bioestimulacin potencia la capacidad de los microorganismos de utilizar
hidrocarburos del petrleo como nica fuente de carbono y energa, reduciendo
el riesgo medioambiental. La aplicabilidad de la biorremediacion depende en
primer lugar de las poblaciones microbianas indgenas presentes, as como de
las condiciones de aeracin, temperatura, y nutrientes ms favorables, de tal
forma que estimulen la degradacin biolgica de los hidrocarburos. Los autores
junto con la empresa GEA-TM (Madrid), han aplicado tcnicas de
bioestimulacin en el subsuelo de una factora (Navarra, Espaa) contaminada
durante aos con diferentes mezclas de hidrocarburos derivados del petrleo
(diesel, fuel-oil y aceite lubricante) debido a la actividad industrial desarrollada
por la misma. nicialmente se llevaron a cabo tratamientos fsicos para su
eliminacin (bombeo entre otros), pero los contaminantes, aunque bastante
biodegradados, an persistan. En base a esto se diseo un programa de
biorremediacin. La caracterizacin biogeoqumica de la zona (nutrientes,
oxgeno disuelto, poblaciones microbianas, etc.) sugiri como mtodo ms
adecuado, la adicin de un compuesto que liberase oxgeno, un fertilizante
oleoflico y un surfactante comercial para reducir los niveles de contaminantes
en el agua.

El proceso de bioestimulacin se evalu de forma continua durante cuatro
meses, analizando la diversidad y actividad microbiana mediante recuento en
placa, enriquecimiento selectivo en medio sinttico con los contaminantes
como nica fuente de carbono, microscopa de fluorescencia de barrido lser
de las bacterias teidas con indicadores fluorescentes y tcnicas moleculares
como anlisis por T-RFLP. Adems se control el consumo de nutrientes y los
ndices de biodegradacin mediante anlisis qumico (tcnicas de CG-SM con
biomarcadores hopanos e isoprenoides-). Tras varios meses de tratamiento,
los anlisis qumicos mostraron una reduccin en los niveles de hidrocarburos
acompaada de un incremento significativo en el nmero de microorganismos
con capacidades degradativas. El aislamiento y caracterizacin de estas
bacterias, permitir evaluar la posibilidad de disear consorcios de
microorganismos degradadores de hidrocarburos potencialmente tiles en
futuros experimentos de bioaumentacin.
B - 437
A&licacin de la laca$a &!oducida &o! Streptomyces cyaneus CECT EEE@
y de $i$tema$ laca$aPmediado! en la decolo!acin de colo!ante$ te-tile$%
Hernndez, M., Molina, J.M., Moya, R., Rodrguez, Y., Seor, A., Troyano, N. y
Arias, M.E.
(epartamento de +icro,iolog-a. Universidad de Alcal". Alcal" de Henares, .881 +adrid. E/mail0
manuel.)ernande$%ua).es
Los efluentes vertidos por la industria textil causan un importante impacto
ambiental ya que alteran la transparencia del agua y la solubilidad de los
gases. Los colorantes textiles empleados tienen estructuras qumicas muy
diversas, y en funcin de sus grupos cromognicos se clasifican en colorantes
de tipo azo, ptalocianina, antraquinona, etc. Esta diversidad estructural hace
que el tratamiento de los efluentes resulte complejo y a menudo ineficaz,
sobretodo los que contienen colorantes de tipo azo. En la actualidad, la
oxidacin enzimtica de estos colorantes se considera una alternativa para el
tratamiento de los vertidos de la industria textil.
Entre las estrategias oxidativas que se consideran hoy en da destaca el
empleo de lacasas (EC 1.10.3.2) de origen microbiano por la amplia variedad
de compuestos fenlicos que oxidan, as como compuestos no fenlicos a
travs de mediadores de oxidacin. En este sentido, la eficacia de lacasas de
origen fngico en la decoloracin de colorantes textiles est ampliamente
documentada, sin embargo, apenas existe informacin sobre la potencial
aplicacin de lacasas bacterianas. En nuestro laboratorio, se ha caracterizado
una lacasa producida por &treptom'ces c'aneus CECT 3335 y se ha puesto de
manifiesto su capacidad para oxidar compuestos no fenlicos a travs de un
mediador de oxidacin. Por otra parte, se han identificado una gran variedad de
compuestos fenlicos presentes en los cultivos de varias cepas de
&treptom'ces cuando crecen sobre residuos lignocelulsicos, y que pueden ser
empleados como mediadores naturales de oxidacin. Ensayos preliminares con
colorantes de tipo azo han demostrado la eficacia del sistema lacasa/p-
hidroxiacetofenona en la decoloracin.
En este trabajo se pretende optimizar el proceso de decoloracin con esta
enzima utilizando compuestos fenlicos relacionados con la estructura de la
lignina, que podemos considerar mediadores naturales. Los ensayos se
realizaron utilizando 200 mU de actividad lacasa frente a colorantes de tipo
azo, antraquinona y ptalocianina (40 ppm) monitorizando la decoloracin
mediante espectros de absorcin UV/vis. Como mediadores se utilizaron 2
compuestos de tipo p-hidroxifenilo, 2 de tipo 4-hidroxi-3-metoxifenilo y 2 de tipo
4-hidroxi-3,5-dimetoxifenilo a tres concentraciones distintas, 10, 1 y 0,1 mM.
Los resultados mostraron que la enzima por si sola decoloraba en pocos
minutos y hasta en un 60% colorantes de tipo ptalocianina (Azul de Solofenil) y
antraquinona (Remazol Billiant Blue R). Ensayos realizados con sistemas
lacasa-mediador mostraron una decoloracin del 45 al 60% de distintos
colorantes tipo azo. Los mejores resultados se obtuvieron con p-
hidroxiacetofenona y acetosiringona a una concentracin de 0,1mM.
MICROBIOLOGA CLNICA
C - 19
Identificacin de &a!#$ito$ inte$tinale$ eme!ente$ C!y&to$&o!idium
&a!"um9 Ciclo$&o!a cayetanen$i$9 I$o$&o!a belli9 Bla$tocy$ti$ ;omini$ y
Mic!o$&o!idia$ en &aciente$ &edi#t!ico$%
Carrillo Mndez . y Vargas Arzola.J.
(epartamento de +icro,iolog-a !l-nica. Facultad de !iencias Gu-micas. Universidad Aut;noma
6enito 2u"re$ de Daxaca. !d. Universitaria Ex)acienda !inco &eLores, Daxaca Dax. +5xico.
carrillo[ivon%cat.ua,=o.mx carrillo[ivon%)otmail.com
!r'ptosporidium parvum, !iclospora ca'etanensis, 1sospora ,elli, 6lastoc'stis )ominis y
+icrosporidias. Son los 5 protozoarios esporulados que en los ltimos aos han sido
reconocidos como patgenos, encontrndose frecuentemente en el tracto
gastrointestinal de nios con SDA sintomticos, y mas recientemente en nios sanos
debido mejor conocimiento de las tcnicas de diagnstico y al conocer mejor la
epidemiologa de estos agentes
(1)
.
Determinar la frecuencia de protozoarios emergentes: !r'ptosporidium parvum.,
!iclospora ca'etanensis, 1sospora ,elli, 6lastoc'stis )ominis ' +icrosporidia en los
pacientes peditricos, que se presentaron con cuadro diarreico en los principales
hospitales del la Cd. de Oaxaca, estos son el MSS, SSSTE, SSA y Hospital de la Niez
Oaxaquea. A travs de la tcnica de Kinyoun modificada para la identificacin de
!r'ptosporidium parvum, !iclospora ca'etanensis e 1sospora ,elli por medio de la
tcnica de Gramcromotropo para +icrosporidias y Directo con Lugol para 6lastoc'stis
)ominis.
Se obtuvieron los siguientes resultados de 201 muestras diarreicas para
!r'ptosporidum parvum, se encontraron 25 casos positivos lo cual equivale a 12.43%,
!'clospora ca'etanensis, se encontraron 5 casos positivos2.48%. 1sospora ,elli, se
encontraron 2 casos positivos 0.99%, 6lastoc'stis )ominis, se encontraron 21 casos
positivos 10.44%,y +icrosporidia, se encontraron 15 casos positivosequivale a 7.46% .
El 12.43% de frecuencia de !r'ptosporidium parvum, concuerda con la bibliografa que
seala que la prevalenca del !r'ptosporidium parvum en los pases desarrollados se
encuentra en el 3% - 3,6% pero en los pases subdesarrollados entre 5% y 15% siendo
mayor la prevalenca en nios que en adultos.
(2)
Los estudios serolgicos han
demostrado que la mayora de los nios de todo el mundo han desarrollado anticuerpos
contra el parsito a la edad de 4 aos
(1)
, !r'ptosporidium parvum. en esta investigacin
se presento con mayor frecuencia en nios menores de 4 aos se presento, cuando aun
no se poseen anticuerpos contra !r'ptosporidium parvum., despus de esta edad la
frecuencia es menor debido que la respuesta inmunolgica empieza con larespuesta
humoral ya preparada con anticuerpos contra !r'ptosporidium parvum y continua con la
respuesta celular ( lo que no sucede con los pacientes con HV que al tener disminuida
esta respuesta en muchos casos no sobreviven la infeccin), combatiendo la infeccin,
se observo una similitud con los grficos de !iclospora ca'etanensise1sospora,elli, que
noexisteen ninguna bibliografa anterior. 6lastoc'stis )ominis ocupa el segundo lugar en
frecuencia su grfica casi no guarda relacin con las anteriores, es decir no presento
preferencia de edad. La frecuencia de +icrosporidias fue mucho mayor de lo que se
esperaba y solo se presento en nios menores de 10 aos entre los cualesse contaba
con el dato de su diagnostico era desnutricin; una inmunosupresin.
El SDA es hoy la razn de muchas investigaciones y descubrimientoscomo son los
parsitos emergentes y su interaccin con individuos sanos. Que nos ayuda a
comprender nuestro sitio como especie en este habitad.
Bibliografa.
Gutirrez R Humberto J. Diarrea por protozoarios formadores de esporas. Articulo de revisin.
Archivos Venezolanos de Puericultura y Pediatra. Vol. 61 N 4, Octubre - Diciembre 1998 Pg. 121-
128
Behrman R, Kliegman R, Arvin A. Nelson Tratado de Pediatra. Ed. Mc Graw Hill. nteram. l5
edicin. 1997:1219-1221.
+icro,iolog-a !l-nica
133
C - 22
Re$i$tencia de %acteroi$es fragilis a antimic!obiano$ beta=lact#mico$8
&a&el de la +B+.Bf! y de la$ beta=lactama$a$ CfiA y Ce&A%
Priz, S.
1
, Quesada, A.
1
, Garca, N.
1
, Lorenzo, M.
1
, Garca, E.
2
, Valle, J.
1
,
Vadillo, S.
1
y

Ayala, J.
3
1
Facultad de Veterinaria, Avda. de la Universidad s<n, 1001 !"ceres Be/mail0 spiri$%unex.esC.
.
Facultad de +edicina, !ampus ^+iguel de Unamuno^, 300 &alamanca.
3
!entro de 6iolog-a
+olecular ^&evero Dc)oa^, !&1!/UA+, .8049 !anto,lanco B+adridC.
6acteroides #ragilis muestra poca sensibilidad a la mayora de los
antimicrobianos -lactmicos debido a la pobre afinidad que muestran sus
protenas fijadoras de penicilinas (PBPs) por estos compuestos. Las -
lactamasas de tipo A y B juegan un papel importante en la resistencia de esta
bacteria a las sustancias de referencia. El objetivo de nuestro trabajo es
estudiar el papel de la PBP2Bfr, la metalo--lactamasa de clase B CfiA y la -
lactamasa de clase A CepA en la resistencia de ocho cepas de 6.#ragilis a
diferentes antimicrobianos -lactmicos.
Las cepas de 6.#ragilis utilizadas han sido aisladas a partir de casos de
infecciones humanas. Se calcul la concentracin mnima inhibitoria (CM) de
trece antimicrobianos, se estudi la actividad -lactamasa (tanto de clase A
como de clase B) y se cuantific su especificidad, se amplificaron los genes
c#iA y cepA mediante el uso de la tcnica de PCR, se secuenciaron los genes
que codifican la PBP2Bfr (p,p66#r) en cinco cepas de 6.#ragilis y, por ltimo, se
realiz un anlisis de competicin de las PBPs de 6.#ragilis al imipenem
(estudio de la C50).
Las cepas de 6.#ragilis ms resistentes al imipenem fueron AK4, AK2 y 119. El
gen c#iA se encontr en cuatro de las ocho cepas, sin embargo la actividad
metalo--lactamasa slo se detect en las cepas AK2 y 119. Consideramos
que la resistencia de estas dos cepas al imipenem se debe a la expresin de la
-lactamasa CfiA. Mediante el estudio de las CMs observamos que 6.#ragilis
2013E, AK4, 0423 y R212 mostraron una gran resistencia a la mayora de los
antimicrobianos utilizados en nuestro estudio. Las cuatro cepas poseen el gen
cepA que codifica la -lactamasa CepA (adems este gen tambin se detect
en las cepas NCTC9344 y 7160). Tras analizar la secuencia del gen p6p66#r
y deducir la protena PBP2Bfr en las cepas NCTC9344, AK2, R212, 119 y 7160
y compararlas con las secuencias de las cepas NCTC9343 y 638R observamos
que existe mutacin en la PBP2Bfr de la cepa AK2 (19 aminocidos) y 119 (20
aminocidos) con respecto a la misma protena de la cepa NCTC9343. En las
pruebas de competicin frente al imipenem se observ una gran afinidad de la
PBP2Bfr para este antimicrobiano. El anlisis de los resultados expuestos nos
permite inferir que, dependiendo de la cepa de 6.#ragilis, la actividad -
lactamasa (CepA y CfiA) y los cambios en la PBP2Bfr intervienen en la
resistencia de estas bacterias a los antimicrobianos -lactmicos analizados.
En cualquier caso, el mecanismo de resistencia ms importante en seis de las
ocho cepas analizadas (NCTC9344, 7160, 2013E, AK4, 0423 y R212) fue la
produccin de la -lactamasa de clase A denominada CepA.
+icro,iolog-a !l-nica 134
C - 31
An#li$i$ t!an$c!i&cional de la !e$&ue$ta de tole!ancia a #cido en
Streptococcus pneumoniae
Martn-Galiano A. J.
1&
, Overweg

K.
2
, Ferrndiz M. J.
1
, Reuter

M.
2
, Wells J.
2
y
de la Campa A. G.
1

1
!entro :acional de +icro,iolog-a. 1nstituto de &alud !arlos 111. .8..0, +a=ada)onda, +adrid,
&pain.
.
1nstitute o# Food ?esearc), :orAic) ?esearc) *arO, :orAic) :?4 UA. United Pingdom.
_
(irecci;n actual0 >e)rstu)l #`r 4enomorientierte 6ioin#ormatiO. Vissensc)a#ts$entrum
Vei)enstep)an, Am Forum 1, 83334 Freising, 4erman'.
a
(irecci;n actual0 7)e Universit' o#
Amsterdam, &Aammerdam 1nstitute #or >i#e &ciences, :ieuAe Ac)tergrac)t 166, 1018 VV
Amsterdam, 7)e :et)erlands. Adela 4. de la !ampa0 agcampa%isciii.es
&treptococcus pneumoniae, uno de los principales agentes causantes de
enfermedad en humanos, afronta condiciones cidas durante su crecimiento in
vitro, en diferentes fluidos humanos durante el proceso de infeccin y en
biofilms en la nasofaringe de los portadores. &. pneumoniae fue capaz de
desarrollar una respuesta de tolerancia a cido puesto que increment su tasa
de supervivencia a pH letal (pH 4.4, tasa de supervivencia de 10
-4
) hasta en 10
veces si previamente haba sido expuesto a pHs subletales (5.8-6.6).
Asimismo, la tasa de supervivencia tras la exposicin a pH 4.4 de clulas en
fase estacionaria fue 1.000 veces mayor que la de las clulas en fase
exponencial, debido a la acidificacin gradual del medio por produccin de
cido lctico resultante del metabolismo. Se analiz la expresin gnica global
tras un choque cido a pH 6.0 tanto a corto plazo (fase de adaptacin, a 5, 15 y
30 min) como a largo plazo (fase de mantenimiento) mediante la utilizacin de
"microarrays", validando estos resultados mediante RT-PCR en tiempo real. Un
total de 126 genes (6%) mostr expresin alterada: 59 nicamente en la fase
de adaptacin; 34 tanto en la fase de adaptacin como en la de mantenimiento
y 33 nicamente en la fase de mantenimiento. Mientras que el nmero de
genes con expresin aumentada o disminuida en la fase de adaptacin fue
equivalente (38 y 21, respectivamente), una mayora de genes (30 de 33)
mostr menor expresin en la fase de mantenimiento, indicando una diferente
regulacin gnica en dichas fases. Los genes de metabolismo de protenas
(incluyendo los implicados en el mantenimiento de la estructura nativa) y de
transporte (incluyendo transportadores de manganeso y hierro) estuvieron
sobre-representados entre aquellos afectados por acidificacin con respecto a
la proporcin de genes pertenecientes a estas categoras en el genoma. Los
del metabolismo de protenas representaron un 8.7% (2.8% en el genoma) y
los de transporte un 24.6% (9.6% en el genoma). Se detect una regulacin
cruzada con las respuestas oxidativas y de choque osmtico, observndose
posibles secuencias reguladoras en las regiones promotoras de algunos de los
genes implicados.
133
C - 73
QConocemo$ el n(me!o de infeccione$ &o! 2ersinia enterocolitica O8IR
:ue ocu!!en en E$&a6aR
Garca-Bermejo
1
., Rubio M.
2
, Snchez M.
1
y Daz R.
2
1.&ervicio de +icro,iolog-a, Hospital Universitario de 4eta#e. 4eta#e. +adrid. ..&ervicio de
+icro,iolog-a !l-nica. !l-nica Universitaria. Universidad de :avarra. *amplona.
Las infecciones humanas por @ersinia enterocolitica O:9, pueden ser
confundidas con casos de brucelosis a causa de los epitopos comunes
existentes en el lipopolisacrido (LPS) de esta bacteria y 6rucellae. Este hecho
complica el diagnstico serolgico diferencial con pruebas en las interviene el
LPS. En Espaa se han descrito dos casos de aislamiento de @. enterocolitica
O:9 humanos (1,2), y en los ltimos aos se est demostrando que en Navarra,
Pas Vasco y Aragn (comunicacin personal de S. Prez, G. Aduriz y J. M.
Blasco) el ganado bovino es un reservorio importante de esta bacteria.
Con objeto de llamar la atencin sobre este hecho, presentamos el siguiente
caso: Paciente de 59 aos que comenz con un cuadro de dolor epigstrico, de
tipo clico, y sin sntomas diarreicos. Tres das ms tarde desarroll un cuadro
de tipo astnico, acompaado de febrcula, dolores musculares, articulares y la
aparicin de un dolor ms intenso en el tobillo derecho acompaado de rubor y
calor en la articulacin. Acude al servicio de urgencias del Hospital Universitario
de Getafe y se remite a su Centro de Salud. En la exploracin destaca la
presencia de un eritema nodoso. El hemocultivo fue negativo y en el
coprocultivo se aisl @. enterocolitica serovar O:9 Myf positiva.
Los resultados del estudio serolgico con pruebas que detectan anticuerpos
frente al LPS no resolvieron el problema. Sin embargo, no se pudieron
demostrar anticuerpos frente a protenas de 6rucella y si frente a las protenas
YOP de @ersinia enterocolitica. El estudio de los isotipos que reaccionaban con
el LPS de 6rucella, mediante inmunocromatografa de flujo lateral gG e gM,
ELSA gG), y con la fraccin gA purificada mediante inmunoadsorcin,
demostr que la positividad de las pruebas que detectaban anticuerpos frente
al LPS, se deba a la intervencin de anticuerpos gM e gA sensibles al
ditiotritol.
Considerando que en Espaa, en el ao 2004 nicamente se han notificado
596 casos de bucelosis humana (3), es el momento de investigar el nmero de
serologas positivas que son debidas a infecciones por @. enterocolitica O:9.
Para ello, se debera investigar la presencia de anticuerpos frente a las YOPs,
y realizar un coprocultivo, en todo paciente sospechoso de padecer un cuadro
de brucelosis, y en el que el hemocultivo resulte negativo y no se demuestren
anticuerpos frente a protenas de 6rucella.
1.-Calvo C. et al. 1987. Ann. nst. Pasteur Microbiol. ?EA:617-23 ;
2.-Prez-Trallero E. et al. 1992. Enferm. nfecc. Microbiol. Clin. ?F:186-89.
3.-Sanchez-Serrano L.P et al. 2005. Eurosurveillance Weekly. ?F:6-9.

C - 81
Ce&a$ de Streptococcus pneumoniae con ene$ par' y parE
!ecombinante$8 e$tudio$ t!an$c!i&cionale$ y de eficacia biolica
Balsalobre, L. y G. de la Campa, A.
!entro :acional de +icro,iolog-a, 1nstituto de &alud !arlos 111, +a=ada)onda .8..0, +adrid.
lu$,al%isciii.es
La resistencia a las fluoroquinolonas en &treptococcus pneumonie
(neumococo) se debe principalmente a mutaciones en regiones denominadas
QRDRs de los genes que codifican la DNA topoisomerasa V (topo V;
ParC
2
ParE
2
) y la DNA girasa (girasa; GyrA
2
GyrB
2
). Las cepas con un bajo nivel
de resistencia a ciprofloxacina (Cip) (CM = 4-8 g/mL) presentan cambios en
la topo V y las de alto nivel (CM mayor o igual a 16 g/mL) presentan
adems cambios en GyrA. Nuestro laboratorio ha descrito aislados clnicos de
neumococo resistentes a Cip (CipR) que llevan mutaciones en la QRDR de
par! y que se han originado por recombinacin homloga con estreptococos
del grupo mitis (&. mitis y &. oralis) (1-3). Estas cepas recombinantes se
diferencian del resto de los neumococos por presentar el gen ant en la regin
intergnica parE/par!. Si parE y par! se transcriben conjuntamente, la
presencia del gen ant en la regin intergnica podra interferir en la
transcripcin de dichos genes y esto podra afectar a la eficacia biolgica de las
cepas recombinantes. Mediante transformacin de &. pneumoniae R6 (CipS)
con un producto de PCR que inclua la regin parE/ant/par! del aislado SM3
CipR de &. mitis, se obtuvieron dos cepas isognicas, T1
SM3(par!)
y T1
SM3(parE/ant/
par!)
. El anlisis de la transcripcin se realiz mediante RT-PCR, tanto en R6
como en los clones T1
SM3(par!)
y T1
SM3(parE/ant/par!)
y se cuantificaron los mRNAs
por RT-PCR en tiempo real. Se observ que la presencia del gen ant no
interfiere en la transcripcin de los genes de la topo V. Se llevaron a cabo
experimentos de crecimiento en competencia en ausencia de Cip (R6 +
R6
par!(S79F)
; R6 + T1
SM3(par!)
y R6 + T1
SM3(parE-ant-par!)
). Tambin se realizaron estos
experimentos en presencia de concentraciones subinhibitorias de Cip
(R6
par!(S79F)
+ T
1
SM3(parE-ant-par!)
y T1
SM3(par!)
+ T1
SM3(parE-ant-par!)
).

No se observaron
diferencias significativas en la eficacia biolgica de las cepas. Por tanto, en las
condiciones ensayadas, ni la presencia de par! recombinante ni la del gen ant
disminuyen la eficacia biolgica de dichas cepas CipR con respecto a cepas
CipR con mutaciones puntuales en par!. Estos resultados permiten predecir el
mantenimiento de las cepas recombinantes en ausencia de fluoroquinolonas y
la expansin de dichas cepas en su presencia.

1. Balsalobre, L., M. J. Ferrndiz, J. Liares, F. Tubau, and A. G. de la Campa.
2003. . Antimicrob Agents Chemother 47:2072-2081.
2. de la Campa, A. G., L. Balsalobre, C. Ardanuy, A. Fenoll, E. Prez-Trallero,
and J. Liares. 2004. Emerg nfect Dis 10:1751-1759.
3. Ferrndiz, M. J., A. Fenoll, J. Liares, and A. G. de la Campa. 2000.
Antimicrob Agents Chemother 44:840-847.
13
C - 96
Acti"idad biolica de com&onente$ de la memb!ana e-te!na de 2ersinia
enterocolitica OI en culti"o$ de e$&lenocito$ mu!ino$
Romero, F., Leiva, M., Moreno, E., Jimnez-Valera, M., Ruiz-Bravo, A.
(epartamento de +icro,iolog-a, Facultad de Farmacia, Universidad de 4ranada. 4ranada 1801.
E/mail0 arui$,r%ugr.es
La enterobacteria @ersinia enterocolitica posee interesantes propiedades
inmunomoduladoras, que han sido extensamente estudiadas por nuestro Grupo
de investigacin. Las cepas virulentas (portadoras del plsmido pYV) del
serotipo de moderada patogenicidad O9 causan en el ratn una infeccin
asintomtica o con escasa sintomatologa, pero que se mantiene alrededor de
un mes, y que, sobre todo en los primeros estados, causa importantes
alteraciones inmunitarias inespecficas. El presente estudio aborda la
caracterizacin de fracciones de membrana externa con actividad biolgica
sobre esplenocitos de ratones sanos o previamente infectados con la bacteria
por va intragstrica.
Tanto el lipopolisacrido (LPS) del serotipo O9 como las preparaciones de
protenas de membrana externa (OMPs) son mitognicas sobre las clulas B
de esplenocitos de ratones no infectados, tanto BALB/c (respondedores a LPS)
como C3H/HeJ (no respondedores por ser portadores de lps/, mutacin que
hace no funcional a TLR4, que es un receptor para LPS convencional de
enterobacterias). Esto sugiere que en ambas preparaciones existe una fraccin
mitognica distinta del LPS (y muy activa, dado que la preparacin de LPS O9
ha sido parcialmente purificada) o, alternativamente, que el LPS de @.
enterocolitica es estructural y funcionalmente diferente del de otras
enterobacterias Gram-negativas. Cuando se ensayan esplenocitos de animales
a los 10 das de la infeccin intragastrica, la capacidad de proliferacin en
respuesta a estos estmulos est drsticamente deprimida, excepto en el caso
de LPS O9 sobre esplenocitos de C3H/HeJ. Hay pus divergencia en el
comportamiento de LPS y OMPs, apoyando la hptesis de que en las OMPs
existe al menos otra fraccin activa, responsable de la supresin de la
proliferacin de esplenocitos de animales (respondedores o no) infectados. Sin
embargo, en ensayos de induccin de choque sptico por endotoxina en
ratones BALB/c y C3H/HeJ, en los que se examinaron la mortalidad y la
produccin de citokinas in vivo, el LPS estndar (de &almonella enterica var
Typhi) y el LPS O9 se comportaron de forma similar, no revelando la actividad
de la posible molcula contaminante a la que se pudiera atribuir la
mitogenicidad de la preparacin de LPS O9 sobre los esplenocitos de ratoens
no respondedores sanos. Es posible pues que el LPS O9 tenga un
comportamiento peculiar, similar al LPS tpico de enterobacterias en la
capacidad de inducir la produccin de citokinas proinflamatorias solo por
macrfagos de ratones respondedores, pero distinto en su actividad mitognica
sobre clulas B de ratones no respondedores.
139
C - 97
Acti"idad antiinflamato!ia de la telit!omicina en un modelo de $;ocH
$'&tico
Leiva, M.M., Ruiz-Bravo, A., Moreno, E., Jimnez-Valera, M.
E/mail0 lenaleiva%)otmail.com
El shock sptico, causado por el lipopolisacrido (LPS) de bacterias Gram-
negativas, es un sndrome que puede llegar a ser letal, resultado de una
respuesta inflamatoria sistmica. El LPS activa los sistemas del complemento y
de coagulacin, y estimula la liberacin masiva de mediadores, como las
citokinas proinflamatorias factor necrosante de tumores alfa (TNF-) e
interleukina-1 (L-1), y radicales oxidantes como xido ntrico, por macrfagos.
Entre las consecuencias de esta respuesta figuran hipotensin, coagulacin
intravascular diseminada y fallo multiorgnico. El shock sptico es un modelo
experimental til para evaluar la actividad antiinflamatoria de agentes
inmunomoduladores. El objetivo del presente trabajo fu evaluar la actividad
antiinflamatoria de la telitromicina, un antibitico ketlido capaz de acumularse
en el interior de las clulas de mamfero.
El shok se indujo en ratones BALB/c por inyeccin intraperitoneal (i.p.) de LPS
de Esc)eric)ia coli O26:B6 (se probaron dosis de 25 y 50 mg por Kg de peso).
Una nica inyeccin i.p. de telitromicina (20 mg por Kg), 1 hora antes que el
LPS, redujo de forma significativa la mortalidad causada por ambas dosis de
LPS. La determinacin de citokinas en plasma, mediante ELSA comercial,
revel que la telitromicina disminuy significativamente los niveles de citokinas
proinflamatorias, e increment los de L-10, citokina con actividad
antiinflamatoria. La concentracin plasmtica de nitritos, que permite medir la
induccin de la xido ntrico sintetasa, tambin fu disminuda por la
telitromicina.
Posteriores investigaciones in vitro realizadas en nuestro Laboratorio han
demostrado que la telitromicina es capaz de disminuir la activacin del factor de
transcripcin NF-B en una lnea celular de macrfagos murinos, lo que se
traduce en la inhibicin de la produccin de citokinas proinflamatorias y de
xido ntrico en respuesta al estmulo con LPS.
En conclusin, nuestros resultados muestran que la telitromicina es un agente
inmunomodulador, capaz de modificar los niveles plasmticos de citokinas y
proteger al ratn en un modelo experimental de shock sptico por LPS.
C - 99
Modificacin &o! Lactobacillus plantarum de la funcin inmunita!ia intacta
y com&!ometida &o! un t!atamiento inmuno$u&!e$o!%
Bujalance, C., Moreno, E., Ruiz-Bravo, A., Jimnez-Valera, M.
(epartamento de +icro,iolog-a, Faculad de Farmacia, Universidad de 4ranada. 4ranada 1801.
E/mail0 m=valera%ugr.es
Algunos de los efectos beneficiosos de los microrganismos probiticos se
deben a su capacidad inmunomoduladora. Esto ha sido establecido por
numerosos estudios en animales y humanos inmunolgicamente intactos, con
la excepcin de algunas investigaciones llevadas a cabo en ancianos en los
que la funcin inmunitaria puede encontrarse deteriorada por la edad. Sin
embargo, alimentos que contienen microorganismos probiticos figuran en las
dietas del creciente grupo de enfermos inmunocomprometidos. El presente
trabajo se plantea como objetivo estudiar si los efectos inmunomoduladores de
bacterias probiticas se manifiestan tambin en situaciones de
inmunocompromiso.
Una cepa de >acto,acillus plantarum fu aislada de un producto lctico
fermentado comercial. Mediante los apropiados ensayos in vitro, se estableci
que la cepa cumpla los requisitos de potencial probitico. Se pas entonces
a investigar su actividad inmunomoduladora, para lo que se establecieron 4
grupos experimentales de ratones BALB/c, hembras: testigos, tratados con >.
plantarum, inmunosuprimidos por ciclofosfamida y tratados con >. plantarum y
con ciclofosfamida. Se administraron inculos de la cepa probitica en leche
descremada, por va intragstrica, una vez al da, durante todo el experimento.
A pesar de cumplir con los criterios de potencial probitico in vitro, la cepa
seleccionada de >. plantarum no fu capaz de colonizar de forma persistente el
tracto gastrointestinal de los ratones, dejando de detectarse en heces a los
pocos das de finalizada su ingesta. Sin embargo, su administracin continuada
durante 15 das estimul significativamente la proliferacin de esplenocitos en
respuesta al mitgeno de clulas T, concanavalina A. La administracin de >.
plantarum no afect a la leucopenia causada por la ciclofosfamida, pero
restaur parcialmente la capacidad de los linfocitos B para proliferar en
respuesta a lipopolisacrido, que haba sido suprimida por el agente
antiproliferativo.
En conclusin, la administracin de lactobacilos probiticos no empeora el
dao causado por tratamientos inmunosupresores, sino que, al contrario,
puede mejorar algunos de los parmetros inmunitarios deteriorados.
141
C - 100
Inmunomodulacin &o! mo-iflo-acino en !atone$ inmunolicamente
intacto$ y !atone$ inmunocom&!ometido$%
Amat, M.A., Moreno, E., Ruiz-Bravo, A. y Jimnez-Valera, M.
E/mail0 angelesamat)d$%)otmail.com
Numerosos agentes antimicrobianos han mostrado poseer capacidad para
modificar las funciones inmunitarias. El hecho de que algunos de estos agentes
sean de frecuente administracin en enfermos inmunocomprometidos, para
prevenir o tratar las infecciones a que estn expuestos, incrementa la
importancia del conocimiento de los efectos que tales molculas puedan tener
sobre el sistema inmune previamente deteriorado. El objetivo de este trabajo es
investigar los efectos inmunomoduladores del moxifloxacino sobre el sistema
inmune normal y daado por tratamientos inmunosupresores.
Se utilizaron dos modelos experimentales de inmunosupresin en ratones
BALB/c. En uno de ellos, los animales recibieron dos dosis de ciclofosfamida
(150 y 100 mg/Kg de peso corporal) por va intraperitoneal, separadas por un
intervalo de 3 das. En el otro, se inyect una dosis diaria de 4 mg/Kg de
azatioprina durante 4 das consecutivos. Los ensayos incluyeron 4 grupos
experimentales: sin tratamiento, tratado con moxifloxacino, tratado con el
agente inmunosupresor y tratado con el agente inmunosupresor y
moxifloxacino. El antibitico se administr por la misma va, en una dosis diaria
de 50 mg/Kg, durante 3 das consecutivos, empezando a las 24 h de la ltima
inyeccin del agente inmunosupresor.
El tratamiento con moxifloxacino en animales inmunolgicamente intactos
redujo siempre los niveles de leucocitos perifricos, sin afectar a los de clulas
nucleadas en mdula sea ni a los de esplenocitos. Tampoco indujo
modificaciones en la proliferacin de esplenocitos en respesta a mitgenos de
clulas B (LPS) y T (Con A). La ciclofosfamida deprimi significativamente
todos estos parmetros. El moxifloxacino agrav la leucopenia y la reduccin
esplnica causadas por la ciclofosfamida, pero restaur parcialmente la
capacidad de linfoproliferacin en respuesta a LPS y Con A. La azatioprina
produjo leucopenia y deprimi la respuesta a Con A, sin que el tratamiento
combinado con azatioprina y moxifloxacino modificase estos efectos.
Los resultados evidencian el inters de usar modelos de inmunocompromiso en
el estudio de la inmunomodulacin por antimicrobianos. No se pueden
generalizar las conclusiones derivadas de un nico modelo: los efectos del
moxifloxacino no fueron iguales sobre el sistema inmune daado por
ciclofosfamida o por azatioprina. El conocimiento de estos efectos permitir
seleccionar, de entre los antimicrobianos disponibles en cada caso, aquellos
mejor adaptados a la situacin clnica del enfermo inmunocomprometido.
+icro,iolog-a !l-nica 14.
C - 103
Deteccin de neumoli$ina du!ante la infeccin neumoccica en !atone$
Garca-Surez M.M.
1
, Vzquez F.
1
, Astudillo A.
2
, Villaverde R.
1
, lvarez S.
1
,
Mndez F.J.
1
1
Nrea de +icro,iolog-a, (pto. 6iolog-a Funcional, Universidad de Dviedo.
.
Nrea de Anatom-a
*atol;gica, Hospital !entral de Asturias. !< 2uli"n !laver-a nZ 6, 33006, Dviedo. Asturias.
garciamar%uniovi.es
&treptococcus pneumoniae habitualmente coloniza asintomticamente la
nasofaringe de los humanos, pero ocasionalmente es capaz de pasar a los
pulmones, el cerebro y la sangre, dando lugar a enfermedades invasivas de
alta morbilidad y mortalidad como neumona, meningitis y septicemia [1]. La
vacuna polisacrida 23-valente presenta eficacia limitada, mientras la vacuna
conjugada 7-valente no incluye algunos serotipos altamente prevalentes en
frica, Asia y Oceana [2]. Por ello, las nuevas investigaciones se estn
centrando en la generacin de vacunas alternativas basadas en protenas
comunes a todos los serotipos. La neumolisina (PLY) es una protena citotxica
de 53 kDa producida por todas las cepas de neumococo testadas hasta ahora.
Esta toxina muestra una amplia variedad de efectos como la activacin del
complemento, alteraciones en las funciones de las clulas del sistema inmune
e induccin de mediadores pro-inflamatorios [3]. Por tanto, PLY es candidata a
formar parte de una nueva vacuna contra la neumona. El objetivo de este
trabajo ha sido la deteccin y cuantificacin "in vivo de PLY, utilizando un
modelo de infeccin neumoccica intranasal en ratones. En lavados
broncoalveolares la toxina fue cuantificada mediante ELSA. Las cantidades de
PLY detectadas fueron sublticas y disminuyeron rpidamente durante las
primeras 24 h de infeccin, permaneciendo en estos niveles durante el
progreso de la colonizacin pulmonar. La evolucin de PLY unida al tejido
pulmonar fue estudiada mediante inmunohistoqumica. Los niveles de PLY
aumentaron progresivamente durante el desarrollo de la infeccin. A las 12 h,
la reactividad fue slo detectada en el interior de macrfagos alveolares
residentes y no se observ tincin del epitelio bronquial ni vascular. A las 24 h,
se observaron neutrfilos PLY-reactivos en reas perivasculares y
peribronquiales. Un dao pulmonar significativo no fue observado hasta las 48
h. Estos datos sugieren que cantidades sublticas de PLY pueden ser
suficientes para producir el dao tisular y la ruptura de las barreras celulares
permitiendo la diseminacin del neumococo en el torrente sanguneo.

[1] Musher, D.M. 1999. n G. L. Mandell, J. E. Bennett, and R. Dolin (ed.),
Principles and practice of infectious diseases, 5th ed., vol. 2.p. 21292156.
Churchill Livingstone, N.Y. [2] Hirst, R.A., Kadioglu A., Callaghan C. O., and
P.W. Andrew. 2004. Clin. Exp. mmunol. 138:195-205. [3] Wuorimaa, T., and H.
Kayhty. 2002. Scand. J. mmunol. 56:111129. Agradecimientos: Fundacin
Universidad de Oviedo (FUO).
143
C - 132
To-iinfeccion alimenta!ia &o! 3ibrio parahaemolyticus
Juste, C., Larrosa, N., Godoy, P., Domnguez, A., Bartolom, R.
Hospital Universitario Valle de He,r;n. 6arcelona. c=uste%v)e,ron.net
Ob*eti"o: Describir un brote epidmico de Vi,rio para)aemol'ticus.
Durante los das 24, 25 y 26 de Junio de 2004, se detect un brote de
gastroentertis en tres grupos de personas (n=41), de seis poblaciones
diferentes que acudieron a un restaurante de Lladors, municipio de Solsons.
Se realiz un estudio de cohortes sobre la exposicin a alimentos y sntomas
clnicos.La implicacin de cada alimento se estudi mediante el riesgo relativo
(RR) y el intervalo de confianza del 95%.
En los 11 coprocultivos realizados, 7 pacientes y 4 manipuladores se utilizaron
los medios adecuados para el aislamiento de enteropatgenos.
La identificacin bioqumica se realiz mediante el sistema AP 20E.
Para establecer las reacciones clonales de las cepas se efectu una
electroforesis en campo pulsado de los fragmentos de restriccin obtenidos con
el enzima Xba.
Se estudi la sensibilidad a 23 antibiticos mediante el mtodo de disco-
difusin
Re$ultado$8 Se entrevist al 95% de los expuestos (39/41). La tasa de ataque
global fue del 53% (20/38). La mediana del periodo de incubacin de 12,5
horas (mximo de 91 y mnimo de 6). La presencia de sntomas fue: dolor
abdominal 85%, diarrea 85%, nauseas 70%, vmitos 65% y fiebre 21%.
El alimento implicado fue el bacala en diferentes formas de elaboracin
(empedrat y exqueixada), con un riesgo relativo del 5,67% y un intervalo de
confianza del 95%, (1,1-5,1).
En el 57% (4/7) de los pacientes se aisl Vi,rio para)aemol'ticus. No se aisl
este microorganismo en ninguno de los manipuladores.
Todas las cepas presentaron el mismo patrn de macrorrestriccin gentica y
las mismas caractersticas de resistencia a ampicilina, cefalotina y cefuroxima.
Conclu$ione$8 Los resultados de la investigacin permitieron detectar un brote
de toxiinfeccin alimentaria por Vi,rio para)aemol'ticus que aunque poco
frecuente en nuestro medio debe sospecharse, sobre todo, en una ingesta de
pescado y en pocas clidas.
C - 137
An#li$i$ com&a!ati"o mediante t'cnica$ molecula!e$ de e$&uto$ de
enfe!mo$ de fib!o$i$ :u,$tica%
Montesi. A.
1
, Pozuelo M.J.
1
, Jimnez Gmez P.A.
1
, Molina, A.
2
, Cantn, R.
2
y
Rotger, R.
3
1
(pto. 6iolog-a !elular, 6ioIu-mica ' 6iolog-a +olecular. Facultad de Farmacia, Universidad &an
*a,lo/!EU. Ur,ani$aci;n +onte *r-ncipe, 6oadilla del +onte. .8668 +adrid.
.
&ervicio de
+icro,iolog-a, Hospital ?am;n ' !a=al, .8034 +adrid.
3
(pto. +icro,iolog-a 11, Facultad de
Farmacia, Universidad !omplutense. .8040 +adrid.
El estudio de la colonizacin microbiana del tracto respiratorio constituye una
actuacin esencial en el seguimiento de los pacientes con fibrosis qustica
(FQ). Las tcnicas moleculares permiten el estudio de poblaciones bacterianas
sin necesidad de cultivo, y algunas de ellas se han impuesto para la
caracterizacin epidemiolgica de aislamientos. En este trabajo se plantea el
uso de PCR para el anlisis de las muestras, mediante: 1) amplificacin de un
fragmento del gen de RNA 16S (bucle V3) mediante cebadores universales
para el dominio bacteria, y separacin de los amplicones obtenidos por
electroforesis en gel con gradiente desnaturalizante (DGGE); 2) amplificacin
de un fragmento interno del gen mucA de aislamientos de *seudomonas
aeruginosa, seleccionados por morfotipos, y posterior secuenciacin. Los
esputos proceden de pacientes del HospitalRamn y Cajal de Madrid.
El primer objetivo pretende analizar la poblacin bacteriana de la muestra,
identificando las bandas separadas en DGGE mediante reamplificacin con los
mismos cebadores y secuenciacin. La comparacin con los bancos de
secuencias de RNA 16S permite una identificacin bacteriana presuntiva.
Adems, se han utilizado controles correspondientes a las especies aisladas
ms frecuentemente de enfermos de FQ para detectar en los geles de DGGE
las bandas mayoritarias sin necesidad de secuencia.
La secuenciacin de un fragmento de 500 pb del gen mucA (objetivo 2), que
codifica un regulador negativo de la sntesis de alginato va dirigida a establecer
si su polimorfismo puede utilizarse como marcador epidemiolgico. Las
mutaciones y deleciones en este gen se asocian a cambios en la mucosidad de
la colonia. Nuestro anlisis nos ha permitido definir de momento 6 genotipos
mucA (3 principales y 3 subtipos) comparando la secuencia obtenida con la
homloga de la cepa PAO de *. aeruginosa. El genotipo mucA se mantiene en
los aislamientos de un mismo paciente, pero hemos detectado un caso en el
que dos morfotipos de *. aeruginosa procedentes de la misma muestra
presentan distinto subtipo. Pero no se ha detectado relacin entre la presencia
de deleciones o inserciones que afectan a la protena MucA y el morfotipo.
Comparamos este mtodo de tipado con el ya establecido de electroforesis en
campo pulsado de fragmentos de restriccin (RFLP/PFGE) obtenidos con la
endonucleasa Y,a . Ambos mtodos han mostrado una buena correlacin,
pero el genotipado mucA ha permitido diferenciar dos cepas dentro de un
mismo pulsotipo.
143
C - 143
Deteccin y an#li$i$ de la ;uella molecula! de Mycobacte!ium $&&%
mediante un nue"o $i$tema de +CR=DGGE%
Poblet-Mas, N.
1
, Rodrguez-Lzaro, D.
2
, de Batlle J.
3
, Ayuso, A.
4
y Garcia-Gil,
L.J.
1
1. >a,oratorio de +icro,iolog-a +olecular. Universitat de 4irona, !ampus de +ontilivi,
1014irona. nuriapo,let%)otmail.com. .. 6acterial +olecular *at)ogenesis. Facult' o# +edical
and Veterinar' &ciences. Universit' o# 6ristol 6&40 3(U >ang#ord, 6ristol U.P.F 3. &ervicio de
An"lisis !l-nicos. Hospital Universitario 2osep 7rueta Av. FranWa s<n 100 4ironaF 40 !entro de
1nvestigaci;n 6"sica de EspaLa B!16EC, +ercO, &)arp and (o)ne, .80. +adrid.
El incremento de infecciones producidas por micobacterias es uno de los
problemas ms serios en Salud Pblica y est directamente asociado a un uso
inadecuado de antibiticos y al aumento del nmero de pacientes
inmunocomprometidos, especialmente afectados por el virus de SDA. Una de
las estrategias preventivas desarrolladas est basada en una rpida y precisa
deteccin e identificacin de los miembros de este gnero bacteriano. La
deteccin de +'co,acterium spp. mediante cultivo contina siendo la tcnica
de eleccin para el diagnstico de infecciones de origen micobacteriano,
mientras que la correcta identificacin a nivel de especie est basada en el
anlisis fenotpico y caractersticas bioqumicas de los organismos tras su
cultivo. Sin embargo, estas aproximaciones pueden estar limitadas ya que
consisten en procesos largos, tediosos y con un pobre poder de discriminacin.
Adems, un porcentaje de estos cultivos pueden presentar microbiota
acompaante, lo que puede dificultar an ms un diagnstico exacto. En este
sentido, el desarrollo de tcnicas moleculares ha salvado alguna de estas
limitaciones y ha acelerado en gran medida el desarrollo diagnstico. En este
contexto, el objetivo de este trabajo fue el desarrollo de un nuevo sistema
basado en la tcnica PCR-DGGE que permitiese detectar y diferenciar
micobacterias. La completa especificidad del sistema fue evaluada analizando
100 aislados micobacterianos de diferente procedencia, as como 63 aislados
de otras especies estrechamente relacionadas filogenticamente,
consiguiendo, adems, niveles de deteccin de hasta 100 micobacterias por
reaccin. Finalmente, este sistema se utiliz para separar y analizar mezclas
compuestas de +'co,acterium spp., mediante electroforesis en gradiente
desnaturalizante.

C - 144
E$tablecimiento de &unto$ de co!te de $euimiento de !e$i$tencia a
flo!fenicol en Escherichia coli ba$ado$ en la &!e$encia de ene$ de
!e$i$tencia
Moreno, M.A., Garca, M., Teshager, T., Porrero, M.C., y Domnguez, L.
(epartamento de &anidad Animal, Facultad de Veterinaria, Universidad !omplutense, .8040,
+adrid / mamoreno%vet.ucm.es
Las redes de seguimiento o de vigilancia de resistencias bacterianas a los
antimicrobianos deben ser capaces de detectar rpida y eficazmente las
bacterias con mecanismos de resistencia, para lo cual es preciso que los
mtodos fenotpicos empleados, tanto los basados en la determinacin de la
concentracin mnima inhibitoria (CM) como los que emplean el dimetro del
halo de inhibicin (DH), estn ajustados para hacerlo. El florfenicol es un
antimicrobiano del grupo de los fenicoles empleado nicamente en animales
para el tratamiento de procesos respiratorios en rumiantes y cerdos, para el
que el Clinical and Laboratory Standards nstitute (anteriormente denominado
NCCLS) ha propuesto puntos de corte de resistencia para +ann)eimia
)aemolitica, *asteurella multocida y Haemop)ilus somnus (mayor o igual a 8
g/ml y menor o igual a 14 mm para las tcnicas de dilucin y de difusin
respectivamente). Sin embargo, las distribuciones poblaciones de los valores
de CM y de DH obtenidos en la Red Espaola de Vigilancia Veterinaria de
resistencias a los antimicrobianos (VAV) indican que estos valores no son
adecuados para Esc)eric)ia coli, por lo que de acuerdo con la distribucin
poblacional y con los criterios aplicados por otras redes europeas (DANMAP y
MARAN) estamos empleado como puntos de corte de resistencia los valores
de mayor o igual a 32 g/ml y menor o igual a 12 mm. Dado que hasta la fecha
la resistencia a florfenicol se ha relacionado con una bomba de eflujo o achique
codificada por un nico gen, denominado #lo, el objetivo de este estudio ha sido
comprobar si los puntos de corte de resistencia enunciados detectan la
presencia de este gen. Para ello, se ha determinado mediante PCR la
presencia de #lo en una coleccin de 143 cepas de E. coli de la Red VAV con
diferentes valores de CM y de DH, obtenindose los siguientes resultados. Se
ha detectado el gen #lo en todas las cepas con DH menor de 10 mm incluidas
en el estudio (37 cepas) y en una de las nueve con DH entre 10 y 12 mm.
Adems, tambin se ha detectado en una de las seis cepas con DH =13 mm.
En cambio, no se ha detectado en ninguna de las 91 cepas con DH mayor de
13 mm. Estos datos indican que en E. coli el punto de corte de vigilancia de
resistencia a florfenicol para poder detectar todas las cepas con el gen #lo por la
tcnica de difusin debera situarse en menor de 14 mm.
No se ha detectado el gen #lo en ninguna de las 85 cepas con valor de CM
inferior a 32 g/ml, pero s en cambio en 39 de las 58 con CM mayor o igual a
32 g/ml, lo que nos lleva a plantear este criterio como punto de corte de
vigilancia de resistencia a florfenicol por la tcnica de dilucin. Ya que tanto por
difusin como por dilucin existen rangos en los que coexisten algunas cepas
con PCR positiva y negativa frente al gen #lo, estas cepas se estn analizando
con ms detalle. Este trabajo forma parte del proyecto AGL2002/02637.
14
C - 173
Re$i$tencia a alto$ ni"ele$ de mu&i!ocina en lina*e$ &and'mico$ de
Staphylococcus aureus !e$i$tente$ a meticilina5SARM7%
Prez-Roth E
1
, Lpez-Aguilar C
1
, Alcoba-Florez J
1
, Lorenzo-Daz F
1
, Mndez-
lvarez S
1,2
.
1
Unidad de 1nvestigaci;n, Hospital Universitario :tra. &ra. de !andelaria BHU:&!C,
.
(epartamento
de 6iolog-a !elular ' +icro,iolog-a, Universidad de >a >aguna, &<! de 7eneri#e. e/mail0
eduardorot)%)otmail.com
La mupirocina es un antibitico tpico especialmente til en el control de la
diseminacin hospitalaria de &tap)'lococcus aureus resistentes a meticilina
(SARM). La resistencia a altos niveles de mupirocina en SARM se est
incrementando por el uso abusivo del antibitico. En particular, la adquisicin
de dicha resistencia por clones SARM epidmicos puede causar serios
problemas en el control de la infeccin. La mayora de aislados SARM
causantes de las infecciones hospitalarias pertenecen a alguno de los
siguientes 5 linajes o complejos clonales (CC): CC5, CC8, CC22, CC30, y
CC45. En un trabajo previo describimos la diversidad clonal de SARM en el
Hospital Universitario Ntra. Sra. de Candelaria (HUNSC), observando que 358
de 375 (95.5%) de los aislados recolectados entre 1998-2002 pertenecan a
alguno de 4 de los 5 CC (CC5, 8, 22, y 30) (1). En este trabajo el objetivo fue
estudiar los aislados para identificar aquellos resistentes a altos niveles de
mupirocina, determinar la presencia y la localizacin del gen ile&-2,
responsable de conferir la resistencia a altos niveles de mupirocina, as como la
capacidad de transferencia horizontal de dicha resistencia. Se identificaron un
total de 48 aislados SARM (12.8%) altamente resistentes a mupirocina, todos
pertenecientes a alguno de los 5 clones SARM mayoritarios previamente
detectados en el HUNSC, encuadrados en los 4 linajes pandmicos. En todos
los aislados el gen ile&-2 se localiz en un plsmido, identificndose un total de
9 plsmidos (pMUP1-pMUP9), mostrando cada uno de ellos diferentes
frecuencias de transferencia conjugativa. Algunos plsmidos fueron detectados
en aislados SARM pertenecientes a diferentes linajes, mientras que otros se
detectaron exclusivamente en aislados de un nico linaje. Los resultados
obtenidos evidencian que en la dispersin de la resistencia a mupirocina en el
HUNSC han contribuido dos fenmenos epidemiolgicos diferentes. Por un
lado, varios episodios independientes de adquisicin de plsmidos portadores
del gen ile&-2 por aislados susceptibles a mupirocina, pertenecientes a los
linajes pandmicos previamente circulantes en el HUNSC y, por otro lado, la
diseminacin de los clones epidmicos tras adquirir la resistencia. Esto indica
que el control de la diseminacin de dicha resistencia implica la necesidad de la
vigilancia y el estudio detallado de un problema con dos vertientes fuertemente
imbricadas, la diseminacin clonal intra-hospitalaria y la transferencia gnica
horizontal.
1.- Prez-Roth E., F. Lorenzo-Daz, N. Batista, A. Moreno, and S. Mndez-lvarez.
2004. Tracking Methicillin-Resistant &tap)'lococcus aureus Clones during a 5-Year
period (1998 to 2002) in a Spanish Hospital. J. Clin. Microbiol. 4284649-4656.
149
C - 192
Induccin de mue!te celula! &!o!amada &o! lactofe!!ina en c'lula$ de
Can$i$a albicans%
Andrs M.T., Viejo-Daz M. y Fierro J.F.
>a,oratorio de +icro,iolog-a Dral. Escuela de Estomatolog-a. Facultad de +edicina. Universidad
de Dviedo. E/mail0 =##ierro%uniovi.es
Int!oduccin% !andida al,icans es responsable del mayor nmero de
infecciones fngicas de la especie humana, causando infecciones oportunistas
particularmente graves en pacientes inmunocomprometidos. !. al,icans se
mantiene en una relacin de comensalismo merced a diversos factores fsico-
qumicos, anticuerpos especficos y algunos componentes de la inmunidad
innata. Estos ltimos incluyen un conjunto de pptidos y protenas (histatinas,
lactoferrina, etc.) con actividad bactericida y fungicida, que forman parte del
armamentarium presente en los fludos mucosos del hospedador con el fn de
evitar la colonizacin profunda y la diseminacin de los microorganismos. Uno
de ellos, lactoferrina (Lf), es una protena (80 kDa) del grupo de las
transferrinas que posee gran afinidad por iones Fe
3+
. Recientemente hemos
publicado las condiciones fisiolgicas ptimas de !. al,icans para la actividad
candidacida de lactoferrina. En esta comunicacin se muestran algunos de los
cambios intracelulares inducidos por la accin candidacida de lactoferrina,
aparentemente similares a los observados en el proceso de muerte celular
programada de las levaduras.
M'todo$% Los tests de apoptosis fueron realizados segn describi Madeo et
al. La exposicin de fosfatidilserina en esferoplastos fu detectada con annexin
V. La degradacin de ADN se evalu mediante la tcnica de marcaje (TUNEL).
La tincin DAP fu utilizada para visualizar la fragmentacin nuclear, y con
dihydrorhodamine (DHR)-123 se determin la formacin de radicales libres. Las
clulas expuestas a sondas fluorescentes fueron analizadas en un citmetro de
flujo y/o mediante microscopa de fluorescencia.
Re$ultado$% Protoplastos expuestos a concentraciones candidacidas de
lactoferrina y tratados con annexin V mostraron fluorescencia perifrica (20-
35%), indicando externalizacin de fosfatidilserina. Clulas incubadas con Lf
mostraron un fenotipo TUNEL-positivo (40-55%) sugiriendo una rotura masiva
de las hebras de ADN. La tincin con DAP mostr clulas con imgenes
semianulares tpicas. El 50% aproximdamente de las clulas tratadas con Lf
presentaron fluorescencia positiva intracelular para la sonda dihydrorhodamine
(DHR)-123, indicativa de la formacin intracelular de radicales libres. No se
observ el patrn `DNA ladder al analizar el ADN cromosmico mediante
electroforesis en geles de agarosa.
Di$cu$in% Se desconoce el mecanismo de la accin microbicida de
lactoferrina. Resultados previos de nuestro grupo muestran una actividad no
permeabilizadora de la membrana citoplasmtica y una posible interaccin con
un receptor de la superficie celular. Los datos comentados aqu muestran que
lactoferrina, un componente de la inmunidad innata, puede inducir un proceso
de muerte celular no ltico y similar a la apoptosis celular. Hipotticamente este
mecanismo podra causar la `muerte silenciosa de !. al,icans en las mucosas
impidiendo la liberacin de componentes celulares y evitando as la
consiguiente respuesta del hospedador.
C - 194
Ca!acte!i)acin de Betalactama$a$ de E$&ect!o Am&liado 5BLEAS7 en
ce&a$ de Salmonella enterica de o!ien ;umano ai$lada$ en .FFB%
Ramiro, R., Gonzalez-Sanz, R., Arroyo, M., Valdezate, S., De la Fuente, M.,
Herrera, S., Aladuea, A. y Echeita, M.A.
>a,oratorio :acional de ?e#erencia de &almonella ' &)igella B>:?&&EC. &ervicio de 6acteriolog-a.
!entro :acional de +icro,iolog-a. 1nstituto de &alud !arlos 111. .8..0 +a=ada)onda. +adrid. E/
mail0 aec)eita%isciii.es
En el seguimiento epidemiolgico de la resistencia a antimicrobianos en
&almonella ent5rica de origen humano, realizado en el LNRSSE durante el ao
2004, se detectaron 18 cepas que presentaban fenotipos compatibles con la
produccin de betalactamasas de espectro ampliado (BLEAs) en una poblacin
de 1.854 cepas estudiadas.
El objetivo de este estudio fue: determinar la prevalencia de cepas de
&almonella portadoras de BLEAs, la distribucin por serotipos y fagotipos, la
resistencia asociada a otros antimicrobianos y la caracterizacin molecular de
las BLEAs.
La prevalencia de cepas de Salmonella productoras de BLEAs, durante el ao
2004, fue 0,97%. Las 18 cepas, sin relacin epidemiolgica, fueron aisladas de
heces recogidasen 11 provincias. La distribucin por serotipos fue0 12 cepas
del serotipo Virchow (8, 1, 1, y 2 cepas de los fagotipos 19, 31, 10 y PNR,
respectivamente) y 1 cepa de cada uno de losserotipos: Enteritidis (fagotipo 1),
Hadar (fagotipo 2), Heidelberg, Livingstone, Typhimurium (fagotipo 104B) y
44:z
4
,z
23
:- (subesp. V).
Se estudio la sensibilidad a13 antimicrobianos mediante la tcnica de difusin
en disco. Se aplicaron los criterios de resistencia de la NCCLS, y las cepas
intermedias fueron consideradas como resistentes. Los porcentajes de
resistencia a los antimicrobianos estudiados fueron los siguientes: ampicillina,
cefazolina, cefotaxima y estreptomicina, 100%; tetraciclina y sulfametoxazol,
88,8%; cotrimoxazol, 77,7%; c. nalidxico 72,2%; kanamicina, 38,8%;
amoxicilina-clavulnico, 16,6%; gentamicina y cloranfenicol, 11,1% y
ciprofloxacina, 5,5%.El test de la doble sinergia fue positivo para el 94,4% de
las cepas. Tras la amplificacin por PCR con iniciadores genricos para las
principales familias de BLEAsy su posterior secuenciacin, se identificaron las
siguientes: CTX-M14 en el 77,7% de las cepas estudiadas y SHV-5 en 11,1%.
En 10/18 cepas (55,5%), todas del serotipo Virchow, se identific la presencia
simultanea de CTX-M14y TEM-1E permaneciendo susceptibles a amoxicilina-
clavulnico. Mientras que en 4/18 cepas (22,2%) solo se detect la presencia
de CTX-M14 y en 2/18 (11,1%) la presencia nica de TEM-1E.
En conclusin, cabe destacar la importante presencia de cepas portadoras de
BLEAs en aislamientos de &almonella de origen humano (0,97%), con
predominio del serotipo Virchow (66,6%), a pesar de que la prevalencia de este
serotipo fue solo del 1,27%en 2004.
131
C - 202
Medida$ alte!nati"a$ al u$o de antimic!obiano$ en e-&lotacione$ &o!cina$
Lpez G., Libana P., Cebolla J., Farelo F., Brcena C., Martnez C.,
Domnguez L.

La evolucin del sector porcino en nuestro pas en los ltimos treinta aos ha
sido imparable, se ha pasado de explotaciones de tipo familiar a sistemas
intensivossofisticados e industrializados, capaces de proporcionar a la sociedad
la cantidad de alimentos que requiere. Sin embargo esta intensificacin va
unida a un aumento de la incidencia de patologas infecciosas y a un
incremento del uso de antimicrobianos para su control. En muchas ocasiones
se utilizan estos antimicrobianos de forma indiscriminada, dando lugar a un
serio problema de salud pblica por la seleccin de cepas bacterianas
resistentes, unido a otros inconvenientes como aparicin de residuos en carne,
problema de toxicidad e hipersensibilidad, impacto ambiental por residuos en
purines, mala imagen del sector, etc. No podemos pensar que los
antimicrobianos sean la nica medida para controlar las enfermedades
bacterianas. Nuestro objetivo es buscar otras alternativas que nos permitan
reducir el uso de los mismos.
El primer paso de nuestro programa es hacer un buen diagnstico de la
situacin sanitaria de las explotaciones, realizando visitas peridicas a las
granjas y mataderos, para practicar necropsias, valorar lesiones y tomar
muestras, y posteriormente en el laboratorio aislar e identificar las bacterias
causales de las principales patologas.
Tras estudiar varias explotaciones porcinas en distintas zonas de Espaa,
podemos decir que &treptococcus suis y *asteurella multocida son los
microorganismos que se aslan en mayor porcentaje en nuestro laboratorio y
son la principal causa del aumento de la mortalidad en granjas, provocando
sintomatologa respiratoria, articular, nerviosa y sistmica. Para resolver estos
problemas consideramos la inmunoprofilaxis como alternativa, siendo las
autovacunas una eficaz herramienta en el control de estos procesos
bacterianos.
Desde hace tres aos estamos realizando pruebas en granjas de la provincia
de Toledo con el fin de valorar la eficacia de las autovacunas frente a &. suis y
*. multocida.
Utilizando la mortalidad como parmetro de anlisis, los resultados obtenidos
son muy satisfactorios, pues se ha reducido notablemente la mortalidad de los
grupos vacunados frente al grupo control.
El uso de los antimicrobianos aplicados por va oral se ha reducido llegando
casi a nivel cero de consumo, esto supone dejar de utilizar antibiticos de uso
muy extendido en porcino como la amoxicilina, la clortetraciclina y la
doxiciclina. Los antimicrobianos inyectables se estaban empleando en
pequeas cantidades antes de aplicar el programa y por tanto no se ha notado
tanto su descenso.
Teniendo en cuenta los resultados de nuestros trabajos, podemos concluir que
las autovacunas son un arma muy eficaz para el control de las enfermedades
bacterianas porcinas y que son una buena alternativa al uso de
antimicrobianos, disminuyendo as todos los inconvenientes derivados de su
uso.
C - 224
Di$t!ibucin de $e!oti&o$ de 'ampylobacter +e+uni ai$lado$ en E$&a6a
du!ante .FF.=.FFB%
Simn-Baamonde C., Prez-Boto D., Lpez-Portols J.A., y Echeita M.A.
>a,oratorio de Campylobacter. &ecci;n de Entero,acterias. &ervicio de 6acteriolog-a. !entro
:acional de +icro,iolog-a. 1nst. &alud !arlos 111. !tra. +a=ada)onda a *o$uelo, Pm .. .8..0
+a=ada)onda. +adrid. EspaLa. !orreo electr;nico0 dp,oto%isciii.es
!amp'lo,acter =e=uni es el productor ms comn de enterocolitis humana en
pases desarrollados. Conocer la epidemiologa de las campilobacteriosis
constituye la principal herramienta para su control sanitario. Actualmente, la
serotipificacin sigue siendo un mtodo de gran utilidad en ste gnero ya que
constituye un marcador epidemiolgico sencillo, ampliamente evaluado y
extendido.
El objetivo de este trabajo es estudiar, por primera vez en nuestro pas, la
distribucin de serotipos entre una coleccin de cepas de origen humano, de
alimentos y de animales portadores, el ndice de discriminacin de la tcnica y
su tipabilidad.
Se analizaron 700 cepas de !. =e=uni recibidas durante el perodo 2002-2004
para su serotipificacin en el Centro Nacional de Microbiologa, procedentes de
diversas provincias espaolas. Las cepas se serotipificaron por
hemaglutinacin pasiva mediante el mtodo de Penner con un panel de 34
antisueros especficos.
Se identificaron 40 serotipos termoestables distintos. Los serotipos 7, 44, 50, 3,
2, 1+44, 4, 15 y 17 fueron los ms frecuentes. El 25,2% de las cepas fueron no
tipificables. El ndice de discriminacin de la tcnica fue 0,89 y la tipabilidad
0,75.
Entre las cepas de origen humano, los serotipos HS:2 y HS:4, asociados al
sndrome de Miller-Fisher se identificaron en un 8% y 4,17% de las cepas y el
serotipo HS:19, asociado con el sndrome de Guillain-Barr, en un 0,67%.
Aunque no tuvimos constancia del desarrollo de estos sndromes en ninguno
de los pacientes, sera conveniente el seguimiento de los mismos para un
diagnstico precoz de estas enfermedades.
En conclusin, la serotipificacin sigue siendo una tcnica
epidemiolgicamente til. El 76,5% de las cepas de !. =e=uni espaolas se
tipificaron a pesar del panel reducido de antisueros del que se dispona. Pese a
todo, este porcentaje es similar al obtenido por otros laboratorios que poseen la
coleccin completa de antisueros. Una base poblacional mas amplia permitir
conocer con mayor precisin la incidencia de los principales serotipos de !.
=e=uni
Este trabajo se ha llevado a cabo bajo el Convenio DGV1312/04-8 entre el
nstituto de Salud Carlos y la Direccin General de Salud Pblica del M de
Sanidad y Consumo y el proyecto +D+, MCYT n AGL 2002-04480-C03-02
133
C - 243
E$tudio y ca!acte!i)acin de facto!e$ de "i!ulencia de E. coli ai$lado$ de
un b!ote de colibacilo$i$ en codo!nice$
Gubert M., Tllez S., Goyache J., Briones V., Domnguez L.
>a,oratorio V1&AVE7 /&anidad Animal /Facultad de Veterinaria. Universidad !omplutense de
+adrid. Hospital cl-nico Veterinario/ *lanta &;tano. Avda. *uerta de Hierro s<n .8040 +adrid.
maguisgi,ert%vet.ucm.es
La importancia de la colibacilosis, denominacin genrica con la que se
conocen los procesos extraintestinales provocados por Esc)eric)ia coli,radica
tanto en su amplia distribucin, como en las prdidas econmicas ocasionadas
al sector, debidas a la mortalidad de los animales y a la disminucin de los
ndices productivos.
mportantes factores de virulencia contribuyen a la patogenicidad de la bacteria,
y, a pesar de la gran importancia de la enfermedad, se desconocen muchos de
los mecanismos de patogenicidad.
Las cepas que causan septicemias en aves son de origen cloacal. Gracias a la
formacin de aerosoles, se produce la colonizacin bacteriana y traspaso del
epitelio del tracto respiratorio con la consiguiente bacteriemia, afectacin de los
rganos internos, septicemia y muerte del animal.
La sintomatologa incluye signos de tipo respiratorio y sistmicos: toses, apata,
anorexia y reduccin del ndice de puesta y del crecimiento. Dichos signos son
consecuencia de las lesiones producidas: aerosaculitis, peritonitis, pericarditis,
perihepatitis, etc. El diagnstico puede hacerse en funcin de la sintomatologa
y las lesiones. Aunque ambas son bastante caractersticas, se recomienda la
confirmacin microbiolgica.
Debido a la gran repercusin de esta enfermedad para el sector, result
necesario realizar un estudio para valorar qu caractersticas posean las cepas
de E.coli aisladas en las codornices.
El aislamiento e identificacin bioqumica (AP 20E) de E. coli como la
caracterizacin de los aislados mediante PCRs (multiplex para determinar los
factores de virulencia: iss, gen de la supervivencia aumentada en suero; iuc,
gen del opern aerobactina; ts), gen de la hemaglutinina sensible a la
temperatura y colV, gen de la inmunidad a la colicina V y PCR sencilla para
determinar el gen que codifica para fimC, fimbria C) fueron los objetivos
planteados.
Se aislaron 11 E. coli a partir de muestras de hgado y pulmn de 11
codornices de un mismo brote. Tras el estudio bioqumico obtuvimos los
siguientes resultados: el @@S present un mismo perfil bioqumico, lo que hizo
suponer que se trataba de la misma cepa, mientras que el B@S de los asilados
formaron parte de un grupo bioqumico heterogneo. nicialmente, se pens
que los E. coli integrantes del grupo mayoritario (55%) sera la misma cepa y la
causante del brote, pero tras el anlisis molecular (PCR) vimos que se trataba
de cepas diferentes por presentar 7 patotipos diferentes. El ?FFS de los
aislados fu positivo para #im! (parece imprescindible la presencia de #im!
para que E. coli sea patgeno), el /BS para ts), el B@S present iuc, el IS el
factor iss y ningn aislado present el factor cvi.
Estos resultados nos hicieron suponer que el brote de colibacilosis se debi a
ms de una cepa de E. coli.
C - 247
Efecto del la"ado de la$ mama$ $ob!e la calidad mic!obiolica de la
lec;e mate!na
Lpez M.C., March L., Mata C., Molina V., Molina A., Fons J., Martnez-Costa
C., Silvestre M.D.
Universidad !ardenal Herrera/!EU, Edi#icio &eminario s<n. 46113 +oncada BValenciaC. E/mail0
dsilves%uc).ceu.es
La leche materna es el alimento de eleccin para el lactante durante los
primeros meses de vida. Su ingesta aporta los componentes necesarios para
su adecuado crecimiento. El protocolo seguido en su suministro debe
conservar al mximo sus propiedades sin suponer un riesgo microbiolgico
aadido. Por ello parece fundamental controlar el efecto que sobre la calidad
microbiolgica ejerce el mtodo utilizado durante la extraccin de la leche,
tanto para su ingesta directa como cuando es precisa la manipulacin previa
(bancos de leche).
El objetivo de este trabajo es evaluar el efecto que el lavado de las mamas con
solucin jabonosa ejerce sobre la calidad microbiolgica de la leche materna
(considerando en todos los casos el lavado previo de las manos).
Se han analizado 20 muestras de leche materna, obtenidas de 5 voluntarias
sanas con ayuda de un sacaleches automtico, acoplado directamente a un
frasco estril. En cada sesin de toma de muestra se obtuvo una lavando las
mamas con solucin jabonosa (10 muestras) y otra sin lavar las mamas (10
muestras), en todos los casos se realiz una higienizacin previa de manos. En
todas las muestras se investig la presencia y se realiz el recuento de los
siguientes microorganismos: microorganismos aerobios mesfilos, coliformes,
&tap)'lococcus aureus, &tap)'lococcus epidermidis, Enterococcus spp., y
Esc)eric)ia coli.
En todas las muestras estudiadas se detect la presencia de microorganismos
aerobios mesfilos y, aunque se observaron diferencias significativas (p<0,05)
entre las muestras tomadas con y sin higienizacin previa de mamas, la
reduccin en los recuentos fue inferior a 0,5 log UFC/ml.
En el caso de los coliformes solo se aislaron en un 45% de las muestras e
igualmente existieron diferencias significativas (p< 0,05) entre las muestras
obtenidas por ambos mtodos, de manera que el lavado de mamas provoc
una reduccin en los recuentos de alrededor de 1 log UFC/ml. En cuanto a la
presencia de &tap). epidermidis est fue constante en todas las muestras, pero
en cambio &tap). aureus no se aisl en ninguna de ellas. La presencia de
Enterococcus spp. y de E. coli se detect slo en un 25 y 30 % de las muestras
respectivamente. Para estos dos ltimos microorganismos, al igual que para
&tap). epidermidis, no se observ ningn efecto del proceso de higienizacin
de mamas.
Podemos concluir, por tanto, que el proceso de higienizacin de las mamas con
una solucin jabonosa previo a la extraccin de la leche, solo afecta a
determinados grupos microbianos y en ningn caso produce una reduccin en
los recuentos superior a 1 log UFC/ml.
133
C - 248
Ca!acte!i)acin de un inte!n de cla$e . encont!ado en do$ ce&a$
multi!!e$i$tente$ a antimic!obiano$ de Salmonella enterica $e!oti&o
4i!c;oT%
Rodrguez, .
a
, Martn, M.C.
b
, Herrero, A.
a
, Rodicio, M.R.
a
, Mendoza, M.C.
a
a
Nrea +icro,iolog-a, (epartamento de 6iolog-a Funcional, Universidad de Dviedo, c< 2uli"n
!laver-a 6, 33006 DviedoF eirene80%'a)oo.es.
,
1nstituto de *roductos >"cteos de Asturias B1*>AC,
Villaviciosa, Asturias
Los integrones son elementos de captura gnica especializados en la captacin
y expresin de pautas abiertas de lectura (ORF), y suelen forman parte de
transposones (Tn). Los integrones de clase 1 (asociados a la familia del Tn.1)
son frecuentes en cepas multirresistentes de diferentes serotipos de
&almonella, mientras que los de clase 2 (asociados al Tn) slo se han
encontrado en cepas concretas de los serotipos Paratyphi B, Typhimurium y
Enteritidis. En este trabajo se describen los experimentos realizados para la
caracterizacin de un integrn de clase 2, en dos cepas clnicas del serotipo
Virchow, aisladas en el Principado de Asturias en diferentes aos (1990 y
1998).
Protocolos basados en la amplificacin gnica (PCR -convencional, -anidada,
-restriccin, -secuenciacin) permitieron la deteccin y caracterizacin de
integrones, secuencias de transposones y genes de resistencia (R).
Experimentos de conjugacin, de extraccin de plsmidos mediante S1-PFGE
e hibridacin de sondas gen-especficas con perfiles S1- y Y,a-PFGE
indicaron que en las dos cepas los integrones, transposones y genes-R se
localizaban en plsmidos conjugativos.
Las cepas mostraban diferentes fenotipo/genotipo-R, perfil de integrones, y
perfil de macrorrestriccin genmica Y,a-PFGE (similitud de 0,79%). &.
Virchow LSP231/90 alberga el plsmido (pUO-&v-R1) de 275 kb portador de 12
genes-R (ampicilina/tem1F cloranfenicol/catA1F gentamicina/aacB3C/11,
sulfadiacina/sul1F estreptomicina/aadA1, strA, str6F trimetoprim/d#rA1F mercurio/
merAF amonio cuaternario/IacEF estreptotricina/sat, sat1), un integrn de clase
1 con una regin variable de nueva descripcin [2300 pb/sat-smr-aadA1], y el
integrn de clase 2 [2300 pb/d#rA1-sat1-aadA1]. La cepa LSP205/98 contiene
otro plsmido (pUO-&v-R2), tambin de 275 kb y con el integrn de clase 2
[2300 pb/d#rA1-sat1-aadA1], pero posee diferentes genes-R (cloranfenicol/
catA1; kanamicina/ap)A1F estreptomicina/aadA1, strA, str6; sulfadiacina/sul1;
trimetoprim/d#rAF mercurio/merAF amonio cuaternario/IacEF tetraciclina/tetAF
estreptotricina/sat1Ce integrn de clase 1: [1000 pb/aadA1]. Mediante
amplificaciones especficas se demostr, adems, la asociacin de los dos
integrones de clase 1 al transposn Tn.60, formado por la inclusin del Tn.1
(que contiene aadA1) dentro del Tn9 (que porta catA1). Sin embargo, la
vehiculizacin de los de clase 2 por el Tn slo pudo ser claramente
demostrada en pUO-&v-R2. En pUO-&v-R1 los resultados apuntan a la
presencia de un Tn interrumpido a nivel del gen ',#A del mismo.
Estos hallazgos reflejan una vez ms la diversidad y complejidad estructural,
as como el importante papel que los elementos genticos mviles
desempean en la dispersin de resistencias entre los microorganismos, un
problema que actualmente pone en serio peligro el tratamiento antibitico de
algunas infecciones bacterianas.
C - 251
Re$i$tencia a antimic!obiano$9 inte!one$ y &l#$mido$ en ai$lamiento$
cl,nico$ de Salmonella enterica $e!oti&o B!andenbu!
Martnez, N.
1
, Gonzlez-Hevia, M.A.
2
, Rodriguez, M.
3
, Rodicio, M.R.
1
, y
Mendoza, M.C.
1
1
(epartamento de 6iolog-a Funcional, Universidad de Dviedo,c< 2uli"n !laver-a 6, 33006 Dviedo,
noemartine$alv%)otmail.com.
.
>a,oratorio de &alud *R,lica. !onse=er-a de &anidad. *rincipado
de Asturias.
3
&ervicio de +icro,iolog-a. Hospital Universitario !entral de Asturias. Dviedo.
Aunque no est claro el origen de los genes de resistencia (R), se cree que
muchos provienen de los microorganismos productores de antimicrobianos,
que los poseen como forma de proteccin frente al efecto de las sustancias que
ellos mismos elaboran; otros, se deben a mecanismos de mutacin que han
permitido variaciones en genes esenciales, defendindolas del ataque de
determinados agentes. Los genes-R pueden mantenerse en las bacterias
originarias y su descendencia, o bien diseminarse de forma horizontal. En la
transmisin horizontal juegan un papel muy importante los elementos genticos
mviles como plsmidos, transposones e integrones/casetes gnicas. El
mantenimiento de genes-R y elementos genticos en las poblaciones
bacterianas se favorece por la presin selectiva que provoca la presencia de
antimicrobianos en el hbitat. As, las bacterias zoonticas, como los serotipos
no tifoideos de &almonella enterica, pueden adquirir la resistencia en el
hospedador animal, previamente a su transmisin al hombre a travs de la
cadena alimentaria.
En el ao 2000 se observ en Asturias un aumento de casos de salmonelosis
asociados al serotipo Brandenburg, identificndose 10 aislamientos (4 de ellos
multirresistentes), frente al nico aislamiento en 1999 (tambin
multirresistente). Este hecho sirvi de punto de partida para el presente estudio
en el que se analizan las bases genticas de la resistencia, junto al
polimorfismo de los fragmentos de macrorrestriccin-PFGE, en 36 aislamientos
clnicos de este serotipo, recogidos en Asturias a lo largo de una dcada y sin
relacin epidemiolgica aparente entre ellos.
Se encontr que cerca de la mitad (47,2%) de las cepas era MR y que una
tercera parte (33,3%) presentaba un integrn de clase 1 con una regin
variable de ca. 1600 pb y los genes aadA1 ' d#r1 (que confieren resistencia a
estreptomicina-espectinomicina y atrimetoprim, respectivamente), adems de
una tpica regin 3' constante con los genes sul1 y IacE1 (resistencia a
sulfamidas y amonio cuaternario, respectivamente). Este integrn se localiz en
cinco tipos de plsmidos (pUO-&,R1-R5) de gran tamao (190-300 kb), con
algunos determinantes-R comunes (tem1/ampicilina, catA1/cloramfenicol, y
sul3<sul#amidas) en adicin a los codificados por el integrn, y otros diferentes
(ap)A1/kanamicina-neomicina, tetABBC y tetABA)/tetraciclinas). Cuatro de estos
plsmidos pudieron ser transferidos a Esc)eric)ia coli por conjugacin. En los
aislamientos sin integrn, los determinantes-R mas frecuentes fueron aadA1 y
ap)A1/kanamicina-neomicina.
El anlisis de los perfiles Y,a-PFGE mostr una elevada heterogeneidad
genotpica entre las cepas. No se encontr una clara correlacin entre perfil
PFGE-Y,a y fenotipo/genotipo-R, presencia/ausencia del integrn y/o tipo de
plsmido. Sin embargo, es de sealar que los 10 aislamientos del ao 2000 se
distribuan en 7 perfiles-R carentes delintegrn, y que nueve de ellos
generaban un mismo perfil Y,a.
13
C - 253
E"aluacin de la $en$ibilidad a antimic!obiano$ en 1ycobacterium bovis
y 1ycobacterium caprae de o!ien animal%
Romero, B.
1
, Bezos, J.
1
, lvarez, J.
1
, de Juan, L.
1
, Aranaz, A.
1
, Mateos, A.
1
,
Gmez-Mampaso, E.
2
y Domnguez, L.
1
1
(pto. &anidad Animal. Facultad de Veterinaria. Universidad !omplutense de +adrid,
.
&ervicio de
+icro,iolog-a, Hospital ?am;n ' !a=al, 1+&A>U(, +adrid. ,romerom%vet.ucm.es
La tuberculosis bovina es una zoonosis y la transmisin de +. ,ovis de los
animales domsticos y salvajes a los humanos se ha descrito. Sin embargo,
hay muy pocos estudios sobre la sensibilidad de +. ,ovis aislados de animales.
Segn Sechi et al. (2001) la prevalencia de +. ,ovis resistentes a la isoniazida
y a la rifampicina en talia fue del 63,6%; por otra parte, Parreiras et al. (2004)
no encontraron ninguna resistencia antimicrobiana en Brasil. Hasta la fecha, la
mayora de las cepas de +. ,ovis resistentes a los frmacos usados frente a la
tuberculosis se han aislado de humanos.
El objetivo de este estudio fue determinar la susceptibilidad de +. ,ovis
aislados de animales en Espaa.
Elegimos 35 cepas representativas 32 +. ,ovis y 3 +. caprae) aislados de
varias especies animales y en varios aos, procedentes de distintas regiones y
clasificadas en diferentes spoligotipos. Como control positivo incluimos la cepa
+'co,acterium tu,erculosis ATCC27294. Evaluamos la sensibilidad de estas
cepas a los antibiticos de primera lnea usados frente a la tuberculosis en
humanos tales como la isoniazida, rifampicina, estreptomicina y etambutol,
adems de una quinolona (la ofloxacina). Los antibiogramas se realizaron
usando el mtodo de las proporciones descrito por Canetti, Rist and Grosset
(1963). El medio usado, Middlebrook 7H10, se suplement con piruvato para
favorecer el crecimiento de +. ,ovis y, de forma paralela, se usaron tubos sin
piruvato con isoniazida.
Todas las cepas fueron sensibles a la rifampicina, estreptomicina, etambutol y
ofloxacina. Sin embargo, los resultados obtenidos en los medios con isoniazida
difirieron dependiendo de la presencia o ausencia del piruvato.
Con este estudio de la susceptibilidad de +. ,ovis y +. caprae aislados de
animales concluimos que todas las cepas son sensibles a la rifampicina,
estreptomicina, etambutol y ofloxacina. Sin embargo, la susceptibilidad a la
isoniazida no puede ser evaluada debido a que existe un posible mecanismo
de supresin del piruvato sobre el antibitico.

Este trabajo ha sido financiado por el Ministerio de Ciencia y Tecnologa (AGL
2001-2029).
C - 255
T;e effect$ of !ed and T;ite Tine$ on t;e !oTt; in "it!o of 4elicobacter
pylori
Mateus, MP
1
; Dionsio, LPC
2
; Borges, N
3
; Pereira C
2
.
1
Escola &uperior da &aRde de Faro BE&&aFC, Universidade do Algarve, Estrada de >oul5, 8000/
310Faro, *ortugal mplopes%ualg.pt F
.
Faculdade de Engen)aria de ?ecursos :aturais BFE?:C,
Universidade do AlgarveF
3
Faculdade de !ibncias da :utriWXo e AlimentaWXo BF!:AC, Universidade
do *orto
The prevalence of infection by Helico,acter p'lori (H.p'lori) is around 50 %
ofmundial population and is associated with chronic gastritis, peptic ulcer and
gastric cancer.
t is generally accepted that its eradication reverse or prevent relapse of these
diseases. Some authors propose that the consumption of alcoholic beverages
may contribute to the spontaneous eradication of H. p'lori in adults. This
hypothesis is supported by in vitro and epidemiological studies.
n the present work, the anti- H. p'lori activity of red and white wines was
studied. The anti- H. p'lori activity of resveratrol, phenolic compound present in
wine, was also studied.
Eleven clinical strains and one reference strain (CCUG 15818) of H. p'lori were
inoculated in Columbia agar supplemented with 10 % of blood. The red and
white wines and the resveratrol were added in different concentrations, and
were incubated in micro-aerophilic conditions, at 37C for 48 hours.
Growth was inhibited in vitro for all strains studied in the presence of 45 % of
wine (red and white). The resveratrol presented anti-H. p'lori for all the studied
strains at 100 g/ml.
t was observed that the red and white wines studied inhibited H. p'lori growth
in vitro, suggesting that the moderate consumption of these beverages may
contribute to the spontaneous eradication of H. p'lori in adults, however the
information obtained is qualitative and more studies were needed.
References
Daroch F, Hoeneisen M, Gonzlez CL, Kawaguchi F, Salgado F, Solar H et al.
1n vitro antibactericidal activity of chilean red wines against Helico,acter p'lori.
Microbios. 2001; 104: 79-85.
Marimn JM, Bujanda L, Gutrrez-Stampa MA, Cosme A, Arenas J. 1n vitro
Bactericidal Effect of Wine against Helico,acter p'lori. Am J Gastroenterol
(letter). 1998; 93 (8): 1392.
Mahady G, Pendland SL. Resveratrol inhibits the growth of Helico,acter p'lori
in vitro. Am J Gastroenterol (letter) 2000; 95 (79): 1849.
Mahady G, Pendland S, Chadwick L. Resveratrol and Red Wine Extracts nhibit
the Growth of cag A+ Strains of Helico,acter p'lori in vitro. Am J Gastroenterol
(letter) 2003; 98 (6): 1440-41.

139
C - 256
E$tudio de lo$ mecani$mo$ de !e$i$tencia$ de fluo!o:uinolona$9
mac!lido$ y tet!aciclina$ en ce&a$ de '. +e+uni y '. coli de o!ien
;umano y alimenta!io
Martnez, ., Mateo, E., Girbau, C., Churruca, E., Fdz. de Aranguiz, A., Alonso,
R. y Fernndez-Astorga, A.
aurora.#ernande$%e)u.es
Las gastroenteritis humanas producidas por !amp'lo,acter =e=uni y
!amp'lo,acter coli son normalmente autolimitadas y no precisan de
tratamiento antibacteriano. Sin embargo, en los casos severos de prolongada
duracin se requiere de la terapia antimicrobiana, siendo los macrlidos y
fluoroquinolonas los antibiticos de eleccin. La presencia cada vez ms
habitual de cepas multirresistentes (macrlidos, quinolonas y tetraciclinas)
resulta un problema para la Salud Pblica. Los alimentos de origen animal
juegan un importante papel como vehculo de transmisin de campilobacterias
resistentes a los humanos.
En !amp'lo,acter, la resistencia a fluoroquinolonas se debe a mutaciones
puntuales en la regin QRDR (quinolone resistance-determining region) del gen
g'rA de la DNA girasa y/o del gen parC que codifica la topoisomerasa V. La
resistencia a eritromicina es debida principalmente a mutaciones puntuales,
A2074C y A2075G, que afectan al gen .3&r?:A; adems, se considera la
implicacin de las bombas de eflujo como otro posible mecanismo de
resistencia. La resistencia a tetraciclina se debe a la participacin de la protena
TetO.
El objetivo de este trabajo es el estudio de los mecanismos de resistencia a
ciprofloxacino, eritromicina y tetraciclina en cepas de !. =e=uni y !. coli de
origen alimentario y humano.
Para evitar las dificultades inherentes a los mtodos basados en el cultivo, se
han diseado mtodos moleculares basados en las tcnicas de PCR, MAMA-
PCR y PCR-RFLP con el fin de detectar los mecanismos de resistencia a
tetraciclinas, fluroquinolonas y eritromicina. Se han analizado un total de 125
cepas de !amp'lo,acter, de las cuales 95 son !. =e=uni y 33 !. coli y se han
hecho estudios comparativos del anlisis molecular con la sensibilidad
determinada por CM.
Los altos porcentajes de concordancia entre ambos mtodos revelan que los
mtodos moleculares aqu diseados son una alternativa vlida para el estudio
de los mecanismos de resistencia en !amp'lo,acter spp. Adems permiten
conocer la diseminacin de las resistencias mediante la monitorizacin
continua de !. =e=uni y !. coli como principales responsables de las
gastroenteritis bacterianas agudas.
C - 300
An#li$i$ de la &oblacin bacte!iana &!e$ente en ub!e$ de no"illa$ $ana$
e$tante$ y !e$i$tencia a antimic!obiano$
Rigaut D.Rigaut D., Soriano C.Soriano C., Cubillo .Cubillo ., Moreno M.A. y
Domnguez L.
(pto. de &anidad Animal. Facultad de Veterinaria. Universidad !omplutense de +adrid/ Av. *uerta
de Hierro s<n/ .8040 +A(?1(. E/mail de contacto0 drigaut%vet.ucn.es
A pesar de que durante muchos aos se consider que las ubres de las
novillas (bovinos que no han tenido ningn parto) no sufran problemas de
mastitis, algunos estudios han demostrado que los animales que no han
iniciado ninguna lactacin estn tambin afectados por microorganismos en el
tejido mamario (1, 2).
Los objetivos de este trabajo han sido cuantificar y caracterizar la presencia de
bacterias en las ubres de novillas gestantes sanas y estudiar su resistencia a
los antimicrobianos, especialmente a los empleados para el tratamiento de las
mastitis.
El estudio se ha realizado con 161 novillas de dos explotaciones radicadas en
la misma zona geogrfica en las que se recogieron muestras individuales de
leche de cada cuartern dos meses antes de la fecha prevista para el parto.
Las muestras (10 l) se sembraron en Agar Columbia, y se incubaron a 37 C
durante al menos 48 horas en condiciones de aerobiosis. El cultivo fue dado
positivo cuando se tena una cantidad del mismo microorganismo mayor o igual
a 500 UFC/ml. La identificacin se hizo con pruebas convencionales (tincin de
gram, catalasa y oxidasa) y con galeras comerciales multisubstrato. Los
antibiogramas se realizaron por las tcnicas de microdilucin en caldo o por
difusin.
De los animales incluidos en el estudio 114 (70'8%) tenan al menos un
cuartern con cultivo positivo (14 animales con los cuatro cuarterones
afectados; 25 con tres; 35 con dos; y 41 con uno slo).
Los microorganismos aislados con mayor frecuencia fueron los estafilococos
coagulasa negativos (SCN), que se detectaron en 96 animales (84'2% de los
animales con cultivo positivo); de ellos, la especie predominante fue
&tap)'lococcus c)romogenes presente en 69 animales (60'5% de animales
con cultivo positivo tenan &. c)romogenes).
La sensibilidad a los antimicrobianos se estudi en 185 cepas de SCN que
resultaron en general muy sensibles frente a la mayor parte de los
antimicrobianos analizados. Los niveles de resistencia ms altos se
presentaron frente a penicilina (9,7% de aislados resistentes; R>0'25 g/ml).

1- MYLLS V. (1995). J. Dairy Res. 62: 51. . - FOX L.K., et al. (1995). J Dairy
Sci; 78: 1619.

161
C - 309
Accin de lo$ concent!ado$ &!oteico$ de Lactobacillus plantarum $ob!e
una l,nea leuc'mica ;umana
Puertollano E, Puertollano MA, Cruz-Chamorro L, lvarez de Cienfuegos G, de
Pablo MA
Universidad de 2a5n, Facultad de !iencias Experimentales, Nrea de +icro,iolog-a, .301 2AE:
B&painC. e/mail0 mpvacas%u=aen.es
En los ltimos aos, los probiticos han adquirido una considerable importancia
como microorganismos capaces de ejercer un efecto beneficioso sobre la
salud, por ejemplo en la prevencin y en el tratamiento de desrdenes
intestinales, en la modulacin de la respuesta inmune o en la reduccin del
riesgo de cncer. Hasta el momento se han propuesto diferentes mecanismos
de accin de los probiticos, los cuales incluyen la regulacin de la produccin
de citoquinas, aumento de la secrecin de inmunoglobulina A, produccin de
sustancias con actividad antibacteriana, aumento de la integridad de la barrera
intestinal o la competicin con microorganismos enteropatgenos. En el
presente trabajo hemos tratado de determinar los efectos que los concentrados
proteicos derivados de estos microorganismos ejercen sobre una lnea
leucmica humana. Para ello se han concentrado las fracciones proteicas de
>acto,acillus plantarum mediante centrifugacin (Centricon plus-20, Millipore) y
seguidamente se han determinado la accin de los concentrados proteicos en
la lnea leucmica humana HL-60. Diferentes parmetros fueron cuantificados
como la viabilidad celular mediante la tcnica colorimtrica con MTT, los
efectos citotxicos medidos a travs de la liberacin de lactato deshidrogenasa
(LDH) y finalmente la produccin de especies reactivas de oxgeno (ROS)
mediante el marcaje de las clulas con 2,7dichlorodihydrofluorescein
diacetate (H
2
DCFDA), el cual se oxida por la accin de H
2
O
2
y produce una
reaccin fluorescente. Los efectos que las fracciones proteicas de >. plantarum
ejercen sobre la viabilidad celular de la lnea celular HL-60 demuestran que
concentraciones superiores a 50 g/ml dan lugar a una reduccin considerable
de este parmetro, siendo superior al 95% cuando la concentracin es de 100
g/ml. En cambio, la liberacin de LDH medida como alteracin de la
membrana celular indic que los concentrados proteicos procedentes de >.
plantarum no ejercen ningn efecto sobre la integridad de la membrana. Por
otra parte, la produccin de ROS fue sorprendentemente reducida y de forma
progresiva con el aumento de la concentracin de protenas, de manera que
una concentracin de 100 g/ml indujo un descenso significativo en la
produccin de ROS.
Los concentrados proteicos obtenidos a partir de >. plantarum son capaces de
generar una alteracin de las funciones mitocondriales y por tanto una prdida
de la viabilidad celular, pero sin la alteracin de la integridad de membrana.
Adems, las protenas obtenidas de esta bacteria inducen muerte celular a
travs de un mecanismo independiente de la generacin de ROS, sin aumentar
el estado de oxidacin.
C - 328
Genoti&o$ de +a&iloma"i!u$ ;umano detectado$ en mue$t!a$ de di$&la$ia
ce!"ical
Galan F, Anaya B, Torrejn R, Palacios E, Domnguez A, Garca-Valdivia MS,
Comino R, Rodrguez-glesias MA
>a,oratorio de +icro,iolog-a, &ervicio de 4inecolog-a ' Unidad de 1nvestigaci;n. Hospital
Universitario de *uerto ?eal, Universidad de !"di$. !arretera :acional 1V Pm 663, 11310/*uerto
?eal Bmanuel.rodrigue$iglesias%uca.esC
Los genotipos de papilomavirus humano (HPV) han sido subdivididos
considerando el riesgo de transformacin celular en tipos de bajo y alto riesgo.
El genotipado de muestras de cervix uterino donde se ha detectado
previamente HPV aporta una informacin valiosa sobre la posibilidad de que
las lesiones evolucionen hacia transformacin tumoral. En este trabajo se
describen los genotipos identificados a partir de muestras obtenidas de mujeres
con displasia cervical de diverso grado.
Se ha realizado el estudio sobre 114 muestras de cepillado endocervical
correspondientes a pacientes que presentaban lesiones displsicas en la
exploracin citolgica y en todas ellas se haba detectado ADN de HPV
mediante una tcnica de hibridacin comercial (HC, Digene). El ADN fue
extrado mediante un sistema de columna (High Pure PCR Template, Roche) y
sometido a PCR con primers SPF de la regin L1 del virus. El producto
amplificado fue hibridado con sondas fijadas a tiras de nitrocelulosa y
detectadas mediante una reaccin enzimtica (nnolipa HPV, nnogenetics).
Han sido detectados 204 genotipos en el total de muestras (1.87
genotipo/muestra). Las infecciones mixtas fueron ms frecuentes que las
producidas por un solo genotipo (54.4% vs 45.6%). Del total de 62 infecciones
mixtas 30 fueron dobles, 22 triples, 6 cudruplesy en cuatro se detectaron 5 o
ms genotipos. Los genotipos de alto riesgo fueron ms frecuentes que los de
bajo riesgo (151 vs 51). Los genotipos de alto riesgo detectados ms
frecuentemente fueron 16 (34.2%), 51 (20.1%), 52 (14.0%), 31 (9.6%), 18
(8.7%), 53 (8.7%), 33 (7.9%), 66 (7.9%), 39 (7.0%) y 56 (7.0%). Otros
genotipos de alto riesgo fueron 35, 45, 68, 58, 59 y 74. En los de bajo riesgo
predominaron los tipos 11 (21.0%) y 6 (20,1%), detectndose tambin 40, 42 y
44.
El genotipo 16 es predominante en las muestras displsicas, sin embargo es
muy destacable la variedad de genotipos distintos. Existen pocos estudios en
nuestro pas que describan los tipos ms frecuentes, siendo este aspecto muy
importante debido al planteamiento de futuras estrategias vacunales basadas
en el genotipo 16 y a la llegada de personas procedentes de regiones
geogrficas con perfiles de prevalencia distintos a la nuestra.

163
C - 338
Deteccin de cito:uina$ mediante RT=+CR &a!a el dian$tico de la
tube!culo$i$ en un !eba6o ca&!ino%
Bezos J., lvarez J., Romero B., de Juan L., Aranaz A., Mateos A., Domnguez
L.
(epartamento de &anidad Animal, Facultad de Veterinaria. Universidad !omplutense de +adrid.
Avda. *uerta de Hierro s<n. .8040. +adrid. =,e$osga%vet.ucm.es
La tuberculosis origina cuantiosas prdidas econmicas en ganadera
producidas por gastos generados en la erradicacin y compensaciones a los
propietarios por el sacrificio obligatorio, descenso en las producciones,
descenso en el aprovechamiento de nutrientes y decaimiento progresivo, y
limitaciones al comercio de los animales y sus productos. El principal agente
etiolgico de la tuberculosis en cabras es +'co,acterium caprae. Aunque no
existen datos oficiales de prevalencia de la enfermedad en cabras en Espaa
se conoce la presencia de rebaos fuertemente infectados en varias regiones.
El objetivo de este estudio fue la deteccin del patrn de citoquinas mediante
un cultivo in vitro de sangre completa con antgenos especficos. Las clulas
previamente sensibilizadas (procedentes de animales infectados) sintetizan
determinadas citoquinas. El patrn de citoquinas generado vara entre
animales, principalmente debido al estadio de la infeccin.
La sangre de cabras de rebaos infectados fue remitida al laboratorio antes de
6 horas tras su extraccin. En el laboratorio fue distribuida en placas de cultivo
celular y estimulada con PPD aviar, PPD bovina y PBS (control negativo).
Simultneamente se hizo un control positivo utilizando sangre estimulada con
mitgeno (poOeAeed mitogen). Tras la incubacin de la sangre 18 horas a 37C
se procedi a la extraccin del ARN total a partir de sangre completa
(Aquapure RNA Blood Kit, Bio-Rad Lab). El ARN extrado fue tratado con
DNase (nvitrogen) para eliminar posibles restos de ADN residual y
conservado a -80C. Posteriormente se realiz la transcripcin reversa (RT) del
ARN (iScript cDNA Synthesis Kit, Bio-Rad Lab.) y el cDNA de citoquinas
caprinas importantes en la tuberculosis como FN-g, L-12, L-2, TNF- and L-
10 fue amplificado utilizando los correspondientes primers especficos. Los
productos de PCR fueron observados mediante electroforesis en gel de
agarosa al 2% teido con bromuro de etidio. Al detectar un amplio nmero de
citoquinas, la tcnica es ms sensible que la tcnica de deteccin de FN-g
mediante el kit Bovigam (CSL). Una vez conocido el patrn de citoquinas en
cada animal se compararon los resultados con los obtenidos mediante la
tcnica de ELSA para deteccin de FN-g, intradermotuberculinizacin (DTB)
y cultivo bacteriolgico. Con el objetivo de observar la correlacin entre la
transcripcin del ARNm y la posterior produccin de FN-g y otras citoquinas se
realiz la extraccin del ARN a partir de sangre completa de un nmero
determinado de animales a diferentes tiempos tras la estimulacin (0, 2, 5 y 18
horas) y se observaron los diferentes patrones de produccin en relacin al
tiempo transcurrido.
C - 393
Relacione$ ent!e f!ecuencia de mutacin y !e$i$tencia a lo$
antimic!obiano$ en Escherichia coli de o!ien animal
Escudero, E, Porrero, M.C., Rivero, E., Domnguez L., y Moreno, M.A.
(epartamento de &anidad Animal, Facultad de Veterinaria, Universidad !omplutense, Avda.
*uerta de Hierro, s<n, .8040, +adrid, eescudero%vet.ucm.es
El amplio arsenal teraputico de antimicrobianos que se ha ido desarrollando a
lo largo del tiempo, haca presuponer que las bacterias patgenas seran
eliminadas. Sin embargo, el empleo generalizado, extensivo y muchas veces
inadecuado de antimicrobianos, tanto en medicina como en ganadera y
agricultura, est contribuyendo a la seleccin de cepas bacterianas resistentes.
Para adaptarse a la presin selectiva que ejercen los antimicrobianos, las
bacterias utilizan diferentes mecanismos, siendo uno de ellos la modificacin
de las dianas teraputicas Las cepas hipermutadoras presentan fallos en los
mecanismos de replicacin del DNA, que se traducen en frecuencias de
mutacin superiores a las normales, y que por tanto se pueden detectar
fenotpicamente analizando dichas frecuencias. Aunque los estudios en los que
se analiza esta caracterstica son frecuentes en bacterias de origen humano,
no existen datos en bacterias procedentes de animales.
Los datos de la Red de Vigilancia Veterinaria de resistencia a los
antimicrobianos (VAV) indican que los perfiles de multirresistencia no siguen
una distribucin al azar, sino que parece existir una acumulacin secuencial de
fenotipos de resistencia. Para conocer si los niveles de resistencia estn
relacionados con la frecuencia de mutacin de las bacterias, hemos analizado
este parmetro empleando rifampicina (100 g/ml) en una coleccin de 214
aislados de E. coli, procedentes de animales enfermos y pertenecientes a la
Red VAV. Los aislados se agruparon en funcin del nmero de resistencias,
utilizando los datos de sensibilidad frente a tetraciclina, sulfamidas,
estreptomicina, trimetoprim, amoxicilina, cloranfenicol y cido nalidxico.
Hemos encontrado que la frecuencia de mutacin (f) ha oscilado entre
3,19x10
-9
y 1,26x10
-6
, con la mediana situada en 2,84x10
-8
. Atendiendo a esta
frecuencia 13 aislados (6,1%) se han clasificado como hipomutadores (f menor
que 8x10
-9
), 121 (56,5%) como normomutadores (f mayor que 8x10
-9
y menor
que 4 x10
-8
), 73 (34,1%) como mutadores dbiles (f mayor o igual que 4 x10
-8
y
menor que 4 x10
-7
) y 7 (3,3%) como mutadores fuertes o hipermutadores (f
mayor o igual que 4 x10
-7
). Comparando los aislados con resistencia frente al
menos uno de los siete antimicrobianos con los sensibles a todos ellos, hemos
encontrado diferencias en la proporcin de aislados mutadores dbiles (36,9%
versus 27,7%) y en la de hipomutadores (2,7% versus 13,8%); adems, los
aislados porcinos (93) presentan la mayor proporcin de hipermutadores
(5,4%) y la menor de hipomutadores (1,1%). En conjunto, estos datos sugieren
que la hiptesis de la existencia de mayores frecuencias de mutacin en las
cepas resistentes a los antimicrobianos es posible.
Este trabajo forma parte del proyecto AGL2002/02637.
163
C - 414
Efecto de !itona"i! en la ad;e!encia de 'an$i$a $ubliniensis a c'lula$
e&iteliale$ bucale$%
Lucio L.; Morales J.J.; Beteta A.; Sacristn B.; Prez Giraldo C.; Blanco M.T.
(epartamento de +icro,iolog-a Facultad de +edicina. Universidad de Extremadura. Avda. Elvas
s<n. 6ada=o$. BE/mail0 matere%unex.esC
La especie !andida du,liniensis se aisla de la cavidad oral de pacientes con
SDA. Parece ser que ritonavir, un antirretroviral inhibidor de la aspartil-
proteasa, puede modificar algunos determinantes de patogenicidad de las
levaduras.
Siendo la adhesin a clulas un importante factor de virulencia, el objetivo
de este trabajo fu estudiar la capacidad de adherencia de !. du,liniensis
CECT 11455 pretratada con ritonavir, a clulas epiteliales bucales (CEBs).
Para conocer la influencia de ritonavir (Abbot) en la adherencia a CEBs se
incub previamente !. du,liniensis durante 24 h a 37C en presencia de 8 mg/l
de ritonavir en un medio nitrgeno limitante (YCB-BSA), que induce la
produccin de aspartil-proteasas por la levadura. A partir de los cultivos, se
prepar una suspensin de 10
7
levaduras/ml en PBS y se incub 1 h a 37C
con 10
5
CEBs/ml obtenidas con un hisopo, lavadas y resuspendidas en PBS.
Se valor la capacidad de adherencia a clulas utilizando el mtodo de Kimura
y Pearsall (1978) por recuento microscpico de las levaduras adheridas a 100
CEBs, tanto del grupo de levaduras pretratadas con ritonavir como del
grupocontrol. Tambin se cuantific la cantidad de albmina consumida en el
medio por el mtodo de Bradford (Bio-Rad). Se realiz un estudio paralelo
utilizando como inhibidor de proteasa 0.7 g/l de pepstatina (Sigma).
Se observ una disminucin significativa del consumo de albmina en
presencia de ritonavir durante la fase exponencial del cultivo aunque al
alcanzar la fase estacionaria el consumo de albmina fu similar en ambos
grupos, producindose con ritonavir una curva de crecimiento de tipo diuxico.
Por el contrario, en relacin con el control se detect un incremento de la
adherencia a CEBs de !. du,liniensis pretratada con ritonavir (446+44) as
como en presencia de pepstatina (356+62) en relacin con el control (290+68).
Este aumento en la adherencia a clulas en presencia de ritonavir, podra
explicar la frecuencia de esta especie en enfermos de SDA.
C - 418
E$tudio !et!o$&ecti"o de bacte!iemia en &aciente$ $ometido$ a t!a$&lante
autloo de &!oenito!e$ ;emato&oy'tico$
Amigo Lozano, M.L.
1
, Teno Snchez, P.
2
, Yiguez Ovando, R.
2
, Bergua Burgos,
J.
1
.
1 &ecci;n de Hematolog-aF . &ecci;n de +icro,iolog-a. !omple=o Hospitalario de !"ceres. Avda.
*a,lo :aran=o, s<n. 10003 !"ceres. pilar.teno%ses.=untaex.es
Ob*eti"o: Estudiar la incidencia de las bacteriemias en los pacientes sometidos
a trasplante autlogo de progenitores hematopoyticos en nuestro centro.
Mate!ial y m'todo$8 Se revisaron de forma retrospectiva las historias clnicas
de lospacientes en los que se realiz un autotrasplante entre Mayo/2000 y
Mayo/2005. Se analizaron los resultados de los hemocultivos extrados durante
los episodios febriles.
Re$ultado$8 En este tiempo 87 pacientes, 50 hombres y 37 mujeres, se
sometieron a trasplante autlogo. La edad media fue de 46 aos (16-69). La
enfermedad de base era una neoplasia hematolgica en 81 casos y un tumor
slido en los 6 restantes. Todos los pacientes eran portadores de un catter
venoso central: yugular triple va en 53, catter tipo Hickman en 20 y port-a-
cath en 14. La media de das que dur el ingreso fue de 24 (13-79). Los
trasplantes se llevaron a cabo en habitaciones dotadas de filtros HEPA y
sistema de presin positiva. No se realiz profilaxis antifngica en ningn caso
y 18 pacientes recibieron quimioprofilaxis con ciprofloxacino. De los 78
pacientes con fiebre, en 28 fue positivo el hemocultivo (35.9%). Los grmenes
ms frecuentemente aislados fueron: &tap)'lococcus coagulasa negativo
(32.1%), Esc)eric)ia coli (25%), &treptococcus spp. (17.8%), *seudomonas
aeruginosa (7.1%) y Haemop)ilus in#luen$ae (3.5%). No se obtuvo ningn
aislamiento de hongos.
Conclu$ione$8 Los resultados de nuestro estudio son similares a los
publicados por otros autores. Los grmenes que producen bacteriemia con ms
frecuencia son los &tap)'lococcus coagulasa negativo.

16
C - 422
A&licacin de ma!cado!e$ en'tico$ &a!a la deteccin de i$la$ de
&atoenicidad en Staphylococcus aureus &!ocedente$ de &o!tado!e$
;umano$
1
Argudn, M. A.,
1
Fueyo, J. M.,
1
Rodicio M. R.,
1
Mendoza M. C. y
2
Martn M. C.
1
(epartamento de 6iolog-a Funcional BNrea de +icro,iolog-aC, Universidad de Dviedo, e 1nstituto
Universitario de 6iotecnolog-a de Asturias B1U6AC, c<2uli"n !laver-a s<n, 33006, Dviedo.
.
1nstituto
de *roductos >"cteos de Asturias B!&1!C, !arretera de 1n#iesto s<n, 33300 Villaviciosa, Asturias.
marian[argu%)otmail.com.
&tap)'lococcus aureus es agente causal de diversas patologas en el ser humano,
l cual adems, constituye un reservorio importante. Las enfermedades originadas
por esta bacteria incluyen tres grupos: infecciones directas (cutneas, superficiales
o profundas); infecciones invasivas (bacteriemia e infecciones focales);
enfermedades mediadas por toxinas superantgenos (sndrome del shock txico,
sndrome de la piel escaldada e intoxicacin alimentaria). Una gran parte de los
determinantes de virulencia (V) de &. aureus han sido adquiridos por procesos de
transferencia horizontal en los que han participado elementos genticos mviles
(EGM: bacterifagos, transposones, y plsmidos), y se encuentran organizados en
islas de patogenicidad (SaP o Sa). La secuenciacin completa o parcial de
genomas de &. aureus ha permitido conocer la estructura dediversas Sa y revel
la coexistencia frecuente de ms de un EGM asociado a virulencia.
En 73 aislamientos (a) de &. aureus procedentes de portadores humanos, se
rastrearon genes-V asociados a EGM cuya secuencia de nucletidos es conocida y
que hemos agrupado en: i) Sa=int derivadas de bacterifagos, para cuya
deteccin se utilizaron los genes (producto codificado) ear (-lactamasa), tst (toxina
del sndrome del shock txico) y sea, se,, sec, see, seg, seO, sel, seI
(enterotoxinas), >uO*V (leucocidina Panton-Valentine) y eta ' etd (epidermolisinas);
ii) Sa=tnpderivadas de transposones, utilizando como marcadores splF (serin
proteasa), epi6 (bacteriocina), luPE( (leucocidina-ED de dos componentes), y el
cluster egc (seg-sen-sel-sem-seoseu); y iii) &l#$mido$ de "i!ulencia, utilizando
los genes et,, y sed/se=/ser.
Se encontraron distintas combinaciones gnicas, pero slo algunas de ellas fueron
compatibles con EGM descritos: i) ti&o Sa=int: ear-se,/seO/seI con Sa1/SaP3
(2 a) y ear-sel/sec con Sa3-tipo /SaP4b (5 a); ii) ti&o Sa=tnp splF/ear-luOE(-
egccseu con Sa-tipo (8 a), splF-ear-epi6/luOE( con Sa-tipo (4 a) y splF-
egc+seu con Sa-tipo (13 a); y iii) &l#$mido$ de "i!ulencia: sed/se=/ser con un
plsmido de 33 kb (2 a). Entre los genes individuales/combinaciones de nueva
descripcin destacan: i) "a!iante$ Sa=int: tst (15 a), sea (15 a), sec (1 a); ii);
"a!iante$ de SaU: tipo V con splF-luOE(-egcseu (17 a); tipo V con splF-luOE(
(9 a); tipo V splF/ear-luOE( (3 a) y tipo V con egc (7 a). Al menos 23 aislamientos
contienen aparentemente ms de un EGM, destacando la combinacin de Sa-
tipo con tst (2 a), sea (2 a) o tst-sea (8 a), y del plsmido sed/se=/ser con Sa tipo
V (2 a). Los genes see, eta, et,, etd no se pudieron detectar en ningn aislamiento
y 5 aislamientos fueron negativos para todos los genes rastreados.
La caracterizacin de las islas o EGM relacionados con virulencia en &. aureus,
(sean compatibles o no con agrupaciones descritas), tiene inters clnico y
epidemiolgico. Podr aportar informacin sobre su implicacin en cuadros clnicos
definidos tanto en el hombre como en los animales, y sobre la evolucin de la
virulencia en &. aureus.
C - 459
Actinobacillu$ actinomycetemcomitan$ 8 itV$ oute! memb!ane%
Escribano, C
1
; Ruiz, L
1
; Vinuesa, T
1
; Benz, R
2
; Vias, M
1
1
&ecci; de +icro,iologia. (epartament de *atologia i 7erapeutica experimental. Facultat
(TDdontologia. Universitat de 6arcelona. . Feixa >larga s<n 0890. Hospitalet de >lo,regat.
6arcelona. &pain.
.
>e)rst)ul #`r 6iotec)nologie. Universit' o# V`r$,urg. 4erman'. !orresponding
aut)or0 escri,an.000%mixmail.com
Actino,acillus actinom'cetemcomitansis a bacterial species including Gram
negative, nonmotile, capnophilic short rods. t is considered as one of the most
prominent pathogenic microorganism associated with periodontal diseases,
mostly agressive periodontitis. The role of the bacterium is specially relevant in
localized juvenile periodontitis and acute progressive periodontitis.
Gram-negative bacteria are surrounded by an external leaflet so called outer
membrane. This membrane is formed by a double bilayer constituted by
phospholipids and lipopolysaccharides and proteins. Outer membrane proteins
(Omp) have some particular characteristics i.e. ability to form pores through
which nutrients, as well as antibiotics penetrate the cell. Thus, they have many
important functions with important consequences on almost all physiological
functions.
By using electrophoresis in polyacrylamide gels denaturalizing we have been
able to identify six major sarkosyl-insoluble outer membrane proteins (Omp) in a
collection offourteen different strains of A. actinom'cetemcomitans. Theywere
designated as Omp100, Omp 64, Omp 39, Omp 29, Omp 18 and Omp 16,
regarding their molecular masses and in agreement with other authors.
Among these proteins one of them, Omp 39, was supposed to be a porin, since
its molecular weight is in the range of porin Mw. Thus, ability to form pores of
such a protein was measured by using artificial black Planar Lipid Bilayers
following the method of Benz. When experiments were done we measured a
conductance of 0.75nS in KCl 1M, this represents approximately a pore
diameter of 0.73nm.
Phenotypes in terms of antimicrobial susceptibility, of A.
actinom'cetemcomitans strains herein studied were determined by measuring
the Minimal inhibitory concentrations of the most frequently used antibiotics. All
strains resulted to be moderately resistant to clyndamicine. Although more
experimental work should be done, the narrow pores formed by A.
actinoom'cetemcomitans porin could be the reason (or contribute to)
clyndamicin resistance ofthis bacterial species
169
C - 460
Relation$;i& betTeen clinical and en"i!onmental i$olate$ of
Pseu$omonas aeruginosa in t;e ;o$&ital $ettin%
Ruiz L, Escribano C, Vinuesa T, and Vias M
+icro,iolog' Unit. (epartment o# *at)olog' and Experimental 7)erapeutics. Universit' o#
6arcelona. !ampus de 6ellvitge. Feixa >larga s<n 0890. Hospitalet de >lo,regat. 6arcelona.
&pain. lidiarui$m%u,.edu
Populations of *. aeruginosa have been extensively studied although there is
not general agreement concerning their genetic structure. t has been proposed
that *. aeruginosa is a very homogeneous species with 90% of individuals
within the same clonal group but other results suggested that *seudomonas
populations are panmictic. Here we compare *. aeruginosa populations from
clinical and environmental samples isolated both from the Bellvitge Hospital.

Antibiotic susceptibility determination as well as whole cell and outer membrane
protein denaturing gel electrophoresis, pulsed-field electrophoresis and random
amplified polymorphic DNA analysis were performed.

Environmental isolates were much more susceptible to antibiotics than those
isolated from clinical specimens. The rest of the analyses revealed a high
degree of diversity. Whole-cell proteins, outer-membrane protein and pulsed
field electrophoresis did not support a close relationship between clinical and
environmental isolates. RAPD confirmed the distance between the isolates from
both sources.

This suggests that the origin of hospital infections by *. aeruginosa are mainly
due to the growth of bacterial strains acquired by patients prior to admission to
hospital or from patient-to-patient through health care workers (HCWs).
C - 462
La im&o!tancia de una adecuada !ecoida de mue$t!a$9 &a!a el
dian$tico micolico de la ti6a unWeal%
Zalacain A., Ruiz L., Escribano C., Vinuesa T., y Vias M.
Unidad de +icro,iolog-a. (epartamento de *atolog-a ' 7erap5utica Experimental. Universidad de
6arcelona. !ampus de 6ellvitge. Feixa >larga s<n 0890. Hospitalet de >lo,regat. 6arcelona.
a$alacain%u,.edu
Debido a la diversa patologa ungueal existente y su gran afectacin en la
poblacin es muy importante el poder llegar a un buen diagnstico, tanto
clnico, como la confirmacin de existencia del hongo as como su
identificacin,a travs de los cultivos. Para ello es requisito bsico el que se
recoja la muestra de la zona y de la forma adecuada, siguiendo unos sencillos
pero tiles protocolos.

El objetivo de este panel es demostrar de una manera prctica la forma
habitual de la recogida de muestras, pero realizndolo de forma protocolizada y
resaltando la importancia de los pasos a seguir, as como su adecuada
ejecucin, para intentar paliar al mximo los falsos negativos en los resultados
de los cultivos as como los posibles contaminantes externos.

Para ello se realiza un protocolo de recogida de muestras, resaltando las
condiciones favorables, as como los errores ms habituales y las deficiencias
que nos pueden hacer que de una ua patolgica nos de un errneo resultado
del cultivo por no haber obtenido adecuadamente la muestra.

Es muy importante para el diagnostico de las micosis ungueales, el poder
establecer un buen diagnstico diferencial clnico, as como su adecuada
confirmacin por los resultados del laboratorio, si no queremos seguir cayendo
en una cadena de errores muy habituales en la prctica diaria de nuestro
ejercicio profesional.

11
MICROBIOLOGA MEDIOAMBIENTAL
E - 13
Identificacin de bacte!ia$ filamento$a$ con lo$ mo!foti&o$ (ostocoi$a
limicola I9 II y III con la t'cnica >ISD en EDAR$ de la Comunidad
4alenciana
Alonso J.L.
1
, Navarro M.D.
1
, Cuesta G.
2
, Ramrez G.
1
1
1nstituto de 1ngenier-a del Agua ' +edio Am,iente '
.
(epartamento de 6iotecnolog-a, Universidad
*olit5cnica, !amino de Vera 14, 460.. ValenciaF e/mail0 =alonso%i)dr.upv.es
La bacteria filamentosa :. limicola se aisl por primera vez de fangos activos, y
se describi como Gram-positiva, con forma de cocos en cadenas, con
crecimiento lento, no mvil (van Veen, 1973). Eikelboom y van Buijsen (1983)
propusieron los tres morfotipos de :. limicola (, , ) en funcin de las
dimensiones celulares, con :. limicola como el ms pequeo y :. limicola
como el ms grande. Estos autores pensaron que sera la misma especie con
diferentes tamaos. La caracterizacin e identificacin de :. limicola , y se
lleva a cabo en las plantas depuradoras a partir de caractersticas morfolgicas
y tinciones diferenciales (Gram y Neisser). Esta rutina de trabajo no
corresponde a una clasificacin sistemtica, sino simplemente de tipo
morfolgico. El objetivo del presente trabajo es utilizar la tcnica de hibridacin
in situ (FSH) para la identificacin de los morfotipos filamentosos :. limicola ,
y en los rectores biolgicos de plantas biolgicas depuradoras de aguas
residuales con el sistema de fangos activos.
Se han tomado muestras de los reactores biolgicos de 20 plantas
depuradoras de la Comunidad Valenciana con problemas de espumas de
origen biolgico y esponjamiento de fangos. Las sondas utilizadas para la
identificacin de los morfotipos de :. limicola , y han sido: :. limicola
sonda NLM 91 (Liu y seviour, 2001, 2002); :. limicola sondas AHW 183
(Schade et al., 2002), Noli 644 (Snaidr et al., 2002), NLM 192y NMLM 175
(Liu y Seviour, 2001); :. limicola sondas NLM 301, MLM 792 y NLM
830 (Liu y Seviour, 2001). Otras sondas FSH utilizadas han sido: EUB 338
(Amann et al., 1990); EUB 338 (Daims et al., 1999); HGC69a (Roller et al.,
1994); LGC 354A, 354B y 354C (Meier et al., 1999) y ALF 1b (Manz et al.
1992). Las clulas de :. limicola se han incubado con lisozima a 4 C durante
10 minutos (Luxmy y Yamamoto, 2002). Las hibridaciones se han realizado a
46C durante 1.5 h segn el protocolo de Amann (1995).
Con la tcnica FSH se han identificado morfotipos de :. limicola en cinco
phylum diferentes. :. limicola : phylum Firmicutes (10 depuradoras). :.
limicola : Proteobacteria (5 depuradoras), Actinobacteria (7 depuradoras) y
Chloroflexi (1 depuradora). :. limicola : Planctomycetes (2 depuradoras).Los
morfotipos :. limicola , y se asocian con bajas cargas msicas, dficit de
nutrientes (fsforo, nitrgeno) y niveles bajos de O
2
disuelto (Jenkins et al.,
1993; Eikelboom, 1983). Sin embargo los resultados obtenidos demuestran que
los morfotipos :. limicola , y pueden corresponder a diferentes especies de
bacterias, con caractersticas fisiolgicas y ecolgicas diferentes y por tanto
establecer medidas de control de estos morfotipos en funcin solo de sus
caractersticas morfolgicas puede ser arriesgado, como sealan tambin otros
autores (Liu y Seviour, 2001).
+icro,iolog-a +edioam,iental
13
E - 16
Deteccin de 'ryptospori$ium en aua$ y fano$ de EDAR$ de la
Comunidad 4alenciana mediante IMSPI>A y +CR
Amors, .
1
, Navarro
1
, M.D., Berncer .
2
y Alonso, J.L.
1

1
1nstituto de 1ngenier-a del Agua ' +edio Am,iente, Universidad *olit5cnica, !amino de Vera 14,
460.., Valencia '
.
Entidad de &aneamiento de AguasF e/mail0 iamoros%i)dr.upv.es
La reutilizacin del agua residual es una necesidad que se viene planteando
desde hace aos, al menos para algunos fines concretos, y as racionalizar las
reservas de agua destinndolas a actividades de primera necesidad
(OMS,1989). Los fangos procedentes de plantas de tratamiento biolgico
pueden ser utilizados, una vez tratados, como fertilizantes o mejorantes de los
suelos. !r'ptosporidium es un protozoo patgeno que puede estar presente en
las aguas y fangos, responsable en los ltimos aos de numerosos brotes de
criptosporidiosis.
El objetivo de nuestro estudio es investigar la presencia de ooquistes de
!r'ptosporidium en los afluentes de las depuradoras y en los efluentes
tratados, para determinar por una parte la eficiencia del tratamiento utilizado, y
por otra los niveles de ooquistes que pueden contener las aguas residuales
tratadas. Del mismo modo, los fangos activos responsables del tratamiento
biolgico tambin han sido objeto de estudio para determinar los niveles de
ooquistes que se encuentran antes y despus del tratamiento de los mismos El
estudio fue llevado a cabo a lo largo de un ao, en 5 plantas de tratamiento
biolgico, con diferente procesado de los fangos (digestin anaerobia, digestin
aerobia, estabilizacin con cal, estabilizacin trmica, aireacin prolongada) y
en una planta de compostaje.
Un total de 44 muestras de agua residual bruta y tratada y 60 muestras de
fangos antes y despus de su tratamiento han sido analizadas para determinar
la presencia de ooquistes de !r'ptosporidium mediante MS/FA. Un volumen
de 50-100 ml de agua residual bruta y 800 ml de agua residual tratada fueron
concentradas por centrifugacin. En el caso de los fangos se pes 1 gramo de
fango segn la tcnica descrita por Massanet-Nicolau (2003). Para la PCR se
utilizaron 2 kits comerciales de extraccin de DNA (MoBio). En el caso de la
PCR simple se ha utilizado el par de iniciadores SB012 (Wu et al, 2000). Para
las 2 PCR anidadas, los pares de iniciadores utilizados han sido KJL/CPB
DAG (Jellison et al, 2002) y SSU1/SSU2. (Xiao et al, 2000)
Mediante la tcnica MS/FA se han observado ooquistes de !r'ptosporidium
en todos los afluentes, con valores que oscilan entre 10.100 y 80 ooquistes por
litro, mientras que en los efluentes el nmero de ooquistes detectado ha estado
entre 100 y 0 por litro. Los valores de ooquistes observados en los fangos
tratados, han sido superiores a los de los fangos antes del tratamiento en 15 de
los 25 muestreos realizados, excepto en la planta de compostaje en la que el
nmero de ooquistes en el fango tratado (compost) ha sido 0 en todos los
muestreos. Mediante PCR simple, han sido analizadas 26 muestras de aguas,
de las cuales 10 (8 afluentes y 2 efluentes) fueron positivos (38, 46%), y 57 de
fangos, de las que 19 (9 antes del tratamiento y 10 despus) han dado positivo
(33,33%). No se ha detectado !r'ptosporidium en ninguna muestra mediante
PCR anidada por lo que no se han podido determinar los genotipos.
+icro,iolog-a +edioam,iental 16
E - 17
Deteccin de .iar$ia en aua$ y fano$ en EDAR$ de la Comunidad
4alenciana
Navarro, M.D.
1
, Amors, .
1
, Berncer, .
2
y Alonso, J.L.
1
1
1nstituto de 1ngenier-a del Agua ' +edio Am,iente, Universidad *olit5cnica, !amino de Vera 14,
460.. Valencia '
.
Entidad de &aneamiento de AguaF e/mail0 dolnala%doctor.upv.es.
4iardia lam,lia es un protozoo patgeno que puede estar presente en aguas
residuales y fangos de depuradoras, produce la enfermedad llamada giardiasis.
El objetivo de nuestro estudio es determinar la presencia de quistes de 4iardia
en los afluentes y efluentes deplantas depuradoras de aguas residuales
domsticas con fangos activos y con diferentes sistemas de procesado de los
fangos, para as establecer la eficiencia de los diferentes tratamientos
empleados. Y todo ello por el inters en la reutilizacin tanto de las aguas
residuales como de los fangos tratados procedentes de las depuradoras como
agua de riego y fertilizantes, respectivamente.
El estudio se ha realizado a lo largo de un ao en 5 plantas de tratamiento
biolgico, con diferente procesado de los fangos (digestin anaerobia, digestin
aerobia, estabilizacin con cal, estabilizacin trmica, aireacin prolongada) y
en una planta de compostaje.
Un total de 44 muestras de agua residual bruta (afluente) y tratada (efluente
final) y de 60 muestras de fangos antes y despus de su tratamiento han sido
analizadas para determinar la presencia de quistes de 4iardia mediante
MS/FA. Un volumen de 50-100 ml de agua residual bruta (afluente) y 800 ml.
de agua residual tratada (efluente final) se ha concentrado por centrifugacin a
3.000 rpm durante 15 min.En el caso de los fangos se ha analizado un gramo
de fango segn la tcnica descrita por Massanet-Nicolau (2003). Para la PCR
se han utilizado 2 kits comerciales para la extraccin de DNA (MoBio).En el
caso de la PCR simple se han empleado los iniciadores MM1/MM2 (Kuhn et al.,
2000). Para la PCR anidada se han utilizado los iniciadores G7F/G759R para la
primera PCR G376F/G759R y para la segunda. Para la tcnica de RFLP las
enzimas de restriccin empleadas han sido Hae y H)a (Cacci et al., 2002).
Los resultados obtenidos mediante MS/FA han mostrado que los afluentes
contenan niveles de quistes de 4iardia comprendidos entre 1450 y 16. En los
efluentes el nmero de quistes detectados ha sido 2 rdenes de magnitud ms
bajos. En los fangos se ha obtenido recuentos de quistes ms altos en los
tratados que en los fangos sin tratar, excepto en la planta de compostaje, en la
que no se han detectado quistes. El proceso de maduracin del compost ha
favorecido la eliminacin de los quistes de 4iardia.
En el caso de la PCR simple han sido analizadas 28 muestras de agua, de las
cuales 16 (15 afluentes y 1 efluente) fueron positivas y 60 de fangos, de los que
27 (14 antes del tratamiento y 13 despus) han dado positivo (45%). Con la
PCR anidada se ha podido determinar el genotipo A1 de 4iardia lam,lia en
Castelln (afluente), A2/A3 en Villareal (afluente), A2/A3 en bi (afluente) y E en
el fango de Sueca (antes del tratamiento).
1
E - 52
+la$ticidad enmica y mutacin8 do$ mecani$mo$ en'tico$
in"oluc!ado$ en la ada&tacin de un mic!oo!ani$mo ante un e$t!'$
:u,mico
Martn-Cardona C., Christie-Oleza J.A., Lanfranconi M.P., Nogales B., Lalucat
J. y Bosch R.
+icro,iolog-a, (epartamento de 6iolog-a, Universitat 1lles 6alears. !tra. Valldemossa Pm. ,3 /
01.. *alma de +allorca. e/mail0 celia.martin%ui,.es
Para que un microorganismo sea capaz de crecer en un medio utilizando un
compuesto qumico determinado como nica fuente de carbono y energa es
indispensable que, a priori, contenga en su dotacin gentica los genes
esenciales implicados en el catabolismo de dicho compuesto qumico.

Esta observacin, que resulta tan evidente a simple vista, no implica que el
microorganismo en cuestin haya alcanzado su grado mximo de eficiencia en
el consumo y utilizacin del compuesto utilizado como nica fuente de carbono
y energa. Es por esta razn que nos planteamos estudiar el papel de dos
mecanismos evolutivos esenciales como son la plasticidad genmica y la
mutacin en el proceso de adaptacin de un microorganismo al estrs qumico
provocado por la presencia de concentraciones crecientes de un hidrocarburo
que acta como nica fuente de carbono y energa.

La cepa seleccionada para llevar a cabo dicho estudio ha sido *seudomonas
stut$eri AN10. Se trata de una bacteria no fluorescente del gnero
*seudomonas aislada de sedimentos marinos contaminados. Este
microorganismo es de enorme inters debido a su capacidad para degradar
diferentes contaminantes ambientales y polietilenglicoles de elevado peso
molecular. En este sentido cabe destacar que *.stut$eri AN10 es capaz de
crecer utilizando naftaleno, 2-metilnaftaleno y salicilato como nica fuente de
carbono y energa ya que contiene los genes esenciales implicados en dichos
procesos. Estos genes se hallan distribuidos en cuatro operones (de ubicacin
cromosmica): uno que codifica para los genes implicados en la transformacin
del naftaleno en salicilato (na)ABFCED), dos que incluyen los genes
implicados en la conversin de salicilato en intermediarios del ciclo de Krebs
(na)GTHNLOMKJ y na)W) y el cuarto que codifica para el gen regulador
(na)R).

Tras ms de 2500 horas de crecimiento de la cepa *.stut$eri AN10 en
presencia de elevadas concentraciones de salicilato (superiores a su CM)
como nica fuente de carbono y energa hemos puesto de manifiesto que los
procesos de plasticidad genmica y mutacin son importantes en la adaptacin
de dicha cepa a estas concentraciones qumicas adversas.
E - 71
Deteccin y de$infeccin de ;ue"o$ de &a!#$ito$ en lodo$ u!bano$9 &a!a
$u &o$te!io! utili)acin en a!icultu!a%
Beringola M.L.; Delgado M M., Miralles de mperial R.; Martn J. V.
1nstituto :acional de 1nvestigaciones Agrarias B1:1AC. !rta. >a !oruLa, Om .3. +adrid .8040.
l,eringo.%inia.es
Los lodos urbanos procedentes de las plantas de tratamiento de las aguas
residuales, son productos apropiados paras su utilizacin como fertilizantes por
sus caractersticas agronmicas. Sin embargo su utilizacin sin tratamientos
previos de higienizacin esta prohibido en la UE, desde la adopcin de la
Directiva 86/278/EC, debido a la presencia de metales pesados entre otros
factores. Actualmente la Directiva est siendo actualizada para incluir
limitaciones a determinados disolventes orgnicos y patgenos biolgicos.
Junto a virus y bacterias, hay tambin quistes de protozoos y huevos de
helmintos. Existen diferentes procesos para desinfectar los lodos, los cuales,
por el momento resultan ser ms eficaces para la destruccin de virus y
bacterias que para protozoos y parsitos, ya que estos desarrollan estados de
resistencia para sobrevivir a las condiciones adversas (Gaspard et al 1997).
Se analizaron lodos procedentes de distintos tratamientos de desinfeccin
(anaerbico deshidratado, secado trmicamente y en etapas diferentes del
proceso de compostaje) para conocer la proporcin de huevos de helminto al
termino del tratamiento, as como de su evolucin en el proceso de compostaje.
En funcin del mtodo y en la medida de lo posible se determina la viabilidad
de los huevos y el grupo al que pertenecen. Esto permitira evaluar la eficacia
de los diferentes tratamientos para estos parsitos. Adems eliminar del lodo
estos microorganismos sera garanta de la ausencia de determinados
patgenos como salmonellas; pues los huevos de helmintos, junto con otros
microorganismos considerados como indicadores de contaminacin muestran
mayor resistencia a los procesos de higienizacin (Rimhanen-Finne et al 2004).
Para realizar el estudio se ha empleadouno de los mtodos propuestos por la
UE para detectar y enumerar la viabilidad de huevos de helmintos en lodos,
suelos y bioslidos; el Draft Method (US EPA modified method -21 st March
2003).Se busca un mtodo eficaz, sensible y rpido para controlar el grado de
higienizacin del lodo residual previamente a su uso en la agricultura.
Los resultados por el momento indican un mtodo valido en los pasos de
disociacin de los huevos de helmintos de la materia orgnica y en los
procesos de flotacin, sedimentacin, concentracin y enumeracin de los
mismos. Para conocer la viabilidad de los huevos en la muestra se comparan el
procedimiento descrito en el protocolo USEPA (observacin de la estructura del
huevo para los nematodos, y del principio de exclusin del colorante azul
tripano para los huevos viables de cestodos, con la realizacin de cultivos de
huevos de helmintos, para la obtencin de sus larvas.

Bibliografa: Gaspard et al 1997. Waste Management& Research;15, 429-436.
Rimhanen-Finne et al 2004. Letters in Applied Microbiology ;38, 301-305.
19
E - 92
La$ laca$a$ en &!e$encia de mediado!e$ fenlico$ de o!ien natu!al $on
eficace$ $i$tema$ &a!a de!ada! contaminante$ a!om#tico$
Caas Ana .*, Martnez M.J., Martnez A.T. y Camarero S.
!16, !&1!. ?amiro de +ae$tu 9, .8040 +adrid. anacp%ci,.csic.es
Los basidiomicetos ligninolticos secretan un conjunto de enzimas para
degradar la lignina que les confiere la capacidad para detoxificar y degradar
compuestos aromticos diversos incluidos los hidrocarburos aromticos
policclicos (PAHs), contaminantes difciles de degradar muy extendidos en los
ecosistemas terrestres. Su oxidacin a quinonas por las oxidorreductasas
ligninolticas (peroxidasas y lacasas) es clave en el metabolismo de los PAHs
por dichos hongos (1), capaces de mineralizar completamente algunos de ellos
(2). Las lacasas son fenoloxidasas con amplia especificidad de sustrato que, en
presencia de compuestos que actan como intermediarios redox, son capaces
de oxidar compuestos no fenlicos de alto potencial redox. Algunos mediadores
artificiales han resultado muy eficaces en la degradacin por lacasa de lignina
(3) o PAHs (1), pero la aplicacin del sistema lacasa-mediador en procesos de
inters medioambiental requiere mediadores eficaces, de bajo coste y seguros
para el medioambiente.
Recientemente nuestro grupo ha descrito una serie de compuestos fenlicos de
origen natural, derivados de las unidades fenilpropano de lignina, como
eficaces mediadores de lacasa en la decoloracin de tintes industriales (4). En
el presente estudio se evala mediante GC-MS y HPLC la capacidad de la
lacasa de *'cnoporus cinna,arinus para degradar PAHs en presencia de
vainillina, acetovainillona, siringaldehdo, acetosiringona o cido p-cumrico. La
presencia de algunos de estos mediadores fenlicos incrementa
significativamente la velocidad y el rendimiento de transformacin de antraceno
a antraquinona por la lacasa de *. cinna,arinus, alcanzando ms del 90% de
degradacin en presencia de cido p-cumrico. El incremento de la
concentracin de mediador (hasta relaciones molares de sustrato/mediador de
1:20) no mejor significativamente la mxima degradacin alcanzada utilizando
bajas concentraciones. La posibilidad de obtener estos compuestos de una
fuente barata, su empleo a bajas dosis, y la ausencia de toxicidad de los
mismos facilitara enormemente su aplicacin. La confirmacin de la oxidacin
de PAHs in vitro con lacasas y mediadores naturales, mostrara el posible papel
de estas enzimas (presentes en muchas especies microbianas y de plantas) en
la degradacin in vivo de PAHs por organismos endgenos del suelo.

1. Pickard, M.A., R. Roman, R. Tinoco & R.Vzquez-Duhalt (1999) A.E.+. 65,
3805-3809
2. Hammel, K.E., B. Green & W. Z. Gai (1991) *.:.A.& .U&A 88, 10605-10608
3. Bourbonnais, R., M.G. Paice, B. Freiermuth, E. Bodie & S. Borneman (1997)
A.E.+. 63, 4627-4632
4. Camarero, S., D. barra, M.J. Martnez & A.T. Martnez (2005) A.E.+. 71,
1775-1784
181
E - 157
Di$e6o E-&e!imental de T!a)abilidad Indi"idual +o!cina en E-&lotacione$
Inten$i"a$ de Ce!do Blanco%
Cebolla Vieites, J. A.; Domnguez Rodrguez, L.; Lopez Orozco, G.; Farelo, F.;
Martnez Fernndez, C.; Libana Martnez, P.; Martn Rueda, R.; Gil Pascual,
A.; Arranz, J. L.
>a,oratorio V1&AVE7. Facultad de Veterinaria. Universidad !omplutense de +adrid. Hospital
!l-nico Veterinario / *lanta &otano. Avda. *uerta de Hierro &<:. .8040 +adrid.
2ace,oll%vet.ucm.es
La trazabilidad la podemos definir como "la posi,ilidad de encontrar ' seguir el
rastro, a trav5s de todas las etapas de producci;n, trans#ormaci;n ' distri,uci;n de
un alimento, un pienso, un animal destinado a la producci;n de alimentos o una
sustancia destinados a ser incorporados en alimentos o piensos o con pro,a,ilidad
de serlo.^ (CE178/2002)
Este proyecto esta basado en el diseo de un sistema de trazabilidad en las
explotaciones de porcino, con el objetivo de mejorar y certificar la calidad del
producto final.
Con este fin intentamos ajustarnos a la normativa de bienestar animal, transporte y
ordenamiento porcino
El primer punto para aplicar sistemas de trazabilidad en explotaciones de porcino,
es la eleccin de un sistema de identificacin adecuado.
En nuestro caso hemos seleccionado microchips auriculares y sistemas de cdigos
de barras para todos los productos que fueran utilizados en nuestro sistema de
produccin, as como para las distintas ubicaciones por donde los cerdos
desarrollan su crecimiento hasta matadero.
El gran volumen de informacin que se produce, son gestiona mediante un
programa informtico diseado especficamente para este proyecto por el
laboratorio VSAVET y Megasoft
.
Este proyecto se ha puesto a prueba en un total de 1000 animales y 5
explotaciones que comprenden dos maternidades, dos transiciones y un cebadero.
Los animales han sido trazados desde el momento del nacimiento hasta su llegada
al matadero.
Todo este proyecto esta siendo evaluado por una empresa certificadora que
colabora en la realizacin de controles internos y externos para dar veracidad a la
informacin que acompaa a nuestro producto.
Este proyecto nos ha servido para evaluar la rentabilidad que supone la
implantacin de un sistema de trazabilidad individual en las explotaciones porcinas.
La implantacin de la trazabilidad da lugar ciertos inconvenientes como:
- ncrementa la mano de obra por el especial manejo que realizamos a los animales
de la prueba.
- ncremento en los costes de produccin.
Sin embargo el sistema de trazabilidad produce mltiples ventajas como:
- Acercarse al cumplimiento del reglamento (CE) 178/2002 y a la Ley de sanidad
animal del 24 de abril de 2003 dicha Ley potencia la trazabilidad y las actuaciones
de carcter preventivo destinadas a evitar la difusin de enfermedades.
- Adems somos capaces de proporcionar un producto en nuestro caso cerdos a
sacrificio con todo su historial, demostrando en todo momento el buen hacer de las
prcticas sanitarias, correcta aplicacin de los medicamentos, cumplimiento de los
periodos de supresin etc.
- La informacin que queda registrada en nuestro sistema de trazabilidad como
pueden ser anlisis, programas de medicacin y profilaxis, no slo tienen un inters
informativo para los compradores de los animales, sino que nos valdrn para la
mejora continua de nuestro sistema de produccin.
+icro,iolog-a +edioam,iental 18.
E - 171
Deteccin y cuantificacin de Legionella $&& en mue$t!a$ ambientale$
mediante la metodolo,a de RT=+CR
Gruas, C.*; Navarro, M.**; Grasa, B.**; Garca, C. B.* y Arruga, M. V.*
M>a,oratorio de !itogen5tica ' 4en5tica +olecular. Facultad de Veterinaria. +iguel &ervet, 1/
30013 SA?A4DSA. MM1nstituto +unicipal de &alud *R,lica. !arretera de !ogullada s<n. 30014
SA?A4DSA. cgruas%uni$ar.es
Dada la importancia de la deteccin de Legionella de una forma rpida y poder
cuantificar y discriminar las colonias vivas del total de colonias presentes en la
muestra, se ha aplicado la metodologa de RT-PCR para la consecucin de
estos objetivos.
La metodologa RT-PCR permite detectar las colonias viables de >egionella,
cuantificarlas y a la vez reducir el tiempo de anlisis, en comparacin con otros
mtodos ms convencionales como la PCR o el crecimiento en cultivo.
En la puesta a punto se utilizaron kits comerciales para amplificar tanto el gen
mip especfico de >. pneumop)ila, como el gen 5S especfico del gnero
>egionella.
Tras la realizacin de diferentes ensayos no se obtuvo amplificacin con
ninguno de ambos kits, por lo que se desecharon y se amplific un nuevo gen,
el gen 16S, que detecta todos los miembros del gnero >egionella, pero en
esta ocasin con diseo propio. Se disearon los cebadores y la sonda que
amplifican una regin de 79 pb perteneciente a dicho gen. De esta forma se
consiguieron amplificaciones positivas para todas las muestras con presencia
de >egionella, mientras que no hubo resultados de amplificacin en ninguno de
los controles negativos.
183
E - 178
Di"e!$idad mic!obiana del $uelo a!,cola culti"ado con dife!ente$
"a!iedade$ de Pyrus communis
Escolano, J; Salazar, ; Martnez-Alonso, M; Gaju, N.
(epartamento de 4en5tica ' +icro,iolog-a. Universidad Aut;noma de 6arcelona. 08193 6ellaterra
B6arcelonaC. E/mail0 2ordi.Escolano%ua,.es
El suelo es un ambiente complejo y dinmico, donde la actividad biolgica
reside principalmente en los microorganismos. Las diferentes poblaciones que
integran estos ecosistemas tienen un papel crucial en la productividad de los
mismos, participando como elementos clave en procesos tales como la
formacin del suelo, la descomposicin de materia orgnica, la eliminacin de
toxinas o en los ciclos biogeoqumicos. Adems, desempean un papel
fundamental en la estimulacin del crecimiento vegetal y en el control de
enfermedades, aspectos de gran inters en suelos destinados a la prctica
agrcola. Tanto los factores biticos como los abiticos tienen un profundo
efecto sobre la comunidad microbiana del suelo, modificando su composicin y
actividad. De esta manera, parmetros como las caractersticas del suelo, la
especie vegetal, el estado fenolgico de la planta o el tipo de prctica agrcola
determinarn la biodiversidad del ecosistema. Tradicionalmente, los estudios
realizados sobre la microbiota del suelo estaban basados en mtodos cultivo-
dependientes. Posteriormente, la introduccin de mtodos moleculares ha
permitido tener una visin ms amplia de la diversidad de dichos ecosistemas,
ponindose de manifiesto que tan solo entre un 0,1 a un 1% de la comunidad
microbiana total del suelo puede ser cultivada. El objetivo planteado en esta
investigacin ha sido el estudio de la comunidad bacteriana del suelo de una
finca dedicada al cultivo de distintas variedades de peral (*'rus communisC con
el fin de determinar su composicin. Concretamente, se han analizado tres
variedades: Conference, Blanquilla y Williams. Las muestras fueron recogidas
de 6 parcelas, dos de cada variedad, durante las estaciones de primavera y
verano, a lo largo de dos aos consecutivos. La extraccin del DNA se realiz
utilizando un kit comercial (MoBio). Mediante PCR se amplificaron los
fragmentos del gen rRNA 16S, utilizando cebadores especficos del Dominio
Eubacteria. Los productos obtenidos fueron analizados mediante la tcnica de
electroforesis en geles de poliacrilamida de gradiente desnaturalizante (DGGE).
Los patrones de bandas representativos de la comunidad fueron analizados, en
trminos de similitud o disimilitud, utilizando el coeficiente de Jaccard, y
representados en forma de dendrogramas. Finalmente, las bandas prominentes
fueron recuperadas del gel y su secuenciacin est actualmente en curso. Los
patrones de DGGE obtenidos presentaban una gran complejidad. La
comparacin de dichos perfiles mostraron la presencia de bandas comunes en
todas las muestras. Sin embargo, en otros casos se observaron notables
cambios, tanto en el nmero, como en la distribucin de bandas. Los anlisis
realizados hasta el momento han puesto de manifiesto variaciones entre las
diferentes variedades de una misma especie y, por lo tanto, no podemos hablar
de un nico patrn para esta especie. Adems, los patrones de las diferentes
muestras sugieren que el estado fenolgico del rbol puede tener un efecto
sobre la composicin bacteriana del ecosistema estudiado.
E - 187
Nue"a$ &e!$&ecti"a$ en la !eulacin lobal de la !uta de $,nte$i$ de
&oli;id!o-ialcanoato$ en Pseu$omonas puti$a 562##2%
De Eugenio L..*, Galn B., Garca P., Garca J.L. y Prieto M.A.
(epartamento de +icro,iolog-a +olecular, !entro de 1nvestigaciones 6iol;gicas, !&1!, !< ?amiro
de +ae$tu, .8040, +adrid. Me/mail0 lidem%ci,.csic.es
Los polihidroxialcanoatos o PHAs son biopolmeros producidos por un gran
nmero de bacterias en su interior celular como un sistema de almacenamiento
y reserva de fuente de carbono. Estos polisteres son muy interesantes desde
el punto de vista de la biotecnologa industrial y medioambiental, ya que
presentan propiedades fsico-qumicas similares a los plsticos provenientes de
la industria petrleo-qumica. Esto, unido a su capacidad biodegradativa y a la
posibilidad de sntesis a partir de fuentes renovables, los convierten en uno de
los mejores candidatos para sustituir a los actuales productos plsticos.
Algunas bacterias pertenecientes al gnero *seudomonas son capaces de
acumular PHAs en condiciones de desequilibrio nutricional como son la
carencia de oxgeno o nitrgeno y el exceso de fuente de carbono en el medio
de cultivo. La sntesis y degradacin de PHA en estas bacterias est sujeta a
una extensa y compleja red de regulacin, de la que actualmente se
desconocen prcticamente las bases moleculares. En la mayora de los
procariotas existe un nivel de regulacin especfico de la transcripcin, en el
que estn implicadas protenas reguladoras que responden a seales
relacionadas nicamente con el gen que regulan, como por ejemplo, la
presencia del sustrato de la enzima codificada por el gen. Adems de la
especfica, existe una regulacin global mediada por reguladores pleiotrpicos,
responsable de traducir las seales del medio ambiente, por ejemplo la falta de
oxgeno, cambios en la temperatura, etc., en respuestas celulares. En este
trabajo se muestran los hallazgos ms recientes y relevantes sobre el sistema
de regulacin de los genes p)a de *. putida, que codifican las protenas
necesarias para la sntesis y degradacin de PHA, como por ejemplo la
implicacin del sistema bicomponente GacA/GacS. Adems, se ha diseado un
mtodo que combina la PCR arbitraria con la tincin con el colorante Nile Red
para la seleccin de mutantes defectivos en la produccin de biopolmero.
183
E - 206
Seleccin de inoculante$ mic!obiano$ &a!a &!oce$o$ de com&o$ta*e de
!e$iduo$ "eetale$%
Vargas Garca, M.C., Surez Estrella, F., Lpez, M.J. y Moreno, J.
Nrea de +icro,iolog-a, (epartamento de 6iolog-a Aplicada, Universidad de Almer-a, >a !aLada de
&an Ur,ano, 041.0 Almer-a. E/mail0 mllope$%ual.es
La importancia del sector agrcola en la provincia de Almera es indiscutible. Sin
embargo, tal hecho no debe ocultar la existencia de ciertos aspectos asociados
a tal actividad de carcter claramente negativo. Como tales cabe considerar la
utilizacin indiscriminada de compuestos qumicos de carcter fitosanitario o la
generacin de residuos de diversa naturaleza. Dentro de este ltimo apartado,
los residuos procedentes de restos de cosecha, producidos en niveles
imposibles de asimilar de forma natural, conservan un importante potencial
energtico y nutricional cuyo desaprovechamiento no es permisible. La
transformacin aerobia microbiana, compostaje, de los residuos de origen
agrcola, no slo se presenta como una solucin respetuosa en trminos
ambientales, sino que adems permite la obtencin de un producto final apto
para su empleo en agricultura, siempre y cuando se ajuste a unos
determinados parmetros de calidad, sobre todo en lo que respecta a
contenido en sustancias hmicas y fraccin ligcelulsica.
De acuerdo a lo anteriormente expuesto, el objetivo planteado en esta
investigacin fue el de seleccionar cepas microbianas susceptibles de ser
utilizadas como inoculantes en procesos de compostaje, de acuerdo a su
potencial para biotransformar residuos hortcolas. Para ello, 13 aislados
microbianos, 7 cepas fngicas, 4 bacterianas y 2 actinomicetos, procedentes
de procesos de compostaje en diferentes estados evolutivos, fueron crecidos
sobre residuos de pimiento e investigados en cuanto a su capacidad para
modificar la fraccin lignocelulsica y generar sustancias de naturaleza hmica
de forma ms eficaz que la microbiota presente en los residuos.
Los resultados obtenidos muestran como 12 de las cepas estudiadas
exhibieron mayor capacidad que la microbiota natural para biotransformar
adecuadamente el material vegetal, sobre todo en lo referido a presencia de
sustancias hmicas. Especialmente destacable result la accin de las
especies bacterianas, grupo al que pertenecen los tres microorganismos que
dieron lugar a los mejores resultados globales. No obstante, el estudio
especfico de parmetros pone de manifiesto el papel destacado de
actinomicetos y hongos concretos en la modificacin de lignina y la produccin
de sustancias hmicas, respectivamente.
Por tanto, la utilizacin de especies microbianas adecuadamente seleccionadas
como inoculantes en procesos de compostaje se muestra como una estrategia
de inters para mejorar y/o acelerar dichos procesos y generar un producto de
superiores caractersticas.
A!adecimiento$% Este trabajo ha sido financiado por el Ministerio de Ciencia
y Tecnologa (CCYT AGL2001-2815).
E - 207
Efecto de lo$ e-t!acto$ ;(mico$ $oluble$9 &!ocedente$ del com&o$ta*e de
!e$iduo$ ;o!t,cola$9 $ob!e mic!oo!ani$mo$ indicado!e$ de la fe!tilidad
del $uelo
Surez-Estrella, F., Vargas-Garca, M.C., Lpez, M.J., Fernndez-Orts, E. y
Moreno, J.
(pto. 6iolog-a Aplicada. Nrea de +icro,iolog-a. !17E 11 6. >a !aLada de &an Ur,ano, 041.0,
Almer-a. E/mail0 #suare$%ual.es
El elevado contenido del compost en materias hmicas, contribuye a crear o
mantener una estructura adecuada en el suelo, incrementar la capacidad de
intercambio catinico, mejorar el crecimiento de las plantas y la supresin de
patgenos vegetales del suelo, sin olvidar el importante efecto que las
sustancias hmicas presentes en este producto ejercen sobre las distintas
comunidades microbianas tpicas de un suelo. Por ello, las medidas de la
actividad biolgica resultan adecuadas para el diagnstico de la fertilidad o
calidad de un suelo sometido a diversas perturbaciones.
Teniendo en cuenta los aspectos anteriormente mencionados, el principal
objetivo del presente trabajo fue el estudio de la evolucin de los distintos
indicadores de humificacin a lo largo de un proceso de compostaje de
residuos hortcolas, as como la optimizacin del proceso de extraccin de
compuestos hmicos a partir de compost obtenido en las distintas etapas del
proceso. Como subobjetivo derivado del anterior se estudi el efecto de los
extractos hmicos procedentes de compost sobre el crecimiento in vitro de
microorganismos indicadores de la fertilidad del suelo.
Para la consecucin de los objetivos indicados anteriormente se llev a cabo
un ensayo de compostaje que sirvi para la obtencin de muestras de compost
en distintas fases de maduracin. Una vez calculados los parmetros de
humificacin de las muestras de compost y optimizadas las condiciones de
extraccin de cidos hmicos a partir de las mismas, el extracto obtenido fue
ensayado in vitro a distintas concentraciones sobre el crecimiento de
microorganismos indicadores de la fertilidad del suelo.
Los resultados obtenidos indicaron por un lado, que el contenido en cidos
hmicos fue mayor durante las etapas tempranas del proceso de compostaje,
lo que explica el hecho de que algunos indicadores de humificacin
relacionados con el contenido en humatos sean cuantitativamente iguales
durante dicha etapa y la fase final de maduracin. Por otro lado, las
condiciones de extraccin ptimas de carbono soluble a partir de las muestras
de compost en general se correspondieron con valores de temperatura y pH
elevados. Finalmente, el producto obtenido a partir de las condiciones descritas
anteriormente tuvo un efecto claramente estimulador del crecimiento
microbiano cuando se utiliz a bajas concentraciones.
Por tanto, la obtencin de compost a partir de residuos vegetales agrcolas,
podra estar dirigida a la obtencin de fertilizantes lquidos de elevado inters
agronmico.
18
E - 209
+!e"alencia de Penicillium rugulosum en a!c;i"o$ y biblioteca$ del #!ea
medite!!#nea
Calvo, MA., Adelantado, C.,Shiva, C., y Arosemena L.
6arcelona. 08193 6ellaterra B6arcelonaC. +ariangels.!alvo%ua,.es
La composicin del material depositado en Archivos y Bibliotecas determina
que sean un adecuado sustrato para el desarrollo de microorganismos. En los
ltimos aos, se han llevado a cabo diversos estudios medio-ambientales con
el fin de establecer y en caso controlar, los microorganismos aislados de los
archivos y bibliotecas del rea mediterrnea.

Entre las especies de microorganismos aisladas, presentan una especial
prevalencia las cepas identificadas como *enicillium rugulosum que han sido
aisladas reiteradamente en la mayora de ambientes muestreados.
En la presente comunicacin resumimos la metodologa seguida para el
aislamiento e identificacin de las cepas fngicas, permitiendo demostrar la
prevalencia de la especie citada en ambientes mediterrneos, as como los
resultados obtenidos tras la aplicacin de tratamientos que han permitido
minimizar la presencia de las cepas fngicas detectadas y controlarlas.
Asimismo, se aportan fotografas en las que se observa el desarrollo de las
cepas sobre los diferentes sustratos, el aspecto de los cultivos fngicos y la
actividad antinfngica de los productos utilizados.
E - 210
E"olucin de la mic!obiota &!e$ente en una cadena de lonc;eado y
en"a$ado de embutido$ t!a$ la in$tau!acin de un $i$tema A++CC
Arosemena, L., Adelantado, C., Shiva, C., y Calvo, MA.
6arcelona. 08193 6ellaterra B6arcelonaC. arosemenaleo%)otmail.com
Tras la instauracin de un sistema APPCC en una cadena de loncheado y
envasado de embutidos, debe evaluarse la eficacia del mismo mediante el
anlisis microbiolgico que permita establecer la evolucin de la microbiota a lo
largo del tiempo.
En la presente comunicacin se aportan los resultados obtenidos a lo largo de
24 meses, en los anlisis microbiolgicos efectuados a los siguientes tipos de
muestras: materia prima, producto loncheado y envasado, cinta transportadora,
utensilios de despiece y loncheado, material de envasado, aguas, ambiente de
las salas y manipuladores.
Los parmetros microbiolgicos evaluados y las metodologas aplicadas han
sido los especficos para cada tipo de muestras, siguiendo las
recomendaciones indicadas en microbiologa alimentaria.
A partir de los resultados obtenidos, se observa una clara evolucin de la
microbiota presente en las muestras citadas, que disminuye considerablemente
tras la aplicacin de las medidas correctivas pertinentes al detectar valores
microbiolgicos no aceptables segn los criterios establecidos. En
consecuencia la implantacin de un sistema APPCC en la cadena de
loncheado y envasado de embutidos analizada, ha permitido un rpido control
de la calidad microbiolgica que colabora en mejorar la seguridad alimentaria.
189
E - 211
Decolo!acin in vitro de colo!ante$ indu$t!iale$ &o! linina$a$ de
mic!oo!ani$mo$ ai$lado$ a &a!ti! de &ila$ de com&o$ta*e
Guisado, G., Lpez, M.J., Vargas-Garca, M.C., Surez-Estrella, F. y Moreno, J.
Nrea de +icro,iolog-a, (epartamento de 6iolog-a Aplicada, Universidad de Almer-a, >a !aLada de
&an Ur,ano, 041.0 Almer-a. E/mail0 gmaria%ual.es
Los colorantes sintticos son compuestos muy contaminantes y los sistemas
actualmente implantados para su depuracin se basan en la aplicacin de
tratamientos fsicos o qumicos, la mayora de los cuales son caros. El
tratamiento biolgico representa una alternativa atractiva. En este sentido, los
hongos ligninolticos se han estudiado como posibles agentes para tales
procesos debido a que sus sistemas enzimticos extracelulares inespecficos
les permite degradar diversos tipos de sustancias recalcitrantes. Las principales
enzimas producidas por estos microorganismos e implicadas en dicha
degradacin son la lignina peroxidasa (LiP), manganeso peroxidasa (MnP) y
lacasa (Lac). La capacidad de estos microorganismos para degradar distintos
tipos de colorantes ha sido demostrada, aunque la mayora de los trabajos se
han realizado utilizando cultivos in vivo mediante la medida de la desaparicin
de color en un medio de cultivo con los colorantes como fuente carbonada.
En este trabajo se investig la decoloracin in vitro de dos colorantes
industriales (RBBR y Poly R478) por las enzimas ligninolticas producidas por
*)aneroc)aete #lavido/al,a (Pfa), *. c)r'sosporium (Pch) y por 4 hongos (MF-
4, MF-7, MF-10 y TF-4) y 1 bacteria (MB-2) aislados originalmente a partir de
pilas de residuos vegetales sometidos a compostaje. Estos nuevos aislados
demostraron en estudios previos capacidad para decolorar RBBR, Poly R-478 y
Poly S-119 en cultivos in vivo.
Se obtuvieron extractos enzimticos a partir de cultivos de los distintos
microorganismos que se utilizaron para determinar la decoloracin producida
en Poly R-478 y RBBR por Lac, LiP y MnP. Las enzimas analizadas estuvieron
implicadas en distinto grado en la decoloracin en funcin del colorante y de la
cepa. As las tres enzimas contribuyeron a la decoloracin de RBBR y Poly R-
478 en extractos de Pch, MF-7 y MF-10, siendo en cada caso mayor la eficacia
de LiP, MnP y Lac, respectivamente, con decoloraciones entre 10 y 17%. En
los extractos de Pfa slo se detect decoloracin por MnP en los dos
colorantes. Los extractos de los hongos MF-4 y TF-4 no dieron lugar a
decoloracin significativa y los correspondientes a la bacteria MB-2 decoloraron
RBBR y Poly R-478 en torno a un 14% y 6%, respectivamente, y en ambos
casos por LiP. Este ltimo dato es tremendamente significativo ya que en
nuestro conocimiento es la primera vez que se detecta esta enzima en una
bacteria.
De acuerdo con los resultados obtenidos las enzimas ligninolticas producidas
por los nuevos aislados podran ser utilizados para el tratamiento de efluentes
contaminados con colorantes.
E - 227
C;elate=en;anced +b &;yto!emediation8 effect of EDTA and EDDS on
mic!obioloical indicato!$ of $oil ;ealt;
Hernndez-Allica J
1
, Becerril JM
2
, Epelde L
1
, Zarate O
1
, Blanco F
1
, Garbisu C
1
1
:E1PE?, 6asIue 1nstitute o# Agricultural ?esearc) and (evelopment, c<6erreaga, 1, E/48160
(erio, &pain. lepelde%neiOer.net.
.
(ept. *lant 6iolog' and Ecolog', Universit' o# t)e 6asIue
!ountr', *.D. 6ox 644, E/48080 6il,ao, &pain.
Phytoremediation is currently being considered a new, highly promising, cost-
effective technology for the remediation of polluted sites. Regarding metal
pollution, there are, at present, two strategies to phytoextract metals from soils:
(i) continuous p)'toextraction, through the utilization of metal
hyperaccumulators and (ii) induced p)'toextraction, based on the application of
mobilizing/chelating agents to the soil in an attempt to increase plant metal
uptake and shoot accumulation, especially when the metal bioavailability is low.
But many chelating agents are toxic for plants and, most importantly, pose a
considerable environmental problem due to their leaching towards groundwater.
Then, environmentally safe methods of chelate-induced phytoextraction must
be developed before steps towards further development of this technology are
taken. n particular, most studies on chelate-induced phytoextraction have
focused on ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) mediated Pb
phytoextraction. Unfortunately, among other drawbacks, Pb-EDTA is a highly
soluble complex and thus can easily leach to groundwater. n this respect, there
are other chelating agents, such as ethylenediaminesuccinate acid (EDDS),
which are much less harmful to the environment. ndeed, EDDS appears less
toxic, more biodegradable, and causes much lower leaching of Pb than EDTA.
n any case, within the context of the chelate-induced phytoextraction, there are
still very few studies regarding the effects of the addition of chelating agents on
soil microbial communities Consequently, a short-term, chelate-induced Pb
phytoextraction study was carried out using !'nara cardunculus to compare
both (i) the efficiency of EDTA and EDDS for Pb plant uptake and translocation
and (ii) their toxic effect on soil microbial communities, by means of determining
the changes observed in different microbiological indicators of soil health, i.e.,
microbial biomass (biomass C and substrate induced respiration), microbial
functional biodiversity, microbiological activity (basal respiration,
dehydrogenase activity), etc.
The results indicate that, although highly efficient in enhancing Pb plant uptake
and translocation, EDTA addition led to high amounts of soluble Pb in soil and
then had a clear negative effect on soil microbial communities. EDDS, in turn,
was extremely toxic for cardoon plants and also had a negative, though lower,
effect on soil microbial communities. Actually, EDDS appeared to be quickly
degraded, leading to high concentrations of soluble Pb in soil only during a
short period of time.
191
E - 228
Soil mic!obial biodi"e!$ity and bioma$$ a$ mic!obioloical indicato!$ of
t;e efficiency of a metal &;yto!emediation &!oce$$
Zarate O
1
, Hernndez-Allica J
1
, Becerril JM
2
, Epelde L
1
, Blanco F
1
, Garbisu C
1
1
:E1PE?, 6asIue 1nstitute o# Agricultural ?esearc) and (evelopment, c<6erreaga, 1, E/48160
(erio, &pain. cgar,isu%neiOer.net.
.
(ept. *lant 6iolog' and Ecolog', Universit' o# t)e 6asIue
!ountr', *.D. 6ox 644, E/48080 6il,ao, &pain.
Phytoremediation, or the use of green plants to remove pollutants from the
environment or to render them harmless, is currently being considered a new,
highly promising, cost-effective technology for the remediation of polluted sites.
Phytoextraction of metals is most promising and might indeed be at present
approaching commercialization. n this respect, the "model" hyperaccumulator
7)laspi caerulescens appears of great potential for Zn phytoextraction and thus
has been much screened in the search for more efficient ecotypes.
Most importantly, the goal of a phytoextraction process must be not only to
remove the metal from the soil but to restore soil health as well. Although to
date, more emphasis has been placed on physicochemical parameters as
indicators of soil health, (micro)biological indicators are becoming increasingly
used due to their simplicity, sensitivity, and their capacity to provide information
that integrates many environmental factors.
n an attempt to evaluate both (i) the capacity of an actively growing ecotype of
7. caerulescens (Lanestosa), isolated from the vicinity of an abandoned mine,
to extract Zn from soil and (ii) the possibility of biomonitoring the efficiency of a
phytoextraction process using microbiological indicators of soil health, two
short-term microcosm studies (i.e., one focused on bulk soil and the other on
rhizospheric soil) were established with soils from the abandoned mine which
showed different degrees of metal contamination: (i) a highly metal polluted soil
and (ii) a soil showing a moderate level of metal pollution.
During the phytoextraction studies, the following parameters were determined:
metal plant content, soil metal concentration, a variety of physicochemical
parameters (pH, OM, CEC, N, P, etc.), soil microbial biomass, and soil microbial
biodiversity (functional metabolic biodiversity).
Apart from showing its great potential for Zn phytoextraction, 7. caerulescens
Lanestosa growth has proved to have a beneficial effect on soil health. The
main positive effect here observed relates to the improved C mineralization
values reached in the presence of 7. caerulescens, probably due to the
presence of extra C from plant root exudates. The revegetation of these
polluted soils with 7. caerulescens could indeed help activate their microbial
functionality. t was concluded that the microbiological parameters of soil health
here studied appear useful bioindicators of the efficiency of a phytoextraction
process.
+icro,iolog-a +edioam,iental 19.
E - 232
Bioad$o!cin de C!9 +b9 Co9 Mn9 La y Ni &o! bioma$a ;(meda de una
bacte!ia ma!ina
Gonzlez-Muoz, M.T.
1
, Morcillo, F.
1
, de Linares, C.
2
, Martnez-Ruz, F.
3
,
Merroun, M.L.
4
y Arias, J.M.
1

1
(epartamento de +icro,iolog-a,
.
(epartamento de 6ot"nica,
3
(epartamento de +ineralog-a '
*etrolog-a, Fac.de !iencias, Universidad de 4ranada, Avda. Fuentenueva s<n. E/18008 4ranada.
7el.0 938 .4339. Fax0 938 .49486. E/mail0 =marias%ugr.es
4
Forsc)ungs$entrum
?ossendor#.1nstitut #`r ?adioc)emie. 4ruppe #`r +oleOulare +iOro,iologie.(/ 01314 (resden.
Alemania
La polucin de aguas por metales pesados es un serio problema ambiental,
siendo las principales fuentes de esta contaminacin las aguas procedentes de
industrias metalrgicas y mineras. A diferencia de otros contaminantes, una
caracterstica preocupante de los metales pesados es la tendencia a persistir
indefinidamente en el ambiente, circulando a travs de la cadena trfica y
acumulndose eventualmente en los organismos superiores.
La bsqueda de soluciones a este tipo de problemas ha hechoque en las dos
ltimas dcadas se haya incrementado notablemente la investigacin en
relacin al potencial biotecnolgico de los microorganismos para su
eliminacin, teniendo en cuenta la capacidad de la biomasa microbiana para
concentrarlos y removerlos. Para el tratamiento de aguas dulces se ha
ensayado biomasa procedente de bacterias, hongos y algas. No obstante, para
el de aguas marinas, si bien hay abundante bibliografa sobre la utilizacinde
algas, apenas hay referencias sobre la utilizacin de bacterias, por lo que ha
conasiderado de inters realizar una investigacin sobre la capacidad de
bioadsorcin de metales pesados por una cepa bacteriana marina.
En esta comunicacin se presentan los resultados preliminares obtenidos
trabajando con una bacteria aislada de aguas someras del Mar de Alborn,
denominada MAH1. Esta cepa bacteriana, que crece bien en medios de cultivo
comunes y produce abundante cantidad de EPS, presenta la capacidad de
desarrollarse en un rango de temperaturas de 2 a 42 C y a concentraciones de
NaCl de 0,7 a 20% (medio TSA). Los ensayos realizados con ella han tenido
una doble finalidad: probar, en condiciones estndar, la capacidad de
bioadsorcin de cromo, plomo, lantano, cobalto, nquel y manganeso y
determinar, mediante observacin con microcopio electrnico de transmisin, la
localizacin celular de los metales bioadsorbidos. Los ensayos de
bioadsorcinse han realizado con biomasa hmeda obtenida en fase
exponencial de crecimiento y con soluciones de los metales a concentracin
0,5mM en aguamilli-Q y pH 4,5. Los resultados obtenidos indican una buena
adsorcion para el cromo y para el plomo (0,91 y 0,78 mmol/gr de biomasa seca,
respectivamente), y menor para el resto de los metales ensayados (lantano
0,08 mmol/gr; cobalto 0,1mmol/gr; manganeso 0,063 mmol/gr y nquel 0,14
mmol/gr). La localizacin celular de los metales bioadsorbidos ha sido: en la
pared celular, el Pb y Cr; en el EPS el La, e intracelularmente los restantes.
Estos resultados indican que se trata de una bacteria que puede ser buen
candidato para desarrollar sistemas de tratamiento de aguas marinas
contaminadas por metales pesados, ms an si se tiene en cuenta que estos
datos son preliminares, y que no se han optimizado las condiciones para la
bioadsorcin de cada metal.
193
E - 238
Mic!obiota bacte!iana del ambiente de una indu$t!ia fa!mac'utica
De la Rosa, M.C., Snchez, M. C. y Mosso, M. A.
(epartamento de +icro,iolog-a 11. Facultad de Farmacia. U!+. +adrid B.8040C.
e/mail0 delarosa % #arm.ucm.es
La industria farmacutica debe cumplir unas Normas de Correcta Fabricacin
de Medicamentos (2002) en las que se exigen unos lmites microbiolgicos del
ambiente de las zonas limpias. El objeto de este trabajo ha sido determinar el
nmero y tipo de bacterias presentes en el aire y superficies de distintas zonas
limpias de una industria de envasado asptico de materias primas
farmacuticas con el fin de conocer su origen y tomar las medidas necesarias
para su control.
El estudio se ha realizado durante seis aos, de 1999 a 2004, tomando
muestras semanalmente, con un total de 2360, de nueve puntos diferentes,
seis del aire (1416 muestras) y tres de superficies (944 muestras). Los
recuentos de bacterias en el aire se realizaron por los mtodos de gravedad
(30 min. exposicin) e impacto (muestreador RCS plus) y en las superficies por
el mtodo de contacto con placas RODAC, utilizando agar triptona soja
incubando a 30 C durante 72 h.
El nmero de bacterias detectado fue muy bajo tanto en el aire (1,4 ufc/30 min,;
21,2 ufc/m
3
) como en las superficies (2,1 ufc/ 25 cm
2
). Se han encontrado
bacterias en el 55,7% de las muestras del aire y 29,3 % de las superficies. En
el aire predominan las muestras con cocos Gram positivos (44,8 %) sobre las
de bacilos Gram positivos (32,7%), mientras que en las superficies sucede al
contrario (12,7% con cocos Gram positivos y 21,7% con bacilos Gram
positivos). No se han encontrado bacterias Gram negativas en ninguna
muestra.
Los gneros identificados y el porcentaje de muestras que los presentan han
sido: &tap)'lococcus (18,8%), 6acillus (18,7%), +icrococcus (11,7%),
Art)ro,acter (8,4%), !or'ne,acterium (3,6 %), Pocuria(3,1%) y actinomicetos
(1,8%). Las bacterias encontradas proceden principalmente del ambiente (aire,
polvo y suelo) y de la piel humana.
El 99,5 % de las muestras cumplen los lmites establecidos para el grado D por
las Normas de Correcta Fabricacin de Medicamentos de la Unin Europea y
los criterios de la Asociacin Espaola de Farmacuticos de la ndustria (1996).

Bibliografa
-Annimo 1996. Programa de control microbiolgico ambiental en zonas de
produccin. Ed. Asociaci;n EspaLola de Farmac5uticos de la 1ndustria.Madrid.
-Annimo 2002. Normas de Correcta Fabricacin. Medicamentos de consumo
humano y medicamentos veterinarios de la Unin Europea. Ed. +inisterio de
&anidad ' !onsumo. Madrid.
E - 260
Diatomea$ y &!otol,:uene$ f$ile$ en un medio !ico en *a!o$ita en
a!eni$ca de Mount >lemin 5D!y 4alley$9 Ant#!tida7
Ascaso, C.* y Wierzchos, J.**
M(epartamento de Ecolog-a de &istemas. 1nstituto de ?ecursos :aturales B!!+AC, !&1!, &errano
113 ,is. +adrid .8006. ascaso%ccma.csic.es. MM&ervei de +icroscop-a Electr;nica, Universidad de
>leida. ?ovira ?oure 44, >leida. .3198
De acuerdo con Conrad y Nealson (2001) nicamente cuando podamos
reconocer todas las formas de vida en ambientes terrestres, estaremos
preparados para ir mas all de los confines de nuestro planeta en busca de
seres vivientes. La existencia de microbiota en un determinado sustrato inerte
puede reconocerse por la existencia de clulas vivas o momificadas y por la
existencia de molculas orgnicas necesarias para la vida, pero tambin por la
presencia de clulas que una vez estuvieron vivas pero que actualmente se
puede presentar totalmente mineralizadas.
En el ltimo tercio del Siglo XX, los signos macroscpicos de exfoliacin en
areniscas antrticas, indicaban la actividad de microbiota endoltica. En el
comienzo del siglo XX, se dispone ya de las herramientas apropiadas para
explorar la presencia de microorganismos fosilizados preservados gracias a la
mineralizacin e incluso se puede lograr la identificacin de sus estructuras
internas.
En el presente trabajo se trata de continuar la investigacin de la microbiota
fsil en las areniscas de Mount Fleming (77 33 S, 160 06 E, 2200 metros de
altitud), para avanzar en el conocimiento de los mecanismos de fosilizacin.
Las estrategias de investigacin estn basadas en el uso de mtodos
preparativos especiales de las muestras fosilizadas y en la utilizacin como
instrumento de observacin del microscopio electrnico de barrido trabajando
en modo de electrones retrodispersados (SEM-BSE) y como herramienta para
el anlisis elemental, la energa dispersita de rayos X (EDS).
Los resultados obtenidos en la observacin de los poros de la arenisca
fosilizadas muestran dos tipos de estructuras biolgicas mineralizadas. Algunos
poros presentan algas y hongos mineralizados que pertenecieron con toda
probabilidad a un protoliquen, mezclados con diatomeas y otros presentan una
especie de sculos que engloban las diatomeas. En el primer caso la jarosita
rellena el resto del poro. En el caso de poros rellenos de sculos de diatomeas,
son los propios sacos los que parecen estar perfilados por una ancha capa de
jarosita. En este caso el resto del poro esta relleno con yeso.
Las sales que han podido introducirse en los poros han causado la
mineralizacin de los microorganismos endolticos autctonos como algas y
hongos pertenecientes al protoliquen, mientras las diatomeas han podido ser
introducidas en los poros a travs de los sculos de jarosita que las engloban.
Se cree que la jarosita se forma en un ambiente hmedo, oxidante y cido, sin
embargo la persistencia de este mineral indica un ambiente rido porque en un
clima hmedo se descompone hasta forma oxihidrxidos. La presencia de
jarosita en Marte y su presencia en las rocas aqu estudiadas, indica que
podran existir similitudes entre los mecanismos de fosilizacin en ambas
regiones, en el caso de que en Marte hubiera habido vida en el pasado.
193
E - 263
Contaminacin ambiental &o! 1ycobacterium avium $ub$&%
paratuberculosis en una !an*a de anado ca&!ino%
lvarez, J., Romero, B., Bezos, J., de Juan, L., Aranaz, A., Mateos, A.,
Domnguez, L.
(epartamento de &anidad Animal, Facultad de Veterinaria. Universidad !omplutense de +adrid.
Avenida *uerta de Hierro s<n. .8040. +adrid. =alvare$%vet.ucm.es
+'co,acterium avium subsp. paratu,erculosis (+apC, el agente causal de la
paratuberculosis, es un patgeno obligado de los animales a los que parasita,
por lo que en teora la enfermedad podra ser erradicada de una explotacin
mediante la eliminacin de todos los animales infectados. Este es el principio
en el que se basa lamayora de los programas de saneamiento. Sin embargo,
la capacidad de supervivencia +ap durante largos periodos de tiempo fuera del
hospedador le permite sobrevivir en ausencia de un hospedador adecuado;
permaneciendo en el medio ambiente y por lo tanto constituyendo un riesgo de
nuevas infecciones para otros animales sanos. Por ello se realiz un estudio
para determinar la carga ambiental de +ap en una granja de ganado caprino
infectado con paratuberculosis y sometida a un programa de control basado en
anlisis serolgicos del rebao y separacin de los animales en el momento del
parto.
Las cabras de la granja fueron divididas en dos grupos siguiendo el programa
de control: "infectadas (aquellos animales no incluidos en el programa de
control) y "libres (animales sometidos a control). Se tomaron muestras de la
zona "libre (donde estaban los animales controlados) y de la sala de ordeo
(en la que se ordean animales de ambos grupos); se analiz la tierra, el barro,
los bebederos y el sistema de conduccin de agua. Las muestras recogidas se
procesaron para la extraccin directa de ADN y el cultivo de +ap y otras
micobacterias.
Se detect un fragmento especfico del gnero +'co,acterium en distintas
localizaciones del rea "libre y de la sala de ordeo; pero el fragmento
especfico de +ap S900 solo fue detectado en la sala de ordeo, el nico lugar
compartido por animales de los dos grupos, "libre e "infectado. Mediante
cultivo bacteriolgico, se cultivaron varias especies de micobacterias atpicas a
partir de muestras de tierra y de agua, pero no se logr aislar +ap.
La presencia del fragmento especfico de +ap S900 en la sala de ordeo
podra indicar que la limpieza y desinfeccin en esta zona no fue lo
suficientemente exhaustiva, y por lo tanto los animales podran infectarse all.
Sin embargo, el hecho de no haber podido cultivar +ap introduce la incgnita
de si las bacterias presentes en la sala de ordeo estaban viables o no.
Este estudio ha sido financiado parcialmente por el proyecto europeo QLRT-
2000-00879 (*ara/76 7ransmission).
E - 273
Se!o&!e"alencia$ y facto!e$ &!edi$&onente$ de la enfe!medad de
Au*e)$Hy9 la B!ucelo$i$ y la +a!"o"i!o$i$ en una &oblacin de *abal,e$ en
un #!ea medite!!#nea%
Cerrato R., Fernndez-Llario P., Corts M., Bermejo F., Snchez M., Pereira G.
y Hermoso de Mendoza J.
(epartamento de +edicina ' &anidad Animal, Universidad de Extremadura. rcerrato%unex.es
La prevalencia de agentes infecciosos que causan enfermedades de relevancia
ecolgica y econmica en las especies de caza mayor es un tema que ha
despertado inters en los ltimos aos. No obstante, todava hoy existe un gran
desconocimiento tanto de la incidencia de los agentes infecciosos ms
importantes, as como de las posibles diferencias que pudieran darse entre
individuos de diferente edad y sexo, ambos elementos muy importantes cuando
se disean las medidas bsicas destinadas a su control o erradicacin. En este
trabajo hemos estudiado una poblacin natural de jabales presente en un rea
mediterrnea de gran valor ecolgico, que en su mayor parte se encuentra libre
de ganado domstico, analizando mediante tcnicas ELSA comerciales la
seroprevalencia de tres importantes procesos infecciosos que afectan a la
reproduccin: la enfermedad de Aujezsky, Brucelosis y Parvovirosis. En total se
analizaron 286 jabales (118 machos y 166 hembras) que procedan de las
actividades cinegticas llevadas a cabo en el Parque Natural de Monfrage y
en su rea de influencia. Debido a la tcnica de caza que fue aplicada
(denominada montera), la presin de captura realizada fue similar para
machos y hembras, hecho que nos ha permitido suponer que los jabales
analizados han representado una muestra fiable de la poblacin natural
presente en este lugar. Los resultados obtenidos indicaron que la edad de los
jabales abatidos fue de 2,08 + 1,47 (media + desviacin tpica) aos, siendo no
significativa la diferencia entre sexos. En cuanto la seroprevalencia de los
agentes infecciosos antes indicados, hemos detectado que un 24,43% positivos
frente a la Enfermedad de Aujezsky, siendo sensiblemente mayor el nmero de
animales que el test cataloga como enfermos en Brucelosis (59,02%) y ms
an en Parvovirosis (72,78%). En cuanto las diferencias entre sexos, nuestros
resultados indican que en el caso de la Brucelosis, hay un mayor nmero de
hembras enfermas segn el test correspondiente (60,47% del total), siendo
estas diferencias significativas. Para las otras dos enfermedades analizadas,
no hay diferencias estadsticamente significativas, si bien en ambos casos se
vuelve a observar una mayor incidencia en las hembras (59,50% de los casos
positivos de Brucelosis y 54,96% en Parvovirosis). Finalmente, en las tres
enfermedades analizadas hemos identificado un aumento en el nmero de
individuos positivos con la edad. As, los mayores ndices de seroprevalencia
han coincidido con los jabales de mayor edad, hecho que nos hace suponer
que las vas y los factores de contagio no se limitan a una edad de riesgo
concreta.
19
E - 289
>ito!!emediacin de $uelo$ contaminado$ con C!omo utili)ando
4irschfel$ia incana*Pseu$omonas maltophilia
Arco N., Tamallo F.G., Soto J., Romero C.
(epartamento de Gu-mica ' +edio Am,iente, Escuela &uperior *olit5cnica, Universidad Europea
de +adrid, Villaviciosa de Dd;n, .860 +adrid. m[carmen.romero%uem.es
Los metales peados constituyen un grupo de contaminantes altamente
peligrosos, el Cr (V) es mutagnico y carcinognico. La contaminacin de
suelos con metales pesados supone importantes prdidas econmicas adems
de implicar riesgos sobre la salud pblica y el medio ambiente. La eliminacin
de los metales pesados de espacios contaminados se ha convertido en una
prioridad. Existen diferentes procedimientos para la eliminacin de metales
pesados, basados en tecnologas de intercambio inico y precipitacin del
metal a una forma no biodisponible. Estos sistemas son caros y agresivos con
el medio ambiente. Los sistemas biolgicos se han mostrado como una
herramienta ms econmica y respetuosa con el medio ambiente en tareas de
recuperacin.Los metales pueden ser altamente txicos para las bacterias, sin
embargo, algunas bacterias han desarrollado varios mecanismos de resistencia
para evitar la toxicidad de los metales. Estas bacterias se han empleado como
mtodo biolgico de biorremediacin. El valor de las plantas en la acumulacin
de metales ha dado lugar al nacimiento de un rea especfica denominada
fitorremediacin.
El objetivo de este trabajo es determinar la capacidad de Hirsc)#eldia incana
asociada a *seudomonas maltop)ilia como sistema biorrecuperar de suelos
contaminados con Cr. Se ha aislado una bacteria resistente a metales pesados
a partir de lodos de depuradora, *seudomonas maltop)ilia y se ha determinado
el nivel mximo de resistencia a varios metales pesados: Zn, Ni, Co, Cu, V, Te,
Pb, Hg, Cr, As. Los resultados han demostrado que esta bacteria es
multiresistente, a niveles elevados de varios metales pesados.La concentracin
inhibitoria mnima para el Cr(V) fue 15 mM.Hirsc)#eldia incana ssp. geniculata
fue seleccionada por su capacidad para acumular metales pesados y crecer
bajo la gran variedad de condiciones climticas de la Pennsula brica. Para el
establecimiento de las asociaciones cada planta fue regada con un cultivo
bacteriano. Las asociaciones planta-bacteria se regaron con un solucin de
CrO
4
2-
durante 8 semanas. No hubo diferencias significativas en biomasa en las
plantas inoculadas con *seudomonas maltop)ilia. Se determin la
concentracin de Cr (V) en el suelo, la raz y la parte area de la planta. El
contenido de Cr del suelo y de la planta fue extrado usando el procedimiento
del cido ntrico modificado (ISOPCD ??FBG=A) y la concentracin de Cr (V) fue
cuantificada mediante espectrofotometra de absorcin atmica. Los resultados
obtenidos demuestran que la presencia de la bacteria aumenta la capacidad de
fitoextraccin de la planta. Este sistema puede ser interesante en el desarrollo
de estrategias biolgicas de eliminacin de metales del suelo.

E - 323
E"aluacin $anita!ia de la tecnolo,a de infilt!acin !#&ida $ob!e el $uelo%
Casermeiro, M.A.
1
; De la Losa, A.
2
; Moreno, L.
2
y Navarro-Garca, F.
3
1
(ept. de Eda#olog-a, Fac. de Farmacia, U!+.
.
(irecci;n de Hidrogeolog-a ' Aguas &u,terr"neas,
1nstituto 4eol;gico +inero de EspaLa, U!+.
3
(ept. de +icro,iolog-a 11, Fac. de Farmacia,
Universidad !omplutense de +adrid.
La tcnica de infiltracin directa sobre el terreno (DT) permite el tratamiento de
las aguas residuales urbanas con mnimos costes econmicos y es de gran
utilidad en zonas con grandes perodos de aridez como el Mediterrneo.
Lgicamente las instalaciones deben demostrar su seguridad sanitaria y su
bajo impacto ambiental, ya que se debe confirmar la ausencia de
contaminacin por bacterias fecales a las aguas subterrneas. Sin embargo, en
muy pocas ocasiones se lleva a cabo este estudio a pesar de las
recomendaciones de numerosas instituciones como la OMS[1]. A este respecto
se ha acuado el trmino "salud del suelo ligado a la utilizacin de ste en la
agricultura[2], pero que quiz debera extenderse para abarcar los aspectos
sanitarios.

En este trabajo se presentan los resultados preliminares obtenidos despus de
la infiltracin directa sobre el terreno durante tres aos en Dehesas de Guadix
(Granada). Se tomaron testigos de suelo con ms de 2 m de profundidad a los
tres aos del inicio de la experiencia y en dos escenarios comparados: zonas
sometidas a la infiltracin directa y zonas testigo. Para llevar a cabo el estudio
microbiolgico se utilizaron los parmetros y tcnicas aplicadas a la evaluacin
de aguas potables de consumo humano (Real Decreto 140/2003).

Los resultados muestran como los primeros centmetros del suelo son un filtro
eficaz para la gran mayora de bacterias fecales analizadas. Sin embargo, en
algunas ocasiones, se han detectado poblaciones microbianas a ms de 1 m
de profundidad por lo que no se puede asegurar la ausencia de contaminacin
bacteriana en las aguas subterrneas debida a la infiltracin directa. No
obstante, los resultados son muy alentadores y permitirn en un futuro
establecer un protocolo para la evaluacin ambiental y sanitaria de las
instalaciones que utilicen esta tecnologa.
[1] http://www.who.int/water_sanitation_health/norms/en/
[2] Arias ME, Gonzalez-Perez JA, Gonzalez-Vila FJ, Ball AS. Soil health -- a
new challenge for microbiologists and chemists. nt Microbiol. 2005 Mar; 8
(1):13-21.
199
E - 324
Reulacin de la !uta de de!adacin del #cido E=;id!o-ifenil&!o&inico
en Escherichia coli%
Manso, .
1
, Galn, B.
1
, Sanz, J. M.
2
, Prieto, M. A.
1
y Garca, J. L.
1
1
(epartamento de +icro,iolog-a +olecular. !entro de 1nvestigaciones 6iol;gicas B!16C/!&1!, !<
?amiro de +ae$tu, 9, .8040 +adrid.
.
1nstituto de 6iolog-a +olecular ' !elular. Universidad +iguel
Hern"nde$. Avda. Ferrocarril s<n., 03.0./Elc)e BAlicanteC. macoi%ci,.csic.es
El cido 3-hidroxifenilpropinico (3HPP) es un compuesto ampliamente
distribuido en la naturaleza procedente de la degradacin de la lignina y de
otros compuestos aromticos sintetizados por las plantas. Este compuesto
sirve de fuente de carbono y energa a distintas bacterias. La ruta de
degradacin del 3HPP en Esc)eric)ia coli est codificada por el cluster m)p
localizado en el minuto 8 del cromosoma. El cluster m)p contiene un opern
catablico (m)pA6!(FE), un gen transportador (m)p7), y un gen regulador
(m)p?) que se transcribe en sentido opuesto al resto de los genes. El
regulador MhpR es un activador transcripcional que pertenece a la familia de
reguladores clR y que controla la expresin de los genes catablicos m)p
mediada por el promotor *a. La protena MhpR detecta los niveles de 3HPP
para activar la transcripcin. La expresin de los genes m)p est sujeta a una
represin catablica por glucosa mediada por la protena CRP. Para
caracterizar MhpR se ha hiperexpresado esta protena en E. coli fusionada a un
tag de 6His en el extremo N-terminal, lo que ha permitido purificarla en un slo
paso a homogeneidad electrofortica. Se ha demostrado mediante ensayos de
retardo en gel que MhpR se une al promotor *a en presencia y ausencia del
inductor 3HPP, aumentando la afinidad de la protena por el DNA en presencia
de 3HPP. Mediante ultracentrifugacin analtica se ha determinado que la
protena MhpR es un dmero en solucin. Por otro lado, se ha modelado una
estructura tridimensional en la cual se describe un dominio de unin al DNA de
tipo hlice-giro-hlice alado y un dominio de activacin de unin al inductor
3HPP. Finalmente, mediante error-prone PCR hemos obtenido una coleccin
de mutantes de MhpR cuya actividad est alterada positiva y negativamente, lo
que permitir conocer los aminocidos implicados en el mecanismo de accin
de este regulador.
+icro,iolog-a +edioam,iental .00
E - 368
Situacin de la$ aua$ de &i$cina de la &!o"incia de Bada*o)
Villalba Doblas, A.M.
(1)
, Ambel Carracedo, M.P.
(2)
,

Cobos Rodrguez, J.G.
(3)
,
Montes Calatayud,Y.
(4)
B1C >a,oratorio &alud *R,lica 6ada=o$. !<?onda del *ilar nZ ... 6ada=o$ 0600.. B.C EA* !entro
&alud >os &antos de +aimona. !<>a 4ran=a 16. >os &anto 06.30. B3C (ep. Gca. Anal-tica '
ElectroIu-mica. UEY. 6ada=o$. B4C >a,oratorio &alud *R,lica 6ada=o$. !<?onda del *ilar nZ ...
6ada=o$ 0600.. anamaria.villal,a%sc.=untaex.es
Aunque el uso de aguas recreativas est relacionado con un gran beneficio
para la salud y el bienestar personal, puede entraar peligros de diversos tipos
como infeccin por ingestin, inhalacin o contacto con bacterias patgenas,
virus, hongos y protozoos presentes en el agua. Adems, el agua, por su
capacidad de transporte, acta como mecanismo de transmisin directo de
enfermedades gastrointestinales y por contacto cutneo-mucoso. La presencia
de indicadores microbiolgicos en aguas de piscinas da idea de una incorrecta
desinfeccin, mal mantenimiento o insuficiente renovacin del agua del vaso.
Adems, puede ser el origen de diversos problemas de salud pblica.
Se han estudiado muestrasde aguas de piscina de diferentes poblaciones
pertenecientes a las cuatro reas de Salud de la provincia de Badajoz; se han
analizado en el Laboratorio de Salud Pblica con el objetivo de estudiar y
evaluar su calidad microbiolgica, siguiendo un muestreo aleatorio de 79 vasos
de piscinas al aire libre, en 40 instalaciones recreativas, entre las fechas de 6
de Junio y 7 de Septiembre del ao 2004. Se ha seguido la metodologa de
filtracin de la muestra, a travs de una membrana estril microporosa de
steres de celulosa, donde son retenidos los microorganismos, los cuales se
investigan siguiendo procedimientos escritos basados en normas
internacionales : Recuento de Coliformes termotolerantes SO 9308-1:2000 ;
Recuento de Estreptococos fecales SO 7899-2:2000 ; Recuento de
&tap)'lococcus aureus SO 6888-1:1999 ; Recuento de *seudomonas
aeruginosa UNE-EN 12780 ; Recuento de Clostridios sulfito-reductores SO
6461/2 ; Presencia de &almonella spp SO 6340.
Los criterios de calidad seguidos son los establecidos en el Decreto 54/2002 de
la Comunidad Autnoma de Extremadura, por el que se aprueba el Reglamento
Sanitariode piscinas de uso colectivo de esta Comunidad. Los resultados
obtenidos reflejan que un62% de las muestras se encuentra dentro de los
criterios de calidad establecidos por el Decreto y un 38% los sobrepasa, siendo
los resultados independientes del uso y caractersticas de las piscinas(infantil y
adultos). Del estudio se desprende que los dos parmetros microbiolgicos que
superan los niveles en mayor medida son !lostridios sul#ito/reductores y
*seudomonas aeruginosa, realizndose estudio estadstico de esta situacin y
relacionando dichas presenciascon su gran resistencia a los tratamientos
clorados.
BBLOGRAFA :
(1)Decreto 54/2002, de 30 de abril . DOE n 52, de 7 de mayo de 2002
(2)Guidelines for Safe Recreational-Water Environments. Vol 2: Swimming pools, spas
and similar recreational-water environments. (2000) OMS
(3)Medicina Preventiva y Salud Pblica. M Pidrola Gil. Aspectos Sanitarios del Agua.
( 2001 )
.01
E - 380
De!adacin de com&ue$to$ a!om#tico$ &o! la$ bacte!ia$ ;alfila$
mode!ada$ 4alomonas organivorans y 6halassobacilus $evorans
Garca, M.T., Ventosa, A. y Mellado, E.
(epartamento de +icro,iolog-a ' *arasitolog-a, Facultad de Farmacia, Universidad de &evilla.
emellado%us.es
Numerosos procesos industriales, tales como la produccin de pesticidas,
productos farmacuticos, procesos de extraccin de petrleo y gas, generan
aguas residuales salinas en las que los microorganismos convencionales no
pueden ser utilizados y en los cuales las bacterias halfilas moderadas juegan
un papel importante. Estas bacterias se definen como aquellos
microorganismos que crecen ptimamente en medios que contienen de 0,5 a
2,5 M de NaCl (Ventosa y col., 1998). Sin embargo, algunos son capaces de
crecer en un rango de salinidades an ms amplio que abarca hasta una
concentracin de 4 M de NaCl. Este grupo constituye un grupo muy
heterogneo que incluye especies pertenecientes a gneros bacterianos muy
diversos. As, a excepcin de algunas especies metangenas pertenecientes a
las arqueas, la mayora son bacterias tanto Gram-negativas como Gram-
positivas (Ventosa y col., 1998).
Recientemente hemos realizado un screening en distintas salinas del sur de
Espaa con el fin de aislar y caracterizar bacterias halfilas moderadas
capaces de degradar en condiciones salinas, compuestos aromticos que son
contaminantes habituales de los residuos industriales. La caracterizacin
fenotpica y genotpica de los aislamientos determin Halomonas como el
gnero predominante. Entre los aislamientos un grupo de cepas mostr una
similitud muy elevada (98%) con Halomonas salina. Sin embargo las
diferencias fenotpicas y el bajo nivel de hibridacin ADN-ADN determin que
estas cepas pertenecen a una nueva especie del gnero Halomonas,
Halomonas organivorans sp. nov. (Garca y col., 2004). Adems hemos aislado
una bacteria Gram-positiva que hemos clasificado como 7)alasso,acilus
devorans capaz de degradar en condiciones salinas fenol, un compuesto que
se genera como residuo en distintas industrias.
Este estudio ha permitido determinar la versatilidad catablica de H.
organivorans y 7)alasso,acillus devorans, dos especies halfilas moderadas
potencialmente tiles desde el punto de vista biotecnolgico en los procesos de
biorremediacin.

Ga!c,a9 M%T%9 Mellado9 E%9 O$to$9 3%C% y 4ento$a9 A% 2004. Halomonas
organivorans sp. nov., a novel moderate halophile able to degrade aromatic
compounds. nt. J. Syst. Evol. Microbiol.@B81723-1728.
4ento$a9 A%9 O!en9 A% y Nieto9 3%3% 1998. Biology of moderately halophilic
aerobic bacteria. Microbiol. Mol. Biol. Rev. /.8 504-544.
+icro,iolog-a +edioam,iental .0.
E - 382
E$tudio de la$ comunidade$ mic!obiana$ a$ociada$ a un &!oce$o de
com&o$ta*e e-&e!imental de al&eo!u*o%
Morillo J.A.
1
, Antizar-Ladislao B.
2
, Beck A.
2
, Fuentes S.
1
, Monteoliva-Sanchez
M.
1
, Ramos-Cormenzana A.
1
, Russell N.J.
2
1 (epartamento de +icro,iolog-a, Facultad de Farmacia, Universidad de 4ranada. . 1mperial
!ollege >ondon, V'e !ampus, United Pingdom.
La introduccin en Espaa en la dcada de los 90 del "sistema de dos fases"
para la produccin de aceite de oliva ha llevado a la generacin de
aproximadamente 4 millones de toneladas/ao de un residuo semislido
denominado alpeoru=o. Las caractersticas principales de este residuo son un
alto porcentaje de agua, pH ligeramente cido y un alto contenido en materia
orgnica, principalmente lignina, celulosa y hemicelulosa. Esta composicin se
complica con una considerable proporcin de protenas y carbohidratos, y una
pequea fraccin de compuestos polifenlicos que destacan por su actividad
antimicrobiana y fitotxica [1]. Algunas de estas propiedades no son
compatibles con su aplicacin directa en la agricultura, razn por la cual el
compostaje de este residuo se ha propuesto como una alternativa viable [2].
En esta comunicacin se presenta un resumen de un estudio sobre compostaje
experimental de alpeorujo, haciendo nfasis en el seguimiento de
las comunidades microbianas. Se utilizaron 60 bioreactores a escala de
laboratorio durante 75 das. El contenido de cada bioreactor, una mezcla de
agua, paja y alpeorujo, fue sometido a aireacin y enriquecimeinto con
nutrientes en funcin de diversos tratamientos, evalundose el contenido
fenlico total como parmetro de control del proceso de bioremediacin.
Asmismo, los cambios producidos en la comuniad microbiana fueron
analizados mediante la tcnica PLFA (Phospholipid Fatty Acid Analysis), y
mediante el anlisis del gen rRNA 16S por el mtodo PCR-DGGE (Denaturing
Gradient Gel Electrophoresis).
Los resultados obtenidos mostraron un efecto positivo de la aireacin y la
adicin de nutrientes (nitrato y fosfato) sobre la disminucin del contenido
fenlico del residuo. Los datos obtenidos por PLFA revelaron un aumento del
ndice hongo/bacteria en los bioreactores con disminucin ms acusada de
compuestos fenlicos. Los perfiles obtenidos por DGGE ofrecieron informacin
sobre cambios de la diversidad microbiana a lo largo del proceso.
Bibliografa
[1]. A. Ramos-Cormenzana, B. Jurez-Jimnez, M.P. Garca Pareja.
nternational Biodeterioration & Biodegradation 38 (1996) 283-290.
[2]. J.A. Alburquerque, J. Gonzlvez, D. Garca, J. Cegarra. Bioresource
Technology 91 (2204) 195-200.

.03
E - 404
An#li$i$ del mate!ial e-t!acelula! e-c!etado &o! Pseu$oalteromonas
antarctica N>E mediante c!iofi*acin &o! alta &!e$in y c!io$u$titucin
Nevot M., Deroncel V., Lpez-glesias C.
1
, Bozal N., Guinea J., Mercad E.
(epartamento de +icro,iolog-a ' *arasitolog-a &anitarias. Facultad de Farmacia Universidad de
6arcelona. Avd. 2uan YY111 s<n 080.8 6arcelona.
1
&ervicios !ienti#ico/75cnicos de la Universidad
de 6arcelona. !orreo electr;nico0 mnevot%'a)oo.es
La Antrtida es un ecosistema que ha centrado el inters de numerosos
estudios cientficos en los ltimos aos debido a la presencia de nuevos
microorganismos con potenciales nuevas aplicaciones en el campo de la
biotecnologa. Nuestro grupo ha descrito recientemente nuevas especies
pertenecientes a diversos grupos taxonmicos. *seudoalteromonas antarctica
NF3 es una bacteria Gram-negativa, psicrotrofa que produce un abundante
material exopolimrico con interesantes propiedades
El objetivo del presente estudio ha sido aplicar la tcnica de criofijacin por alta
presin y criosustitucin para analizar a nivel ultrastructural el material
extracelular producido por *. antarctica NF3. El elevado contenido en agua de
los biopolmeros bacterianos impide su correcta visualizacin mediante las
tcnicas convencionales de fijacin qumica y deshidratacin a alta
temperatura, pudindose visualizar nicamente con tratamientos previos de
estabilizacin como la utilizacin de un antisuero especfico. Mediante la
criofijacin por alta presin se inmovilizan los componentes celulares a muy
bajas temperaturas y gran velocidad, solidificando el agua presente en la
muestra de manera que se evita la formacin de cristales de hielo que podran
daar su estructura y se consigue mantener su disposicin natural.
La observacin por microscopa electrnica de transmisin de cortes ultrafinos
de *. antarctica NF3 procesada por criofijacin por alta presin y criosustitucin
han permitido visualizar el material extracelular y mostrar que est integrado
por distintos componentes. Por un lado se aprecia un halo adherido a la
superficie celular constituido por fibras dispuestas perpendicularmente a ella.
Esta estructura fibrilar se extiende ms all del halo formando una red ms
dispersa. Por otra parte destaca la presencia de una gran cantidad de
estructuras globulares rodeadas por una bicapa, semejantes a las vesculas de
membrana descritas en otras bacterias Gram-negativas.
La clara mejora tcnica que introduce la criofijacin por alta presin y
criosustitucin en la visualizacin de biopolmeros bacterianos respecto a los
mtodos convencionales, nos ha permitido analizar la ultraestructura del
material extracelular de *. antarctica y en futuros estudios asignar la
composicin y propiedades de modo correcto a los distintos componentes
observados.
Agradecimientos:
Agradecemos la ayuda de los Servicios Cientfico-Tcnicos de la Universidad
de Barcelona., as como la beca recibida por M. Nevot de la Fundacin Agust
Pedro Pons. Este trabajo ha sido en parte subvencionado por la Agncia de
Gesti d'Ajuts Universitaris i de Recerca de la Generalitat de Catalunya
(Proyecto No. 2001/SGR/00126).
.03
E - 417
Glicol,&ido$ bacte!iano$8 Com&o$icin y &!o&iedade$f,$ico=:u,mica$
Marqus, A.M.
1
;Garreta A.
1
; Aranda F.J.
2
;Sarr, J.
1
; Teruel J.A.
2
;Espuny, J.
1
;
Manresa, A.
1
; Ortiz, A.
2
1
>a,oratori de +icro,iologia. Facultat de FarmHcia. Universitat de 6arcelona. E/080.8 6arcelona.
.
(epartamento de 6ioIu-mica ' 6iolog-a +olecular/A. Facultad de Veterinaria. Universidad de
+urcia. E/30100 Espinardo. +urcia. ammarIues%u,.edu
Los biotensiaoctivos son metabolitos secundarios acumulados en el medio de
cultivo por diversos grupos de microorganismos. *seudomonas sp 47T2
acumula durante el ciclo celular 12 g/L de ramnolpidos, mientras que
?)odococcussp 51T7 produce 3.9 g/L de trealosalpidos. Estos glicolpidos se
acumulan como una mezcla de diversos componentes constituyendo
tensioactivos complejos. En el caso de *seudomonas se han detectado hasta
once componentes homlogos mediante LC-MS, y en el caso de
?)odococcuscuatro componentes. Debido a la posible utilizacin de los
tensioactivos en formulaciones de aplicacin tpica en cosmtica y farmacia se
ha estudiado su potencial efecto irritante ocular y drmico. El estudio de
irritacin drmica se ha realizado con dos lneas celulares: fibroblastos y
queratinocitos, determinndose la C
50
para cada uno de ellos en ambas lneas
celulares. En el caso de los ramnolpidos la C
50
en queratinocitos es de
71g/mL y en la prueba de NRU de 65,1 g/mL utilizando MTT, y para los
trealosalpidos el NRU es de 91,85 g/mL y el MTT 70,1 g/mL. En fibroblastos,
la C
50
de los ramnolpidos es de 53,9 g/mL en NRU y de 60,1 para el MTT,
mientras que para los trealosalpidos NRU 91,1 g/mL y MTT 117,4 g/mL.
Estos valores, superiores a los obtenidos con SDS, indican su escasa
irritabilidad. No obstante, los resultados obtenidos representan una
aproximacin dado que se han obtenido con extractos orgnicos no
purificados.A partir del tensioactivo completo, se ha purificado el
monoramnolpido y el diramnolpido mediante cromatografa en columna de
cido silcico. La calorimetra diferencial de barrido muestra que la inclusin de
diRL en membranas de fosfatidilcolina hace disminuir la Tc de la transicin
principal de gel a lquido-cristalino. A concentraciones en torno a 5 mol% y
superiores se observa la aparicin de una nueva transicin a temperaturas
inferiores, que es ms aparente al acortarse la cadena: ms en DMPC que en
DPPC y DSPC, lo que indica una separacin de fases inducida por el diRL. En
los perfiles dedifraccin de rayos X de ngulo estrecho se observa la
desaparicin de las reflexiones agudas de Braggs, dando lugar a perfiles
anchos de dispersin, lo que sugiere una fuerte disminucin del orden de la
membrana.

Sub"encionado &o! el +!oyecto CTX.FFB=FF?FG del Mini$te!io de Ciencia
y Tecnolo,a%

E - 420
T!an$&o!te y $u&e!"i"encia de contaminante$ mic!obiano$ en el $uelo
Vigus N*, Rodrguez R**, Candela L**, Mas J*.
M(epartament de 4enKtica i +icro,iologia, Facultat de !iKncies, Universitat AutUnoma de
6arcelona, 08193 6ellaterra. 6arcelona. Email0 nuria.vigues%ua,.esMM (epartament dTEngin'eria
del 7erren', U*! !ampus :ord, 6arcelona.
Debido a la deficiencia de recursos hdricos caracterstica de nuestro pas, la
reutilizacin de aguas residuales tratadas para riego y posterior recarga de los
acuferos se est convirtiendo en una prctica cada vez ms habitual. Si la
calidad microbiolgica de estas aguas es mala, hay riesgo de acabar
contaminando acuferos y comprometiendo su uso posterior. Para valorar el
riesgo de contaminacin de acuferos derivados del uso de estas aguas, es
importante disponer de informacin sobre la supervivencia y la velocidad de
transporte de los contaminantes microbianos en el suelo.
En este trabajo se ha determinado la supervivencia de dos microorganismos
modelo (E. coli y &. aureus) en suelos de diferentes caractersticas, en funcin
del contenido de humedad. Se han determinado tambin las isotermas de
adsorcin de ambos microorganismos a los dos tipos de suelos y se han
realizado experimentos de movilidad en columnas empaquetadas de suelo y
saturadas de agua.
Los resultados obtenidos permiten estimar el tiempo necesario para que los
contaminantes microbianos aportados con el agua de riego lleguen a la zona
saturada y contaminen los acuferos. Las predicciones realizadas a partir de los
resultados de laboratorio se han comparado con medidas de campo realizadas
en un campo experimental sometido a riego perodico con aguas residuales
procedentes de un tratamiento secundario. El suelo de este campo esta
formado por arenas de elevada permeabilidad. El riego se efectua por
inundacin y la capa fretica se encuentra prxima a la superficie, entre los 40
cm y los 2 m de profundidad. Estas caractersticas configuran una situacin de
alto riesgo que podemos considerar como el peor caso posible.
.0
E - 426
4a!iacin e$tacional de la &oblacin mic!obiana en c!i$tali)ado!e$ de
$alina$ de e$tan:ue m(lti&le.
Meseguer Sarabia M.L. U Goma!i) Clemente M%U Gme) De!n#nde) M%3%U
Me$eue! So!ia I%
(epartamento de +icro,iolog-a, Universidad +iguel Hern"nde$ de Elc)e. Avenida de la
Universidad s.n.F Edi#i#cio 7orregaitan *l.,a=a. 03.0./Elc)e BAlicanteC
Las poblaciones de microorganismos en ambientes naturales se enfrentan a
numerosos cambios debidos a diversos factores. En el caso de ambientes
halfilos extremos, estos cambios se ven acentuados por la dureza de las
condiciones ambientales.
A lo largo del ao, y debido a los cambios climticos fundamentalmente, se
producen cambios poblacionales de tal forma que unos microorganismos que
son ms abundantes en una poca del ao, son reemplazados por otros en
otras pocas. Por otra parte, en estudios previos habamos observado que las
poblaciones tambin eran variables de unos cristalizadores a otros. Esto se
explica porque en el proceso de la produccin de la sal los estanques se vacan
y rellenan de nuevo con agua procedente de los calentadores varias veces al
ao. El nmero de veces que se rellena un cristalizador vara de unos a otros
incidiendo sobre la poblacin microbiana.
En el presente trabajo se pretende estudiar la influencia de factores
ambientales externos, tales como la temperatura, precipitaciones,
evaporacin, ..., as como la posible relacin de la dinmica de circulacin de
las aguas utilizadas en la obtencin de sal marina con la dinmica de poblacin
microbiana de las salinas.
Se realiz un estudio sobre la variacin de la poblacin microbiana con
muestreos en varios estanques a la vez y en el transcurso de un ao.
Se obtuvieron un total de 120 muestras que se observaron al microscopio
ptico con contraste de fases para determinar la diversidad morfolgica y
cuantificarlas mediante el recuento directo con la cmara de Nehubaer.
Dentro de la enorme diversidad morfolgica presente en las muestras, se
mostr un cierto predominio de las formas bacilares y las cocoides
De nuestros resultados se desprende que la poblacin microbiana total era
elevada a lo largo de todo el ao, ya que siempre se mantuvo por encima de
las 10
5
clulas/ml. Sin embargo cabe destacar que variaban los tipos
morfolgicos en funcin de las pocas del ao, siendo las formas bacilares
predominantes durante los meses ms clidos y las formas cocoides durante
los meses ms fros. Esto podra ser debido a que las formas cocoides son
ms resistentes que las bacilares a las condiciones climticas adversas como
la lluvia que reduce la concentracin de las sales en el medio o las
temperaturas bajas. Otra explicacin vlida podra encontrarse con la relacin
superficie/volumen.
En lo que respecta a lapoblacin microbiana en general, lo nico destacable es
un descenso significativo en los meses de Septiembre y Abril. En Septiembrese
renuevan las aguas de los cristalizadores lo cual podra implicar un cambio
sustancial en la concentracin de nutrientes y afectando en consecuencia a la
poblacin microbiana es normalmente inferior a la de los cristalizadores. En
Abril, hubieron lluvias abundantes, lo cual pudo afectar directamente a la
disminucin de la poblacin, al lisar las clulas.
AGRADECMENTOS: D.Miguel Cuervo. Salinas Bras del Port (Santa Pola).
E - 441
E$tudio del efecto t-ico del Cu9 Yn y Cd $ob!e la diatomea ma!ina
Phaeo$actylum tricornutum mediante la t'cnica de citomet!,a de flu*o
Folgar, S.; Cid, A.; Torres, E. y Abalde, J.
>a,oratorio de +icro,iolog-a. Facultad de !iencias. Universidad de A !oruLa, Ale=andro de la &ota,
nZ 1, A !oruLa, &pain. e/mail0 s#olgar%udc.es
Los metales se encuentran entre los contaminantes ms frecuentes de los
ecosistemas acuticos; como tales contaminantes alteran la estructura de los
ecosistemas provocando cambios en las comunidades biticas. Los
microorganismos, que constituyen la base de las cadenas trficas acuticas,
son los primeros en verse afectados por las descargas de este tipo de
contaminantes en su medio, dado que se encuentran en contacto directo con
ste, separados nicamente por una membrana y/o una pared celular. Dentro
de los microorganismos, las microalgas han sido utilizadas como indicadores
biolgicos para el ensayo de la toxicidad de muchos contaminantes acuticos,
dada su gran sensibilidad frente a las variaciones de las condiciones del medio
[1].

En este trabajo se ha estudiado el efecto txico de tres metales muy frecuentes
en aguas marinas sobre la diatomea marina *)aeodact'lum tricornutum. Los
metales seleccionados para el presente estudio fueron los metales esenciales
Cu y Zn y el metal no esencial Cd. Todos ellos estn presentes en numerosos
efluentes urbanos, agrcolas e industriales. La diatomea marina *. tricornutum
es una especie fitoplanctnica usada ampliamente en laboratorio y en ensayos
de toxicidad para evaluar los efectos de los efluentes industriales. El propsito
de este estudio es evaluar, mediante la tcnica de citometra de flujo, las
posibles variaciones en el contenido de clorofila a as como el efecto que
ejercen dichas concentraciones de metales sobre la viabilidad celular. Las
concentraciones de metales utilizadas fueron: 0.05, 0.1, 0.250 y 0.5 ppm Cu;
2.5, 10, 20 y 40 ppm Zn; y 5, 10, 25, 50, 75 y 100 ppm Cd.

Los resultados obtenidos muestran que a medida que aumenta la
concentracin de metales en el medio desciende la viabilidad celular tras 96
horas de cultivo. Estos datos muestran una mayor sensibilidad (y por tanto una
mayor toxicidad) al Cu y una gran resistencia al Zn. As, los resultados indican
que *. tricornutum es ms sensible al Cu, seguido del Cd y el Zn. Por otro lado,
la presencia de estos metales en el medio provoca un descenso en la
autofluorescencia celular tanto a las 48 como a las 96 horas. Estos cambios en
la autofluorescencia de la clorofila a estn relacionados con la capacidad
oxidativa de estos metales en diferentes posiciones del transporte electrnico
fotosinttico [2].

Biblio!af,a8
[1] E. Torres, A. Cid y C. Herrero. Water, Air, Soil Pollut. ??G (2000) p. 1
[2] D. P. Singh y S. P. Singh. Plant Physiol. 83 (1987) p. 12
.09
E - 445
Metale$ +e$ado$ con$ide!ado$ como Contaminante$ de Aua y de Suelo
afectan la e-&!e$in flaela! de Escherichia coli ente!o&atena%
Avelino F.F.
1,2,
, Labra L.P.
3
, Muoz G.A.
2
, Castaeda R.E..
2
, Chvez B.E.
2
,
Cedillo R.M.L.
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4
*osgrado en !iencias Am,ientales
1
, !1!+
.
, Facultad de !iencias Gu-micas
3
de la 6enem5rita
Universidad Aut;noma de *ue,la, +5xico. (epto de +icro,iolog-a e 1nmunolog-a de la Universidad
de Ari$ona en 7ucson, U&A
4
. !iudad Universitaria edi#. 6 comple=o de !iencias, tercer piso
!iudad Universitaria, !1!+/1!6UA*, tel B...C .33 .0 10 ext... ; 1., #ax B...C ..9 36 30, correo
electr;nico #avelino#lores%'a)oo.com
Las enfermedades diarreicas siguen siendo un problema de salud en pases en
desarrollo, porque el 70 % de las muertes de nios menores de 5 aos son por
esta causa (OMS); siendo EPEC uno de los principales agentes causales. Un
factor de virulencia de EPEC importante es el flagelo, que ayuda a la bacteria a
desplazarse y realizar movimientos dirigidos, dicho apndice ha sido
involucardo en la formacin de biopelculas a superficies inertes, contribuyendo
esto a la permanencia del mismo en alcantarillado y agua potable de mala
calidad. sta ltima suele tener microorganismos y concentraciones elevadas
de metales pesados, entre otros. El propsito de este proyecto fue investigar al
flagelo como un factor que le permite a la bacteria sobrevivir, desarrollarse y
reproducirse en presencia de metales pesados.
El objetivo de este trabajo fue determinar como la presencia de los metales
pesados (Hg, Pb, Zn, Cu, Cd, Fe y Cr ) influyen en la transcripcin y expresin
del flagelo de EPEC (E2348/69). Para este proyecto se transformaron las
cepas EPEC silvestre (E2348/69), AGT01 (mutante de flagelo) y la DH5a (K-
12), con la fusin transcripcional (promotor #li! con el opern lacSC. Las cepas
obtenidas se crecieron en caldo LB durante 24 horas, se hicieron diluciones
1:100, se crecieron por 4 horas y se determin la produccin de b-
galactosidasa. Para determinar la expresin de flagelina se usaron cultivos
bacterianos a una OD
600
=1 de los que se prepararon extractos de bacteria
completa por desnaturalizacin en buffer de muestra para SDS-PAGE,
serealiz inmunoelectrotransferencia y las protenas se reaccionaron con
anticuerpos anti-flagelo y conjugado anti-gG de conejo acoplado a peroxidasa.
Los ensayos de motilidad se hicieron en agar LB al 0.25%. Se demostr que la
presencia de algunos metales no afectaron significativamente el crecimiento
bacteriano, excepto Hg y Pb. Con Zn, Cu, Cd y Cr la expresin flagelar fue
proporcional a la transcripcin. La movilidad coincide con la expresin flagelar
en presencia de Zn, Cu, Cd y Fe. La transcripcin de flagelo se afect de forma
similar para todos los metales excepto para Pb.
La presencia de metales pesados no afecta significativamente el crecimiento
bacteriano pero si la transcripcin y expresin de flagelina asi como la
movilidad de EPEC.
E - 446
Di"e!$idad bacte!iana de $uelo$ de la ant#!tida y ca&acidad de la$
bacte!ia$ &a!a de!ada! ;id!oca!bu!o$%
Surez Surez A. B., Pelez Andrs A. . y Snchez Martn J.
Nrea +icro,iolog-a, (epartamento de 6iolog-a Funcional. Facultad de +edicina. Universidad de
Dviedo. !< 2ulian !laver-a &<:, 33006, Dviedo. anina99%'a)oo.es
La Antrtica es una regin aislada del resto del mundo, que recibe microorganismos de regiones
templadas, sobre los que la seleccin ambiental acta favoreciendo a los fenotipos ms adaptados
(Cavicchioli et al; 2002). Esto genera una divergencia evolutiva de dichos microorganismos. Los
endemismos microbianos que se estn encontrando en la Antrtida, hacen que esta regin sea uno
de los principales lugares donde se puede estudiar el proceso evolutivo que da lugar a la
especiacin microbiana (Vincent, 2000).
Por otro lado, en los ltimos aos se han producido vertidos de hidrocarburos en esos hbitats y se
ha comprobado que la biorremediacin es la herramienta ms til para la limpieza de suelos y
aguas costeras en esas condiciones (Ruberto et al., 2005). Se han incrementado notablemente los
estudios sobre microorganismos autctonos con capacidad para degradar hidrocarburos tanto en el
rtico como en la Antrtica (Gunn Rike et al., 2003; Baraniecki et al., 2002; Ferguson et al., 2003;
Vasileva-Tonkova and Gesheva, 2004), que permiten predecir el comportamiento de estos suelos
ante una posible contaminacin y su utilizacin en experimentos de biorremediacin.
Los objetivos de este estudio son: determinar la di"e!$idad bacte!iana presente en el suelo
asociado a la rizosfera de las dos nicas plantas vasculares ((esc)ampsia antarctica y
!olo,ant)us IuitensisC, existentes ensla Livingston (Antrtida), analizar la di"e!encia e"oluti"a
entre estas bacterias y otras relacionadas filogenticamente de climas templados y por ltimo,
identificar y caracterizar bacte!ia$ con ca&acidad &a!a de!ada! ;id!oca!bu!o$ de!i"ado$ del
&et!leo a bajas temperaturas.
Para obtener una informacin objetiva, se ha utilizado una combinacin de tcnicas clsicas de
cultivo en medio de laboratorio y de tcnicas de biologa molecular independientes de cultivo,
basadas en el anlisis del ADNr 16S (reaccin en cadena de la polimerasa, PCR; anlisis de la
longitud de los fragmentos de restriccin, RFLP; anlisis de la longitud de los fragmentos de
restriccin terminales, T-RFLPs; hibridacin "in situ fluorescente FSH; electroforesis en gradiente
de desnaturalizacin, DGGE; principalmente).
La mayora de las bacterias aisladas son psicrotrofas y pertenecen a los gneros ?)odococcus,
Art)ro,acter, 6acillus, *seudomonas, &porosarcina y Alcaligenes. Esto contrasta con la diversidad
detectada mediante el anlisis de las genotecas, dondela mayora de las bacterias presentan
homologas con bacterias no cultivadas hasta el momento, lo que da una idea de la gran diversidad
bacteriana de estas muestras. Mediante la aplicacin de FSH hemos comprobado que los
microorganismos del Domino Arquea, aunque presentes, lo estn en menor proporcin que los del
Dominio Bacteria, lo que contrasta con la notable abundancia de esos microorganismos en aguas
antrticas marinas.
Los experimentos de enriquecimiento en crudo de petrleo y diesel han mostrado la presencia en
estos suelos, de bacterias con capacidad para degradar hidrocarburos a baja temperatura (12 C),
por lo que estas bacterias son potencialmente susceptibles de ser utilizadas en tcnicas de
biorremediacin "in situ. Mediante la tincin con indicadores fluorescentes de actividad bacteriana
y microscopa de barrido lser confocal se observa que las bacterias degradadoras se encuentran
mayoritariamente activas y que se sitan tanto dentro como fuera de las gotas de petrleo.
BIBLIOGRA>A8
Baraniecki C.A., Aislabie J. and Foght J.M. (2002). Microb. Ecol. 43: 44-54.
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Vincent W.F. (2000). Antarc. Sci. 12: 374-385.

.11
E - 450
+ue$ta a &unto y e$tudio de efecto$ muta'nico$ de lo$ ae!o$ole$
&!oducido$ &o! la de!adacin de lo$ com&ue$to$ o!#nico$ en la
atm$fe!a%
1
de Benito Armas,A. ,
2
Martn Reviejo, M.,
1
Toms Forns, D.,
1
Monz-Sanchez
JL y
2
Wirtz, K.
1
ainia, *arIue 7ecnol;gico de Valencia, *aterna BValenciaC '
.
!EA+ !entro de Estudios
Am,ientales del +editerraneo, *arIue 7ecnol;gico de Valencia, *aterna BValenciaC.
Ma,enito%ainia.es
En el presente estudio se ha evaluado el efecto mutagnico mediante el test de
Ames de aerosoles obtenidos por la degradacin de los compuestos orgnicos
en la atmsfera (benceno y tolueno), en reacciones generadas en un reactor
fotoqumico de la Fundacin CEAM (Centro de estudios Ambientales del
Mediterraneo).
La deteccin de compuestos carcinognicos y mutagnicos mediante el uso de
cepas de Salmonella fue descrito por Bruce N. Ames en 1975 y consiste en el
estudio de la reversin de una mutacin en el opern de la histidina de cepas
de &almonella t'p)imurium al ser expuesta al agente mutagnico. Las cepas
utilizadas en este estudio se utilizan para la deteccin de mutaciones por la
sustitucin de un nucletido (cepa TA100) y las que provocan el
desplazamiento de una secuencia genmica (cepa TA98). En todos los
ensayos realizados se estudi el efecto de la metabolizacin sobre las
partculas, utilizando la fraccin microsomal S9.
Los aerosoles obtenidos en las reacciones de degradacin del fotoreactor
fueron captados y concentrados en un soporte slido (filtro de cuarzo de
47mm) sobre el que se realizaron diversos tipos de extraccin para su anlisis
de caracterizacin qumica mediante cromatografa gases masas (GC-MS) y
ensayos de mutageneidad.
Junto con estas muestras se han evaluado el efecto de partculas presentes en
el aire en muestras ambientales y tomadas dos estaciones distintas.
Los resultados obtenidos han mostrado que concentraciones elevadas de
partculas procedentes de la fotooxidacin del tolueno en las experiencias
realizadas en el fotoreactor han producido resultados positivos de
mutageneidad, con tasas de reversin 6 veces superiores a la obtenida en la
reversin espontnea. Los ensayos preliminares parecen demostrar que la
mutageneidad est asociada a las partculas atrapadas en los filtros y no a los
compuestos voltiles.
En la evaluacin de las partculas procedentes de aire filtrado del ambiente
exterior se obtuvieron efectos mutagnicos de mayor magnitud en las muestras
tomadas los meses de invierno (tasas de reversin entre 6 y 15 veces
superiores al control) en comparacin con las tomadas en el periodo estival
(hasta 2,5 veces la reversin espontnea), siendo este resultado debido
probablemente al aumento en periodos fros de hidrocarburos aromticos
policclicos procedentes de la combustin incompleta de varios compuestos
(gasolina, gas natural).
+icro,iolog-a +edioam,iental .1.
MICOLOGA
F - 10
Ca!acte!,$tica$ de la$ ce&a$ f(nica$ del 'ne!o 6richo$erma9 ai$lada$ en
la !ein del 4ola de la >ede!acin Ru$a%
Cabrera, F. H. A., Tuxbatova, R. ., Karimova, L., Rafailova, E., Shishkin, A.,
Alimova, F. K.
Pa$an &tate Universit', Facult' o# 6iolog' and &oil, (epartment o# +icro,iolog'. 18 Preml'ovsOa'a
str., Pa$an, ?epu,lic o# 7atarstan, ?ussian Federation. 4.0008. E/mail0
alexca#u3001%'a)oo.com.mx
Las cepas fngicas del gnero 7ric)oderma se encuentran ampliamente
distribuidas, prcticamente en todos los climas del mundo, contando con
capacidades de crecimiento en diferentes substratos; restos vegetativos y
madera degradada, asimismo, se localiza con mayor frecuencia en la tierra.
Las especies del gnero 7ric)oderma tienen aplicacin en muchas reas de las
actividades humanas. Del resultado de su metabolismo se obtiene un complejo
de diferentes enzimas hidrolticas de gran importancia para la industria, al igual
que estimulan el crecimiento de las plantas y sus mecanismos de defensa,
produciendo antibiticos, por lo cual tienen un gran valor agrcola al ejercer el
biocontrol de hongos fitopatgenos. En los ltimos aos en la Federacin Rusa
se ha estudiado la distribucin de las especies del gnero 7ric)oderma en sus
diferentes regiones, con excepcin de la regin del Volga. En el 2000
Aleksandrova A. V. document el aislamiento de ms de 200 especies de
7ric)oderma y 3 cepas de H'pocrea en diferentes regiones de la Federacin
Rusa. El presente trabajo tuvo como objetivo aislar las cepas fngicas del
gnero 7ric)oderma de la tierra, en la regin del Volga de la Federacin Rusa y
estudiar sus caractersticas morfolgicas, gentico-moleculares y cintica de
crecimiento. Se aislaron ms de 150 cepas de 7ric)oderma en diferentes
nichos ecolgicos, asi como una cepa de H'pocrea lixii. Segn las
caractersticas morfolgicas y utilizando los mtodos de identificacin de
Samuels, Chaverri, Bisset y el programa de soporte informtico, desarrollado
para la identificacin fenotpica de las especies de 7ric)oderma por el M. C.
Tarasov D. S., en el departamento de bioqumica de la Universidad Estatal de
Kazan - Federacin Rusa, se lleg a la conclusin de que con mayor frecuencia
se aislaron las siguientes especies: 7r. )ar$ianum, 7r. Ooningii, 7r. asperellum,
7r. citrinoviride, 7r. atroviride, 7r. o,longisporum, 7r. &pirale, 7r.
longi,rac)iatum. El anlisis gentico-molecular de las cepas, utilizando el
mtodo RAPD-PCR con cebadores oligonucleotdicos para TS (nternal
Transcribed Spacer) y para el gen de endogluconasa, ha permitido diferenciar
las especies y corroborar los resultados obtenidos segn las caractersticas
morfolgicas. Por cintica de crecimiento, se dividieron en tres clases: de
rpido crecimiento (7r. longi,rac)iatum, 7r. )ar$ianum, 7r. atroviride),velocidad
media de crecimiento (7r. Ooningii, 7r. asperellum, 7r. citrinoviride) y de lento
crecimiento (7r. o,longisporum, 7r. spirale).

Palabras claves: 7ric)oderma, caractersticas morfolgicas, anlisis gentico-
molecular, cintica de crecimiento.
+icolog-a .13
+icolog-a .16
F - 56
Toll=LiHe Rece&to! B=defecti"e mice ca!!yin &oint o! null mutation$ do
not $;oT inc!ea$ed $u$ce&tibility to 'an$i$a albicans infection$
Murciano C.
*
,

Villamn E.
*
, Gozalbo D.
*
, Roig P.
*
, OConnor J.E.
**
,

and Gil M.L.
*
BMC (epartamento de +icro,iolog-a ' Ecolog-a, Universitat de ValKncia, !< (r. +oliner 30, 46100
6ur=assot, &painF e/mail0celia.murciano%uv.es. BMMC >a,oratorio de !it;mica, !entro de
1nvestigaci;n ^*rincipe Felipe^/Universitat de ValKncia, Valencia, &pain.
!andida al,icans is the most frequent etiologic agent that causes opportunistic
fungal infections so called candidiasis, whose incidence is increasing as a result
of an expanding immunocompromised population. Resistance to candidiasis
requires the coordinated action of innate and adaptive immune defenses. Toll-
like receptors (TLRs) are a family of evolutionarily conserved transmembrane
proteins that function as sensors of infection that induce the activation of innate
immune responses by recognizing specific patterns of microbial components,
and are also regulators of adaptive immune responses [1]. Although there is
evidence indicating that TLR2 and TLR4 participate in murine defenses against
!. al,icans infections, conflicting results have been reported [2,3].
n this work we have studied the role of TLR4 in murine defenses against !.
al,icans in two TLR4-defective mouse strains: C3H/HeJ mice which have
defective TLR4 signaling, and TLR4-/- knockout mice. Both TLR4-defective
mice strains experimentally infected with virulent !. al,icans cells showed no
significant difference in survival as compared with their respective controls.
Recruitment of neutrophils to the peritoneal cavity of i.p. infected mice was not
affected in TLR4-/- animals, but significantly enhanced in C3H/HeJ mice,
compared with their control mice. 1n vitro production of TNF- by macrophages
from both types of TLR4-defective mice, in response to yeasts and hyphae of
!. al,icans, was not diminished as compared with production by macrophages
from wild-type mice. 1n vitro production of TNF- by yeast-stimulated
splenocytes from mice intravenously infected with the low-virulence !. al,icans
PCA2 strain was not affected in TLR4-defective mice, but the TNF- production
in response to hyphae was higher in TLR4-defective than in control animals; the
production of FN- by these splenocytes was similar to controls, as well as the
frequency of FN--producing CD4+ T lymphocytes, indicating that TLR4-
defective mice are capable of mounting a Th1 adaptive immune response. Our
data indicate that TLR4 is dispensable for murine immune resistance to !.
al,icans.

[1] Takeda K, Kaisho T, Akira S. Annu ?ev 1mmunol 2003; .?: 335.
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Supported by Grants P03/0647 (Ministerio de Sanidad y Consumo), and
GV4B-075 and grupos 03-172 (Generalitat Valenciana), Spain.

+icolog-a .1
+icolog-a .18
F - 117
An#li$i$ molecula! de la e$t!uctu!a de $e&tina$ en 'an$i$a albicans%
Gonzlez-Novo, A; Jimnez, A
1
; Snchez, M y Jimnez, J.
(epartamento de +icro,iolog-a ' 4en5tica. 1nstituto de +icro,iolog-a 6ioIu-mica. Universidad de
&alamanca<!&1!. Avda (octores de la ?eina &<:. 300 &alamanca.
1
(epartamento de +edicina.
Facultad de +edicina. Universidad de &alamanca. !orreo electr;nico0 anovo%usal.es
La generacin de herramientas moleculares, ha permitido un gran avance en el
estudio de !andida al,icans. Este es un hongo patgeno oportunista de
humanos en condiciones de inmunosupresin, y cuya caracterstica ms
destacada es la capacidad que presenta de adoptar diversas morfologas,
peculiaridad que est muy relacionada con su capacidad virulenta. En este
sentido, existe una familia de protenas, denominadas septinas, que estn
implicadas en la morfognesis fngica. En !. al,icans se han identificado 7
genes que codifican para septinas. El producto de cinco de estos genes, las
protenas Cdc3, Cdc10, Cdc11, Cdc12 y Shs1, se ensamblan en el cuello entre
la clula madre y la hija en una estructura en forma de anillo. Este anillo sigue
una dinmica caracterstica en levaduras y en pseudohifas. La dinmica y
localizacin de las septinas sufren pequeas variaciones cuando las clulas
acometen la formacin de hifas. Por esto, decidimos estudiar la estructura de
septinas de !. al,icans a nivel molecular, con objeto de determinar
interacciones entre diferentes elementos de dicha estructura, as como
comprobar si se produce alguna variacin en la misma de forma coordinada
con los diferentes patrones morfogenticos. Los datos obtenidos mediante
localizaciones de diferentes elementos tanto en clulas silvestres como en
diversos mutantes, nos ha permitido comprobar que existe una jerarqua en la
formacin de esta estructura, al igual que ocurre en &. cerevisiae, y que
adems es necesaria la presencia de todas las septinas. As mismo, hemos
comprobado que durante la formacin de hifas se produce una modificacin en
la septina Shs1, lo que posiblemente altera la estructura general del anillo de
septinas. Esto nos hace pensar que esta modificacin est relacionada con el
control morfogentico de las hifas de !. al,icans, puesto que dicha
modificacin es independiente del ciclo celular, lo que supone una notable
diferencia con la levadura modelo &. cerevisiae.
+icolog-a .19
F - 149
Gene$ 7hite*collar de 1ucor circinelloi$es y !eulacin de la e-&!e$in
'nica &o! la lu)%
Silva, F., Torres-Martnez, S. y Garre, V.
(epartamento de 4en5tica ' +icro,iolog-a. Facultad de 6iolog-a. Universidad de +urcia. 3001
+urcia. &pain. vgarre%um.es
El hongo +ucor circinelloides, perteneciente a la clase Zygomycetes, responde
a la luz incrementando la acumulacin de carotenos. Esta respuesta se ha
estudiado, en los ltimos aos, con el objetivo de caracterizar los mecanismos
moleculares por los que la luz regula la expresin gnica en este grupo de
hongos. Este trabajo ha permitido la identificacin y clonacin del gen crgA,
que acta como un represor de la sntesis de carotenos. La secuencia de
aminocidos de la protena CrgA sugiere que se trata de una ligasa de
ubiquitina, que podra ejercer su funcin a travs del control de los niveles de
otras protenas reguladoras con capacidad de unin a regiones controladoras
de los genes regulados por la luz. Distintas aproximaciones experimentales han
tratado de identificar dichos genes reguladores y el trabajo que se presenta
describe la clonacin de tres genes de +. circinelloides (mAc/1a, mAc/1, y
mAc/1c) que cifran protenas con una elevada homologa al gen A)ite collar/1
de :. crassa (Ac/1), el cual controla todas las respuestas a la luz en este
ascomiceto. Las secuencias de aminocidos de las tres protenas Mwc-1
presentan los mismos dominios funcionales (LOV, PAS, localizacin nuclear y
dominio de unin a GATA) que la protena WC-1 de :. crassa, sugiriendo que
podran participar en la regulacin de la expresin gnica por la luz. No
obstante, la expresin de los tres genes es distinta: los genes mAc/1a y mAc/
1, se expresan constitutivamente, mientras que la expresin del gen mAc/1c
es inducida por la luz, al igual que la del gen de :. crassa.
Se han generado mutantes para cada uno de los genes mAc/1, mediante
disrupcin gnica, con el objetivo de determinar si estn implicados en la
regulacin por la luz y, en caso afirmativo, caracterizar las respuestas
controladas por cada gen. Los mutantes en los genes mAc/1a y mAc/1,
muestran una induccin silvestre de la sntesis de carotenos por la luz,
mientras que los mutantes en el gen mAc/1c son incapaces de inducir la
sntesis de carotenos en respuesta a la luz. Estos resultados indican que el gen
mAc/1c es el nico implicado en el control de la induccin de la sntesis de
carotenos por la luz en +. circinelloides. El anlisis en los mutantes en mAc/1a
y mAc/1, de la expresin de genes regulados por la luz, pero no implicados en
la sntesis de carotenos, permitir determinar si existen varias rutas de
regulacin de la expresin gnica por la luz en este hongo. Esta sera una
situacin diferente a la de :. crassa, donde se ha identificado una nica ruta, lo
que acrecienta el inters por el estudio de la regulacin de la expresin gnica
por la luz en +. circinelloides.
+icolog-a ..0
F - 164
4alidacin mediante e$tudio$ de infecti"idad del $i$tema de
t!an$fo!macin pyr.8pyr*# como ;e!!amienta &a!a la identificacin de
facto!e$ de "i!ulencia de !spergillus fumigatus
Olivas
1
, Royuela M
2
, Laborda F
1
, De Lucas JR
1
B1C (epartamento de +icro,iolog-a ' *arasitolog-a B.C (epartamento de 6iolog-a !elular '
4en5tica. !ampus Universitario. Universidad de Alcal". .881 Alcal" de Henares. +A(?1(. e/mail0
=oser.lucas%ua).es
La secuenciacin del genoma de Aspergilllus #umigatus permite abordar
estudios de genmica funcional que conduzcan a la identificacin de molculas
responsables del establecimiento de la aspergilosis invasora. La principal
metodologa empleada en estos anlisis conlleva la delecin del gen candidato
y la demostracin de que la cepa delecionada es parcial o completamente
avirulenta.

A pesar de la disponibilidad y versatilidad de varios marcadores auxotrficos en
A. #umigatus, (por ejemplo p'r4, s!, nia(), los marcadores de transformacin
empleados para identificar posibles factores de virulencia en ensayos de
infectividad son los genes bacterianos que confieren resistencia a higromicina y
fleomicina. Estos genes bacterianos presentan importantes desventajas
respecto a los marcadores auxotrficos, destacando la prdida del marcador en
ausencia de seleccin positiva, la restriccin en el estabilizador osmtico usado
en transformacin o la existencia de un crecimiento residual de la cepa salvaje
que dificulta la identificacin de verdaderos transformantes.

En este trabajo analizamos la validez del sistema de transformacin p'r4/p'r/4
para obtener knock outs en A. #umigatus sin afectar el proceso de virulencia. Se
construy el plasmido pPRG4 que contiene el gen p'r/4 de :. crassa
flanqueado por la regin promotora y terminadora de su homlogo, el gen p'r4
de A. #umigatus. Dicha construccin fue empleada para delecionar el alelo
p'r4
-
de la cepa CEA22 mediante re-emplazamiento gnico, confirmndose
este evento mediante Southern blotting.

Utilizando un modelo murino de infectividad que mimetiza la produccin de
aspergilosis pulmonar invasora en humanos (Smith et al. 1994) se analiz la
infectividad de 3 transformantes p'r4::p'r/4
]
seleccionados comparndose sta
con la de 3 cepas de referencia de A. #umigatus: 293 (cepa empleada en la
secuenciacin del genoma), 237 y ATCC46645. Los resultados obtenidos de
los ensayos de infectividad demuestran que los 3 transformantes seleccionados
son tan virulentos como las 3 cepas de referencia testadas. Adicionalmente, la
realizacin de cortes histolgicos de pulmones infectados y su tincin con
plata-metenamina-hematoxilina demuestra similares patrones de colonizacin
del parnquima pulmonar en todas las cepas virulentas.
+icolog-a ..1
F - 212
Ca&acidad de la de!adacin de oc;!ato-ina A &o! accin de aceite$
e$enciale$
Shiva, C., Adelantado, C., Arosemena, L. y Calvo, MA.
6arcelona. 08193 6ellaterra B6arcelonaC. !arlos+artin.&)iva%ua,.es
Uno de los problemas que se plantean en seguridad alimentaria es la presencia
y acumulacin de micotoxinas, concretamente ochratoxina A en productos
destinados al consumo humano y/o animal. En la presente comunicacin se
aportan los resultados obtenidos al adicionar aceites esenciales procedentes
de plantas de la familia ?utaceae a sustratos en los que se desarrollaban
cepas fngicas fuertemente productoras de ochratoxina A.

La metodologa utilizada se basa en facilitar el desarrollo de Aspergillus
oc)raceus ATCC 22947, potente productor de ochratoxina A en un sustrato de
arroz previamente esterilizado. A partir de los matraces inoculados con la cepa
se procedi a separar lotes con el fin de mantener cultivos control frente a
aquellos a los que se adicionaba el extracto de rutceas a concentraciones
crecientes desde 400 hasta 2000 ppm. Transcurridos siete y catorce das
desde iniciado el cultivo se realiz el recuento de UFC/g as como la extraccin
y deteccin de la posibles micotoxinas. Para la deteccin de micotoxinas se
realiz por cromatografa en capa fina y por mtodo ELSA.

Como resultado podemos indicar que se observa una clara disminucin en la
produccin de ochratoxina A en presencia de extractos de rutceas si bien no
siempre se corresponde con una disminucin en la concentracin de UFC/g.
+icolog-a ...
F - 264
Nut!itional "alue of &!otein f!om "eetati"e mycelia of edible mu$;!oom
Pleurotus ostreatus
Parada Albarracin, J.A.
1
, Urdaneta, E.
2
, Marzo, F.
2
, Ramrez, L.
2
y Pisabarro de
Lucas, A.G.
2
1
Agrarian *roduction (epartment and Environmental &cience (epartment. *u,lic Universit' o#
:avarra E/ 31006 *amplona E &pain and Universit' o# *amplona E !olom,ia, e/mail0
=ulianparada%'a)oo.com
Protein represents an essential part of our daily nutrient intake; wich has to
cover our requirements for growth, maintenance and metabolic activity of cells
and organs during all stages of life (1). The use of fungi as food is not new.
Higher fungi, know as mushrooms, have been used as food flavouring for
centuries. Early man picked wild mushrooms from natural habitats, largely as a
supplement to an otherwise monotonous diet, but probably did no use
mushrooms as a primary source of protein. *leurotus ostreatus (oyster
mushroom) is an edible basidiomycete, is a wood destroying saprophytic
fungus. This fungus present an increase of biotechnological interest due to
chemicals related to lignin degradation products, and to produce secondary
metabolites with pharmaceutical applications and some proteins of industrial
potential.

The present work was designed to study the effects of supplementation a
control diet with *leurotus ostreatus mycelium for evaluation a nutritional value
of mycoprotein and possible cholesterol lowering.

Forty-four male Wistar rats were divided into six groups that were fed during
thirty-one days with diets supplemented with 2,5% and 5% *. ostreatus mycelia
and/or 1% cholesterol (Control; C + M 2,5%; C + M 5%; C + Ch 1%; C + M
2,5% + 1% Ch; C + M 5% + 1% Ch) respectively. All the diets were isoenergetic
and isonitrogenous and meet the requirements of growing animals (AN-93).
Body weight, food and water intake, faecal and urine excreted were registered
daily, after decapitation fresh weight of main organs were registered and
parameter haematics were analysed. An inter laboratory study involving all
nutritional parameters were carried out.

No differences in food intake, final body weight, weight gain, and daily weight
gain were founded among the six groups. Significantly different (P<0.05) were
founded into C + M 5% group compared with control group in Body Growth
ndex (BG).

To finish this study, we will carry out the analysis of the others nutritional and
haematics parameters that we are interested.
+icolog-a ..3
F - 270
En)ima$ lininol,tica$ &!oducida$ &o! nue"o$ ba$idiomiceto$ ai$lado$ en
la Sie!!a de Aylln ca&ace$ de de!ada! colo!ante$ indu$t!iale$
Barrasa, J.M.
1
, Martnez, A.T.
2
y Martnez, M.J.
2
1
(epartamento de 6iolog-a Vegetal, Universidad de Alcal", Alcal" de Henares, E/.881, +adrid.
.
!entro de 1nvestigaciones 6iol;gicas, !&1!, ?amiro de +ae$tu 9, .8040 +adrid, Be/mail0
m=martine$%ci,.csic.esC
Los basidiomicetos de podredumbre blanca producen oxidoreductasas
extracelulares, incluyendo lacasas, peroxidasas, y oxidasas productoras de
H
2
O
2
. Estas enzimas, adems de estar implicadas en la degradacin de la
lignina, tienen inters en la degradacin de otros compuestos aromticos que
producen problemas de contaminacin ambiental, entre los que se encuentran
muchos colorantes que se utilizan en la industria textil. Sin embargo, no todos
los basidiomicetos producen las mismas enzimas, y stas pueden tener
caractersticas diferentes. As, dependiendo de su potencial redox, pueden o no
oxidar los compuestos aromticos contaminantes de suelos y aguas. Esta gran
variabilidad enzimtica puede depender principalmente, no slo de las especies
estudiadas, sino tambin de las condiciones de cultivo empleadas.
Los hongos utilizados en este estudio son basidiomicetos poco conocidos
desde el punto de vista de su sistema enzimtico. Se aislaron a partir de
cuerpos fructferos crecidos sobre madera degradada en condiciones naturales
en la Sierra de Aylln (Sistema Central). Una vez aislados en placas de agar
malta se identificaron en base a caracteres morfolgicos y se llev a cabo un
test de decoloracin en placa en presencia de 2 colorantes sintticos: Reactive
Back 5 y Ractive Bue 38. De los 30 basidiomicetos aislados slo 12 fueron
capaces de crecer en presencia de los dos colorantes y slo 3 de ellos
(!alocera cornea, *ol'porus alveolaris y >op)aria spadicea) decoloraron
eficientemente los dos colorantes ensayados a diferentes concentraciones (75
y 150 mg/L). Es este trabajo se estudia la produccin de las enzimas
extracelulares secretadas por estos hongos en cultivos en agitacin (180 rpm y
28
o
C), utilizando un medio basal con glucosa como fuente de carbono y
diferentes inductores: Cu
2+
y

etanol (para las lacasas) y Mn
2+
y alcohol
veratrlico (para peroxidasas). !. cornea produjo, principalmente, actividad
peroxidasa dependiente de Mn
2+
en los cultivos suplementados con Mn
2+
,
siendo la lacasa una actividad minoritaria que no se indujo por la presencia de
Cu
2+
ni Cu
2+
-etanol. Similar patrn enzimtico fue encontrado en >. spadicea,
aunque en este hongo se detectaron niveles similares de actividad peroxidasa
dependiente de Mn
2+
tanto en presencia como en ausencia de Mn
2+
. *.
alveolarisprodujo peroxidasa dependiente de Mn
2+
, slo en presencia de este
in en los cultivos, y tambin elevada actividad lacasa en presencia de Cu
2+
-
etanol. Dado que los tres hongos degradaron los colorantes ensayados y
mostraron distintos sistemas enzimticos, se pretende purificar y caracterizar
estas enzimas, contrastar su eficacia con otras previamente descritas y
comprobar si representan nuevas alternativas para la degradacin de
colorantes textiles u otras aplicaciones medioambientales.
+icolog-a ..4
F - 278
Ai$lamiento e identificacin de Sporothrix schenc&ii a &a!ti! de $uelo y
&lanta$ de $ei$ munici&io$ del e$tado de +uebla M'-ico%
Espinosa Texis AP, Ramrez Gaona AY, Hernndez Hernndez F.
!entro de 1nvestigaciones en !iencias +icro,iol;gicas, posgrado en +icro,iolog-a, 1nstituto de
!iencias, 6enem5rita Universidad Aut;noma de *ue,la. Facultad de +edicina U:A+. Apartado
*ostal d 16.., *ue,la, +5xico. espinosatex%'a)oo.com
La esporotricosis se presenta con gran frecuencia en la Repblica Mexicana,
ocupando el estado de Puebla el tercer lugar de incidencia. El agente etiolgico
de esta micosis &porot)rix sc)encOii habita suelo y plantas que son la principal
fuente de infeccin para el humano. Estudios previos muestran que existen
zonas endmicas de esta micosis en la sierra norte del estado de Puebla, por
tal motivo los objetivos del presente trabajo tuvieron como finalidad determinar
la distribucin de &porot)rix sc)encOii en el estado de Puebla y realizar la
identificacin de los aislados fngicos mediante morfologa macroscpica y
microscpica tanto de la fase micelial como levaduriforme y secuenciacin del
dominio D1/D2 del gen 26S rDNA de la fase micelial.
Por las tcnicas convencionales fueron identificados 9 aislados de &porot)rix
sc)encOii del municipio de Atlixco (8 de suelo y 1 de planta); 3 de zcar de
Matamoros (1 de suelo y 2 de plantas); 1 aislado de Tecamachalco a partir de
suelo; de Tehuacn se aisl 1 de suelo; de Tepexi de Rodrguez 1 a partir de
planta y 1 en la ciudad de Puebla a partir de planta. La amplificacin y
secuenciacin del dominio D1/D2 del gen 26S rDNA de los aislados confirm la
identificacin de 13 de 16 aislados de &porot)rix sc)encOii , 2 Endom'ces
scopularum y 1 Dp)iostoma spp.
La mayor frecuencia de aislamientos de &porot)rix sc)encOii se obtuvo de
suelo. La morfologa macroscpica y microscpica que presentan Endom'ces
scopularum ' Dp)iostoma spp. es parecida a la que presenta &porot)rix
sc)encOii de los aislados provenientes de fuentes naturales, por lo que la
realizacin de tcnicas moleculares como la secuenciacin del dominio D1/D2
del gen 26S rDNA es herramienta que permite confirmar la identificacin.
Agradecimientos:
Financiado por Vicerrectora de nvestigacin y Estudios de Posgrado, BUAP.
Proyecto V 20-04/Nat/G.
+icolog-a ..3
F - 350
Influencia del &e!iodo de &o$tco$ec;a en la acumulacin de &atulina en
man)ana Golden
Morales, H., Marn S., Ramos A.J., Sanchis V.
(epartamento de 7ecnolog-a de Alimentos, !e?7A, Universidad de >leida, ?ovira ?oure, 191,
.3198 >leida
Patulina, una -lactona ,-insaturada es un metabolito secundario txico
producido principalmente por especies del gnero *enicillium. En el caso de
manzanas y peras la especie involucrada en la contaminacin por esta
micotoxina es *enicillium expansum. La infeccin de la fruta por parte de este
hongo se da principalmente en las cmaras frigorficas de las centrales
hortofrutcolas.
En el presente estudio se determin la alteracin de manzanas de la variedad
Golden inoculadas con *enicillium expansum y la acumulacin de toxina. Para
ello se realiz un diseo factorial cruzado en el que los factores ensayados
fueron madurez, tratamiento fungicida (imazalil+folpet), tiempo de permanencia
en cmara (30 y 45 das) a 1C en atmsfera normal, tiempo a 20C a la salida
de cmara y cepas inoculadas. Los diferentes tratamientos se hicieron por
triplicado, adems de una prueba control en la que se inocul agua estril,
resultando un total de 573 manzanas analizadas.
Transcurrido el tiempo en cmara se procedi a la medida de la podredumbre y
a la determinacin del contenido en patulina de la mitad de las manzanas
siguiendo el mtodo de la AOAC. El resto fueron almacenadas a 20C durante
tres das reproduciendo as las condiciones en que se encuentran las
manzanas una vez han salido de la cmara y antes de ser procesadas.
Transcurrido este tiempo, se determinaron los parmetros anteriormente
mencionados.
El crecimiento observado dependi significativamente del estado de madurez
de las manzanas ensayadas, siendo el lote maduro ms susceptible a la
alteracin. En ambos lotes se observ mayor alteracin en las manzanas
almacenadas ms tiempo en cmara y en aquellas que se mantuvieron 3 das
a 20C. Sin embargo, el tratamiento fungicida en prealmacenamiento result
ms efectivo en su aplicacin en manzanas con un grado de madurez mayor.
Con respecto a la acumulacin de patulina, sta no se produjo durante todo el
periodo de almacenamiento en fro independientemente del grado de madurez
y el tratamiento fungicida. Las manzanas mantenidas a 20C durante tres das
presentaban niveles similares de patulina independientemente del tratamiento
fungicida y del tiempo que estuvieron en cmara a 1C.
El almacenamiento en fro en postcosecha es totalmente eficaz en la
prevencin de la acumulacin de patulina aunque no en la prevencin de la
podredumbre azul. An as, perodos cortos de tiempo de espera previos al
procesamiento pueden conducir a una rpida acumulacin de patulina en esta
materia prima. La reduccin del tiempo de espera en las industrias
procesadoras de manzanas es una medida preventiva que ayudara a reducir el
contenido de patulina en el zumo de manzana.
+icolog-a ..6
F - 362
Ca!acte!i)acin del en de la laca$a de Phanerochaete flavi$o*alba
Rodrguez Rincn, F.
1
, Suarez, A.
2
, Lucas, M., de la Rubia T., Martinez J.
1
Universidad de *amplona B!olom,iaCF (epartamento de +icro,iolog-a,
.
(epartamento de
6ioIu-mica ' 6iolog-a +olecular. Facultad de Farmacia, !ampus de !artu=a, Universidad de
4ranada, 1801 4ranada, &pain
*)aneroc)aete c)r'sosporium es el hongo ligninoltico mejor conocido y su
genoma est secuenciado. En contraste con la mayoria de hongos ligninoliticos
no se han detectado genes de lacasas en este hongo. En su lugar se han
encontrado cuatro genes (mco1, mco2, mco3, mco4) que codifican para
oxidasas multicobre (Mcos). Las secuencias de las Mcos de *. c)r'sosporium
conservan analogas con lacasas pero son mas semejantes alas ferroxidasas
fngicas (1,2). Solamente se ha caracterizado enzimaticamente una de las Mco
(la Mco1) de *. c)r'ssoporium, que posee una fuerte actividad ferroxidasa
(oxidacin de Fe a Fe). *)aneroc)aete #lavido/al,a es tambin ligninoltico,
y desde hace aos sele reconoce la produccin de una lacasa peculiar. Tiene
menor eficacia que la Mco1 para oxidar el Fe, y posee un rango de sustratos
mas propio de lacasas que de ferroxidasas (3).La presente comunicacin
resume la caracterizacin del gen de la lacasa de *. #lavido/al,a (unas 4.5 kb).
Esta secuencia se ha caracterizado a partir de cebadores deducidos de
secuencias conservadas en las lacasas fngicas. La secuencia gnica obtenida
present mayor identidad con los genes mcode *. c)r'sosporium que con
genes de lacasas. Los pptidos identificados en la lacasa de *. #lavido/al,a
purificada son idnticos a los deducidos delmRNA, por lo que se concluye que
la secuencia caracterizada corresponde al gen de la lacasa de *. #lavido/al,a .

A!adecimiento$
Los resultados han sido obtenidos con financiacin procedente de la UE
(contrato UE CA3CT2002-10033 ) y del Plan Andaluz de nvestigacin
(proyecto "Mejoras en el compostaje de alpeorujo)
Refe!encia$
1-Larrondo, L.F.; Gonzalez, B.; Cullen, D.; Vicuna, R. 2004.Microbiology 150:
2775-2783.
2-Larrondo, L. F.; Salas, L.; Melo, F.; Vicuna, R.; Cullen, D. 2003. Appl.
Environ. Microbiol. 69: 6257-6263.
3-M. Lucas, M; de la Rubia,T;Larrondo, L.F; Martnez, J. 2005. COST E23
Action.: Conference on Biotechnology for Pulp and Paper Manufacture.
Abstracts pp 91-92 Baiona. Spain . April 26-29
+icolog-a ..
F - 385
E$tudio de la funcin del e-t!emo C=te!minal no catal,tico de la MA+M Slt.
de Saccharomyces cerevisiae
Cosano C, Palacios L, Molina M, Martn H.
(epartamento de +icro,iolog-a 11. Facultad de Farmacia. Universidad !omplutense. .8040/+adrid.
E/mail0 icosano%#arm.ucm.es
Gracias a su capacidad para modular la funcin de factores de transcripcin,
las MAP quinasas (MAPKs) son elementos esenciales en la regulacin de la
expresin gnica en respuesta a distintos estmulos en microorganismos
eucariticos. Recientemente se ha comprobado que algunas MAPKs reclutan al
complejo de la RNA polimerasa a determinados promotores, actuando ellas
mismas como factores de transcripcin. Slt2 presenta un dominio carboxi-
terminal no cataltico y no conservado en eucariotas superiores, que porta una
secuencia de 16 glutaminas consecutivas. Dicha regin es capaz de actuar
como activador transcripcional cuando se fusiona al dominio de unin a DNA
de factores de transcripcin (Soler et al 1995). Todo ello sugiere que Slt2
podra llevar a cabo funciones directas de activacin transcripcional.
Hasta el momento se han identificado dos factores de transcripcin, Rlm1 y el
heterodmero Swi4/Swi6, a travs de los cuales la ruta de integridad celular
modula la expresin de un gran nmero de genes. Con el fin de estudiar si Slt2,
mediante su extremo C-terminal, activa de una manera directa la transcripcin
de genes regulados por estas protenas, se han construido una serie de
versiones mutantes de Slt2 carentes de distintas zonas del extremo C-terminal.
Mediante estudios de PCR cuantitativa hemos comprobado que la ausencia de
esta regin no modifica ni la capacidad ni la intensidad con la que Slt2 modula
la transcripcin de genes regulados por Rlm1. Asimismo, no tiene ningn efecto
sobre el nivel de activacin de Rlm1. De forma concordante, los ensayos de
inmunoprecipitacin de cromatina realizados no han detectado unin de esta
MAPK a las regiones promotoras de genes regulados por Rlm1. Sin embargo,
experimentos preliminares indican que la ausencia de esta regin C-terminal de
Slt2 conduce a cambios en la expresin de genes regulados por Slt2 va
Swi4/Swi6. Los mecanismos moleculares que subyacen en este fenmeno
estn siendo investigados. Asimismo, se presentarn distintas evidencias que
sugieren funciones adicionales de esta regin, caracterstica de Slt2, en la
fisiologa de la levadura.

Soler, M., Plovins, A., Martn, H., Molina, M., y Nombela, C., 1995.
Characterization of domains in the yeast MAP kinase Slt2 (Mpk1) required for
functional activity and in vivo interaction with protein kinases Mkk1 and Mkk2.
Mol. Microbiol. 17: 833-842
+icolog-a ..8
F - 387
Reulacin de la $e6ali)acin ",a MA+M$ en Saccharomyces cerevisiae
&o! la fo$fata$a de e$&ecificad dual M$@
Flndez M, Marn MJ, Bermejo C, Nombela C, Martn H, Molina M.
(epartamento de +icro,iolog-a 11. Facultad de Farmacia. Universidad !omplutense. .8040/+adrid.
&pain. E/mail0 m=marinc%#arm.ucm.es
Las rutas de transduccin de seales mediadas por MAP quinasas (MAPKs)
son esenciales en la fisiologa de las clulas eucariticas. Uno de los
principales puntos de control en estas rutas son las propias MAPKs. En ellas
convergen tanto quinasas activadoras (MAPK quinasas) como reguladores
negativos, las proten fosfatasas. Sern treonn fosfatasas, tirosn fosfatasas y
fosfatasas de especificad dual (DSPs), estas ltimas capaces de eliminar
grupos fosfatos tanto en Ser/Thr como en Tyr, desfosforilan el dominio de
activacin de MAPKs, desactivndolas. Si bien se han identificado diversas
fosfatasas que actan sobre MAPKs en &. cerevisiae, an se desconoce tanto
el impacto real de su accin en la sealizacin como muchos de los
mecanismos moleculares que operan en su regulacin.
La DSP Msg5 regula negativamente a la MAPK Fus3, tanto en condiciones de
crecimiento vegetativo como tras la estimulacin de la ruta de apareamiento.
Asimismo, tambin controla a la MAPK Slt2, que opera en la ruta de integridad
celular. Por ltimo, dado que su sobre-expresin conduce a una disminucin de
los niveles fosfo-Kss1, se supone que tambin debe estar regulando a esta
MAPK. Con el objetivo de valorar la funcin de Msg5 en la sealizacin
mediada por estas MAPKs, se ha estudiado el nivel de estimulacin de estas
rutas a distintos niveles en mutantes msg3. Por una parte, el anlisis mediante
western blotting de la cantidad de fosfo-MAPKs, a la vez que confirma la
funcin de Msg5 en la regulacin de Fus3 y Slt2, descarta un papel significativo
sobre Kss1 tanto en condiciones basales como en diversas situaciones bajo las
cuales Kss1 se activa. El estudio transcriptmico de clulas que carecen de
Msg5 indica su gran influencia sobre la transcripcin de genes regulados por la
ruta de apareamiento. Sorprendentemente, a pesar del elevado nivel de
fosforilacin de Slt2 en mutantes msg3, las diferencias de expresin de genes
regulados por la ruta de integridad celular entre clulas silvestres y msg3 son
relativamente limitadas. En dichos mutantes, el factor de transcripcin Rlm1,
regulado por Slt2, presenta un nivel de induccin transcripcional y de
fosforilacin (activacin) similar al de clulas silvestres.
Junto a ello, hemos profundizado en los mecanismos que regulan la actividad
de Msg5 sobre Fus3 y Slt2. Se mostrar cmo las dos formas producidas de
Msg5 por comienzos de traduccin alternativos (Flndez et al 2004) presentan
distintas especificidades frente a estas MAPKs, lo cual podra configurar un
nuevo mecanismo de regulacin de MAPKs por DSPs.

Flndez, M., Cosano, .C., Nombela, C., Martn, H., and Molina, M. (2004)
Reciprocal regulation between Slt2 MAPK and isoforms of Msg5 dual-specificity
protein phosphatase modulates the yeast cell integrity pathway. 2 6iol !)em
.GI: 11027-11034
+icolog-a ..9
F - 400
E$tudio del facto! de "i!ulencia de E. coli ente!o&atena Ma& mediante
e-&!e$in ;ete!loa en Saccharomyces cerevisiae
Rodrguez-Escudero , Hardwidge PR, Brett Finlay B, Cid VJ y Molina M.
(epartamento de +icro,iolog-a 11, Facultad de Farmacia, Universidad !omplutense de +adrid
E. coli enteropatgena (EPEC) es el agente etiolgico de infecciones
intestinales graves. Esta bacteria se adhiere muy eficazmente a los epiteliocitos
mediante la interaccin de la intimina, una adhesina expuesta en su superficie,
con un receptor especfico producido por la bacteria, Tir, el cual es translocado
a la membrana plasmtica de la clula diana mediante un sistema de secrecin
de tipo . Dicha interaccin resulta esencial para la induccin de las lesiones
generadas por esta bacteria en la zona de adhesin, caracterizadas por un
borrado de las microvellosidades y la aparicin de unas estructuras
denominadas "pedestales, que parecen soportar a la bacteria. Se ha descrito
recientemente que, adems del receptor de la intimina, el sistema de secrecin
de tipo de EPEC transloca una serie de efectores que interfieren con
diversas funciones de la clula eucaritica, alterando su fisiologa y
contribuyendo a la sintomatologa de la infeccin. En nuestro laboratorio,
utilizamos como sistema modelo para el estudio de dichos efectores la levadura
&acc)arom'ces cerevisiae. La expresin de uno de los efectores translocados
de EPEC, Map, inhibe drsticamente el crecimiento de la levadura. Las clulas
de &. cerevisiae que expresan una fusin GST-Map son incapaces de gemar,
exhiben una despolarizacin del citoesqueleto subcortical de actina y de las
estructuras de septinas y acumulan quitina en su pared celular. Adems, la
expresin de GST-Map produce una activacin de las rutas de sealizacin en
las que intervienen las quinasas MAP Slt2 y Kss1. Al igual que ocurre en los
enterocitos, Map se localiza en las mitocondrias de la levadura, como pudimos
comprobar mediante la expresin de una fusin C-terminal de Map a GFP.
Mediante la produccin en levadura de versiones mutantes de esta protena
heterloga, hemos comprobado que los ltimos 15 aminocidos de la
secuencia de Map son esenciales para su toxicidad. Los estudios realizados en
el modelo de levadura pueden proporcionar importantes pautas para la
elucidacin de la funcin de este factor de virulencia durante el proceso
infeccioso.

+icolog-a .30
F - 421
Re$&ue$ta a a!$'nico8 mecani$mo$ de t!an$duccin de $e6ale$ en
le"adu!a%
Rodrguez Gabriel, M. A., Martn, H. y Molina, M.
(epartamento de +icro,iolog-a 11. Facultad de Farmacia. Universidad !omplutense de +adrid.
*la$a ?am;n ' !a=al s<n. +adrid .8040. miguelr%#arm.ucm.es
El arsnico se encuentra en el ambiente como subproducto de actividades
humanas o como componente natural de suelos y aguas. Estudios
epidemiolgicos han demostrado que la ingesta de arsnico est asociada con
un incremento en la aparicin de tumores en humanos. Su toxicidad es
conocida desde la antigedad, pero no as sus mecanismos moleculares de
accin no son del todo conocidos.
Para elucidar los mecanismos bioqumicos de respuesta a arsnico,
estudiamos la toxicidad del arsenito sdico en las levaduras &acc)arom'ces
cerevisiae y &c)i$osacc)arom'ces pom,e. El anlisis del estrs provocado por
arsnico en dos levaduras tan distintas, podra darnos claves sobre
mecanismos conservados de respuesta en organismos eucariotas superiores.
Analizamos la importancia de diferentes protenas involucradas en la
sealizacin mediante rutas MAP quinasa y dedujimos la importancia de cada
una de ellas en la respuesta a arsnico por la sensibilidad a arsnico de cepas
deficientes en cada una de estas actividades.
Adems, estudiamos la activacin de estas rutas de MAP quinasas en
respuesta a arsnico y qu componentes de las rutas eran importantes para
esta sealizacin.
La conservacin de algunos de estos mecanismos entre &. cerevisiae y &.
pom,e demuestra que la respuesta a arsnico puedo haber aparecido
temprano en la evolucin de los eucariotas y, por consiguiente, est
posiblemente conservado en eucariotas superiores.
+icolog-a .31
F - 430
Ai$lamiento e identificacin molecula! de ce&a$ de 'olletotrichum
cau$ante$ de ant!acno$i$ de f!e$a en Andaluc,a Occidental
Garrido, C.; Carb, M.; Fernndez-Acero, F.J.; Quero, P.; Vallejo, .; Cantoral,
J.M.
Facultad de !!. del +ar ' Am,ientales. >a,. +icro,iolog-a. Universidad de !"di$. !ampus *uerto
?eal 11310 !"di$ BEspaLaC. =esusmanuel.cantoral%uca.es
!olletotric)um es uno de los hongos fitopatgenos ms importantes en todo el
mundo debido a las cuantiosas prdidas econmicas que ocasiona en diversos
cultivos como cereales, leguminosas, alfalfa, caf, patatas, pimientos, tomates,
frutales, etc. Tres especies son de especial inters como causantes de
antracnosis en fresa a nivel mundial: !olletotric)um gloeosporioides (Penz)
(teleomorfo 4lomerella cingulata), !. acutatum (Simmonds) (teleomorfo
4lomerella acutata) y !. #ragariae (Brooks). Andaluca es la principal
productora de fresas de toda Europa. Huelva es la mayor zona productora del
mundo y la mayor exportadora de fresa de Europa. En trminos econmicos, la
fresa es el tercer producto andaluz en valor exportado, suponiendo el 6,8% del
total agroalimentario, 322 millones de euros. Slo en la provincia de Huelva se
calcula que las prdidas en el sector de la fresa, debidas mayoritariamente a
los hongos fitopatgenos, pueden alcanzar los 100 millones de euros al ao,
siendo los gneros !olletotric)um y 6otr'tis los ms implicados en estas
prdidas.
Tradicionalmente la clasificacin de !olletotric)um spp. se ha realizado segn
caractersticas morfolgicas, tales como tamao y forma de conidios, forma de
acrvulos, etc., pero debido a la gran plasticidad morfolgica de las especies
de !olletotric)um, y a la existencia de aislados con caractersticas morfolgicas
intermedias entre las tres especies, este mtodo no resulta vlido para
distinguir entre !. acutatum, !. gloeospoioides y !. #ragariae. Las tcnicas
moleculares se han postulado como una herramienta de gran utilidad para
aportar claridad a la sistemtica del gnero !olletotric)um. Los genes
ribosmicos mayores (16S, 18S, 5,8S 22S y 28S) son regiones altamente
conservadas en la mayora de los organismos, en cambio las regiones
espaciadoras internas, TS1 e TS2, son regiones no codificantes y su
secuencia presenta una gran variabilidad. Estas regiones se han utilizado para
el diseo de oligos especficos, que permiten amplificar por PCR secuencias
especficas para la identificacin de gnero, y de las especies !. acutatum y !.
gloeosporioides.
En este estudio se ha realizado un aislamiento de cepas de !olletotric)um en
frutos y plantas de fresa (Fragaria ananassa) con sntomas de antracnosis en
cinco zonas de las provincias de Huelva y Cdiz. Para el aislamiento se ha
utilizado un medio de cultivo semiselectivo para !olletotric)um spp., y se han
identificado cada uno de los aislados mediante PCR, siendo !olletotric)um
acutatum la principal responsable de la antracnosis de fresa en Andaluca
Occidental.
+icolog-a .3.
F - 451
Inte!accion ent!e el mico&atoeno 3erticillium fungicola y $u$
;o$&edado!e$ !garicus bisporus 2 Pleurotus ostreatus en la "e!ticilio$i$
de lo$ culti"o$ come!ciale$ de c;am&i6one$ y $eta$ de o$t!a
Prez Cabo A., Bernardo D. y Garca Mendoza C.
!entro de 1nvestigaciones 6iol;gicas, !&1!, ?amiro de +ae$tu 9, .8040 +adrid
El micoparasitismo verticiliosis de los carpforos de Agaricus ,isporus
(champin) producido por Verticillium #ungicola ha mostrado ser un proceso
complejo formado por sucesivas etapas en donde es necesario que se
produzca el reconocimiento y unin entre molculas complementarias: la
lectina de dichos carpforos con el glucogalactomanano de las paredes
celulares de V. #ungicola. Los carpforos de *leurotus ostreatus (seta de
ostra) manifiestan tambin la verticiliosis y contienen otra lectina por lo que, en
el presente trabajo se comparan las propiedades de ambas lectinas tratando
de confirmar si el reconocimiento y unin entre el glucogalactomanano-lectina
es igualmente el paso necesario en el micoparasitismo de V. #ungicola sobre *.
ostreatus.
La purificacin de la lectina de *. ostreatus fu realizada mediante precipitacin
con sulfato amnico seguida de cromatografas de intercambio aninico y
catinico. La electroforesis disociante (SDS-PAGE) de la lectina purificada
mostr una banda de protena de masa molecular de alrededor de 40 kDa y el
espectro de masa obtenido mediante la tcnica de MALD-TOF revel un pico
de 44270 m/z. Mediante filtracin molecular de la lectina nativa sobre
Sephadex se obtuvo una masa molecular de alrededor de 80 kDa, que junto
con un contenido en carbohidratos de 8,15 % nos llev a concluir que se trata
de una glicoprotena dimrica. La actividad hemaglutinante de la lectina
ensayada frente a diferentes azcares mostr una importante inhibicin
producida por N-acetilgalactosamina y el glucogalactomanano de V. #ungicola.
Estos resultados junto con los obtenidos con la lectina de A. ,isporus nos
muestran que, aunque ambas lectinas presenten diferente estructura qumica,
reconocen de forma semejante al glucogalactomanano de V. #ungicola,
confirmando la existencia de la misma etapa de reconocimiento y unin en la
verticiliosis de los carpforos de ambos hongos.
+icolog-a .33
F - 455
0n nue"o &oli$ac#!ido de la &a!ed celula! de cie!to$ Loculoa$comycete$%
Prieto A
1
, Bernab M.
2
, Gimnez-Abin M..
1
y Leal J.A.
2
1
!entro de 1nvestigaciones 6iol;gicas, !&1!. c< ?amiro de +ae$tu, 9. .8040/+adrid.
.
1nstituto de
Gu-mica Drg"nica, !&1!. c< 2uan de la !ierva, 3. .8006/+adrid.
Los Loculoascomycetes se caracterizan porque producen las ascas en
cavidades originadas en un estroma, el ascoma carece de verdadero peridio y
las ascas tienen doble pared (bitunicadas). La clasificacin de este grupo no
est definitivamente resuelta. Tampoco se conocen bien sus relaciones
filogenticas con otros ascomycetes.
Los polisacridos F1SS, componentes de la pared celular que se extraen con
lcali y son solubles en agua, constituyen caracteres de gran utilidad para la
delimitacin de taxones a nivel de gnero, establecer relaciones anamorfo-
teleomorfo y formular hiptesis evolutivas de los ascomycetes (Prieto et al.,
2004). Puesto que estos polisacridos han demostrado ser de gran utilidad en
la sistemtica de Plectomycetes e Hypocreales, se ha iniciado el estudio de los
polisacridos de hongos pertenecientes a los Loculoascomycetes. Los
resultados obtenidos hasta el momento, indican que en esta clase hay varias
estructuras polisacardicas, que una vez caracterizadas permitiran delimitar
grupos. En la presente comunicacin se determina la estructura del
polisacrido F1SS de un grupo de estos hongos.
La hidrlisis cida (TFA 3M, 1h, 120C) de los polisacridos indic que estn
compuestos por manosa y glucosa en proporciones molares que oscilan entre
1:1,2 y 1:1,6 segn la especie, y la mayora de ellos contiene adems una
pequea proporcin de galactosa (1-4%). Los tipos de enlace se determinaron
por anlisis de metilacin mediante GC-MS. Se identificaron residuos
terminales de glucopiranosa, de (1-6)-manopiranosa y (1-2,4,6)-manopiranosa
en los polisacridos de todas las especies. Algunos de ellos contienen adems
(1-2,6)-manopiranosa.
Los polisacridos se estudiaron mediante experimentos mono y
bidimensionales de RMN, que condujeron al establecimiento de su estructura,
consistente en una cadena de unidades de alfa-1,6-manopiranosa, sustituidas
en posiciones 2 y 4 por alfa y beta-glucopiranosas, respectivamente, alternando
con residuos de manopiranosas no sustituidas.
Aunque los microorganismos estudiados pertenezcan a diferentes familias y
rdenes (algunos de ellos incluso aparecen como incertae sedis), el hecho de
que posean este polisacrido en comn indica que estn muy relacionados, e
incluso podran considerarse congenricos. Este grupo est bien definido por
este polisacrido, ya que no ha sido encontrado en ninguno de los ascomicetos
estudiados hasta ahora. La comparacin de este polisacrido con los obtenidos
de hongos pertenecientes a las otras clases muestra una mayor proximidad de
este grupo con los Plectomycetes, con los que podra compartir un ancestro
comn.
Prieto, A., Ahrazem, O., Bernab, M., and Leal, J.A. (2004). Polysaccharides F1SS: taxonomic and
evolutionary characters for ascomycetes. En: Pathogenic Fungi: Structural Biology and Taxonomy,
pp. 319-360. Eds.: San-Blas, G. y Calderone, R.A. Caister Academic Press.
+icolog-a .34
MICROBIOLOGA DEL MEDIO AC0ZTICO
H - 25
Deteccin de anuila$ &o!tado!a$ del &ateno ;umano y de &ece$ 3ibrio
vulnificus $e!o"a! E mediante $u ai$lamiento e identificacin &o! +CR
Valiente, E
1
and Amaro, C
1
1
Universidad de Valencia, Edi#icio de investigaci;n, (epartamento de +icro,iologia ' Ecologia,
6ur=asot, Valencia, EspaLa. carmen.amaro%uv.es
La bacteria patgena Vi,rio vulni#icus serovar E produce tanto casos
espordicos de infecciones humanas como epizootias de alta mortalidad en
anguilas cultivadas. En este trabajo, desarrollamos y ensayamos a escala de
laboratorio y de campo, un protocolo para la deteccin incruenta de anguilas
portadoras sanas compatible con el aislamiento del patgeno. En la primera
fase del trabajo realizamos una serie de experimentos a escala de laboratorio
para averiguar los rganos en donde el patgeno persista tras la infeccin.
Para ello, infectamos a travs del agua lotes de anguilas que mostraban
distintos grados de inmunidad frente al patgeno y seguimos el proceso
infeccioso microbiolgica y microscpicamente durante 72 horas. Usamos dos
protocolos distintos para el aislamiento de la bacteria, uno a partir de rganos
internos, en donde el patgeno sobrevive sin competidores, y otro a partir de
los externos, en donde se enfrenta a microbiota competidora (1). Las colonias
aisladas las identificamos mediante una PCR especfica de serovar E (2) y
confirmamos la identificacin por mtodos clsicos (3). Los resultados que
obtuvimos demostraban que el patgeno se acantonaba preferentemente en
agallas y bazo. As, la bacteria colonizaba y se multiplicaba en las agallas
desde donde entraba en sangre y se extenda a los rganos hematopoyticos y
al hgado. Las anguilas vacunadas eran capaces de eliminar el patgeno de
todos los rganos externos e internos en menos de 9 horas, confirmando la
eficacia de la vacunacin como medida preventiva para controlar la
enfermedad y su transmisin al hombre. Seleccionamos las agallas como
rgano a muestrear y ensayamos el protocolo en dos piscifactoras en ausencia
de brotes infecciosos y con anguilas sanas. Demostramos la eficacia del
protocolo al aislar cepas del patgeno de animales sin sntomas procedentes
de una piscifactora que haba registrado el ltimo caso de vibriosis en el ao
2000. Las cepas aisladas han sido incluidas en nuestra coleccin para estudios
posteriores.

1.SanJuan, E and C. Amaro.2004. Protocol for specific isolation of virulent
strains of Vi,rio vulni#icus serovar E (biotype 2) from environmental samples.
Appl. Environ.Microbiol. 70: 7024-7032.2.
2.Lee, C-T, C. Amaro, E. Sanjun and L-, Hor.dentification of DNA sequences
specific for Vi,rio vulni#icus biotype 2 strains by suppression subtractive
hybridization. Appl. Environ. Microbiol. (in press).
3.Biosca, E.G., C. Amaro, J.L. Larsen, and K. Pedersen. 1997. Phenotypic and
genotypic characterization of Vi,riovulni#icus0 proposal for the substitution of the
subspecific taxon biotype for serovar. Appl. Environ. Microbiol. 63: 1460- 1466.
+icro,iolog-a del +edio Acu"tico .3
H - 34
+!e$encia de 'ampylobacter te!motole!ante$ en aua$ $u&e!ficiale$
Rodrguez, S.; Araujo, R.
(epartamento de +icro,iolog-a. Facultad de 6iolog-a. Universitat de 6arcelona. Av. (iagonal 643.
080.8 6arcelona. sara)rodrigue$%u,.edu
Las especies termotolerantes del gnero !amp'lo,acter constituyen uno de los
principales grupos bacterianos que causan gastroenteritis en humanos.
Considerada como una zoonosis, la campylobacteriosis se transmite por
contacto directo o indirecto con animales y tambin a travs de leche, agua y
comida. Se ha aislado Camp'lo,acter spp de diversos tipos de agua: ros, agua
subterrnea, agua de mar, etc., considerndose su presencia como un signo de
contaminacin fecal reciente. El aumento de las gastroenteritis causadas por
!amp'lo,acter termotolerantes en los ltimos tiempos, los sita entre los
patgenos emergentes. En Espaa es el principal agente causal de
gastroenteritis en nios y el segundo en importancia en adultos.
El objetivo de este trabajo es determinar la importancia del agua como vehculo
de transmisin de !amp'lo,acter spp. Con este fin se determin la presencia y
los niveles de !amp'lo,acter termotolerantes en aguas de ro y agua residual
de origen urbano del noroeste de Espaa mediante la tcnica del nmero ms
probable (NMP) y el cultivo en placa. Paralelamente se realiz la identificacin
de los enriquecimientos mediante el anlisis por una "multiplex PCR" que
diferencia !.=e=uni y !.coli del resto de las especies termotolerantes, lo que nos
permiti determinar la especie predominante en cada una de las muestras.
Resultados y discusin: Hemos analizado 21 muestras procedentes del ro
Llobregat y 9 de agua residual de origen humano. Todas las muestras se han
caracterizado con parmetros fsico-qumicos y microbiolgicos. Se ha
determinado pH, turbidez, temperatura, coliformes fecales, E.coli y fagos
somticos, conjuntamente con !amp'lo,acter spp. En el de agua residual se
determin la presencia de !amp'lo,acter termotolerantes en el 100% de las
muestras, obteniendo recuentos entre 0,4 y 1,1x10
4
NMP/100ml. El 11,1%
correspondi a !.coli, el 11,1% a !.=e=uni, el 55,5% a una mezcla de !.=e=uni y
!.coli y el 22,2% a !amp'lo,acter termotolerantes sin determinar. En el caso
del ro, el 76,2% de las muestras resultaron positivas, obtenindose recuentos
entre 0,4 y 1,1x10
2
NMP/100ml. En este caso, el 31,7% de los enriquecimientos
corresponden a !.=e=uni, el 28,6% a una mezcla de !.=e=uni y !.coli y el 28,6%
a !amp'lo,acter termotolerantes sin determinar.
En resumen, hemos detectado la presencia de !amp'lo,acter spp
termotolerantes en el 100% de las muestras de agua residual de origen
humano, con el predominio de una mezcla de !.coli y !.=e=uni y en un 76,2%
de las muestras de agua del ro Llobregat, con un predominio de !.=e=uni. Las
muestras de agua residual presentan unos valores mayores de !amp'lo,acter
spp, presentando tambin una menor variacin en sus datos.
H - 55
3ibrio vulnificus en anuila$ $il"e$t!e$ del lao de L[Albufe!a 54alencia78
&!ime!a !efe!encia de la e-i$tencia de ce&a$ inm"ile$ y "i!ulenta$ &a!a
!nguilla anguilla
Esteve, C.
1
, Alcaide, E.
1
, Canals, R.
2
, Toms, J.M.
2
y Merino, S.
2
(pto. +icro,iolog-a ' Ecolog-a BUniv. ValenciaC 46100 6ur=assot
1
F (pto. +icro,iolog-a BUniv.
6arcelonaC 080.8 6arcelona
.
. estevem%uv.es
En la zona mediterrnea, V. vulni#icus presenta una baja incidencia en agua y
moluscos filtradores pero ha sido frecuentemente aislado como agente causal
de epizootias en cultivos intensivos de anguila (A. anguilla). Vi,rio vulni#icus es
una especie compleja por su variabilidad fenotpica y antignica, adems de
por su amplio espectro de huspedes. Su relativa diversidad bioqumica dio
lugar a la propuesta de tres biotipos, todos ellos patgenos para el ser humano,
de los cuales tan slo el biotipo 2 es patgeno para anguila. Durante muchos
aos, las cepas de V. vulni#icus virulentas para anguila han sido consideradas
un grupo homogneo en cuanto a su perfil bioqumico (ndol, ODC y Manitol-
negativo) y antignico (serovar E). No obstante, la obtencin de nuevos
aislados con distinto perfil bioqumico (ndol, ODC y Manitol-positivo) y
antignico (serovar A, serogrupo O3/O2), ha llevado a la revisin de los
criterios que definen al biotipo 2, quedando ste restringido a cepas celobiosa-
positivas y virulentas para anguila. En cualquier caso, las cepas de V. vulni#icus
biotipo 2 aisladas hasta la fecha slo se han recuperado de anguila cultivada
en piscifactorias y adems presentan un fenotipo mvil.
De Octubre 2003 a Mayo 2005 se han analizado 115 ejemplares de anguila
plateada y "pasturenca que fueron suministrados por la pesca tradicional de
anguila silvestre en el lago de LAlbufera (Valencia). En el 17% de los peces se
aisl V. vulni#icus en cultivo puro sobre agar TSA-1, a partir de rganos internos
(hgado y rin), siendo significativa la existencia de septicemia hemorrgica
ulcerosa en estos peces. Todas las cepas de V. vulni#icus aisladas (n = 60),
han sido homogneas a nivel bioqumico (ndol, ODC, Manitol y celobiosa-
positivo), presentan el gen de la vulnificolisina, desarrollan colonias opacas en
agar TSA-1, y son mayoritariamente inmviles (90% del total). Este fenotipo
inmvil se ha mantenido estable durante tres meses de repetidos subcultivos, y
hemos comprobado se debe a la carencia de flagelos, mediante microscopa
electrnica de transmisin. Las cepas inmviles de V. vulni#icus son altamente
virulentas para anguila (DL
50
= 8,1x10
1
6,6x10
3
ufc/pez), en ensayos de
infeccin experimental por inyeccin intraperitoneal. Esto contrasta con la
avirulencia mostrada por el aislado M4-7-65, nica cepa mvil de V. vulni#icus
por ahora ensayada. A este respecto destacar que el 67% de los aislados
mviles de V. vulni#icus (no. total = 6) fueron recuperados de anguilas silvestres
que no presentaban septicemia hemorrgica ulcerosa. Por otra parte, este
trabajo presenta resultados sobre las propiedades de adherencia a lneas
celulares y de resistencia al suero de anguila de los aislados de V. vulni#icus
obtenidos de anguila silvestre.
Agradecimientos: El presente trabajo ha sido financiado por el proyecto
CGL2004-02009/BOS (M.E.C.)
H - 57
+!edominio de E$7ar$siella tar$a en &oblacione$ $il"e$t!e$de anuila
Eu!o&ea 5!nguilla anguilla7 ca&tu!ada$ en el lao de lVAlbufe!a de
4alencia
Alcaide, E., Herraiz, S., Esteve, C.
(epartamento de +icro,iolog-a ' Ecolog-a. Universidad de Valencia. 46100, 6ur=assot. Valencia.
elena.alcaide%uv.es
La especie EdAardsiella tarda es el agente causal de edwardsiellosis, una
enfermedad septicmica que afecta a peces, tanto silvestres como en cultivo,
en zonas templadas de Asia, Australia, Amrica y frica. As mismo, esta
especie se ha aislado a partir de otros hospedadores como aves, reptiles,
anfibios y mamferos acuticos de la fauna silvestre. Adems, E. tarda es un
patgeno humano que puede provocar infecciones tanto de tipo gastrointestinal
como extraintestinal. Hasta la fecha, el nico aislamiento de E. tarda en Europa
se ha obtenido en el pez de acuario 6etta splendens. Por otra parte, aunque
existen numerosas referencias sobre patologas bacterianas que afectan a
peces cultivados en zonas templadas europeas, incluyendo la anguila (Anguilla
anguilla), no hay apenas datos sobre patologas en peces silvestres.
Este trabajo forma parte de un proyecto uno de cuyos objetivos es,
precisamente, determinar las patologas bacterianas de la anguila silvestre.
Para ello, se han analizado 115 anguilas capturadas en el lago de L'Albufera de
Valencia desde octubre de 2003 hasta mayo de 2005. En seis de los 13
muestreos realizados, se aisl E. tarda en cultivo puro a partir de rganos
internos de anguilas que mostraron los signos descritos para la edwardsiellosis.
La incidencia de peces afectados vari entre el 11 y el 40% en los diferentes
muestreos. Se aislaron un total de 22 cepas que se identificaron mediante
sistemas miniaturizados (AP 20E) y pruebas bioqumicas convencionales.
Todos los aislados resultaron prcticamente idnticos en su perfil bioqumico, e
idnticos a la cepa tipo (CECT 849) empleada como control. En base a los
resultados obtenidos, todas las cepas fueron incluidas en el biotipo silvestre de
la especie E. tarda.
As mismo, se determin el patrn de resistencia de los aislados a 13
antimicrobianos. Dicho patrn result muy similar en todos los casos y
coincidente con las resistencias mostradas por cepas de E. tarda aisladas en
otras zonas geogrficas.
Por otra parte, los aislados resultaron virulentos para la anguila europea,
presentando valores de DL
50
entre 7,4x10
4
y 6,6x10
6
ufc/pez.
El presente estudio es la primera referencia sobre edwardsiellosis en anguila
europea silvestre. Este tipo de estudios es bsico para disear medidas de
conservacin y gestin de Anguilla anguilla, encaminadas a disminuir la tasa de
mortalidad de la poblacin de anguila en sus hbitats, ya que, segn un
reciente informe del grupo de trabajo sobre anguila del CES/EFAC (2003) esta
especie est fuera de los lmites biolgicos de seguridad.
Agradecimientos: El presente trabajo ha sido financiado por el proyecto
CGL2004-02009/BOS (Ministerio de Educacin y Ciencia).
H - 63
Identificacin y clonacin del en :ue codifica la ma!inocina9 una &!ote,na
antimic!obiana $inteti)ada &o! la bacte!ia ma!ina 1arinomonas
me$iterranea%
1
Lucas-Elio, P.,
1
Gomez, D.,
2
Solano, F. y
1
Sanchez-Amat, A.
(epartamento de 4en5tica ' +icro,iolog-a
1
' (epartamento de 6ioIu-mica ' 6iolog-a +olecular 6
.
,
Universidad de +urcia, 30100 +urcia, EspaLa. Bpatlucel%um.esC.
La bacteria marina +arinomonas mediterranea posee un rico metabolismo
secundario. En fase estacionaria, expresa dos polifenol oxidasas, una lacasa
multipotente y una tirosinasa responsable de su pigmentacin cuando existe
tirosina en el medio. Por otra parte, este microorganismo sintetiza una protena
antimicrobiana de amplio espectro denominada marinocina (Lucas-Elio et al.,
2005). La marinocina ejerce su actividad inhibitoria mediante la generacin de
perxido de hidrgeno, producto de la oxidacin de lisina. Este compuesto
podra tener un gran inters en el campo biotecnolgico y biofarmacutico
debido a su amplio espectro de actuacin y a su elevada resistencia a
tratamientos trmicos y proteolticos, lo cual le confiere una inusual estabilidad.
El objetivo de este trabajo se ha centrado en la clonacin y anlisis del gen que
codifica la marinocina. Dicho estudio complementar el anlisis de su
mecanismo de actuacin y aportar nuevos datos acerca de los mecanismos
de competencia antimicrobiana en el medio ambiente marino. Asimismo, el
origen marino del compuesto hace suponer un mecanismo de actuacin y
estructura novedosos que podran aportar interesantes propiedades
complementarias a las del actual arsenal teraputico.
La clonacin del gen que codifica la actividad antimicrobiana en +arinomonas
mediterranea se llev a cabo mediante PCR degenerada. El producto de
traduccin de la secuencia obtenida fue contrastado con los resultados de la
secuenciacin del extremo amino terminal de la protena activa, lo que confirm
que se trata de la misma protena. De acuerdo con la secuencia obtenida, la
actividad antimicrobiana est codificada por un opern formado por dos genes,
alpA y alp6. Mediante recombinacin homloga usando plsmidos suicidas se
han conseguido mutantes en ambos genes. En ambos casos, la interrupcin
del gen conduce a la prdida de la actividad antimicrobiana.
Esta estructura en opern, est muy conservada entre protenas homlogas
segn el anlisis de Blast. Entre dichas protenas homlogas, la mayor similitud
se encontr con la protena autoltica de *seudoalteromonas tunicata, otra
bacteria marina. Para esta bacteria, se ha propuesto una funcin de dispersin
en los biofilms, lo cual podra indicar un mecanismo comn de supervivencia
extendido en el medio ambiente marino.

Lucas-Elio,P., Hernandez,P., Sanchez-Amat,A., and Solano,F. (2005)
Purification and partial characterization of marinocine, a new broad-spectrum
antibacterial protein produced by +arinomonas mediterranea. Biochimica et
Biophysica Acta ?G.?: 193-203.
+icro,iolog-a del +edio Acu"tico .4.
H - 67
Cuantificacin e identificacin de ente!o"i!u$ en efluente$ te!cia!io$ de
de&u!ado!a$% E$timacione$ de !ie$o a$ociado al u$o de e$to$ efluente$%
Costn Longares, A, Jofre Torroella, J, Lucena Gutirrez, F.
Avda (iagonal 643, Facultad de 6iolog-a de la Universidad de 6arcelona. Edi#. *rincipal, planta 0.
6arcelona080.8e/mail0 acostanlo%u,.edu
El agua regenerada es un recurso que cubre una parte del dficit hdrico en
nuestro pas ya que se puede destinar a usos muy diversos, entre ellos, el riego
de campos de cultivo, de golf, los usos industriales y urbanos y la recarga de
acuferos. El uso de este tipo de aguas no debe comportar riesgos inaceptables
para la salud de las personas. Los objetivos de nuestro estudio fueron
cuantificar e identificar los enterovirus presentes en los efluentes de tres
plantas depuradoras de Catalua, valorar las eficiencias de inactivacin de
estos virus en los diferentes tratamientos y hacer una primera estimacin del
riesgo asociado al uso del agua regenerada en riego por aspersin.
Para ello se recogieron y se analizaron un total de 138 muestras de efluentes
primarios, secundarios y terciarios de manera estacional durante dos aos. Los
enterovirus se cuantificaron por el mtodo de doble capa y se identificaron
mediante RT-PCR con cebadores especficos de la regin 5' NTR y RFLPs
mediante tres enzimas de restriccin del fragmento amplificado.
El porcentaje de muestras positivas y el valor medio de las concentraciones de
enterovirus fueron del 87% y de 131 pfu/l en los efluentes primarios, del 56% y
de 14,5 pfu/l en los efluentes secundarios y del 32 % y de 0,023 pfu/l terciarios.
Las reducciones logartmicas obtenidas en las tres plantas depuradoras fueron
de 2,49 ulog cuando el tratamiento terciario consista en filtracin por filtros de
arena, desinfeccin UV y cloracin, de 2,25 ulog cuando el tratamiento terciario
consista en tcnicas de lagunaje y humedales construidos y de 3,6 ulog
cuando consista en decantacin con coagulacin, filtracin por filtro multicapa,
cloracin y desinfeccin ultravioleta.
El tipo de enterovirus mayormente aislado en todos los efluentes fue el
Echovirus 6, con una frecuencia media del 55% en los efluentes primarios, del
45% en los secundarios y del 26% en los terciarios. En los efluentes terciarios
tambin fueron abundantes los Echo 11 Metcalf con una frecuencia mediadel
12,16 % y los Poliovirus 1 no vacunales con una frecuencia media del 17,57 %.
Una vez caracterizado el peligro en cuanto a concentracin y tipos de
enterovirus presentes en las muestras de los terciarios se pueden hacer
estimaciones del riesgo asociado al uso de estas aguas. As, por ejemplo la
estimacin del riesgo asociado a la ingestin de aerosoles durante el riego por
aspersin a una distancia de 90 metros del punto de riego fue de 5,04 E-9 para
los Echo12 y de 4,45 E-9 para los Cox B4. Por otro lado, la misma estimacin
hecha a una distancia de 2 metros del punto de riego fue de 8,18 E-06 en el
caso de Echo12 y de 7,22 E-06 en el caso de Cox B4. Dichos resultados se
obtuvieron aplicando el modelo emprico de Brooks et al, 2005, considerando
un tiempo de exposicin de 8 horas y asumiendo que el 70% de los aerosoles
inhalados eran ingeridos.

H - 76
Ti&ificacin molecula! mediante RA+D=+CR de 3. harveyi ai$lado de
&ece$ culti"ado$
Pascual, J.
1,2
, Macin, M.C.
1,2
, Garay, E.
1,2,3
, Pujalte, M.J.
1,2
1
1nstituto !avanilles de 6iodiversidad ' 6iolog-a Evolutiva,
.
Ecolog-a, '
3
!olecci;n EspaLola de !ultivos 7ipo B!E!7C. Universitat de ValKncia. !ampus de
6ur=assot. 46100 ValKncia, EspaLa. macianro%uv.es
Vi,rio )arve'i es la especie de Vi,rio mayoritaria en agua y bivalvos en la costa
del Mediterrneo espaol durante la poca clida. Es patgeno de crustceos y
de peces cultivados (lubina, salmn, caballito de mar). Nuestro grupo ha
encontrado que es la especie mayoritaria asociada a rganos internos de
doradas y lubinas, tanto enfermas como asintomticas (Pujalte et al. 2003a;
Pujalte et al. 2003b).
En este trabajo hemos aplicado la tcnica de RAPD, utilizando dos cebadores
universales (M13 y T7), a un total de 88 aislados y 9 cepas de referencia que
incluyen las cepas tipo de las especies V. )arve'i y V. camp,ellii. Estas dos
especies son fenotpicamente indistinguibles y slo se pueden diferenciar
mediante hibridacin DNA-DNA y con tcnicas moleculares como (GTG)
5
-PCR
(Gmez-Gil et al. 2004). El anlisis conjunto de RAPD-M13 y RAPD-T7 se
realiz con el programa informtico GelCompar v4.1, aplicando el coeficiente
de Pearson y el mtodo de agrupamiento UPGMA, y los resultados fueron los
siguientes:
1) Al 46 % de similitud se forman 3 grupos y queda una cepa de dorada sin
agrupar; uno de los grupos, formado por 22 cepas, incluye 14 cepas aisladas
de lubina (sorbitol -), la cepa tipo de V. camp,ellii NCMB 1894
T
y otros V.
camp,ellii de referencia; el segundo grupo, formado por 4 cepas, es perifrico
al grupo de V. camp,ellii; el resto de las cepas (70) forman un grupo bastante
homogneo en el que est incluida la cepa tipo de V. )arve'i NCMB 1280
T
.
2) No se ha observado relacin entre la tipificacin molecular (RAPD) y
fenotpica (fermentacin del sorbitol), ni con la capacidad patgena sobre la
lubina.
3) La tcnica de RAPD (con el cebador M13 o la aplicacin conjunta de ambos
cebadores) ha permitido hacer el seguimiento de una cepa virulenta de V.
)arve'i utilizada en ensayos de virulencia, permitiendo distinguir la cepa
experimental de otras de la misma especie presentes en los peces ensayados.
4) El agrupamiento obtenido coincide, en lneas generales, con el resultante de
aplicar una tcnica molecular mucho ms potente como la (GTG)
5
-PCR (ver
pster de Pascual y col. en el rea temtica de Taxonoma, Filogenia y
Biodiversidad).
A!adecimiento$: las cepas de referencia de V. camp,ellii han sido cedidas
por el Dr. Gmez-Gil (!ollection o# AIuacultural 1mportant +icroorganisms,
CAM, Mxico).
Biblio!af,a: Gmez-Gil et al. (2004). +icro,iolog' 150, 1769-1777.
Pujalte et al. (2003a). &'st Appl +icro,iol 26, 284-292.
Pujalte et al. (2003b). (is AIuat Drg 54, 119-126.
H - 106
Din#mica de acumulacin de &oli=b=;id!o-ialcanoato$ en lo$ ta&ete$
mic!obiano$ del delta del Eb!o y de la Cama!a
Urmeneta, J., del Campo, J., Villanueva, L., Guerrero, R. y Navarrete, A.
(pto.de +icro,iolog-a, Facultad de 6iolog-a, Universidad de 6arcelona, Av. (iagonal 643. 080.8
6arcelona. E/mail0 =urmeneta%u,.edu
Los tapetes microbianos son comunidades formadas por diferentes capas de
organismos procariticos y representan el primer tipo de ecosistema que se
desarroll en la Tierra hace unos 3500 millones de aos. La capa superior de
los tapetes microbianos est formada por cianobacterias filamentosas y
unicelulares y diatomeas. Las capas inferiores presentan bacterias fototrficas
anoxignicas (rojas y verdes del azufre y verdes no del azufre). En la zona ms
profunda se desarrollan las bacterias sulfatorreductoras que producen
sulfhdrico, compuesto que es utilizado como dador de electrones por parte de
las bacterias fototrficas del azufre y por algunas cianobacterias.
La mayor parte de las inclusiones de reserva en organismos procariticos son
de poli-b-hidroxialcanoatos (PHA). Los PHA son polmeros formados por
subunidades de b-hidroxicarboxicidos unidos por enlaces ster. Segn el
nmero de carbonos que posee cada subunidad tenemos diferentes tipos de
PHA entre los que destaca el poli-b-hidroxibutirato (PHB) con subunidades de 4
carbonos. Estos biopolmeros se acumulan bajo condiciones de estrs
metablico o bajo condiciones de crecimiento no equilibrado (alta disponibilidad
de carbono y escasez de otros nutrientes como el nitrgeno y el fsforo). As,
tal y como se ha establecido en diferentes estudios, la acumulacin de estos
biopolmeros se puede relacionar con el estado fisiolgico del microorganismo.
La acumulacin de PHA es mayor en la zna ftica de los tapetes microbianos
mientras que es prcticamente indetectable en capas ms profundas. A lo largo
de un ciclo circadiano la acumulacin de estos biopolmeros en muestras del
delta del Ebro, va incrementando a lo largo del da, llegando a un valor mximo,
hacia las 18h, de 230 mg de PHB por cm
2
(o 4.2 mg de PHB por mg de
carbono orgnico). En cambio, en muestras de la Camarga as como en
diversos estudios presentes en la bibliografa, se observa una tendencia
inversa. En este tipo de sistemas, las bacterias fototrficas anoxignicas tienen
un papel predominante en la dinmica de los PHA. Estos microorganismos
acumulan carbono durante el da en forma de glicgeno que durante la noche,
transforman a PHA. Los resultados obtenidos en los tapetes microbianos del
delta del Ebro pueden ser debidos a la acumulacin de PHA por cianobacterias
o bien por bacterias heterotrficas, cuyo papel en el reciclado de los nutrientes,
aun siendo esencial, es todava poco conocido.
H - 109
An#li$i$ de bioma!cado!e$ li&,dico$ de lo$ ta&ete$ mic!obiano$ del delta
del Eb!o a lo la!o de un ciclo ci!cadiano8 un e$tudio de bioma$a9
com&o$icin &oblacional9 e$tado fi$iolico y e$tado !edo-
Navarrete, A., Villanueva, L., Urmeneta, J. y Guerrero, R.
(pto. de +icro,iolog-a, Facultad de 6iolog-a, Universidad de 6arcelona. Av. (iagonal, 643. 080.8
6arcelona. E/mail0 anavarrete%u,.edu
Los tapetes microbianos son comunidades procariticas que representan los
anlogos actuales de los primeros ecosistemas que se dieron sobre la Tierra.
El estudio de estos ecosistemas revela las estrategias microbianas para la
supervivencia bajo una amplia gama de ambientes. Este estudio se basa en
una caracterizacin integrada de los biomarcadores lipdicos para determinar
cambios en el estado fisiolgico, la biomasa viable y la composicin de la
comunidad, en los tapetes microbianos del delta de Ebro (NE Espaa)
muestreados durante un ciclo diario a intervalos de 3 horas.
Se determinaron las variables fisicoqumicas (luz, conductividad y sulfhdrico) a
lo largo del ciclo circadiano. De las muestras, se extrajo la fraccin total lipdica,
para ser posteriormente fraccionada en lpidos polares, neutros y glicolpidos.
Los perfiles de los cidos grasos de la fraccin polar (fosfolpidos, PLFA),
muestran los cambios en la biomasa viable, la composicin de la comunidad y
su estado metablico. En sta misma fraccin, tambin se estudiaron los
plasmalgenos, indicadores especficos de las bacterias del gnero
!lostridium. De la fraccin neutra se analizaron las quinonas, indicadores del
estado redox de la comunidad. La fraccin glicolipdica se analiz para estudiar
el contenido en poli--hidroxialcanoatos (PHA).
La tasa ms lenta de crecimiento se observ a ltimas horas de la tarde,
coincidiendo con un mximo del estrs metablico, un incremento de bacterias
anaerbicas y una disminucin de la biomasa viable. En este mismo momento
del ciclo, tambin se observa un valor mximo en el contenido de PHA. El
anlisis del potencial redox mostr un metabolismo principalmente aerbico,
con micronichos anaerbicos, a lo largo del da.
La integracin de los resultados de los anlisis lipdicos sugieren una alta
actividad fotosinttica por la maana, que conlleva un exceso de compuestos
de carbono, que, en adicin a la escasez de otros nutrientes, como el
nitrgeno, da lugar a una situacin de crecimiento no equilibrado. Este hecho
se ve reflejado en los valores mximos de estrs metablico y de produccin
de PHA observados al final del da. Hasta la fecha, los anlisis indican una
tendencia similar en los ciclos circadianos entre las diferentes estaciones y
aos, apoyando la idea de que los tapetes microbianos son ecosistemas
complejos pero relativamente estables.
H - 121
Com&a!acin de t'cnica$ citom't!ica$ &a!a la deteccin de
'ryptospori$ium $&&% en mue$t!a$ ambientale$%
Montemayor, M.
1
, Galofr, B.
2
, Ribas, F.
2
y Lucena, F.
1
.
1
Avda. (iagonal 643. (epartamento de +icro,iolog-a. Facultad de 6iolog-a. Universidad de
6arcelona, 080.8, 6arcelona. mmontema'or%u,.edu.
.
*asseig &ant 2oan 39/43. (ivisi;n
>a,oratorios, &ociedad 4eneral de Aguas de 6arcelona, 08009 6arcelona
Los ooquistes de !r'ptosporidium spp, protozoo parsito que infecta el tracto
gastrointestinal de humanos y animales, ha adquirido un inters creciente en
los ltimos aos debido a los numerosos brotes asociados al consumo de agua
potables y al uso de aguas recreativas. A pesar que numeroso mtodos han
sido desarrollados y estandarizados para la deteccin de los ooquistes de
!r'ptosporidiumen aguas de bebida, estos procedimientos se basan en la
deteccin de los ooquistes mediante procesos de microscopia de
epifluorescencia, los cuales son unos procedimientos laboriosos y susceptibles
a la subjetividad y cansancio del operador. La utilizacin de tcnicas
citomtricas supone un gran avance en la deteccin de los ooquistes de
!r'ptosporidium en muestras de aguas, reduciendo el tiempo de observacin y
facilitando la estandarizacin de la tcnica.
En el presente estudio se han comparado tres tipos de citmetros (un citmetro
de flujo y dos citmetros de fase slida) frente a la microscopia de
epifluorescencia y entre los diferentes citmetros para evaluar la capacidad de
deteccin de ooquistes de !r'ptosporidium tanto en muestras inoculadas con
material de referencia como en muestras ambientales naturales, encontrndose
unos coeficientes de correlacin elevados (r
2
= 0,96 para la citometria de flujo y
r
2
= 0,98 para la citometria de fase slida frente a la epifluorescencia y r
2
=0,99
entre los dos citmetros de fase slida) y unas sensibilidades parecidas entre
las diferentes tcnicas utilizadas. Tambin se valoraron varios mtodos para
reducir las interferencias producidas durante la etapa de deteccin (gradientes
de Percoll-sacarosa y la separacin immunomagnetica), de gran importancia en
muestras ambientales y mejorar la sensibilidad de dichas tcnicas, as como la
aplicacin de las ventajas que ofrecen la citometra (la relocalizacin
automtica de los ooquistes mediante la citometria de fase slida y la
capacidad de separacin de los citmetros de flujo) para la determinacin de la
viabilidad de los ooquistes presentes en las muestras ambientales mediante
tcnicas de los colorantes vitales (Yoduro de propidio y DAP). Una vez
desarrollada la metodologa, se realiz la deteccin de ooquistes de
!r'ptosporidium en diferentes tipos de aguas ambientales (agua residual
(media 125 ooquistes por litro, viabilidad 35%), agua residual tratada, (media
de 3,1, viabilidad 29% y 0,2 y viabilidad de 8% en muestras de tratamientos
secundarios y terciarios respectivamente) y ro (media de 0,9, viabilidad de
26%), pudiendo confirmar la gran utilidad y aplicabilidad de las tcnicas de
citometra para la deteccin y determinacin de la viabilidad de los ooquistes de
!r'ptosporidium spp. en diferentes tipos de agua con la ventaja de ser una
metodologa ms rpida, sensible y estandarizable que la microscopia de
epifluorescencia tradicional.
H - 122
1ethylobacterium isbiliense $&% no"%9 ai$lada de aua &otable de Se"illa
Gallego V., Garca M.T. y Ventosa A.
4101. &evilla. vgallego%us.es
Estudios previos orientados a determinar la diversidad bacteriana presente en
el agua potable de la ciudad de Sevilla permitieron la descripcin de tres
nuevas especies del gnero +et)'lo,acterium: +. )ispanicum (Gallego y col.,
2005a), +. aIuaticum (Gallego y col., 2005a) y +. varia,ile (Gallego y col.,
2005b). Las especies de este gnero estn presentes en una gran variedad de
habitats, incluyendo suelo, polvo, sedimentos de lagos, agua potable, superficie
de hojas y ndulos de races, granos de arroz, ambientes hospitalarios, etc...
Pertenecen a la subclase -2 de las Proteobacterias y son bacilos Gram-
negativos, aerobios estrictos, con pigmentacin rosa, metilotrofos facultativos y
capaces de crecer a partir de compuestos de un slo carbono como nica
fuente de carbono y energa, tales como formato, formaldehdo y metanol, as
como en un amplio rango de compuestos multicarbonados. Actualmente este
gnero est formado por un total de 19 especies, siendo +. organop)ilum la
especie tipo del mismo.
La abundante presencia de bacterias pertenecientes a este gnero en los
sistemas de distribucin de agua potable nos hizo llevar a cabo otro muestreo,
en el cual se aislaron 3 cepas (AR24, AR25 y GR32) que se estudiaron
fenotpica y genotpicamente (anlisis filogentico basado en la secuencia del
gen ARNr 16S y estudios de hibridacin ADN-ADN).
El anlisis de la secuencia del gen ARNr 16S nos revel que estos tres
aislamientos constituan un nico grupo filogentico dentro del gnero
+et)'lo,acterium (100% semejanza) y el nivel de semejanza obtenido al
comparar las secuencias del gen ARNr 16S de las especies tipo de ste gnero
con respecto a las de nuestras cepas fueron inferiores al 96,5% en todos los
casos excepto para la especie +. nodulans (98,1% semejanza). Aunque en
este ltimo caso el valor obtenido fue superior al 97%, las diferencias
fenotpicas observadas entre nuestros aislamientos y +. nodulans, nos hizo
continuar con la caracterizacin de las mismas.
El porcentaje de hibridacin entre las cepas AR24 y GR32 fue de un 99%,
confirmando que se trata de dos cepas de la misma especie. Por otro lado, los
porcentajes de hibridacin ADN-ADN con respecto a algunas de las especies
de este gnero oscilaron entre un 14% y un 37% para +. aIuaticum DSM
16371 y +. nodulans LMG 21967, respectivamente.
En base a los resultados de hibridacin ADN-ADN, el anlisis filogentico y la
caracterizacin fenotpica se propone incluir dichas cepas en una nueva
especie con la denominacin +. is,iliense sp. nov. La cepa tipo es AR24 (=
CECT 7068 = CCM 7304).
Gallego, V., Garca, M. T. and Ventosa, A. 2005a. nt J Syst Evol Microbiol 55: 281-287.
Gallego, V., Garca, M. T. and Ventosa, A. 2005b. nt J Syst Evol Microbiol, en prensa.
DO:10.1099/ijs.0.63597-0.
H - 128
Com&o!tamiento de mic!oo!ani$mo$ &ateno$ e indicado!e$ en do$
&!oce$o$ de ;iieni)acin de lodo$%
Guzmn, C., Jofre, J., Lucena F.
Universidad de 6arcelona. Facultad de 6iolog-a. (epartamento de +icro,iolog-a. Avenida.
(iagonal, 643. cp0 080.8. cgu$malu%docd3.u,.edu
Los lodos de depuradora se generan durante el tratamiento de aguas
residuales. Su alta concentracin de nutrientes y elementos trazas, favorece su
utilizacin en agricultura y recuperacin de suelos erosionados. Sin embargo,
su aplicacin est restringida por la concentracin de sustancias txicas y
microorganismos patgenos que pueda contener. El objetivo de esta
investigacin fue la evaluacin microbiolgica de dos procesos de higienizacin
de lodos, mediante la identificacin y cuantificacin de microorganismos
patgenos e indicadores de contaminacin fecal (E. coli, &almonella, esporas
de anaerobios sulfito reductores, colifagos somticos, fagos ARN F-especficos,
fagos que infectan 6. #ragilis, enterovirus y huevos de helminto. Los protocolos
utilizados fueron mtodos estandarizados con ligeras modificaciones, resultado
de la puesta a punto de las tcnicas en este tipo de matrices. Los tratamientos
de higienizacin valorados fueron un proceso de digestin mesoflica
anaerbica (35C, 25d) seguido de la deshidratacin del bioslido por
centrifugacin y un proceso de compostaje (2 meses de tratamiento, ms 2
semanas de maduracin).
La digestin mesoflica anaerbica no reduce significativamente la
concentracin de E. coli y esporas de anaerbios sulfito reductores. Sin
embargo, reduce la concentracin de fagos somticos, fagos ARN F-
especficos y fagos que infectan 6. #ragilis en 0,9; 2,2 y 1,2 Ulog
10
,
respectivamente. Los fagos ARN F-especficos fueron los ms sensibles al
tratamiento. La reduccin de enterovirus (1,6 Ulog
10
) es de una magnitud
intermedia entre la de los fagos ARN F-especficos y la de los fagos que
infectan 6. #ragilis. &almonella sp. fue aislada en todas las muestras de entrada
y de salida.
El compostaje reduce de forma significativa la concentracin de E. coli: 4,8 -
5,0Ulog
10
; esporas de anaerobios sulfito reductores: 2,6 Ulog
10
; fagos
somticos: 5,8 - 6,6Ulog
10
; fagos ARN F-especficos: 5,0 - 6,8Ulog
10
; fagos que
infectan 6. #ragilis: 3,4 - 5,5Ulog
10
. &almonella sp. fue aislada en el 83,3% de
las muestras de entrada y en el 16.7% de las muestras de compost. La
concentracin de enterovirus en el compost es inferior al lmite de deteccin de
la tcnica (1,0 - 8,3 ufp/100gST).
En relacin con los helmintos, los bajos niveles encontrados en los fangos
primarios, no permiten evaluar la reduccin experimentada por este grupo de
organismos en los dos tratamientos.
Atendiendo a la presente normativa, USEPA/625/R92/013 (1999) y al borrador
(09/2001) de la normativa de la Comunidad Europea: directiva 86/278 (1986), el
bioslido digerido y deshidratado puede ser utilizado en agricultura o en
reforestacin con las debidas restricciones de aplicacin. En contraste, la
calidad microbiolgica del compost hace posible su destinacin para un
espectro ms amplio de utilizacin.
H-133
+!o&ue$ta de un e$:uema bio:u,mico &a!a la identificacin de
!eromonas hy$rophila y !. caviae8 en$ayo con ce&a$ cl,nica$ y
ambientale$
Kuepfer, M.
1,3
, Figueras, M.J.
2
, Demarta, A.
3
y Esteve, C.
1
(pto. +icro,iolog-a ' Ecolog-a BUniv. ValenciaC 46100 6ur=assot
1
F (pto. +icro,iolog-a BUniv. ?ovira
i VirgiliC 43.01 ?eus
.
, 1stituto !antonale di +icro,iologia BUniv. 4inevraC 6300 6ellin$ona, &ui$a
3
.
lord'6%,lueAin.c)
El gnero Aeromonas incluye bacilos gram-.negativos, oxidasa y catalasa-
positivos, quimioorganotrofos, anaerobios facultativos y no halfilos. Varias
especies de Aeromonas mviles, entre las que destacan A. )'drop)ila y A.
caviae, han sido relacionadas con enfermedades gastrointestinales y tambin
con infecciones degenerativas de piel y msculo en humanos. Adems, A.
)'drop)ila es uno de los principales patgenos causantes de epizootias en
peces cultivados en agua dulce.
El presente estudio ha tenido dos objetivos principales. Primero disear un
esquema bioqumico para la identificacin de A. )'drop)ila y A. caviae; y
segundo, evaluar dicho esquema mediante su uso en cepas de origen clnico y
ambiental (n = 52), las cuales haban sido previamente clasificadas mediante
tcnicas moleculares (16S rDNA RFLP) y de secuenciacin (gen A?:r 16&;
gen g'r6).
La elaboracin del esquema de identificacin estuvo basada en la recopilacin
de los trabajos publicados a lo largo de los ltimos veinte aos, sobre el perfil
fenotpico de las especies de Aeromonas. Nuestro esquema presenta tres
niveles, el "nivel corresponde a las caractersticas propias del gnero y
consta de 8 pruebas. El "nivel 2, con un total de 6 pruebas bioqumicas,
corresponde a un "supragrupo que incluye a las especies A. )'drop)ila, A.
,estiarum, A. salmonicida, A. caviae, A. media y A. eucrenop)ila. Por ltimo, el
"nivel 3 diferencia a estas especies entre s mediante 13 pruebas bioqumicas.
El empleo de este esquema bioqumico en cepas de Aeromonas cuya
identificacin original estaba basada en tcnicas genticas, confirm la
asignacin a la especie A. )'drop)ila en el 82% de las cepas (n = 44), mientras
confirm la identificacin original del 79% de las cepas de A. caviae (n = 28).
Por otra parte destacar que el uso del esquema bioqumico propuesto mostr,
en sus resultados, un nivel de concordancia alto (89% de los casos) con la
identificacin basada en resultados de secuenciacin (gen A?:r 16&; gen
g'r6), mientras ste fue inferior (77% de los casos) con la identificacin basada
en tcnicas moleculares (16S rDNA RFLP). En el presente trabajo, adems, se
discute acerca de la metodologa a emplear en la realizacin de las distintas
pruebas bioqumicas. Finalmente, se presentan resultados preliminares sobre
las propiedades de virulencia de estas cepas de A. )'drop)ila y A. caviae
aisladas de muestras clnicas y ambientales.
Agradecimientos: M. Kuepfer agradece al FNS (Fondo Nazionale Svizzero) por
la beca de investigacin concedida para una estancia en la Universidad de
Valencia.
H - 166
Ca!acte!i)acin de ai$lado$ de &!ofundidad y $u&e!ficie del
mic!oo!ani$mo !lteromonas macleo$ii
vars-Martnez, E.
1
, DAuria, G.
1
; Tamburini, C.
2
; Lopez-Lopez, A.
1
; y Rodrguez-
Valera,F.
1
1 (ivisi;n de +icro,iolog-a, !ampus de &an 2uan, Universidad +iguel Hern"nde$, Apdo. 18,
03330. &an 2uan, Alicante. .. !entro Dceanogra#ico de +arsella, U+? 611 / !:?& < Universit5
de la +5diterran5e, France
El gnero Alteromonas agrupa microorganismos heterotrficos de vida libre que
se encuentran presentes en la mayor parte de los hbitats marinos tropicales,
subtropicales y templados del planeta.
La facilidad para cultivarla en el laboratorio y la posibilidad de utilizar las
tcnicas de Biologa Molecular como herramienta de trabajo nos ha permitido
realizar un amplio estudio de su adaptacin en el medio ambiente en el que se
desarrolla.
En un trabajo previo se estudiaron las caractersticas genotpicas de 16 cepas
de Alteromonas macleodii aisladas de diferentes zonas geogrficas (Ocanos
ndico y Pacifco, Mar Adritico, Mar Egeo, Mar Jnico y Mar Negro) y
procedentes de distintas profundidades (desde la superficie hasta 3500 m de
profundidad). Este estudio comparativo se llev a cabo mediante el anlisis de
las secuencias espaciadoras entre los genes ribosmicos 16S rRNA y 23S
rRNA, y secuencias parciales de los genes 16S rRNA, girasa B(gyrB) y la
subunidad beta de la RNA polimerasa (rpo6), adems de otras tcnicas de
comparacin genmica (AFLP y PFGE). Con todo ello fue posible identificar
relaciones entre las cepas que fueron aisladas de regiones y profundidades
similares, describindose la existencia de distintos ecotipos para la especie.
Con el fin de confirmar la existencia de estos ecotipos se estn llevando a cabo
estudios para conocer si existe una correspondencia entre las agrupaciones
genotpicas observadas y las caractersticas fenotpicas de las cepas. Para ello
se han realizado experimentos de crecimiento en los que se estudia la
respuesta de las distintas cepas a la variacin de parmetros tales como
salinidad, temperatura y presin. Los resultados preliminares parecen confirmar
que existe una relacin entre las caractersticas fsico-qumicas del ambiente
naturaly las condiciones ptimas de crecimiento y desarrollo de cada una de las
cepas.
H - 169
0tilidad de la dete!minacin de bacte!ifao$ &a!a la e"aluacin de lo$
&!oce$o$ em&leado$ en la !eutili)acin de aua$
Payn Gonzlez A., Jofre Torroella J., Lucena Gutirrez F.
Avenida (iagonal 643. Facultad de 6iolog-a. (epartamento de +icro,iolog-a. Universidad de
6arcelona. Edi#icio anexo planta 0. 6arcelona0 080.8. anpa'an%)otmail.com
Para el uso el agua regenerada es necesario llevar acabo una evaluacin
microbiolgica que permita garantizar que sta no representa un riesgo para la
salud. En la actualidad el uso de bacterifagos se est implementando en el
anlisis de riesgos y control de puntos crticos en los diferentes tipos procesos
empleados en la regeneracin de este recurso.
En el presente trabajo se valor la eficacia de los procesos de eliminacin de
microorganismos modelo en distintos tratamientos terciarios de aguas
residuales para su reutilizacin posterior. Determinando los indicadores
bacterianos clsicos, adems de colifagos somticos, RNA F+ especficos
(FRNA), y fagos que infectan 6acteroides spp, se evaluaron procesos y
operaciones unitarias como Cloracin (Cl), coagulacin y floculacin(C-F),
filtracin por arena (FA), por filtro multicapa (FMC), lagunaje (LAG), osmosis
inversa (O), radiacin por luz ultravioleta (LUV) y ultrafiltracin (UF); as como
tratamientos que incluan la combinacin de algunos de stos.
En todos los casos el agua regenerada cumpla con los requerimientos
microbiolgicos de referencia para su utilizacin. Las bacterias demostraron
mayor sensibilidad a los procesos de eliminacin que los fagos. Se encontr
persistencia de fagos en cantidades de hasta 5,2x10
3
UFP/ 100 ml al final de
tratamientos combinados. En trminos generales, se observ que los valores
ms altos de eliminacin de bacterias y fagos entre los procesos y operaciones
unitarios estudiados, se obtuvieron cuando se emple la UF (> 4Ulog/100ml
para ambos indicadores).En cuanto a los dems tratamientos combinados, se
observ que el que inclua C-F, FA, LUV y CL, bajo las condiciones evaluadas
aqu, fue el ms efectivo en eliminacin de fagos, logrando niveles de hasta
3,72 Ulogs. Se puso en evidencia la variacin estacional en los niveles de
eliminacin de los indicadores en aquellos tratamientos que involucraban
procesos de tipo biolgico; en los que adems los FRNA tuvieron la
persistencia ms alta de entre todos los dems fagos estudiados en este
proceso. Los resultados obtenidos permitieron realizar una comparacin
general del comportamiento de los diferentes tipos de indicadores estudiados
ante los distintos tratamientos, poniendo de manifiesto que el estudio de las
dinmicas de los fagos brinda una informacin complementaria a la que se
puede obtener a travs de los otros tipos de indicadores. Finalmente, en la
seleccin de un determinado fago como indicador en un determinado
tratamiento, deben tenerse en cuenta su grado de variacin en la persistencia
durante cada tipo de operacin o proceso, niveles iniciales en el agua residual
y aspectos tcnicos ligados a las facilidades metodolgicas en su
determinacin, aspectos todos estos que pueden diferir en cada caso.

H - 174
Se&a!acin de c'lula$ culti"able$ y no culti"able$ mediante !adiente de
den$idad
Orruo, M., Seco, C., Calera, A., Arana, ., Muela, A., Barcina, .
(pto. 1nmunolog-a, +icro,iolog-a e 1nmunolog-a. Fac. !iencia ' 7ecnolog-a. Universidad del *a-s
Vasco. Apdo. 644. 48080 6il,ao. Bisa,el.,arcina%e)u.esC
El significado biolgico del estado viable no cultivable (VNC) est en entredicho
desde su descripcin (Roszak & Colwell, 1987). La aceptacin del estado VNC
como parte integrante de un ciclo de vida requiere la comprobacin inequvoca
de que las clulas VNC revierten al crecimiento vegetativo. Esta exigencia
plantea un problema metodolgico complejo, dada la heterogeneidad de las
poblaciones bacterianas compuestas por mezclas de clulas cultivables y no
cultivables.
Siegele et al. (1993) propusieron un mtodo de separacin de clulas
cultivables y no cultivables por centrifugacin en gradiente de densidad de
Renografin-76+ (otras denominaciones, Radioselectan o Urografin). Desnues
et al. (2003) y Cuny et al. (2005) tambien han utilizado este mtodo de
separacin para obtener poblaciones no cultivables.
En nuestro laboratorio hemos aplicado este mtodo en Esc)eric)ia coli. En
todos los casos estudiados, las diferentes bandas que se obtienen tras la
centrifugacin contienen poblaciones heterogneas, si bien las clulas no
cultivables se posicionan preferentemente en las bandas de mayor densidad.
La toxicidad de los medios de contraste iodados inicos (p.e. Urografin) ha sido
puesta de manifiesto para clulas eucariotas (Fanning et al., 2002). Hemos
podido comprobar el efecto negativo del Urografin sobre la actividad de celular
de E. coli. El tiempo de exposicin, la temperatura y la concentracin de
Urografin determinan el grado de afectacin celular.
Teniendo en cuenta estos resultados, consideramos que es necesario
perfeccionar el mtodo de separacin de clulas no cultivables y proponemos
su combinacin con otras tcnicas ya descritas a la hora de estudiar la
reversin de las clulas VNC al crecimiento vegetativo.

H - 175
An#li$i$ del clu$te! yhl%! im&licado en la $,nte$i$ y $ec!ecin de una
;emoli$ina del &ateno de &ece$ 2ersinia ruc&eri
Fernndez, L.; Guijarro, J.A.
Nrea de +icro,iolog-a, (epartamento de 6iolog-a Funcional, Facultad de +edicina, Universidad de
Dviedo, !< 2uli"n !laver-a s<n, 33006 Dviedo. Bluci#erllamas%'a)oo.esC
La yersiniosis es una de las enfermedades infecciosas ms importantes en
acuicultura, especialmente en salmnidos, ocasionando importantes prdidas
econmicas. Sin embargo, los mecanismos de patogenicidad de su agente
etiolgico, @. rucOeri, no se haban estudiado en profundidad hasta el momento.
Con el fin de superar las limitaciones que supone los estudios en condiciones
in vitro, Mahan y col. (1993) desarrollaron un sistema de seleccin gentica
denominado tecnologa de expresin in vivo (VET: in vivo expresin
technology). Esta tcnica es un sistema de captura de promotores que utiliza al
hospedador como medio de seleccin y permite la identificacin de genes que
se expresan durante la infeccin pero no en condiciones in vitro (genes ivi).
El desarrollo del sistema VET para su aplicacin en peces ha permitido
identificar 14 genes ivi. Entre dichos genes se identific la secuencia parcial de
un gen (')l6) que codifica una protena implicada en la activacin y secrecin
de una hemolisina tipo &erratia. A continuacin, se secuenci el fragmento
restante de dicho gen as como la secuencia adyacente al mismo en la que se
identific un locus con homologa a los genes que codifican hemolisinas de
este tipo y que se denomin ')lA.
El anlisis de la secuencia mostr la existencia de regiones conservadas
propias de este tipo de protenas. Tambin se estudi la regulacin de la
expresin por hierro y temperatura, concluyndose que ')l6 presentaba una
mayor expresin en condiciones de escasez de hierro y a 18C, aunque la
temperatura ptima de crecimiento de este microorganismo es de 28C.
En el presente trabajo, se ha puesto a punto la tcnica VET para el
microorganismo patgeno de peces @. rucOeri y se ha estudiado en mayor
profundidad uno de los genes seleccionados mediante la misma. Esto ha
llevado a identificar dos genes implicados en la sntesis, activacin y secrecin
de la hemolisina YhlA lo que permitir, a continuacin, valorar la implicacin en
virulencia de dichos genes obteniendo mutantes insercionales de los mismos.

Bibliografa

Ma;an9 M%3%9 Slauc;9 3%M% \ MeHalano$9 3%3% 5?IIE7%Selection of bacterial
virulence genes that are specifically induced in host tissues. &cience .@I, 686-
688.
H - 176
Elect!ot!an$foma!cin y con$t!uccin de enoteca$ de in$e!cin &o!
t!an$&o$icin en el &ateno de &ece$ Lactococcus garvieae
Menndez, A.; Guijarro, J. A.
Nrea de +icro,iolog-a, (epartamento de 6iolog-a Funcional, Universidad de Dviedo, Facultad de
+edicina, 2uli"n !laver-a s<n, 33006 Dviedo BAsturiasC. Bauroraesminom,re%)otmail.comC
La lactococosis, cuyo agente causal es >actococcus garvieae, es una de las
patologas emergentes en acuicultura continental. A pesar de que ocasiona
importantes prdidas econmicas, se tienen pocos conocimientos sobre su
agente etiolgico, modos de transmisin y sistemas de prevencin.

En el presente trabajo se desarroll por primera vez un mtodo de
transformacin en este microorganismo para, a continuacin, abordar el
anlisis gentico del mismo mediante mutagnesis por transposicin.

La transformacin de >. garvieae se realiz por electroporacin utilizando el
plsmido pGKV210 y uno de los protocolos descritos con anterioridad para >.
lactis, modificado convenientemente para su adaptacin a las caractersticas de
dicha bacteria. Adems, con el fin de optimizar la eficiencia de transformacin
se analizaron diversos parmetros elctricos y fisiolgicos: fase de crecimiento
del cultivo celular a partir del cual se elaboraron las clulas competentes, la
composicin del medio de cultivo, la duracin e intensidad del pulso y del
campo elctrico, etc.
El protocolo desarrollado se aplic a distintas cepas de >. garvieae obteniendo
resultados similares en todas ellas, con eficiencias de transformacin que
fluctuaron entre 10
3
y 10
5
transformantes/g ADN.

Tras la puesta a punto de un sistema de electrotransformacin que permiti
obtener eficiencias adecuadas, se utiliz el plsmido pTV408 portador del
transposn Tn917 para la construccin de genotecas de insercin por
transposicin que permitieron la identificacin de genes implicados en
diferentes funciones celulares. Los resultados obtenidos al analizar por
Southern Blot y secuenciacin las inserciones en diferentes transformantes
parecan indicar que la transposicin en el cromosoma tiene lugar al azar. Con
el fin de corroborar estos resultados se llev a cabo la seleccin de un mutante
especfico incapaz de fermentar el manitol.

El desarrollo de la electrotransformacin y de la mutagnesis mediante
transposicin de >. garvieae sienta las bases para el estudio gentico de dicho
microorganismo. Los pasos a seguir en un futuro estarn dirigidos a poner
apunto la mutagnesis de marcaje (signature-tagged mutagenesis) para la
identificacin y anlisis de genes implicados en el proceso infeccioso.
H - 193
Xui$te$ de .iar$ia en aua$ !e$iduale$ de&u!ada$ de Tene!ife% +!e$encia
de enoti&o$ y ;a&loti&o$ de .. $uo$enalis.
Abreu Acosta, N
1
; Ballart Sistach, D
1
; Leal Guio, Y
1
; Figueruelo Ojeda, E
1
;
Foronda Rodrguez, P
1
; Lorenzo Morales, J
1
; Martnez Carretero, E; Aguiar
Gonzlez, E
2
; Valladares Hernndez, B
1
.
1
1nstituto Universitario de En#ermedades 7ropicales ' &alud *R,lica de !anarias. Universidad de >a
>aguna. Avda. Astro#-sico Francisco &"nc)e$, s<n. >a >aguna. 7eneri#e. 1slas !anarias. Drganismo
Aut;nomo de 6alsas de 7eneri#e B6A>7E:C. !a,ildo 1nsular de 7eneri#e. e/mail0 na,reu%ull.es
En pases industrializados, 4iardia es uno de los protozoos ms comunes
transmitidos por el agua, y sus quistes son ms resistentes a las concentraciones
de desinfectantes utilizadas para la reduccin de la contaminacin bacteriana.
El primer objetivo de este estudio fue evaluar la presencia y prevalencia de estos
parsitos en la infraestructura que gestiona BALTEN para la reutilizacin agrcola
de las aguas residuales en Tenerife. En segundo lugar, estudiar el comportamiento
de los principales indicadores bacterianos y vricos de contaminacin fecal y su
relacin con la presencia de quistes. Por ltimo, definir los principales genotipos y
haplotipos de este parsito.
Se analizaron 143 muestras de agua residual depurada tomadas entre junio de
2002 y febrero de 2005, para coliformes fecales, Esc)eric)ia coli, enterococos,
clostridios sulfito reductores, colifagos somticos, bacterifagos ARN F-especficos
y quistes de 4iardia.
Para la identificacin de genotipos y haplotipos de 4iardia, 6 muestras se
sometieron a un mtodo de nested-PCR, en el que se obtuvo en la segunda PCR
un fragmento de 530 pb del gen de la triosafosfato isomerasa (TP). Estos
productos una vez clonados se secuenciaron en ambas direcciones. Se
determinaron las homologas con las secuencias depositadas en el GenBank y se
alinearon con stas mediante el programa CLUSTAL X. Para estudiar las
potenciales relaciones genticas entre los haplotipos, se realiz un anlisis de
median-joining network usando el programa NETWORK 3.X.
Los quistes de 4iardia fueron visualizados en 78 muestras (54,5%). En invierno
(noviembre-abril) la prevalencia fue significativamente mayor (56,5%) que en
verano (mayo-octubre) (25,5%), hecho detectado en otros pases indicando
estacionalidad. El nmero de quistes por litro (0-32) result inferior al obtenido por
otros investigadores, debido a la menor sensibilidad de la tcnica utilizada en este
estudio. De las muestras destinadas a riego agrcola slo dos fueron positivas
(8,3%). La reduccin de quistes obtenida durante el transporte, tratamiento
avanzado y almacenamiento fue del 96,2% en invierno y del 100% en verano.
No hubo relaciones significativas con los indicadores de contaminacin fecal
analizados durante el verano. En invierno el comportamiento de los quistes fue
similar a coliformes fecales, E. coli, enterococos y clostridios sulfito reductores. En
ningn caso aparecieron relaciones claras con los dos indicadores vricos
estudiados.
En las aguas residuales depuradas se detectaron los dos genotipos patgenos
humanos (A y B). En la mayora de las muestras se aisl 4. duodenalis genotipo A
(58,8%), mientras que el 41,2% de los aislados correspondieron al genotipo B,
coincidiendo con datos de talia y EEUU. Esto demuestra que la mayora de la
poblacin de Santa Cruz de Tenerife est infectada con este genotipo, como ocurre
en varios pases distribuidos por todo el mundo. Se obtuvieron 17 haplotipos
nuevos confirmndose la mayor diversidad gentica del genotipo B respecto del A.
H - 199
E$tudio de la &!e$encia de Salmonella spp en Aua$ de Yona$ de Ba6o
Natu!ale$ de la &!o"incia de C#ce!e$%
Larena MG, Vivas YG, Muoz L, Acero V.
Unidad de +icro,iolog-a de Aguas. >a,oratorio de &alud *R,lica de !"ceres. 4erencia de &alud
del Nrea de !"ceres. &ervicio ExtremeLo de &alud. 2unta de Extremadura.
monica.gutierre$%sc.=untaex.es
ntroduccin: &almonella spp presenta una alta incidencia en patologa humana
y es aislada en medios naturales (aguas de mar, aguas interiores), donde
puede constituir un riesgo de Salud Pblica para los usuarios de las mismas.
Objetivo: Estudiar, entre otros parmetros microbiolgicos, la presencia de
&almonella spp en muestras de aguas tomadas de Zonas de Bao Naturales
de tres de las cuatro reas de Salud de la provincia de Cceres, incluidas
dentro del Programa de Control de Zonas de Bao Naturales 2004 de la
Comunidad Autnoma de Extremadura.
Metodologa: Segn Norma SO 6340: 1995.
Resultados: De todas las muestras analizadas (141), el 56.7% superaba
algunos de los valores del nivel imperativo recogidos en la normativa vigente
(R.D. 734/1988) y en un 46.8% se detect &almonella spp. Por reas de Salud,
la prevalencia de este microorganismo fue: 93.1% en el rea de Navalmoral,
38.0% en el rea de Plasencia y 29.6% en el rea de Coria. En Zonas de Bao
censadas oficialmente, un total de cuatro en la provincia de Cceres, en el
45.3% de las muestras analizadas se aisl e identific &almonella spp.
Discusin: La presencia de este microorganismo en las muestras analizadas es
ms elevada de la esperada, debido posiblemente a vertidos incontrolados en
los cauces fluviales, de aguas residuales procedentes de actividades humanas,
recreativas y/o industriales. Todo ello reduce la calidad de las aguas de las
Zonas de Bao adquiriendo mucha ms importancia, cuando los niveles de
este patgeno son elevados, o bien dependiendo del tipo de &almonella spp
que se encuentre presente en estas aguas, circunstancia que desconocemos
con los datos actualmente disponibles.
Conclusiones: ncidir en adoptar medidas protectoras de estas Zonas de Bao
Naturales junto con un mayor control de los vertidos a los cauces naturales;
Aislar y tipificar &almonella spp en este tipo de aguas para poder establecer
una posible relacin entre las cepas de origen natural y las cepas de origen
clnico; por ltimo desarrollar mtodos de anlisis que permitan cuantificar este
patgeno en aguas.
Agradecimientos: A todas las personas implicadas en el desarrollo y ejecucin
del Programa de Control de Zonas de Bao Naturales 2004 de la Comunidad
Autnoma de Extremadura.
H - 204
Re$&ue$ta :uimio$en$o!ial de &!oto)oo$ bacte!,"o!o$ f!ente a
com&ue$to$ &!oducido$ en la inte!accin &!oti$ta=bacte!ia
Txakartegi, A., Ayo, B., Anderson, R., Artolozaga, ., riberri, J.
(pto. 1nmunolog-a, +icro,iolog-a ' *arasitolog-a. Facultad de !iencia ' 7ecnolog-a. Universidad
del *a-s Vasco. Apdo. 644.48080 6il,ao. #,c))ea%lg.e)u.es
Las comunidades de bacterias y protozoos no se encuentran uniformemente
distribuidas en el espacio acutico. La existencia de focos dispersos de materia
orgnica en el sistema provoca la acumulacin de bacterias en su entorno.
Dado que los protozoos son activos bactervoros, es de esperar que a lo largo
de la evolucin hayan desarrollado mecanismos que les permitan localizar
estos focos dispersos de crecimiento bacteriano. Esta deteccin podra estar
mediada por molculas generadas durante la interaccin entre protozoos y
bacterias.
En el presente trabajo se contrast la hiptesis de que aminocidos que se
encuentran presentes en la pared bacteriana, y pueden acumularse en el
medio como resultado de una digestin parcial del depredador, acten como
quimioefectores atrayentes para los protozoos. Con este fin se llevaron a cabo
co-incubaciones del nanoflagelado heterotrofo ?)'nc)omonas nasuta y
comunidades mixtas bacterianas, en las que se determin la evolucin en el
tiempo de las comunidades microbianas y concentraciones de D- y L-
aminocidos libres disueltos. En una segunda serie de experimentos, se evalu
la capacidad quimiocinsica del protista para dirigirse hacia los aminocidos
ensayados.
En todos los casos, los aminocidos presentes en el medio de cultivo fueron
consumidos durante las primeras 12 horas de incubacin. Posteriormente, se
observ una notable acumulacin del aminocido Glicina asociada a elevadas
poblaciones del protista bactervoro, la cual no se observ en experiencias
control sin el depredador. Por otra parte, este aminocido gener una fuerte
respuesta quimiocinsica positiva cuando fue ofrecido a un cultivo del
nanoflagelado bactervoro. Tendencias similares aunque no tan marcadas, se
observaron para los aminocidos L-Alanina y L-Serina. Nuestros resultados
sugieren que este tipo de aminocidos, componentes principales del
peptidoglicano de paredes bacterianas, pueden acumularse bajo presin de
depredacin y ser utilizados como seales qumicas por otros bactervoros
ajenos al foco de consumo. Este mecanismo de comunicacin mediado por
compuestos qumicos supone una clara ventaja para los protistas en los
sistema acuticos espacialmente heterogneos.
H - 265
E"aluacin de medio$ de culti"o &a!a la deteccin de 3ibrio tapetis9 el
aente cau$al de la enfe!medad del anillo ma!!n en alme*a$%
Balboa, S., Beaz R., Prado, S., Vilario M.L., Barja J.L., Romalde J.L.
(epartamento de +icro,iolog-a ' *arasitolog-a. Facultad de 6iolog-a e 1nstituto de Acuicultura.
Universidad de &antiago de !ompostela. 138.. &antiago de !ompostela. E/mail0
mpromal%usc.es
La enfermedad del anillo marrn ha constituido uno de los principales
problemas limitantes del cultivo de la almeja (?uditapes decussatus y ?.
p)ilipinarum), siendo la nica patologa de etiologa bacteriana demostrada que
afecta a almejas adultas (Maes & Paillard. 1994; Borrego et al. 1996). Su
agente causal, Vi,rio tapetis, en muchos casos no se logra aislar a partir de
muestras poco contaminadas, lo que implica una infravalorizacin de la
incidencia del patgeno e impide la obtencin y caracterizacin de nuevos
aislados. Es por esto importante el disponer de un mtodo eficaz para el
aislamiento de V. tapetis. De acuerdo con resultados de estudios previos
(Bolinches et al. 1988; Castro et al. 1997) se ensayaron distintos medios de
cultivo incluyendo, tiosulfato citrato bilis sacarosa (TCBS), agar tripticasa soja
manitol al 1% de NaCl (TSAM-1), agar marino manitol (AMM), AMM
suplementado con sales biliares, agar tripticasa soja-sacarosa-bilis-
trifeniltetrazolio (TSAT) y agar marino-sacarosa-bilis-trifeniltetrazolio (AMT).
Como medio control se utiliz agar marino (AM). Se observ que V. tapetis no
crece en TCBS, TSAT, AMT ni AMM con sales biliares. El medio AMM fue el
ms eficaz en la recuperacin del patgeno. Las colonias de V. tapetis
aparecen pequeas, de bordes lisos y manitol negativas, de un color azul
oscuro en AMM, diferencindose claramente de las manitol positivas, de color
amarillo. La morfologa y color de la colonia se mantienen al cabo de los das.
Se concluye que el medio AMM al 0,005% de azul de bromotimol posee las
mismas cualidades que el AM con la ventaja de poder distinguir mejor la
morfologa de las colonias de V. tapetis e incrementar las posibilidades de
conseguir nuevos aislados. De este modo se podrn estudiar aspectos
patobiolgicos de nuevas cepas de este microorganismo con la finalidad de
aplicar medidas preventivas de transmisin de la enfermedad.
Bolinches, J., Romalde J.L. & Toranzo A.E. 1987. Evaluation of selective media
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Castro, D., Santamara, J. A., Luque, A., Martnez- Manzanares, E., Borrego,
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H - 304
Ca!acte!i)acin de un nue"o bacte!ifao &o!tado! del en stx
2g
Garca-Aljaro, C., Muniesa, M., Jofre, J., Blanch, A.R.
(epartament de +icro,iologia, Facultat de 6iolog-a, Universitat de 6arcelona, Av. (iagonal, 643
080.8 6arcelona. E/mail0 crgarcia%u,.edu
Los bacterifagos portadores del gen stx, que codifican las toxinas Shiga, han
sido identificados como uno de los principales vehculos implicados en la
transmisin horizontal de este gen, lo que habra facilitado su difusin entre
ms de 400 serotipos diferentes de Esc)eric)ia coli, e incluso entre otras
enterobacterias. Se han descrito diferentes variantes de este gen que han sido
asociadas a diferentes bacterifagos, aunque no parece que haya una relacin
constante entre el bacterifago y la variante del gen que codifican. As pues,
existe una elevada diversidad de bacterifagos que son portadores de genes
stx, as como tambin hay que sealar que se ha detectado la existencia de
bacterifagos que han perdido su viabilidad y que no son capaces de inducirse
con los mtodos clsicos. Recientemente se ha descrito una nueva variante de
toxina Shiga codificada por el gen stx
.g
, aunque hasta la actualidad no haba
sido identificado el bacterifago portador de este gen. En este estudio, se han
caracterizado dos bacterifagos portadores del gen stx
.g
, que fueron inducidos
y aislados de dos cepas de Esc)eric)ia coli serotipo O2:H25, que fueron
aisladas a partir de dos muestras de agua residual de dos mataderos distintos.
Estos bacterifagos fueron transducidos a una cepa de &)igella sonnei. Los
transductantes adquirieron la capacidad de producir la toxina Shiga. Estos
bacterifagos presentaron un patrn de restriccin de ADN similar y un mismo
espectro de huspedes. Los estudios de microscopia electrnica mostraron
bacterifagos con cpsides hexagonales regulares y colas cortas, similares al
bacterifago 933W. Sin embargo, a partir de los estudios de hibridacin
cruzada con el ADN de los diferentes bacterifagos, se observ que los
bacterifagos portadores del gen stx
.g
no estn altamente relacionados con el
bacterifago 933W.
H - 305
E"aluacin de la &e!$i$tencia de la$ &oblacione$ de %ifi$obacterium Nin
situO en aua de !,o mediante t'cnica$ molecula!e$ y de culti"o%
Bonjoch X, Lucena F y Blanch AR.
(epartament de +icro,iologia, Facultat de 6iologia. Av.< (iagonal 643 080.8.6arcelona. E/mail0
x,on=oc)%u,.edu
El gnero 6i#ido,acterium se ha propuesto como indicador del origen de la
contaminacin fecal, ya que algunas de sus especies se han asociado
exclusivamente a origen fecal humano, y otras a animales de sangre caliente.
La disponibilidad de una elevada concentracin de bifidobacterias en las heces
(10
9
-10
10
UFC/g) facilita su deteccin en dicho tipo de contaminacin. Adems,
su fisiologa anaerobia, sus requisitos nutricionales complejos y la inhabilidad
de multiplicarse por debajo de los 30C hacen poco probable su reproduccin
en el medio extraentrico. Existe todava un desconocimiento sobre su
persistencia en el medio ambiente. Por esta razn en este estudio se analiz la
persistencia tanto de bifidobacterias ambientales como de cepas tipo de
6i#ido,acterium conjuntamente con otros indicadores de la contaminacin fecal
(coliformes fecales, enterococos y esporas sulfito-reductoras de clostridios). El
anlisis de las bifidobacterias se realiz con tcnicas moleculares y tcnicas de
cultivo. La persistencia de las especies de 6. adolescentis y 6. dentium
descritas como indicadoras del origen humano de la contaminacin fecal, se
valor mediante iniciadores especficos del gen del 16S rRNA con la tcnica de
la PCR en tiempo real. Se valor la persistencia de las bifidobacterias mediante
medios selectivos. Estas dos tcnicas mostraron unas enumeraciones
significativamente diferentes, el recuento de bifidobacterias mediante la PCR
en tiempo real fue mucho mayor que con el medio selectivo Beerens. Tambin
se detect una diferencia significativa en los recuentos de las diferentes
poblaciones bacterianas analizadas en las diferentes estaciones. En verano
todas las poblaciones analizadas presentaron una persistencia ms baja que
no en invierno, tanto con los anlisis moleculares como con las tcnicas de
cultivo. El gnero 6i#ido,acterium en todos los casos fue la poblacin que
present una persistencia ms baja, con unas T
90
de 15h a 20h en invierno y de
7h a 10h en verano mediante tcnicas de cultivo. Las T
90
obtenidas mediante la
PCR en tiempo real fueron de 100h (invierno) y 40h (verano). Concluyendo, el
gnero 6i#ido,acterium resulta un buen indicador del origen de la
contaminacin fecal en aguas con aportaciones elevadas y recientes de dicha
contaminacin. Ahora bien, su baja persistencia en las aguas ambientales
comporta una desventaja para su uso como marcador cuando la contaminacin
fecal no es reciente.
H - 314
E"aluacin de m'todo$ molecula!e$ &a!a la dete!minacin del o!ien de
la contaminacin fecal en aua$ ba$ado$ en la deteccin de dife!ente$
!u&o$ bacte!iano$%
Ballest, E., Bonjoch, X. y Blanch, A.R.
(epartament de +icro,iologia, Facultat de 6iolog-a. Av. (iagonal 643 080.8, 6arcelona. E/mail0
e,alleste%u,.edu
El gnero 6i#ido,acterium posee las caractersticas fundamentales de un
microorganismo indicador de contaminacin fecal en aguas. Se ha descrito que
diversas especies de 6i#ido,acterium se encuentran exclusivamente en
intestinos de humanos mientras que otras solo se encuentran en animales, y
como consecuencia se han propuesto como potenciales marcadores para la
determinacin del origen de la contaminacin fecal en aguas. El uso de
tcnicas moleculares elimina las dificultades relacionadas con su cultivo que
limitan el uso de las bifidobacterias como indicadores. Se ha adaptado una
electroforesis de geles de gradiente desnaturalizante (DGGE) para detectar las
especies de bifidobacterias en muestras de aguas residuales sin la necesidad
de realizar un cultivo.Se describieron distintos patrones para cada una de las
diferentes aguas residuales que nos permitieron su comparacin para valorar el
origen de la contaminacin fecal en aguas. Se compararon los patrones
obtenidos con la DGGE, con otras tcnicas moleculares de deteccin del origen
fecal de la contaminacin detectando el grupo 6acteroides/*revotella utilizando
fragmentos especficos del 16S ARNr en cepas de origen humano y en otras de
origen animal, y la deteccin de una protena de superficie de Enterococcus
#aecium (esp) descrita como especfica de contaminacin fecal humana. Se
obtuvieron unos perfiles de DGGE para 6i#ido,acterium distintos entre los
orgenes de la contaminacin fecal. Se observ una elevada homogeneidad de
patrones de bandas de DGGE para las muestras de aguas residuales urbanas
(mayoritariamente de origen humano), y un nico patrn para las muestras de
aguas residuales de origen exclusivo avcola. Se detect una diversidad de
patrones cuando las muestras procedan de aguas residuales de origen bovino
o porcino. Los distintos patrones de DGGE permiten una diferenciacin del
origen fecal de las muestras. Se determin un bajo porcentaje de acierto para
las tcnicas moleculares de los grupos 6acteroides/*revotella y de
Enterococcus con respecto a los resultados mediante los patrones de DGGE
de las bifidobacterias.
H - 315
E$t!uctu!a y din#mica del fito&lancton en la launa de Sta% Olalla 5+a!:ue
Nacional de Do6ana7
Lpez-Archilla, A.. y Guerrero, M C.
(pto. Ecolog-a. Facultad de !iencias. Universidad Aut;noma de +adrid. !anto,lanco .8049. e/
mail0 ana,el.lope$%uam.es
Sta. Olalla es una laguna hipognica, prcticamente permanente y de carcter
naturalmente eutrfico, situada en el Parque Nacional de Doana. A lo largo de
24 meses (Febrero 1998 a Febrero de 2000) se realiz un seguimiento de su
comunidad fitoplanctnica, junto con diferentes parmetros fisico-qumicos
(volumen de la laguna, zona euftica, PAR, pH, conductividad, nitrgeno
inorgnico y fosforo reactivo soluble PRS-). Las especies dominantes, tanto
en trminos de abundancia como de biomasa (estimada como biovolumen),
fueron cianobacterias, especialmente Ap)anot)ece clat)rata, >imnot)rix sp. y
!)roococcus dispersus. Estos productores constituyeron ms del 80% de la
biomasa fitoplanctnica mientras que el siguiente grupo en importancia, las
clorofitas, slo aport el 18 %. El biovolumen fue incrementndose a lo largo
del periodo de estudio, desde valores mnimos de 0.5 mm
3
L
-1
en Febrero de
1998 a mximos de 147.5 mm
3
L
-1
en el verano de 1999. Despus de este
periodo la biomasa decay pero mantenindose en valores intermedios en
torno a los 60 mm
3
L
-1
, incluso durante el invierno. El anlisis de regresin ha
mostrado como variables predictoras de la biomasa al volumen lagunar, la
profundidad media y la relacin N/P (R
2
=0.854; p=0.000;
biovolumen=60.99+0.841N/P-166.7Z
med
+0.000108Volumen). El ndice de
diversidad de Shannon y Wiever muestra valores bajos de media (1.70.78
bits/mm
3
) aunque con un mximos de 3.3 bits mm
-3
en marzo de 1998. Las
distintas especies integrantes del fitoplancton han mostrado cierta tendencia a
asociarse en grupos en diferentes periodos. Siguiendo la clasificacin de
asociaciones funcionales de Reynolds et al. (2002), el primer periodo fue
dominado por *ediastrum, &cenedesmus y !)lorella, integrantes del grupo 3.
Un segundo periodo estuvo dominado por especies del grupo M (Ap)anot)ece
y Ap)anocapsa) y el tercer periodo por integrantes del grupo S?
(mayoritariamente >imnot)rix).

Reynolds, C.S.; Huszar, V.; Kruk, C; Naselli-Flores, L. y Melo, S. (2002).
7oAards a #unctional classi#ication o# t)e #res)Aater p)'toplanOton. J. Plakton
Research. 24: 417-428.

H - 317
E"aluacin in vitro de la $u$ce&tibilidad de bacte!ia$ &otencialmente
&!obitica$ f!ente a dife!ente$ aente$ antimic!obiano$
Daz-Rosales, P., Chabrilln, M., Tapia-Paniagua, S.T., Len-Rubio, J.M.,
Martnez-Manzanares, E.
(epartamento de +icro,iolog-a. Facultad de !iencias. Universidad de +"laga. !ampus de
7eatinos. .901 +"laga. e/mail0 pdrosales%uma.es
El control de las patologas bacterianas es uno de los principales problemas
que afecta a la industria acucola. Las enfermedades de peces pueden ser
controladas por quimioterpicos, vacunacin, inmunoestimulantes y probiticos.
El uso de quimioteraputicos es el ms extendido por lo que es importante
conocer el patrn de resistencia y susceptibilidad de posibles microorganismos
potencialmente probiticos frente a un agente antimicrobiano en concreto. De
este modo podra combinarse los efectos positivos del probitico sobre la salud
del pez, as como el tratamiento antibitico frente a alguna posible patologa
infecciosa que pudiera aparecer.
En este trabajo se ha estudiado el comportamiento de 25 aislados
potencialmente probiticos frente a 6 agentes antimicrobianos de uso en
acuicultura. Las cepas probadas procedan de diferentes tejidos de dorada
(piel, branquias e intestino) y fueron seleccionadas tras ensayos previos in vitro
cuyos resultados sugirieron su utilizacin como potenciales probiticos. La
actividad de los agentes antimicrobianos fue determinada in vitro por la tcnica
de difusin en disco, as como por la concentracin mnima inhibitoria (C.M..).
Para el mtodo de difusin en disco cultivos ajustados al 8 MacFarland fueron
sembrados en agar Meller-Hinton suplementado con 15 g/l de NaCl. Los
discos de antibiticos testados fueron: cido oxolnico (2 mg), ampicilina (10
mg), enrofloxacina (15 mg), flumequina (30 mg), oxitetraciclina (30 mg) y
tetraciclina (30 mg). Para la determinacin de la C.M.. cultivos en caldo de
tripticasa de soja salino fueron inoculados con las diferentes concentraciones
de antibiticos e incubados en constante agitacin. Los resultados se
observaron transcurridas 24 h de incubacin a 22 C.
Se observ una distribucin bimodal en los datos obtenidos con los tamaos de
los halos de inhibicin, aparecan grupos de aislados resistentes, con menor
tamao de halo, as como sensibles que presentaron mayores dimetros. Lo
mismo para la C.M.., pero de manera inversa. Se estableci la relacin lineal
entre el dimetro del halo de inhibicin y el log
2
C.M.., as como el coeficiente
de correlacin. El antibitico frente al cual se detect un mayor porcentaje de
resistencia fue para la enrofloxacina (91,66%), mientras que la tetraciclina fue
el que menor nmero de aislados presentaron resistencia (24%). Si
comparamos con el otro estudio hecho en paralelo para cepas de
*)oto,acterium damselae subsp. piscicida nos encontramos, primero, que los
porcentajes de resistencia de las bacterias potencialmente probiticas son
mayores. Y segundo, el patrn de resistencia/susceptibilidad de los probitiicos
es a la inversa que el presentado por *. damselae subsp. piscicida.
A la hora de la seleccin de microorganismos como potenciales probiticos es
importante determinar su patrn de resistencia y susceptibilidad frente a los
agentes antimicrobianos utilizados en las piscifactoras, para evitar la prdida y,
por tanto, la eficacia del tratamiento probitico.
H - 340
Medio de culti"o a&!o&iado &a!a en$ayo$ Nin vitroO de $u$ce&tibilidad del
&ateno de &ece$ 6enacibaculum maritimum
Avendao-Herrera R, rgang R, Romalde JL, Magarios B y Toranzo AE
(epartamento de +icro,iolog-a ' *arasitolog-a, Facultad de 6iolog-a e 1nstituto de Acuicultura.
Universidad de &antiago. 138. &antiago de !ompostela, EspaLa. E/mail0mpaet=l,%usc.es
7enaci,aculum maritimum (antes Flexi,acter maritimus) es una bacteria
filamentosa agente causal de la tenacibaculosis marina, una enfermedad
ulcerativa que afecta al cultivo de importantes especies de peces marinos. Sin
embargo, la recuperacin del patgeno desde los peces enfermos es difcil, ya
que la bacteria tiene un fastidioso crecimiento requiriendo de medios de
cultivos bajos en nutriente y preparados con agua de mar.
En el presente trabajo se han comparado los medios de cultivos Anacker y
Ordal (AOA), Agar Marino (AM) y Flexi,acter maritimus (FMM) con la versin
diluida de Mueller-Hinton (DMHA) recomendada por el National Committee for
Clinical Laboratory Standards (NCCLS) para el mtodo de difusin en placas y
para calcular la concentracin mnima inhibitoria (CM) de 7. maritimum con
cinco diferentes agentes antimicrobianos usando E-test. Los primeros intentos
de crecimiento de 32 aislados de este patgeno en cada medio mostr que
ninguna cepa creci en DMHA, mientras los restantes medios proporcionan un
crecimiento adecuado de las bacterias. Los ensayos de susceptibilidad a los
agentes antimicrobianos usando AOA, AM y FMM demostraron que las cepas
de 7. maritimum presentan un patrn similar de susceptibilidad, siendo
resistentes a cido oxolnico y altamente sensibles a amoxicilina y
trimethoprim-sulphametoxazole, cuyos valores de E-test varan entre 0,064 a
0,75 g ml
-1
y 0,006 a 1,5 g ml
-1
, respectivamente. Con respecto a
enrofloxacina y oxitetraciclina, estos compuestos mostraron halos de inhibicin
y valores de CMs significativamente menores en AM que en los otros medios
evaluados.
En conclusin, slo el medio FMM proporciona zonas de inhibicin claras, bien
definidas con un rpido crecimiento para todas las cepas despus de 24 h de
incubacin, tanto en los ensayos de difusin en placa como en E-test.Adems,
este medio de cultivo preparado con sal de mar comercial, en vez de agua de
mar, es tambin apropiado para el aislamiento y su uso en ensayos de
susceptibilidad de 7. maritimum.
H - 341
+!e$encia de mecani$mo$ de ca&tacin de ;ie!!o en Pseu$omonas
anguilliseptica
Castro N, Magarios B, Avendao-Herrera R, Osorio C y Toranzo AE
(epartamento de +icro,iolog-a ' *arasitolog-a, Facultad de 6iolog-a e 1nstituto de Acuicultura.
Universidad de &antiago. 138. &antiago de !ompostela EspaLa. E/mail0 nurili%)otmail.com
*seudomonas anguilliseptica ha sido identificada como el agente etiolgico de
la pseudomonadiasis. Esta enfermedad se describi por primera vez en
anguilas japonesas cultivadas y, desde entonces, se ha aislado a partir de otras
especies de peces de gran importancia econmica como anguila europea,
salmnidos, lubina, dorada, rodaballo y besugo.
Hasta la fecha, son escasos los trabajos realizados sobre la patobiologade *.
anguilliseptica. Solamente existen especulaciones sobre el posible papel de
algunas exoenzimas y la presencia de material capsular en los mecanismos de
patogenicidad.
En este trabajo se han caracterizado, por primera vez en *. anguilliseptica, los
sistemas de captacin de hierro dependientes e independientes de quelantes
que constituyen factores de virulencia de reconocida importancia en otros
microorganismos patgenos de peces.
Este trabajo se realiz con aislados de *. anguilliseptica de distinto serotipo,
origen geogrfico y fuente de aislamiento. Todas las cepas fueron capaces de
crecer en presencia de los quelantes de hierro EDDHA y 2,2'-dipyridil, as como
de producir siderforos tanto en medio slido como lquido. Sin embargo, los
ensayos de alimentacin cruzada y las pruebas bioqumicas realizadas no
mostraron presencia de compuestos fenlicos y/o hidroxamatos en los
sobrenadantes de los cultivos bacterianos. Todas las cepas fueron capaces de
utilizar grupos hemo, hemina o hemoglobina, as como citrato frrico amnico
comonicas fuentes de hierro.
Estos resultados sugieren que en *. anguilliseptica existen, al menos, dos
sistemas de captacin de hierro, uno dependiente de siderforos yotro
alternativo no mediado por estos compuestos, los cuales podran jugar un
papel importante en la patogenicidad de esta especie bacteriana.
H - 345
E"aluacin del CAM+ te$t !e"e!$o &a!a la confi!macin de 'lostri$ium
perfringens en aua$%
Lobato Alvarez M J, Bances Gonzlez M, Gutirrez Gonzlez M J, Gonzlez
Hevia M A
>a,oratorio de &alud *R,lica del *rincipado de Asturias. !amino de ?u,-n s<n. 33011 Dviedo.
Asturias. m=osela%princast.es.
La Directiva 98/83/CE relativa a la calidad de las aguas destinadas al consumo
humano contempla, entre los parmetros que deben de realizarse, el recuento
de !lostridium per#ringens incluidas sus esporas. El objeto de este trabajo es la
evaluacin de un mtodo de confirmacin de esta especie que resulte sencillo y
rpido en su ejecucin.
La tcnica de CAMP test para !lostridium per#ringens es la misma que la
utilizada para otros microorganismos como >isteria monoc'togenes. En este
caso se utiliza la bacteria &treptococcus agalactiae (Landfield grupo B) para
inducir hemlisis sinrgica con el !. per#ringens productor de -toxina, cuando
este se enfrenta al estreptococo en ngulo de 90 grados (a 1-2 mm de
distancia) en placas de agar sangre de cordero. Un resultado positivo se
identifica como una zona de hemlisis amplificada en forma de punta de flecha
redonda despus de 24 horas de incubacin en anaerobiosis.
En total se estudiaron 124 cepas, 16 cepas de coleccin procedentes de
Centro Espaol de Cultivos Tipo (CECT) del gnero !lostridium (nueve de ellas
eran de la especie !lostridium per#ringens y siete !lostridium de otras
especies) y el resto aislamientos del gnero !lostridium en el medio TSC con
cicloserina de las aguas analizadas en el Laboratorio.
Las cepas de coleccin fueron procesadas siguiendo las indicaciones de
reconstitucin del liofilizado del CECT. Las cepas salvajes se aislaron
siguiendo el protocolo del borrador de la Norma SO/CD 6481-2 de 2002. Se
describieron las distintas morfologas de las colonias en TSC y una colonia de
cada tipo se pas a medio de Columbia Agar Sangre de cordero (Bio-Merieux)
en aerobiosis y anaerobiosis para obtener cultivos puros y anaerobios estrictos.
Se comprob la morfologa de todas las cepas en estudio mediante la tincin
de Gram y a todas aquellas colonias bacilos gram positivos se realizaron las
pruebas de identificacin indicadas en la Norma SO 7937:2004 y el CAMP
test. Se consider !. per#ringens todas aquella cepas que cumplan los
requisitos de la Norma: motilidad negativa, reduccin de nitratos, licuefaccin
de la gelatina y lactosa positivos y produccin de gas y SH
2
en medio de
lactosa-sulfito.
La sensibilidad del CAMP test fue de un 100%, su especificidad de 95,12%, un
2,35% de falsos positivos y un 0% de falsos negativos.
A la vista de estos resultados el CAMP test reverso se considera como un
mtodo vlido de confirmacin del !lostridium per#ringens aislados en aguas
continentales, es fcil de realizar y econmico, ya que con solo una placa de
agar sangre se pueden realizar al menos cinco test. Despus de 24 horas de
incubacin el test se puede evaluar sin necesidad de ms preparacin y
materiales.
H - 347
Di"e!$idad mic!obiana de manantiale$ mine!omedicinale$ bica!bonatado$
c#lcico$ y $dico$%
Mosso, M. A., de la Rosa, M. C., Snchez, M. C. y Rodrguez, C.
(epartamento de +icro,iolog-a 11. Facultad de Farmacia. U!+. +adrid B.8040C.
e/mail0 a.mossoromeo%#arm.ucm.es
Los manantiales mineromedicinales pueden contener diversos
microorganismos autctonos y alctonos segn las caractersticas fsico-
qumicas del agua y el grado de proteccin de los acuferos. En este trabajo se
han estudiado en tres pocas distintas del ao, los microorganismos de inters
sanitario y ecolgico del punto de emergencia de dos manantiales
mineromedicinales "San Camilo y "Baos del Balneario Cervantes, situado en
Santa Cruz de Mudela (Ciudad Real). Las aguas emergen entre 15,5-17,5 C y
son bicarbonatadas clcicas y sdicas.
El nmero de microorganismos totales realizado por epifluorescencia, tiendo
con naranja de acridina, yoduro de propidio y syto 9, ha sido de 10
5
/ml, estando
en su mayora vivos (97%). El nmero de bacterias aerobias viables
hetertrofas y oligotrficas a 22 y 37 C ha sido menor de 100 ufc/ml y el de
esporuladas menor de 5 ufc/ml. No se han detectado microorganismos
patgenos (&almonella, *. aeruginosa, &. aureus, >egionella) ni indicadores de
contaminacin fecal.
En la deteccin de los microorganismos que participan en los ciclos
biogeoqumicos, se han encontrado microorganismos amilolticos, proteolticos
y amonificantes en nmero alto (NMP 10
4
/100 ml), sulfato-reductores en
nmero medio (NMP 10
2
/100ml) y celulolticos y halfilos en nmero muy bajo
(menos de 10/100 ml). No se han detectado microorganismos nitrificantes,
oxidantes del azufre, del hierro ni actinomicetos.
Los hongos presentes en un nmero pequeo (menos de 20 ufc/100ml) se han
identificado como: *enicillium, Acremonium, Aureo,asidium y +ucor.
Se han aislado 75 cepas de bacterias hetertrofas que corresponden,
principalmente, a bacilos Gram negativos (55,9%) fermentadores (30,2%) y no
fermentadores (25,7%), seguido de bacilos Gram positivos (24,5%) y cocos
Gram positivos (15%). Las bacterias Gram negativas constituyen la microbiota
predominante en manantiales frios e hipotermales (Leclerc, 2002). Los gneros
ms frecuentes han sido: 6urO)olderia y &erratia (13,3%), &tap)'lococcus
(10,6%), 6acillus y !lostridium (8,2%) y Aeromonas (6,3%). El manantial San
Camilo ha presentado una mayor diversidad de especies. Algunos de los
gneros y especies aislados en estos manantiales tambin se han encontrado
en otros manantiales bicarbonatados (de la Rosa et al., 2004).

-Leclerc, H. and Moreau, A. 2002. FE+& +icro,iol. ?ev. 26: 207-22.
-De la Rosa M. C. et al. 2004. An. ?. Acad. :ac. Farm. 70: 521-542.
H - 349
Ta&ete$ mic!obiano$ de manantiale$ bica!bonatado$ c#lcico$ y $dico$
Snchez, M.C., Rodrguez, C., Mosso, M.A. y de la Rosa, M.C.
(epartamento +icro,iolog-a 11. Facultad Farmacia. U!+. +adrid B.8040C. maria[s,%ole.com
Se han estudiado los tapetes microbianos de dos manantiales hipotermales
bicarbonatados clcicos y sdicos, denominados "San Camilo y "Cervantes y
localizados en el Balneario Cervantes, en el municipio de Santa Cruz de
Mudela, Ciudad Real. El uso de estos manantiales se remonta al siglo XV,
cuando la Orden de los Camilos comenz a utilizar sus aguas por sus
propiedades beneficiosas para la salud. Estos manantiales poseen las
caractersticas fisicoqumicas adecuadas para la formacin de comunidades
microbianas denominadas tapetes microbianos. Se han realizado estudios en
fresco de los mismos por diferentes tcnicas de microscopa, as como el
cultivo en los medios Das (1996) para las bacterias oxidantes del azufre y
Duchon-Miller (2002) para las bacterias del hierro, incubando a 30C, durante
30 das.
El tapete microbiano epiltico denominado "Fuente San Camilo se desarrolla
en la fuente del manantial del mismo nombre, en la pared del vaso donde cae
el agua. Presenta color verde oscuro, tacto gelatinoso y consistencia media.
Est formado, principalmente, por diatomeas (:avicula, Fragilaria y !'m,ellaC,
cianobacterias filamentosas (Dscillatoria ' >'ng,'a) y esfricas (4loeocapsa),
y en menor proporcin algas. Adems se han detectado por cultivo, en
asociacin con los microorganismos descritos, bacterias que oxidan el azufre y
bacterias del hierro (>eptot)rix ' &p)aerotilus).
En el manantial Cervantes se han tomado muestras del tapete que se forma al
aire libre en la salida de la canalizacin del agua utilizada en los baos. El
tapete posee una estructura laminar de gran consistencia con tres capas
diferenciadas. La superficie presenta coloracin verdosa, donde predominan
algas verdes (!osmarium) y diatomeas, junto con cianobacterias (Dscillatoria y
*seudana,aenaC y bacterias fototrofas filamentosas (!)loro#lexus). La zona
intermedia, de color marrn-anaranjado, presenta un incremento en
cianobacterias (&pirulina y :ostoc) acompaadas del resto de microorganismos
descritos en la zona superior, junto con una menor presencia de algas. En la
zona ms profunda, de color negro, destaca la presencia de cianobacterias
(*seudana,aena) y bacterias sulfato-reductoras. En el cultivo del medio Das se
ha encontrado 7)iot)rix junto con bacterias oxidantes del azufre y &p)aerotilus
en el cultivo de las bacterias del hierro.

- Das et al. (1996). 1nt. 2. &'st. 6acteriol. 46: 981-987
- Mosso et al. (2002). An. ?. Acad. :ac. Farm. 68: 381-405
+icro,iolog-a del +edio Acu"tico ..
H - 356
Inacti"acin de indicado!e$ bacte!iano$ y ",!ico$ de contaminacin en
una &lanta &iloto de de&u!acin de aua$ &o! el m'todo NDe&u!acin
Simbitica]O
Sola Castejn, F. y Torrella Mateu F.
(epto. 4en. ' +icro,iolog-a, Fac. 6iolog-a, Universidad de +urcia, 30100 +urcia. torrella%um.es
La "Depuracin Simbitica es un mtodo de depuracin de aguas residuales
que combina un sistema de diseo especial por percolacin concomitante al
establecimiento de reas verdes sobre la superficie de la depuradora. La planta
piloto objeto de este estudio se construy en el Campus de Espinardo de la
Universidad de Murcia y estaba compuesta por pares de columnas dispuestas
en serie conformando un sistema de 4 fases.
En este trabajo se describen los resultados de un estudio de la capacidad
inactivadora de indicadores bacterianos de contaminacin (coliformes totales
(CT) y fecales (CF)) y vricos (colifagos somticos y especficos de pili) a lo
largo de las 4 fases del proceso depurador. Los anlisis microbiolgicos se han
completado con medidas fsico-qumicas, as como observaciones al
microscopio ptico y electrnico.
Se observaron dinmicas de inactivacin de tipo exponencial. En el caso de las
bacterias coliformes, la inactivacin ms acusada tuvo lugar en la Fase 1,
mientras que respecto de las partculas virales, la mayor inactivacin relativa
tuvo lugar en las Fases 1 y 2. Se llevaron a cabo diversas experiencias
sometiendo al sistema a distintas cargas contaminantes mediante la variacin
de los caudales tratados. Las reducciones de CF fueron muy elevadas, con
descensos de 4 log en la mayora de los casos. En el efluente final (Fase 4) se
detectaron como mximo niveles de n x 10
2
unidades viables de CF en 100 ml
(menor depuracin) o ausencia de los mismos en este volumen de muestra,
dependiendo de la carga microbiana del influente. Respecto a la inactivacin de
las partculas vricas, se observ un descenso de 2,5 a 3 log, detectndose
entre 10
1
y 10
2
ufc/ml de colifagos somticos o de pili en el efluente final,
dependiendo de la carga del influente. Se ha realizado un estudio comparado
entre los diversos tipos de calvas y la naturaleza de los virus que las producen,
en especial por lo que respecta a las cepas WG49 y HS(pFamp)R que son
usadas para el recuento de colifagos especficos de pili (leviviridae) con objeto
de ajustar los valores de los recuentos a los tipos vricos.
El seguimiento de los parmetros fsico-qumicos realizado en el sistema
mostr un claro aumento de la concentracin del oxgeno disuelta (hasta 8,0
ppm en Fase 4) y un drstico descenso de turbiedad (< 1 NTU en Fase 4). Los
resultados se discutirn en el contexto de la capacidad inactivante de
indicadores microbianos por sistemas biolgicos de depuracin de aguas
urbanas.

Agradecimientos: Vicerrectorado de Planificacin e nversiones, Universidad de
Murcia; Empresa Golftrat SA.
H - 359
E"aluacin in vitro de la $u$ce&tibilidad de Photobacterium $amselae
$ub$&% piscici$a f!ente a dife!ente$ aente$ antimic!obiano$
Daz-Rosales, P., Tapia-Paniagua, S.T., Rico, R.M., Arijo, S., Martnez-
Manzanares, E.
(epartamento de +icro,iolog-a. Facultad de !iencias. Universidad de +"laga. !ampus de
7eatinos. .901 +"laga. e/mail0 silvanateresa.%)otmail.com
Las patologas bacterianas son el principal factor limitante de la produccin
acucola. Una las enfermedades que produce ms importantes prdidas
econmicas en cultivos pisccolas marinos es la pseudotuberculosis. Los
mtodos quimioteraputicos son muy utilizados en el control de la enfermedad,
sin embargo, el tratamiento antibitico ser efectivo siempre y cuando el
patgeno sea susceptible al agente antimicrobiano y no desarrolle resistencia.
Por tanto es necesario evaluar la susceptibilidad y resistencia as como el
desarrollo de sta frente a un agente antimicrobiano.
En este trabajo se ha estudiado el comportamiento de 38 diferentes aislados de
*)oto,acterium damselae subsp. piscicida, procedentes de diferentes especies
pisccolas cultivadas frente a 6antibiticos de uso en acuicultura. La actividad
de los agentes antimicrobianos fue determinada in vitro por la tcnica de
difusin en disco, y valorando su concentracin mnima inhibitoria (C.M..). Para
el mtodo de difusin en disco cultivos ajustados al 8 MacFarland fueron
sembrados en agar Meller-Hinton suplementado con 15 g/l de NaCl. Los
discos de antibiticos probados fueron: cido oxolnico (2 mg), ampicilina (10
mg), enrofloxacina (15 mg), flumequina (30 mg), oxitetraciclina (30 mg) y
tetraciclina (30 mg). Por otro lado, para la determinacin de la C.M.. fueron
inoculados cultivos en caldo de tripticasa de soja salino con las diferentes
concentraciones de antibiticos ya citados e incubados en constante agitacin.
Los resultados se observaron trancurridas 24 h de incubacin a 22 C.
Los tamaos de los halos de inhibicin presentaron una distribucin bimodal,
donde grupos de aislados con los menores valores eran resistentes frente al
antimicrobiano, mientras que los que eran sensibles presentaron mayores
dimetros de halo. Lo mismo ocurra para la C.M.., pero de manera inversa. Se
estableci la relacin lineal entre el dimetro del halo de inhibicin y el log
2
C.M.., as como el coeficiente de correlacin. El antibitico frente al cual se
determin el mayor porcentaje de cepas resistentes (36,11%) fue la tetraciclina,
por el contrario, ninguno de los aislados ensayados present resistencia para la
ampicilina. Las resistencias al cido oxolnico (22,22%), tetraciclina y
oxitetraciclina (35%) nos indican que estos antibiticos resultan ineficaces
como prevencin de la pseudotuberculosis. En cuanto al mtodo de la C.M..,
se obtiene una buena correlacin con los resultados obtenidos mediante la
tcnica de difusin en disco, por lo que no se recomienda su uso por las
dificultades de la tcnica.
Tras este estudio es recomendable, para evitar la aparicin de resistencias, un
uso razonable de antibiticos para el tratamiento de enfermedades de peces.
Por ello es importante un estudio mayor del patrn de resistencia y sensibilidad
de patgenos frente a diferentes agentes antimicrobianos, as como el uso de
stos de manera controlada.
H - 363
Biodi"e!$idad de ente!obacte!i#cea$ en efluente$ $ecunda!io$ de EDAR
$ometido$ a e$t!'$ &o! clo!acin
Terradillos, A., Galofr, B., Saucedo, G., sern, A.M.*, Ferrer, D.* y Ribas, F.
Aigès de 6arcelona, A46A?. *aseo &ant 2oan 39/43 08009 6arcelona. M AgKncia de &alut
*R,lica de 6arcelona. Av.(rassanes 13/13 08001 6arcelona. gsaucedo%ag,ar.es
En ensayos interlaboratorio efectuados, de acuerdo con el procedimiento SO
17994, para evaluar la equivalencia entre el mtodo descrito en la norma SO
9308-1 para bacterias coliformes y E.coli y otros mtodos alternativos, se
utilizaron muestras obtenidas desinfectando con cloro efluentes secundarios de
EDAR. Se observ una correlacin positiva entre el porcentaje de muestras
estresadas en cada laboratorio y la ratio entre enterobactericeas indol+ y
MUG+ (b-glucuronidasa +) aisladas. De acuerdo con la norma SO 9308-1,
cualquier coliforme indol+ debera clasificarse como E.coli, pero la evidencia
experimental demuestra que slo las cepas indol+MUG+ pueden considerarse
E.coli con garantas. Ante estos antecedentes, el objetivo del presente estudio
ha sido estudiar la biodiversidad de enterobactericeas aisladas en muestras
de efluentes secundarios de distintas EDAR sometidas a estrs por cloracin.
Se ha aislado un total de 512 cepas presuntivas a partir de agar lactosa-
Tergitol-TTC (norma SO 9308-1) y se han sometrido al ensayo del citocromo-
oxidasa. Las 109cepas oxidasa+ no se consideran coliformes o
enterobactericeas. En el resto de cepas se ha efectuado el test de la
aminopeptidasa, que ha permitido desechar como no coliformes otras 4 cepas
aminopeptidasa-negativas. Las restantes 399 cepas se consideran en principio
coliformes y se han sometido a los ensayos del indol a 44C, onPG y MUG. 5
cepas onPG- tampoco se consideran coliformes. Demostrado en estudios
anteriores que la doble condicin de indol+ MUG+ (33 cepas, un 8,4 % de los
coliformes aislados) conduce a la identificacin clara como E.coli y que la doble
condicin de indol-MUG- (167 cepas, un 42,4 %) jams conduce a E.coli,
nicamente se han efectuado confirmaciones con el sistema AP 20 E de los
fenotipos indol+ MUG- (180 cepas, un 45,7 %) e indol-MUG+ (slo 14 cepas,
un 3,5 %).En comparacin con los ejercicios de equivalencia, el perfil
indol+MUG - se halla en un porcentaje superior (un 45,7 % frente a un 16,4 %)
y el perfil indol+MUG+ en un porcentaje inferior (un 8,4 % frente a un 30 %), lo
cual corrobora lo anunciado sobre los efectos del estrs por cloracin (la ratio
ndol+/MUG+ pasa de 1,44 en los ensayos de equivalencia a 4,51 en el
presente estudio).
De las 180 cepas ND+MUG-, 135 (75 %) se han identificado como Ple,siella
ox'toca, 24 (13,3 %) como *antoea spp, 2 (1,1 %) dentro del gnero
Entero,acter, 1 (0,56 %) como >eclercia adecar,ox'lata y slo una como E.coli
(identificacin tan slo aceptable).
Como conclusin a este estudio, puede afirmarse que, adems de corroborar lo
detectado en los ensayos de equivalencia en relacin con la mayor seleccin
de indol+ respecto a MUG+ en el estrs por cloracin, se han obtenido
argumentos adicionales en contra del criterio de la norma SO 9308-1 de
considerar E.coli cualquier bacterisa coliforme indol + a 44C.
H - 364
Coloni)acin de un !eacto! de biofilm &o! aua de di$t!ibucin
Aira, A.M., Saucedo, G., Galofr, B. y Ribas, F.
Aigès de 6arcelona, A46A?. *aseo &ant 2oan 39/43 08009 6arcelona. aaira%ag,ar.es
Durante un perodo de dos aos, se han colonizado con agua de la red de
distribucin un biorreactor consistente en una columna de vidrio borosilicatado
de 62 cm de longitud y 3 cm de dimetro interno rellena de bolas de vidrio de 3
mm de dimetro, conectada a un grifo mediante un tubo de silicona. El agua
circula de abajo arriba a un caudal de 4014 mL/min. Se ha estudiado la
cintica de colonizacin del biorreactor de columna tomando peridicamente
muestras de 50 bolas (superficie total de 14 cm
2
), de las cuales se eluan los
biofilms, en unas condiciones de sonicacin previamente establecidas, en
tubos de plstico estriles con 6 mL de Ringer 1/4. Se han efectuado recuentos
de bacterias cultivables en agar R
2
A (ms de 10 das de incubacin a 22C) y
recuentos de bacterias totales y viables al microscopio de fluorescencia
utilizando la tcnica de tincin live/dead (combinacin de Syto 9 que penetra en
todas las clulas bacterianas y provoca fluorescencia verde, y yoduro de
propidio, que penetra slo en las clulas con membranas daadas y las tie de
fluorescencia roja). Asimismo, las cepas aisladas en agar R
2
A se han
identificado de acuerdo con la morfologa colonial y celular, la tincin gram, la
catalasa y la oxidasa, as como el sistema AP ms adecuado en cada caso.
Tambin se han identificado cepas aisladas en agar R
2
A en el agua de entrada
y salida del biorreactor. La colonizacin se ha efectuado en las condiciones
reales de cloro de la red (por trmino medio, 0,32 mg/L a la entrada y 0,24
mg/L a la salida del reactor).
Mientras que las bacterias cultivables no empiezan a detectarse hasta el quinto
mes y alcanzan las 10
2
UFC/cm
2
a los 11 meses, los recuentos de bacterias
totales y viables, que son del mismo orden, ascienden rpidamente al nivel de
las 10
3
UFC/cm
2
al primer mes, y a los 3 meses ya se ha alcanzado el nivel
mximo de 10
5
UFC/cm
2
, mantenindose entre 10
4,5
y 10
5,5
durante todo el
tiempo del experimento. Exisaten algunas diferencias en la biodiversidad de
bacterias cultivables del biofilm y del agua de entrada y salida. Mientras que en
el biofilm existe un ligero predominio de bacterias gram-positivas (54 %) frente
a las gram-negativas (46%), este porcentaje se invierte en el agua (40%/60%
en la de entrada y hasta 28%/72% en la de salida). Adems, dentro de los
gram-positivos, predominan en el biofilm mucho ms los catalasa-positivos (13
veces ms catalasa-positivos que catalasa-negativos) que en el agua (donde
los catalasa-positivos slo representan el doble que los catalasa-negativos). En
cambio, dentro de los gram-negativos, se observa una mayor influencia del
biofilm en el agua de salida del biorreactor, puesto que en el agua de
entradapredominan los oxidasa-negativos y tanto en el biofilm como en el agua
de salida los oxidasa-positivos. Entre los gram-positivos identificados,
predominan los gneros +icrococcus y &tap)'lococcus, mientras que, entre los
Gram-negativos, los gneros 6revundimonas, &p)ingomonas,
&tenotrop)omonas, !)r'seomonas y +oraxella.
H - 365
Ecolo,a de Leionella en un aba$tecimiento de aua
Ruiz, J., Terradillos, A., srael, S., Huguet, J.M. y Ribas, F.
Aigès de 6arcelona, A46A?. *aseo &ant 2oan 39/43 08009 6arcelona m'rdinrui$%)otmail.com
Con la llegada del nuevo siglo se ha implantado el control de >egionella en la
red de distribucin de la zona metropolitana de Barcelona y, a partir de 2003,
se ha investigado el comportamiento de este microorganismo en la ETAP de
St. Joan Desp (ro Llobregat). Con el fin de mejorar la recuperacin de
>egionella, se ha puesto a punto un mtodo de anlisis alternativo, que slo
difiere en la simple incubacin de la muestra, previamente a su anlisis,
durante una semana a 37C. En las muestras sin incubacin previa, se observa
una disminucin progresiva de >egionella a medida que seavanza en el
tratamiento. As, >. pneumop)ila slo se ha detectado en el agua brutay
>egionella spp en las aguas bruta, preclorada, decantada y filtrada por arena,
pero no en el agua ozonizada, filtrada por carbn y postclorada. La
comparacin entre el mtodo de anlisis tradicional y el de preincubacin
oferece diferencias significativas, mucho ms para >.pneumop)ila que para
>egionella spp. Con la preincubacin, el serogrupo 1 pasa, en el aguia bruta,
de encontrarse en 3/19 muestras (5,3 %) a 14/19 muestras (73,7 %) y tambin
se detect en 2/19 muestras de agua preclorada. Los serogrupos 2-14, que
slo se hallaban en el agua bruta (3/19 muestras, un 15,8 %), se detectan en
18/19 muestras (94,7%) de agua bruta preincubada, en 5/19 muestras (26,3 %)
de agua preclorada e incluso en 1/14 muestras (7,1 %) de agua decantada. En
cambio, para >egionella spp. se detect el mismo nmero de muestras
positivas de agua preclorada (1), decantada (1) y filtrada por arena (2) con el
mtodo tradicional y con el mtodo de incubacin previa. No obstante, en el
agua bruta, se ha detectado en 7/19 muestras sin incubar y en 12/19 cuando se
utiliza incubacin previa. En las aguas ozonizada, filtrada por carbn y
postclorada no se ha encontrado ninguna muestra positiva ni con
preincubacin.
Se ha investigado la presencia de amebas, cultivndolas a partir de las
muestras sin preincubar, en los ltimos 6 muestreos, habindose detectado
trofozoitos en la mayor parte de los casos (75 % del total de las muestras) o, en
su ausencia, formas qustivas (en un 20 % de las muestras) y slo se ha
hallado una muestra sin amebas en las aguas preclorada y postclorada (5 %
del total de las muestras). De cualquier modo, no ha podido detectarse la
presencia de >egionella en el interior de amebas, aunque se ha observado la
presencia de clulas bacterianas en general.
En la red de distribucin, se han analizado 339 muestras, repartidas en 3 zonas
bsicas: lazona A, bajo la influencia directa de la ETAP (152 muestras); la zona
B, que puede recibir agua de la ETAP en algn momento (100 muestras); y la
zona C, donde es muy improbable que llegue agua de la ETAP (87 muestras).
Del conjunto de las 239 muestras, slo 13 han sido positivas (3,8 %): 8 de ellas
para >egionella spp, 3 para >.pneumop)ila serogrupos 2-14, una para
>.pneumop)ila serogrupo 1 y una para a la vez >.pneumop)ila serogrupo 1 y
>egionella spp.
+icro,iolog-a del +edio Acu"tico .
MICROBIOLOGA IND0STRIAL
- 48
Ai$lamiento y clonacin del en de la :uimo$ina de %ubalis arnee bubalis
en E. coli%
Vallejo, J.A.; Ageitos, J.M.; Veiga-Crespo; Poza, M. y Villa, T.G.
(epartamento de +icro,iolog-a, Universidad de &antiago de !ompostela !.*. 1306 &antiago de
!ompostela =valle=o%usc.es.
Las proteasas asprticas actan sobre la k-casena de la leche originando la
desestabilizacin de las micelas y dando lugar a la coagulacin de la leche,
efecto que es empleado para la elaboracin de masas queseras. En la
actualidad existen cuatro fuentes de produccin de cuajo destinadas a la
elaboracin de masas queseras: las reninas animales (quimosinas), extradas a
partir del prensado directo de cuajares de terneros lechales; las proteasas
asprticas microbianas, obtenidas a partir del cultivo de microorganismos tales
como ?)i$omucor mie)ei; las proteasas vegetales, como la cardosina obtenida
mediante infusiones de !'nara cardunculus y las recombinantes, construidas
mediante ingeniera gentica. En general, la incapacidad de las proteasas
animales o vegetales de cubrir las demandas actuales del mercado, ha
conducido a un aumento del inters por las proteasas microbianas o por las
recombinantes. La introduccin en el mercado de una cepa de E. coli que
contiene el gen de la quimosina bovina represent el primer eslabn de una
cadena que pretende reemplazar paulatinamente el cuajo animal por el
microbiano o por el obtenido mediante ingeniera gentica. El bfalo (6u,alus
arnee ,u,alis) lechal produce una quimosina similar a la quimosina bovina que
es capaz de originar masas queseras de gran calidad cuando se emplea como
sustrato leche de vaca o de bfala. Adems, el gen que codifica esta quimosina
guarda un alto grado de similitud con el gen de la quimosina bovina, proteasa
asprtica elegida en la industria quesera como la mejor para la fabricacin de
queso. Teniendo en cuenta que las granjas de bfalas estn prosperando en la
actualidad, se plante en este trabajo el aislamiento y la clonacin del gen de la
quimosina de 6u,alus arnee ,u,alis en E. coli como paso previo para su futura
sobreexpresin en levaduras. El gen de la quimosina de bfalo se aisl en
forma de cDNA, mediante la realizacin de RT-PCR empleando como molde
RNAm extrado a partir de tejido de cuajar de un bfalo lechal. Las parejas de
oligonucletidos empleados se disearon a partir de una secuencia del gen de
la quimosina bovina y a partir una secuencia de un gen de la quimosina de
bfalo, ambas encontradas en las bases de genes (Genbank). La amplificacin
funcion nicamente cuando se emplearon los oligonucletidos de origen
bovino, ya que la secuencia de la quimosina de bfalo descrita en las bases de
genes result estar incompleta en uno de sus extremos. El cDNA obtenido
present un 97% de homologa con el gen de la quimosina bovina. Esta
secuencia de cDNA se insert en el vector PCR Blunt TOPO (nvitrogen)
empleando el Zero Blunt TOPO PCR Cloning Kit (nvitrogen). La construccin
obtenida se analiz y se emple para transformar clulas de E. coli TOP10. Las
colonias recombinantes se seleccionaron en placas de LB con kanamicina y se
analizaron con el fin de confirmar la presencia de inserto. Finalmente, se
obtuvo una batera de colonias de E. coli portadoras del gen de la quimosina de
6u,alus arnee ,u,alis.
+icro,iolog-a 1ndustrial .81
- 49
+u!ificacin y ca!acte!i)acin de una Se!,n &!otea$a de %acillus
licheniformis &a!a la elabo!acin de ma$a$ :ue$e!a$%
Ageitos, J. M.; Vallejo, J. A.; Poza, M.; Villa, T.G.
(epartamento de +icro,iolog-a, Universidad de &antiago de !ompostela. !.*. 1306, &antiago de
!ompostela. mp=mam%usc.es
Las proteasas con capacidad coagulante sobre la leche son enzimas
ampliamente utilizadas en la industria. Desde la antigedad se han venido
utilizando enzimas naturales de origen animal y vegetal para la produccin de
queso. Actualmente, estas enzimas no pueden satisfacer las demandas del
mercado. ltimamente se han estado empleando proteasas microbianas cuya
produccin es ms sencilla y que producen diferentes acabados en las
propiedades de las masas queseras y a menor coste.
6acillus lic)eni#ormis es un microorganismo utilizado industrialmente por su
capacidad para producir grandes cantidades de diversas enzimas. Se ha
descrito que posee la capacidad de producir 25 g/L de protenas.
A partir de un nuevo aislado de 6. lic)eni#ormis se ha descrito una nueva
proteasa con capacidad de coagular la leche, originando masas queseras con
propiedades fsico qumicas y reolgicas interesantes para la industria quesera.
En este trabajo se ha purificado y caracterizado esta proteasa. Para ello, se ha
diseado una variante del mtodo descrito por Twining (1984) en la que se ha
sustituido el sustrato por k-casena, de tal modo que se aumenta la
especificidad de la reaccin, obtenindose los valores de actividad enzimtica
correspondientes nicamente a aquellas proteasas con efecto coagulante
sobre la leche. As, se ha clasificado al nuevo enzima dentro del grupo de las
sern-proteasas. Los ensayos empleando, tanto de leche de vaca como de
bfala, revelan una gran calidad reolgica en las masas queseras obtenidas.
+icro,iolog-a 1ndustrial .8.
- 154
Ca!acte!i)acin de la ce&a P. chrysogenum L.9 obtenida de la
inte!!u&cin del en lysE :ue &a!tici&a en la !uta bio$int'tica de li$ina%
Velasco T., Naranjo L., Casqueiro J., Ulln R.V., Lamas M., Teves F. y Martin
J.F.
1n,iotec. Av. ?eal 1. .4006, >e;n, EspaLa. Email0 tanveco%'a)oo.es
*enicillium c)r'sogenum utiliza la ruta del cido L--aminoadpico para formar
lisina. El c. L--aminoadpico se necesita en grandes cantidades para la
biosntesis de penicilina y es obtenido a partir de la ruta biosinttica de lisina.
En este trabajo se ha caracterizado el mutante de *. c)r'sogenum L2, un
auxtrofo de lisina deficiente en la actividad homoaconitasa. El gen l's3, que
complementa dicha mutacin, fue clonado por transformacin utilizando una
librera genmica de *. c)r'sogenum construida en un plsmido de replicacin
autnoma. El anlisis de la mutacin presente, revel la existencia de una
mutacin puntual de una G
1532
por una A
1532
. Esta mutacin est en una regin
altamente conservada adyacente a dos de los tres residuos de cistena que
actan como ligandos para unir la agrupacin hierro- azufre que requiere la
actividad de la homoaconitasa.
La cepa L2 mostr niveles de transcripcin significativamente ms altos que la
cepa control, para los genes l's1 y l's2, estos genes codifican respectivamente
la homocitrato sintasa y la -aminoadipato reductasa, enzimas implicadas en la
biosntesis de lisina.
El mecanismo exacto de accin de la protena Lys 3 mutada es an
desconocido. Parece ser que la protena Lys3 podra tener una actividad
bifuncional, de tal modo que la forma apo, de la misma, funcione como una
protena reguladora que controla la expresin de los otros genes de la ruta
biosinttica de lisina en *. c)r'sogenum.
- 168
A&licacin de ?=E lucana$a$ de 6richo$erma har0ianum MRT?G y
%acillus circulans ^L=?E en el t!atamiento de candidia$i$ "ainal%
Poza M
1
, Daz-Sarabia A M
1
, Veiga-Crespo P
1
, Vallejo J A
1
, Ageitos J A
1
, Villa T
G
1
y Torres-Labandeira J L
2
.
1
.
(epartamento de Farmacia 4al5nica, Facultad de Farmacia,
Universidad de &antiago de !ompostela, !ampus &ur 138., &antiago de !ompostela, A !oruLa.
mpmpo$a%usc.es
En los ltimos aos ha habido un aumento de infecciones fngicas tales como
la candidiasis debido a la creciente expansin de enfermedades relacionadas
con la depresin del sistema inmune. Como consecuencia, han aparecido
resistencias a los frmacos antifngicos convencionales tales como el
ketokonazol.
El enzima 1-3 glucanasa actan sobre los enlaces 1-3 de glucano de
paredes de levadura y hongos patgenos dificultando su desarrollo.
El hongo recombinante 7ric)oderma )ar$ianum MRT17, procedente de la cepa
silvestre CECT 2413, contiene en su batera cromosmica el gen de la 1-3
glucanasa integrado y sobreexpresado bajo el control del promotor constitutivo
pci1 de 7. reesei, cuando se mantiene una presin selectiva con acetamida.
Por su parte, se dispone de una coleccin de cepas de 6acillus circulans que
expresan 1-3 glucanasas cuando se inducen con paredes celulares de
levaduras.
El objetivo principal del presente trabajo consiste en combinar diferentes
concentraciones de ketokonazol y de extractos enzimticos procedentes de 7.
)ar$ianum y 6. circulans, para detener el crecimiento de !andida al,icans, con
el fin de obtener una dosis de ketokonazol efectiva menor, de tal forma que se
disminuye el riesgo de aparicin de resistencias.
Para ello, en primer lugar, se realiz un estudio de los enzimas secretados por
dichos microorganismos y se encontr que el hongo 7. )ar$ianum MRT17
produce cantidad de enzima mxima a las 80 h de crecimiento, con una Km de
2 mg/ml, una Vmx de 2500 nmol de glucosa/min mg de protena y una
temperatura ptima de actuacin de 60C.
Por su parte, la cepa WL-13 de 6. circulans demostr ser la mejor productora
de este enzima.
La combinacin de diferentes cantidades de ketokonazol, ciclodextrinas y de
los extractos enzimticos microbianos, en presencia de !andida al,icans,
revel que es posible disminuir la dosis de ketokonazol aplicada de forma
convencional, de tal forma que el riesgo de aparicin de resistencias se ve
reducido.
- 271
Cont!ol Biolico del N&itc;O de eucali&to8 O&timi)acinPAlte!nati"a$ &a!a
la &!oduccin de la e$te!a$a de Ophiostoma piceae
Barba, V., Calero-Rueda, O., Rodrguez, E., Martnez, A.T. y Martnez, M.J.
!entro de 1nvestigaciones 6iol;gicas, !&1!, ?amiro de +ae$tu 9, .8040 +adrid
Be/mail0 v,ar,a%ci,.csic.esC
El desarrollo de nuevas tecnologas menos agresivas con el medio ambiente en
la fabricacin de pastas de papel (secuencias de blanqueo TFC Totally
Chlorine Free) ha ocasionado la aparicin de una nueva problemtica en la
produccin y blanqueo de las pastas, conocida por "pitch, estrechamente
relacionada con los componentes de la fraccinextrable de la madera. La
utilizacin de lipasas comerciales (Resinasa) en el proceso de fabricacin de
pasta de conferas ha permitido disminuir los problemas de "pitch en estas
pastas, en las que predominan los triglicridos, pero no es efectiva en el caso
de madera de eucalipto (principal materia prima para la produccin de pasta de
papel en Espaa), en la que predominan los esteroles libres y esterificados.Se
ha caracterizado nueva esterasa fngica, producida por el ascomiceto
Dp)iostoma piceae, capaz de hidrolizar los steres de esteroles presentes en
los extrables de madera de eucalipto. La actividad de la enzima sobre
diferentes steres de esteroles es mayor que la obtenida con otras enzimas
comerciales. Estos resultados han abierto nuevas expectativas para el control
biolgico del "pitch en el proceso de fabricacin de pasta de frondosas, o de
conferas en cuya composicin existen altos niveles de estos compuestos.
En este trabajo se pretende optimizar la produccin de esta enzima utilizando
diferentes medios de cultivo en los que se vara la fuente de carbono y
nitrgeno, en presencia y ausencia de diferentes tipos de aceite como
inductores de esta actividad. Resultados preliminares muestran que en un
medio con patata o soja como fuente basal de nutrientes, la actividad se
incrementa respecto al medio control con glucosa,dos y tres veces,
respectivamente, y que el aceite induce en todos los casos esta actividad (10-
20 veces respecto al medio control), siendo los mejores resultados los
obtenidos en presencia de aceite de orujo. En la actualidad se est tratando de
escalar el proceso de produccin en un fermentador de 3 l de capacidad.
Adems, dado que recientemente se ha clonado esta enzima, se est tratando
de expresar este gen en la levadura *ic)ia pastoris, empleada habitualmente
para la produccin industrial de protenas de inters, con el fin de obtener
mayores niveles de expresin que en la cepa nativa que permitan comprobar la
eficiencia de la enzima en el proceso industrial.

Agradecimientos: Este trabajo se est financiando con el proyecto BO2003-
0062. V. Barba agradece su financiacin al MEC por la beca de FPU
recientemente concedida.

- 318
La cole$te!ol o-ida$a e$ un en)ima e$encial &a!a la bio$,nte$i$ del
antif(nico &ima!icina%
Mendes, M.V. (1), Antn, N. (1), Recio, E. (1), Guerra, S.M. (1), Martn, J.F.
(1,2) y Aparicio, J.F. (1,2).
B1C1nstituto de 6iotecnolog-a, 1:61D7E!, >e;n. B.CArea de +icro,iolog-a, Facultad de 6iolog-a,
Universidad de >e;n, >e;n. E/maile deg=#a%unileon.es
Las bacterias del gnero &treptom'ces producen una gran variedad de
enzimas extracelulares, algunas de importancia clnica, y en particular
colesterol oxidasas. Estas enzimas (EC 1.1.3.6) son flavoproteinas
bifuncionales, que catalizan en un nico centro activo tanto la oxidacin del
colesterol a 5-colesten-3-ona con la reduccin de oxgeno molecular a perxido
de hidrgeno, como la isomerizacin del enlace D5 para formar 4-colesten-3-
ona como producto final. Se trata de enzimas de gran aplicacin en clnica para
la determinacin de los niveles de colesterol total o libre en suero o plasma. De
un modo anlogo se utilizan tambin para el anlisis de esteroides en
alimentos, y para disminuir el contenido en colesterol de muchos productos
alimenticios.
&treptom'ces natalensis produce pimaricina, un antifngico tetraeno que se
utiliza ampliamente en el tratamiento de queratitis fngicas, as como en la
industria alimenticia para evitar la contaminacin por hongos de quesos y otros
alimentos no estriles.
La agrupacin gnica responsable de la biosntesis de pimaricina en &.
natalensis contiene un gen que codifica una colesterol oxidasa (pimE) situado
en el centro del "cluster, entre otros genes implicados en la produccin de
pimaricina. Su anlisis transcripcional sugiere que dicho gen se transcribe a
partir de un opern monocistrnico. El anlisis funcional de pimE mediante
interrupcin gnica ha revelado que realmente codifica una colesterol oxidasa
funcional. Sorprendentemente, el mutante generado tambin mostr una
perdida completa de la capacidad de produccin de pimaricina, lo que sugiere
que PimE est tambin implicada en la biosntesis del antifngico. La inhibicin
in vivo de la cholesterol oxidasa tambin tuvo como resultado una menor
produccin de pimaricina. La implicacin de este gen en ambos procesos fue
corroborada mediante complementacin en trans del mutante DPimE con
plsmidos conjugativos replicativos, restaurndose tanto la capacidad de
producir colesterol oxidasa como del polieno.

- 327
Identificacin de pim1 como !eulado! &o$iti"o de la bio$,nte$i$ de
&ima!icina en Streptomyces natalensis
Antn, N. (1), Mendes, M.V. (1), Guerra, S.M.(1), Martn, J.F. (1,2) y Aparicio,
J.F. (1,2).
B1C1nstituto de 6iotecnolog-a, 1:61D7E!, >e;n. B.CArea de +icro,iolog-a, Facultad de 6iolog-a,
Universidad de >e;n, >e;n. E/mail0 degna#%unileon.es
&treptom'ces natalensis es el productor industrial del antifngico pimaricina.
Este antibitico pertenece a la familia de los macrlidos polienos y es muy
utilizado en la industria alimentaria, especialmente en la conservacin de
quesos y otros alimentos no estriles como carnes curadas, fiambres etc.
Asimismo, se est utilizando con xito en oftalmologa, para prevenir
infecciones fngicas en los transplantes de crnea, y en el tratamiento de
queratitis del mismo origen.

La agrupacin gnica responsable de la biosntesis de pimaricina se extiende a
lo largo de unas 90 kb de ADN del cromosoma de &. natalensis, donde se han
encontrado 18 posibles marcos de lectura abiertos. Entre stos, 5 genes
codifican 5 enzimas multifuncionales componiendo la polictido sintasa de la
pimaricina. Los 13 genes restantes codifican 13 protenas adicionales que
llevan a acabo las modificaciones post-PKS del esqueleto polictido, la
exportacin y la regulacin de la expresin gnica.

La secuenciacin del extremo izquierdo de la agrupacin gnica responsable
de la biosntesis depimaricina permiti la identificacin de un gen de 915
nucletidos, pim+, situado corriente arriba del gen pim?, el regulador positivo
de la biosntesis de pimaricina. En base a homologa de secuencia, se trata de
un regulador de tipo LuxR, semejante a los reguladores de respuesta de
sistemas de dos componentes.

Con el fin de conocer la funcin del gen pim+ se realiz el reemplazamiento
gnico del mismo por un gen mutado no funcional. Para ello se realiz una
delecin del fragmento de ADN de pim+ correspondiente a la zona que codifica
para el sitio HTH de unin a ADN (388 pb), originando un salto de marco en la
lectura. Se utiliz el fago KC515 (c
+
, attP
-
) para llevar a cabo el
reemplazamiento gnico, obtenindose por doble recombinacin la cepa
mutante &. natalensis D9 con el gen pim+ alterado. Se analiz el efecto de
esta mutacin sobre la produccin de pimaricina, tanto mediante bioensayo
frente a !andida utilis como por HPLC, observndose en ambos casos una
ausencia total de pimaricina, indicando que PimM es un regulador positivo de la
biosntesis del antifngico. El anlisis de la expresin de los genes de la
agrupacin gnica de la biosntesis de pimaricina por RT-PCR revel que en &.
natalensis D9 no hay transcripcin de varios genes implicados en la biosntesis,
demostrando as que este regulador activa la transcripcin de algunos de los
genes de la agrupacin gnica.
- 366
E$tudio de enca&$ulacin y e$tabilidad de lo$ a!:ueo$oma$ obtenido$ a
&a!ti! de 4alobacterium salinarum%
Cuerda Correa, MT
1
; Gonzlez Paredes, A
1
; Medina Prez, MM
2
; Ramos
Cormenzana, A
1
; Monteoliva Snchez, M
1
.
1
(pto de +icro,iolog-aF
.
(pto de 7ecnolog-a Farmac5utica, Facultad de Farmacia, Universidad de
4ranada, !ampus Universitario de !artu=a s<n, 1801, 4ranada. anagonpar9%)otmail.com
Los liposomas son vesculas constituidas por una o ms bicapas lipdicas
concntricas formadas espontneamente. Son potenciales vehculos de
frmacos que se incorporan, segn su solubilidad, a las bicapas lipdicas o a
los compartimentos acuosos.
Las arqueas son microorganismos que se diferencian del resto por su RNA
ribosomal 16s, sus paredes celulares y sus lpidos de membrana. Se dividen en
tres grupos: halfilas extremas, metangenas, termoacidfilas. Se ha ensayado
la obtencin de liposomas a partir de los lpidos de membrana de arqueas y se
les ha denominado arqueosomas (1 y 2).
El dipropionato de betametasona presenta actividad antiinflamatoria,
antipruriginosa y antialrgica de potencia alta y vida media larga que, en
tratamientos prolongados, muestra los inconvenientes de la corticoterapia. El
sistema de transporte liposomal podra mejorar la efectividad teraputica del
corticoide y reducir simultneamente los efectos adversos sistmicos.
Tras elaborar arqueosomas a partir de los lpidos de membrana de arqueas
halfilas extremas pertenecientes a los gneros Haloarcula, Halo,acterium,
Halococcus, Halo#erax y Haloru,rum (3) y seleccionar la cepa con la cual
obtuvimos mejores resultados, nuestro objetivo fue optimizar la formulacin de
arqueosomas y liposomas para la encapsulacin del principio activo (p.a.)
seleccionado y realizar un estudio comparativo de la estabilidad de las
vesculas obtenidas con diversas formulaciones.
Se han ensayado distintas condiciones para la elaboracin de los arqueosomas
y liposomas observndose que la proporcin "lpidos:p.a. y el tiempo de
agitacin e hidratacin de las muestras influyen en las propiedades de las
vesculas originadas y en la capacidad de captacin del p.a. La estabilidad de
las formulaciones elaboradas y conservadas a diferentes temperaturas ha
puesto de manifiesto la influencia de la composicin de las preparaciones y de
las condiciones de conservacin.
1. Sprott, GD; Tolson, DL; Patel, GB.: Archaeosomes as novel antigen delivery
systems. FEMS Microbiology Letters (1997): 17-22.
2. Cuerda Correa, MT; Monteoliva Snchez, M; Ramos Cormenzana, A;
Medina Prez, MM: Estudio de los arqueosomas obtenidos a partir de los
lpidos de Halo,acterium )alo,ium CECT396. V Congreso de la SEFG (2003):
157-160.
3. Cuerda Correa, MT; Medina Prez, MM, Ramos Cormenzana, A; Monteoliva
Snchez, M: Estudio comparativo de los liposomas obtenidos a partir de los
lpidos de membrana de haloarqueas. XX Congreso Nacionalde Microbiologa
(2003): 157-160.
- 381
E-&!e$in y $ob!e&!oduccin de la$ li&a$a$ Li&A y Li&C de Pseu$omonas
aeruginosa B.A. en di$tinto$ ;u'$&ede$ ;ete!loo$%
Bofill, C., Prim, N., Pastor, F..J., Diaz, P.
(epartamento de +icro,iolog-a, Facultad de 6iolog-a, Universidad de 6arcelona. Av. (iagonal,
643. 6arcelona 080.8. e/mail0 pdia$%u,.edu
La cepa bacteriana *seudomonas aeruginosa 42A2 (NCB 40045) fue aislada a
partir de una muestra de agua contaminada con residuos oleosos (1). Estudios
previos han puesto de manifiesto la eficacia de dicha cepa para la
transformacin de aceites residuales en cidos grasos hidroxilados, en cuya
conversin se hallan implicados una lipooxigenasa y una hidroxilasa.
Posteriormente, estos derivados hidroxilados son utilizados por las lipasas
extracelulares que secreta la propia cepa, para la sntesis de estlidos
(polmeros de cidos grasos hidroxilados) (2). Las propiedades de estos
compuestos les confieren numerosas aplicaciones en la industria como
lubricantes, tensoactivos, plastificantes, aditivos alimentarios o cosmticos
entre otras.
Con el objetivo de obtener la sntesis de estlidos in vitro, se realiz el clonaje y
la sobreexpresin de las enzimas involucradas en esta reaccin. Con la
finalidad de aislar y clonar los genes codificantes para la actividad lipasa, se
disearon un conjunto de cebadores para la amplificacin de los genes lipA y
lip! de la cepa *seudomonas aeruginosa 42A2. Los fragmentos de ADN
obtenidos fueron secuenciados y clonados en la cepa husped E.coli DH5a.
Los clones recombinantes no mostraron actividad lipasa, probablemente debido
a la ausencia de la foldasa encargada del correcto plegamiento de las lipasas
LipA y LipC (3). Paralelamente, para la sobreproduccin y secrecin de las
respectivas lipasas, se clonaron los genes aislados en la cepa 6acillus su,tilis
BCL1050. Los clones recombinantes obtenidos volvieron a mostrar ausencia de
actividad lipasa, indicando que las dos enzimas requieren la foldasa,
independientemente del husped utilizado. Actualmente est en proceso tanto
la clonacin del gen lipH de *seudomonas aeruginosa que codifica para dicha
foldasa, como la realizacin de diversas construcciones genticas conteniendo
a la vez los genes lipA<lipH, lip!<lipH, o lipA<lip!<lipH. Se prev que en
presencia de la foldasa LipH, los clones recombinantes obtenidos presenten
actividad.
1.- Robert, M. (1989). Tesis doctoral. Universidad de Barcelona.
2.- Pelez, M., Orellana, C., Busquets, M., Marqus, A., Guerrero, A., Manresa,
A. (2003). JACOS. 80: 859-866.
3.- Martnez, A., Ostrovosky, P., Nunn, D.N. (1999).Molecular
Microbiology.34:317-326.
- 390
Clonacin del dominio catal,tico de la celula$a CelIB de Paenibacillus
barcinonensis. Efecto en el !efinado de la &a$ta de &a&el%
Chiriac, A.., Pastor, F..J.
(epartamento de +icro,iolog-a, Facultad de 6iolog-a, Universidad de 6arcelona. Av. (iagonal 643,
6arcelona 080.8. e/mail0 irris,cn%'a)oo.com
La celulasa Cel9B de *aeni,acillus ,arcinonensis ha sido clonada y
caracterizada previamentepor el grupo investigadora partir del clon
recombinante Esc)eric)ia coli/pC7, procedente de una genoteca del organismo
arriba mencionado [1]. Cel9B partenece a la familia 9 de glicsido hidrolasas
(EC 3.2.1.4). Como la mayora de enzimas de esta familia, la celulasa clonada
presenta una estructura modular con varios dominios funcionales: un dominio
cataltico (GHF9), dos dominios de unin a celulosa (CBD3) y dos
dominiosafines a fibronectina (Fn3). La enzima hidroliza enlaces 1,4-b-
glicosidicos internos de la molcula de celulosa generando oligosacridosde
longitudes variables, y presenta una actividad tpica de las endoglucnasas:
hidrlisis muy eficiente sobre celulosa amorfa (CMC y liquenano) y baja sobre
celulosa cristalina (Avicel).
Cel9B ha sido evaluada en ensayos papeleros para modificar y mejorar las
propriedades mecnicas del papel. El tratamiento con la celulasa Cel9B
mejorala resistencia mecnicas del papel, ejerciendo un efecto de biorefinado
equivalente a un incremento de 1,000 revoluciones en el refinado mecnico de
la pasta de papel, lo que puede suponer un importante ahorro energtico [2]. El
tratamiento con la enzima revierte el fenmeno de perdida de propriedades por
secado, conocido como hornificacin. El efecto beneficioso de la aplicacin de
la celulasa es una caracterstica diferencial de Cel9B, que no tiene paralelo en
otras celulasas de laboratorio o comerciales ensayadas hasta el momento.
Para identificar las caractersticas moleculares de la enzima, que correlacionan
con su efecto de biorefinado, se procedi a la clonacin de los distintos
dominios que la componen, de forma independiente. En primer lugar se
procedi a la clonacin del dominio cataltico. Para ello se disearon dos
construcciones genticas que se clonaron en varias cepas de E.coli. La primera
construccin delimita el dominio cataltico entrelos aminocidos 40 y 481, y la
segunda delimita dicho dominio entre los aminocidos 40 y 504.
Al comparar el nivel de actividad hidroltica de las dos celulasas truncadas
entre s, as como con el de la celulasa original, la segunda celulasa truncada
result ms activa que la primera pero ambas fueron considerablemente menos
activas que la enzima original.
Los clones obtenidos en las distintas cepas de E.coli son inestables,
posiblemente debido a la toxicidad de la protena truncada al ser
sobreexpresada en dichas cepas. Para evitar los problemas de inestabilidad,
est en proceso la clonacin de las protenas truncadas, bajo control de
promotores inducibles, en huspedes del genero 6acillus, tal como 6acillus
su,tilis +V13, cepa deficiente en celulasas y proteasas.
[1]Pastor, F..J., Pujol, X., Blanco, A., Vidal, T., Torres, A.L., Daz, P. (2001). Appl.
Microbiol. Biotechnol. 55: 61-68
[2]Garca, O., Vidal, T., Torres, A.L., Colom, J.F., Pastor, F..J., Snchez, M., Daz, P.
(2003). ngeniera Qumica 401: 84-90.
- 397
Dife!enciacin mo!folica9 mue!te celula! y &!oduccin de antibitico en
culti"o$ $ume!ido$ de Streptomyces%
Salazar N; Manteca A; Fernndez M; Snchez J.
Nrea de +icro,iolog-a. (epartamento de 6iolog-a Funcional. Universidad de Dviedo. !< 2uli"n
!laver-a s<n. 33006 Dviedo. E/mail0 Bnusaga%)otmail.comC.
&treptom'ces es una bacteria micelial perteneciente al Orden Actinomycetales
cuyo hbitat natural es el suelo, dnde contribuye a los ciclos biogeoqumicos
de degradacin de la materia orgnica. Desde un punto de vista biotecnolgico
tiene gran importancia, ya que alrededor de dos tercios de los antibiticos
producidos industrialmente son sintetizados por miembros de este gnero. Esta
bacteria tambin produce un amplio espectro de agentes antitumorales y otros
metabolitos secundarios de inters. Adems presenta un ciclo de desarrollo
muy complejo, el cual ha sido ampliamente estudiado en cultivos de superficie,
condiciones en las cuales se producen procesos de muerte celular, y
fenmenos de diferenciacin que conducen a la esporulacin (Fernandez y
Sanchez, 2002). La diferenciacin en cultivos sumergidos se ha estudiado
mucho menos, debido principalmente a que la mayora de las cepas no
esporulan en estas condiciones. No obstante, la mayora de los procesos
industriales de produccin de antibitico se realizan en cultivos sumergidos,
existiendo una relacin an no aclarada entre la morfologa de las masas de
&treptom'ces, la muerte celular y la produccin de antibitico (Sebastine et al.,
1999; Stocks and Thomas, 2001). En el presente trabajo hemos realizado un
anlisis detallado del ciclo de desarrollo del gnero &treptom'ces en cultivos
sumergidos, con el fin de relacionar los anteriores parmetros. Mediante
estudios morfolgicos de viabilidad utilizando colorantes vitales asociados a
microscopa de fluorescencia lser-confocal, y anlisis de distintos parmetros
bioqumicos, hemos comprobado que durante el desarrollo en cultivos
sumergidos, tienen lugar procesos de muerte y fenmenos de diferenciacin,
que influyen decisivamente en la produccin de antibitico.

Fernandez M, Sanchez J (2002). Nuclease activities and cell death processes
associated with the development on surface cultures of &treptom'ces
anti,ioticus ETH7451. Microbiology 148: 405-412.

Sebastine M, Stocks S M, Cox P W, Thomas CR (1999). Characterisation of
percentage viability of &treptom'ces clavuligerus using image analysis.
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Stocks SM, Thomas CR (2001). Viability, strength, and fragmentation of
&acc)aropol'spora er't)raea in submerged fermentation. Biotechnol Bioeng
75: 702-709.
- 439
Ca!acte!i)acin de una nue"a laca$a &!oducida &o! Streptomyces
ipomoea CECT EEB?% A&licacin en el blan:ueo de &a$ta$ de &a&el%
Molina, J.M., Guilln, F., Moya, R., Rodrguez, Y., Troyano, N. y Arias, M.E.
(epartamento de +icro,iolog-a ' *arasitolog-a, Facultad de Farmacia, Universidad de Alcal".
.881, Alcal" de Henares, +adrid. E/mail0 enriIueta.arias%ua).es
Las lacasas son enzimas que catalizan la oxidacin de un amplio rango de
compuestos fenlicos, as como de compuestos no fenlicos a travs de
mediadores redox. Estn ampliamente distribuidas en la naturaleza, puesto que
se han hallado en hongos, plantas, insectos y recientemente en bacterias. El
papel biolgico que desempean las lacasas bacterianas no est muy definido
aunque se han relacionado con procesos de esporulacin, movilidad y
morfognesis. La versatilidad cataltica de las lacasas las ha convertido en foco
de inters para numerosos trabajos encaminados a su aplicacin industrial y
medioambiental, en procesos tales como la decoloracin de colorantes textiles,
biorremediacin de aguas y suelos contaminados o sntesis qumica. Sin
embargo, el mayor inters se centra en la industria papelera, donde pueden
aplicarse en el bioblanqueo de las pastas o para el incremento de la resistencia
de las fibras de celulosa.
En este trabajo se presenta la caracterizacin de una nueva lacasa producida
por &treptom'ces ipomoea CECT 3341 y se pone de manifiesto su utilidad para
su aplicacin en la industria papelera.
En primer lugar, se establecieron las condiciones ptimas para la produccin
de la actividad enzimtica en cultivo sumergido. Se seleccion un medio basal
salino suplementado con galactomanano, asparagina y sulfato ferroso.
El mximo de actividad enzimtica se alcanz el cuarto da de cultivo. La
enzima se purific a partir del sobrenadante del caldo de cultivo en los
siguientes pasos: ultrafiltracin, cromatografa de intercambio inico y
electroelucin a partir de geles de poliacrilamida. La enzima purificada mostr
una masa molecular de 77 kD, un punto isoelctrico de 5,7 y una temperatura y
pH ptimos de reaccin de 60 C y 4,5 respectivamente. La Km de la enzima
purificada, empleando ABTS como sustrato, fue 1,35 mM, mientras que la V
max
fue 323 mUmg de protena
-1
. Tras desnaturalizar la enzima con b-
mercaptoetanol, apareci una nica banda de 35 kD, lo que sugiere el carcter
dimrico de esta lacasa, como sucede con otras lacasas bacterianas. La
secuencia del extremo amino terminal de la protena purificada, mostr un
grado de similitud del 85% y del 73% con las lacasas de &. coelicolor y &.
griseus respectivamente.
La enzima purificada fue capaz de oxidar compuestos no fenlicos (cido
homovertrico) empleando ABTS como mediador. En el mismo sentido, el uso
de ABTS y 2-aminofenol como mediadores para el tratamiento de pastas Kraft
de eucalipto, supuso una reduccin notable del n Kappa y un sensible
incremento de la blancura de las pastas tratadas.
+icro,iolog-a 1ndustrial .9.
- 453
A&!o"ec;amiento del &e!meato de lacto$ue!o &a!a la obtencin de #cido
L=l#ctico en un !eacto! de c'lula$ inmo"ili)ada$%
Bolumar T., Monedero V. y Prez Martnez G.
1.A.7.A./ !.&.1.!. 6ur=assot/Valencia
El principal objetivo de este trabajo fue establecer un procedimiento piloto para
la produccin de cido L-lctico en continuo a partir de permeato de suero
lcteo, con el fin de lograr un posterior escalado industrial. Para ello se utiliz
un bioreactor con clulas inmovilizadas de una cepa especialmente
seleccionada de >acto,acillus r)amnosus. El sistema es similar al descrito
anteriormente (Bruno-Brcena et al, 1999) y consta de dos reactores, ambos
necesarios para su funcionamiento en continuo. El primero (R1, de biomasa) es
de pequeo volumen y se alimenta con permeato y 0,5% de extracto de
levadura, cuya finalidad es reponer de forma constante la biomasa eluda del
segundo reactor (R2, de conversin), el cual se alimenta exclusivamente de
permeato, para el que se ha logrado una eficacia de conversin de lactosa
prxima al 100% en condiciones ptimas. Se mantuvieron constantes la
temperatura (40C), el pH (5'3) y la relacin entre los flujos de los dos reactores
(R1:R2 = 1:2), y se procedi a estudiar la influencia de las variaciones del flujo
en la conversin de lactosa y produccin de cido L-lctico.
En el sistema piloto adaptado se obtuvo una productividad de 5 g / lh de cido
lctico, con una tasa de dilucin de 0'11 l/h. Gracias a que la cepa utilizada
produce de forma predominante cido L-lctico, se obtuvo un grado de pureza
del L-lctico del 91-94%.

Bruno-Barcena, J. M., A. L. Ragout, P. R. Cordoba, and J. Sirami. 1999.
Continuous production of l(+)-lactic acid by Lactobacillus casei in two-stage
systems. Applied Microbiology and Biotechnology 51:316-324

MICROBIOLOGA MOLEC0LAR
M - 21
La GT+a$a R;o@ de Schi0osaccharomyces pombe9 muy $imila! a R;o?&9
$e induce &o! la falta de nut!iente$
Rincn S.*, Santos B. y Prez P.
1nstituto +icro,iolog-a/6ioIu-mica. (epartamento de +icro,iolog-a/4en5tica. !onse=o &uperior de
1nvestigaciones !ient-#icas<Universidad de &alamanca. 300 &alamanca. EspaLa.
M
sarpadilla%usal.es
La familia de GTPasas Rho y sus protenas efectoras son reguladores
importantes involucrados en muchas funciones de las clulas eucariotas y
relacionadas con la organizacin de la actina y el establecimiento de la
polaridad. En &c)i$osacc)arom'ces pom,e Rho1p es esencial, activa
directamente la enzima (1,3) B-D-glucn sintasa y participa en la regulacin de
la biosntesis de la pared celular y la morfognesis.
En este trabajo describimos la caracterizacin de la GTPasa Rho5p, muy
similar a Rho1p, con la que comparte 86% identidad y 95% similitud. El gen
r)o3
]
se expresa preferentemente durante la fase estacionaria y en el proceso
de conjugacin. r)o3
]
es inducido en condiciones de falta de nutrientes. Las
clulas carentes de r)o3
]
son viables y no muestran defectos de crecimiento o
de conjugacin. En las clulas de fase estacionaria GFP-Rho5p se localiza en
la membrana y en el citoplasma. Cuando GFP-Rho5p se sobreproduce en
clulas en crecimiento, se localiza en el septo pero no causa ningn efecto en
las clulas.
La sobreexpresin del alelo hiperactivo r)o3413V causa un efecto morfolgico
similar al de r)o1413V pero la penetracin del fenotipo es significativamente
menor. La sobreexpresin del alelo dominante negativo r)o37.0: causa lisis
similar a la de r)o17.0:. La sobreexpresin de r)o3
]
puede rescatar la
letalidad de clulas carentes de Rho1p. Sin embargo, Rho5p no es tan eficaz
como Rho1p en el mantenimiento de la integridad de la pared celular o la
organizacin de la actina. Adicionalmente, cuando se reprime r)o1
]
durante la
fase estacionaria, las clulas carentes de r)o3
]
presentan mayores defectos de
viabilidad. Estos resultados sugieren que Rho5p acta durante la fase
estacionaria de forma similar a Rho1p, reforzando las funciones de esta
GTPasa.
+icro,iolog-a +olecular .9
M - 23
Cont!ibucin de la$ bomba$ de eflu*o a la !e$i$tencia int!,n$eca a
antibitico$ en 1ycobacterium tuberculosis
Ramn-Garca S.
1
, Mick V.
1
, Martn C.
1
, De Rossi E.
2
y Ansa J.A.
1
.
10 4rupo de gen5tica de +ico,acterias. (pto. +icro,iolog-a. Facultad de +edicina. Universidad de
Sarago$a. EspaLa. .0 (ipartimento di 4enetica e +icro,iologia, UniversitH degli &tudi di *avia,
1talia. santirg%uni$ar.es
ntroduccin.
Dada la alta resistencia intrnseca a antibiticos de las micobacterias, el
nmero de frmacos eficaces contra la tuberculosis es muy limitado. La
aparicin de cepas de +'co,acterium tu,erculosis resistentes a
antituberculosos dificulta el control de la enfermedad. La mayora de las cepas
resistentes tienen mutaciones en los genes que codifican las dianas de accin
de los frmacos o las enzimas que activan profrmacos. Sin embargo, en
algunas cepas resistentes no se ha encontrado ninguna mutacin. Una posible
explicacin es que la resistencia sea debida a la accin de bombas de eflujo
que pueden conferir resistencia a antibiticos qumica y estructuralmente no
relacionados, con la consiguiente aparicin de multirresistencia.
Objetivo.
+. tu,erculosis tiene ms de 20 posibles ORFs que codifican para bombas de
eflujo de la familia MFS (Major Facilitator Superfamily). El objetivo de este
trabajo es el estudio y la caracterizacin de las bombas de eflujo codificadas
por los genes Rv0783c, Rv1250, Rv1258c, Rv1410c y Rv2333c para evaluar su
contribucin en la resistencia a frmacos de +. tu,erculosis usando como
modelo +. ,ovis BCG.
Resultados y discusin.
Se han utilizado dos aproximaciones. Primero; sobre expresin. Segundo;
construccin de cepas con el gen de la bomba inactivado. Con estas cepas se
han probado una gran variedad de compuestos entre los que se encuentran
antibiticos, diversos colorantes, etc. Se ha encontrado que estas bombas
confieren bajos niveles de resistencia a antituberculosos de primera lnea como
rifampicina (Rv1410c) y etionamida (Rv1250), de segunda lnea como PAS
(Rv1258c) o a antibiticos usados en el tratamiento de la lepra como la
clofacimina (Rv1410c) as como, a colorantes como la acriflavina (Rv1250,
Rv1258c). En contra de lo esperado, la inactivacin del gen Rv0783c reduce la
sensibilidad a vancomicina. Adems, se han realizado experimentos de
acumulacin con acriflavina (Rv1258c) y tetraciclina marcada con tritio
(Rv1258c, Rv2333c) confirmando que estas bombas expulsan el antibitico
fuera de la clula. Estos resultados, combinados con la informacin derivada
del uso de la genmica, pueden ayudar al conocimiento de los mecanismos de
resistencia intrnseca en +. tu,erculosis y as, contribuir al desarrollo de
nuevos agentes que puedan bloquear las bombas de eflujo, lo que resultara en
un aumento de la sensibilidad del bacilo a los antituberculosos convencionales,
hacindolos ms efectivos y, de este modo, siendo ms fcil controlar este
importante patgeno humano.
M - 26
Ca!acte!i)acin de la !e$&ue$ta al e$t!'$ &o! &D del o&e!n >F>?=AT+
$inta$a en 'orynebacterium glutamicum ATCC ?EFE.%
Barriuso-glesias M., Barreiro C. y Martn J.F.
1nstituto de 6iotecnolog-a de >e;n B1:61D7E!C. *arIue cient-#ico de >e;n, Avda. del ?eal, nZ 1,
.4006. E/mail0 degm,i%unileon.es
!. glutamicum es una ,acteria 4ram ] de gran inter5s industrial debido a su
empleo a gran escala en la produccin de aminocidos y vitaminas. La
secuenciacin completa de su genoma ha permitido avanzar en la bsqueda de
genes que se induzcan ante diferentes situaciones de estrs. As, el objetivo
del presente trabajo es el estudio y la caracterizacin de promotores fuertes
regulados por el pH del medio, que permitan la sobreexpresin controlada de
genes de inters biotecnolgico en corynebacterias.
Tradicionalmente, !. glutamicum es crecido en medios de pH neutro pero
inesperadamente en este trabajo se describe por primera vez la condicin
basfila de este microorganismo, adems de la observacin de un fenmeno
de acomodacin al pH. El opern F0F1-ATP sintasa ha sido descrito como
implicado en la respuesta a estrs por pH en diversos microorganismos por lo
que se decidi estudiar su patrn transcripcional y el efecto que el pH externo
ejerce sobre su expresin. Mediante Northern, se analiz la respuesta del
opern atp ante distintas condiciones de pH (6.0, 7.0 y 9.0), utilizndose como
sondas fragmentos internos a los genes atp1, atp6 y atp( (sondas , B y D,
respectivamente). Con la sonda B se obtuvieron dos transcritos de 7.5 kb y 1.2
kb. El primero corresponde al tamao esperado para la expresin del opern
completo, y es claramente inducido a pH 9.0; mientras que el transcrito de 1.2
kb, no inducido por el cambio de pH, corresponde a la expresin del propio gen
atp6. Usando la sonda D se confirm que el mayor transcrito corresponde al
cluster de genes atp completo, observndose una banda de 7.5 kb, que se
aprecia de nuevo inducida a pH 9.0. Con la sonda no se obtuvieron seales
positivas, por lo que se decidi verificar la existencia de dicho gen y la
posibilidad de expresin junto con el opern mediante ensayos de RT-PCR.
Los resultados confirman la existencia del gen atp1 (banda de 250 pb inducida
tambin a pH 9.0), y que adems este gen no forma parte del opern F0F1-
ATP sintasa en !. glutamicum, a diferencia de lo que sucede en la gran
mayora de operones atp en otros microorganismos.
Las posibles regiones promotoras del gen atp1 y atp6, fueron estudiadas en
E. coli y en !. glutamicum mediante su clonacin en el vector sonda de
promotores pET2, con el cloranfenicol como reporter. Ambas regiones
mostraron actividad promotora en dichos microorganismos, alcanzando en
!. glutamicum mayor resistencia al cloranfenicol a pHs bsicos que a cidos.
Mediante Primer Extension se ha determinado la existencia de dos sitios de
inicio de la transcripcin para el opern F0F1, situados en una guanina (G) y en
una adenina (A) a 86 pb del ATG inicial del gen atp6 y a 45 pb del GTG inicial
del gen atp1, respectivamente. A partir del nucletido +1 se determinaron las
cajas -10 y -35 de cada regin promotora. Geles bidimensionales han sido
utilizados para detectar posibles cambios en el proteoma de !. glutamicum
despus de un estrs por pH.
+icro,iolog-a +olecular 300
M - 28
An#li$i$ enmico de facto!e$ $ima con funcin e-t!acito&l#$mica 5EC>7
en Pseu$omonas syringae
Oguiza, J.A.
1
, Kiil, K.
2
y Ussery, D.W.
2
1
(epartamento de *roducci;n Agraria, Universidad *R,lica de :avarra, 31006 *amplona, :avarra.
.
!enter #or 6iological &eIuence Anal'sis, (epartment o# 6iotec)nolog', 7)e 7ec)nical Universit' o#
(enmarO, (P/.800 >'ng,', (enmarO.
E/mail0 =ose.ogui$a%unavarra.es
Los factores sigma que controlan funciones extracitoplsmicas (ECF) estn
ampliamente distribuidos en bacterias como un mecanismo de regulacin
transcripcional en respuesta a seales ambientales especficas, y se ha
propuesto la existencia de una correlacin entre los estilos de vida bacterianos
y el nmero de factores sigma ECF. *seudomonas s'ringae es una bacteria
localizada en la superficie de las hojas que puede encontrarse como un
comensal inofensivo o como un importante patgeno de plantas. El nmero de
factores sigma ECF caracterizados en bacterias patgenas de plantas es muy
reducido y, por lo tanto, los factores sigma ECF de *. s'ringae resultan
interesantes para la realizacin de estudios genmicos. Estos estudios
genmicos pueden permitir la determinacin de las funciones reguladoras de
los factores sigma ECF y de los mecanismos moleculares implicados en la
adaptacin a la patognesis en plantas. Se ha desarrollado un perfil de Hidden
+arOov +odel (HMM) capaz de reconocer factores sigma ECF, y se ha
utilizado para identificar factores sigma ECF en los genomas de *. s'ringae pv.
tomato DC3000 y pv. syringae B728a. Mediante este perfil HMM se han
identificado 10 factores sigma ECF en el genoma de cada patovar de *.
s'ringae. En este trabajo, se presenta el anlisis de la organizacin genmica
de los factores sigma ECF en *. s'ringae y el anlisis comparativo con los
factores sigma ECF en los genomas de especies de *seudomonas
relacionadas con estilos de vida diferentes (la bacteria patgena oportunista
humana *. aeruginosa PAO1 y la bacteria saprofita no patgena *. putida
KT2440) y de otras Proteobacterias patgenas de plantas (ErAinia, ?alstonia y
Yant)omonas). Aunque el tamao del genoma es similar entre las especies de
*seudomonas analizadas, el nmero de factores sigma ECF en *. s'ringae es
significativamente inferior en comparacin con los 19 factores sigma ECF de *.
aeruginosa y *. putida. Estos datos sugieren que para la adaptacin a la
patognesis en plantas en el genoma de *. s'ringae han ocurrido importantes
cambios sin una reduccin del tamao, y esta diferenciacin genmica ha
originado la perdida de funciones reguladoras controladas por distintos factores
sigma ECF.

+icro,iolog-a +olecular 30.
M - 32
Acumulacin de la &!ote,na de unin a fo$fato +$tS a alta$
concent!acione$ de f!ucto$a en Streptomyces livi$ans% Efecto de la
au$encia de PstS en la dife!enciacin%
Daz M., Esteban A., Yepes A. y Santamara R.
(pto +icro,iolog-a ' 4en5tica<1nstituto de +icro,iolog-a 6ioIu-mica. Universidad de
&alamanca<!onse=o &uperior 1nvestigaciones !ient-#icas B!&1!C. Edi#icio (epartamental. !ampus
+iguel de Unamuno. *la$a de los (octores de la ?eina sn. 300 &alamanca. mardi%usal.es
El patrn de protenas secretadas por &treptom'ces lividans vara
drsticamente en respuesta a la fuente de carbono presente en el medio de
cultivo y a la concentracin de sta. Una de las protenas que presentan un
cambio ms drstico en su secrecin es la protena de unin a fosfato *st& que
se acumula en presencia de altas concentraciones de varios azcares como
fructosa, galactosa y manosa pero no en presencia de glucosa. Esta protena
forma parte del opern que constituye el sistema de transporte de fosfato de
alta afinidad y en otros organismos se induce en presencia de bajas
concentraciones de fosfato. La respuesta de las regiones promotoras del gen
pst& de &. lividans y de &. coelicolor a fuente de carbono se ha corroborado al
emplear estos promotores para expresar una xilanasa y valorar su actividad. En
ambos promotores se observa que altas concentraciones de fosfato anulan el
efecto inductor ejercido por la fuente de carbono lo que sugiere un doble control
carbono-fosfato de este gen y probablemente del opern del que forma parte
en ambos organismos estudiados. La funcionalidad de la protena *st& de &.
lividans y de &. coelicolor en el transporte de fosfato se ha demostrado al
comprobar que la delecin del gen pst& reduce drsticamente el transporte de
fosfato al interior de la clula. Al mismo tiempo se ha observado que esta
mutacin acelera la diferenciacin y esporulacin de ambos organismos en
medio slido.
M - 36
Staphylococcus aureus &!oduce biofilm inde&endientemente de ica en
au$encia del $i$tema de do$ com&onente$ arlRS
Toledo-Arana, A.
1
; Merino, N.
1
; Vergara-rigaray, M.
1
; Dbarbouill, M.
2
;
Penads, J.
3
y Lasa, .
1
1
>a,oratorio de 6io#ilms +icro,ianos. 1nstituto de Agro,iotecnolog-a ' ?ecursos :aturales ' (pto.
de *roducci;n Agraria, Universidad *R,lica de :avarra/!&1!. *amplona/31006, EspaLa.
.
6iologie
des 6act5ries pat)ogKnes H 4ram positi#, (5partement de +icro,iologie Fondamentale et +ed-cale
B!:?&, U?A .1.C. 1nstitut *asteur. *aris 3.4. Francia.
3
Universidad !ardenal Herrera/!EU e
1nstituto Valenciano de 1nvestigaciones Agrarias B1V1AC, 46113 +oncada, Valencia, EspaLa.
E/mail0 ale=andro.arana%unavarra.es
La capacidad de formacin de biofilm es considerada un factor de
patogenicidad para el establecimiento de infecciones crnicas producidas por
&tap)'lococcus aureus. Las condiciones medioambientales afectan a la
formacin de biofilm de &. aureus sugiriendo la existencia de reguladores
positivos y negativos del proceso. La mayora de los abordajes genticos
utilizados para la identificacin de los genes involucrados en la formacin de
biofilm se han basado en la seleccin de mutantes deficientes en la formacin
del biofilm. Estos abordajes han permitido identificar genes esenciales para
dicho proceso. En este estudio nosotros hemos realizado una aproximacin
inversa que ha consistido en la seleccin de mutantes que adquiran la
capacidad de formar biofilm con el objetivo de identificar los reguladores
negativos. Los mutantes analizados fueron obtenidos mediante mutagnesis
por transposicin y por mutacin sistemtica de los 16 sistemas de dos
componentes presentes en el genoma de &. aureus. Los resultados de ambas
estrategias coinciden en identificar al operon arlRS como un represor del
biofilm, tanto en condiciones de crecimiento estticas como de flujo continuo. El
mutante en arlRS present una mayor adherencia primaria as como un
aumento en la acumulacin del exopolisacrido PNAG, producto del operon
icaADBC. Sin embargo la formacin de biofilm del mutante arlRS no se vio
afectada cuando el operon icaADBC era delecionado, indicando que el
exopolisacrido PNAG no es un componente esencial de la matriz del biofilm
producida por el mutante arlRS. Experimentos de epistasis con reguladores
globales implicados en la formacin de biofilm de &. aureus indicaron que la
mutacin de sarA suprime, mientras que la mutacin de agr refuerza el biofilm
promovido por la ausencia del sistema de dos componentes arlRS.
M - 37
Identificacin de !eione$ de la &!ote,na de "i!ulencia SiD de Salmonella
con acti"idad $ob!e la o!ani)acin de actina9 mediante el u$o de
Saccharomyces cerevisiae como modelo%
Alemn, A.*, Rodrguez-Escudero, .*, Mallo, G.V.**, Cid, V.J.*, Molina, M.* y
Rotger, R.*
M(pto. +icro,iolog-a, Fac. Farmacia, Universidad !omplutense, .8040 +adrid. MM(ivision o# !ell
6iolog', Hospital #or &icO !)ildren, 7oronto +34 1Y8 B!anad"C.
&acc)arom'ces cerevisiae ha demostrado su utilidad como modelo de clula
eucaritica en el estudio de factores de virulencia bacterianos, como SopE/E2 y
SptP de &almonella, expresndolos en levadura como fusiones a GST [1].
Hemos aplicado este sistema al estudio de SigD (SopB), otra protena efectora
de &almonella inyectada en las clulas del husped a travs de un sistema de
secrecin de tipo y que interviene en la invasin. SigD no acta sobre la
organizacin de actina afectando directamente a protenas G pequeas, como
SopE/E2 y SptP, sino que sus efectos se han atribuido a su actividad fosfatasa
sobre fosfatidil-inositol polifosfatos [2].
En un estudio previo [3] se determin que la expresin de GST-SigD inhiba el
crecimiento de &. cerevisiae. Dos construcciones en las que se haba
mutagenizado la regin conservada de fosfatasa de SigD (SigD
R466A
) o
eliminado el extremo carboxilo que la contiene (SigD
1-351
) mantenan este efecto
inhibitorio, aunque no presentaban actividad fosfatasa in vitro. Ambas
provocaban despolimerizacin de actina al ser expresadas tanto en &.
cerevisiae como en clulas HeLa (como fusin N-terminal a GFP).
En este trabajo se han analizado nuevas construcciones, sustituyendo un
posible dominio de unin a membrana por cinco prolinas en la protena silvestre
(SigD
(118-142)
) y en el fragmento amino-terminal (SigD
1-351(118-142)
). Estas
construcciones no inhiben el crecimiento de &. cerevisiae. SigD
1-351(118-142)
tampoco inhibe la gemacin y slo afecta parcialmente a la polimerizacin de
actina, a diferencia de SigD
1-351
. Las dos protenas delecionadas en la regin
118-142 carecen de actividad sobre actina al expresarse en clulas HeLa; sin
embargo, SigD
(118-142)
mantiene aproximadamente un 50% de actividad
fosfatasa in vitro y tiene efecto sobre fosfatidil-inositol 4,5-P
2
en la membrana
de clulas HeLa. En conclusin, existe una actividad de SigD sobre actina
independiente de la actividad fosfatasa, para la que es esencial la regin 118-
142, y &. cerevisiae es un modelo eficaz para analizar el efecto de protenas
bacterianas sobre clulas eucariticas.
[1]Rodrguez-Pachn, J.M., Martn, H., North, G., Rotger, R., Nombela, C., y
Molina, M. 2002. 2. 6iol. !)em. 277:27094-102.
[2] Patel, J. C. y Galan, J. E. 2005. !urr. Dpin. +icro,iol. 8: 10-15.
[3] Rotger, R., Rodrguez-Pachn, J.M. Rodrguez-Escudero, ., Alemn, A.,
Cid, V.J., Martn, H., Nombela, C. y Molina, M. 2003. XX Congreso Nacional de
Microbiologa, Santiago de Compostela.
M - 39
E$tudio del cont!ol &o! fo$fato de lo$ ene$ pho!, pho% y pho'9
codificando fo$fata$a$ alcalina$ en Streptomyces coelicolor.
Apel AK, Sola-Landa A, Rodriguez A y Martn JF
1nstituto de 6iotecnolog-a de >e;n B1n,iotecC, *arIue !ient-#ico de >e;n, Avda. ?eal, nZ1, .4006
>e;n. E/mail0 degOap%unileon.es
Las bacterias gram-positivas del genero &treptom'ces producen una gran
cantidad de metabolitos secundarios, entre ellos ms del 50% de los
antibiticos conocidos hoy en da as como antifngicos, anticancergenos y
otros sustancias biolgicamente activas. Por eso son microorganismos de gran
inters tanto cientfico como econmico.
Un componente esencial en el crecimiento es el fosfato, ya que puede ser un
factor limitante. En general la limitacin de fosfato es necesaria para la
produccin de metabolitos secundarios. El control por fosfato est bien
estudiado en bacterias gram-negativas como Esc)eric)ia coli o gram-positivas
como 6acillus su,tilis, pero an no ha sido estudiado en profundidad en
&treptom'ces.
La publicacin de la secuencia del genoma de &treptom'ces coelicolor ha
hecho posible la identificacin de varios genes probablemente implicados en el
control por fosfato. Entre ellos se encuentran tres genes que pueden codificar
fosfatasas alcalinas, designados p)oA, p)o6 y p)o!.
Los promotores de estos tres genes han sido clonados en el vector sonda de
promotores pJ4083 que utiliza el gen x'lE sin su promotor y transformado en
las cepas &. coelicolor +143 y &. coelicolor +143(p)o* en la cual ha sido
delecionado el gen p)o*, que codifica el regulador de la respuesta a fosfato.
Se ha determinado la expresin de los tres genes en la cepa silvestre y en la
cepa delecionada para establecer si la protena p)o* est implicado en su
control. Tambin se ha medido la expresin de los genes p)oA, p)o6 y p)o!
en condiciones de alta y baja concentracin de fosfato para determinar su
dependencia.
Para confirmar los resultados de los ensayos de expresin se han hecho
estudios de retraso en geles de poliacrilamida con la protena PhoP para ver si
sta se une a los promotores. El gen p)oA mostr un fuerte control por fosfato
mediado por la protena PhoP. En el caso de p)o! se observ control por
fosfato, aunque en menor grado que p)oA. En los ensayos de retraso se ve
que la protena PhoP se une a ambos promotores.
A diferencia de los promotores de los genes p)oA ' p)o!, el promotor del gen
p)o6 tiene una actividad mucho ms baja y parece estar controlado por fosfato
pero no mediante la protena PhoP, la cual no se une al promotor del gen p)o6
en los ensayos de retraso.
M - 40
Dife!ente$ &!ote,na$ $e unen a la $ecuencia ARE &a!a !ece&to!e$ de
buti!olactona$ en Streptomyces clavuligerus
Santamarta .
1,2
, Prez-Redondo R.
2
, Lorenzana L.M.
1
, Lpez-Garca M.T.
1
,
Baos S.
1
, Martn J.F.
1,2
, Liras P.
1,2
B1C 1nstituto de 6iotecnolog-a 1:61D7E!. Avda. ?eal 1, .4001 >e;n, EspaLa. B.C Nrea de
+icro,iolog-a, Facultad de !!. 6iol;gicas ' Am,ientales, Universidad de >e;n. !ampus de
Vega$ana s<n, .401 >e;n, EspaLa. direcci;n electr;nica0 degis)%unileon.es
En algunas especies de &treptom'ces se ha demostrado la existencia de
autorreguladores tipo g-butirolactonas que actan como seales que controlan
la produccin de antibiticos.Protenas receptoras de los autorreguladores, se
unen a secuencias consenso (ARE) presentes corriente arriba de genes que
codifican protenas reguladoras de tipo SARP, implicadas en la biosntesis de
antibiticos. En &treptom'ces clavuligerus, cepa productora de cido
clavulnico y cefamicina C, existe una secuencia ARE corriente arriba del gen
regulador cca? (ARE
cca?
). En este trabajo se analiza una posible regulacin de
la produccin de ambos antibiticos a travs de autorreguladores de tipo
butirolactona.
Se ha clonado el gen ,rp, que codifica una protena receptora de butirolactonas
en &. clavuligerus. Corriente arriba de ,rp, existe tambin una secuencia ARE
(ARE
,rp
), lo que indica que Brp autorregula su propia expresin. El mutante
delecionado &.clavuligerus (,rp00neo, produce 150-300% de cido clavulnico
y 120-220 % de cefamicina C, comparado con la cepa silvestre, lo que sugiere
que Brp acta como represor en la biosntesis de antibiticos.
La protena recombinante rBrp, purificada desde Esc)eric)ia coli, se une
especficamente a las secuencias ARE presentes corriente arriba de cca? y de
,rp. Mediante cromatografa de afinidad en heparina-agarosa, se han purificado
protenas presentes en extractos acelulares de la cepa silvestre de
&.clavuligerus, que se unen especficamente a la secuencia ARE
cca?
. El anlisis
mediante EMSA revel la existencia de dos complejos ADN-protena:)
complejo de alta movilidad debido a la unin de Brp a la secuencia ARE, que
no se forma al analizar los extractos purificados a partir del mutante
delecionado &.clavuligerus (,rp00neo; ) complejo de baja movilidad que
aparece al analizar los extractos de ambas cepas.
Estos resultados indican que protenas adicionales distintas a Brp se unen
especficamente a la secuencia ARE localizada corriente arriba del gen
regulador cca?, pudiendo as controlar o modular la biosntesis de cido
clavulnico y de cefamicina C mediante su accin sobre la expresin del gen
cca?.
Folcher and col., 2001. 2 6iol !)em 276: 44297-44306.
Hourinouchi and Beppu, 1992. Annu ?ev +icro,iol 46: 377-398.
Liras P. 1999. Antonie Van >eeuAen)oeO 75: 109-124.
Santamarta and col., 2002. 2 6acteriol 184: 3106-3113.
Santamarta and col., 2005. +ol +icro,iol 56: 824-835
M - 41
En$ayo$ de e-&!e$in ;ete!loa del en as*#9! c,clicamente &e!mutado
:ue contiene la $ecuencia lineal del &'&tido AS=BA
Montalbn, M., Martnez-Bueno, M., Valdivia, E. y Maqueda, M.
(epartamento de +icro,iolog-a. Facultad de !iencias. Universidad de 4ranada. !ampus
Fuentenueva s<n 1801 4ranada. manuelml%ugr.es
La enterocina AS-48 producida por Enterococcus #aecalis, es una molcula
singular por las caractersticas estructurales que presenta -un pptido circular
mediante enlace peptdico entre sus residuos terminales (Met
1
Try
70
),
organizada en cinco hlices a las cuales presentan una estructura globular muy
compacta- y por el amplio espectro de accin que muestra frente a la mayora
de bacterias Gram-positivas ensayadas y algunas especies de Gram-negativas.
Para profundizar en la relacin estructura/funcin hemos diseado la obtencin
de una molcula de AS-48 lineal que nos permita investigar la importancia de la
ciclacin en la estabilidad de la molcula.
En este trabajo se ha construido un nuevo gen mediante permutacin cclica
del gen estructural (as/48A) que codifica una variante lineal de la molcula AS-
48, abierta por el asa de giro existente entre las hlices a3 y a4 (AS-48L
3-4
). El
sitio de apertura ha sido cuidadosamente diseado en base a anlisis tericos
y estructurales para identificar la zona de mayor flexibilidad, con la finalidad de
que la nueva molcula conserve las caractersticas estructurales y biolgicas
de la nativa. Este gen ha sido clonado en el vector pBAT-4m bajo el promotor
lacUV5 que responde a la induccin por PTG (galacto piransido.), y la
construccin obtenida (pBAT4-L
3-4
) ha sido empleada para transformar las
cepas BL21 y DH5a de E. coli.
La presencia de las molculas lineales AS-48L
34
ha sido extensamente
investigada en los lisados de las clulas transformadas y de los
correspondientes controles negativos, tras la induccin con concentraciones
variables de PTG (isopropil--D-tiogalactopiransido) a distintos tiempos y
temperaturas, en geles de poliacrilamida en condiciones desnaturalizantes
(SDS-PAGE). Sin embargo, no ha sido posible la deteccin de protenas con el
tamao esperado (7149.5 Da) en ninguna de las condiciones ensayadas. Este
resultado sugiere que la molcula lineal podra ser inestable y por ello
rpidamente degradada por proteasas celulares, o alternativamente que fuera
txica para la clula, lo que explicara el retraso de varias horas observado en
el inicio del crecimiento de los transformantes tras la induccin con PTG.
M - 42
An#li$i$ del $i$tema de flaelacin &ola! y late!al de !eromonas
hy$rophila
Merino ,S.; Canals R.; Jimnez, N. y Toms, J..
(epartamento de +icro,iolog-a. Facultad de 6iolog-a. Universidad de 6arcelona. Avda. (iagonal
643, 080.8 6arcelona. e/mail0 smerino%u,.edu
Las Aeromonas mesfilas son patgenos tanto de humanos como de animales
poiquilotermos. Este grupo de microorganismos dispone de un flagelo polar
constitutivo y algunas cepas, expresan adicionalmente flagelos laterales al
crecer en medios con elevada viscosidad o en superficies slidas. A pesar de
que diferentes estudios han relacionado ambos tipos de flagelos con el proceso
de colonizacin, poco se conoce sobre la organizacin y expresin de los
genes implicados en su formacin.
Nuestro principal objetivo es identificar y caracterizar los genes implicados en la
formacin y funcionamiento del flagelo polar y/o lateral de Aeromonas
)'drop)ila, pues su conocimiento es el paso previo para entender su jerarquia
de activacin, as como las seales que dan lugar a la formacin de uno u otro
tipo de flagelacin. Adicionalmente, determinaremos la implicacin de ambos
modelos flagelares en la capacidad de adhesin de este grupo, as como su
implicacin en la formacin de biofilms
En este trabajo, mediante la obtencin de mutantes por transposicin al azar en
la cepa AH-3 de Aeromonas )'drop)ila y el anlisis de su fenotipo motil,
identificamos los genes implicados en la formacin del flagelo polar y/o lateral.
El sistema de flagelacin lateral de Aeromonas esta formado por 38 genes
distribuidos en una nica regin del genoma, a diferencia de lo descrito en
Vi,rio para)aemol'ticus, cuyo sistema de flagelacin lateral se halla distribuido
en dos regiones distintas del cromosoma . El sistema de flagelacin polar de
Aeromonas esta formado al menos por 55 genes, distribuido en cinco regiones
distintas del genoma. La distribucin de genes en el sistema de flagelacin
polar presenta similitudes con los descritos en Vi,rio ssp. y *seudomonas ssp.,
aunque difiere en algunos aspectos como en la localizacin de los genes
responsables del inicio de la cascada de transcripcin del flagelo polar de
Aeromonas. En ambos sistemas de flagelacin se han hallado genes que
codifican para protenas homlogas a protenas de la familia Maf, cuya funcin
se ha relacionado con modificaciones post-transcripcionales, los cuales son
esenciales para la formacin de uno u otro tipo de flagelacin.
La obtencin de mutantes por insercin definida ha permitido demostrar que
ambos sistemas de flagelacin son absolutamente independientes y que
nicamente comparten los genes de quimiotaxis. Adems, la mutacin de los
genes homlogos al motor del flagelo polar pomA, pom6 y motY ha
demostrado que pomA6 no son esenciales para la rotacin del flagelo polar de
A. )'drop)ila. Finalmente, ensayos de adhesin a clulas HEp-2 y el estudio de
la capacidad de formacin de biofilm de los mutantes obtenidos mediante
insercin definida han permitido demostrar que tanto la flagelacin polar como
la lateral son fundamentales en estos procesos.
M - 43
0na &o!ina de BFHDa de !eromonas salmonici$a ca&a) de uni! C?:8
clona*e9 $ecuenciacin9 $u$ce&tibilidad al $ue!o e inmuno&!oteccin en
&ece$%
Ramrez, S.; Vilches, S.; Canals, R.; Toms J. y Merino S.
643, 080.8 6arcelona. e/mail0 sramire$[peinado%)otmail.com
Las cepas tpicas de Aeromonas salmonicida son el principal agente causal de
furunculosis en piscifactoras, mientras que las cepas atpicas se han hallado
asociadas a diferentes tipos de infecciones tanto en peces dulceacucolas
como marinos. A pesar de que el mecanismo de patogenicidad no esta claro,
diferentes estructuras como la lmina-A, la cpsula y el lipopolisacrido (LPS)
se han relacionado con la proteccin de la bacteria ante la accin bactericida
del complemento. En los estudios desarrollados hasta el momento poca
atencin se ha prestado al papel de las protenas de membrana externa
(OMPs) u otras estructuras de superficie a la virulencia de este
microorganismo. En el presente estudio, analizamos la contribucin de la
principal protena de membrana externa de A. salmonicida a la resistencia
frente al suero no inmune.
Mediante ensayos de unin directa de C1q biotinilado (factor inicial de la va
clsica del complemento) a protenas de membrana externa purificadas de la
cepa de A. salmonicida A450 (A
+
:O
+
), identificamos una protena de 40kDa
capaz de unir directamente C1q. El gen estructural de la misma fue clonado en
Esc)eric)ia coli y secuenciado. La secuencia aminoacdica de la porina de 40
kDa de A. salmonicida, su habilidad de unin a C1q mediante un proceso
independiente de anticuerpos, y su immunoreactividad cruzada con la porina de
tipo de A. )'drop)ila AH-3, nos mostraban su importancia en la
susceptibilidad al suero de A. salmonicida A450. Con objeto de definir su papel
como molcula de superficie implicada en la resistencia al suero, as como en
la unin de C1q, obtuvimos mutantes definidos por insercin en cepas tanto
sensibles como resistentes al suero. OMPs de dichos mutantes no
reaccionaban con anticuerpos especficos para la porina detipo de A.
)'drop)ila y eran incapaces de unir C1q. La introduccin de un plsmido que
contena el gen estructural para la porina de 40kDa de A. salmonicida o bien el
correspondiente al de la porina de tipo de A. )'drop)ila AH-3 daba lugar a la
complementacin de los mismos. Adicionalmente, se estudio la distribucin del
gen y/o protena de 40kDa de A. salmonicida en cepas tanto tpicas como
atipicas comprobndose su presencia en todas ellas. Finalmente, se determin
la importancia de la porina de tipo de A. )'drop)ila AH-3 como
immunoprotector en peces ante infecciones producidas por A. salmonicida o A.
)'drop)ila, observndose una reduccin de la mortalidad en los individuos
vacunados de 70-80%, respectivamente.
M - 44
Ca!acte!i)acin en'tica y e$t!uctu!al del n(cleo del li&o&oli$ac#!ido de
Ae!omona$ ;yd!o&;ilaAD=E 5$e!oti&o O8EB7
Jimnez, N., Fresno, S., Canals, R., Toms, J. M., Merino, S.
643, 080.8 6arcelona. e/mail0 natalia=imene$%u,.edu
Las Aeromonas mesfilas son microorganismos Gram-negativos ubicuos de
medios acuticos y capaces de producir infecciones tanto en organismos
poiquilotermos como homeotermos. Diferentes publicaciones las han
relacionado con infecciones gastrointestinales en humanos, as como con
bacteremias y septicemias en pacientes inmunocomprometidos. Las tres
especies aisladas mayoritariamente en este tipo de infecciones han sido
Aeromonas )'drop)ila (HG1 y HG3), Aeromonas caviae (HG4) y
Aeromonasveronii biovar so,ria (HG8/10).
El lipopolisacrido es un complejo glucolipdico constituido por tres dominios: el
lpido A, el ncleo y el antgeno O, siendo una de las estructuras mayoritariase
inmunodominantes de la membrana externa de los Gram-negativos. Dada su
importancia como factor de virulencia y el elevado grado de conservacin que
presenta su ncleo entre las diferentes especies de un mismo gnero, se trata
de una buena diana con fines teraputicos.
El objetivo de este trabajo ha sido la caracterizacin qumica y gentica del
ncleo del lipopolisacrido de la cepa AH-3 de A. )'drop)ila serotipo O:34 y el
estudio de la distribucin de algunos genes en diferentes cepas de Aeromonas.
Se ha determinado la estructura qumica del ncleo del LPS de la cepa AH-3
de A. )'drop)ila e identificado todos los genes implicados en la biosntesis del
ncleo externo y cuatro de los genes implicados en la biosntesis del ncleo
interno. A diferencia de lo que ocurre en la mayora de Enterobacterias, cuyos
genes responsables de la biosntesis del ncleo del LPS se hallan en una nica
agrupacin denominada Aaa, A. )'drop)ila presenta los genes implicados en la
biosntesis del ncleo externo e interno localizados en dos agrupaciones en
regiones distintas de su cromosoma.
La elaboracin de varios mutantes por insercin en genes de ambas
agrupaciones y el anlisis de sus fenotipos electroforticos permite
correlacionar la funcin de los genes con la estructura qumica del ncleo
purificado. Para completar estos estudios se realizaron ensayos de
complementacin empleando mutantes de Ple,siella pneumoniae 52145
definidos para diversos genes de biosntesis del ncleo y plsmidos que
contenan genes homlogos de la cepa AH-3 de A. )'drop)ila. La no
complementacin del mutante de Ple,siella pneumoniae 52145 en el gen
Aaa! mediante el clon de Aeromonas que contiene el ncleo interno indica la
falta de este gen en la agrupacin, lo que sugiere que debe localizarse aislado
en el cromosoma. Finalmente, se ha estudiado la distribucin de los genes
implicados en la biosntesis del ncleo externo en diferentes serotipos de
Aeromonas, observndose una elevada conservacin en todos ellos.
M - 45
Clonacin del en de la >enilacetil=CoA lia$a de Penicillium
chrysogenum e im&licacin en la bio$,nte$i$ de &enicilina y en la
!e$i$tencia al #cido fenilac'tico
Lamas-Maceiras M.(1), Vaca, .(1,2),Rodrguez-Dez M. E.(1), Casqueiro J.(1,2)
y Martn J. F.(1,2)
1. Nrea de +icro,iolog-a, Facultad de 6iolog-a ' !iencias Am,ientales, .401, >e;n, EspaLa. ..
1nstituto de 6iotecnolog-a, 1:61D7E!, *arIue !ient-#ico de >e;n, >e;n, EspaLa.
La fenilacetil-CoA ligasa de *enicillium. c)r'sogenum es una acil-CoA-ligasa
especfica que cataliza la activacin del cido fenilactico (PAA) a fenilactil-
CoA (PAA-CoA), en presencia de ATP, CoA e iones de magnesio. Dicha
activacin es necesaria para que el cido fenilactico sea utilizado como
precursor de la cadena lateral en la biosntesis de bencilpenicilinas. Esta
enzima pertenece a la familia de enzimas que forman los aminoacil-adenilato.
En el presente trabajo se ha clonado el gen que codifica para la fenilacetil-CoA
ligasa (p)lC y la protena deducida, (Phl) posee un 65 % de identidad con una
protena hipottica (AN7631.2) de Aspergillus nidulans y entre un 30 % y un 35
% con otras tres protenas tambin hipotticas (AN2549.2, AN3490.2 y
AN5990.2) del mismo hongo, alrededor de un 50 % de identidad con protenas
hipotticas de :eurospora crassa y +agnaport)e grisea y un 30 % de identidad
con las 4-cumarato-CoA ligasa de varias plantas superiores.
Los genes que intervienen en la ruta de biosntesis de penicilinas en *.
c)r'sogenum se agrupan formando un nico cluster; mediante experimentos de
hibridacin, se determin que el gen p)l no forma parte de dicha agrupacin
gnica.
Para analizar la implicacin de Phl en la biosntesis de penicilina se ha llevado
a cabo el incremento de la dosis gnica (cepa Phl+) y la interrupcin del gen
p)l (cepas Phl1
-
y Phl2
-
). En el caso de Phl+ se observ un aumento de un 30
% en la biosntesis de penicilina respecto a la cepa silvestre Wis54, mientras
que las cepas Phl1
-
y Phl2
-
, crecidas en medio definido con 0.15 % de
fenilacetato potsico producan un 35 % menos de penicilina que la cepa
silvestre. La cepa Phl+ es resistente a concentraciones ms altas de
fenilactico y las cepas interrumpidas son ms sensibles.
Posteriormente se utilizaron extractos proteicos crudos de Wis54, Phl+ y Phl1
-
para analizar in vitro la reaccin de conversin del PAA en PAA-CoA. Mediante
tcnicas de HPLC se midi la formacin de PAA-CoA observandose que en la
cepa Phl+ se produca un aumento de aproximadamente 8 veces respecto a la
parental Wis54, mientras que en la cepa interrumpida Phl1
-
se detect un
descenso en la actividad enzimtica de alrededor un 35 % respecto aWis54.
Estos resultados indican la implicacin de la protena Phl en la biosntesis de
penicilina y sugieren la probable existencia de otra protena capaz de catalizar
la activacin del cido fenilactico a fenilacetil-CoA.
M - 58
Identificacin de un !e&!e$o! del &!omoto! del o&e!n de la AT+a$a >
F
>
?
de Streptococcus pneumoniae
Hernndez-Madrid, A.
1
y de la Campa A. G.
!entro :acional de +icro,iolog-a, 1nstituto de &alud !arlos 111, .8..0 +a=ada)onda, +adrid.
1
v.)emaa%isciii.es
La principal funcin de la ATPasa F
0
F
1
de &treptococcus pneumoniae es
mantener el pH intracelular a partir de la hidrlisis de ATP [1]. Esta enzima est
codificada por un opern esencial para la viabilidad celular [2]. La regulacin de
la transcripcin de la ATPasa F
0
F
1
est mediada por una secuencia de 90
nucletidos (-90 a +1 del gen atp!, primer gen del opern) [1]. Para estudiar la
regulacin del promotor del opern de la ATPasa F
0
F
1
(Patp) se intent clonar
en el plsmido pLS1 (de neumococo) una fusin Patp(-90-+1)-cat, pero todos
los plsmidos recombinantes obtenidos presentaron mutaciones y deleciones
en Patp, entre la regin -35 y el inicio de la transcripcin. Dicha regin podra
ser la zona de unin del factor regulador, que se habra delecionado en los
plsmidos para evitar su titulacin, ya que el nmero medio de copias de pLS1
es de 40/clula y la cantidad de represor presente en la clula sera limitada. A
continuacin se introdujo la fusin Patp-cat en el cromosoma de &.
pneumoniae R6, originndose la cepa R6-CAT3.10 que se utiliz como
receptora de una genoteca de R6 en pLS1. Para detectar clones
recombinantes portadores de un posible activador, se plaque la genoteca
seleccionndose en cloranfenicol, a concentracin superior a la CM de R6-
CAT3.10. En una genoteca representativa no se obtuvo ningn clon
recombinante con estas caractersticas. Posteriormente, para detectar clones
de la genoteca que llevasen un represor, se hicieron rplicas de las colonias en
placas con y sin cloranfenicol, a concentracin inferior a la CM de R6-
CAT3.10. Se seleccionaron 5 clones que no crecieron en presencia del
antibitico, pero solamente uno de ellos tena una accin represora especfica
sobre Patp, el clon pLATP5: la actividad cloranfenicol acetil transferasa de
cepas con la fusin cromosmica Patp-cat disminuy nicamente en cepas con
Patp silvestre, pero no con Patp mutado. El plsmido pLATP5 llevaba un
inserto con dos genes completos, spr133. y spr1331, que podran constituir un
opern. Se obtuvo represin de Patp silvestre cuando el plsmido era portador
del opern completo (spr133.-spr1331) o bien del gen spr133.. Otro dato
independiente que apoya el papel represor del opern spr133.-spr1331 es la
disminucin en 2.6 veces de los niveles de sus mRNAs a pH cido [3]. Por
tanto, el incremento en la transcripcin de la ATPasa F
0
F
1
a pH cido podra
deberse a una disminucin en la cantidad de represor.
1.Martn-Galiano, A.J., M.J. Ferrndiz, and A.G. de la Campa. Mol. Microbiol.,
2001. /: p. 1327-1338.
2.Ferrndiz, M.J. and A.G. de la Campa. FEMS Microbiol. Lett., 2002. ?F@?B: p.
1-6.
3.Martn-Galiano, A.J., K. Overweg, M.J. Ferrndiz, M. Reuter, J. Wells and
A.G. de la Campa. (Manuscrito en preparacin), 2005.
M - 61
Deteccin del ma!cado! de !e$i$tencia cep ! en bacte!ia$ anae!obia$
e$t!icta$ ai$lada$ de infeccione$ animale$%
Garca Fernndez N.
1
, Lorenzo Snchez M.
1
, Vadillo Machota S.
1
, Ayala
Serrano J.
3
, Priz Durn S.
1
, Quesada Molina A.
2
1
!"tedra de +icro,iolog-a e 1nmunolog-a '
.
!"tedra de 6ioIu-mica ' 6iolog-a +olecular '
4en5tica, Facultad de Veterinaria, Universidad de Extremadura, Avda. de la Universidad s<n,
1001 !"ceres.
3
!entro de 6iolog-a +olecular &evero Dc)oa !&1!/UA+, .8049 !anto,lanco
B+adridC. nuriag#[vet%)otmail.com
El aumento de resistencia de las bacterias anaerobias gramnegativas a los
antimicrobianos beta-lactmicos de uso comn en la clnica veterinaria es un
tema de gran inters. Estos microorganismos, potencialmente patognicos,
forman parte de la micropoblacin bacteriana bucal e intestinal del hombre y de
los animales. Los mecanismos de resistencia son: la menor accesibilidad de las
dianas para los antibiticos, la modificacin de estas dianas (PBPs) y/o la
modificacin enzimtica del propio antibitico por beta-lactamasas. En el
presente estudio hemos analizado 53 cepas anaerobias estrictas aisladas de
infecciones podales de pedero ovino y caprino, clasificadas dentro de los
gneros 6acteroides, Fuso,acterium, *revotella ' *orp)'romonas.
El gen de resistencia cepA, que codifica una cefalosporinasa
endgena sensible al cido clavulnico, se detect por PCR utilizando
cebadores degenerados e hibridaciones con sondas especficas. Adems la
expresin del gen se puso de manifiesto por varios mtodos, incluyendo el
clculo de la CM de cada cepa frente a 17 antimicrobianos (tcnica de dilucin
en agar), la deteccin de la produccin de beta-lactamasas en extractos de
membrana (nitrocefn) y la cuantificacin espectrofotomtrica de la actividad.
El marcador cep A se detect en el 72.7%, 57.1%, 57.1% y 50% de las cepas
analizadas de 6acteroides, Fuso,acterium, *orp)'romonas, ' *revotella,
respectivamente. Los estudios de CM de mostraron que la cefuroxima, la
cefoxitina, la penicilina G y el imipenem son activos frente a todas las cepas
estudiadas. Sin embargo, frente a la ampicilina, el cefadroxilo monohidrato, y la
cefalexina presentaron resistencia el 27.2%, 63.6% y 72.7%
respectivamente, de las cepas del gnero 6acteroides, mientras que las cepas
del resto de gneros fueron sensibles a estos tres antimicrobianos con la
excepcin del gnero *orp)'romonas, en el que un 14.2% de las cepas mostr
resistencia a la cefalexina. La expresin de actividad beta-lactamasa alcanz
porcentajes del 80% en las cepas el gnero 6acteroides, 33% para
*orp)'romonas y un 25 % en *revotella. Ninguna de las cepas de
Fuso,acterium mostr dicha actividad. Un 39.2% de todas las cepas mostr
actividad al degradar el nitrocefn, de las que el 81.8% posea el gen cep A. Se
evidencia as el papel de cepA en la resistencia a los antibiticos beta-
lactmicos en bacterias anaerobias aisladas de infecciones animales, y se
muestra la relevancia de este grupo de microorganismos como reservorio de
este gen de resistencia.
Trabajo subvencionado por la Junta de Extremadura (Consejera de Sanidad y Consumo, n
SCSS0459, Consejera de Educacin, Ciencia y Tecnologa n 2PR04A004).
M - 62
+!e$encia del ma!cado! de !e$i$tencia tet: en bacte!ia$ anae!obia$
e$t!icta$ ai$lada$ de infeccione$ animale$
Lorenzo Snchez, M.
1
, Garca Fernndez, N.
1
, Vadillo Machota, S.
1
, Valle
Manzano, J.
1
. Ayala Serrano, J.
3
, Quesada Molina, A.
2
, Priz Durn, S.
1
1
!"tedra de +icro,iolog-a e 1nmunolog-a '
.
(epartamento de 6ioIu-mica ' 6iolog-a +olecular '
4en5tica. Facultad de Veterinaria. Avda. Universidad s<n 10001 !"ceres.
3
!entro de 6iolog-a
+olecular &evero Dc)oa. !&1!/UA+ .8049 !anto,lanco B+adridC. mer'l3[valencia%'a)oo.es
La caracterizacin de marcadores de resistencia a antimicrobianos de uso
habitual en el tratamiento de las infecciones originadas por bacterias es un rea
de enorme inters y actualidad. La utilizacin masiva de antimicrobianos como
la tetraciclina ha multiplicado los fenmenos de resistencia, detectndose una
amplia distribucin de los genes tetG, tet+ y tetD que confieren proteccin a
los ribosomas, impidiendo as la accin del antimicrobiano de referencia.
El objetivo de este estudio consiste en evaluar la distribucin de la resistencia a
la tetraciclina en patgenos anaerobios estrictos aislados de infecciones
animales y humanas, analizndose el posible papel en el mecanismo de
resistencia del marcador tetG.
La metodologa seguida consisti en el aislamiento (medios de cultivo y
condiciones de incubacin especficas), la identificacin (cromatografa de
gases y pruebas bioqumicas) y la conservacin (crioviales) de bacterias
gramnegativas anaerobias estrictas aisladas a partir de infecciones animales. A
continuacin estudiamos, cuantificamos y comparamos la sensibilidad
antimicrobiana (CM) a un grupo de 17 antimicrobianos beta-lactmicos y no
beta-lactmicos (mtodo de dilucin en agar). Tras ello, se realiz la extraccin
del ADN genmico de todos los microorganismos y la deteccin en stos del
gen tetG mediante PCR. Finalmente, se utilizaron hibridaciones con sondas
especficas para confirmar la identidad de los productos obtenidos. De esta
forma se ha podido comprobar que la presencia del marcador de resistencia
tetG est muy extendida en bacterias gramnegativas pertenecientes a los
gneros 6acteroides, Fuso,acterium, *revotella ' *orp)'romonas tanto de
origen animal como humano. Entre los gneros bacterianos analizados
destacan valores de 81'8% en 6acteroides, 80'9% en Fuso,acterium y 71'4%
en *orp)'romonas. Sin embargo, los estudios de sensibilidad antimicrobiana
muestran porcentajes significativamente inferiores de resistencia a la
tetraciclina, tales como 45'5% en 6acteroides, 4'7% en Fuso,acterium y 0% en
*orp)'romonas.
Estos resultados muestran que la simple presencia de un determinante de
resistencia no implica que el microorganismo exprese este comportamiento,
aunque su abundancia en bacterias de origen animal alerta sobre el papel que
stas podran jugar como reservorio de marcadores de resistencia. La
adecuada interpretacin de los resultados obtenidos permitir disear terapias
antimicrobianas menos agresivas y ms eficaces a la hora de instaurar un
tratamiento para curar las enfermedades infecciosas originadas por las
bacterias gramnegativas anaerobias estrictas.
Este trabajo est subvencionado por la Junta de Extremadura (Consejera de
Sanidad y Consumo, proyecto n SCSS0459 y Consejera de Educacin,
Ciencia y Tecnologa, proyecto n 2PRO4A004).
M - 75
An#li$i$ molecula! de la coloni)acin inte$tinal &o! Enterococcus en
ni6o$ $ano$ du!ante $u$ &!ime!o$ a6o$ de "ida
Pozuelo, M.J.
1
., Montesi, M.A.
1
., Garca-Albiach, R.
1
, Baquero, F.
2
, Del Campo,
R.
2
1
(pto. 6iolog-a !elular, 6ioIu-mica ' 6iolog-a +olecular. Facultad de Farmacia, Universidad &an
*a,lo/!EU. Ur,ani$aci;n +onte *r-ncipe, 6oadilla del +onte. .8668 +adrid.
.
&ervicio de
+icro,iolog-a, Hospital ?am;n ' !a=al, .8034 +adrid. marpo$%ceu.es
La colonizacin intestinal que ocurre tras el nacimiento sufre modificaciones
especialmente intensas a lo largo de los primeros meses de vida. El objetivo de
este trabajo fue estudiar la dinmica poblacional de Enterococcus presentes en
las heces de nios a lo largo de sus tres primeros aos de vida.
Para ello se recogieron quincenalmente muestras fecales de 6 nios sanos
nacidos a trmino durante sus primeras 34 semanas de vida, registrando el tipo
de dieta de ese momento. A los tres aos, se volvi a recoger otra muestra
fecal. Las heces se sembraron en Slanetz-Bartley agar, seleccionando 6
colonias compatibles con Enterococcus por cada muestra. La identificacin de
especie se realiz mediante PCR con cebadores especficos para los genes
e#aA de E. #aecalis y aac-1i de E. #aecium. Se estudi la relacin clonal de los
aislados mediante electroforesis en campo pulsante (PFGE-&ma) as como la
sensibilidad a macrlidos, glicopptidos, aminoglicsidos, tetraciclina,
ciprofloxacino, cloranfenicol y trimetropim mediante la tcnica de difusin en
agar. Se ha puesto a punto un sistema de deteccin por PCR multiplex de los
genes que codifican los factores de virulencia ace, esp, gelE, c'lA y agg. La
caracterizacin fenotpica de la produccin de bacteriocinas, hemolisinas y
proteasas se realiz tambin en todos los clones diferentes.
En cada nio se detect la colonizacin persistente de uno o dos clones en
todas sus muestras fecales, coexistiendo en algunas ocasiones con clones
espordicos. La presencia de los clones espordicos estuvo relacionada con la
introduccin de nuevos alimentos en la dieta. No se observ ninguna relacin
clonal entre los diferentes aislados de cada nio. Se detectaron elevados
niveles de resistencia antibitica, especialmente en el caso de tetraciclina
(66%), SXT (53%), eritromicina y cloranfenicol (46%) junto con resistencia de
alto nivel a gentamicina (26 %). La produccin de proteasas y bacteriocinas se
constat en el 9 y el 36% de los clones analizados, respectivamente. La
presencia del gen ace fue detectada en el 45 % de los clones, mientras que los
genes agg, esp, y gelE fueron positivos en el 27% de los clones, existiendo
diferentes combinaciones. No se detect actividad hemolisina ni presencia del
gen c'lA en ninguno de los aislamientos. El seguimiento de los clones a lo
largo del estudio permiti detectar variaciones en la sensibilidad antibitica, as
como la estabilidad de los factores de virulencia a lo largo del tiempo.
En conclusin, la poblacin de los enterococos fecales que colonizan el
intestino de los nios analizados, se mantiene relativamente estable a lo largo
del periodo analizado, si bien se detectan variaciones en cuanto a la
sensibilidad antibitica de los clones.
+icro,iolog-a +olecular 3.0
M - 79
Clona*e9 e-&!e$in9 &u!ificacin y dete!minacin de la acti"idad
en)im#tica de &b&Bb de Escherichia coli
Vega Mendoza D.E.* y Ayala Serrano J.A.
!entro de 6iolog-a +olecular &evero Dc)oa de +adrid/ Universidad Aut;noma de +adrid/!ampus
!anto,lanco/.8049Mdvega%c,m.uam.es
Las Penicillin-Binding Proteins (PBPs), enzimas responsables del ensamblaje y
maduracin del peptidoglicano a travs de actividades DD-Transpeptidasa,
Transglicosilasa, DD-Carboxipeptidasa y DD-endopeptidasa, son investigadas
como posibles dianas antimicrobianas dado su carcter de ser altamente
especficas, selectivas y esenciales, entre ellas podemos destacar una nueva
PBPB4b, descubierta por nuestro grupo de trabajo.
Se realizo el clonaje del gen p,p4, de E. coli CS-109 en pET28b y se
transform en clulas competentes Bl21(DE3).La expresin de PBP4b se
realiz utilizando medio M9 con kanamicina 30 g a 21C e induccin con 1
mM PTG. Para la purificacin, las membranas fueron extradas con Sarkosil
0,2%/4C/12 horas, y se ultracentrifugo 30 minutos/70000 rpm/ 4C. Este
extracto se incubo a 4C/1 hora con agarosa Ni-NTA y se eluy con imidazol
250 mM y finalmente se dializ y verific por SDS-PAGE y Western-Blot.
A fin de determinar la capacidad de unin a penicilina de PBP4b, se realizaron
ensayos de "Binding" a Bocillin-FL, usando membranas de BL21(DE3)/pET28b-
PBP4b obtenidas en condiciones de induccin y no induccin por PTG. Los
resultados obtenidos muestran claramente que PBP4b es una Penicillin-Binding
Protein.
Los ensayos dirigidos a detectar la posible actividad Carboxipeptidasa (CPasa)
y/o Endopeptidasa (EPasa), se han enfocado desde el anlisis por HPLC del
peptidoglicano de BL21(DE3)/pET28b-PBP4b no inducido e inducido por PTG
crecidos en M9 a 21 y 37C, los resultados obtenidos muestran una variacin
en la composicin de muropeptidos, aprecindose una reduccin en los
pentapeptidos dimricos (en caso de induccin por PTG), lo cual indica una
posible actividad CPasa especifica sobre los dmeros pentapeptdicos. Estos
resultados se verificaron en las condiciones de 21 y 37C en LB.
Otro enfoque realizado (modificacin de la tcnica de Ghursen et.al,) fue la
liberacin de D-Ala empleando 375 nmoles de N, N-Diacetyl-Lys-D-Ala-D-Ala
como sustrato, y detectado por absorcin a 460 nm. Los resultados obtenidos
muestran que PBP4b libera 2 nanomoles de D-Alanina en una hora a 37 C en
condiciones de saturacin de sustrato, lo cual nos permite concluir que PBP4b,
presenta una actividad DD-CPasa debil, en las condiciones de ensayo
utilizadas.
Otra estrategia que estamos llevando a cabo actualmente para determinar la
posible actividad CPasa y/EPasa de PBP4b es el anlisis por HPLC de los
productos de la reaccin in vitro, empleando como sustratos los muropeptidos
M5 (monomero pentapeptido) y D45 (dimero tetra-pentapeptido).Todos los
datos sugieren que PBP4b presenta una actividad CPasa especifica sobre
dmeros.
+icro,iolog-a +olecular 3..
M - 105
Coe-i$tencia de ",a$ alte!nati"a$ de fo!macin de biofilm9 ica
de&endiente$ e inde&endiente$9 en ce&a$ de Staphylococcus aureus
!e$i$tente$ a meticilina
Vergara-rigaray M.
1
, Valle J.
1
, Penads J.
2
y Lasa .
1
1
1nstituto de Agro,iotecnolog-a ' ?ecursos :aturales. Universidad *R,lica de :avarra E !onse=o
&uperior de 1nvestigaciones !ient-#icas. *amplona 31006, :avarra. e/
mail0 marta.vergara%unavarra.es.
.
1nstituto Valenciano de 1nvestigaciones Agrarias B1V1AC,
+oncada 46113, Valencia
&tap)'lococcus aureus es uno de los patgenos hospitalarios ms importantes
ya que frecuentemente, causa infecciones asociadas al uso de implantes
mdicos. Sobre estos dispositivos &. aureus es capaz de adherirse y crecer
formando biofilms lo cual, le vuelve ms resistente tanto a la accin del sistema
inmune como al tratamiento antibitico. De est forma, se generan infecciones
crnicas muy difciles de eliminar y frecuentemente es necesario eliminar los
dispositivos infectados y sustituirlos por unos nuevos, con toda la problemtica
que ello conlleva. Tradicionalmente la formacin del biofilm de &. aureus se ha
asociado a la produccin del exopolisacrido de unin intercelular PNAG cuya
sntesis depende de las enzimas codificadas por el opern ica. Sin embargo, en
uno de nuestros estudios, el anlisis de 63 cepas clnicas de &. aureus, ica
positivas, ha revelado la existencia de cepas que a pesar de producir elevados
niveles de PNAG no desarrollan biofilm y de cepas que aunque no sintetizan
PNAG son capaces de formarlo. Estos resultados indican que en algunas
cepas la sntesis de PNAG no es suficiente mientras que en otras no es
necesaria para la formacin del biofilm. Con el fin de estudiar el proceso de
formacin de biofilm independiente de PNAG, seleccionamos la cepa 132, por
ser resistente a meticilina y capaz de formar biofilm en ausencia de PNAG. La
mutacin por intercambio allico del opern ica en esta cepa no afecta a la
capacidad de formar biofilm en medio TSB-glucosa sin embargo, afecta a la
formacin de biofilm en condiciones de estrs osmtico es decir, en medio
TSB-NaCl. De acuerdo con estos resultados, el biofilm formado en medio TSB-
glucosa es sensible a tratamientos con proteinasa K y resistente a tratamientos
con metaperiodato sdico, un agente que oxida los polisacridos
inactivndolos. Este resultado sugiere que el biofilm formado en este medio
puede presentar algn componente de naturaleza proteica. Por el contrario, el
biofilm formado en TSB-NaCl es resistente a tratamientos con proteinasa K y
sensible a tratamientos con metaperiodato sdico, indicando que la formacin
del biofilm en condiciones de estrs osmtico es dependiente de un
componente de naturaleza polisacardica, muy probablemente PNAG. Estos
resultados sugieren la existencia de al menos dos mecanismos alternativos de
formacin de biofilm en la misma bacteria, uno de los cuales sera dependiente
de un componente de naturaleza proteica y otro dependiente de la produccin
de PNAG. Recientemente, hemos construido mediante mutagnesis por
transposicin una genoteca de mutantes para identificar el componente
proteico responsable de la formacin de biofilm en ausencia de PNAG.
M - 124
A&licacin de la ti&ificacin mediante 4NTR$ en ce&a$ ;umana$ de
%rucella melitensis !e$&on$able$ de ca$o$ e$&o!#dico$ y de b!ote$ en
E$&a6a
Valdezate S.
1
, Cervera .
1
, Alvarez D.
1
, Sez Nieto J.A.
1
.
1
&ervicio 6acteriolog-a. !.:.+. 1nstituto de &alud !arlos 111, +a=ada)onda. +adrid.
svalde$ate%isciii.es
La falta de polimorfismo gentico en 6rucella spp., patgeno responsable de
una de las principales zoonosis existente, limita las tcnicas de tipificacin
disponibles para la caracterizacin de las cepas causantes de brotes por
exposicin ocupacional o por ingestin de alimentos. La aparicin variable de
repeticiones mltiples en tandem (VNTR) en 6rucella spp. (Bricker et al., BMC
Microbiology 2003), ha sido aplicada en este estudio como tcnica de
tipificacin en cepas humanas de 6rucella melitensis responsables de casos
espordicos y de brotes en Espaa. Se procedi a la amplificacin y
secuenciacin de los VNTR presentes en 8 loci localizados en los dos
cromosomas, en dos grupos de cepas clnicashumanas de 6.melitensis: i) un
grupo sin relacin epidemiolgica (n=40 cepas), aisladas en 18 provincias
durante un perodo de 6 aos y ii) un grupo relacionado (n=19), procedente de
la misma rea geogrfica durante un perodo de 3 aos. Los alelos para cada
locus fueron codificados en funcin del nmero de repeticiones de 8-9 bp
detectadas. Para cada locus (50 - 200 bp),el nmero y rango de alelos
identificados en el grupo no relacionado y en el grupo con relacin geogrfica,
fueron, respectivamente: lc1 (10, 212;9, 312), lc2 (5, 26; 5, 26), lc3 (1;
1), lc4 (11, 114; 9, 117), lc5 (12, 26; 8, 413), lc6 (6, 16; 4, 16), lc7
(12, 315; 9, 312), lc8 (7, 213; 5, 26). En el grupo relacionado, se
identificaron 2, 3, 2, y 2 cepas con idntico perfil de VNTRs para todos los
locus. La tipificacin molecular desarrollada medianteel estudiode los VNTRs
permite la caracterizacin decepas humanas de6. melitensis responsables de
casos espordicos y de brotes. La aplicacin de la tcnica "HOOF-Prints
(Hipervariable Octameric Oligonucleotide Finger-Prints) supone un avance en
el estudio de la epidemiologa de la brucelosis en nuestro pas.
M - 126
+!ote,na$ de la familia de la$ a!!e$tina$ median la $e6ali)acin &o! &D en
;ono$ filamento$o$ y le"adu!a$
Herranz Fernndez S.(1), Rodrguez J.M.(1), Bussink H.(2), Rudnicka J.(2),
Snchez JC.(1), Arst H.(2), Pealva M.A.(1), Vincent O.(1)
B1C!entro de 1nvestigaciones 6iol;gicas B!16C !&1!. ?amiro de +ae$tu, 9.8040 +adrid, EspaLaF
B.C (epartment o# 1n#ectious diseases, Facult' o# medicine, 1mperial !ollege o# &cience, tec)nolog'
_ +edicine, (u !ane ?oad, >ondon V1. on:, UP. &ilvia.8%ci,.csic.es
La regulacin de la expresin de gnica por el pH ambiental en hongos
filamentosos y levaduras est mediada por la ruta de sealizacin Pal/Rim.
PalF en Aspergillus nidulans y su homlogo en levadura Rim8 son
componentes de esta ruta de transduccinde seal, ampliamente conservada
en hongos% Demostramos que PalF y Rim8 son protenas relacionadas con las
arrestinas de eucariotas superiores y los primeros miembros de esta familia de
protenas identificados fuera de metazoos. Ambos, PalF y Rim8, contienen
dominios arrestina N-terminal y C-terminal y, al igual que las arrestinas de
mamfero, interaccionan condominios citoplasmticos de protenas con 7
hlices transmembrana (7TM). PalF interacciona con la cola citoplasmtica C-
terminal de la protena 7TM candidata a sensor de pH PalH y esta interaccin
est conservada en levadura entre sus correspondientes homlogos Rim8 y
Rim21. Adems, evidencias genticas en A. nidulans sugieren que la unin
entre PalF y PalH media la transduccin de la seal de pH ambiental in vivo.
Finalmente, demostramos que PalF, al igual que las beta-arrestinas de
mamfero, se ubiquitina y fosforila de manera seal (pH alcalino) dependiente y
que ambas modificaciones postraduccionales no se detectan en un mutante
palH1. Dado el papel que juega la fosforilacin y la ubiquitinizacin de las
beta-arrestinas en la endocitosis de receptores 7TM en mamferos, estos
resultados son consistentes con el actual modelo en el cual el trfico endoctico
est implicado en la transduccin de la seal de pH ambiental en hongos.
M - 127
Secuenciacin del enoma bacte!iano m#$ &e:ue6o8 %uchnera
aphi$icola9 endo$imbionte del &uln 'inara ce$ri%
Prez-Brocal V., Gil R., Silva F.J., Moya A. y Latorre A.
1nstitut !avanilles de 6iodiversitat i 6iologia Evolutiva, Universitat de ValKncia.
amparo.latorre%uv.es
6uc)nera ap)idicola, endosimbionte primariodel pulgn !inara cedri, ha
experimentado una reduccin extrema en el tamao de su genoma que est
relacionada con la adaptacin a un estilo de vida simbitico, establecido hace
cerca de 80-150 millones de aos.De hecho, se trata del genoma microbiano
ms pequeo conocido hasta la fecha. Lo ms sorprendente, frente a otras
cepas de esta bacteria previamente secuenciadas, pertenecientes a pulgones
de diferentes subfamilias, es la coexistencia en esta especie de pulgn de 6.
ap)idicola, con otros dos tipos bacterianos conocidos como simbionte
secundario (tipoR) y Vol,ac)ia sp., respectivamente. Las tres bacterias se
localizan en clulas especializadas del pulgn, llamadas bacteriocitos, que se
localizan por detrs del tubo digestivo. Precisamente la proximidad de los
bacteriocitos dentro del pulgn, ha supuesto unadificultad a la hora de
secuenciar el genoma de 6. ap)idicola. Para solucionar tal obstculo hemos
aplicado una metodologa basada en la combinacin de una separacin de
estos genomas mediante electroforesis en campo pulsante (PFGE), que nos ha
permitido construir genotecas especficas de 6. ap)idicola, junto con la
amplificacin de segmentos del cromosoma de 6. ap)idicola mediante PCR
largas.
El tamao genmico obtenido tras la secuenciacin es de tan slo 422 kb,
frente a ms de 600 kb de las otras tres cepas previamente secuenciadas,
distribuidas entre un cromosoma de 416 kb y un plsmido de 6 kb que contiene
los genes leucina (leuA, leu6, leu! y leu(). En total hemos identificado 401
genes y dos pesudogenes. Estos y otros rasgos han hecho posible establecer
una comparacin con otros endosimbiontes bacterianos, revelando aspectos de
gran inters para entender la evolucin desde un modo de vida libre hasta una
simbiosis ntima y obligada en estadios ms avanzados como lo es el
representado por 6. ap)idicola de !. cedri. Aspectos tales como la reduccin
genmica extrema, la prdida de genes o el incremento en el contenido de A+T
(79,8 %),con la consiguiente prdida de capacidades celulares (metablicas,
reguladoras o de reparacin de daos celulares) han alcanzado en esta cepa
un grado tan drstico, que nos lleva a plantear la hiptesis de que ha entrado
en una dinmica conducente a su extincin y su reemplazamiento por otras
bacterias simbiticas de ms reciente establecimiento.
M - 129
An#li$i$ molecula! del $i$tema fo$fot!an$fe!a$a de&endiente de
fo$foenol&i!u"ato e$&ec,fico de luco$a en Lactobacillus casei y $u &a&el
en el cont!ol del metaboli$mo de a)(ca!e$%
Yebra M.J.
1
, Monedero V.
1
, Ziga M.
1
, Deutscher J.
2
, Prez-Martnez G.
1
1
(epartamento de 6iotecnolog-a, 1nstituto de AgroIu-mica ' 7ecnolog-a de Alimentos, !&1!, Apdo.
!orreos 3,46100 6ur=assot, EspaLa. ,tcmon%iata.csic.es.
.
+icro,iologie et 45n5tiIue
+ol5culaire, !:?&<1:?A<1:A/*4, U+?.383, 8830 7)iverval/4rignon, Francia.
En >acto,acillus casei, el transporte de glucosa se realiza preferentemente por
un sistema fosfotransferasa dependiente de fosfoenolpiruvato (PTS)
perteneciente a los transportadores de la clase PTS-manosa.
El anlisis de la secuencia genmica preliminar de >. casei nos ha permitido
encontrar un cluster de genes (man>+:D) que codifica las protenas AB
Man
(man>), C
Man
(man+) y D
Man
(man:) de un transportador PTS de la clase
manosa, as como una pequea protena hipottica de 121 aminocidos
(manD), de funcin desconocida, cuyo gen se encuentra asociado a operones
man de diferentes bacterias Gram-positivas. La transcripcin de man>+:D es
independiente del azcar usado como fuente de carbono. La mutacin de
man+ resulta en una notable reduccin en la capacidad de transportar glucosa.
De igual manera, el mutante man+ perdi la capacidad de represin por
catabolito de actividades como la :-acetilglucosaminidasa o de los genes para
la utilizacin de sorbosa, adems de mostrar una deficiencia en el fenmeno de
exclusin del inductor de maltosa. Se cree que estos defectos estaran
asociados a la baja fosforilacin que presenta este mutante a nivel de la
Serina-46 de la protena reguladora HPr. Se ha llevado a cabo, por primera
vez, la obtencin de una cepa mutante con una deleccin en manD. Este
mutante no mostr ningn fenotipo particular con respecto al transporte de
glucosa o la represin por catabolito, pero s una tasa de crecimiento reducida.
Los resultados ponen de manifiesto el papel regulador del PTS en >. casei y
abren nuevas vas para el estudio de la participacin de las protenas
Man
o
ManO en el control global del metabolismo de carbohidratos.
M - 138
Reulacin de la ben)oato=CoA lia$a9 im&licada en el cataboli$mo
anae!bico del ben)oato9 en la bacte!ia !educto!a de >e5III7 .eobacter
metallire$ucens%
Carmona, M., Blzquez, B., Garca, J.L. y Daz, E.
!entro de 1nvestigaciones 6iol;gicas/!&1!, ?amiro de +ae$tu 9, +adrid .8040.
mcarmona%ci,.csic.es
En todos los microorganismos anaerbicos estudiados hasta la fecha los
compuestos aromticos son preferentemente transformados hasta benzoil-CoA
que posteriormente es reducido por la benzoil-CoA reductasa hasta
compuestos no aromticos que se tranformarn en intermediarios del
metabolismo central a travs de la denominada ruta central. Los genes que
codifican los enzimas responsables de estas transformaciones generalmente
se encuentran organizados en operones los cuales, a su vez, se encuentran
controlados por reguladores transcripcionales. Existe poca informacin acerca
de la regulacin de la ruta central de degradacin de compuestos aromticos
en anaerobiosis. Hasta la fecha se sabe que BadR, un regulador de la familia
MarR, controla la expresin de la benzoil-CoA reductasa, en
?)odopseudomonas palustris una alfa-proteobacteria fototrofa (Eglan y col.
(1999), 2. 6acteriol., 1818 2102-2109). Recientemente hemos caracterizado en
nuestro laboratorio el regulador BzdR que controla la expresin del cluster ,$d,
responsable del catabolismo anaerbico del benzoato en la beta-proteobacteria
desnitrificante A$oarcus sp. CB (Barragn y col., 2. 6iol. !)em. (2005), 280:
10683-10694). Para ampliar el conocimiento sobre la regulacin del
catabolismo anaerbico del benzoato en este trabajo hemos investigado la
expresin del enzima benzoato-CoA ligasa en la delta-proteobacteria reductora
de Fe() 4eo,acter metallireducens. Esta bacteria es un habitante habitual en
suelos anxicos contaminados con compuestos aromticos y su genoma est
siendo secuenciado en la actualidad. En el cromosoma de 4. metallireducens
se ha identificado el gen ,clA que codifica la benzoato CoA ligasa responsable
de la primera etapa de la degradacin anaerbica de benzoato en este
microorganismo (Matthias Boll, Universidad de Friburgo, Alemania,
comunicacin personal). En posicin 5 respecto al gen ,clA se localizan dos
genes que codifican un presunto regulador de la familia NtrC (BclR) y una
histidn-kinasa (BclK) que presumiblemente constituirian un sistema regulador
de dos componentes. En el mismo segmento de DNA se han identificado genes
que codifican una presunta reductasa de compuestos aromticos, as como
otros genes que codifican putativos enzimas que podran estar tambin
implicados en la ruta central del catabolismo anaerbico de compuestos
aromticos. El anlisis de la secuencia promotora (*,clA) que controla la
expresin del gen ,clA, predice la existencia de una secuencia de
reconocimiento para la subunidad sigma-54 de la RNA polimerasa. En el
presente trabajo se describe el papel de la protena BclR en la regulacin del
promotor *,clA, as como su implicacin en la regulacin de la ruta catablica
del benzoato de 4. metallireducens.
M - 139
El $im&o!tado! de luco$a de Streptomyces coelicolor no e$ $uficiente
&a!a com&lementa! la deficiencia en la utili)acin de luco$a en
Streptomyces clavuligerus
Prez-Redondo R., Lorenzana L.M., Baos S., Lpez-Garca M.T., Liras P.
(epartamento de Ecolog-a, 4en5tica ' +icro,iolog-a. Nrea de +icro,iolog-a. Facultad de !iencias
6iol;gicas ' Am,ientales. !ampus de Vega$ana, .401. >e;n. correo electr;nico0
degmpr%unileon.es
&.clavuligerus, actinomiceto de importancia industrialpor producir cido
clavulnico, no es capaz de crecer en glucosa como fuente de carbono.
Tampoco usa hexosas como manosa, galactosa o fructosa, pentosas,
azcares-alcohol como manitol o sorbitol, o disacridos como lactosa o
sacarosa. Slo glicerol, maltosa o almidn son eficientemente usados por este
microorganismo. Esta limitacin contrasta con la versatilidad nutricional del
microrganismo modelo &.coelicolor, donde se han detectado 53 sistemas de
transporte de carbohidratos, entre los que se incluyen dos simportadores de
H+/glucosa.
La deficiencia en la utilizacin de glucosa de &.clavuligerus puede deberse a la
ausencia de un sistema de transporte o de la enzima de fosforilacin de
glucosa previa a su metabolismo.
La hibridacin del ADN genmico de &.clavuligerus con una sonda del gen
glOA de &.coelicolor, que codifica la glucosa quinasa, dio como resultado una
seal positiva. La presencia y expresin del gen ha sido confirmada con el
estudio de la actividad glucosa quinasa en extractos de &.clavuligerus. Sin
embargo, la hibridacin heterloga con el gen glc*., simportador de glucosa de
&.coelicolor, no permiti afirmar que exista tal transportador en &.clavuligerus.
Mediante un plsmido integrativo se introdujo el gen glc*. de &.coelicolor
como monocopia en &.clavuligerus. La cepa resultante,
&.clavuligerus::pMSglc*., ha sido analizada por RT-PCR y se ha comprobado
que existe expresin del gen glc*., sin embargo, el exconjugante es an
incapaz de crecer en glucosa como nica fuente de carbono.
Puesto que &.clavuligerus utiliza maltosa y, por tanto, debe poseer un
metabolismo normal de la glucosa, se est estudiando la posibilidad de que la
protena GlcP expresada de manera heterloga no sea ensamblada
correctamente en la membrana o que el sistema de transporte necesite de
otros componentes.
M - 140
Ba&A9 una nue"a &!ote,na de $u&e!ficie :ue !elaciona la fo!macin del
biofilm con la "i!ulencia de Salmonella enteriti$is
Latasa C
1
, Roux A
2
, Toledo-Arana A
1
, Chigo J.M
2
,

Gamazo C
3
, Penads J
4
y
Lasa
1
1
>a,oratorio de 6io#ims +icro,ianos. 1nstituto de Agro,iotecnolog-a. Universidad *R,lica de
:avarra/ !&1!. *amplona, 31006.
.
4roupe de 45n5tiIue des 6io#ilms. 1nstitut *asteur. *aris
3.4. France.
3
(epartamento de +icro,iolog-a. Universidad de :avarra, 31008 *amplona.
4
1nstituto Valenciano de 1nvestigaciones Agrarias B1V1AC, +oncada, 46113. Valencia.
cristina.latasa%unavarra.es
La protena de superficie Bap (biofilm associated protein) fue identificada como
esencial para la formacin del biofilm en determinadas cepas de mastitis bovina
de &tap)'lococcus aureus. Posteriormente, otras protenas con una homologa
estructural con Bap e implicadas en el proceso de formacin del biofilm han
sido descritas por distintos grupos en distintas bacterias incluyendo: Esp de E.
#aecalis, Bhp de &. epidermidis, Bap de 6urO)oderia cepacia, Mus20 de *.
putida, LapA de *. #luorescens y V1445 de V.para)emol'ticus.
Utilizando el altgoritmo tBlastN, iniciamos una bsqueda de protenas
homlogas a Bap de &. aureus en los genomas de &. enterica presentes en las
bases de datos. El resultado de esta bsqueda identific dos orfs, stm2689 y
stm4261, que presentaban una similitud con Bap del 29 y 25%
respectivamente. El anlisis de la secuencia primaria revel que ambas
protenas presentan una regin central de repeticiones imperfectas, un rasgo
estructural comn a todas las protenas homologas a Bap. Adems estas orf
codificaban para las dos protenas de mayor tamao del genoma de &.
t'p)imurium LT2.
Para determinar si las protenas codificadas por estas orf estaban implicadas
en la formacin del biofilm de &. enteritidis, se realiz la disrupcin de ambos
genes. La delecin de stm2689 provoc la prdida de la capacidad de formar
biofilm en medio LB, mientras que la delecin de stm4261 no tena ningn
efecto.
La sobreexpresin de las proteinas codificadas por los genes stm2689 y
stm4261 mediante la introduccin por recombinacin homloga del cassette
RExBAD delante del gen no tuvo ningun efecto en el caso de stm4261. sin
embargo cuando se sobreexpresaba stm2689 se produca la formacin de un
biofilm ms grueso y rgido, tanto en LB como en microfermentadores.
Teniendo en cuenta la homologa estructural y funcional de stm2689 con Bap
de &. aureus, se decidi renombrar a este gen como bap!. Ensayos de
complementacin mostraron que la sobreproduccin de Bap no es capaz de
compensar la deficiencia de celulosa o fimbriae, componentes fundamentales
de la matriz del biofilm de &almonella. Sin embargo, la sobreproduccin de
fimbrias era capaz de complementar la deficiencia de la protena producida por
stm2689.
Estudios de virulencia has mostrado que la deficiencia en BapA provoca una
atenuacin debida a una menor capacidad de adhesin e internalizacin en el
epitelio intestinal.
M - 142
Di$c!e&ancia$ ent!e f!ecuencia$ de !ecombinacion y di$tancia f,$ica en
!spergillus8 Im&licacione$ en la identificacin de ene$%
Cobeo, L.
1
, Espeso, E.A.
1
, y Arst, H.N.
2
1
(ept. +icro,iolog-a +olecular, !entro 1nvestigaciones 6iol;gicas. !&1!. ?amiro de +ae$tu, 9.
.8040 +adrid BEspaLaC.
.
(ept. 1n#ectious (iseases. Facult' o# +edicine. 1mperial !ollege >ondon.
(u!ane ?d. >ondon V1. on: BUPC. lauraco,e%ci,.csic.es
En la era de la secuenciacin de genomas una forma rpida para identificar
genes es utilizar las frecuencias de recombinacin entre mutaciones. El trabajo
que se presenta muestra las dificultades en la identificacin de un gen prximo
al centrmero, el gen )alA.
A pesar de lo avanzado de la secuenciacin del genoma de Aspergillus
nidulans (10x), se desconoce la longitud y la secuencia de los centrmeros de
los ocho cromosomas que este hongo filamentoso posee, aunque si su
situacin aproximada en cada cromosoma. El mapeo gentico de la mutacin
)alA24 determina que el gen mutante est localizado en el brazo derecho del
cromosoma de Aspergillus nidulans y muy prximo, 1.8 cM, al gen p)enA.
En primer lugar identificamos el gen p)enA (situado a 59 kb del centrmero), y
a continuacin, utilizando la base de datos del genoma de Aspergillus y el
anlisis del fenotipo causado por la mutacin )alA24, intentamos identificar al
gen )alA en la proximidad del locus p)enA, fracasando en nuestra bsqueda.
Utilizando la tcnica del "paseo cromosmico finalmente pudimos identificar al
gen que portaba la mutacin )alA24 y determinar que la distancia fsica entre
las mutaciones p)enA2 y )alA24 es de ms de 66 kb.
Extendimos nuestra bsqueda a otros marcadores genticos frecuentemente
utilizados en A. nidulans. Hemos determinado la distancia fsica entre siete loci
diferentes, caracterizando una mutacin en cada locus, cuatro en el brazo
derecho del cromosoma y tres en el brazo derecho del cromosoma V.
Nuestro trabajo muestra que la frecuencia de recombinacin entre mutaciones
en genes prximos al centrmero se reduce considerablemente en A. nidulans.
Hemos determinado que en la cercana del centrmero 1 cM corresponde a
aproximadamente 50 kb, mientras que esta relacin se reduce a menos de 2 kb
por cM a una distancia de 240 kb de los centrmeros. Este resultado tiene
implicaciones importantes en las bsquedas de genes de Aspergillus que estn
situados en las regiones pericentromricas basndose en los datos existentes
de gentica clsica.
M - 148
>uncionalidad de +B+Bb de Escherichia coli
Ayala Serrano, J.A.* y Vega Mendoza, D.E.
!entro de 6iolog-a +olecular &evero Dc)oa de +adrid/ Universidad Aut;noma de +adrid/!ampus
!anto,lanco/.8049. e/mail0 =a'ala%c,m.uam.es
La divisin celular bacteriana, a pesar de su aparente simpleza, es un complejo
proceso a nivel molecular que implica invaginar, de manera controlada espacial
y temporalmente, las tres estructuras que conforman la pared de las bacterias,
la membrana interna, el sculo de peptidoglicano y la membrana externa. En
este proceso el componente morfogentico mas importante es la capa de
mureina (peptidoglicano), cuyo ensamblaje de novo, tanto durante la
elongacin de la pared como durante la septacin, tiene que estar acoplado a
la degradacin de las cadenas preexistentes. Es decir, sntesis, maduracin,
degradacin y reciclaje de los muropeptidos, son procesos que estn
perfectamente regulados y sincronizados.
Las Penicillin-Binding Proteins (PBPs) son las enzimas responsables del
ensamblaje y maduracin del peptidoglicano a travs de actividades DD-
Transpeptidasa (DD-TPasa), Transglicosilasa (TGasa), DD-Carboxipeptidasa
(DD-CPasa) y DD-endopeptidasa (DD-EPasa) y por ello son investigadas como
posibles dianas antimicrobianas dado su carcter altamente especfico,
selectivo y esencial.
Para la insercin de muropptidos de nueva sntesis en el sculo, se han
postulado dos mecanismos, uno que implica degradacin de una cadena
polisacardica y sustitucin por otras tres presintetizadas ("three for one,
Holtje) o la incorporacin secuencial sobre extremos de cadenas iniciadoras
(Park, Nanninga). En cualquiera de estos modelos se requieren las actividades
autolticas (LTGasa, transglicosilasa ltica y DD-EPasa, DD-endopeptidasa).
Requirindose adems un precursor lipdico especifico durante la septacin
(lipido tripeptido, L--T).
En Esc)eric)ia coli existan 12 protenas con los dominios conservados de
PBPs que presentan las actividades descritas ms arriba. Recientemente
hemos encontrado una nueva protena, PBP4b, que posee estos dominios
conservados, que hemos clonado y caracterizado (ver abstract adjunto) y
demostrado su capacidad de fijacin de penicilina y su actividad CPasa.
Recientemente se han conseguido mutantes mltiples de deleccin de los
genes de PBPs (K. Young), que sugeran la dispensabilidad de todas las
protenas con potencial actividad CPasa y/o EPasa. El descubrimiento de
PBP4b, abra la posibilidad de que esta fuera la protena esencial remanente
que portara estas actividades. Como se demuestra en el abstract adjunto, la
protena presenta la actividad especfica CPasa sobre muropptidos dmeros.
Sin embargo, hemos conseguido la inactivacin del gen p,p4, en el entorno
gentico de deleccin de ocho genes de PBPs, lo que ha demostrado la no
esencialidad de dichas actividades autolticas, y por tanto se cuestionan los
modelos postulados de insercin de muropeptidos.
Dado el fondo gentico (mutante de deleccin de 9 genes de pbps) donde no
hay actividades CPasas, caba la posibilidad de estudiar la necesidad de L--T
para septacin, ya que podra inducirse la sntesis de precursor lpido
peptapptido (L--P) y analizar el efecto en el crecimiento. La sobreproduccin
de L--P por induccin de nueva sntesis por MurF, condujo a la parada del
crecimiento y lisis en el mutante, y no afect a la estirpe salvaje que mantiene
la actividad CPasa.
M - 150
4a!iacin al'lica del locu$ &olim!fico lyt% de e$t!e&tococo$ del !u&o
miti$8 el en im&licado en la $e&a!acin de la$ c'lula$ ;i*a$ en
neumococo
Moscoso, M., Obregn, V., Lpez, R., Garca, J. L., y Garca, E.
(epartamento de +icro,iolog-a +olecular, !entro de 1nvestigaciones 6iol;gicas, !&1!F ?amiro de
+ae$tu 9, .8040 +adrid. e/mail0 mmoscoso%ci,.csic.es.
La bacteria Gram-positiva &treptococcus pneumoniae es un importante
patgeno humano, responsable de enfermedades como neumona,
bacteriemia, meningitis y otitis media. La colina, requerimiento nutricional de
neumococo, es un componente estructural de los cidos teicoico y lipoteicoico,
y sirve de anclaje a las protenas de unin a colina (ChBPs) en su unin a la
superficie neumoccica. Las ChBPs estn construidas por una
combinacin/fusin de diferentes dominios funcionales con un peculiar dominio
de unin a colina (ChBD) que consta de hasta 18 repeticiones (ChBRs) de
aproximadamente 20 aminocidos (aa) cada una. La N-acetilglucosaminidasa
LytB de &. pneumoniae es una ChBP clave en la separacin de las clulas
hijas al final de la divisin celular, lo que facilita la dispersin bacteriana durante
la infeccin. El primer alelo l't6
R6
(2109 pb) que fue secuenciado de la cepa R6
codifica una protena de 81,9 kDa con un pptido seal de 23 aa. La mitad N-
terminal de LytB
R6
, responsable de la unin a la pared celular, contiene 18
ChBRs mientras que la mitad C-terminal confiere la especificidad enzimtica.
Para investigar la variacin allica y la evolucin molecular de LytB, se
secuenciaron los alelos l't6 de 7 aislados clnicos de neumococos de
diferentes serotipos capsulares y de 13 estreptococos del grupo mitis (12
neumococos atpicos y la cepa tipo &treptococcus mitis
T
). Mediante el
alineamiento de secuencias se observ que la diferencia principal entre alelos
reside en el nmero de ChBRs (de 12 a 18) caracterstica de ChBPs. Estas
diferencias se localizaron en la regin correspondiente a las repeticiones 11 a
17. Las cepas de neumococos tpicos contienen 14, 16 18 repeticiones
mientras que los aislados atpicos y &. mitis
T
poseen slo 12 repeticiones; con
la excepcin de las cepas 1283 y 782, que presentan 14 y 16 repeticiones,
respectivamente, y el aislado atpico 10546 que result ser un mutante l't6
natural. Estos resultados sugieren que los sucesos de duplicacin que dan
origen a las ChBRs de LytB implicaban dos repeticiones simultneas de 21 y
23 aa, una observacin acorde con la estructura cristalogrfica de los ChBDs
que muestran que la unin a los residuos de colina se lleva a cabo en la
interfase de dos ChBRs consecutivas. Los mutantes l't6
/
de neumococo
forman largas cadenas que pueden ser dispersadas mediante la adicin de
LytB al cultivo. Por el contrario, la mayora de los aislados atpicos aqu
estudiados forman cadenas que no se dispersan mediante la adicin de LytB,
sugiriendo que en estas cepas, el encadenamiento se produce mediante
mecanismos no relacionados con LytB.
M - 151
0nin de +;o+ a &!omoto!e$ de ene$ !eulado$ &o! fo$fato en
Streptomyces coelicolor8 identificacin de la$ ca*a$ +DO%
Sola-Landa A
1
, Rodrguez-Garca A
1
, Franco-Domnguez E
1
, y Martn JF
1,2
.
1
1nstituto de 6iotecnolog-a de >e;n B1:61D7E!C, *arIue !ient-#ico de >e;n, Av. ?eal, 1, .4006,
>e;n.
.
Nrea de +icro,iolog-a. Fac. !!. 6iol;gicas ' Am,ientales, Universidad de >e;n, !ampus de
Vega$ana, s<n, .401, >e;n.
e/mail0 degasl%unileon.es
La biosntesis de la mayora de los metabolitos secundarios en las distintas
bacterias est fuertemente reprimida por el fosfato inorgnico. En
&treptom'ces el control de los genes regulados por fosfato, tanto del
metabolismo primario como secundario, est mediado por el sistema de dos
componentes PhoR-PhoP (1). Los promotores de los genes pst&, p)o?* y
p)oU acoplados al gen testigo x'lE mostraron una alta sensibilidad a la
regulacin por fosfato. Mediante primer extension se determin el origen de la
transcripcin de los tres genes, resultando el de p)o?* como un transcrito sin
regin lder. La protena reguladora de la respuesta PhoP se sobreexpres en
Esc)eric)ia coli y se purific como una protena de fusin GST-PhoP. Del
mismo modo se obtuvo el dominio de unin a DNA (DBD, (:A/,inding domain)
de PhoP. Tanto PhoP como su dominio truncado DBD se unieron con alta
afinidad a una regin upstream de los promotores de los genes pst& y p)o?*-
p)oU, prxima a la secuencia -35 de dichos promotores. Los ensayos de
proteccin con DNasa revelaron una zona protegida de 29 pb en la cadena
codificante del promotor de pst&, incluyendo dos unidades repetidas directas
de 11 pb. La misma tcnica con la regin promotora bidireccional p)o?*-p)oU
mostr una secuencia protegida de 51 pb, incluyendo cuatro unidades
repetidas directas, dos de las cuales presentan una alta semejanza con las
secuencias protegidas en el promotor de pst&. Las cajas PHO se han
identificado alineando las 6 unidades repetidas directas encontradas en estos
promotores. Cada repeticin directa se ajusta al consenso
G(G/T)TCAYYYR(G/C)G (2).

1. Sola-Landa A, Moura RS, Martn JF. 2003. The two-component PhoR-PhoP
system controls both primary metabolism and secondary metabolite
biosynthesis in &treptom'ces lividans. Proc Natl Acad Sci USA. 100:6133-6138.

2. Sola-Landa A, Rodrguez-Garca A, Franco-Domnguez E, Martn JF. 2005.
Binding of PhoP to promoters of phosphate-regulated genes in &treptom'ces
coelicolor: identification of PHO boxes. Mol Microbiol. 56:1373-1385.
M - 155
Reulacin del &!oce$amiento de la i$o&enicilina N=acilt!an$fe!a$a 5IAT7
de Penicillium chrysogenum &o! $u &!e&!ote,na%
Garca-Estrada C.
1
, Martn J.F.
1,2
.
1
Nrea de +icro,iolog-a. Facultad de !!. 6iol;gicas ' Am,ientales, Universidad de >e;n, !ampus
de Vega$ana, s<n, .401, >e;n.
.
1nstituto de 6iotecnolog-a B1:61D7E!C, *arIue !ient-#ico de >e;n,
Av. ?eal, 1, .4006, >e;n. E/mail0 d#tcge%unileon.es
La ltima enzima implicada en la biosntesis de penicilina, isopenicilina N-
aciltransferasa (AT), se expresa como un precursor de 40 kDa denominado
proaciltransferasa o proAT, el cual sufre en *. c)r'sogenum un rpido
procesamiento mediante autocatlisis entre los residuos Gly102/Cys103. De
este modo se origina un heterodmero formado por dos subunidades; de 11
kDa (que se corresponde con la regin N-terminal) y de 29 kDa
(correspondiente a la regin C-terminal). Por el contrario, la proAT de A.
nidulans permanece predominantemente en su forma no disociada de 40 kDa.
Esta diferencia en el procesamiento de la AT entre ambos microorganismos es
debida a las diferencias existentes en su secuencia y podra ser responsable
de la gran diferencia existente entre ellos para sintetizar penicilina (*.
c)r'sogenum sintetiza 30 veces ms cantidad de penicilina que A. nidulans).
Estudios previos con la AT recombinante, indicaron que el mutante C103S,
que es incapaz de autoprocesarse, carece de actividad aciltransferasa. Sin
embargo, la AT de A. nidulans, aunque permanece no disociada, es capaz de
retener al menos parte de dicha actividad. Esta situacin, nos llev a
plantearnos el objetivo de comprobar si la proAT no procesable es capaz de
ejercer regulacin post-traduccional sobre el autoprocesamiento de la proAT.
Con ese fin, se procedi a generar una AT no procesable (mutante C103S)
que se expres en *. c)r'sogenum, comparndose a continuacin el patrn de
expresin de la AT en presencia y ausencia de tal protena. Para confirmar los
resultados se dise un sistema en E. coli capaz de valorar el procesamiento
de la AT a lo largo del tiempo, para a continuacin, estudiar su modificacin
por la presencia de una AT no procesable. Los resultados obtenidos indicaron
que un exceso de la AT no procesable es capaz de provocar un retraso en el
procesamiento de la AT silvestre. Esta situacin es debida probablemente a la
interaccin que se producira entre ambas protenas y que conducira a la
inhibicin del procesamiento. De este modo, A. nidulans, al tener como
predominante su forma no disociada de AT, estara induciendo una
autorregulacin negativa sobre el procesamiento de dicha enzima, lo que
llevara en ltimo trmino a una menor capacidad para la biosntesis de
penicilina.
M - 159
T;e !ole of lycoen &;o$&;o!yla$e in !eulatin lycoen b!eaHdoTn
and maltode-t!in bio$ynt;e$i$ in Escherichia coli
Alonso-Casajs, N., Morn-Zorzano, M.T., Viale, A. M., Muoz, F.J., Eidallyn,
G., Baroja-Fernndez, E., Pozueta-Romero, J.
1nstituto de Agro,iotecnolog-a BU*:A< !&1!C !tra. +utilva s<n. +utilva 6a=a 3119.. :avarra. E/
mail0 maite.moran%unavarra.es
Glycogen phosphorylase (GlgP) belongs to a structurally related and ubiquitous
group of proteins that are generally regarded as glucan-degrading enzymes that
catalyze the production of glucose-1-phosphate (G1P) by the reversible
cleavage of a-1,4 bonds at the non-reducing ends of polyglucans such as
maltodextrins, starch and glycogen.
n contrast to the case of mammalian GlgPs, the role of the bacterial GlgP in
glycogen metabolism is not well understood. Whereas Palmer et al. (1)
suggested that GlgP does not play an important role in glycogen breakdown in
E. coli, GlgP has generally been suggested to be the major enzyme of glycogen
catabolism in bacteria that, in combination with debranching enzyme (GlgX)
activity, participates in the slow degradation of glycogen during extended
periods of substrate deprivation (2-4).
To understand the biological function of bacterial glycogen phosphorylase
(GlgP) we have characterized different strains of E. coli with altered GlgP
activities. glg* overexpressing BL21(DE3)C43 cells cultured in the presence of
glucose exhibited a dramatic reduction of the glycogen content when compared
with wild-type (WT) cells. n turn, both glycogen content and rates of glycogen
accumulation in W3110 and B/r glg* deletion mutants ((glg*) were several fold
higher than those of WT cells when cultured in the presence of glucose,
whereas TG1 (glg* cells showed normal rate of glycogen accumulation and
glycogen content as compared with WT cells. TG1 (glg* cells cultured with
maltose exhibited a dramatic reduction of maltodextrins when compared with
WT cells. Furthermore, TG1 (glg!A* deletion mutants lacking the glycogen
biosynthetic machinery were unable to accumulate both glycogen and
maltodextrins when cultured with maltose. n clear contrast, both
BL21(DE3)C43 (glg!A* and (glg* cells were shown to accumulate normal
levels of maltodextrins as compared with WT cells. The overall results thus
show that (a) GlgP plays a dual role in catalyzing glycogen breakdown and in
producing precursors for maltodextrin biosynthesis, (b) control of GlgP on the
glycogen breakdown and maltodextrin biosynthetic processes highly differs from
one strain to another and (c) GlgP operates during glycogen accumulation.
1.Palmer, T. N., Wber, G., and Whelan, W. J. (1973) Eur. 2. 6ioc)em. EI9 601-
612
2.Chen, G. S., and Segel, . H. (1968) Arc). 6ioc)em. 6iop)'s. ?.G9 164-174
3.Ball, S. G., and Morell, M. K. (2003) Annu. ?ev. *lant 6iol. @B9 207-233
4.Dauville, D., Kinderf, . S., Li, Z., Kosar-Hashemi, B., Samuel, M. S.,
Rampling, L., Ball, S., and Morell, M. K. (2005) 2. 6acteriol. ?AG9 1465-1473
M - 161
Ai$lamiento y ca!acte!i)acin de un &l#$mido endeno de .or$onia
+acobaea.
Feijoo-Siota, L., Veiga-Crespo,P., Blasco, L., Poza,M., Villa,T.G.
(pto +icro,iologia .Fac. Farmacia/!ampus &ur s<n. Universidad de &antiago de !ompostela.
&antiago de !ompostela. >a !oruLa !.*.138..
#ei=oosiota%mixmail.com
El gnero 4ordonia presenta un gran potencialen distintas reas industriales
debido a su capacidad para actuar en procesos de biodegradacin,
biorremediacin y biotransformacin. As mismo 4ordonia =aco,aea, presenta
gran inters para las industrias alimentaria y cosmtica por ser productora de
carotenoides como es la cantaxantina.
Pese a este enorme inters y aplicabilidad en diversos campos de las
diferentes especies del gnero 4ordonia el conocimiento de sus mecanismos
moleculares es muy escaso.
Para desarrollar investigaciones con las cepas del gnero 4ordonia es
necesario emplear vectores con origen de replicacin propios.
El desconocimiento de las secuencias y caractersticas diferenciadoras de los
orgenes de replicacin propios de estos gneros provoca que el nmero de
plsmidos lanzadera sea muy escaso.
Por otra parte, debido a la estructura de la pared celular de 4ordonia =aco,aea
es necesario desarrollar un mtodo que permita el estudio de sus posibles
plsmidos endgenos.
En este trabajo se describe el desarrollo de un protocolo para el aislamiento del
plsmido crptico de 4ordonia =aco,aea, y su purificacin mediante
centrifugacin en gradiente de cloruro de cesio para su posterior secuenciacin
y su caracterizacin: estudio de de la promiscuidad del plsmido enE. coli,
+'co,acterium p)lei y !or'ne,acterium glutamicum, termosensibilidad, estudio
de la estabilidad estructural y segregacional.
M - 162
E-&o!te nuclea! en ;ono$ filamento$o$8 ene!acin de una ce&a de
!spergillus ni$ulans $en$ible a le&tomicina B%
Arajo L.
1
, Fernndez-Martnez J.
1
, Bernreiter A.
2
, Strauss J.
2
y Espeso E.A.
1
1
!entro de 1nvestigaciones 6iol;gicas, !.&.1.!., ?amiro de +ae$tu, 9 .8040 +adrid BEspaLaC.
.
1nstitut #`r AngeAandte 4enetiO und Sell,iologie, 6DPU/Universit' o# :atural ?esourcesand
Applied >i#e &ciences, +ut)gasse 18, A/1190 Vienna BAustriaC. lidiaar,a%ci,.csic.es
En los eucariotas el trfico ncleo-citoplsmico de macromolculas tiene lugar
a travs del complejo del poro nuclear. Este proceso est mediado por una
familia de receptores denominados carioferinas entre las que se pueden
distinguir importinas, que median el importe nuclear, y exportinas, encargadas
del exporte. La ruta de exporte mediada por Crm1p/Exportina-1 es la mejor
conocida y sus cargas presentan una seal de exporte nuclear (NES) rica en
leucinas. La leptomicina B (LMB) inhibe la funcin de esta exportina, unindose
a un residuo conservado de cistena localizado en la regin que une a la NES.
En &ac)arom'ces cerevisiae el cambio de esta cistena por una treonina hace
a la levadura insensible a la droga.
Hemos identificado el ortlogo de Crm1p (&. cerevisiae) en A. nidulans,
designado como KapK. Aspergillus, y probablemente otros hongos
ascomicetos, es resistente a la LMB porque carece de la cistena que es
recocida por esta droga. Mediante mutagnesis dirigida se gener un alelo
sensible a LMB, alelo OapP1, mediante la substitucin Thr525Cys. Para
comprobar el efecto de la substitucin de este aminocido en la ruta de exporte
que media KapK, se generaron protenas fluorescentes quimricas que
contenan nicamente seales de importe nuclear o conjuntamente con una
NES. En el fondo gentico OapP1, las protenas de fusin que portaban la NES
se acumulaban en el ncleo en presencia de LMB, demostrando que la funcin
de KapK1 es impedida por LMB. Adicionalmente, hemos buscado un cargo
natural de KapK, el activador especfico de ruta NirA, que media la regulacin
de la expresin gnica dependiente de nitrato. NirA es nuclear cuando el hongo
crece con nitrato, mientras que su localizacin es exclusivamente citoplsmica
en presencia de amonio. La salida del ncleo de NirA es dependiente de la ruta
mediada por KapK. NirA es la primera protena de un hongo filamentoso que se
caracteriza como una carga de una exportina miembro de la familia
Crm1p/Exportina-1.
Las cepas sensibles a LMB que se han generado pueden ser utilizadas para
estudiar en detalle el exporte nuclear en A. nidulans; as como la regulacin de
la localizacin subcelular de factores de transcripcin que son excluidos del
ncleo. Por otra parte, el exporte nuclear ha sido estudiado exclusivamente en
organismos uninucleares, por tanto, el hongo filamentoso coenoctico A.
nidulans constituye un novedoso escenario donde estudiar este proceso en
profundidad.
M - 172
El en pga? de Penicillium chrysogenum9 !eula neati"amente la
conidiacin y $e encuent!a in"oluc!ado en el c!ecimiento "eetati"o en
medio $lido%
Garca-Rico R.O.
1,2
, Fierro F.
1
y Martn J.F.
1
B1C 1nstituto de 6iotecnolog-a de >e;n B1:61D7E!C. Avda. ?eal,1. .4006. >e;n, EspaLa. B.C
(epartamento de +icro,iolog-a, Facultad de !iencias 6"sicas. Universidad de *amplona.
*amplona, :orte de &antander. !olom,ia.
Email0 degrgr%unileon.es
Las protenas G heterotrimricas acoplan las seales medioambientales con
una amplia diversidad de efectores intracelulares, estando involucradas por lo
tanto en una gran variedad de fenmenos fisiolgicos. Estas protenas se
componen de tres subunidades: alfa (a), beta (b) y gamma (g), las cuales en el
estado inactivo se encuentran asociadas formando un trmero en la cara interna
de la membrana citoplasmtica. En organismos superiores las subunidades a
de protenas G han sido divididas en cuatro grupos principales: Gai, Gas, Gaq y
Ga12, segn su semejanza estructural y funcional. Se ha demostrado que en
hongos filamentosos, las protenas G heterotrimricas intervienen en diversos
procesos del ciclo vital, tales como germinacin, reproduccin asexual y sexual,
patogenicidad y regulacin del metabolismo secundario.
En este trabajo presentamos la clonacin del gen pga1 en *enicillium
c)r'sogenum NRRL 1951, el cual codifica para la subunidad a de una protena
G heterotrimrica homloga al grupo Gai de mamferos. La secuencia
nucleotdica del gen presenta un marco de lectura abierto de 1062 pb con tres
intrones, que corresponde a una secuencia deducida de 353 aminocidos con
un peso molecular estimado de 40.865 Daltons, la cual presenta una alta
identidad con subunidades ai de otros hongos filamentosos. La protena PGA1
presenta los caractersticos subdominios G1-G5 de los miembros de las
GTPasas tipo-RAS, as como el potencial sitio de acilacin amino terminal
MGXXXS y la secuencia consenso carboxilo terminal CXXX para la ADP-
ribosilacin dependiente de NAD, que son caractersticos de las subunidades
alfa del grupo Gai.
Con el fin de examinar la funcin del gen pga1 en *. c)r'sogenum, ste fue
sobreexpresado mediante una fusin al promotor gpdA de Aspergillus nidulans.
Los transformantes exhibieron una dramtica reduccin en los niveles de
produccin conidial, alterando el aspecto morfolgico de las colonias en medio
slido. Tambin se observ una disminucin en la tasa de extensin apical
(expresada en mm/h) en medios de cultivo slidos. Se analiz la expresin del
gen pga1 durante el crecimiento de *. c)r'sogenum en medio slido y en
medio lquido. El gen se expres pobremente durante el crecimiento en medio
slido, especialmente despus del segundo da, coincidiendo con el inicio de la
conidiacin, lo cual confirma el efecto negativo observado en los
transformantes. La expresin del gen no mostr variaciones apreciables en el
crecimiento en medio lquido. Los resultados obtenidos nos indican que PGA1
juega un importante papel, regulando negativamente la conidiacin y est
involucrada en el crecimiento vegetativo en medio slido.
M - 177
Ca!acte!i)acin molecula! de una nue"a li$ina de un &!ofao de
Streptococcus mitis acti"a cont!a &a!ede$ de Streptococcus pneumoniae
Llull, D., Lpez, R. y Garca, E.
!entro de 1nvestigaciones 6iol;gicas. !&1!. ?amiro de +ae$tu, 9, .8040 E +adrid. e/mail0
dllull%ci,.csic.es
&treptococcus mitis y &treptococcus pneumoniae cohabitan en el tracto
respiratorio superior humano. Ambos microorganismos presentan cidos
teicoicos idnticos, siendo la fosforilcolina uno de los componentes de los
mismos. Este aminoalcohol permite a la bacteria el anclaje en superficie de una
familia de protenas denominadas protenas de unin a colina (CBPs), entre las
que se encuentran diversos factores de virulencia de &. pneumoniae y, ms
concretamente, peptidoglicn hidrolasas de la bacteria y de los fagos que la
infectan, as como factores de adhesin a las clulas del husped. Puesto que
an no se han caracterizado CBPs en &. mitis, esta especie proporciona un
modelo adecuado para la bsqueda de peculiaridades an desconocidas en los
nuevos miembros de esta familia de protenas.
La adicin de mitomicina C a cultivos de la cepa SK137 de &. mitis,
desencaden su lisis, sugiriendo la presencia de un profago en esta cepa.
Partiendo de estos mismos lisados de cultivos inducidos, se construy una
genoteca en Esc)eric)ia coli. Uno de los clones obtenidos hiperexpresaba una
protena de 33.4 kDa (Skl) con capacidad para solubilizar paredes de
neumococo in vitro. La lisina Skl se purific a homogeneidad electrofortica
utilizando por cromatografa de afinidad en DEAE-celulosa y se determin su
secuencia amino terminal. Su purificacin mediante este procedimiento y los
anlisis de la secuencia de DNA del gen sOl revelaron que Skl contiene un
tpico dominio de unin a colina en su extremo C-terminal. Adicionalmente, el
extremo N-terminal presenta un dominio CHAP, asociado a peptidoglicn
hidrolasas con actividad amidasa o endopeptidasa. Las caractersticas
bioqumicas ms relevantes de Skl fueron determinadas en ensayos in vitro
sobre paredes de neumococo y &. mitis marcadas con [
3
H]-colina. La enzima
alcanza su mxima actividad a 30C y pH 6.5. Al igual que las lisinas LytA
B6
y
LytA
HER
recientemente caracterizadas en los profagos fB6 y fHER de &. mitis,
Skl se inhibe con bajas concentraciones de colina (0.5%) y desoxicolato sdico
al 1%. El anlisis, mediante filtracin en gel, de los productos de degradacin
de paredes celulares tratadas con Skl y la secuenciacin de los pptidos
liberados revelaron que Skl presenta una actividad amidasa. La enzima
purificada, aadida a cultivos de &. mitis o &. pneumoniae, produce la rpida
lisis de los mismos, lo que sugiere el posible uso de esta nueva lisina como
agente teraputico alternativo a la clsica administracin de antibiticos. Este
trabajo ilustra, asimismo, sobre el posible papel de los fagos en la transferencia
de genes entre especies, as como del reemplazo modular de los genes lticos.
M - 181
De$a!!ollo de un m'todo !#&ido9 lim&io y eficiente &a!a la obtencin de
i$o&enicilina N &u!a a &a!ti! de !cremoniumchrysogenum.
Vaca . (1), Casqueiro F.J. (2), y Martn J.F. (1, 2).
1. 1nstituto de 6iotecnologia de >e;n B1:61D7E!C. Av. ?eal s<n, *arIue !ienti#ico de >e;n. ..
Universidad de >e;n, !ampus de Vega$ana s<n, .4003 >e;n.
Diversos antibiticos b-lactmicos como penicilinas y cefalosporinas continan
siendo medicamentos de eleccin en el tratamiento de diversas enfermedades
infecciosas. Por tanto, el conocimiento completo de la ruta biosinttica de
penicilinas y cefalosporinas es degran inters industrial por su importancia en la
mejora de la producciny la diversificacin de estos antibiticos.
Unintermediario importante de estas rutas metablicas es la isopenicilina N. Se
ha encontrado recientemente, que la isopenicilina N es convertida a penicilina
N, a travs de una reaccin enzimtica de epimerizacin en tres pasos (Ulln y
col. 2003), reaccin que no haba sido descrita antes en la biosntesis de
antibiticos. Con objeto de estudiar la biologa molecular de dicho proceso es
necesario disponer de isopenicilina N.
En este trabajo hemos desarrollado por primera vez, un mtodo eficiente,
rpido y no contaminante, para la obtencin de isopenicilina N pura.
Previamente, se haba descrito la obtencin de isopenicilina N mediante
sntesis qumicao purificacina partir de caldos de cultivo o micelio de los
hongos productores: *enicillium c)r'sogenum y Acremonium c)r'sogenum.Sin
embargo, los rendimientos obtenidos con los procedimientos de sntesis
qumica son muy bajos adems de ser muy largos, laboriosos y altamente
contaminantes. Respecto a la purificacin de isopenicicilina N a partir de los
caldos de cultivo de los hongos, todos los protocolos presentes en la
bibliografa emplean sustancias toxicas como la piridina, y adems, son
procesos de micropurificacin.
En nuestro laboratorio se obtuvo una cepa de A. c)r'sogenum denominada
TD189 en la que se han interrumpido los genes que intervienen en
laepimerizacin de la isopenicilina N en penicilina N, consiguiendo de este
modo que se acumule isopencilina N en los caldos de cultivo como nico
compuesto bioactivo. Usando esta cepa se desarrollo un mtodo simple para la
purificacin de isopenicilina. En dicho mtodo, inicialmente el caldo se filtra y
trata con acetona para posteriormente pasarlo por un tndem de columnas
cromatogrficas, una de carbn activo y otra conteniendo una resina
hidrofbicaSM2. Una vez recogido el eluyente, se liofiliza para concentrar y a
continuacin, se realiza una cromatografa de gel filtracin a travs de una
resina sephadex G25. Finalmente, la muestra se purific por HPLCempleando
una columna semipreparativa de fase reversa C18. El resultado es la obtencin
de la isopenicilina N con una pureza mayor del 95% y un rendimiento del
proceso total del 25%.

M - 182
E$tudio$ de lo$ efecto$ de la eliminacin del en pur9 del clu$te! de
bio$,nte$i$ de &u!omicina de S. alboniger en S. livi$ans ?E./
Snchez M. B., Martnez, J. . y Jimnez, A.
!entro de 6iolog-a +olecular f&evero Dc)oag, Universidad Aut;noma de +adrid, !anto,lanco,
.8049 +adrid. m,sanc)e$%c,m.uam.es
La puromicina es un antibitico aminonucleosdico producido por &. al,oniger.
El cluster de biosntesis consta de 10 or#s que codifican los genes de
biosntesis y resistencia. El gen pur8, con homologa con protenas
transportadoras dependientes de un gradiente de protones, proporciona
resistencia a puromicina cuando se expresa en &. lividans 1326, y por ello se le
ha asociado una funcin de resistencia al antibitico en &. al,oniger, adems
de una posible funcin transportadora de N-acetilpuromicina, ltimo
intermediario de la ruta de biosntesis. El gen pur8 se transcribe en forma
monocistrnica y en sentido contrario al resto de los genes del cluster,
presentando su mximo de expresin antes del inicio de la biosntesis del
antibitico, al inicio de la curva de crecimiento.
Se intent la eliminacin de la secuencia completa del gen pur8 en el
organismo productor, &. al,oniger, sin xito. nicamente se obtuvo la
eliminacin de los 7 primeros dominios transmembrana, lo cual no afecta a la
produccin de puromicina aunque s a los niveles de resistencia, reducindolos
(1). Sin embargo se realiz la eliminacin de la secuencia total del gen pur8,
mediante recombinacin homloga en Esc)eric)ia coli (2), en los csmidos
pPB5.13 y pCXS, conteniendo el cluster pur completo. Estos csmidos se
utilizaron para estudiar el efecto de su mutacin en el organismo heterlogo &.
lividans 1326. El resultado observado fue una reduccin de los niveles de
resistencia a puromicina, adems de una disminucin de los niveles de
puromicina producida, sin acumulo intracelular de N-acetilpuromicina, ltimo
intermediario de la ruta. Todo esto junto con la baja actividad de la encima Pac,
cuyo gen se expresa en un policistrn con el resto de los genes del cluster,
parece indicar que la eliminacin del gen pur8 afecta negativamente la
expresin del resto de los genes del cluster, a pesar de poseer una expresin
independiente.
(1) Martnez, J. . (1998). "Transformacin y delecin gnica en &. al,oniger0
estudio sobre la funcin de los genes napH y pur8 del cluster pur. Tesis
doctoral. Facultad de Ciencias. Universidad Autnoma de Madrid.
(2) Gust, B., Challis, G. L., Fowler, K., Kieser, T. and Chater, K. F. (2003). PCR-
targeted &treptom'ces gene replacement identifies a protein domain needed for
biosynthesis of the sesquiterpene soil odor geosmin. *roc. :atl. Acad. &ci. ?FF9
1541-1546.

M - 186
Con$t!uccin de :uime!a$ del facto! E>. de !spergillus fumigatu$
$en$ible$ a de!i"ado$ de la $o!da!ina
Rodrguez-Mateos M., Garca-Marcos A., Remacha M., Santos C.
1
, Ballesta
J.P.G.
!entro de 6iolog-a +olecular &evero Dc)oa, !anto,lanco, UA+ ' !&1!, +adrid .8049.
1
(irecci;n
actual, Universidad Francisco de Vitoria. maria[r%c,m.uam.es
Las sordarinas actan inhibiendo especficamente la sntesis de protenas en
hongos. El aislamiento de mutantes resistentes a esta droga en !andida
al,icans y &acc)arom'ces cerevisiae, ha permitido determinar dos grupos de
complementacin. El primero de ellos corresponde al factor de elongacin 2
(EF2), y el segundo a la protena del tallo ribosmico P0.
Durante el proceso de elongacin de la sntesis de protenas, EF2 se une al
tallo ribosmico de forma reversible, promoviendo la translocacin del ribosoma
a lo largo del mRNA. La sordarina acta a este nivel unindose al complejo
EF2-tallo ribosmico, estabilizndolo en la forma post-translocacional y por
tantodeteniendo la elongacin del pptido naciente.
Aspergillus #umigatus, un hongo filamentoso patgeno oportunista en humanos,
presenta de forma natural resistencia a la sordarina. La dificultad de
manipulacin de hongos filamentosos en sistemas de rastreo masivos para la
bsqueda de nuevos antibiticos nos indujo a construir una cepa de &.
cerevisiae que expresara los elementos del hongo que son blanco del inhibidor.
En una primera aproximacin se clonaron los genes ?**0 y EF76 (homlogo a
EF7.) de A. #umigatus, y se expresaron en la levadura para analizar su efecto
sobre la sensibilidad a la sordarina.
Se determin que la expresin de la protena P0 de A. #umigatus, AfP0, en una
cepa de &. cerevisiae que no expresa la protena P0 endgena, &. cerevisisae
dGP0-AfP0, confierem un cierto grado de resistencia a la sordarina. La
expresin adicional de EFB en la cepa que expresa la protena AfP0, &.
cerevisiae E4/EFB, mostr una resistencia muy superior. Sin embargo, el
crecimiento de la misma era muy lento (tiempo de generacin 7 horas), debido
al bajo nivel de expresion de EFB y por tanto es poco til para su utilizacin en
screenings.
As pues, como alternativa, nos planteamos construir una quimera en la que un
fragmento de 220pb del EF2 de &. cerevisiae se sustituyera por el equivalente
de EFB que codifica la regin que determina la resistencia a la sordarina. Esta
quimera se expres en &. cerevisiae E4 obtindose la cepa & cerevisiae E4Q.
Esta cepa presenta un tiempo de generacin de aproximadamente 3 horas, lo
que supone una disminucin considerable con respecto a la cepa E4/EFB.
Adems se ha comprobado que esta cepa presenta un nivel de resistencia a
sordarina muy elevado quepermitir su utilizacin en futuros screenings para
buscar compuestos que inhiban A. #umigatus.

M - 188
Identificacin &!otemica de &!ote,na$ de !spergillus ni$ulans :ue
inte!accionan con la im&o!tina a%
Fernndez-Martnez, J.
1
, de los Ros, V.M.
2
, Pealva, M.A.
1
, Albar, J.P.
2
,
Espeso, E.A.
1
1
(ept. +icro,iolog-a +olecular, !entro 1nvestigaciones 6iol;gicas. !&1!. ?amiro de +ae$tu, 9.
.8040 +adrid BEspaLaC.
.
>a,oratorio de *rote;mica. !entro :acional de 6iotecnolog-a !&1!,
.8039 +adrid BEspaLaC. =#ernande$%ci,.csic.es
La importina a es el principal transportador de protenas entre el citoplsma y el
ncleo. Todos los eucariotas contienen en sus genomas al menos un gen que
codifica para una importina a. En Aspergillus nidulans hemos caracterizado el
nico gen que codifica para una importina a, gen que hemos denominado
OapA, (Oar'op)erin A).
Nuestra hiptesis de trabajo es que las clulas de este hongo, hifas, que son
multinucleadas y con un crecimiento muy polarizado posiblemente imponga
una serie de requerimientos a la maquinaria de transporte nuclear
completamente diferente a la de las clulas mononucleadas, para abordar est
hiptesis hemos utilizado tcnicas protemicas para descubrir potenciales
interactores de la importina a, KapA, en este hongo filamentoso.
Hemos caracterizado 11 protenas de A. nidulans que, in vitro, son purificadas
por afinidad a KapA. Entre ellas se encuentran dos protenas de la ruta de la
dinena, lo que sugiere que la dinena, cuyo movimiento celular se soporta
sobre microtbulos, podra ayudar a KapA a repartir sus cargas a los diferentes
ncleos de la hifa en un tiempo celular razonable. Adems, hemos detectado la
interaccin de KapA con una protena similar a los componentes de la familia
NAP/SET. Esta familia de protenas se asocia con la cromatina y adems se
han descrito que interaccionan con las ciclinas de tipo B. Esta ultima
interaccin es muy interesante dado que podra explicar los fenotipos descritos
de parada de mitosis que muestran ciertos alelos termosensibles de la
importina a de levadura.
Finalmente, entre las protenas que interaccionan con KapA hemos encontrado
posibles cargos de esta importina en Aspergillus nidulans.
M - 208
Ca!acte!i)acin molecula! del en)ima li&ol,tico &!oducido &o! la bacte!ia
;alfila mode!ada 1arinobacter lipolyticus
Martn, S., Mellado, E. y Ventosa, A.
(epartamento de +icro,iolog-a ' *arasitolog-a, Facultad de Farmacia, Universidad de&evilla.
rengel%us.es
Las bacterias halfilas moderadas son microorganismos capaces de crecer
ptimamente en medios que contienen entre un 3 y un 15% de NaCl y estn
representadas por un gran nmero de especies pertenecientes a diferentes
gneros (Ventosa y col., 1998). Al igual que otros microorganismos
extremfilos, las bacterias halfilas constituyen una importante fuente de
enzimas de inters biotecnolgico. En un muestreo realizado en diferentes
salinas del sur de Espaa, se aislaron bacterias halfilas capaces de producir
diferentes hidrolasas extracelulares, centrndonos en el estudio de la actividad
lipoltica. Entre todas las cepas aisladas que presentaban sta actividad se
seleccion la cepa SM19 para un estudio en profundidad. Tras su
caracterizacin fenotpica y genotpica, sta fue descrita como una nueva
especie perteneciente al gnero +arino,acter, a la que se denomin
+arino,acter lipol'ticus (Martn y col., 2003).

La construccin de un banco de genes en E. coli mediante la tcnica de
encapsidacin "in vitro nos ha permitido aislar y secuenciar el gen lip+, de 816
pares de bases, que codifica la lipasa LipM producida por +. lipol'ticus. Una
vez localizado y aislado dicho gen, se procedi a su estudio mediante diversos
programas informticos. La comparacin de la secuencia de LipM con las de
otras lipasas existentes en las bases de datos revel homologa con el grupo
de las / hidrolasas, presentando el pentapptido conservado en esta familia
(Gly-X-Ser-X-Gly).

Por otra parte, se estn llevando a cabo experimentos de expresin heterloga
en E. coli utilizando como vector de expresin pET22b(+). Para la clonacin del
gen lip+ en dicho vector se disearon unos cebadores especficos que
amplificasen la regin del gen y que introducan las secuencias de las enzimas
de restriccin Eco?1 (extremo N-terminal) y Y)o1 (extremo C-terminal). De esta
forma obtuvimos los clones pETlipEX y pETlipNX que estn siendo analizados
con el fin de detectar la expresin de la protena recombinante.

S. Martn, M.C. Mrquez, C. Snchez-Porro, E. Mellado, D.R. Arahal and A.
Ventosa. +arino,acter lipol'ticus sp. nov., a novel moderate halophile with
lipolytic activity. nt. J. Syst. Evol. Microbiol. 53: 1383-1387
Ventosa, A., Nieto, J.J. and Oren, A. 1998. Biology of moderately halophilic
aerobic bacteria. Microbiol. Mol. Biol. Rev. 62: 504-544

M - 214
Cla$ificacin de bacte!ia$ ai$lada$ de &!oce$o$ infeccio$o$ &o!cino$%
T'cnica$ molecula!e$ &a!a la identificacin de &ateno$ eme!ente$
"ete!ina!io$%
Muoz, D; Vela, A; Fernndez-Garayzbal, JF; Domnguez, L.
>a,oratorio Visavet. &anidad Animal. Facultad de Veterinaria. Hospital cl-nico Veterinario. *lanta
s;tano. Universidad !omplutense de +adrid. deliamuno$1%'a)oo.es
Los principales problemas econmicos del sector porcino actual son
ocasionados por las perdidas que producen diferentes procesos infecciosos.
Los virus y mycoplasmas responsables de estos procesos estn en estos
momentos ampliamente caracterizados.

No sucede lo mismo con los agentes
bacterianos. En el panorama porcino actual, adems de patgenos clsicos,
como *asteurella multocida, Actino,acillus pleuropneumoniae o Haemop)ilus
parasuis, otros agentes bacterianos son en ocasionesaislados. Por tanto, es
necesario conocer el abanico de agentes bacterianos que pueden ser
responsables o estar asociados con los procesos respiratorios en el ganado
porcino. Sin embargo, la caracterizacin de estas bacterias no siempre es
posible mediante la utilizacin de mtodos microbiolgicos convencionales,
bien por la propia limitacin de los sistemas de identificacin, o por tratarse de
especies bacterianas no descritas previamente. La alternativa ms eficaz y
racional para solventar esta limitacin es la identificacin mediante mtodos
moleculares.
En este estudio hemos analizado 4.165 cocos gram positivos catalasa
negativos. Estos microorganismos fueron aislados a lo largo de 1999 y 2005 a
partir de diferentes muestras (pulmn, corazn, ganglios, entre otras) obtenidas
en matadero (28% de las cepas) y a partir de casos clnicos porcinos. Los
animales muestreados procedan de explotaciones sitas en las reas de mayor
produccin porcina en Espaa. El 61% de estos aislamientos fueron
identificacin bioqumicamente (por sistemas multisustrato comerciales) como
& suis, uno de los agentes etiolgicos de mayor significacin clnica en la
industria porcina. Otras especies de estreptococcus fueron tambin
identificadas, destacando los microorganismos clasificados como
&treptococcus acidominimus (6,46%) y &treptococcus d'sgalactiae subsp.
eIuisimilis (5,83%). Aerococcus viridans represent el 6,02% de los
aislamientos. Otras especies bacterianas incluidas en gneros tales como
A,iotrop)ia spp., Alloicoccus ottis, Enterococcus spp., 4emella spp.,
>actococcus spp. ' >euconosto spp. fueron identificadas en una frecuencia
inferior a los anteriores.
La identificacin bioqumica dudosa, dbil o inaceptable que presentaban el 4%
de los microorganismos fue comparada con la proporcionada por la
secuenciacin del gen que codifica para el 16S ARNr. Los resultados obtenidos
determinaron identificaciones diferentes a las bioqumicas en un 48% de estos
aislamientos. Por otro parte, la identificacin molecular ha permitido la
identificacin de ciertos microorganismos hasta ahora no descritos en ganado
porcino, como es el caso de la FacOlamia ta,accinalis. El papel de todos estos
microorganismos en las infecciones porcinas no ha sido hasta el momento
establecido. Sin embargo, estas bacterias podran actuar como patgenas
oportunistas en estados de estrs, originado por las propias condiciones de
produccin intensiva actuales del ganado porcino siendo, en determinadas
ocasiones, responsables directos del caso clnico o actuar como patgenos
secundarios agravando un proceso ocasionado por otro agente etiolgico.
M - 215
Ca!acte!i)acin de una en)ima f!uctofu!ano$ida$a de la le"adu!a
;anthophylomyces $en$rorhous.
Macas Borrego, M.., Alcal Martnez, B., Linde Lpez, L., lvaro Benito, M.,
Fernndez Lobato, M.
(epartamento de 6iolog-a +olecular. !entro de 6iolog-a +olecular &evero Dc)oa BUA+/!&1!C.
Universidad Aut;noma de +adrid. E/mail0 imacias%c,m.uam.es.
La levadura Yant)op)'lom'ces dendror)ous B*)a##ia r)odo$'maC es un
basidiomiceto productor del carotenoide astaxantina. El atractivo industrial de
este pigmento anaranjadoha originado un considerable avance en el
conocimiento gentico-molecular del organismo productor. En este trabajo se
describe el proceso de obtencin de una fructofuranosidasa extracelular de Y.
dendror)ous y su caracterizacin bioqumica.
Los niveles mximos de actividad fructofuranosidasa se valoran en cultivos
saturados del microorganismo crecido en medios basados en maltosa. La
expresin de la enzima se reprime por glucosa.
Se ha purificado la actividad fructofuranosidasa extracelular de Y. dendror)ous
partiendo de cultivos saturados de este microorganismo; se ha utilizado un
proceso que bsicamente implica filtracin tangencial y cromatografa de
intercambio inico. La enzima nativa tiene un peso molecular de 214 kDa
(filtracin molecular) y en condiciones desnaturalizantes migra como una nica
banda a la altura de 170 kDa. El anlisis por MALD-TOF no coincide con el de
ninguna protena conocida. La secuencia del extremo amino terminal muestra
un alto grado de homologa con la descrita para otras protenas similares en
distintos microorganismos.
La nueva protena muestra una fuerte actividad hidrolasa sobre sacarosa; acta
sobre distintos carbohidratos, entre los que se encuentran lactosa, rafinosa, 1-
kestosa, nistosa y palatinosa. No muestra actividad sobre leucrosa.
Se obtienen niveles mximos de actividad hidrolasa sobre sacarosa en un
rango de pH comprendido entre 4.5 y 6.5 unidades y una temperatura de
reaccin de 65-75C. La enzima es estable a 60C, retiene el 80% de su
actividad al menos durante 24 h a esta temperatura. Cuando se utiliza sacarosa
como sustrato, la enzima purificada muestra unos valores de V
max ,
K
cat
y
K
m
de947 U/min, 141 min
-1
y 4 mM, respectivamente.

M - 216
E$tudio $ob!e la$ do$ lico$ilt!an$fe!a$a$ de la a!u&acin 'nica ata de
la !uta bio$int'tica del antibitico nucleo$,dico A.F?A de Streptomyces
capreolus
Molloy, B., Ceballos, R.A., Saugar, ., Sanz, E., Mesa, S., Fernndez Lobato,
M., Jimnez, A.
!entro de 6iolog-a +olecular &evero Dc)oa BUA+/!&1!C. Universidad Aut;noma de +adrid.
+adrid .8049. ,mollo'%c,m.uam.es.
A201A es un antibitico nucleosdico producido por el actinomiceto
&treptom'ces capreolus NRRL 3817. Se trata de un inhibidor de la sntesis de
DNA sumamente activo frente a bacterias Gram positivas aerbicas o
anaerbicas y la mayor parte de los Gram negativos anaerbicos. La estructura
qumica consta de un componente nucleosdico, la N
6
,N
6
-dimetil-3'-amino-
3'desoxiadenosina, unida por un enlace tipo amida a un poliqutido (cido a-
metil-p-cumrico), el cual a su vez se une mediante un enlace O-glucosdico al
disacrido compuesto por una hexofuranosa insaturada y una 3,4-di-O-metil-D-
ramnosa.
Se ha obtenido una cepa de &. lividans (&. lividans ata) que incluye un
fragmento de DNA genmico (unas 90kb) de &. capreolus que contiene el
cluster ata. El transformante obtenido produce A201A (espectrometra de
masas y actividad biolgica) en un nivel algo inferior al del organismo
productor. El fragmento de DNA forneo incluido en &. lividans incluye al
menos 28 ORFs que podran estar implicadas en la biosntesis del antibitico
A201A% De todas ellas 5 parecen tener relacin conla biosntesis y
transferencia de azcares (tres para D-ramnosa: ata1., 13, 1 y dos para la
hexofuranosa insaturada: ata3, 10). La destruccin independiente en &.
lividans ata de los posibles determinantes de las dos glicosiltransferasas,
necesarias para la incorporacin de los dos monosacridos a la molcula de
A201A ha sido abordada. Para ello, utilizando un csmido integrativo y no
replicativo en &treptom'ces, que contiene la agrupacin gnica ata al completo,
se han delecionado los genes ata3 y ata13 de manera independiente por
recombinacion en E.coli. Se han generado dos csmidos mutantes que
posteriormente fueron introducidos por conjugacin en &.lividans13.6 e
integrados en el sitio ATT del genoma de la bacteria. Los mutantes obtenidos
expresan el gen de resistencia a A201A y no producen el antibitico estudiado.
Se estn realizando distintos ensayos para caracterizar los metabolitos
sintetizados por estos mutantes.
M - 217
Ca!acte!i)acin de una nue"a =luco$ida$a de la le"adu!a
;anthophyllomyces $en$rorhous con acti"idad t!an$lico$ida$a%
Linde Lpez L., Marn Alberdi D., Borrego Macas ., Cobo Agudo M J.,
Fernndez-Arrojo L.*, Lemus R.*, Plou F.J.*., Fernndez Lobato M.
(epartamento de 6iolog-a +olecular. !entro de 6iolog-a +olecular &evero Dc)oa BUA+/!&1!C.
Universidad Aut;noma de +adrid. M1nstituto de !at"lisis ' petroleoIu-mica B!&1!C. !ampus UA+.
dlinde%c,m.uam.es.
Las -glucosidasas (EC 3.2.1.20) son glicosil hidrolasas que actan sobre los
extremos no reductores de un variado nmero de glcidos produciendo la
liberacin sucesiva de unidades de D-glucosa.
En este trabajo se describe una nueva -glucosidasa de la levadura
Yant)op)'llom'ces dendror)ous (*)a##ia r)odo$'ma) que adems de
presentar actividad hidrolasa, tiene la capacidad de sintetizar oligosacridos
mediante una actividad transglicosidasa.
Lapurificacin de esta protena se ha realizado partiendo de cultivos de la
levadura crecidos enmedios basados en maltosa. En el proceso se emple
filtracin tangencial seguida de cromatografas de intercambio inico a distintos
pHs.
La -glucosidasa purificada presenta un alto espectro de actuacin, muestra
actividad hidrolasa sobre distintos oligosacridos, maltodextrinas, glucgeno y
almidn soluble. No tiene actividad sobre sacarosa. El anlisis cintico de esta
enzima determin unos valores de V
max
de 46, 24, 30 y 8.6 g glucosa liberados
min
-1
, y de K
m
de 2.71, 0.55, 0.86 y 0.72 mM para maltosa, maltotriosa,
maltoheptosa y almidn, respectivamente.
La enzima purificada presenta una actividad transglicosidasa de alto espectro.
Utilizando maltosa como sustrato forma distintos tipos de productos; todos ellos
oligosacridos que incluyen enlaces glicosdicos -(1,4) y/o -(1,6). somaltosa,
maltotriosa, panosa y maltotetraosa son algunas de las molculas sintetizadas.
Se estudi el efecto de la concentracin de maltosa en el medio sobre la tasa
transglicosidasa/hidrolasa. La mezcla de azcares generados presenta una
composicin cualitativa muy similar a la de los preparados comerciales de
isomaltooligosacridos que se utilizan como completo diettico con actividad
prebitica. Estos preparados se obtienen industrialmente mediante la hidrlisis
enzimtica del almidn y posterior tratamiento con transglicosidasas fngicas.
La enzima estudiada no muestra actividad glicosiltransferasa cuando se utiliza
sacarosa como sustrato.

M - 218
Ca!acte!i)acin de huvS9 un nue"o !ece&to! de memb!ana e-te!na de
!u&o$ ;emo en el &ateno de &ece$ 3ibrio anguillarum
Mourio S., Juz-Ro S., Balado M., Osorio C.R., Lemos M.L.
(epartamento de +icro,iolog-a ' *arasitolog-a, 1nstituto de Acuicultura, Universidad de &antiago
de !ompostela, 138. &antiago de !ompostela. e/mail0 susanaml%usc.es
Vi,rio anguillarum engloba 10 serotipos que incluyen cepas tanto patgenas
como ambientales. Uno de los principales factores de virulencia reside en su
capacidad de captar hierro del hospedador. Para esto, la bacteria se sirve de
mecanismos basados tanto en la captura del hierro en su forma libre
(produccin de siderforos) como en la utilizacin del grupo hemo asociado a
protenas como la hemoglobina. En un trabajo previo, se caracteriz el sistema
de captacin y transporte de grupos hemo de la cepa 775 de V. anguillarum
(serotipo O1) y que incluye el gen que codifica el receptor de membrana
externa denominado )uvA. Mediante PCR y Southern blot se analiz la
presencia de este gen y del resto del sistema en aislados de V. anguillarum
representativos de los 10 serotipos. Segn los resultados obtenidos las cepas
analizadas poseen todos los genes asociados al sistema de captacin y
transporte de hemo a excepcin del receptor )uvA, presente en 12 de las 21
cepas analizadas. Por PCR-nversa se caracterizaron, en la cepa ET208
(serotipo O3), las regiones adyacentes a )uvS, gen al que est ligado )uvA.
Como resultado, se encontr un nuevo receptor de membrana externa
asociado a este sistema al que se denomin )uv& y que est presente en las
restantes cepas carentes de )uvA. El porcentaje de identidad entre los dos
receptores caracterizados es de un 67% respecto a la secuencia de nucletidos
y 38% en la secuencia de aminocidos. Sin embargo, )uv& comparte con
)uvA, adems de su posicin dentro del sistema de captacin de grupos hemo,
las regiones adyacentes 5' (incluida la regin promotora y las 131 primeras
bases de la ORF) y parte de la regin intergnica entre el receptor y el gen
)uvS asociado al sistema de captacin de hemo, lo que sugiere un posible
origen por transferencia horizontal de uno de los dos receptores descritos en V.
anguillarum.
M - 219
Identificacin de un o&e!n in"oluc!ado en la $,nte$i$ de $ide!fo!o$ en
Photobacterium $amselae $$&% piscici$a< $imilitude$ e$t!uctu!ale$ con el
$i$tema de $,nte$i$ y t!an$&o!te de ye!$iniabactina en 2ersinia $&&%
Juiz-Ro S.; Mourio S.; Prez-Pardal S.; Lemos M.L. y Osorio C.R.
(epartamento de +icro,iolox-a, 1nstituto de Acuicultura, Universidade de &antiago, 138.,
&antiago de !ompostela
*)oto,acterium damselae subsp. piscicida es el agente causal de la
pasteurelosis, una enfermedad que causa importantes prdidas econmicas en
la acuicultura marina a nivel mundial. Estudios previos indican que esta especie
produce y utiliza siderforos como mecanismo para captar hierro, pero las
bases genticas de dicho mecanismo no han sido estudiadas en detalle.
En el presente trabajo hemos identificado un fragmento genmico de 21 kb que
incluye un opern de genes con una elevada similitud con los sistemas de
sntesis y transporte de yersiniabactina, un siderforo producido y utilizado
como mecanismo de captacin de hierro en especies del gnero @ersinia.
Sorprendentemente, ninguno de los sistemas descritos en otras vibrionceas
(familia a la que pertenece *. damselae) muestra una similitud significativa con
los genes del opern aqu descrito. Hasta el momento se han identificado cinco
genes, que incluyen un activador transcripcional de la familia AraC, un posible
receptor de membrana externa, una protena de funcin desconocida, y dos
pptido-sintetasas no ribosmicas (rp1 e rp2) de alto peso molecular (375 y
221kDa) y con mltiples dominios, que mostraron un elevado grado de
conservacin con pptido-sintetasas no ribosmicas homlogas descritas en
@ersinia spp.
Para llevar a cabo un anlisis funcional, y demostrar la implicacin de este
opern en la produccin de siderforos, se construy un mutante por insercin
en el gen irp1. La cepa de *. damselae ssp. piscicida con este gen inactivado
mostr una reduccin muy significativa en su capacidad de crecer en un medio
con un quelante de hierro, y adems en placas de agar CAS mostr una
reaccin negativa, indicando la prdida de la capacidad de producir siderforos.
Los resultados demuestran que la protena rp1 est directamente implicada en
la sntesis del siderforo de *. damselae ssp. piscicida.

M - 226
ML4A 5Multilocu$ 4a!iable=Numbe! Tandem=Re&eat Analy$i$7 como
m'todo alte!nati"o &a!a la ti&ificacin de ce&a$ de E. coli serotipo
O1=><4> &!oducto!a$ de t-ina de S;ia%
Herrera, L.*, Franco, L.*, Aladuea, A.*, Herrera, S.*, Blanco, M.
+
, Blanco, J.E.
+
,
Mora, A.
+
, Dhabi, G.
+
, Blanco, J.
+
, y Echeita, M.A.*
M>a,oratorio :acional de ?e#erencia de Salmonella ' Shigella, !entro :acional de +icro,iologia,
1nstituto de &alud !arlos 111, .8..0 +a=ada)onda, +adrid, EspaLa.
]
>a,oratorio de ?e#erencia de
E. coli B>?E!C. (epartamento de +icro,iolog-a ' *arasitolog-a. Facultad de Veterinaria.
Universidad de &antiago de !ompostela, !ampus de >ugo, .00.. aec)eita%isciii.es.
El grupo Esc)eric)ia coli productor de toxina de Shiga (STEC) es el patgeno
emergente ms importante causante de diarrea alimentaria. El serotipo ms
frecuentemente implicado en esta patognesis en todo el Mundo es el
O157:H7. En los ltimos aos su impacto en Salud Pblica ha forzado la
necesidad de mejorar las tcnicas preventivas y potenciar el estudio de los
brotes. Las investigaciones epidemiolgicas tradicionales utilizan la
electroferesis en campo pulsado (PFGE) como mtodo de referencia pero
diversos factores han motivado la bsqueda de nuevos mtodos moleculares
basados en la secuenciacin como el anlisis de las repeticiones de pequeas
secuencias de ADN que se encuentran repetidas en tandem (TR). El anlisis
de diferentes loci (MLVA, mltiple-locus VNTR anlisis) ha sido utilizado con
xito por Noller y col. para discriminar entre cepas. El objetivo de este estudio
fue evaluar este mtodo como alternativa para la tipificacin de STEC O157:H7
usando 50 cepas de origen humano, animal y alimentario aisladas en Espaa.
Se realiz una modificacin del protocolo descrito con el fin de amplificar todos
los loci de manera simultnea. Todos los aislados fueron amplificados con las
siete parejas de primer correspondientes a cada locus (TR1 a TR7) con 7
excepciones: un aislado no amplific los locus TR! y TR2 y 5 aislados no
amplificaron el locus TR5. Todos los aislados agrupados en un cluster
especfico mediante PFGE presentaron un nico patrn de repeticiones
mediante MLVA excepto en un cluster donde uno de los aislados present 6
repeticiones en lugar de 12 en el locus TR1, 26 repeticiones en lugar de 27 en
el locus TR2 y, 17 repeticiones en lugar de 16 repeticiones en el locus TR5. El
resto de aislados que no fueron agrupados en cluster y que fueron clasificados
como casos espordicos, presentaron un nico patrn mediante MLVA. Estos
aislados difieren entre ellos en al menos 2 loci. El locus que presenta una
menor variabilidad fue el TR6. El nmero de repeticiones para cada locus vara
de las publicadas por Noller y col. pero nuestros datos sugieren que el MLVA
debera ser considerado como una alternativa para la tipificacin de cepas
STEC O157:H7.
M - 229
El &!oce$o de !educcin enmica en el endo$imbionte de &ulone$
%uchnera aphi$icola
Gmez-Valero, L., Latorre, A., y Silva, F. J.
1nstitut !avanilles de 6iodiversitat i 6iologia Evolutiva, Universitat de ValKncia, Apartat ..083,
4601 Valencia. E/mail0 #rancisco.silva%uv.es
La transicin de un estilo de vida libre a un ambiente intracelular asociado a un
hospedador provoca una serie de cambios en el genoma entre los cuales
destacan la reduccin del tamao genmico y la especial evolucin de sus
secuencias nucleotdicas. Este proceso afecta tanto a bacterias patgenas
como mutualistas, siendo el endosimbionte primario de los pulgones, 6uc)nera
ap)idicola, un ejemplo extremo ya que los genomas de varias de sus cepas
alcanzan tamaos inferiores a las 500 Kb. Esta bacteria deriva de un ancestro
cuyo genoma era mucho mayor (un mnimo de 1800 genes y 2 Mb). La mayor
parte de sus genes se volvieron no esenciales o poco importantes en el nuevo
ambiente y se inactivaron. A diferencia de lo que ocurre en muchos eucariotas
este DNA no funcional se fue perdiendo rpidamente. La desintegracin gnica
mediante pequeos sucesos de delecin nucleotdica o la accin de grandes
deleciones se han postulado como los fenmenos que tuvieron lugar en las
primeras etapas de este proceso.
En este trabajo hemos estudiado el proceso de degradacin genmica durante
la evolucin de 6. ap)idicola mediante dos aproximaciones: (1) un estudio
comparado de los genomas de 3 cepas y (2) la determinacin de las tasas y
caractersticas de los indels y sustituciones nucleotdicas durante un periodo
ms reciente de su evolucin.
La comparacin genmica mostr que el DNA de los genes inactivados hace
ms de 50 millones de aos (m.a.) ha desaparecido casi completamente del
genoma. Se estim la vida media de los pseudogenes en 23,9 m.a. Tambin se
determin la existencia de una correlacin entre la disminucin del contenido
en GC del DNA de los pseudogenes y su longitud. As, cuando un gen pierde
su funcin, sus nucletidos van siendo sustituidos por otros ms ricos en AT y
su longitud disminuye. En el segundo estudio se determinaron las tasas de
indels durante la evolucin de los endosimbiontes de 37 clones del pulgn
?)opalosip)um padi (< 1 m.a.) y de varias especies del gnero ?)opalosip)um
(hasta 21 m.a.). Se analizaron el pseudogen cmO, y la regin intergnica
situada entre los genes )upA y rpo!. La obtencin de la secuencia de un gen
plasmdico, repA., nos ha permitido calibrar un reloj molecular para poder
calcular tasas respecto al tiempo transcurrido. El anlisis ha mostrado que la
prdida de DNA no funcional se produce por la combinacin de dos tipos de
sucesos, deleciones frecuentes y muy pequeas (ej. 1 nt) y deleciones
infrecuentes y ms largas (ej. 200 nt). Esto nos lleva a proponer un modelo
escalonado de prdida de DNA para las ltimas etapas del proceso de
degradacin. En base a ste, junto a una reduccin gradual caracterizada por
eventos de muy pequeo tamao se produciran ocasionalmente eventos de un
tamao mayor que podran ser fijados por seleccin y produciran puntualmente
cambios ms relevantes en el tamao del genoma.
M - 233
E$tudio in vivo del c!ecimiento de la ca&a S de 6hermus thermophilus
DBA
Acosta, F., Cava, F., Valls, C. , de Pedro, M.A. , Berenguer, J.
!entrode 6iolog-a +olecular &evero Dc)oa. Universidad Aut;noma de +adrid/!&1!. !arretera de
colmenar Pm 13. .8049. +adrid. #acosta%c,m.uam.es
Las capas S son disposiciones cristalinas bidimensionales de subunidades
proteicas que recubren las clulas procariotas que se encuentran en muchas
arqueas y bacterias. Estn constitudas por la repeticin ordenada de una
subunidad (glico) proteica codificada en copia nica en el genoma, implicando
un nivel de expresin calculado entre 200 y las 400 subunidades por segundo.
En 7)ermus t)ermop)ilus la capa S, de simetra hexagonal, est constituda
por una protena de 100 KDa denominada SlpA. Esta capa es la ms externa
de una envoltura compleja que incluye: la membrana citoplasmtica limitada
por una fina capa de peptidoglicano de composicin similar a las Gram
positivas, a la que se une covalentemente una capa de polisacridos, llamada
SCWP. Algunos azcares piruvilados de esta SCWP actan como punto de
anclaje no covalente de la capa S, que a su vez parece constituir una especie
de andamiaje sobre el que se embeben los componentes de una envoltura o
membrana externa primitiva.
Hasta la fecha se conoce muy poco acerca de la incorporacin de las
subunidades en la capa S. Debido a su rigidez, es poco probable que exista un
mecanismo de incorporacin y posterior difusin horizontal sino que lo mas
probable es que la incorporacin de subunidades ocurra sobre las posiciones
definitivas de stas en la envoltura. En 6acillus sp)aericus y en 4eo,acillus
stearot)ermop)ilus la incorporacinde nuevas subunidades ocurre en los
lugares de septacin, en forma de bandas longitudinales organizadas
helicoidalmente. Por el contrario, en 6acillus antracisy en !aulo,acter
crescentus ha sido descrita la incorporacin de nuevas unidades en forma
difusa sobre la superficie.
En este trabajo se analiza la incorporacinde SlpA en 7)ermus t)ermop)ilus
HB8 a travs de marcajes covalentes de las unidades "viejas con agentes
fluorescentes, y posterior seguimiento del crecimiento mediante microscopa
confocal.Los resultados preliminares indican la incorporacin de subunidades
en reas de crecimiento de la clula, con la conservacin completa de los polos
celulares. Los datos del anlisis sugieren tambin que esta incorporacin tiene
lugar en un ngulo con respecto al eje longitudinal coincidente con lo esperable
de una simetra de tipo hexagonal

M - 244
Clona*e y $ob!ee-&!e$in de en)ima$ te!mo!!e$i$tente$
Ferreras, E.R., Berenguer, J.
!entro de 6iolog-a +olecular &evero Dc)oa UA+/!&1!. !rta !olmenar vie=o, Pm 13, .8049,
+adrid. e/mail0 er#erreras%c,m.uam.es
Las enzimas han representado y representan un importante papel en todo
tipode procesos industriales, siendo fundamentales catalizadores de mltiples
reacciones. Hoy en da disponemos de un gran nmero de enzimas utilizadas
en multitud de procesos, y su nmero y aplicaciones no para de crecer.
Utilizadas en la industria alimentaria, qumica, papelera, fabricacin de
biosensores y un largo etctera. La mayor parte de las enzimas utilizadas
proceden de organismos mesfilos, aunque se comienzan a usar con xito las
de organismos termfilos.

Los componentes celulares de los organismos termfilos (protenas y cidos
nucleicos) son tambin termoestables. Las enzimas de estos organismos
(termozimas) estn adaptadas para realizar su funcin a elevadas
temperaturas, pero adems, presentan un alto nivel de resistencia frente a
diversos agentes desnaturalizantes, como detergentes ysolventes orgnicos o
condiciones extremas de acidez o alcalinidad. Estas caractersticas les
confieren gran inters tanto en aplicaciones donde sea necesaria la presencia
de solventes orgnicos, como en aquellas en las que se deba trabajar a altas
temperaturas.

(1)La publicacin del genoma completo de 7. t)ermop)ilus HB27 (Mayo 2004),
ha posibilitado rastrear su DNA en busca de secuencias homlogas a enzimas
conocidas y con potencial inters en aplicaciones biotecnolgicas o
industriales, como esterasas o aquellas implicadas en la hidrlisis o
modificacin de oligo y/o polisacridos. El objetivo que perseguimos es
conseguir la sobreproduccin de stas en E. coli desde vectores pET, y si no
fuera posible obtener las enzimas funcionales en E. coli, lo haramos en 7.
t)ermop)ilus, usando vectores propios del tipo pMKE.

En esta comunicacin se discutir el clonaje y expresin de genes homlogos a
b-glucosidasa, a-glucosidasa, a-galactosidasa y amilopululanasa de 7.
t)ermop)ilus HB27.

(1) Henne, A y cols. Nat Biotechnol. 2004 May;22(5):547-53
M - 245
Identificacin de una nue"a ba!!e!a a la infeccin &o! fao$ ba$ada en
$ecuencia$ de DNA !e&etida$
Dez Villaseor, C; Garca Martnez, J; Mojica, F
(ivisi;n de +icro,iolog-a. Universidad de Alicante. 03080/Alicante. mo=ica%ua.es
El genoma de procariotas pertenecientes a grupos filogenticos muy diversos
1,2
contiene unas secuencias repetidas denominadas CRSPR (Clustered
Regularly Interspaced +alindromic Repeats)
3
. Adems del tamao y la
disposicin en agrupaciones, destaca como caracterstica distintiva el
espaciamiento regular entre unidades repetidas. Recientemente hemos
identificado elementos extracromosmicos como el origen de tales
espaciadores
2
, proporcionando un punto de partida para el esclarecimiento del
papel desempeado por las CRSPR. Varias observaciones sugieren que la
presencia de espaciadores concretos en un locus CRSPR podra interferir en
la eficacia de transferencia de elementos genticos conteniendo secuencias
homlogas. Con el fin de evaluar esta posibilidad, hemos analizado en E. coli el
efecto de la presencia de un espaciador-CRSPR homlogo a una secuencia
en P1 (espaciador P1) sobre la susceptibilidad a infeccin por dicho fago. Las
tasas de lisogenia obtenidas para cepas conteniendo el espaciador P1 han
resultado ser consistentemente inferiores a las estimadas en las
correspondientes cepas isognicas carentes del espaciador. Estos resultados
confirman a los elementos CRSPR como consituyentes de un sistema que
confiere resistencia a infeccin por fagos, y cuya funcin es probablemente la
de limitar la transferencia horizontal. Proponemos un modelo segn el cual
molculas de RNA transcritas a partir de un loci CRSPR
4
actuaran dirigiendo
al sistema de inmunidad sobre elementos genticos concretos. La especificidad
vendra dada por el apareamiento de espaciadores-CRSPR con la
correspondiente secuencia homloga en la molcula diana. Actualmente
estamos investigando el papel de las protenas Cas (CRSPR-associated
sequences)
3
en la generacin y funcin de las CRSPR.

1. Mojica FJM, et al. Mol. Microbiol. 2000, 36:244-6
2. Mojica FJM, et al. J. Mol. Evol. 2005, 60:174-182
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4. Tang TH, et al. Proc Natl Acad Sci USA. 2002, 99:7536-41
M - 249
rpsL como ma!cado! de $eleccin en 6hermus thermophilus%
Blas, E., Berenguer, J.
!entro de 6iolog-a +olecular &evero Dc)oa UA+/!&1! la, ,c/103. !rta !olmenar Pm 13.8049,
+adrid. email0 e,galindo%c,m.uam.es
Hoy en da muchos aspectos de los organismos extremfilos estn siendo
estudiados, entre otros motivos por su potencial aplicacin en procesos
biotecnolgicos e industriales. Uno de los problemas a la hora de desarrollar
vectores adecuados para clonar en 7)ermus t)ermop)ilus ha sido la prctica
inexistencia de genes de seleccin positiva a alta temperatura. Uno de los
temas a abordar es el desarrollo de cassettes gnicos de resistencia
termoestable a antibiticos que nos den un mayor margen de trabajo, ya que
en la actualidad contamos nicamente con la resistencia termoestable a
kanamicina, que permite la seleccin de mutantes de insercin a alta
temperatura y con un ndice casi nulo de falsos positivos (1). Recientemente ha
sido descrita la "bleomycin binding protein" como marcador de resistencia en
7)ermus (2), pero an no se han publicado aplicaciones.

La resistencia en 7. t)ermop)ilus al antibitico estreptomicina viene conferida
frecuentemente por mutaciones en el gen rps>, que codifica la protena S12 de
la subunidad 30S del ribosoma bacteriano. La idea de este trabajo era tratar de
emplear un gen rps> mutado como mtodo de seleccin positiva por resistencia
a estreptomicina. Para ello, se aisl el gen rps> de un mutante espontneo a
estreptomicina en la cepa HB27 de 7. t)ermop)ilus, comprobndose que la
secuencia del gen presenta dos mutaciones (K42R y K52E) en la protena S12,
la segunda de las cuales no haba sido descrita previamente. Una vez obtenido
este gen mutado, construimos dos tipos de vectores, uno integrativo y otro
replicativo, este ltimo basado en el replicn de pMY1 (3), ambos
seleccionables por estreptomicina.

La validacin del sistema de seleccin en ambos casos se realiz mediante
ensayos de complementacin de mutantes de insercin del gen de resistencia
a kanamicina con el gen silvestre respectivo (nar!, p)oA, greA1, greA.) y
tambin mediante genes testigo (-galactosidasa). Los datos obtenidos de
dichos ensayos nos muestran que ambos plsmidos funcionan.

Los ensayos realizados nos han demostrado que el gen rps>, que confiere
resistencia a estreptomicina, es un buen criterio de seleccin positiva para
7)ermus t)ermop)ilus.

Bibliografa:

1-Lasa, .,et al. (1992). +ol. +icro,iol. 6(11):1555-64.
2-Brouns, S.J., et al. (2005). 2 6iol !)em. 280(12):11422-31.
3-de Grado, M., et al. (1998).FE+& +icro,iol >ett. 165(1):51-7.
M - 250
Nue"o enfo:ue &a!a e$tudia!9 mediante el $i$tema de doble ;,b!ido9 la$
inte!accione$ ent!e la$ &!ote,na$ + de S. cerevisiae%
Francisco, R., Ballesta, J.P.G. y Remacha M.
!entro de 6iolog-a +olecular f&evero Dc)oag B!&1! ' Universidad Aut;noma de +adridC.
!anto,lanco, .8049/+adrid. r#rancisco%c,m.uam.es
El tallo ribosmico es una estructura de naturaleza proteica altamente
conservada en todos los ribosomas. Se encuentra anclado en el dominio
GTPasa del rRNA 16S de la subunidad mayor del ribosoma, a travs de las
protenas RPP0 y RPL12. Se compone adems de las genricamente
denominadas "protenas cidas o "protenas P por el hecho de estar
fosforiladas. El tallo es una estructura flexible sobre la que interaccionan
diferentes factores que participan en el proceso de traduccin, siendo el ms
estudiado el factor de elongacin 2.
Distintas evidencias indican que estas protenas se agrupan en dos familias, P1
y P2, que se unen al ribosoma como heterodmeros P1-P2, siendo la protena
P1 la que ancla al heterodmero sobre la protena P0. As, por ejemplo, tan slo
las protenas P1 dan interaccin con P0 en el sistema de doble hbrido clsico.
Recientemente hemos utilizado una variante de este sistema en el que las
protenas cuya interaccin se quiere estudiar se fusionan al extremo amino de
los dominios de GAL4 en lugar de hacerlo al extremo carboxilo. Con este
sistema hemos observado que tanto las protenas P1 como las P2 son capaces
de interaccionar con P0. Este dato abre nuevas vas para interpretar el proceso
de ensamblaje del tallo ribosmico.
El sistema de doble hbrido tambin lo hemos utilizado para identificar
protenas que interaccionan con los componentes del tallo ribosmico en
&acc)arom'ces cerevisiae. A vista de los resultados anteriores, se ha repetido
el screening de genotecas con construcciones que fusionan las protenas P al
extremo amino del dominio de unin de GAL4. Como resultado, se han
identificado protenas (no encontradas previamente con el sistema
convencional) que estn implicadas en el proceso de biognesis de la
subunidad mayor del ribosoma, lo que relaciona el tallo ribosmico con el
proceso de ensamblaje nucleolar del ribosoma.
M - 254
Relacin ent!e el $i$tema ene!al de lico$ilacin y la $u&e!"i"encia de
'ampylobacter +e+uni% Obtencin de ce&a$ de '. +e+uni con el en pgl%
mutado%
Girbau, C., Churruca, E., Martnez, ., Mateo, E., Fernndez de Aranguiz, A.,
Alonso, R. y Fernndez-Astorga, A.
cgir,au001%iOasle.e)u.es
!amp'lo,acter =e=uni bajo condiciones adversas, como las bajas temperaturas
o la ausencia de nutrientes, es capaz de entrar en el estado viable no cultivable
(VNC). Bajo este estado pierde su capacidad de crecer en medios de cultivo
pero mantiene actividad metablica detectable.
!. =e=uni posee dos sistemas de glicosilacin: glicosilacin de la flagelina (O-
linked) y sistema general de glicosilacin (N-linked). El locus que codifica los
enzimas implicados en este ltimo tipo de glicosilacin se denomina pgl
(protein gl'cos'lation) y est altamente conservado en !. =e=uni. La protena
codificada por el gen pgl6 es un enzima clave que probablemente acte como
una oligosacariltransferasa responsable de la transferencia del azcar a la
cadena peptdica. Se ha demostrado que las mutaciones en este locus afectan
directamente a la glicosilacin y a ciertas propiedades virulentas de !. =e=uni.
El objetivo de este trabajo es el estudio de la posible relacin entre el sistema
general de glicosilacin y la supervivencia de !. =e=uni; as como la bsqueda
de glicoprotenas como potenciales marcadores de viabilidad.
Se construy una cepa de !. =e=uni con el gen pgl6 mutado por insercin de un
cassette de resistencia a kanamicina y se indujo el estado VNC, tanto de la
cepa mutante como de su homloga salvaje. Se evalu comparativamente el
efecto de las condiciones que provocan la entrada en el estado VNC en funcin
de determinados parmetros celulares (TBC, UFC, ARC).
Se analiz a lo largo de la supervivencia el perfil de protenas totales y el perfil
de glicoprotenas, en este ltimo caso mediante blotting frente a SBA.
Los resultados muestran que a lo largo de toda la supervivencia el nmero de
clulas totales y de clulas respiradoras se mantiene en torno a los valores
iniciales tanto en la cepa mutante como en la salvaje. Por contrario, la
cultivabilidad descendi progresivamente hasta alcanzar valores indetectables,
en el caso de la cepa mutante con significativa mayor rapidez que su homloga
salvaje. Por ello, cabe pensar en una posible implicacin de la glicosilacin
mediada por el locus pgl en el proceso de supervivencia.
En los perfiles proteicos totales no se evidencian diferencias significativas entre
la cepa mutante y la salvaje. Por contrario, los resultados del blotting muestran
una evidente disminucin de la reactividad frente a SBA en la cepa mutante,
confirmando que la mutacin en el locus gnico pgl afecta de modo importante
a la glicosilacin.
M - 258
Ca!acte!i)acin en'tica de ce&a$ de Streptococcus suis 5$e!oti&o$ . y I7
ai$lada$ de anado &o!cino
Blume, V.
1
, Luque, .
2
, Borge, C.
2
, Vela, A..
1
, Domnguez, L.
1
, Perea, J.A.
2
,
Tarradas, C.
2
, y Fernndez-Garayzbal, J.F.
1
1
(epartamento de &anidad Animal. Facultad de Veterinaria. Universidad !omplutense. .8040
+adrid. verena%vet.ucm.es.
.
(epartamento de &anidad Animal. Facultad de Veterinaria. !ampus
Universitario ?a,anales.1401 !;rdo,a.
&treptococcus suis es responsable de distintos procesos clnicos en el ganado
porcino y adems se considera una bacteria zoonsica. Actualmente se
reconocen 35 serotipos, siendo los serotipos 2 y 9 los de mayor significacin
epidemiolgica en Europa. Hasta la fecha se consideran que suilisina, MRP
(muramidase/released/protein), y EF (extracellular/#actor protein) son los
principales factores de virulencia de &. suis. En el presente trabajo se describe
la caracterizacin gentica mediante PFGE de cepas de &. suis aisladas de
cerdos en distintas zonas de Espaa.
Se estudiaron un total 114 cepas, aisladas tanto de procesos clnicos (n=80)
como de portadores tonsilares (n=34), perteneciendo 72 al serotipo 2 y 42 al
serotipo 9. La identificacin se realiz mediante pruebas bioqumicas
convencionales y comerciales (Rapid D 32 Strep) y PCR (DOAuma,ua '
DT!onnor .00.C. La serotipificacin se ha llevado a cabo con tcnicas de
aglutinacin en placa. La expresin de los factores de virulencia MRP y EF se
determin mediante Vestern/,lotting (Vec)t ' col.1991C y la produccin de
suilisina mediante microtitulacin (2aco,s ' col. 1994C. Para la caracterizacin
molecular por PFGE se utiliz el enzima Apa1 (Vela ' col. .003C.
De los 114 aislados de &. suis se identificaron 53 pulsotipos. Con un nivel de
similitud del 72%, se distinguieron 3 grupos genticos (A, B y C). La diversidad
gentica de las cepas de los serotipos 2 y 9 fue semejante (0.54 y 0.33,
respectivamente), si bien al 87% de las cepas del serotipo 2 se incluyeron en
los grupos B (n=57) y C (n=6), y el 83.3% de las cepas del serotipo 9 en el
grupo A. Estas asociaciones fueron estadsticamente significativas (p<0.05),
resultados que indican que ambos serotipos representan subpoblaciones
distintas de &. suis. Los grupos genticos A y B se subdividieron en 3 (A1-A3) y
4 (B1-B4) subgrupos, respectivamente. Atendiendo al origen de las cepas, el
46.6% de las cepas de portadores y el 40.4% de las cepas clnicas del serotipo
2, se incluyeron en los subgrupos B2 y B1, respectivamente (p<0.05). Las
cepas clnicas del serotipo 9 se agruparon mayoritariamente en los clusters A2
y A3 y las cepas tonsilares en el A1. Por otra parte, no se han observado
diferencias significativas (p>0.05) entre la expresin de los factores de
virulencia y los distintos grupos de cepas.

%ibliograf?a
2aco,s ' col. 1994F 1n#ect. 1mmun. 6.014./148
DOAuma,ua ' DT!onnor .00.F FE+&+icro,iol. >ett. .180 9/84
Vec)t ' col.1991F 1n#ect. 1mmun. 3903136/316.
Vela ' col. .003F 2.!lin. +icro,iol. 410.498/.30.
M - 261
An#li$i$ &!otemico &!elimina! de la$ &!ote,na$ e-t!acelula!e$ &!oducida$
&o! Pleurotus eryngii en dife!ente$ condicione$ de culti"o
Prez-Leblic, M..
1*
, Martnez, A.T.
2
, y Martnez, M.J.
2
1
(pto de +icro,iolog-a ' *arasitolog-a, Univ. Alcal", .881+adrid.
.
!entro de 1nvestigaciones
6iol;gicas, !&1!, ?amiro de +ae$tu 9, .8040 +adrid, Be/mail0 mipere$%ci,.csic.esC
La degradacin de la celulosa, la hemicelulosa y la lignina es esencial para
mantener el ciclo del carbono en la tierra. Para llevar a cabo este proceso los
microorganismos tienen que degradar primero la lignina, polmero complejo que
protege a la celulosa y la hemicelulosa. Por otro lado, la degradacin de lignina
es la etapa limitante para la utilizacin de la celulosa y la hemicelulosa en
diferentes aplicaciones industriales. Aunque muchos microorganismos estn
involucrados en la degradacin de estos polmeros, los basidiomicetos de
podredumbre blanca juegan un papel muy importante en el proceso ya que son
los nicos capaces degradar la lignina hasta CO
2
y H
2
O (especialmente cuando
el contenido en este polmero en la pared celular supera el 20%). Para llevar a
cabo este proceso estos hongos han desarrollado un sistema oxidativo
inespecfico que incluye oxido-reductasas extracelulares, metabolitos de
pequeo peso molecular y especies activas de oxgeno. *leurotus er'ngii es un
hongo de podredumbre blanca que produce degradacin selectiva de la lignina
durante su crecimiento sobre la paja de trigo, una importante caracterstica
para las aplicaciones biotecnolgicas basadas en la deslignificacin. En este
hongo han sido caracterizadas diferentes enzimas extracelulares implicadas en
la degradacin de la lignina: lacasas, peroxidasas y una oxidasa productora de
H
2
O
2
extracelular, la aril alcohol oxidasa (AAO).
En este trabajo se ha utilizado la electroforesis bidimensional para separar e
identificar, mediante el anlisis protemico de los geles, las protenas
extracelulares que se inducen en las condiciones de cultivo estudiadas: medio
basal con 2% de glucosa y este medio suplementado con 150 mM Cu
2+
, 100
mM Mn
2+
y 2,5% de paja de trigo. Mientras la peroxidasa de *. er'ngii, descrita
como una peroxidasa independiente de Mn
2+
, muestra los mayores niveles de
actividad en el medio basal, la actividad lacasa se estimula por la presencia de
Cu
2+
y paja de trigo. La AAO no parece inducirse en las condiciones
estudiadas. Los geles bidimensionales de las muestras de 7 das, en las que
los cultivos presentaban las mximas actividades, se han realizado utilizando
un gradiente de pH de 3-6 y 12% poliacrilamida. El anlisis de estos geles pone
de manifiesto que en presencia de Cu
2+
y paja, adems de inducirse las
lacasas, aparecen nuevas protenas que estn siendo analizadas por
espectrometra de masas con el fin de identificar otras enzimas producidas por
este hongo implicadas en la degradacin de la lignocelulosa.

* nvestigador visitante en el CB (ao sabtico)
M - 267
An#li$i$ en'tico de la de!adacin anae!bica de tolueno en !0oarcus
$&% CIB
Blzquez B., Zamarro MT., Barragn MJ., Garca JL., Carmona M., y Daz E.
!entro de 1nvestigaciones 6iol;gicas/!&1!, ?amiro de +ae$tu 9, .8040 +adrid. 6las%ci,.csic.es
Los compuestos aromticos son muy abundantes en la naturaleza, siendo
algunos de ellos contaminantes. El tolueno, (junto al benceno, etilbenceno y
xilenos) forma parte de las mezclas BTEX, que contaminan tanto ambientes
aerbicos como anxicos. En los gneros A$oarcus y 7)auera, dos b-
proteobacterias anaerbias facultativas, se ha estudiado la bioqumica y
gentica de la degradacin anaerbica del tolueno. El catabolismo del tolueno
requiere una ``ruta perifrica, quien convierte el tolueno en el intermediario
central benzoil-CoA, una ``ruta central que transforma el benzoil-CoA en el
compuesto aliftico 3-hidroxipimelil-CoA, y una ``ruta baja encargada de
degradar este ultimo mediante un proceso similar a una b-oxidacin hasta
acetil-CoA, compuesto que es incorporado en el metabolismo central de la
clula. En la cepa A$oarcus sp.CB, bacteria aislada en nuestro laboratorio,
hemos identificado el conjunto de genes (cluster ,ss y ,,s) responsable de la
ruta perifrica de degradacin anaerbica del tolueno. Si bien los genes ,ss y
,,s son similares a los descritos en otras cepas de A$oarcus y 7)auera, el
cluster gnico de la cepa A$oarcus sp. CB presenta una organizacin gnica
distinta y peculiar. Los genes responsables de la ruta central de degradacin
del benzoil-CoA se organizan en el cluster ,$d, previamente descrito en
nuestro laboratorio (Barragn et al. (2004), 2. 6acteriol., ?A/85762-5774). Por
ltimo, hemos identificado un fragmento de DNA de A$oarcus sp. CB que
contiene algunos de los genes responsables de la ruta baja de la degradacin
anaerbica de compuestos aromticos, tales como el gen gcd que codifica la
glutaril-CoA dehidrogenasa encargada de transformar glutaril-CoA en crotonil-
CoA. Adems de los genes que codifican las enzimas de las rutas perifrica y
baja del catabolismo anaerbico del tolueno, se han identificado genes
reguladores que intervienen en el control transcripcional de estas rutas y que
sern presentados en este trabajo.
M - 268
E"olucin del $i$tema de la c;a&e!ona DnaM en A!c;aea ;alfila$% Nue"a
"i$in $ob!e el o!ien y funcin del $i$tema DnaM en lo$ enoma$ de
A!c;aea%
Fenosa, D.
1
, Gonzaga, A.
1
, Kamekura, M.
2
y Juez, G.
1
1
(ivisi;n +icro,iolog-a, Facultad de Farmacia, !ampus de &an 2uan, Universidad +iguel
Hern"nde$, 03330 Alicante.
.
:oda 1nstitute #or &cienti#ic ?esearc), :oda, :oda/s)i, !)i,a/Oen,
2ap;n .8. d#enosa%um).es
La protena DnaK (Hsp70) se encuentra universalmente presente en los
distintos grupos de organismos (bacterias, eucariotas), y de hecho es una de
las protenas ms conservadas que existen y ha sido utilizada frecuentemente
como marcador filogentico. No obstante, su presencia discontinua en los
genomas de Archaea, as como las relaciones filogenticas previamente
inferidas de la secuencia de la protena, sugeran un origen polifiltico del
sistema DnaK en Archaea, llevando a una importante confusin y controversia.
Contrariamente a hiptesis previas, que sugeran un origen del sistema DnaK
en Archaea por transferencia horizontal a partir de distintos grupos de
bacterias, en el presente trabajo hemos puesto de manifiesto un origen
ancestral y comn del sistema en los distintos grupos de Archaea donde ha
sido detectado.
En el caso concreto de Archaea halfilas se haba sugerido un origen del
sistema DnaK por transferencia horizontal a partir de bacterias Gram positivas
de alto contenido en G+C. No obstante, la preferencia en el uso de codones,
posiciones de aminocidos caractersticas, las regiones intergnicas y
adyacentes a la agrupacin de genes del sistema con una naturaleza tpica de
Archaea, as como las relaciones filogenticas inferidas por nuestro grupo
incluyendo nuevas secuencias de la protena DnaK de Archaea halfilas y de
otras Archaea, revelan un origen vertical del sistema en Archaea halfilas,
origen a su vez relacionado con el de otros grupos de Archaea. Por otro lado,
tras la identificacin en este estudio del gen dnaP en distintos miembros de los
18 gneros actualmente validados de Halo,acteriales, la protena DnaK se
perfila como un excelente marcador filogentico y de utilidad incluso para
clarificar aspectos actualmente confusos en la filogenia de este grupo. Nuestros
resultados sugieren, por tanto, una nueva visin sobre el origen, evolucin y
funcin del sistema DnaK en Archaea, acorde con su prdida en los genomas
de algunos grupos de Archaea (concretamente Archaea hipertermfilas, donde
su funcin parece haber sido reemplazada por un sistema de prefoldinas), y su
conservacin en los genomas de Archaea mesfilas o termfilas moderadas
donde podra desempear una funcin esencial.
M - 272
Ca!acte!i)acin en'tica y fi$iolica de ISPst@9 un elemento t!an$&onible
!eulado de Pseu$omonas stut0eri.
Christie-Oleza J.A., Lanfranconi M.P., Martn-Cardona C., Nogales B., Lalucat
J. y Bosch R.
+icro,iolog-a, (to. 6iolog-a, Universitat de les 1lles 6alears BU16C. !tra. Valldemossa Pm. ,3 E
01.. *alma de +allorca. e/mail0 =osep)[c)ristie%'a)oo.es
La mayora de las secuencias de insercin (S) asociadas con genes
catablicos en *seudomonas pertenecen a las familias S3 e S>3. *. stut$eri,
conocida tanto por su gran versatilidad catablica y adaptativa como por su
elevada plasticidad genmica, presenta cepas que contienen en su genoma S
representantes de ambas familias. En estudios previos realizados con *.
stut$eri AN10, se han detectado tres secuencias de insercin de tipo S3 muy
ligadas a la ruta de degradacin del naftaleno: una de ellas situada cadena
arriba de la va alta de degradacin del naftaleno, y dos flanqueando na)V
(gen que codifica para una salicilato hidroxilasa) formando un posible
transposn compuesto. *. stut$eri AN10 tambin contiene dos copias de una
secuencia de insercin tipo S>3, una de las cuales se halla situada justo
cadena abajo del mencionado posible transposn compuesto na)V, y que
nombramos S*st3.

S*st3 presenta dos repeticiones terminales invertidas (R) de 24 pb y dos
fases de lectura abierta: or#1 y tnpA. El gen or#1, de funcin desconocida, es
semejante en secuencia a transportadores de membrana de la familia LysE. El
gen tnpA codifica para una presumible transposasa funcional. El objetivo de
este trabajo fue esclarecer el papel que pudieran tener or#1 y tnpA en el
proceso de transposicin.

Para ello se insert S*st3, con delecciones en las diferentes fases de lectura
abiertas, en el plsmido suicida pGP704, resultando las construcciones: pJOC9
(S*st3 or#1
]
/tnpA
]
como salvaje), pJOC10 (S*st3 or#1
/
/tnpA
]
) y pJOC11
(S*st3 or#1
]
/tnpA
/
como control negativo). Adicionalmente, y para facilitar el
seguimiento del salto de la S, se insert un casete de kanamicina.

Los experimentos llevados a cabo han demostrado una reduccin de casi un
45% en las frecuencias de transposicin de la secuencia de insercin or#1
/
frente a la de la or#1
]
. Adicionalmente, se ha observado que S*st3, ante
determinadas condiciones de estrs, incrementa extraordinariamente su
frecuencia de salto, comportamiento que no se observa entre las secuencias de
insercin de tipo S3. Se estn realizando ya experimentos para determinar el
papel que tiene or#1 en este comportamiento y la utilidad adaptativa de tal
incremento de la actividad de transposicin para la clula husped.
M - 279
Clonacin9 &u!ificacin y ca!acte!i)acin de una nue"a li&a$a de
4elicobacter pylori .//I@
Ruiz, C.
1,2
, Falcocchio, S.
1,2
, Saso, L.
2
y Daz, P.
1
1
(epartmento de +icro,iolog-a, Facultad de 6iolog-a, Universidad de 6arcelona, Av. (iagonal 643,
080.8 6arcelona, EspaLa.
.
(ipartimento di Fisiologia Umana ^Vittorio Erspamer^, UniversitH di
?oma f>a &apien$ag, *.le Aldo +oro 3, 00183 ?oma, 1talia. Me/mail0 crui$%,io.u,.es
La actividad lipasa de Helico,acter p'lori parece ser un factor de virulencia
importante debido a que su efecto sobre los lpidos de la mucosa
gastrointestinal del husped podra daar la capa protectora del estmago y la
membrana apical de las clulas subyacentes, as como generar lpidos
proinflamatorios y citotxicos (Tsang y Lam, 1999). Por ello, el presente trabajo
se centr en la bsqueda y caracterizacin de las protenas responsables de
dicha actividad, desconocidas hasta el momento.
La comparacin del proteoma de H. p'lori .6693 con la secuencia
aminoacdica de lipasas previamente descritas revel que la protena deducida
HP0739, asignada como una hipottica 2-hidroxi-6-oxohepta dienoato hidrolasa
(Tomb et al., 1997), mostraba una elevada homologa con las lipasas
bacterianas de la familia V (Arpigny y Jaeger, 1999). El anlisis informtico de
su secuencia aminoacdica revel que HP0739 es una protena de 241
residuos sin pptido seal, que tiene un peso molecular de 27,5 kDa y un p
igual a 9. Esta protena presenta una estructura globular con un solo dominio, y
tiene las caractersticas tpicas de las lipasas: (1) plegamiento / formado por
8 lminas y 7 hlices , y (2) trada cataltica formada por los residuos
serina
99
(contenida en el pentapptido GHSPG), cido asprtico
192
e histidina
219
,
cuya localizacin se corresponde con la que presentan en el plegamiento de
las lipasas de la familia V. Por tanto, se procedi a la clonacin del gen
H*039 (que fue denominado estV), as como a la purificacin y posterior
caracterizacin de la lipasa HP0739 (EstV).
La caracterizacin de EstV revel que esta enzima presenta el comportamiento
tpico de las carboxilesterasas, como est descrito para la mayora de lipasas
de la familia V (Arpigny y Jaeger, 1999), mostrando una preferencia muy
marcada por sustratos de cadena corta y produciendo cinticas del tipo
Michaelis-Menten, sin activacin interfacial. La actividad mxima de EstV se
obtuvo sobre p-nitrofenil acetato, MUF-butirato y tributirina, mientras que la
enzima mostr una actividad muy baja sobre sustratos con longitud de cadena
igual o superior a 8 tomos de carbono. Las condiciones ptimas de actuacin
de EstV fueron 55 C y pH 10, aunque la enzima tambin mostr una elevada
actividad a temperaturas desde los 45 C hasta los 60 C, y a pH 6 y 99,5, as
como una actividad moderada a 37 C y pH 7.
El conocimiento sobre las caractersticas bioqumicas de esta lipasa, as como
sobre su inhibicin, podran contribuir en la terapia de la lcera y otras
enfermedades producidas por H. p'lori.
M - 284
La$ li$ina$ ti&o LytA de do$ fao$ de Streptococcus mitis ilu$t!an $ob!e
la t!an$icin monme!o=d,me!o de la &!inci&al autoli$ina de
Streptococcus pneumoniae
Romero, P., Lpez, R., Garca, E.
!entro de 1nvestigaciones 6iol;gicas B!&1!C ?amiro de +ae$tu, 9. .8040 +adridF
patromero%ci,.csic.es
El gen l'tA codifica la principal autolisina de &treptococcus pneumoniae, un
importante factor de virulencia. Este gen es considerado exclusivo de
neumococo y sus fagos y constituye la base de una de las pruebas en las que
se basa su identificacin clnica. Algunos aislados atpicos de &. pneumoniae
portan genes de tipo l'tA que carecen de dos aminocidos Thr
290
-Gly
291
. Estas
enzimas atpicas se inhiben en presencia de desoxicolato (Doc). La mayora de
los aislados clnicos de &. pneumoniae son lisognicos y los profagos podran
estar contribuyendo de forma relevante a la virulencia de estos importantes
patgenos humanos. En este trabajo se describe el aislamiento de dos fagos
atemperados de &. mitis (B6 y HER), una especie muy cercana, desde un
punto de vista taxonmico, a neumococo y con la que comparte su hbitat
natural. B6 y HER codifican dos enzimas de tipo LytA tpicas pero sensibles
a Doc. Una importante caracterstica que diferencia a estas enzimas de la
LytA de neumococo es que una breve dilisis revierte la forma completamente
activa (forma C dimrica) a la forma de baja actividad (forma E monomrica).
Anlisis comparativos de secuencias sugirieron que el residuo Val
317
podra ser
el responsable del proceso de "desconversin de las enzimas lticas de los
fagos de &. mitis. Mediante mutagnesis dirigida se construy una coleccin de
mutantes de LytA en los que se reemplazaron los aminocidos implicados en la
dimerizacin. Los mutantes fueron caracterizados bioqumicamente y, en
algunos de ellos, sus caractersticas fisico-qumicas analizadas por
ultracentrifugacin analtica. La relevancia en la actividad enzimtica de cada
uno de los aminocidos mutados depende de las interacciones de las que est
formando parte. El residuo le
315
es el ms sensible a cualquier cambio mientras
que las propiedades bioqumicas de los mutantes construidos en Val
317
y Tyr
294
varan con la naturaleza qumica y estructural del aminocido por el que son
sustituidos. El residuo Leu
314
es el ms permisivo pudiendo soportar cambios
tanto en carga como en polaridad. La Val
317
desempea un papel fundamental
en el proceso de conversin de la enzima LytA aunque Tyr
294
y, en menor
medida, Leu
314
tambin parecen cooperar en este proceso de formacin de
formas monomricas de la enzima a partir de dmeros activos. En cualquier
caso, la conversin enzimtica, caracterstica de la principal autolisina de
neumococo, parece requerir, adems del proceso de dimerizacin, algunos
cambios estructurales sutiles an por determinar.
M - 287
E$tudio del &a&el !eulado! de la$ &!ote,na$ + del tallo !ibo$mico%
Remacha, M., Jimnez-Daz, A., Revuelta, J. y Ballesta, J.P.G.
!entro de 6iolog-a +olecular f&evero Dc)oag. !&1! ' Universidad Aut;noma de +adrid. .8049/
!anto,lanco, +adrid. miguel.remac)a%uam.es
Las protenas P1, P1, P2 y P2 de &acc)arom'ces cerevisiae son un grupo
de protenas con PM de 11 kDa y p comprendidos entre 3,61 y 3,89 que, junto
con P0, constituyen el tallo de la subunidad mayor del ribosoma. Mientras que
P0 es una protena estructural del ribosoma, esencial para la viabilidad celular,
las protenas P1 y P2 se intercambian entre el ribosoma y el citoplasma,
existiendo un "pool en el mismo.
Se estn realizando estudios in vivo e in vitro sobre el papel que ejercen las
protenas cidas en la regulacin de la traduccin en la levadura &. cerevisiae,
empleando la cepa W303 (wt) y el mutante D4567 en el que estn ausentes las
cuatro protenas P1/P2. Extractos de la cepa mutante muestran una tasa de
sntesis proteica inferior, al tiempo que producen un patrn de expresin
proteica diferente en geles bidimensionales. 1n vivo, la ausencia de las
protenas P en el ribosoma produce una disminucin de la velocidad de
crecimiento. Asimismo, se observan diferencias en respuesta a condiciones de
stress, probable reflejo del diferente patrn de expresin observado.
A partir de los geles bidimensionales de protenas sintetizadas por extractos de
ambas cepas se han secuenciado spots que se expresan diferencialmente, con
objeto de identificar estas protenas. En general, la mayora de las protenas se
traducen mejor por ribosomas silvestres o se traducen por igual en ambas
cepas. Adems, hay cambios puntuales de protenas que slo estn presentes
en el sistema silvestre (como Fkbp12) y otras (eF5A) que son traducidas mejor
por ribosomas sin protenas P.
Como estrategia alternativa, hemos realizado un estudio sistemtico, mediante
el uso de microarrays, utilizando como sondas mRNA total y mRNA asociado a
polisomas, de los genes que se transcriben y/o traducen diferencialmente en
ambos sistemas.
M - 291
E$tudio$ $ob!e el en$ambla*e de ORC9 el com&le*o iniciado! de la
!e&licacin del DNA en Sacc;a!omyce$ ce!e"i$iae
Snchez-Gorostiaga, A., Moreno-del lamo, M.*, Serrano, A., Giraldo, R.
(epartamento de +icro,iolog-a +olecular, !entro de 1nvestigaciones 6iol;gicas / !&1!, c< ?amiro
de +ae$tu, 9, .8040, +adrid.M E/mail0 mmoreno%ci,.csic.es
La iniciacin de la replicacin del DNA es un proceso muy complejo que se
encuentra regulado en mltiples pasos entre los cuales se incluyen la seleccin
del sitio de inicio en el DNA, el desenrrollamiento de la doble hlice y el
ensamblaje de la maquinaria multiproteica de replicacin. Estudios en la
replicacin de bacterias, fagos y virus que infectan clulas eucariotas han
establecido que hay protenas, a las cuales se denomina iniciadoras, que se
unen al orgen de replicacin (el replicador) de una manera especfica a esta
secuencia.
Al contrario que en procariotas, en dnde suele existir un nico origen de
replicacin y una nica protena iniciadora, en eucariotas cada cromosoma
necesita mltiples orgenes de replicacin para asegurarse que su replicacin
ocurra en un tiempo preciso. En estos orgenes de replicacin (ARS) se une un
conjunto de protenas llamado Complejo de Reconocimiento del Origen (ORC),
inicialmente caracterizado en la levadura &. cerevisiae pero posteriormente
identificado en todos los eucariotas. ORC es un complejo de seis protenas
(Orc1-Orc6), numeradas en orden de masas decrecientes. Se desconocen los
detalles de cmo ORC se ensambla en las ARS, aunque resultados recientes
de nuestro grupo [Giraldo, R., Daz-Orejas, R. (2001) PNAS 98, 4938-4943]
planteaban la posibilidad de que fuera un proceso complejo en el cual
participen protenas chaperonas. Mediante ensayos in vitro con protenas de &.
cerevisiae, recombinantes en E. coli y purificadas, hemos identificado la
existencia de complejos estables entre chaperonas de la familia Hsp70 y la
subunidad Orc4p. Aproximaciones protemicas y bioinformticas nos han
permitido identificar las superficies de contacto entre DnaK (la chaperona
Hsp70 de E. coli) y Orc4p. La mutagnesis dirigida de la secuencia implicada
en ORC4 (orc4-Hsp70 box) condujo a una disminucin significativa de la
agregacin de Orc4p y a una asociacin ms dbil con DnaK. Mediante
experimentos de dicroismo circular y estudiando las curvas de
desnaturalizacin trmica de Orc4p y el mutante orc4p-Hsp70box, pudimos
observar que ambas protenas no tienen diferencias significativas ni en su
estructura secundaria ni en su estabilidad. Adems, pretendemos estudiar el
efecto de dicha mutacin en el ciclo celular y en el disparo de orgenes de
replicacin in vivo.Hemos desarrollado un sistema de expresin en E. coli del
complejo multiproteico ORC con el objetivo de poder estudiar las interacciones
de cinco de sus subunidades (ORC1-5), incluyendo bien ORC4 u orc4p-
Hsp70box, para tratar de ver cul interaccin (o interacciones) se encuentra
afectada por la mutacin y para su caracterizacin biofsica posterior.
M - 306
Rele"ancia de la to&olo,a del DNA como mecani$mo de !eulacin
lobal en !rchaea ;alfila$
Soria, E.
1
, Mojica, F.J.M.
1
y Juez, G.
2
1
(ivisi;n de +icro,iolog-a. Facultad de !iencias. Universidad de Alicante. Apdo. 99. Alicante.
soria%ua.es.
.
(ivisi;n de +icro,iolog-a. Facultad de Farmacia. Universidad +iguel Hern"nde$.
Apdo. 18. &ant 2oan dJAlacant. Alicante.
Existen evidencias de que cambios en la topologa local del DNA promovidos
por factores ambientales pueden actuar como un mecanismo de regulacin en
procariotas. En el caso concreto de la Arc)aea halfila extrema Halo#erax
volcanii, se han detectado agrupaciones de genes (no necesariamente
cotranscritos) con una respuesta coordinada al ambiente cuya organizacin
puede tener un significado funcional en este sentido: la topologa del DNA
podra actuar como un mecanismo de regulacin global que permitira una
respuesta coordinada al ambiente de grupos de genes y regiones genmicas.
En el presente trabajo se plante delimitar y caracterizar regiones con
respuesta coordinada al ambiente en el genoma de H#x. volcanii, y evaluar la
posibilidad de una regulacin global de la expresin gnica mediante cambios
en la topologa del DNA de esas regiones. Mediante distintas aproximaciones
experimentales, se ha realizado un mapa transcripcional detallado de dos
regiones del genoma de este organismo. Se ha confirmado la homogeneidad
en la respuesta a condiciones de estrs hipoosmtico en un amplio dominio
(200 Kb) del megaplsmido pHV4. En una regin cromosmica de unas 180 Kb
se han detectado agrupaciones de genes con respuesta coordinada a
determinadas condiciones ambientales (baja salinidad, elevada salinidad,
elevada temperatura o estrs general). Con el fin de dilucidar la implicacin de
la topologa del DNA en la regulacin gnica, se ha estudiado el efecto de la
inhibicin de la girasa (mediante novobiocina) sobre los niveles de transcripcin
en ambas regiones. Tanto los niveles de transcripcin global en regiones
genmicas como los de transcritos concretos con respuesta al ambiente,
mostraron sensibilidad a novobiocina, permitiendo establecer un nexo directo
entre la topologa del DNA y la regulacin de la expresin gnica en la
respuesta al ambiente. Adicionalmente, se han detectado alternancias purina-
pirimidina capaces de adoptar estructuras de Z-DNA corriente arriba, incluso
solapando secuencias promotoras, de una gran diversidad de ORFs
identificados en estas regiones. Las estructuras de DNA no-B se han descrito
como posibles sensores de factores ambientales, cuya estabilizacin afectara
a los niveles de superenrollamiento local del DNA, y con ello, a los niveles de
transcripcin en regiones prximas. La regulacin de la expresin gnica a
travs de variaciones en la estructura del DNA como respuesta al ambiente,
sera, por tanto, un mecanismo de regulacin global ampliamente extendido y
de gran relevancia en el genoma de Arc)aea halfilas.
M - 319
E"aluacin de lo$ &!omoto!e$ de lo$ ene$ xln! y xln% de !spergillus
ni$ulans &a!a la &!oduccin ;ete!loa de una !amno$ida$a de inte!'$
indu$t!ial
Tamayo, J.A. y Orejas, M.
(epartamento de 6iotecnolog-a. 1nstituto de AgroIu-mica ' 7ecnolog-a de Alimentos B1A7AC.
!onse=o &uperior de 1nvestigaciones !ient-#icas B!&1!C. Apartado de !orreos 3. 46100 6ur=assot
BValenciaC. =uatara%iata.csic.es
Las -L-ramnosidasas, enzimas ampliamente distribuidas en la naturaleza que
catalizan la hidrlisis de la ramnosa terminal presente en los -L-ramnsidos,
tienen un gran potencial en la industria alimentaria donde se pueden aplicar
tanto para mejorar la calidad de bebidas (liberando monoterpenos aromticos
en mostos y vinos, o reduciendo el amargor en zumos de ctricos), como sus
caractersticas funcionales (aumentando la biodisponibilidad de los
flavonoides). Pese a este hecho, hasta la fecha no se han descrito estudios
para mejorar su produccin.
La produccin de enzimas heterlogas en cepas recombinantes de hongos
filamentosos ha resultado ser una buena estrategia tanto para obtener mejores
rendimientos como facilitar su recuperacin. Aunque an no es utilizado
normalmente en la industria, A. nidulans es el organismo modelo para llevar a
cabo estudios de regulacin de la expresin gnica, ya que se dispone de
todas las herramientas bsicas para su manipulacin gentica y de una amplia
batera de mutantes. Estudios anteriores de nuestro grupo, sugeran que los
promotores de los genes del complejo xilanoltico, en concreto los de los genes
xlnA y xln6 (codifican respectivamente las xilanasas X
22
y X
22
) tienen
propiedades adecuadas para sobreexpresin regulada de genes heterlogos.
La actividad de los genes xlnA y xln6 est controlada, a nivel transcripcional,
por al menos tres protenas reguladoras: (i) CreA, que reprime su expresin en
presencia de glucosa; (ii) XlnR, que activa especficamente su expresin
cuando xilano o xilosa son la fuente de carbono; y (iii) PacC, que los regula de
manera diferente en funcin del pH ambiental. Mientras que la expresin del
gen xlnA es mayor a pH alcalino y ms an en fondos genticos mutantes
pac!
c
(mimetizan las condiciones de crecimiento alcalino), la expresin de xln6
es mayor en medios cidos y ms an en fondos genticos mutantes pac!
+/-
o
pal
/
(mimetizan el crecimiento a pH cido). El hecho de que la transcripcin de
estos genes sea mayor en esos mutantes, as como en mutantes creA
d
30 y
xln?
c
, indica un camino a seguir para llevar a cabo una mejora gentica dirigida
de cepas para la sobreproduccin de enzimas.
Nuestro objetivo final es conocer, en A. nidulans, el efecto que tienen sobre la
produccin de ramnosidasa el tipo de promotor, el nmero de copias, el fondo
gentico y las condiciones ambientales. En el presente trabajo se compara la
cintica de produccin de la -L-ramnosidasa A (codificada en Aspergillus
aculeatus por el gen r)aA) en cepas portadoras de una copia de los cassettes
de expresin xlnA
p
00r)aA y xln6
p
00r)aA, integradas en los locus xlnA y xln6
respectivamente, con la de cepas mutantes pac!
C
14, xlnA
p
00r)aA y palA1,
xln6
p
00r)aA.
Trabajo financiado por el proyecto AGL2002-01906 (CCYT/FEDER).
M - 320
Lo$ antibitico$ _ lact#mico$ inducen la !e$&ue$ta SOS en
Staphylococcus aureus y &!omue"en la t!an$fe!encia ;o!i)ontal de ene$
im&licado$ en "i!ulencia%
Maiques, E; beda, C; Barb J, Lasa, ; Penads, JR
Universidad !ardenal Herrera /!EU/ 1nstituto Valenciano de 1nvestigaciones Agrarias, 46113,
+oncada, Valencia. emaiIues%uc).ceu.es
Los lactmicos, entre los que se incluye la ampicilina o la penicilina, son
antibiticos de amplio espectro cuyo mecanismo de accin es la inhibicin de la
sntesis del peptidoglicano, componente fundamental de la pared celular tanto
de bacterias Gram-positivas como Gram-negativas. En un estudio anterior,
nuestro grupo demostr que la activacin de la respuesta SOS mediada por
quinolonas conduca a la replicacin y elevada transferencia mediada por fagos
de SaPbov1, una isla de patogenicidad de &tap)'lococcus aureus (1). En este
estudio demostramos que los -lactmicos tambin son capaces de inducir la
respuesta SOS, y por lo tanto, la diseminacin de factores de virulencia
codificados por islas de patogenicidad de &. aureus. Para comprobar la
activacin de la respuesta SOS por los -lactmicos, indujimos con ampicilina
la cepa RN1030-SaPbov1, una cepa de &. aureus lisognica para el fago 11 y
mutante recA, conteniendo SaPbov1. Como era de esperar, el fago no se
indujo y por lo tanto no hubo ni replicacin ni transferencia de SaPbov1, a
diferencia de lo observado tras inducir con ampicilina la cepa RN451, lisognica
para el fago 11 y recA
+
, en la que encontramos replicacin y elevada
transferencia de la isla. De la misma manera, el tratamiento con ampicilina de
la cepa RN27-SaPbov1, lisognica para el fago 80 provoc la induccin del
fago y la replicacin y tansferencia de SaPbov1.
En E. coli, la induccin de la respuesta SOS estimula la actividad co-
proteasade RecA, promoviendo la autoproteolisis del represor transcripcional
LexA, el cual regula negativamente la expresin de genes implicados en la
reparacin del DNA. A su vez, esta actividad de RecA promueve la
autoproteolisis de diversos represores de fagos, como es el represor c del fago
(similar al represor del fago 11 de &. aureus). Para confirmar la activacin de
la respuesta SOS, creamos un mutante lexA resistente al corte por RecA en la
cepa RN451 y RN27 y valoramos su capacidad de replicar la isla. Observamos
un escaso aumento en la transferencia de SaPbov1 tras la induccin con
ampicilina. Asimismo, realizamos la misma induccin en el mutante c
resistente al corte por RecA de la cepa RN451. Como caba esperar, esta
mutacin bloqueaba la transferencia de SaPbov1. Por lo tanto, y en su
conjunto, estos experimentosconfirman la capacidad de la ampicilina para
activar la respuesta SOS y favorecer la transferencia horizontalmente de genes
de virulencia codificados en las islas de patogenicidad de &. aureus.

1.Ubeda, C., Maiques, E., Knecht, E., Lasa, ., Novick, R. P. & Penades, J. R.
(2005) +ol +icro,iol @/9 836-44.

M - 321
An#li$i$ de la$ $ecuencia$ nece$a!ia$ &a!a la unin a DNA y el cont!ol de
la t!an$c!i&cin &o! el !eulado! At)R de Pseu$omonas $&% AD+
Porra, O.*, Santero, E. y Govantes, F.
!entro Andalu$ de 6iolog-a del (esarrollo ' (epartamento de !iencias Am,ientales. Universidad
*a,lo de Dlavide. !arretera de Utrera, Pm 1, 41013, &evilla. ME/mail0 opor#ue%upo.es
El regulador tipo LysR (LTTR), AtzR, controla la expresin del opern at$(EF
de *seudomonas sp. ADP, responsable de la mineralizacin del cido
cianrico. Conjuntamente con el regulador global NtrC, AtzR activa la
transcripcin de at$(EF en condiciones de limitacin de nitrgeno. Adems, de
un modo independiente de NtrC, incrementa los niveles de expresin del
opern en respuesta a la presencia de cido cianrico y regula negativamente
la expresin de su propio gen, at$?, que se transcribe divergentemente
(Garca-Gonzlez et al, 2005). Los reguladores del tipo LysR generalmente
actan a travs de la unin a una secuencia palindrmica con la estructura T-
N
11
-A (Schell, 1993). En la regin intergnica at$?/at$(EF existe una
secuencia con homologa al consenso para los sitios reconocimiento de los
LTTR (Martnez et al, 2001). Los objetivos de este trabajo son la identificacin
de las las secuencias en cis necesarias para la regulacin por AtzR y el anlisis
de la capacidad de unin del regulador a dichas secuencias. Se han realizado
ensayos de expresin de variantes de los promotores de at$? y at$(EF con
deleciones y mutaciones puntuales en la regin intergnica. Los resultados
muestran que el posible sitio de unin de LTTR es esencial para la regulacin
de ambos genes e indican la existencia de secuencias adicionales que son
esenciales tanto para la activacin de la expresin de at$(EF como para la
autorrepresin de at$?. Finalmente se ha purificado AtzR y se han realizado
ensayos "in vitro" de unin a las secuencias previamente identificadas,
demostrando que el regulador se une en la zona de estudio. En conjunto, los
resultados sugieren que AtzR reconoce al menos dos sitios en la regin
intergnica at$?/at$(EF. Se conocen otros reguladores del tipo LysR que
requieren tanto un sitio de reconocimiento (RBS) como un sitio de activacin
(ABS) para la unin a DNA y el control de la transcripcin (Schell, 1993). Por
tanto, los datos indican que AtzR podra compartir los mecanismos de accin
de otros reguladores de la misma familia.
Bibliografa:
Garca-Gonzlez et al., 2005. J. Bacteriol. 187:155-167.
Martnez et al., 2001. J. Bacteriol. 183:5684-5697.
Schell, 1993. Annu. Rev. Microbiol. 47 :597-626.
M - 337
Acti"acin9 locali)acin9 y !eulacin &o! la !uta SA+M de la MA+ Hina$a
+mH? en Schi0osaccharomyces pombe%
Madrid,M.
1
, Soto,T.
1
, Khong,K.
1
, Franco,

A.
2
, Vicente,J.
1
, Prez,P.
3
, Gacto,
,
M.
1
y
Cansado, J.
1
1
(epartamento de 4en5tica ' +icro,iolog-a, Universidad de +urcia. 3001 +urcia,
.
(ivision o#
@east 4enetics. :ational 1nstitute #or +edical ?esearc)., >ondon :V 1AA, UPF '
3
1nstituto de
+icro,iolog-a 6ioIu-mica. !&1!<(epartamento de +icro,iolog-a ' 4en5tica, Universidad de
&alamanca. 300 &alamanca. (irecci;n de correo electr;nico0 marisa%um.es
Las rutas de MAP kinasas son crticas para la deteccin y respuesta de las
clulas eucariotas frente estmulos externos y cambios en el ambiente
extracelular. En la levadura con fisin &c)i$osacc)arom'ces pom,e, la MAPK
Pmk1/Spm1 ha sido implicada en la construccin de la pared celular,
morfognesis, separacin celular (citoquinesis) y la homeostasis frente a
distintos iones, formando parte de una ruta denominada de "integridad celular
junto con la MAPKKK Mkh1 y la MAPKK Pek1/Skh1. En este trabajo,
describimos que Pmk1 se activa por fosforilacin en respuesta a mltiples
situaciones de estrs, como el estrs hiper- e hipotnico, el tratamiento con
compuestos que daan la pared celular, o el estrs oxidativo provocado por el
perxido de hidrgeno o distintos agentes pro-oxidantes. La activacin por
estrs de Pmk1 fue en todos los casos dependiente de la presencia de Pek1 y
Mkh1, lo que sugiere la existencia de una regulacin de la activacin de la
MAPK por medio de un mdulo no ramificado. Mediante microscopia de
fluorescencia hemos comprobado que tanto Mkh1, como Pek1 o Pmp1 (la
principal fosfatasa que defosforila a Pmk1) localizan a nivel del citoplasma
celular. Sin embargo, Pmk1 localiza tanto en el citoplasma como en el ncleo
celular, as como en el huso mittico y en el septo durante la citoquinesis. De
hecho, la localizacin subcelular de Pmk1en &. pom,e no se vio afectada
cuando la levadura se someti a distintas condiciones de estrs, ni en ausencia
de Mkh1 o Pek1. Ello sugiere que la activacin de Pmk1 por el mdulo
Mkh1/Pek1 tiene lugar a nivel citoplasmtico y que las formas activa o inactiva
de la kinasa pueden atravesar la membrana nuclear. Tambin hemos
demostrado que, contrariamente a lo que se sospechaba, la GTPasa Cdc42 y
dos de sus efectores, las PAK kinasas Pak1 y Pak2, no se encuentran
implicados en la regulacin de la activacin del mdulo Mkh1-Pek1-Pmk1. Por
el contrario, la MAPK Sty1 (elemento clave de la ruta de MAPK activable por
estrs -SAPK- en &. pom,e) es esencial para la activacin de Pmk1 inducida
por perxido de hidrgeno y durante el estrs osmtico. Estos resultados
demuestran por primera vez la existencia de una interconexin entre dos rutas
de MAPK en &. pom,e.
M - 342
An#li$i$ en'tico9 inmuno:u,mico y biolico de mutante$ !uo$o$ de
%rucella melitensis &a!a u$o "acunal
Gonzlez, D.
1
, Grill, M.J.
2
, De Miguel M. J.
2
, Muoz,

P.M.
2
, Marn, C.M.
2
,
Lpez-Goi, .
1
, Blasco, J.M.
2
y Moriyn, .
1

1
(pto. +icro,iolog-a, Univ. de :avarra, *amplona, EspaLaF '
.
Unidad de &anidad Animal, !entro
de 1nvestigaci;n ' 7ecnolog-a Agroalimentaria, 4o,ierno de Arag;n, Sarago$a, EspaLa.
dgon$ale$%unav.es
La estimulacin de anticuerpos frente a la cadena O del lipopolisacrido (LPS)
por las vacunas lisas anti-6rucella dificulta el diagnstico de la brucelosis
animal. Con el fin de desarrollar vacunas alternativas, se obtuvieron mutantes
rugosos (R) de 6. melitensis 16M y H38 (dos cepas de diferente virulencia) y se
caracteriz su LPS. El estudio confirm el papel de varios genes en la sntesis
de la cadena O y permiti identificar otros nuevos (A,OE, AecA, A,O( y A,o6).
Otros genes (AaMM y man6
nRcleo
C se relacionaron con la s-ntesis del nRcleo del
>*& o con la de precursores (pgm). Adems del incremento conocido en
sensibilidad a la polimixina B y al fago R/C, los mutantes fueron ms sensibles
a la penicilina y mostraron mayor carga de superficie y accesibilidad de las
protenas de membrana externa a los anticuerpos. Todos posean una
superficie ms hidrfoba que las cepas parentales y que sus homlogos en 6.
a,ortus. Tambin fueron ms sensibles al complemento que las cepas
parentales, pero menos que sus homlogos en 6. a,ortus. El anlisis con
anticuerpos monoclonales mostr diferencias entre el ncleo del LPS de 6.
a,ortus y 6. melitensis, lo que unido a la ausencia de Omp31 en la primera
podra explicar sus diferencias en superficie y sensibilidad al complemento.
El estudio en ratones BALB/c demostr que todos los mutantes R estaban
atenuados. Sin embargo, los mutantes en A,O(, AecA y per de la cepa H38 se
multiplicaron en el bazo hasta los niveles de la cepa parental y los mutantes en
AaMM y A$m de la cepa 16M presentaron una mayor persistencia que el resto.
Slo estos 5 mutantes protegieron frente a la infeccin por 6. melitensis
virulenta de forma similar a la vacuna lisa 6. melitensis Rev1. Sin embargo, el
mutante en A$m estimul la sntesis de cantidades significativas de anticuerpos
anti-cadena O. Se concluye que los otros 4 mutantes son candidatos
adecuados como vacunas R.
M - 351
Identificacin de un clu$te! de ene$ in"oluc!ado en la $,nte$i$ de
"anc!obactina9 un nue"o $ide!fo!o &!oducido &o! ce&a$ del $e!oti&o O.
de 3ibrio anguillarum
Balado, M. Mourio, S. Najimi, M. Osorio, C.R. Lemos M.L.
(epartamento de +icro,iolog-a ' *arasitolog-a, 1nstituto de Acuicultura, Universidad de &antiago,
&antiago de !ompostela, 138. >a !oruLa. m,alado%usc.es
La limitacin en la disponibilidad de hierro es una de las barreras que debe
superar un patgeno para desencadenar el proceso infectivo una vez dentro
del hospedador. Existen numerosas vas de captacin de hierro, una de ellas
es la produccin de siderforos. El patgeno de peces Vi,rio anguillarum pose
al menos dos sistemas diferentes de captacin de hierro mediado por
siderforos. El sistema mediado por el siderforo anguibactina est asociado
mayoritariamente a cepas del serotipo O1 que poseen el plsmido pJM1. En el
plsmido se encuentran gran parte de los genes responsables de su sntesis y
utilizacin, siendo un sistema bien caracterizado. Las cepas del serotipo O2 y
algunas cepas del O1 que no poseen el plsmido utilizan un sistema totalmente
diferente, mediado por el siderforo vancrobactina. Este sistema est
codificado por genes cromosmicos cuyo estudio es todava incipiente. En este
estudio hemos identificado y secuenciado un "cluster de genes con homologa
con genes de sntesis de siderforos en E. coli y Acineto,acter ,aumanni.
Hasta el momento hemos caracterizado los genes de la va de sntesis del
cido 2,3-dihidroxi-benzoico (DHBA) que reciben los nombres de (HA*
sintetasa, vacA, vac6 y vac!. Adems hemos caracterizado el gen vacE,
responsable de la activacin del DHBA. El gen vacF ha sido identificado como
el posible responsable del ensamblaje final de los componentes del siderforo.
Un gen codificador para un exportador de membrana externa, y que
denominamos exp, as como un gen #es (gen de la esterasa relacionada en
otras especies con la utilizacin del ferro-siderforo intracelular) han sido
asimismo identificados. En este trabajo describimos adems el anlisis
funcional y estructural del gen exp, as como el anlisis de vacF en relacin a
los dominios catalticos que se deducen del estudio comparativo de la
secuencia aminoacdica.
M - 367
O!ien y funcin de un dominio del mea&l#$mido &D4B9 !e&licn
e$encial o minic!omo$oma9 de la A!c;aea ;alfila 4aloferax volcanii%
Gonzaga, A.
1
, Fenosa, D.
1
, Soria, E.
2
, Mojica, F.J.M.
2
y Juez, G.
1
1
(ivisi;n +icro,iolog-a, Facultad de Farmacia, !ampus de &an 2uan, Universidad +iguel
Hern"nde$, Apdo. 18 &ant 2oan dTAlacant, Alicante.
.
(ivisi;n de +icro,iolog-a, Facultad de
!iencias, !ampus de &an Vicente, Universidad de Alicante, Apdo. 99, Alicante. agon$aga%um).es
Previamente describimos la existencia de una amplia regin o dominio de unas
200 Kb del megaplsmido de mayor tamao (700 Kb) y posiblemente replicn
esencial pHV4 de Halo#erax volcanii, con una respuesta aparentemente
homognea a condiciones de baja salinidad. Actualmente hemos confirmado la
homogeneidad de esta respuesta a condiciones de estrs hipoosmtico, as
como definido el papel de la estructura del DNA como un mecanismo de
regulacin global que coordinara la respuesta al ambiente en esta amplia
regin genmica. En el presente trabajo se ha puesto de manifiesto una
peculiar naturaleza de este dominio, que se encuentra flanqueado por un lado
por una regin con abundantes elementos de insercin, y por otro lado, por una
extensa estructura de repeticiones en tandem para la que previamente
describimos su posible relacin con la segregacin de replicones esenciales.
La regin flanqueante rica en elementos de insercin revela la presencia de
secuencias de origen bacteriano (como genes de protenas de la familia Htr,
conocidas como de origen bacteriano pero funcionales en Archaea halfilas).
En regiones adyacentes a la estructura de repeticiones en tandem se han
detectado secuencias relacionadas con la segregacin de replicones y que se
encuentran presentes en otros replicones de Archaea. A lo largo de regiones
concretas de este dominio se han identificado secuencias codificantes para
muy diversas protenas y familias de protenas, como reguladores
transcripcionales, protenas transductoras de seales, o diversos sistemas de
transporte entre ellos de transporte de iones posiblemente relacionados con la
adaptacin a condiciones osmticas. Dichas familias de protenas se
encuentran tambin presentes en los genomas de otras Archaea, si bien, en
general, las protenas detectadas en este dominio de H#x. volcanii difieren
notablemente de las protenas presentes en el cromosoma principal de
Archaea halfilas (Halo,acterium, Haloarcula). Este amplio dominio del
megaplsmido o minicromosoma de Halo#erax, podra estar relacionado con la
capacidad del gnero Halo#erax a crecer a ms bajas salinidades que otras
Archaea halfilas, pudiendo bien poseer un origen vertical y haberse perdido en
otras Archaea halfilas como Halo,acterium adaptadas a concentraciones
salinas ms extremas, o bien, alternativamente, haberse originado por
transferencia horizontal y evolucionado hacia su funcionalidad.
M - 372
Acti"acin de &!ote,na$ G de la familia R;o &o! la &!ote,na SiD de
Salmonella e-&!e$ada en c'lula$ de mam,fe!o%
Alemn, A.*, Mallo, G.V.**, Terebiznik, M.**, Rodrguez-Escudero, .*, Cid, V.J.*,
Molina, M.* y Rotger, R.*
M(epartamento de +icro,iolog-a 11. Facultad de Farmacia. Universidad !omplutense de +adrid.
.8040 +adrid. MM(ivision o# !ell 6iolog', Hospital #or &icO !)ildren, 7oronto, Dntario +34 1Y8,
!anad".
SigD (SopB) es una protena de &almonella inyectada en las clulas del
husped a travs de un sistema de secrecin tipo , dependiente de la sla de
Patogenicidad 1 (SP-1). SigD contribuye, junto a otros efectores dependientes
de SP-1 (SopE/E2, SipA y SipC) a la invasin de clulas no fagocticas
actuando sobre el citoesqueleto de actina y flexibilizando la membrana para
facilitar la endocitosis (1). Los efectos de SigD se han atribuido a su actividad
como fosfatasa de fosfatidil-inositol polifosfatos. La reorganizacin de actina
supone una activacin de protenas G pequeas de la familia Rho, como Cdc42
o Rac-1. La activacin por SopE/E2 es directa, pero en el caso de SigD se
atribuye indirectamente a su actividad fosfatasa. Sin embargo, en nuestro
laboratorio se ha podido disociar su efecto sobre actina de la actividad
enzimtica, y localizar una regin esencial en un dominio posiblemente
implicado en unin a membranas (2). En consecuencia, decidimos analizar la
activacin de Rac-1 y Cdc42 por SigD y construcciones derivadas de ella.
Para ello se utilizaron vectores que expresaban las versiones dominantes
silvestres y mutantes negativos de Rac-1 y Cdc42, fusionadas al eptopo Myc,
para co-transfectar clulas HeLa conjuntamente con plsmidos que expresaban
SigD o sus derivados mutagenizados, fusionados a la protena GFP. De este
modo se pudo detectar por microscopa confocal la localizacin de las
protenas Rho en membrana como consecuencia de su activacin in vivo.
SigD fue capaz de activar Rac-1-myc, mientras que el mutante SigD
R468A
deficiente en actividad fosfatasa mostr una capacidad de activacin reducida
pero significativa. Este resultado concuerda con las observaciones sobre el
efecto de SigD y SigD
R468A
sobre el citoesqueleto de levaduras y clulas HeLa
(2). Por el contrario, la activacin de Cdc42-myc, tanto con la protena silvestre
SigD como con el mutante SigD
R468A
, no fue significativa. Por lo tanto, hay
indicios de que SigD, aunque no interaccione directamente con Rac-1, puede
activarla por una va independiente de su actividad fosfatasa.
Se ha utilizado tambin la microinyeccin de los vectores en clulas de
mamfero, que permite una expresin ms rpida de las construcciones, para
analizar su papel en la formacin de vacuolas y "ruffles y su posible relacin
con las rutas de trafico endoctico, detectando la co-locallizacin con
anticuerpos anti-EEA1 y Lamp1.

(1) Terebiznik MR, et al. :at !ell 6iol. 4:766-73.
(2) Alemn A, Rodrguez-Escudero , Mallo GV, Cid VJ, Molina M, Rotger R.
!ellular +icro,iolog' (aceptado).
M - 373
E$tudio$ de $ec!ecin de la ;alo&!otea$a C+? &!oducida &o!
Pseu$oalteromonas ruthenica C+G/
Snchez-Porro, C., Mellado, E. y Ventosa, A.
(epartamento de +icro,iolog-a ' *arasitolog-a, Facultad de Farmacia, Universidad de &evilla.
sanpor%us.es
Los microorganismos halfilos moderados son capaces de crecer ptimamente
en medios que contienen de 0,5 a 2,5 M (aprox. 3-15%) de NaCl. Estos
microorganismos son muy interesantes desde un punto de vista biotecnolgico
ya que producen numerosos compuestos de inters industrial como
exopolisacridos, solutos compatibles o enzimas (Ventosa y col., 1998). La
bacteria halfila moderada *seudoalteromonas rut)enica CP76 fue aislada en
un screening realizado en salinas de sla Cristina (Huelva), en el que se
determin la capacidad de las bacterias halfilas para producir diferentes
hidrolasas extracelulares (Snchez-Porro y col., 2003a). *. rut)enica CP76
produce una proteasa extracelular, denominada haloproteasa CP1, que ha sido
purificada y caracterizada bioqumicamente (Snchez-Porro y col., 2003b).
Mediante PCR inversa se ha secuenciado el gen, denominado cp1, que
codifica dicha proteasa. Se trata de una protena de 733 aminocidos que se
sintetiza en forma de pre-proprotena con cuatro dominios conservados.
Corriente abajo del gen cp1 se ha encontrado otro gen, cp., que codifica una
segunda proteasa extracelular.
El sistema general de secrecin (GSP) es un mecanismo de translocacin
mediante el cual las protenas atraviesan sucesivamente, la membrana
citoplasmtica y la membrana externa (Sandkvist, 2001). Para que una protena
atraviese la membrana interna las bacterias utilizan generalmente el sistema
Sec mientras que para atravesar la membrana externa el mecanismo ms
comnmente utilizado por las bacterias Gram-negativas es el denominado de
tipo . El aparato de secrecin de tipo est compuesto por 12-16 genes
diferentes que forman un complejo multiproteico localizado en el espacio
periplsmico. La protena D es una de las protenas ms conservadas en este
tipo de secrecin y es la encargada de formar el poro en la membrana externa.
En este trabajo se ha amplificado, mediante PCR inversa, el gen que codifica la
protena D en *. rut)enica CP76. Adems, mediante mutagnesis por doble
recombinacin utilizando el cassette Sm y el vector suicida pJQ200-SK se ha
conseguido un mutante, *. rut)enica CP77, incapaz de secretar la
haloproteasa CP1 al exterior, confirmando por tanto que en esta bacteria la
haloproteasa CP1 es secretada al exterior mediante el sistema de tipo .
C. Snchez-Porro, S. Martn, E. Mellado and A. Ventosa. 2003a. Diversity of moderately
halophilic bacteria producing extracellular hydrolytic enzymes. J. Appl. Microbiol. 94:
295-300.
C. Snchez-Porro, E. Mellado, C. Bertoldo, G. Antranikian and A. Ventosa. 2003b.
Screening and characterization of the protease CP1 produced by the moderately
halophilic bacterium *seudoalteromonas sp. strain CP76. Extremophiles 7: 221-228.
Sandkvist, M. 2001. Biology of type secretion. Mol. Microbiol. 40: 271-283.
A. Ventosa, J.J. Nieto and A. Oren. 1998. Biology of moderately halophilic aerobic
bacteria. Microbiol. Mol. Biol. Rev. 62: 504-544.
M - 378
+!ime!a ca!acte!i)acin de la !e$i$tencia a fluo!o:uinolona$ en
Streptococcus suis
Escudero, J.A., San Milln, A., Farelo, F., Moreno, M.A., Domnguez, L.,
Gonzlez-Zorn, B.
(epartamento de &anidad Animal, Facultad de Veterinaria, Universidad !omplutense de +adrid,
Avda *uerta de Hierro s<n, .8040/+adrid. ,g$orn%vet.ucm.es
&treptococcus suis es un coco Gram-positivo de distribucin mundial. Es causa
de elevadas tasas de mortalidad, tanto en el hombre como en los animales,
siendo una zoonosis de creciente incidencia mundial. Los tratamientos de las
infecciones causadas por &. suis se basan en la teraputica antibitica, siendo
las penicilinas y las quinolonas los tratamientos de eleccin. Su actividad
antibitica se debe a la inhibicin de dos enzimas bacterianas: la girasa, o
topoisomerasa y la topoisomerasa V. En bacterias, la resistencia a
quinolonas puede desarrollarse principalmente a travs de dos mecanismos: (i)
bombas de eflujo, que expulsan el antibitico del citoplasma impidiendo su
accin y (ii) la resistencia derivada de mutaciones puntuales en los genes que
codifican para las topoisomerasas y V. En los ltimos 5 aos y a travs del
laboratorio de diagnstico VSAVET de la facultad de Veterinaria de Madrid,
hemos detectado distintos aislado de S. suis altamente resistentes a
fluoroquiniolonas. En el presente trabajo mostramos la identificar y
caracterizacin del mecanismo de resistencia a las fluoroquinolonas en &. suis.

Hemos identificado y secuenciado por primera vez los genes par! y g'rA de &.
suis. Las secuencias aminoacdicas derivadas de los genes g'rA y par! de
cepas sensibles son idnticas entre ellas. Sin embargo, hemos detectado
mutaciones especficas en las cepas resistentes a fluoroquinolonas, tanto en el
gen par! como en g'rA. Estas mutaciones no han sido descritas anteriormente
en ninguna otra especie bacteriana.

CONCLUSONES

La mutaciones presentes en las cepas de &. suis resistentes a fluoroquinolonas
nos permiten afirmar que, a pesar de la facilidad de intercambio de material
gentico entre bacterias, especialmente entre estreptococos, la resistencia a
fluoroquinolonas de &. suis se genera de forma independiente al resto de
gneros bacterianos. Por ello, la emergencia de estas resistencias en &. suis,
suponiendo un problema clnico per se, no representa un reservorio de
mecanismos de resistencia para otros patgenos bacterianos.

Agradecemos al Grupo de Diagnstico del Laboratorio VSAVET por la
identificacin de losaislados clnicos.
Este proyecto ha sido parcialmente financiado con el proyecto AGL2002/02637.
M - 383
Ca!acte!i)acin de la -ilana$a A de %acillus $&. B+=G% Com&a!acin con
-ilana$a$ de &I alcalino y ba*o &e$o molecula! de la familia ??%
Gallardo, ., Daz, P., Pastor, F..J.
(epartamento de +icro,iolog-a, Facultad de 6iolog-a, Universidad de 6arcelona. Av. (iagonal
643, 6arcelona 080.8. e/mail0 ogallard%,io.u,.es
A partir de la cepa xilanoltica 6acillus sp. BP-7, previamente aislada y
caracterizada en el grupo de investigacin
1
, se elabor una genoteca en E. coli
usando como vector pUC19. De esta genoteca se aislaron diferentes clones
con actividad xilanasa, entre ellos E. coli/pXA3, a partir del cual se subclon el
gen x'nA, que codifica el enzima XynA de la 6acillus sp. BP-7.
Los estudios de especificidad de substrato mostraron que la xilanasa A
presenta alta actividad sobre xilanos de maderas duras y cereales, y muy baja
actividad sobre pNP-xilosidos y otros aryl-glicsidos ensayados. Estos
resultados son coherentes con el hecho de que XynA es una endo-xilanasa
(1,4-?-D-xylan xylanohydrolase; EC 3.2.1.8).
Los ensayos determinaron un pH ptimo del enzima de 6 y una temperatura
ptima de 60C. Adems la xilanasa present una alta termoresitencia,
conservando su actividad durante 3 horas a 50C y pH 7; mientras que result
fuertemente inhibida por los iones Mn
2+
, Fe
3+
, Pb
2+
y Hg
2+
.
Los anlisis electroforticos y zimogrficos mostraron que la xilanasa A tiene
un peso molecular aparente de 24 kDa y un p de alrededor de 9.
El fragmento de DNA que contena el gen x'nA fue secuenciado, obtenindose
una secuencia nucleotdica de 1394 bp, que contena un pauta abierta de
lectura de 619 bp codificante para una protena de 23 475 Da.
La secuencia aminoacdica de la xilanasa A, deducida a partir de la secuencia
nucleotdica, mostr homologa con xilanasa de p alcalino y bajo peso
molecular de la familia 11, como, por ejemplo, XynA de 6acillus su,tilis. El
anlisis de uso de codn en XynA de 6acillus sp. BP-7 revel que los
porcentajes G+C de la primera y segunda posicin de los codones era similares
a los de x'nA de 6acillus su,tilis
2
, y notablemente diferente de los valores
medios calculados para otros genes de glicosil hidrolasas de 6acillus su,tilis
3
.
Estos resultados sugieren que la xilanasa A de 6acillus sp. BP-7 es un enzima
altamente conservado que posiblemente ha sido adquirido por transferencia
horizontal de genes entre especies relacionadas con el gnero 6acillus.
1.- Lpez, C., Blanco, A. and Pastor, F..J. (1998). Xylanase production by a
new alkali-tolerant isolate of 6acillus. Biotechnol. Lett. 20, 243-246.
2.- Gallardo, ., Daz, P., Pastor, F..J. (2004). Cloning and characterization of
a xylanase from the strain 6acillus sp. BP-7. Comparison to alkaline low
molecular weight xylanases of family 11. Current Microbiol. 48, 276-279
3.- Garcia-Vallv, S., Palau, J. and Romeu, A. (1999) Horizontal gene transfer
in glycosyl hydrolases inferred from codon usage in Esc)eric)ia coli and
6acillus su,tilis. Mol. Biol. Evol. 16, 1125-1134.
M - 388
Deteccin de arm!9 un nue"o mecani$mo de !e$i$tencia a
aminoluc$ido$
Cataln, A., San Milln, A., Escudero, J.A., Porrero, M. C., Moreno, M. A.,
Domnguez, L., Gonzlez-Zorn, B.
Avda *uerta de Hierro s<n, .8040/+adrid. anita[cercedilla%)otmail.com
Los aminoglucsidos se utilizan en la actualidad para el tratamiento de
numerosas patologas producidas por bacterias, tanto Gram positivas como
Gram negativas. Los mecanismos de resistencia a estos antibiticos hasta
ahora descritos son la produccin de enzimas modificadoras, disminucin de la
acumulacin intracelular del antibitico y mutaciones en el rRNA. armA es un
nuevo mecanismo de resistencia que consiste en la metilacin del rRNA 16S,
impidiendo as la unin del aminoglucsido a la subunidad 30S ribosomal, que
es el lugar de accin de este grupo de antibiticos.
armA es de localizacin plasmdica y ha sido encontrado en aislados
hospitalarios de Taiwan y Francia. Nosotros hemos identificado por primera vez
armA en un aislado animal.
1
Se trata de un aislado de Esc)eric)ia coli
(MUR050) de origen porcino. Esta bacteria contiene el plsmido pMUR050, en
el que, adems de armA, se ha localizado un opern de resistencia a
macrlidos que hasta el momento slo se ha identificado en bacterias Gram-
positivas.
2
armA confiere resistencia de alto nivel a aminoglucsidos y puede
ser diseminado por conjugacin o transposicin tanto en humanos como en
animales. Por ello el seguimiento de la difusin de este gen entre los
microorganismos patgenos, tanto de origen humano como animal, es de
crucial importancia para la utilidad clnica de los aminoglucsidos en la prctica
clnica.
Con el fn de determinar la presencia de armA en E. coli y otras especies
bacterianas, estamos realizando PCRs de distintos aislados de origen animal,
utilizando como control positivo el plsmido pMUR050 y la cepa MUR050.
Diluciones del plsmido pMUR050 y de la cepa original MUR050 nos han
servido para determinar la sensibilidad de nuestra tcnica. Los fragmentos de
ADN resultantes de las PCRs fueron purificados, secuenciados y analizados
mediante anlisis bioinformtico. La tcnica de identificacin de armA en
aislados de heces es altamente sensible y especfica. Esta metodologa nos
est permitiendo analizar series de aislados bacterianos de distintos orgenes
para la deteccin de armA. Utilizaremos esta tcnica con el fin de detectar este
nuevo gen de resistencia a aminoglucsidos, armA, en otros microorganismos
para conocer su difusin, su posible origen y las interacciones que se
establecen entre los microorganismos patgenos y los comensales para
adquirir nuevos mecanismos de resistencia.
1. Gonzlez-Zorn et al. Emerg 1n#ect (is, 2005. 11; 954-6
2. Gonzlez-Zorn et al. 2 Antimicro, !)emot)er, 2005 (en prensa)
Agradecemos al Grupo de Diagnstico del Laboratorio VSAVET por la identificacin de losaislados
clnicos.
Este proyecto ha sido parcialmente financiado con el proyecto AGL2002/02637.
M - 389
Inte!accione$ ent!e la li&a$a de 'an$i$a rugosa y bica&a$ li&,dica$
mediante Mic!o$co&,a de >ue!)a$ Atmica$% A&licacin &a!a el e$tudio
de in;ibido!e$ de li&a$a$
Prim N.
a
, versen L.
b
, Bjrnholm T.
b
, Diaz P.
a
a
(epartamento de +icro,iolog-a, Universidad de 6arcelona, Avda. (iagonal 643, 6arcelona 080.8,
e/mail0 nprim%u,.edu.
,
:ano &cience !enter, (epartment o# !)emistr', Universit' o#
!open)agen, UniversitetsparOen 3, (P/.100 !open)agen, (inamarca
Las lipasas microbianas son enzimas altamente verstiles, mostrando una gran
eficacia en mltiples conversiones biotecnolgicas [1]. Algunas de ellas se han
considerado tambin como factores de virulencia para el establecimiento y/o
mantenimiento de ciertos procesos patognicos [2]. Debido a la complejidad de
las propias lipasas y de los sustratos sobre los cuales actan, resulta
extremadamente importante conocer las interacciones moleculares que se
establecen entre ambos, para entender el modo particular de accin de estas
enzimas sobre diferentes sustratos, as como bajo diferentes condiciones de
reaccin. Adicionalmente, el estudio de sustancias potencialmente inhibidoras
de lipasas est ganando inters, especialmente dirigido hacia las lipasas
producidas por microorganismos patgenos que contribuyen a ciertas
enfermedades como el acn o la lcera gstrica [3].
La microscopa de fuerzas atmicas (AFM) supone un nuevo e interesante
enfoque para el estudio de sistemas biolgicos complejos a nivel molecular, ya
que permite la observacin in situ de reacciones e interacciones moleculares
en las interfases, y bajo condiciones cercanas a las fisiolgicas [4]. Adems, la
microscopa de fuerzas atmicas puede medir interacciones especficas entre
una enzima y dos ligandos, uno de ellos en solucin y el otro inmovilizado
sobre una superficie [5], permitiendo de este modo el estudio de sistemas
multicomponente [6]. En este contexto, las bicapas lipdicas se prepararon
sobre mica mediante la tcnica de Langmuir-Blodgett [4] y se utiliz la
microscopa de fuerzas atmicas para el estudio de las interacciones que las
lipasas establecan con estas interfases. La lipasa de !andida rugosa (CRL)
[7], por tratarse de una enzima muy bien caracterizada, fue usada como
modelo para estandarizar las condiciones generales para estos estudios a
nanoescala. Se realizaron ensayos tanto de observacindirecta de la hidrlisis
con CRL presente en solucin, como mediante el anlisis de las fuerzas
establecidas entre las bicapas y la enzima, previamente unida a la sonda de
AFM. Los estudios de AFM en presencia de compuestos anteriormente
descritos como inhibidores de lipasas con potencial teraputico [6, 8, 9], se
estn llevando a cabo en la actualidad.
Referencias
[1] Jaeger, K.E., Ransac,S., Dijkstra, B.W., Colson, C., Heuvel., M., Misset, O. (1994). FEMS
Microbiol. Rev. 15: 29-63. [2] Jaeger, K.E., Reetz, M.T. (1998). TBTECH, 19: 396-403. [3]
Higaki, S. (2003). Journal of molecular catalysis B Enzymatic, 22 (5-6): 377-384. [4] Balashev,
K., Jensen, T.R., Kjaer, K., Bjrnholm, T. (2001). Biochimie, 83: 387-397. [5] Fiorini, M.,
McKendry, R., Cooper, M.A. Rayment, T., Abell, C. (2001). Biophysical Journal, 80: 2471-
2476. [6] Allen, S., Davies, J., Dawkes, A.C., Davies, M.C., Edwards, J.C., Parker, M.C.,
Roberts, C.J., Sefton, J., Tendler, S.J.B., Williams, P.M. (1996). FEBS Letters, 390: 161-164.
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Mazzanti, G.; Saso, L.; Silvestrini, B. (1999). Bioscience Biotechnology and Biochemistry. 63
(9): 1557-1562. [9] Ruiz, C., Falcocchio, S., Xoxi, E., Pastor, F..J., Diaz, P., Saso, L. (2004).
Biochimica et Biophysica Acta 1672: 184-191.
M - 392
Re$i$tencia a beta lact#mico$ en 4aemophilus parasuis
San Milln, A., Domnguez, L. Garca, M., Muoz-Ruiz, D., Moreno, M.A.,
Gonzlez-Zorn, B.
Avda *uerta de Hierro s<n, .8040/+adrid, alvsanmillan%)otmail.com
Haemop)ilus parasuis es un microorganismo comensal del tracto respiratorio
superior de los cerdos, que bajo determinadas circunstancias puede ser
invasivo y causar patologas sistmicas severas, caracterizadas por
poliserositis fibrinosa, artritis y meningitis, denominada enfermedad de Glasser.
Este bacilo Gram negativo se asla de forma rutinaria en el laboratorio
VSAVET, en la Facultad de Veterinaria de la UCM. La identificacin se basa
en caractersticas fenotpicas en agar chocolate y un test de CAMP.
En los antibiogramas rutinarios que nuestro laboratorio realiza de H. parasuis
aparecen de forma creciente cepas resistentes a beta lactmicos, que son los
antibiticos de eleccin en procesos respiratorios en ganado porcino. Hasta el
momento no se ha caracterizado ningn mecanismo de resistencia a beta
lactmicos en esta especie bacteriana.
Primeramente y para confirmar la identificacin de la especie H. parasuis,
hemos aplicado a estas cepas una tcnica de PCR especfica basada en la
amplificacin del gen codificante para la subunidad 16S del RNA, resultando un
producto de 821 pb. Como resultado hemos ratificado la identificacin de 67
aislados de H. parasuis, de los que 10 presentan resistencia a ampicilina.
Posteriormente hemos aplicado el test de la nitrocefina aestas cepas, siendo
todas las cepas resistentes (>18 mm Amoxicilina) positivas, mientras que las
cepas sensibles fueron negativas, lo que demuestra que enzimas del tipo beta
lactamasas son las responsables de la aparicin de la resistencia en la especie
H. parasuis. Dado que estas enzimas suelen estar codificadas por genes
plasmdicos en otros patgenos respiratorios del ganado porcino, hemos
procedido a la extraccin de plsmidos de estas cepas resistentes,
comprobando que todas ellas contienen un plsmido de patrn indistinguible en
geles de agarosa. Actualmente estamos caracterizando estos plsmidos y
comprobando la existencia de genes codificantes de beta lactamasas (,la
ROB-1
,
,la
TEM-1
...) que aparecen en otros patgenos respiratorios de cerdos, sin
descartar la posibilidad de encontrar nuevos genes no descritos. Por otro lado
tambin hemos transformado cepas de Esc)eric)ia coli con estos plsmidos
para determinar la presencia del gen de resistencia en este replicn y
procedera su caracterizacin gentica.
De este modo esperamos caracterizar el mecanismo de resistencia a beta
lactmicos en H. parasuis, as como los genes implicados en el mismo y su
posible transmisin a otros patgenos respiratorios porcinos o humanos.
Agradecemos al Grupo de Diagnstico del Laboratorio VSAVET por la
identificacin de los aislados clnicos. Este proyecto ha sido parcialmente
financiado con el proyecto AGL2002/02637.
M - 399
E$tudio enmico de la !e$&ue$ta de fib!obla$to$ a la infeccin
int!acelula! con Salmonella
Nez-Hernndez, C. y Garca-del Portillo, F.
(epartamento de 6iotecnolog-a +icro,iana. !entro :acional de 6iotecnolog-a/!&1!. (arAin 3.
.8049 +adrid. cnune$%cn,.uam.es
&almonella enterica es un patgeno bacteriano intracelular que infecta clulas
eucariticas fagocticas y no fagocticas. Este patgeno sobrevive al ataque
microbicida de macrfagos, tipo celular en el que diversos estudios sugieren
que la bacteria podra proliferar in vivo. No obstante, diversos estudios han
demostrado que esta bacteria no desarrolla in vivo una fase activa de
crecimiento intracelular (media 3-4 bacteria/clula), incluso en la fase aguda de
la infeccin. Nuestro laboratorio analiza la infeccin de fibroblastos con
&almonella ya que, al contrario de lo que ocurre en macrfagos en cultivo, la
bacteria muestra una tasa de proliferacin muy baja, asemejndose a las
observaciones in vivo. &almonella programa este estado de baja proliferacin
en el fibroblasto utilizando reguladores como el sistema PhoP-PhoQ y la
protena gaA. Mutaciones en estas funciones del patgeno conducen a un
fenotipo de "sobrecrecimiento. Con el objeto de conocer qu funciones del
fibroblasto podran ser diana de &almonella para reducir la tasa de
proliferacin, se ha analizado por ensayos de transcriptmica el perfil de
expresin de genes de fibroblastos de rata infectados con una cepa silvestre
virulenta de &. enterica serovar Typhimurium o sus mutantes isognicos p)o* e
igaA1. Para ello se emplearon microsoportes de DNA (microarra's) en los que
estn representados 26.962 genes del genoma de rata. La comparacin del
perfil obtenido en fibroblastos infectados versus no infectados mostr
alteraciones en la expresin de 106 genes que, acorde a su patrn de cambio,
se pueden diferenciar dos grupos: a) genes inducidos por las tres cepas
empleadas (wt, p)o*, igaA1); y, b) genes con expresin disminuida en
fibroblastos infectados por la cepa virulenta. El primer grupo incluye genes que
codifican protenas relacionadas con respuesta inmune innata, como las
quimioquinas CCL20, CNCs, y la molcula de adhesin CAM-1, adems de
genes que codifican para la protena Rip-2 y las metaloproteinasas MMP-3 y
MMP-9. Estas endopeptidasas se inducen en clulas eucariticas en respuesta
a LPS o infeccin frente a otros patgenos, siendo nuestro trabajo el primero
que las relaciona con la infeccin por &almonella. El segundo grupo comprende
genes que codifican la ciclina D2 y la fosfoprotena 1 de fase M, mostrando
menor expresin en clulas infectadas con la cepa parental. Estos cambios
podran reflejar un mecanismo de modulacin del ciclo celular del fibroblasto
para coordinar la velocidad de crecimiento de la clula infectada con la del
patgeno. Los cambios de expresin en los genes descritos han sido validados
por RT-PCR cuantitativa. En su conjunto, los datos obtenidos indican que la
persistencia de &almonella en el interior de fibroblastos podra requerir la
modulacin de circuitos de regulacin que controlan el ciclo celular. Otro
aspecto llamativo es la aparente falta de regulacin negativa sobre la liberacin
de quimioquinas de tipo inflamatorio.
M - 401
Blattabacte!ia9 t;e endo$ymbiont$ of cocH!oac;e$9 ;a"e con!uent
enome $i)e$ of /@F Hb
Neef A., Lpez-Snchez M.J., Latorre A., and Moya A.
!avanilles 1nstitute #or 6iodiversit' and Evolutionar' 6iolog', Universit' o# ValenciaF Apartado
*ostal ..083, 4601 ValenciaF alexander.nee#%uv.es
Blattabacteria are intracellular endosymbionts found specifically in the
abdominal fat body of cockroaches. The symbiosis is considered as mutually
obligatory although the function of the blattabacteria is yet unknown.
Blattabacteria are members of the phylum Bacteroidetes (formerly called CFB
phylum) and the genus 6latta,acterium is belonging to the class Flavobacteria
constituting therein an own family. The genomes of six insect endosymbionts,
all members of the gamma-proteobacteria, have been already completely
sequenced (1). The gathered information reveals for all of them a drastic
genome size reduction in comparison with their respective free living relatives.
The gene contents found in these symbionts have confirmed the eminent role of
the bacteria for the nutrition of the hosts like postulated previously. Therefore,
we hope that genomic studies of blattabacteria may disclose an idea of their
function for the cockroaches, but also deliver general insights on the
evolutionary constraints for obligate intracellular bacteria. Here, genome sizes
of three different blattabacteria were determined using pulse field gel
electrophoresis. Additionally, a shot-gun approach sequencing project of the
complete genome of the endosymbiont of 6lattella germanica has been started.
Determined genome sizes for the endosymbionts from 6lattella germanica,
*eriplaneta americana, and 6latta orientalis were highly congruent and all in the
size range of about 650 kb. Despite the identical genome sizes restriction
patterns were considerably distinct for the three symbionts and showed a
species-specific outline.
n the moment, this is the only known genome project for a non-proteobacterial
insect endosymbiont. Like the gamma-proteobacterial endosymbionts
blattabacteria possess a highly reduced genome compared with free-living
relatives (2-4). As an additional aspect, in future, knowledge gained from
genomic studies may support the improvement of pest control strategies.
References:
(1) http://www.ncbi.nlm.nih.gov/genomes/MCROBES/Complete.html
(2) Akman L et al 2002. Nat.Genet. 32:402-407. (3) van Ham RCHJ et al 2003.
PNAS 100:581-586. (4) Gil R et al 2003. PNAS 100:9388-9393.

M - 403
Ca!acte!i)acin del $i$tema celulol,tico de Stachybotrys atra B+=A
Picart, P. y Pastor, F..J.
(epartamento de +icro,iolog-a, Universidad de 6arcelona, Av. (iagonal 643, 080.8 6arcelona,
EspaLa. e/mail0 picart%,io.u,.es
La cepa fngica &tac)',otr's atra BP-A fue aislada a partir de material textil en
descomposicin, e identificadamediante el estudio del opern nuclear rDNA. El
estudio del sistema celuloltico de la cepa mediante electroforesis y zimograma
mostr que la cepa posee una batera compleja de enzimas celulolticos, en
relacin con su capacidad de crecer en medios de celulosa como nica fuente
de carbono. Con el fin de caracterizar de forma ms completa el sistema
celuloltico de &tac)',otr's atra BP-A, se realizaron ensayos de unin de
dichas enzimas a celulosa cristalina (Avicel), para determinar la capacidad de
unin de las distintas celulasas al Avicel y poder establecer as estrategias para
la purificacin de las mismas. Los resultados mostraron que las celulasas de
peso molecular 61 y 63 kDa se unan a Avicel, hecho que indicaba la presencia
de dominios de unin a celulosa (CBM) en estas enzimas, mientras que las
celulasas de peso molecular 59 y 40 kDa no se unan a celulosa y se recogan
en la fraccin no unida a Avicel. Los ensayos para determinar las condiciones
de elucin de las dos celulasas que se adsorben al Avicel mostraron que, de
entre todos los eluyentes analizados, nicamente el SDS al 1% consigui la
elucin de ambas celulasas.
Al mismo tiempo, con el fin de clonar las celulasas en estudio, sedisearon 2
primers degenerados correspondientes a una regin conservada de las
endoglucanasas de la familia 12 de glicosil hidrolasas, familia que contiene
celulasas fngicas con interesantes aplicaciones industriales (Goedegebuur, et
al., 2002). Mediante dichos primers se amplific un fragmento que contena una
secuencia codificante con similitud a endoglucanasas fngicas. A continuacin,
mediante la tcnica de gene AalOing, se consigui la secuencia completa del
gen, que codificaba para un enzima que present un 85% de homologa con
una endoglucanasa de la sp. +emnoniella ec)inata. Dicha enzima se denomin
Endoglucanasa A.
Actualmente se estn llevando a cabo geles 2D, secuenciacin del extremo N-
terminal y FPLC con el fin de clonar el resto de celulasas de&tac)',otr's atra
BP-A.
Goedeebuu!9 >%9 >oTle!9 T%9 +;illi&$9 3%9 +im "an de! Mley9 +iet "an
Solinen9 DanHmeye!9 L% And +oTe!9 S% 5.FF.7% Cloning and relational
analysis of 15 novel fungal endoglucanases from family 12 glycosyl hydrolase.
Current Genetics 41:89-98.
M - 407
El !eulado! lobal de "i!ulencia sar! cont!ola &o$iti"amente la e-&!e$in
de Ba&9 una &!ote,na de Staphylococcus aureus im&licada en la fo!macin
del biofilm
Trotonda M.P., Manna A.C., Cheung A.L., Lasa .

y Penads J. R.
Universidad !ardenal Herrera/!EU E 1nstituto Valenciano de 1nvestigaciones Agrarias B1V1AC,
46113, +oncada, Valencia. ptrotonda%uc).ceu.es.
&tap)'lococcus aureus es un patgeno oportunista causante de infecciones
tanto en hombres como en animales debido a su habilidad para persistir y
multiplicarse en gran variedad de ambientes. En la actualidad se ha convertido
en el patgeno ms importante productor de mamitis subclnicas en rumiantes
y es tambin una de las principales causas de infecciones nosocomiales al ser
capazno slo de colonizar y persistir en las glndulas mamarias sino tambin al
ser capaz de adherirse a catteres, vlvulas cardacas y otros implantes
prostticos mediante la formacin, en ambos procesos, de un biofilm.
Recientemente nuestro grupo identific una protena de superficie denominada
Bap (biofilm associate protein; Cucarella et al., 2 6acteriol 183: 2888-2896)
implicada en la formacin del biofilm en &. aureus. Todas las cepas de &.
aureus que llevan el gen ,ap son fuertes formadores de biofilm y la mutacin
del gen ,ap provoca una prdida de la capacidad para formar biofilm y una
disminucin de la capacidad infectiva (Cucarella et al., 2 6acteriol 183: 2888-
2896).
En &. aureus, muchos factores de virulencia son regulados por SarA
(staphylococcal accesory regulator). En este trabajo demostramos que SarA
regula la expresin de Bap, y por lo tanto el proceso de formacin del biofilm en
&. aureus. As, mediante Western-blot se observ que los mutantes en sarA
haban perdido la capacidad de expresar Bap, por lo que los converta en no
adherentes en placa de poliestireno (no formadores de biofilm). El anlisis en
profundidad de este proceso demostr que la prdida de la capacidad de
expresar Bap era debida a que SarA acta como activador de la expresin de
,ap, hecho que fue demostrado tras el anlisis por Northern-blot y mediante la
realizacin de una fusin transcripcional. Finalmente, la realizacin en paralelo
de "geles de retardo y "huellas dactilares de proteccin a la digestin por
DNasa han demostrado que la protena SarA se une especficamente al
promotor de ,ap, controlando positivamente la expresin de la protena Bap.
M - 408
!1OS +CR una ;e!!amienta diano$tica (til &a!a la dife!enciacin de la$
ce&a$ de %rucella abortus de cam&o y la ce&a "acunal RB@?
Pereira G, Cerrato R, Hermoso de Mendoza M, Snchez S, Alonso JM, Rey
JM, Snchez MA, Hermoso de Mendoza J
*atolog-a 1n#ecciosa, Facultad de Veterinaria, !ampus Universidad de Extremadura, 1001/
!"ceres. ,ru=ula.010%'a)oo.es.
La reaccin serolgica con los antgenos de 6rucella mediante Rosa de
Bengala se usa para el screening inicial de diagnstico y la Fijacin de
Complemento para confirmar dudosos. Sin embargo, las reacciones cruzadas
con algunas infecciones bacterianas y otros factores pueden originar
reacciones positivas falsas. El aislamiento e identificacin de 6rucella spp. son
el mtodo diagnstico de referencia para confirmar casos. La conservacin
gentica entre las especies de 6rucella ha dificultado su diferenciacin.
Nuestro objetivo consisti en aplicar la tcnica de A+D& PCR, basada en la
secuencia 1&11, desarrollado por Bricker y Halling en 1994, a los aislados
obtenidos de hisopos vaginales y tejidos de ganado bovino procedentes de
casos de campo en reas sometidas a control vacunal con 6. a,ortus RB51.
Esta PCR nos permite diferenciar la cepa de 6rucella a,ortus de campo de la
cepa vacunal RB51.
En el ensayo escogimos aislados de 6rucella. La identificacin presuntiva de
6rucella se realizaba en base a las caractersticas morfolgicas del cultivo, sus
caractersticas microscpicas y caractersticas metablicas. Adems las
identificaciones presuntivas fueron confirmadas por el Laboratorio Nacional de
Sanidad Animal de Santa Fe. Nuestro ensayo corrobora la fcil
reproducibilidad y fiabilidad de este mtodopara diagnstico los aislados de
6rucella
El empleo de tcnicas moleculares estandarizadas en laboratorios
adecuadamente equipados puede acelerar la obtencin de resultados
epidemiolgicamente valiosos. Aunque las tcnicas microbiolgicas
convencionales son las de referencia en la actualidad, se hace necesaria la
validacin oficial de procedimientos que aceleren el proceso diagnstico y
reduzcan la manipulacin de agentes infecciosos peligrosos y por consiguiente
el riesgo para el personal de laboratorio. Este es el caso de AMOS PCR,
herramienta til para la identificacin de 6rucella, y especialmente para la
diferenciacin de la cepa de 6rucella a,ortus de campo de la cepa vacunal
RB51, crucial cuando se est controlando la enfermedad con esta vacuna.
A!adecimiento$
Este estudio se ha podido realizar con el soporte econmico de la Consejera de
Agricultura y Medio Ambiente de la Junta de Extremadura y especialmente gracias a la
colaboracin tcnica y de campo del personal de la Direccin General de Explotaciones
Agrarias.
Biblio!af,a
1. Alton, G. G., L. M. Jones, 1988. Techniques for the brucellosis laboratory. NRA.
2. Bricker, B. J., and S. M. Halling. 1994. J. Clin. Microbiol. E.826602666.
3.Bricker, B. J., and S. M. Halling.1995. J. Clin. Microbiol. June 1640-1642.
4. Bricker, B. J . Veterinary Microbiology 90 (2002) 435-446.
M - 410
Ti&ado molecula! de ce&a$ de Staphylococcus aureus obtenida$ de
le$ione$ &u!ulenta$ cun,cola$%
Selva, L
1
; Viana, D
1
; Penads, J
1,3
; Peris, B
1
; Segura, P
1
y Corpa. J
1
.
1
(epartamento de Atenci;n &anitaria, &alud *R,lica ' &anidad Animal, Universidad !ardenal
Herrera/!EU, 46113 +oncada, ValenciaF
.
(epartamento de Gu-mica, 6ioIu-mica ' 6iolog-a
+olecular, Universidad !ardenal Herrera/!EUF
3
1nstituto Valenciano de 1nvestigaciones Agrarias
B1V1AC, 46113 +oncada, Valencia. lselva%uc).ceu.es
La estafilococia es una enfermedad que afecta comnmente a conejos
domsticos, a liebres y a conejos silvestres (Flatt, 1974; Ktsche y Gottschalk,
1974). Est causada por &. aureus y se caracteriza por una inflamacin
supurativa en prcticamente todos los rganos y localizaciones de los animales
y, con frecuencia, por una septicemia fatal (Flatt, 1974).
Las infecciones estafiloccicas suponen, en la actualidad, un proceso
patolgico de enorme inters en la cunicultura industrial, ya que se encuentran
instauradas en la prctica totalidad de las granjas y originan una medicacin,
en ocasiones excesiva, provocando multitud de resistencias en los animales.
Nuestro objetivo es realizar el tipado molecular de cepas de &. aureus
obtenidas de diferentes lesiones, con el fin de estudiar la clonalidad de la
poblacin de &. aureus causante de lesiones de carcter pigeno y establecer
su asociacin con diversos cuadros patolgicos presentes en explotaciones
cuncolas de tipo industrial.
Para la realizacin de este estudio partimos de 311 hembras de desvieje,
procedentes de distintas explotaciones cuncolas de la Comunidad Valenciana.
Se realiz cultivo microbiolgico de lesiones de ndole purulento y se procedi
a la purificacin del ADN genmico siguiendo los mtodos utilizados
habitualmente en la bibliografa para la extraccin de ADN genmico de
microorganismos Gram-positivos (Sambrook et al, 1989). Posteriormente se
realiz el tipado molecular utilizando como criterio de seleccin el polimorfismo
en la longitud de los fragmentos de restriccin del producto de PCR del gen de
la coagulasa y de la protena A.
El anlisis del producto de PCR del gen de la coagulasa y su posterior
digestin con !#o1, establece 5 tipos diferentes de &. aureus: A-A, B-B, C-C, D-
D y B-E. Dichos anlisis para la protena A, establecen los siguientes tipos: 1-1,
2-2, 2-6, 2-7, 3-3, 4-4 y 4-5. En total se obtienen 12 tipos diferentes de &.
aureus: AA22, AA33, BB11, BB44, BB45, BE44, CC11, CC26, DD22, DD27,
DD44, DD45, siendo el tipo AA22 el ms frecuentemente aislado.
En conclusin, un mismo tipo de cepa es capaz de producir lesiones en
diferentes localizaciones (mamitis, abscesos subcutneos, pododermatitis,
neumona, conjuntivitis, pimetra y otitis), lo que supone una adaptacin de la
cepa a distintas condiciones de crecimiento en distintos rganos.
M - 411
>o!macin de biofilm9 de&endiente de Ba&9 de e$&ecie$ &atena$ de
Staphylococcus< Qe"idencia de t!an$fe!encia ;o!i)ontal de ene$R
Tormo, M.A., Mart, M., Knecht, E., Gtz, F., Lasa, . y Penads, J.R.
Universidad !ardenal Herrera/!EU E 1nstituto Valenciano de 1nvestigaciones Agrarias B1V1AC,
46113, +oncada, Valencia. migmar%uc).ceu.es
La protena asociada a biofilm (Bap) es una protena de superficie de 2276
aminocidos implicada en la formacin de biofilm de &tap)'lococcus aureus
aislados de infecciones de mamitis crnica (Cucarella et al., 2001). El gen ,ap
se encuentra en un transposn incluido en SaPbov2, una isla de patogenicidad
mvil de &. aureus (Ubeda et al., 2003). En este estudio hemos identificado,
clonado y secuenciado ortlogos del gen ,ap de diferentes especies de
&tap)'lococcus como &. epidermidis, &. c)romogenes, &. x'losus, &. simulans
y &. )'icus. El anlisis de la comparacin de secuencias del gen ,ap de estas
especies revel una alta similitud, sugiriendo la transferencia horizontal de
SaPbov2 entre ellas. Sin embargo, el anlisis de la secuencia de la regin
flanqueante revel que el gen ,ap presente en estas especies no se
encontraba ni en el transposn ni en la isla de patogenicidad descritos
previamente en &. aureus. Aunque no contenan el opern icaADBC, todos los
aislados de &tap)'lococcus ,ap-positivos eran fuertes productores de biofilm.
La disrupcin del gen ,ap en &. epidermidis suprimi la capacidad de
formacin de biofilm, mientras que la complementacin heterloga de cepas
,ap- e ica-, y por lo tanto biofilm-negativas, de &. aureus con la protena Bap de
&. epidermidis les confiri la capacidad de formacin de biofilm.
Conjuntamente, estos resultados demuestran que los ortlogos de Bap inducen
un mecanismo alternativo de formacin del biofilm independiente del
exopolisacrido PA/PNAG.

Cucarella, C., Solano, C., Valle, J., Amorena, B., Lasa, ., and Penades, J.R.
(2001) Bap, a &tap)'lococcus aureus surface protein involved in biofilm
formation. 2 6acteriol ?AE: 2888-2896.
Ubeda, C., Tormo, M.A., Cucarella, C., Trotonda, P., Foster, T.J., Lasa, ., and
Penades, J.R. (2003) Sip, an integrase protein with excision, circularization and
integration activities, defines a new family of mobile &tap)'lococcus aureus
pathogenicity islands. +ol +icro,iol BI: 193-210.

M - 412
>acto!e$ de &atoenicidad de dife!ente$ ce&a$ de Staphylococcus aureus
&!ocedente$ de le$ione$ de cone*o
Viana, D
1
; Selva, L
1
; Penads, J
1,3
; Peris, B
1
; Segura, P
1
y Corpa. J
1
.
1
(epartamento de Atenci;n &anitaria, &alud *R,lica ' &anidad Animal, Universidad !ardenal
Herrera/!EU, 46113 +oncada, ValenciaF
.
(epartamento de Gu-mica, 6ioIu-mica ' 6iolog-a
+olecular, Universidad !ardenal Herrera/!EUF
3
1nstituto Valenciano de 1nvestigaciones Agrarias
B1V1AC, 46113 +oncada, Valencia. dviana%uc).ceu.es
&tap)'lococcus aureus es una bacteria Gram positiva, patgena oportunista,
que se encuentra en el aire, polvo, aguas residuales, leche, superficies
ambientales, as como piel y mucosas de humanos y animales, siendo stos
los principales reservorios. Su habilidad para persistir y multiplicarse en
diferentes ambientes junto con su capacidad para producir una gran variedad
de exoprotenas le convierten en un patgeno muy verstil capaz de producir
un amplio espectro de enfermedades. &. aureus suele infectar piel y tejidos
blandos, desde los cules puede invadir la sangre y producir cuadros graves de
sepsis, neumona, endocarditis o llegar hasta las articulaciones o el hueso y
producir artritis u osteomielitis.
En la especie cuncola produce una inflamacin supurativa en prcticamente
todos los rganos y localizaciones de los animales y, con frecuencia, una
septicemia fatal.
Hasta el momento, se desconoce la importancia de la relacin entre los
factores de patogenicidad bacterianos y el hospedador en el desarrollo de la
patogenia de la enfermedad. El objetivo del presente trabajo fue determinar los
factores de patogenicidad expresados en diferentes cepas de &. aureus
cuncolas y relacionarlas con el tipo lesional que ocasionaban.
Para la realizacin de este estudio partimos de 311 aislados de &. aureus
procedentes de casos clnicos de granjas cuncolas de la Comunidad
Valenciana. De estos aislados se seleccionaron 35 cepas por tipado molecular
y lesin de procedencia. De esta seleccin se analizaron toxinas (sea, seb, sec,
sed, see, seg, seh, sei, sej, pvl, hlg), adhesinas asociadas a la pared bacteriana
(fnb A, Clf A, Clf B,cna, spa, sdrC, sdrD, sdrE, bbp, ebp S, map/eap) y
exoprotenas (tst, eta, etb). El anlisis de los diferentes factores de
patogenicidad se realiz mediante amplificacin por PCR de los genes que los
codifican, posteriormente a la purificacin del ADN genmico.
Tras el anlisis de los diferentes factores se comprob que cepas del mismo
tipo molecular mostraban semejanza en los factores de patogenicidad,
implicando una gran variabilidad en los genes de virulencia entre las
poblaciones naturales de &. aureus.
M - 415
Recombinacin Domloa en '. albicans8 ca!acte!i)acin de mutante$
ra$=1D%
Gmez-Raja, J
1
. Andaluz, E
1
. Ciudad, T
1
y Larriba, G
1
.
1
(epartamento de +icro,iolog-a, Facultad de !iencias, Universidad de Extremadura, 6ada=o$.
=gr%unex.es
!andida al,icans es un comensal diploide presente en el 50-70% de la
poblacin. Cuando las defensas del husped son bajas, el organismo pasa a
patgeno. De hecho, C. albicans es el principal patgeno fngico ms
frecuentemente aislado en humanos, representando el 8% de las infecciones
en sangre, especialmente en pacientes inmunodeprimidos. Una particularidad
de este hongo es la ausencia de un ciclo sexual completo (ausencia de
meiosis); por lo que la recombinacin mittica podra ser la nica fuente de
variabilidad gentica. El organismo posee un alto grado de heterozigosidad
natural, lo que significa que algunos pares de alelos solo contienen una copia
funcional. Adems, las reorganizaciones cromosmicas son frecuentes tanto en
aislados clnicos como en mutantes espontneos de este organismo. Todo ello
revela una elevada inestabilidad genmica y sugiere que la recombinacin
mittica puede jugar un papel importante en la ciclo de vida de este organismo.
Nuestro grupo est caracterizando genes implicados en este proceso. Uno de
ellos, ?A(31, es un homlogo de ?ecA bacteriano. La protena de &.
cerevisiae tiene un 30% de identidad con el dominio cataltico de ATP-asa de
?ecA, el cual une e hidroliza nucletidos, y participa en recombinacin
homloga promoviendo el intercambio de cadenas durante la formacin del
"heteroduplex. Hemos clonado ?A(31 de !. al,icans a partir de un fsmido
utilizado en la confeccin del mapa fsico del genoma. La correspondiente ORF
presenta polimorfismo de restriccin (RFLP) en varias cepas silvestres de !.
al,icans. Se han obtenido dos mutante nulos independientes mediante la
interrupcin secuencial de ambos alelos en la cepa CA4 (auxtrofa para el gen
U?A3) utilizando el U?A ,laster. Ambos mutantes rad31(/rad31( exhibieron
un fenotipo filamentoso. Mediante la reintegracin de una copia del gen
!a?A(31 silvestre en su propio locus se ha obtenido un revertiente que posea
el fenotipo levaduriforme del silvestre. Finalmente, se ha analizado el
comportamiento de estos mutantes en respuesta a agentes que daan DNA
(MMS, UV), as como su capacidad para integrar fragmentos de DNA lineales
con homologa en sus extremos y para mantener plsmidos replicativos.
M - 416
Im&o!tancia de la fo$fatidilcolina en la "i!ulencia de %rucella
Conde R.
1
, Grill M.J.
2
, de Miguel M.J.
2
, Moriyn .
1
, riarte M.
1
1
(pto. de +icro,iolog-a. Facultad de +edicina, Universidad de :avarra, *amplona '
.
Unidad de
&anidad Animal, !entro de 1nvestigaci;n ' 7ecnolog-a Agroalimentaria, 4o,ierno de Arag;n,
Sarago$a, EspaLa.
La envoltura de 6rucella se diferencia de la de la mayora de los patgenos
animales por contener fosfatidilcolina (PC), el fosfolpido ms abundante en la
membrana de eucariotas, donde tiene un papel estructural importante y puede
intervenir en la sealizacin. Aunque el papel de la PC en la patogenicidad de
6rucella no ha sido investigado todava, podra ser relevante en la estrecha
relacin que la bacteria mantiene con la clula hospedadora. Se han descrito
dos rutas principales para la sntesis de PC. En la primera, la PC se forma por
metilaciones de la fosfatidil-etanolamina realizadas por una metiltransferasa
(PmtA) que utiliza la S-adenosilmetionina como dador. La segunda est
mediada por una PC sintasa (Pcs) que condensa colina con CDP-diacilglicerol
para formar PC. El genoma de 6rucella contiene dos ORFs con homologa
significativa con las de PmtA y Pcs. Nuestro trabajo ha sido analizar si estas
ORFs estn implicadas en la produccin de PC y estudiar el papel de este
fosfolpido en las propiedades de la membrana de 6rucella y en la virulencia en
ratones.
Por mutagnesis dirigida se construyeron mutantes no polares en pmtA
(BApmtA), en pcs (BApcs) y un doble mutante pmtApcs (BApmtApcs) en B.
abortus 2308. El anlisis por cromatografa en capa fina de alta resolucin
mostr que el mutante pcs y el doble mutante pmtApcs no sintetizan PC. La
sntesis de PC se restableci cuando ambos fueron complementados en trans
con el gen pcs. Adems, la introducin de un plsmido con pmtA no indujo la
sntesis de PC en el doble mutante. Estos resultados sugieren que, in vitro, la
va de la Pcs es la nica implicada en la sntesis de PC en B. abortus, y que
cuando est anulada tampoco la sobreexpresin de pmtA conlleva la sntesis
de PC. Los mutantes BApcs y BApmtApcs crecieron ms despacio que la cepa
parental y fueron ms sensibles a la poly-L-ornitina. Por otra parte, los tres
mutantes se diferenciaron de la cepa parental por su sensibilidad a colorantes y
al fago Tb.
Los estudios de virulencia en ratones demostraron que los mutantes pcs y
pmtApcs se multiplican menos y son menos persistentes que la cepa parental.
Esto demuestra que la PC es un componente de B. abortus necesario para
establecer infecciones crnicas. nesperadamente, el mutante pmtA tambin se
multiplic y persiti menos que la cepa parental, indicando que juega un papel
desconocido in vivo tambin necesario para la cronicidad. Se postula que una
estabilidad de la membrana externa de 6rucella necesaria para un nivel
mximo de virulencia slo pude ser proporcionada por la PC y no por la
fosfatidil-etanolamina como en la mayora de los patgenos gram-negativos.
M - 423
QXu' $on !ealmente la$ i$la$ de &atoenicidad de Staphylococcus
aureusR
beda C, Maiques E, Blanco J, Lasa , Penads JR.
Universidad !ardenal Herrera/!EU < 1nstituto Valenciano de 1nvestigaciones Agrarias.
=penades%ivia.es
La virulencia de muchas bacterias patgenas es debida a protenas codificadas
por largas agrupaciones de genes denominadas islas de patogenicidad (Ps).
Aunque la presencia de Ps es un prerrequisito para muchas enfermedades
bacterianas, se conoce muy poco acerca de los sus orgenes y de su
mecanismo de transferencia entre bacterias. En las cepas de &tap)'lococcus
aureus se han descrito diversas Ps entre las que se incluyen SaP1-SaP4 y
SaPn1 procedentes de cepas humanas y SaPbov1-2 procedentes de cepas
bovinas. SaP1 y SaPbov1 son capaces de escindir y replicarse durante el
crecimiento del fago de laboratorio 80. Despus de la replicacin, ambas Ps
son eficientemente encapsidadas en cpsides ms pequeas acordes a su
tamao y transducidas con una muy alta frecuencia. Despus de ser
transferidas a otra bacteria, SaPbov1 y SaP1 se integran en sus respectivos
sitios de integracin gracias a la integrasa que codifican. Adems SaPbov1 es
replicada y transferida en una muy alta frecuencia por los fagos naturales f11 y
f147. Utilizando un anlisis mutacional hemos demostrado que la mayor parte
de los genes codificados por SaPbov1 estn implicados en su replicacin,
encapsidacin y transferencia. Adems, hemos sido capaces de complementar
los mutantes de SaPbov1 con una copia de SaP1 que presenta diversos
genes comunes a SaPbov1 pero se integra en un sitio de integracin distinto.
Teniendo en cuenta estos resultados y que la mayora de genes estn
conservados en otras islas de patogenicidad estafiloccicas incluyendo SaP3,
SaPn1 y SaPbov2, proponemos un mecanismo comn para la transmisin de
islas de patogenicidad. Por ltimo discutimos la posibilidad de que las islas de
patogenicidad estafiloccicas definan una nueva familia de elementos
genticos diseados para ser eficientemente replicados, encapsidados y
transferidos horizontalmente.
M - 424
La MA+MM +b$. e$ e$encial en la !e$&ue$ta f!ente a e$t!'$ o-idati"o en el
;ono &ateno 'an$i$a albicans%
Arana DM, Nombela C, Alonso-Monge R, Pla J.

!andida al,icans responde a diversos tipos de estrs a travs de unas rutas de
transduccin de seales, mediadas por protenas quinasas MAP, implicadas en
la adaptacin a las nuevas condiciones. En concreto, la ruta HOG est
implicada en la respuesta de la levadura frente a estrs osmtico y oxidativo.
Esta ruta responde a dichos tipos de estrs mediante la activacin final de la
MAPK Hog1. Se ha clonado *6&. que codifica la MAPKK implicada en su
activacin, como se determina por ensayos de Western Blot, mediante la
utilizacin de anticuerpos que reconocen la forma fosforilada/activa de Hog1.
La caracterizacin de mutantes p,s. revel que stos fueron ms sensibles
frente a estrs osmtico y oxidativo y que, interesantemente, desarrollaron
comportamientos diferenciales respecto a un mutantes )og1, perdiendo
viabilidad ms rpidamente que dicho mutante cuando se exponen a un estrs
oxidativo. Hog1 y Pbs2 estn tambin implicadas en el mecanismo de
adaptacin a estrs oxidativo, como se evidencia por el aumento de
susceptibilidad frente a este estrs en comparacin con la mostrada por una
cepa silvestre. Este proceso es dependiente de *6&., ya que su delecin
provoc la ausencia de fosforilacin de Hog1. Por otra parte se realizaron
estudios con una construccin Hog1-protena verde fluorescente (Hog1-GFP)
los cuales revelaron la localizacin de esta protena en el ncleo en repuesta a
estrs osmtico, un proceso dependiente tambin de *6&.. Ambas protenas
juegan tambin un papel en el control del estado de fosforilacin de otras
MAPKs (Mkc1 y Cek1) implicadas en la ruta de integridad celular y crecimiento
invasivo respectivamente. Adems se ha demostrado tambin que Pbs2 juega
un papel en la biognesis de la pared celular en este patgeno, ya que su
ausencia provoca una susceptibilidad alterada de las clulas a ciertos
compuestos que interfieren con la pared celular de la levadura.
M - 431
Recent cont!ibution$ of t;e parD 5&i$=&is7 to-in=antito-in $y$tem of
&la$mid R?
Lpez-Villarejo J
1*
, Muoz-Gmez AJ
1,2
, Hernndez-Arriaga AM
1
, Berzal-
Herranz A
2
, Lemonnier M
1
and Daz-Orejas R
1
1
(epartmento +icro,iolog-a +olecular. !entro de 1nvestigaciones 6iol;gicas E !&1!. !< ?amiro de
+ae$tu, 9. .8040 E +adrid, &pain. Memail0 villare=o%ci,.csic.es.
.
1nstituto de *arasitolog-a '
6iomedicina ^>;pe$/:e'ra^, !&1!, *arIue 7ecnol;gico de !iencias de la &alud, Avda. del
!onocimiento s<n, Armilla, E/18100 4ranada, &pain
The par( toxin-antitoxin system of plasmid R1 is an operon of two genes that
encode two small proteins, the Kis antitoxin (10 kDa) and the Kid toxin (12 kDa)
(1). The crystal structure of the dimer of the Kid toxin has been obtained (2).
Based in the detailed characterization of Kis and Kid mutants (3-6), it was
concluded that that differential interactions at the interface of the monomers of
the Kid toxin are involved in interactions with the target and with the antitoxin
and is consistent with information derived of the structure of the complex of the
MazE/MazF antitoxin-toxin (a pair homologous to Kis-Kid) (7). Comparisons of
the Kid and MazE-MazF structures in combination with the genetic analysis
suggests that the orientation of the amino-terminal hairpin loop of the toxin and
residues located in the toxins dimers at the interface of the two monomers are
relevantfor toxicity and or/ interactions with the antitoxin (2-7). The structure of
the Kid toxin revealed a clear homology with the structure of the CcdB toxin (2),
an inhibitor of E. coli DNA-gyrase (8). This suggested a common origin for these
toxins that are functionally different and that differ substantially at the amino-
acid sequence level.Kid and Kis were found to be active in eukaryotes (yeast,
embryos of Yenopus laevis and human tumour cell lines) were Kid inhibits
proliferation/viability and Kis protects (9). Following published information on the
translation dependent RNase activities of the RelE and MazF toxins (10,11) we
found that the Kid toxin and its chromosomal homologue MazF cut RNA in the
absence of ribosomes and that they have different specificity on this substrate
(12, 13). Both Kid and MazF can inhibit protein synthesis in cell extracts of
prokaryotes and eukaryotes.Using an independent approach similar results
have been obtained in M nouyes group (14, 15). The RNase activity of the
toxins is consistent with its activity in prokaryotes and eukaryotes and predicts
effects on RNA-dependent processes different to translation. This seems to be
the case for ColE1 replication, a process that is initiated with the synthesis of a
long transcript made by RNA polymerase and that is inhibited by the Kid toxin
(16, 17).We will report detailed information on these results on the current
research on the Kis-Kid toxin-antitoxin system.
1.-Bravo et al. (1987) +ol. 4en. 4enet. 210, 101-110. 2.-Hargreaves, et al. (2002) &tructure 10, 1-9.
3.-Santos-Sierra et al. (2003) *lasmid 50, 120-130. 4. Lemonnier et al. (2004C 2. 6acteriol. 186,
240-243. 5.-Santos-Sierra et al. (2002) FE+& +icro,iol. lett. 206, 115-119. 7.-Kamada et al, (2003)
+ol. !ell. 17, 875-884. 8.-Couturie et al. (1998) 7rends +icro,iol. 6, 269-275. 9.-De la Cueva-
Mndez et al. (2003) E+6D 2. 22, 246-251. 10.-Pedersen et al. (2003) !ell 112, 131-140 (2003).
11.-Christensen et al. (2003) 2. +ol. 6iol. 332, 809-819. 12.-Muoz-Gmez et al. (2004) FE6&
>etters 567, 316-320. 13.-Muoz-Gmezet al (2005) J. Bacteriol. 187, 3151-3157. 14.-Zhang et al.
(2003) +ol. !ell 12, 913-923. 15.-Zhang et al. B.004C 2. 6iol. !)em. 279, 20678-20684. 16.-Ruiz-
Echevarraet al. (1995) 2. +ol. 6iol. 247, 568-577. 17.-Potrykus, et al. (2002) +icro,iolog' 148,
2489-2495
M - 432
Recombinacin no ;omloa 5NDE37 en 'an$i$a albicans8
ca!acte!i)acin de mutante$ DD>=?D%
Chico, L.
1
, Ciudad, T.
1
, Larriba G.
1
, Andaluz, E.
1
1
(epartamento de +icro,iolog-a, Facultad de !iencias, Universidad de Extremadura, 6ada=o$.
l'c)ic%gmail.com
!andida al,icans es un hongo patgeno oportunista de gran inters por ser un
agente causante de infecciones fngicas en el ser humano. La caracterstica
ms estudiada de !. al,icans es su diformismo que se produce como
respuesta a las condiciones ambientales y se cree relacionado con la virulencia
del microorganismo. Otras caractersticas destacables de este microorganismo
son su diploida y la ausencia de ciclo sexual completo, no pudiendo generar
variabilidad gentica mediante meiosis como otros hongos. Se estima que se
adapta al estrs y a las condiciones ambientales del husped mediante
cambios genticos, aprovechando su carcter diploide. Estos cambios surgen
como consecuencia de la reparacin de roturas de la doble cadena (DSBs,
Double Strand Breaks), la cual es llevada a cabo por diferentes vas, siendo las
ms importantes, la recombinacin homloga (HR) y el mecanismo de
reparacin por unin de extremos no homlogos o NHEJ (Non Homologous
End Joining).
Con objeto de entender esta inestabilidad gentica, estamos generando
diversos mutantes mediante la disrupcin de distintos genes implicados en
ambas rutas. Estudios previos se han centrado en los genes RAD52 (implicado
en HR) y LG4 (implicado en NHEJ). En el presente trabajo, hemos
caracterizado el gen HDF-1, implicado en NHEJ.
En &acc)arom'ces cerevisiae, la protena Hdf-1 (Ku70) forma un heterodmero
con Ku80 que, a su vez, constituyen, junto con DNA-PK
CS
, un complejo proteico
que desempea un papel central dentro de la ruta NHEJ. A este complejo se le
atribuyen distintas funciones como la proteccin de los extremos de DNA frente
al ataque de exonucleasas o, bien, mantener inaccesible a la maquinaria
implicada en los procesos de replicacin y transcripcin del DNA, evitando
transferencias en la reparacin.
En !. al,icans, hemos detectado un gen, CaHDF-1, que codifica para una
protena homloga a Ku70 de &. cerevisiae. Hemos obtenido mutantes nulos
mediante la interrupcin secuencial de ambos alelos en la cepa CA4 (auxtrofo
para el gen URA3) utilizando el mtodo URA blaster. Con el mismo mtodo, se
han realizado las construcciones de mutantes nulos )d#/1<)d#/1 en fondo
lig4<lig4 y mutantes nulos rad3.<rad3. en fondo )d#/1<)d#/1. Los mutantes
generados sern sometidos a un anlisis fenotpico bsico, que incluye
capacidad de miceliacin, sensibilidad a dao al DNA (UV, MMS) y aparicin
espontnea de auxotrofas. Actualmente, estamos clonando !aH(F/1 a partir
de un fsmido utilizado en la confeccin del mapa fsico del genoma.
M - 436
Sa!A e$ un !eulado! &o$iti"o e$encial &a!a el de$a!!ollo del biofilm en S.
epi$ermi$is%
Tormo, M.A., Mart, M., Valle, J., Manna, A.C., Cheung, A.L., Lasa, . y
Penads J.R.
Universidad !ardenal Herrera/!EU E 1nstituto Valenciano de 1nvestigaciones Agrarias B1V1AC,46113
+oncada, Valencia. matormo%uc).ceu.es
&tap)'lococcus epidermidis posee la capacidad de producir biofilm, una
estructura extracelular de naturaleza polisacardica que lo protege frente al
ataque del hospedador y aumenta la resistencia a los tratamientos antibiticos.
La formacin del biofilm est asociada con la produccin de una adhesina
intercelular polisacardica, el polisacrido (PA)--poly-:-acetilglucosamina
(PNAG), producida por los productos del opern icaADBC. Recientes estudios
indican que SarA, un elemento regulador central que controla la produccin de
factores de virulencia de &tap)'lococcus aureus, es esencial para la sntesis de
PA/PNAG y el consiguiente desarrollo del biofilm en esta especie. Basndonos
en la presencia de un homlogo a sarA en &. epidermidis, decidimos estudiar si
SarA podra tambin estar envuelta en la regulacin del proceso de formacin
del biofilm en &. epidermidis. Para ello, en este trabajo examinamos el papel de
SarA en la regulacin de la expresin del opern icaADBC, produccin de
PA/PNAG y formacin del biofilm en dos aislados clnicos no relacionados
genticamente biofilm positivos de &. epidermidis, O-47 y CH845. Los mutantes
en sarA fueron completamente defectivos en la formacin del biofilm, tanto en
condiciones estticas en pocillos de poliestireno como en condiciones de flujo
continuo en microfermentadores. Experimentos de qRT-PCR mostraron que la
mutacin en el gen sarA produca un significativo decrecimiento en la
transcripcin del opern icaADBC y que dicho decrecimiento se produca de
manera independiente a caR (un regulador negativo del opern icaADBC). Por
otro lado, ensayos realizados en gel de retardo mostraron que la protena SarA
purificada presentaba una alta afinidad de unin a la regin promotora de icaA.
Consecuentemente con los resultados obtenidos, la mutacin en sarA
provocaba un significativo decrecimiento en la cantidad de PA/PNAG en la
superficie de la clula y una disminucin de la formacin del biofilm. En
resumen, SarA parece ser un regulador positivo de la transcripcin del opern
icaADBC y por tanto en su ausencia se disminuye la produccin de PA/PNAG
y la formacin del biofilm. Adicionalmente, presentamos evidencias
experimentales de que SarA podra ser un importante elemento regulador que
controle otros factores de virulencia en &. epidermidisindependientes al de
formacin del biofilm.

M - 438
B($:ueda de $e6ale$ de ;i&e!lico$ilacin en lico&!ote,na$ de le"adu!a$
Conde, R , Cueva, R, Pablo, G, Polaina, J y Larriba, G.
aUniversidad de Extremadura, (epartamento de +icro,iolog-a, F. de !iencias, 0601 6ada=o$.
h1nstituto de AgroIu-mica ' 7ecnolog-a de Alimentos, !onse=o &uperior de 1nvestigaciones
!ient-#icas, 46980 *aterna, Valencia. rconde%unex.es
Los N-oligosacridos de las glicoprotenas de &acc)arom'ces cerevisiae estn
clasificados como cortos y elongados. Los primeros estn constitudios por 13-
14 manosas, mientras que los segundos presentan un ncleo interno
prolongado con una cadena externa formada por 200-300 molculas de
manosas, un proceso conocido como hiperglicosilacin. Para identificar
determinantes de hiperglicosilacin, nosotros hemos analizado la influencia del
segundo aminocido (Xaa) del secun en este proceso usando como modelo la
exoglucanasa mayoritaria. Nuestros resultados indican que aminocidos
cargados negativamente inhiben la hiperglicosilacin, mientras que los
cargados positivamente la promueven. En base a la estructura tridimensional
de la Exg1p, proponemos que el aminocido Xaa controla la orientacin del
ncleo interno modificando su accesibilidad al complejo Manosil Polimerasa
que adicciona a-1,6 manosas. El hecho de que la posicin Xaa del segundo
secun de la exoglucanasa nativa est ocupada por el aminocido (Glu) que
influencia ms negativamente la hiperglicosilacin sugiere que ha sido
seleccionado a lo largo de la evolucin para evitar la elongacin del
oligosacrido. La comparacin de otros secuones parece sin embargo haber
sido seleccionada positivamente para favorecer el proceso.

M - 452
Metaboli$mo del D=a!abinitol en el ;ono &ateno 'an$i$a albicans8
&a&el de la D=a!abinitol de$;id!oena$a A!d?&
Gola, S. y Pla, J.
Universidad !omplutense de +adrid, Faculdad de Farmacia, (epartamento +icro,iolog-a 11, *la$a
de ?am;n ' !a=al s<n, .8040 +adrid. &usanne.4ola%#arm.ucm.es
El D-arabinitol (DA) es un poliol producido especficamente por el hongo
patgeno !. al,icans. Este metabolito est siendo utilizado como marcador de
candidiasis sistmicas. Sin embargo, su funcin en la fisiologa del propio
micoorganismo es todavia desconocido. De igual forma a otros polioles como el
glicerol, el sorbitol o el manitol, el DA podra estar implicado en la respuesta
frente al estrs osmtico u oxidativo, servir como reserva de fuente de carbono
o incluso como "vlvula de escape frente a un exceso de potencial reductor en
la clula. Nuestro trabajo se centra en la elucidacin de la funcin de este
metabolito en este hongo patgeno.
La deshidrogenasa Ard1p cataliza en una reaccin reversible la oxidacin del
DA e interviene en la produccin del poliol. Se ha construido una cepa de
!. al,icans mediante el sistema de delecin basado en la recombinasa FLP-
FRT cuya caracterizacin fenotpica respecto de la a) produccin de DA b)
sensibilidad a estrs oxidativo y c) implicacin en procesos morfogenticos
ser presentada.
NORMALIYACI1N EN MICROBIOLOGA
N-7
La me*o!a de la calidad anal,tica mediante en$ayo$ inte!com&a!ati"o$
Sanchis Solera, J., Roqus, B., Rook, N., Garca, A., Sanchez, E.
Apdo.44, .8.10/Valdemorillo B+adridC microOit%la,oratoriosmicroOit.com
Los ensayos de aptitud por intercomparacin entre laboratorios (aplicando la
Norma UNE 66543-1:199 N) son la mejor herramienta para la mejora continua
de la calidad analtica de un laboratorio para control microbiolgico industrial,
ambiental, farmacutico, cosmtico, y alimentario, siempre que cumplan con la
citada Norma y el laboratorio aplique sistemas de mejora ante los resultados
obtenidos y lo aprendido del informe de resultados del ejercicio. Siendo hace
tan slo unos aos, una mera disquisicin acadmica, se estn implantando
con fuerza, permitiendo que los laboratorios sean cada vez ms conscientes de
la necesidad de aplicacin de BPLs, Control de Puntos Crticos, Normas SO,
Mejoras validadas de stas, etc, para garantizar la fiabilidad de sus ensayos.
nformamos sobre los resultados de 7 aos de implantacin de estos ejercicios
en cientos de laboratorios espaoles, mediante los ejercicios SELA
(SELALMENTOS, SELAGUA Y SELAPARFUM), en que se cuida al
mximo tanto la preparacin, como la evaluacin/revisin de resultados, de
forma que adems de cumplir la norma, sean una herramienta ms til (y no
slo unos nmeros de un programa informtico de estadstica).
El objetivo es animar a cada vez ms laboratorios a aprovechar este tipo de
servicios de mejora, para as conseguir que el nivel de la mayora de
laboratorios pase de la actual nota media de "Notable" a la de "Sobresaliente".
Cada vez ms las Administraciones Sanitarias Pblicas exigen dichos
ejercicios a los laboratorios que quieran ser "homologados" o "autorizados". Sin
embargo quedan an una inmensa mayora de laboratorios donde no se ha
implantado todava esta herramienta de mejora de la calidad. Por diversos
motivos, desde el miedo al coste econmico (infinitamente menor a emitir
resultados poco fiables), por temor a la comparacin (temor infundado porque
la propia normativa exige total confidencialidad) o simplemente por considerar
engorrosa la participacin (cuando es todo lo contrario, pues es ms fcil
participar en un ejercicio en que se da "todo hecho" a tener que manipular
cepas, contaminar matrices y medios en el propio laboratorio, con todo el
riesgo que conlleva). Otro motivo menos reconocido es la falta de experiencia
en las validaciones y sobre todo en la evaluacin de resultados, hecho que en
un ejercicio intercomparativo como este, queda totalmente resuelto.
SELA nos est permitiendo sacar interesantes conclusiones, reiteradas en los
informes. Algunas, entre otras ms de 50, tan importantes como:
-El porcentaje de fallos analticos ronda entre un 35% en alimentos (dada la
diversidad de matrices complejas que interfieren con la flora), el 18% en aguas
y el 17% cosmticos-medicamentos (donde las validaciones son frecuentes).
-Los parmetros ms conflictivos son: la preparacin de la muestra, &. aureus
coagulasa-positivos, recuento de Enterobacterias, 6. cereus,
>.monoc'togenes, !. per#ringens, >. pneumop)ila, V. c)olerae y,
paradjicamente, E. coli.
- En aguas la bsqueda de Enterococos fecales es ms fiable como parmetro
indicador de contaminacin fecal que las clsicas de E. coli/Coliformes.
-Ciertas normas SO (p.ej. en el caso de >egionella pneumop)ilaC presentan
problemas en su aplicacin prctica y deben ser revisadas con urgencia.
:ormali$aci;n en +icro,iolog-a 40
N - 66
Ce!tificacin en la ISO IFF?8.FFF de la CECT
Ferrer ., Belloch C., Garay E.
!olecci;n EspaLola de !ultivos 7ipo. Universidad de Valencia. !ampus de 6ur=assot. 46100
6ur=assot BValenciaC. inmaculada.#errer%uv.es
En la ltima dcada la mayora de empresas, numerosos organismos pblicos
y otras organizaciones, estn adoptando diferentes sistemas de gestin de la
calidad y de control de los productos y procesos. Las colecciones de cultivos,
que proporcionan un material vivo esencial para el progreso de la ciencia
bsica y sus numerosas aplicaciones, no se pueden sustraer a la tendencia
generalizada a implantar sistemas de gestin de la calidad.
La norma UNE-EN SO 9001:2000 constituye el punto de referencia para todas
las normas. Se aplica cuando una organizacin:
1. necesita demostrar su capacidad para proporcionar de forma coherente
producto que satisfagan los requisitos del cliente y los reglamentos aplicables.
2. aspira a aumentar la satisfaccin del cliente a travs de la aplicacin eficaz
del sistema, incluidos los procesos para la mejora continua del sistema y el
aseguramiento de la conformidad con los requisitos del cliente y los
reglamentos aplicables.
Los requisitos generales de un sistema de gestin de la calidad establecen una
serie de puntos que deben seguirse y promueven la adopcin de un enfoque
basado en procesos cuando se desarrolla, implementa, y mejora la eficacia de
un sistema de gestin de la calidad (SGC), para aumentar la satisfaccin del
cliente mediante el cumplimiento de sus requisitos. Este es el caso de la CECT,
que se ha certificado en diciembre de 2004 para la norma SO 9001:2000 con
el alcance: "Preparacin, venta y distribucin de microorganismos: bacterias,
levaduras y hongos filamentosos".
Para el establecimiento del SGC, la CECT ha seguido los siguientes pasos:
a) ha identificado los procesos.
b) ha determinado la secuencia e interaccin de los mismos.
c) ha determinado los criterios y mtodos necesarios para asegurarse de que
tanto la operacin como el control de estos procesos sean eficaces.
d) se ha asegurado de la disponibilidad de recursos e informacin necesarios
para apoyar la operacin y el seguimiento de los mismos.
e) ha realizado el seguimiento, la medicin y el anlisis de los mismos.
f) ha implementado las acciones necesarias para alcanzar los resultados
planificados y la mejora continua de los mismos.
Para la consecucin de los objetivos marcados ha resultado esencial la
implicacin y el compromiso de todo el personal de la CECT, junto con la
informacin recibida de nuestros clientes. La revisin continua y el anlisis de
los datos, as como el nuevo enfoque del sistema basado en procesos
interrelacionados ha mejorado la eficiencia de la organizacin, y ha facilitado la
comunicacin.
Aunque los resultados del SGC han sido inmediatos, y las encuestas recibidas
indican que los usuarios de la CECT estn satisfechos con el servicio, la
mejora continua a todos los niveles constituye un objetivo permanente.
N - 156
4alidacin int!alabo!ato!io de m'todo$ de an#li$i$ de bacte!ia$ colifo!me$
y E. coli en aua$%
Allaert, C., Vila, G., Garrof, R., Gmez, R., Marqus, P., Sala, N.
Universitat de >leida. (epartament de 7ecnologia dTAliments. ?ovira ?oure 191, .3198 >leida.
nsala%tecal.udl.es
La Directiva Europea sobre aguas de consumo humano especifica la
metodologa para el anlisis microbiolgico de aguas. En el caso de las
bacterias coliformes y de E. coli, se estipula el mtodo de filtracin de
membrana utilizando el agar lactosado TTC Tergitol incubado a 36C (SO
9308-1). Debido a la gran variabilidad en la calidad microbiolgica de las aguas
analizadas en los laboratorios del pas, muchos laboratorios necesitan mtodos
ms adaptados a sus aguas. Para ello se han organizado estudios de
equivalencia (siguiendo la SO 17994), con la participacin de varios
laboratorios. Uno de los estudios pretende demostrar la equivalencia entre el
mtodo de la directiva con uno alternativo que emplea los medios de cultivo m-
Endo (37C) para bacterias coliformes y m-FC (44C) para E. coli. Otro de los
estudios es entre el mtodo de la directiva y el Colilert Quanti-Tray (36C)
segn NMP.
El objetivo de este trabajo es la posible validacin, en el mbito interno de
nuestro laboratorio, de los mtodos alternativos para el anlisis de bacterias
coliformes y E. coli en aguas, mediante la participacin en los ejercicios de
equivalencia antes citados.
Se han analizado 65 muestras de aguas de distintos orgenes (agua superficial
de canal, agua de efluente secundario de una depuradora y agua simulada a
partir de lentculas MR). Como pruebas de confirmacin, adems de los
criterios de mtodo (prueba de la oxidasa y produccin de indol a 44C), se han
realizado, para todas las cepas aisladas (2750) las pruebas de la -
galactosidasa y la -glucuronidasa. En el caso del estudio con el Colilert, para
la confirmacin, adems se ha estudiado la fermentacin de la lactosa con
produccin de gas a 37C y 44C, y galeras AP para todas las cepas atpicas.
El estudio estadstico se ha basado en una incertidumbre expandida (D) de
0.20 a 0.25 segn la SO 17994 y la experiencia adquirida en estos ejercicios.
A nivel intralaboratorio se ha validado el mtodo Colilert Quanti-Tray tanto para
el anlisis de bacterias coliformes como para E. coli, demostrando ser un
mtodo equivalente o mejor para la recuperacin de estas bacterias, hecho de
gran importancia para la proteccin de la salud pblica.
No se ha podido validar los medios m-Endo y m-FC para estos anlisis.
Agradecemos la colaboracin de Beln Galofr y Ferran Ribas.
MICROBIOLOGA DE +LANTAS
P - 53
Identificacin de ene$ im&licado$ en la bio$,nte$i$ de manoto-ina &o!
Pseu$omonas syringae &"% syringae% +a&el en "i!ulencia y $u&e!"i"encia
e&if,tica
Cazorla, F.M.; Prez-Garca, A.; Arrebola, E.; Vzquez, M. A.; de Vicente, A.
(epartamento de +icro,iolog-a, Facultad de !iencias, Universidad de +"laga, .901/
+"laga, EspaLa. e/mail0 adevicente%uma.es
*seudomonas s'ringae pv. syringae (*ss) es una bacteria fitopatgena y epifita
sobre un amplio rango de huspedes vegetales. La produccin de fitotoxinas
por algunos patovares de *. s'ringae se considera un factor de virulencia, ya
que su produccin aumenta la gravedad de los sntomas necrticos y/o
clorticos. La mayora de las cepas de *ss aisladas de mango producen
mangotoxina, una toxina antimetabolito que inhibe a la ornitina acetiltransferasa
(OAT). La OAT es una enzima clave implicada en la ruta de biosntesis de los
aminocidos ornitina y arginina, y de las poliaminas.
En este trabajo se han identificado y caracterizado algunos genes
putativamente implicados en la produccin de mangotoxina por la cepa *ss
UMAF0158. Para ello, se ha construido una coleccin de mutantes mediante la
insercin del minitransposn mini7n5km2. Se seleccionaron nueve mutantes
defectivos en la produccin de mangotoxina, y se obtuvieron las secuencias
flanqueantes de los genes interrumpidos por la insercin. El anlisis de dichas
secuencias interrumpidas mostr homologa con diferentes genes, como los
reguladores globales gacA y lemA, o una peptidosintetasa no ribosomal, entre
otros. Desde una genoteca de la cepa sivestre *ss UMA0158, se seleccionaron
varios clones genmicos correspondientes a los genes interrumpidos en los
mutantes defectivos en la produccin de mangotoxina. En posteriores ensayos
de complementacin, dichos clones genmicos restauraron la produccin de
mangotoxina en los mutantes, confirmando la relacin de los genes
interrumpidos con la produccin de mangotoxina. El plsmido pCG2-6, que
contiene un clon genmico de 10,5 kb, restaura la produccin de mangotoxina
por el mutante *ss UMAF0158-6F6, que presenta una insercin del
minitransposn en un gen homlogo de una peptidosintetasa no ribosomal. Se
ha secuenciado este clon genmico (6 ORFs), y el anlisis de promotores
muestra la estructura y organizacin de un posible opern con 4 ORFs, que
incluye al gen putativo de una peptidosintetasa no ribosomal.
Adems, se ha establecido el papel de la produccin de mangotoxina en la
virulencia de las cepas de *ss, mediante un modelo de inoculacin
experimental sobre foliolos de tomate. Los mutantes defectivos en la
produccin de mangotoxina mostraron una reduccin en los niveles de
sntomas necrticos inducidos, y la virulencia se restableca hasta niveles
similares a los observados con la cepa silvestre cuando los mutantes eran
complementados con sus correspondientes clones genmicos, indicando que la
produccin de esta toxina es un factor de virulencia en *ss. Finalmente, se han
llevado a cabo experimentos para establecer el posible papel de la produccin
de mangotoxina en la supervivencia epifita de *ss, mediante ensayos de
+icro,iolog-a de *lantas 414
colonizacin sobre foliolos de tomate.
P - 64
+u!ification and c;a!acte!i)ation of t;e ly$o)yme=liHe bacte!iocin $ec!eted
by .luconacetobacter $ia0otrophicus9 T;ic; in;ibit$ !oTt; of
;anthomonas albilineans%
Blanco Lpez, Y., Sacristn San Cristbal, M., Legaz Gonzlez, M.E., Vicente
Crdoba, C.
(epartment o# *lant *)'siolog', Facult' o# 6iolog', !omplutense Universit', 2os5 Antonio :ovais
Av., .8040 +adrid. E/mail0 ',lanco%,io.ucm.es
Bacteriocins are exocelular proteins, produced by bacteria and other
microorganisms, to destroy other bacteria occupying their ecological niche.
Generally, these bacteriocins exert their anti-microbial action by interfering with
the cell wall or the membrane of target organism, either by inhibiting cell wall
biosynthesis or causing pore formation, subsequently resulting in death. Many
bacteria produce and secrete this kind of proteins.
4luconaceto,acter dia$otrop)icus, N
2
-fixing and sugarcane endophyte,
produces a lysozyme-like bacteriocin in liquid medium that inhibits growth of
Yant)omonas al,ilineans (leaf scald pathogen). This apparent inhibition of
bacterial growth has been revealed as lysis of bacterial cells.

The aim of the present study concerns the purification and biochemical
characterization of the bacteriocin produces by 4. dia$otrop)icus to establish a
possible mechanism of biological control of scald leaf.

4. dia$otrop)icus, strain 166 (CM-NCA), isolated from sugarcane, was
maintained in a N-poor medium which contained 10% sucrose pH 5.5 at 30 C
and Y. al,ilineans, strain NCPPB 887, was cultured on Wilbrink medium at 37
C. +icrococcus luteus, strain CECT 241, was maintained in a manitol salt agar
medium at 30 C.
Lysozyme secretion to liquid medium and celular lysozyme production by 4.
dia$otrop)icus active against Y. al,ilineans and against +. luteus was assayed
during 12 days. Also, lysozyme purification was carried out by precipitating with
80% amonium sulfate and filtrating through a Sephadex G-100 column (74 cm x
3 cm) equilibrated with 10 mM phosphate buffer pH 6.14. The biologically active
fraction against the pathogen eluted from the Sephadex G-100 column was
prepared and resolved in PAGE/SDS and was used for an assay of sustrate
dependence and optimum pH and optimum temperature assays.
Lysozyme-like bacteriocin secreted by 4. dia$otrop)icus was capable to inhibit
the growth of Y. al,ilineans and +. luteus, being its specifity activity against the
pathogen higher than that against +. luteus. Bacteriocin was synthesized by 4.
dia$otrop)icus during the first and second days and later it was secreted into
the culture medium, reaching the highest lysozyme production in the eleventh
day of culture. This bacteriocin is a glycoprotein with a molecular mass of about
10 KDa, with an optimum pH and temperature of activity against Y. al,ilineans
of 8 and 22 C, respectively.
P - 86
Ca!acte!i)acin de ce&a$ de !;i)obia ai$lada$ de t!'bol en $uelo$ de
dife!ente$ ca!acte!,$tica$ ed#fica$ del no!oe$te de E$&a6a
Ramrez-Bahena, M.H.
1
, Valverde, A.
2
, Santos, F.
3
, Fernndez-Santos, F.
1
,
Mateos, P. F.
1
, Martnez-Molina, E.
1
, Velzquez, E.
1
1.(epartamento de +icro,iolog-a ' 4en5tica. Edi#icio (epartamental de 6iolog-a, !ampus +iguel
de Unamuno, 300 &alamanca, &pain. ..(epartamento de *roducci;n Vegetal. 1?:A/!&1!, !<
!ordel de +erinas 40/3., 3008 &alamanca, &pain. 3.(epartamento de Eda#olog-a ' Gu-mica
Agr-cola. Edi#icio (epartamental de 6iolog-a, !ampus +iguel de Unamuno, 300 &alamanca,
&pain. !orreo electr;nico0 lisina[r[,%'a)oo.com.mx
Entre las leguminosas ms abundantes del noroeste de la Pennsula brica, se
encuentran las especies del gnero 7ri#olium, que establecen simbiosis con
rhizobia de crecimiento rpido del gnero ?)i$o,ium (Jordan, 1984).
Durante el presente estudio se aislaron cepas de rhizobia a partir de ndulos
de varios ejemplares de 7ri#olium pratense provenientes de suelos con pH,
textura y perfil edfico distintos. Mediante la utilizacin de perfiles de TP-RAPD
se obtuvieron 10 grupos diferentes. Con una cepa representante de cadagrupo
se llev a cabo la secuenciacin del gen ribosmico 16S, que mostr en todos
los casos, una similitud cercana al 100% con respecto a ?)i$o,ium
leguminosarum bv. trifolii, especie que tambin ha sido identificada en ndulos
de *)aseolus vulgaris (Velazquez et al., 2001) en Castilla y Len. La identidad
de los aislados como una sola especie, refleja la proximidad de sus fondos
cromosmicos.
La caracterizacin fenotpica de todas las cepas aisladas, mostr gran
homogeneidad tanto bioqumica como fisiolgica, sin embargo, sus perfiles
plasmdicos fueron distintos, lo que supone la presencia de una gran cantidad
de informacin extracromosmica en los mismos. Adems mostraron una
capacidad simbitica muy distinta al ser inoculadas en plantas de 7ri#olium
repens.
A partir de los resultados obtenidos en este trabajo, es posible destacar la
necesidad de llevar a cabo estudios de rhizobia usando no
solamentecaractersticas cromosmicas, que son fundamentales para la
taxonoma, sino incluir adems, las codificadas en el material
extracromosmico, ya que estas ltimas, son determinantes de la capacidad
simbitica de la rhizobia, que es fundamental para la seleccin de inoculantes
microbianos eficaces.

Refe!encia$8
Jordan, D.C. 6erge'Ts +anual o# &'stematic 6acteriolog'. Vol. 1. First Ed. N. R.
Krieg and J. G. Holt Eds. Williams & Wilkins, Baltimore. (1984), p. 234
Velzquez, E., Martnez-Romero, E., Rodrguez-Navarro, D. N., Trujillo, M. E.,
Daza, A., Mateos, P. F., Martinez-Molina, E., van Berkum, P. 2001. Appl.
Environ. +icro,iol. 67: 1008-1010.
P - 118
+a&el de fenole$ en la !e$i$tencia de la ca6a de a)(ca! f!ente a Astilago
scitaminea
Santiago, R.; de Armas, R.*; Legaz, M.E.; Vicente, C.
(epartamento de Fisiolog-a Vegetal, Facultad de 6iolog-a, Universidad !omplutense. Avda. 2os5
Antonio :ovais s<n .8040, +adrid, EspaLa. M(epartamento de Fisiolog-a Vegetal, Facultad de
6iolog-a, Universidad de la Ha,ana. !< .3 e< 2 e 1. Vidado, !iudad de la Ha,ana 10400, !u,a.
rocsanti%,io.ucm.es
El carbn es una enfermedad de la caa de azcar producida por Ustilago
scitaminea. El sntoma ms caracterstico es la formacin de un soro alargado
denominado ltigo cuyo interior alberga las teliosporas. Existen distintas
variedades de caa que presentan diferentes respuestas a la enfermedad,
variedades resistentes como Mayar 55-14, y susceptibles como Barbados 42-
231. Algunos cidos fenlicos, derivados del cido benzoico y cido cinmico,
podran aumentar su contenido en plantas infectadas como respuesta a la
infeccin, consecuencia del proceso multifactorial de la resistencia frente a
patgenos.
Se trabaja con hojas de dos variedades de &acc)arum o##icinarum (L.) con
distinta sensibilidad frente a U. scitaminea, Mayar 55-14, resistente a la
infeccin fgica, y Barbados 42-231, susceptible. 20 discos de 1 cm. de
dimetro de hojas de la planta se incuban en tampn fosfato sdico 10 mM
(14.4 mL, pH 6.8) e iso-propanol (0.6mL al 4 %) durante 1 hora para
permeabilizar el tejido. Posteriormente se hacen infecciones in vitro incubando
los discos con 0.5mL de homogeneizado de micelio del hongo, y con 0.5 mL de
una fraccin hidrosoluble libre de clulas obtenidas de este micelio (elicitor);
ambos tratamientos se prolongan 6 horas a 37 C en oscuridad.
Transcurrido este tiempo, se maceran los discos y se extraen fenoles con ter
dietlico/acetato de etilo (65:35, v/v), y con metanol (80%) a 70C.
El anlisis y la cuantificacin de los cidos fenlicos se lleva a cabo mediante
HPLC, con una fase mvil compuesta por acetonitrilo y cido actico/ agua
milliQ (2:98, v/v). Se observa que tras la infeccin con el homogeneizado de
micelio, aumenta 8 veces la cantidad de cido clorognico en la planta sensible
y no se observa variacin significativa en el resto de fenoles, mientras que
disminuye 4 veces el contenido de cido p-cumrico en la planta resistente. Sin
embargo, tras la incubacin con la fraccin hidrosoluble del micelio (elicitor), se
observa que en la planta sensible disminuye 0.2 veces el cido clorognico y
0.5 el ferlico, mientras que en la variedad resistente se observa que aumenta
4 veces el cido clorognico. Tambin se observan cambios, tras la infeccin
con elicitor, en un compuesto ms polar cuya estructura no est determinada.
Este compuesto disminuye a la mitad en la planta sensible, y no vara en la
planta resistente.
Los cidos clorognico, ferlico y p-cumrico, podran definirse como factores
de resistencia frente a patgenos fngicos.
P - 119
+u!ification and &!o&e!tie$ of an unu$ual 0D+=luco$e de;yd!oena$e9
NAD+D=de&endent9 f!om ;anthomonas albilineans%
Blanch, M.; Blanco, Y.; Legaz, M.E. and Vicente, C.
>a,orator' o# *lant *)'siolo', Facult' o# 6iolog', !omplutense Universit', Av. 2os5 Antonio :ovais
s<n, .8040 +adrid, &pain. E/mail0 m,lanc)r%,io.ucm.es
Yant)omonas al,ilineans is a Gram negative, phytopathogenic bacterium which
invades sugarcane and produces leaf scald. The disease is characterized by a
fine, yellowish pencilline in parallel to the main vein in the leaf. Bacteria produce
a xanthan-like polysaccharide, which occludes both xylem and phloem and
leaves are desiccated. The xanthan-like polysaccharide produced by
Y.al,ilineans consisted of a basal tetramer that is repeated to form the
macromolecule. This basal tetrasaccharide is composed by two molecules of
glucose, one mannose rest and a final glucuronic acid. Thus, in many
occasions, the ability of Yant)omonas to produce an active UDP glucose
dehydrogenase (the enzyme that produces UDP glucuronic acid from UDPG) is
seen as a virulence factor.
The occurrence of glucuronate rest in the polysaccharide requires the action of
an UDP-glucose dehydrogenase which catalyzes the NAD
+-
dependent oxidation
of UDP-glucose to UDP-glucuronic acid. t belongs to a small group of
dehydrogenases that are able to carry out the 2-fold oxidation of an alcohol to
an acid without the release of an aldehyde as intermediate. This enzyme has a
wide range of functions. n plants, UDP-glucose dehydrogenase is the main
enzyme in the pathway of synthesis of hemicelluloses and pectins, which are
the components of newly-formed cell walls.
Y. al,ilineans produced UDPglucose dehydrogenase in culture on sucrose. This
enzyme is an unusual dehydrogenase since requires molecular oxygen to
oxidise UDPG to UDPglucuronic acid. The enzyme has been purified at
homogeneity. The value of p of the purified enzyme was 8.98, that of Km for
UDPglucose was 0.87 mM and 0.26 mM for NADPH. The enzyme was inhibited
by UDP-glucose concentrations higher than 1.3mM. N-terminal sequence was
determined as QPYNH.
P - 125
Ai$lamiento y ca!acte!i)acin de bacte!ia$ !i)o$f'!ica$ con &otencial
utili)acin en el cont!ol biolico de Bosellinia necatrix en auacate%
Cazorla, F.M.
1
; Ruiz-Romero, D.J.
1
; Pliego, C.
2
; Gonzlez-Snchez, M.A.
3
;
Prez-Garca, A.
1
; Bloemberg, G.
4
; Lugtenberg, B.J.J.
4
; Perez-Jimnez, R.
3
;
Ramos, C.
2
; de Vicente, A.
1
1
(pto. +icro,iolog-a '
.
Nrea de 4en5tica, Fac. !iencias, Univ. +"laga, .901/+"laga, EspaLaF
3
1FA*A/!1FA. !)urriana, +"laga, EspaLaF
4
1nst. 6iolog' o# >eiden, .333/A>, >eiden, 7)e
:et)erlands. e/mail0 ca$orla%uma.es
La podredumbre blanca del aguacate causada por ?osellinia necatrix es una
enfermedad importante en el rea mediterrnea. La dificultad de su control
sugiere un manejo integrado del cultivo, y en este contexto se est valorando el
uso de bacterias rizosfricas como posible estrategia de control.
En este trabajo se emplean distintas estrategias para el aislamiento y seleccin
de bacterias rizosfricas con potencial actividad en biocontrol. Una primera
estrategia est basada en el aislamiento de bacterias con actividad antagonista
in vitro frente a ?. necatrix y otros hongos fitopatgenos. Otra estrategia est
basada en el aislamiento y seleccin de rizobacterias con una alta capacidad
de colonizacin de races de aguacate, mediante enriquecimientos sucesivos
en races de plntulas de aguacate. Una ltima estrategia se basa en la
evaluacin directa de la actividad de biocontrol en un modelo experimental
?osellinia/aguacate, seleccionndose directamente aquellas cepas que
muestran proteccin frente al hongo.
Las cepas seleccionadas por las diferentes estrategias se caracterizan e
identifican y se analizan propiedades que podran estar relacionadas con el
proceso de biocontrol: actividad antagonista (sustancias antifngicas
producidas, espectro de accin), propiedades relacionadas con la colonizacin
(tipo de movilidad, presencia de regulacin por Iuorum sensing, persistencia en
rizosfera, genes relacionados con la colonizacin), y finalmente se analiza su
actividad de biocontrol sobre el modelo ?osellinia/aguacate.
Resaltar que se est caracterizando la cepa *seudomonas #luorescens (*#)
PCL1606, que se seleccion por presentar elevada actividad antifngica y
mostrar capacidad de biocontrol. El anlisis de los compuestos antifngicos
producidos, solo muestra la produccin del antibitico 2-hexil, 5-propil
resorcinol (HPR). Para estudiar el papel del HPR en el biocontrol, se han
construido mutantes 7n5. Se han aislado mutantes afectados en la actividad
antagonista, y las secuencias flanqueantes a la insercin del transposn han
sido analizadas, revelando genes putativamente implicados en la produccin de
dicho antibitico. Se estn seleccionando secuencias homlogas a los genes
interrumpidos a partir de una genoteca de la cepa *# PCL1606. Ensayos de
biocontrol muestran la reduccin parcial de los niveles de proteccin cuando se
aplican mutantes defectivos en la produccin de HPR, lo que sugiere la
participacin de este antibitico y propiedades adicionales en la actividad de
biocontrol de esta cepa. Actualmente se dispone de nuevos aislados con
actividad de biocontrol obtenidos por distintas estrategias y cuya actividad y
propiedades se estn caracterizando a nivel biolgico y gentico.
+icro,iolog-a de *lantas 4.0
P - 145
I$olation of $&ecific !ece&to!$ f!om cell Tall$ of ;anthomonas albilineans
fo! $ua!cane lyco&!otein$ T;ic; &a!tici&ate in cellula! !econition
&!oce$$e$%
Sacristn San Cristbal, M., Blanco Lpez, Y., Legaz Gonzlez, M.E., Vicente
Crdoba, C.
(epartment o# *lant *)'siolog', Facult' o# 6iolog', !omplutense Universit', 2os5 Antonio :ovais
Av., .8040 +adrid. E/mail0 msacrist%,io.ucm.es
Yant)omonas al,ilineans is the leaf scald pathogen, a bacterial-vascular
disease of sugarcane. An invading organism generally enhances the production
of released exopolysaccharides. However, a primary response of sugarcane
plants to infection seems to be the production of glycoproteins. These
glycoproteins are produced from structural polymers of cell wall of
parenchymatous cells, which are partially hydrolysed by a glycosidase to
release mainly high molecular mass glycoproteins (HMMG) to the cytosol and
later mid molecular mass glycoproteins (MMMG). Germination rate of Ustilago
scitaminea teliospores (smut disease pathogen in sugarcane) decreased about
50% after to be in contact with HMMG and MMMG. Also, sugarcane
glycoproteins were able to bind to 4luconaceto,acter dia$otrop)icus
(endophyte of sugarcane), but they didnt bind efficiently to >euconostoc
mesenteroides and ErAinia am'lovora (epiphytic bacteria on leaf surfaces of
sugarcane). Are sugarcane glycoproteins capable to discriminate between
pathogen and non-pathogen bacteria? To a best knowledge of the role of these
glycoproteins in the cell recognition between organisms and plants, specific
receptors for them in the cell wall of Y. al,ilineans have been isolated.
Y. al,ilineans, strain NCPPB 887, was cultured on Wilbrink medium at 37 C.
HMMG and MMMG was purified from juice of stalks from sugarcane. Both
glycoproteins were labelled with FTC and used for binding to bacterial cells and
desorption assays with different sugars to investigate the nature of the
carbohydrate moiety related to the binding between glycoproteins and
bacterium. Also, binding assays were followed by optical microscopy.
Both glycoproteins were linked to cyanogen bromide-actived agarose in beads
of 5.0 cm x 1.0 cm and used to retain selectively glycoproteins previously
extracted from bacterial cell walls. Total cell wall glycoproteins and that eluted
from affinity beads were analysed by capillary electrophoresis.
About 95% of MMMG and 97% of HMMG were bound by bacteria cells
according to fluorescence assays. Both glycoproteins were desorbed from
bacterial cell walls by addition of different sugars. The highest desorption was
carried out with galactitol. Cytoagglutination, indicating the binding of
glycoproteins to the cell surface, was produced when bacteria were incubated
with sugarcane glycoproteins. Bacterial receptors for MMMG and HMMG are
anionic glycoproteins with relative retention times values of 1.388 min and 1.536
min. Nine different receptors for MMMG were desorpted with sucrose and only
5 with galactitol, whereas six different receptors for HMMG were desorpted with
sucrose and 4 with galactitol. Therefore, several glycoproteins could consider
bacterial receptors for both sugarcane glycoproteins, having different number of
bound points between their proteic domain and the saccharide domain of
sugarcane glycoproteins.
P - 190
Antibio$i$ como &!inci&al mecani$mo de accin de ce&a$ de %acillus
subtilis en el biocont!ol de Po$osphaera fusca%
Romero, D., Prez-Garca A., Cazorla F.M. y de Vicente A.
(epartamento de +icro,iolog-a, Facultad de !iencias, Universidad de +"laga, +"laga .901. e/
mail0 diegor%uma.es
El odio es una enfermedad de origen fngico comn en cultivos de
cucurbitceas que puede ser causada por dos especies, 4olovinom'ces
cic)oracearum o *odosp)aera #usca, siendo ste el nico agente responsable
de la enfermedad descrito en el sur de Espaa. Las dos principales estrategias
de control de la enfermedad, el empleo de cultivares resistentes y el uso
intensivo de fungicidas, presentan limitaciones en su eficacia. En este
escenario, el control biolgico ha surgido como una interesente alternativa que
puede paliar algunas de estas deficiencias contribuyendo a mejorar el control
de la enfermedad. Puesto que *. #usca es un hongo biotrofo con desarrollo
ectoparastico, asumimos que ste podra ser eficazmente controlado por
microorganismos productores de antibiticos. En nuestro laboratorio se han
aislado 4 cepas de 6acillus su,tilis que han demostrado capacidad de reducir
el desarrollo de *. #usca en ensayos de biocontrol con clulas lavadas tanto in
vitro como en plntula. Paralelamente la capacidad inhibitoria observada para
los filtrados libres de clulas en ensayos de biocontrol in vitro contra *. #usca
sealaba a la antibiosis como principal mecanismo de accin de estas cepas.
Con el objetivo de corroborar esta hiptesis, se plante llevar a cabo la
identificacin de los posibles compuestos antifngicos producidos, as como el
anlisis de mutantes deficientes en su produccin.
Para el anlisis de las sustancias antifngicas producidas se realiz una
extraccin con n-butanol, fraccionamiento mediante cromatografa FLASH y
purificacin mediante HPLC preparativa. El empleo de tcnicas analticas como
TLC, HPLC, espectrometra de masas (MALD-TOF), anlisis de infrarrojos y el
anlisis de la composicin y secuencia de aminocidos nos permitieron
confirmar que las 4 cepas producan surfactina, fengicina y bacilomicina o
iturina, lipopptidos ya descritos en diferentes cepas de 6acillus y con
demostrada capacidad antifngica. La actividad antiodio de cada lipopptido
fue evaluada in vitro, midiendo el porcentaje de germinacin de esporas de *.
#usca y mientras que la surfactina no lo reduca significativamente, fengicina y
bacilomicina retenan la mayor capacidad inhibitoria entre un 55% y 63%
respecto a la observada para el sobrenadante (88%). La obtencin de mutantes
deficientes en la produccin de lipopptidos se est llevando a cabo mediante
mutagnesis dirigida, para lo cual hemos construido una coleccin de vectores
de integracin que portan una secuencia entre 300-2000 pb del gen diana as
como un marcador de resistencia para 6acillus. La imposibilidad para
transformar estas cepas con las tcnicas descritas nos ha llevado a poner a
punto una nueva estrategia de transformacin con la que se han obtenido
mutantes que estn siendo evaluados mediante HPLC para confirmar la no
produccin de los lipopptidos. gualmente, se llevar a cabo una
caracterizacin molecular de estos mutantes (PCR y southern blot), as como
de su actividad biolgica, mediante ensayos de biocontrol in vitro contra odio.
+icro,iolog-a de *lantas 4..
P - 223
La celula$a bacte!iana CelC. e$ c!ucial en el e$tablecimiento de la
$imbio$i$ Bhi0obium leguminosarum b"% t!ifolii=6rifolium repens
Mateos Gonzlez, P., Rodrguez Bahena, M.H., Trujillo Toledo, M., Velzquez
Prez, E. y Martnez Molina, E.
(epartamento de +icro,iolog-a ' 4en5tica. Universidad de &alamanca. 300 &alamanca. &*A1:.
p#mg%usal.es
La Fijacin Biolgica de Nitrgeno es considerada, despus de la fotosntesis,
como el proceso bioqumico ms importante en el mantenimiento de la vida en
la Tierra siendo crucial en el mantenimiento del ciclo biogeoqumico del
Nitrgeno. Las simbiosis mutualistas entre miembros de la familia Rhizobiaceae
y las plantas leguminosas suministran al suelo el 80% del nitrgeno fijado de
forma estable, incorporado a la planta como aminocidos o protenas.
La simbiosis rhizobia-leguminosa se puede calificar como rizoendosimbiosis
mutualista estricta. Esta interaccin implica el intercambio de seales
bioqumicas diversas emitidas por ambos, macro y microsimbionte, y el proceso
infectivo, muy regulado y complejo, culmina con la formacin en la planta de
una estructura altamente organizada (ndulo), que puede considerarse como
un nuevo rgano de la misma, donde la bacteria se diferenciar en su forma
endosimbionte fijadora de nitrgeno atmosfrico (bacteroide) que de esta forma
puede ser asimilado por el vegetal. El establecimiento de una
rizoendosimbiosis mutualista eficiente supone que la bacteria debe penetrar en
el pelo radical de forma que se mantenga la integridad del mismo y no se
aborte el proceso infectivo, por lo que esta etapa puede considerarse crtica
para el progreso posterior de la relacin simbitica.
Nuestro grupo de investigacin ha descrito un nuevo fenotipo en el proceso de
infeccin ?)i$o,ium-leguminosas que hemos denominado fenotipo Hot (Hole
on the tip). En ?)i$o,ium leguminosarum bv. tri#olii ANU843 la celulasa C2 es
la responsable del fenotipo Hot en el proceso de infeccin con trbol. La
celulasa C2 es una 1,4--D-endoglucanasa que se engloba dentro de la familia
8 de las glicosil hidrolasas y presenta una alta homologa con la celulasa CelC
de ?)i$o,ium leguminosarum bv. tri#olii R200, celulasa implicada en la sntesis
de celulosa.
Cuando se aplica exgenamente a las races de trbol (hospedador habitual de
?)i$o,ium leguminosarum bv. trifolii), esta celulasa bacteriana degrada la
pared celular vegetal de una forma muy localizada nicamente en el pice
isotrpico, no cristalino de la punta del pelo radical que es justo el sitio por
donde penetra la bacteria en la planta iniciando el proceso endosimbitico
fijador de nitrgeno. Por el contrario, mutantes knockout son incapaces de
hidrolizar la pared celular vegetal lo que provoca que las plantas inoculadas
con dichos mutantes presenten un fenotipo nod
+
fix
-
lo que les impide
desarrollarse al cultivarlas en ausencia de nitrgeno.
P - 288
La "iabilidad de lo$ &!o&#ulo$ de usarium $&&% en mue$t!a$ de $uelo
de$ecada$8 efecto del tiem&o de almacenamiento y del ti&o de $uelo
Rodrguez-Molina, M.C.
1
; Torres-Vila, L.M.
2
; Palo-Nez E.J.
1
1
!entro de 1nvestigaci;n Finca f>a Drdeng. !onse=er-a de 1n#raestructuras ' (esarrollo
7ecnol;gico. 0618 4uada=ira, 6ada=o$.
.
&ervicio de &anidad Vegetal. !onse=er-a de Agricultura '
+edio Am,iente. Avda. *ortugal s<n, 06800 +5rida, 6ada=o$. E/mail0
carmen.rodrigue$%=untaextremadura.net
Las especies del gnero Fusarium se encuentran ampliamente distribuidas en
el suelo. Los anlisis de suelos para caracterizar las poblaciones de Fusarium
se realizan sobre un medio selectivo, previa desecacin al aire de las muestras.
Las muestras desecadas se consideran biolgicamente estables, pero poco se
sabe sobre el tiempo que dura su estabilidad.
Para caracterizar las poblaciones de Fusarium se desecaron y analizaron
muestras de 10 suelos forestales y 11 suelos agrcolas. Los anlisis de estos
suelos se repitieron despus de 2 y 3 aos de almacenamiento de las
muestras.
Las densidades de Fusarium ms elevadas correspondieron a los forestales,
en los que F. ox'sporum fue la especie predominante. F. ox'sporum y F.
roseum fueron las especies ms abundantes en los suelos agrcolas, en los
que tambin se detectaron poblaciones considerables de F. solani.
Las densidades de las tres especies de Fusarium disminuyeron con el tiempo
de almacenamiento, pero despus de 2 y de 3 aos el nmero y el porcentaje
de propgulos viables en los suelos forestales segua siendo significativamente
ms elevado que en los agrcolas. Se discuten los posibles factores implicados
en la prdida de viabilidad de los propgulos con el tiempo de almacenamiento.

P - 325
+!e$encia de la acti"idad ?=aminociclo&!o&ano=?=ca!bo-ilato de$amina$a
en di"e!$o$ ai$lado$ de Lotus y Dorycnium spectabile
Donate Correa, J.; Prez Galdona, R. y Len Barrios, M.
(epartamento de +icro,iolog-a ' 6iolog-a !elular. Facultad de Farmacia. Universidad de >a
>aguna. Avda. Astro#-sico Fco. &"nc)e$ s<n, 3801. >a >aguna, 7eneri#e. =donate%ull.es
La enzima 1-aminociclopropano-1-carboxilato (ACC) desaminasa degrada el
ACC, el cual es el precursor del etileno en las plantas. Se ha comprobado que
la fitohormona etileno acta como inhibidor en los procesos de nodulacin (1).
En este sentido, la presencia en los rizobios de estrategias capaces de reducir
los niveles de etileno en la planta reduciran el efecto negativo de esta hormona
en la nodulacin.
De muestras de suelo de la rizosfera de diferentes plantas se han aislado
diversas cepas de pseudomonas capaces de utilizar ACC como nica fuente de
nitrgeno y de intervenir en los niveles de produccin de etileno en
leguminosas (2). Sin embargo, existen pocos estudios sobre esta actividad en
los rizobios.
Los rizobios utilizados en este estudio se obtuvieron de ndulos de plantas de
>otus y (or'cnium specta,ile.
En una primera aproximacin se estudi la capacidad que presentaron cepas
inducidas para crecer en medio mnimo DF en el que la nica fuente de
nitrgeno fue ACC a la concentracin 3mM (3). Se obtuvo as un alto
porcentaje de cepas con esta capacidad. Posteriormente, mediante uso de
cebadores especficos para el gen que codifica para esta enzima (acd&) se
obtuvo por PCR un fragmento de unas 675 pb del gen a partir de las cepas que
fueron capaces de crecer en el medio anteriormente sealado (en algunos
casos no fue posible amplificar la secuencia esperada). La comparacin de la
secuencia obtenida del amplificado con las bases de datos confirm que se
trataba del gen acd& y la existencia, en general, de una alta homologa entre
las secuencias de las diferentes cepas. La elaboracin de un rbol filogentico
mostr que para el caso de las cepas de +esor)i$o,ium aisladas (or'cnium
estas secuencias son muy prximas a las del gen homlogo en ?)i$o,ium
leguminosarum bv. viciae, y curiosamente ms alejadas del mismo gen de
+esor)i$o,ium loti MAFF303099.

(1) Ma, W; Penrose, D.M. y Glick, B.R. Can J Microbiol. (2002) 48(11):947-54.
(2) Donate-Correa, J.; Len-Barrios, M y Prez- Galdona, R. Plant and Soil
(2004) 266: 261-272,
(3) Glick, B.R.; Karaturovic, D.M. y Newell, P.C. Can. J. Microbiol. (1995) 41:
533-536
P - 326
Di"e!$idad de !i)obio$ ai$lado$ de e$&ecie$ de Lotus end'mica$ de la$
I$la$ Cana!ia$%
Donate Correa, J.
1
; Prez Galdona, R.
1
; del Arco Aguilar, M.
2
; Garca
Casanova, J.
3
y Len Barrios, M.
1
1
(epartamento de +icro,iolog-a ' 6iolog-a !elular.
.
(epartamento de 6iolog-a Vegetal B6ot"nicaC.
Facultad de Farmacia. Universidad de >a >aguna. Avda. Astro#-sico Fco. &"nc)e$ s<n, 3801. >a
>aguna. 7eneri#e.
3
&ervicio de 1mpacto Am,iental. Viceconse=er-a de +edio Am,iente del 4o,ierno
de !anarias. mileon,a%ull.es
El gnero >otus en Canarias es un gnero ampliamente representado que
incluye numerosas especies endmicas, algunas de cuales tienen un inters
adicional porque se trata de especies que se encuentran en la actualidad en
peligro de extincin y/o viven en ambientes salinos, tal es el caso de >.
maculatus, >. callis/viridis, >. lancerottensis, >. arinagensis o >. OunOelii.
Los rizobios usados en este estudio se obtuvieron de ndulos de plantas
recolectadas en sus zonas originales o, cuando no fue posible, debido al
reducido nmero de ejemplares de la poblacin, se germinaron semillas de la
especie de inters y se emplearon como plantas-trampa sobre suelos donde
crecan las poblaciones objeto de estudio.
Los aislados obtenidos se estudiaron mediante una aproximacin polifsica que
incluy datos genticos y fenotpicos. El anlisis de huellas moleculares
obtenidas por rep-PCR (REP y ERC), fue utilizado para detectar la diversidad
gentica de los aislados y eliminacin de redundantes. Estos anlisis mostraron
una enorme diversidad, recuperndose en pocas ocasiones la misma cepa,
que siempre proceda de rizobios aislados de un mismo lugar y, generalmente,
de distintos ndulos de una misma planta. La caracterizacin taxonmica de los
aislados y sus relaciones filogenticas se establecieron mediante los perfiles de
restriccin del amplificado del ADNr 16S (ARDRA) y secuenciacin del gen
ADNr 16S. Estos datos pusieron de manifiesto que las especies de >otus
estudiadas estn noduladas por al menos tres gneros distintos de rizobios,
+esor)i$o,ium, &inor)i$o,ium y ?)i$o,ium; encontrndose que una misma
especie de >otus puede estar nodulada por rizobios pertenecientes a gneros
distintos.
Las relaciones simbiticas de los aislados fueron estimadas mediante tests de
infectividad y anlisis de restriccin del gen nod!. La mayora de los aislados
nodularon en plantas de >otus corniculatus (desgraciadamente no tuvimos
disponibilidad para estos ensayos de semillas de los >otus endmicos de los
cuales fueron originalmente aisladas), uno nodul en alfalfa y ninguno, como
caba esperar, nodul la soja (4l'cine max var Osumi). El dendrograma de la
restriccin del gen nod! mostr buena correlacin con las propiedades
infectivas.
La caracterizacin fenotpica (asimilacin de carbohidratos y ensayos de
resistencia a la salinidad) de los aislados demostr asimismo un elevado grado
de diversidad, aunque no se encontr correlacin con los datos genticos.
P - 369
Ca!acte!i)acin de !i)obio$ ai$lado$ de la leumino$a end'mica de la$
I$la$ Cana!ia$ Dorycnium spectabile.
Donate Correa, J.
1
; Prez Galdona, R.
1
; del Arco Aguilar, M.
2
; Garca
Casanova, J.
3
y Len Barrios, M.
1
1
(epartamento de +icro,iolog-a ' 6iolog-a !elular.
.
(epartamento de 6iolog-a Vegetal B6ot"nicaC.
Facultad de Farmacia. Universidad de >a >aguna. Avda. Astro#-sico Fco. &"nc)e$ s<n, 3801. >a
>aguna, EspaLa.
3
&ervicio de 1mpacto Am,iental. Viceconse=er-a de +edio Am,iente. 4o,ierno de
!anarias. rpere$ga%ull.es
El gnero (or'cnium presenta nicamente tres especies en las slas Canarias,
de las cuales (. especta,ile se encuentra en grave peligro de extincin y est,
por ello, incluida en programas de conservacin a nivel autonmico, nacional y
europeo.
Las plantas utilizadas en este estudio fueron recolectadas en dos zonas de la
isla de Tenerife en las que existen poblaciones establecidas de forma natural.
Las cepas obtenidas de los ndulos de esta planta se sometieron a
caracterizacin fenotpica, gentica y simbitica. En primer lugar, se realiz un
genotipado mediante tcnicas de rep-PCR (REP y ERC) que pusieron de
manifiesto la variabilidad gentica de los aislados y sirvieron para eliminar las
cepas redundantes. Estos resultados mostraron que la diversidad gentica fue
grande, y slo en dos ocasiones se aislaron cepas redundantes que siempre
pertenecieron a aislados de distintos ndulos de una misma planta.
La caracterizacin taxonmica y filogentica mediante perfiles PCR-RFLP del
ADNr 16S, mostraron que los rizobios que nodulan (. specta,ile se agrupan
con las especies del gnero +esor)i$o,ium, aunque existen varios subgrupos
que se aproximan a diferentes especies del gnero. Los datos de la
secuenciacin casi completa del gen ADNr 16S de algunos representantes de
diferentes grupos de restriccin RFLP-16S mostraron a +esor)i$o,ium )ua)uii
y +. t)iansanense como las especies ms prximas. Los anlisis de restriccin
del gen nod!, mostraron que, con una excepcin, independientemente del
grupo RFLP-16S los aislados formaron un agrupamiento con alta homologa.
Las pruebas fenotpicas (asimilacin de carbohidratos, crecimiento a distintas
temperaturas y pHs y resistencia a la salinidad y a diversos antibiticos),
mostraron un diversidad que no correlacion con los datos genticos.
+icro,iolog-a de *lantas 4.
P - 396
An#li$i$ en'tico y &!otemico de ene$ cont!olado$ &o! !eulado!e$ de
ti&o >u! en la bacte!ia endo$imbitica de leumino$a$ Sinorhi0obium
meliloti
Brito, B.
1
, Prieto, R.
1
, mperial, J.
2
, Palacios, J.M.
1
, y Ruiz-Argeso, T.
1
1
>a,oratorio de +icro,iolog-a, E. 7. &. 1ngenieros Agr;nomos, Universidad *olit5cnica de +adrid '
.
!. &. 1. !. !iudad Universitaria s<n, .8040 +adrid. ,elen.,rito%upm.es
El proceso de fijacin biolgica de nitrgeno que se establece en la simbiosis
?)i$o,ium-leguminosa presenta importantes beneficios a nivel econmico y
medioambiental por el ahorro de fertilizantes que supone. Mltiples factores
estn implicados en los procesos de colonizacin bacteriana de la rizosfera, en
el establecimiento de la simbiosis y en la eficiencia del proceso de fijacin de
nitrgeno que se realiza en los ndulos de las leguminosas (Maier and Triplett,
1996; Gage, 2004). El Fe puede jugar un papel importante para la
supervivencia bacteriana en medios con limitacin de nutrientes, como son
algunos tipos de suelos, o cuando las necesidades de Fe son muy elevadas,
como es el caso de la sntesis de la nitrogenasa en el proceso de fijacin de
nitrgeno. El anlisis de la secuencia del genoma de la bacteria endosimbitica
de leguminosas &inor)i$o,ium meliloti ha revelado la presencia de varios
sistemas implicados en la biosntesis de siderforos, sistemas de sealizacin
y varios reguladores homlogos a Fur, lo que sugiere la existencia de una
regulacin gnica compleja, como as demuestran trabajos recientes realizados
con uno de los reguladores de tipo Fur (Chao et al. 2004; Platero et al. 2004).
En este trabajo se aborda, mediante una aproximacin gentica y protemica,
el anlisis de sistemas gnicos dependientes de reguladores tipo Fur. Para ello
se ha llevado a cabo la caracterizacin del proteoma de mutantes en los
reguladores de tipo Fur en condiciones de suficiencia y carencia en Fe.

Maier, R.J. and Triplett, E.W. (1996). Crit. Rev. Plant Sci. 15, 191-234.
Gage, D. J. (2004). Microbiol. Mol. Biol. Rew. 68(2): 280-300.
Chao, T. C., Becker, A., Buhrmaster, J., Phler, A., and Weidner, S. (2004). J.
Bacteriol. 186(11): 3609-3620.
Platero, R., Peixoto, L., O'Brian, M.R., and Fabiano, E. (2004). Appl. Environ.
Microbiol. 70(7):4349-4355.

+ROTISTOLOGA
R - 11
Inte!ado!e$ de la bioene!'tica de metaboli$mo y cambio de fa$e en
&!oti$ta$ foto$int'tico$8 modelo$ &a!a &lanta$
Valverde, F., Drake, R., Herrera, R. y Serrano, A.
1nstituto de 6ioIu-mica Vegetal ' Fotos-ntesis, U&E/!&1!. Av. Am5rico Vespucio 49. 4109./&evilla.
Los procesos bioenergticos fundamentales se han conservado en toda la
escala evolutiva. En plantasy protistas fotosintticos su regulacin es compleja
porque las caractersticas morfofisiolgicas de los organismos vegetales les
obligan a responder de manera muy coordinada a las seales externas. As,
responden finamente a la presencia de luz, tanto a su cantidad y calidad
(fotorreceptores) como a la longitud del da y al ritmo circadiano. gualmente, la
presencia de azcares produce una alteracin del metabolismo celular y el
desarrollo muy generalizado en vegetales (1). Este complejo sistema de
respuesta gnica necesita puntos de control global para asegurar la
coordinacin y optimizacin de la respuesta a las seales externas, los
llamados integradores o protenas cuya modulacin sirve a su vez de control
para numerosos procesos celulares. La secuenciacin de los genomas de
plantas y algas ha mostrado que algunos de estos integradores potenciales se
encuentran altamente conservados en la evolucin.
Nuestro grupo est estudiando la modulacin conjunta de estos integradores
en sistemas modelo como el protista !)lam'domonas rein)ardtii y la planta
Ara,idopsis t)aliana. El estudio comparado de las rutas en protistas y plantas
permite extraer informacin de su evolucin y sobre sus componentes bsicos,
deshilando la trama que esconde las vas regulatorias de los eucariotas
complejos. Hemos centrado nuestro inters en dos procesos: 1- Los cambios
que ocurren en la bioenergtica durante la transicin de fase mediada por el
gen !D:&7A:& (y su ortlogo en algas verdes) comparando la floracin con la
reproduccin vegetativa en microalgas (2). 2- La implicacin de un regulador
global especfico tipo (DF en la ruta principal de asimilacin de nitrgeno en
vegetales (3). En este caso cobra especial inters identificar mediante un
estudio comparado los genes ortlogos de !. rein)ardtii y Dr'$a sativa, donde
la alta redundancia gnica (ms de treinta homlogos) dificulta encontrar el gen
que cumple dicha funcin.
La modificacin de estos reguladores es la clave de la optimizacin de los
procesos bioenergticos en vegetales con vistas a una mejora gentica, ms
que la alteracin de las caractersticas de las enzimas de las rutas centrales
que la componen, aproximacin que ha resultado infructuosa en el pasado.
Nuestra lnea de investigacin plantea por tanto elucidar los mecanismos
bsicos que controlan la bioenergtica vegetal con el nimo de identificar los
integradores de las seales externas que modulan su funcionamiento. Su
alteracin por tcnicas de ingeniera gentica tiene el potencial de generar
lneas transgnicas con caractersticas mejoradas para la produccin agraria e
industrial.
Refs.
1. F. Valverde, J.M. Ortega, M. Losada y A. Serrano. 2005. *lanta (DO:10.107/s00425-
005-1501-0).
2. F. Valverde, A. Mouradov, W.Soppe, D. Ravenscroft, A. Samach,G. Coupland. 2004.
&cience 303:1003-1006.
3. S Yanagisawa, A Akiyama, H Kisaska, H Uchimiya, T Miwa. 2004. *roc. :atl. Acad.
&ci. U&A 2004, 101, 7833-8.
*rotistolog-a 431
R - 35
Q>ito:uelatina$ en ciliado$R8 Ai$lamiento9 clonacin9 ca!acte!i)acin y
an#li$i$ de la e-&!e$in de un en :ue codifica una fito:uelatin=$inta$a
en 6etrahymena thermophila%
Amaro Torres, F., Martn-Gonzlez, A. y Gutirrez J.C.
(epartamento de +icro,iolog-a/111. Facultad de 6iolog-a. !<. 2os5 Antonio :ovais, .. Universidad
!omplutense BU!+C. .8040 +adrid. E/mail0 =uancar%,io.ucm.es
La fitoquelatin-sintasa (FQS) (g - glutamilcisteinil-transferasa ; EC: 2.3.2.15) es
la enzima encargada de la biosntesisde fitoquelatinas (FQs) (g - Glu-Cys)n-
Xaa, donde n = 11-12. Este oligopptido, junto con el glutatin (GSH), sustrato
de la FQS, y las metalotioneinas (MTs), son las principales molculas
involucradas en la destoxificacin de metales pesados (MPs). Se han
detectado FQs en muchas plantas, algunos hongos, en la levadura
&c)i$osacc)arom'ces pom,e y en el nematodo !aenor)a,ditis elegans. En
todos ellos se ha identificado, igualmente, un gen codificante de FQS.
Usando cebadores diseados a partir de regiones conservadas de secuencias
de FQS de diversos organismos, pudimos amplificar por PCR un fragmento, a
partir de ADN genmico del ciliado 7. t)ermop)ila (cepa SB1969), que
presentaba homologa con FQS de otros organismos. A partir de este
fragmento, y aprovechando que el genoma-macronuclear de este ciliado est
completamente secuenciado, identificamos la seccin del genoma secuenciado
en donde se encuentra dicho gen. Usando los cebadores apropiados se ha
podido clonar y secuenciar el gen completo. Este gen tiene una longitud de
2.615 b y presenta 3 intrones (129 , 79y 1.069 b , con % de A+T ; 83, 92 y 84%,
respectivamente). La regin codificante completa tiene una longitud de 1.341b,
y origina una protena de 446 aa con una masa molecular estimada de 52,4
Kda (dentro del rango 45-55 Kda que presentan todas las FQS eucariotas
conocidas). Presenta una identidad del 41% con la FQS de !aenor)a,ditis, un
39% con la de &c)i$osacc)arom'ces y la FQS1 de Ara,idopsis t)aliana, y un
38% con la de 6rassica =uncea. El extremo N-terminal de la protena es el que
tiene el centro cataltico, y es el ms conservado; la FQS de 7etra)'mena
presenta, en este extremo, los tres residuos; Cys, His y Asp, que en todas las
FQS estn muy conservados y forman la triada cataltica del centro reactivo.
Por RT-PCR, hemos aislado el ADNc correspondiente a este gen, el cual se
expresa constitutivamente en poblaciones control del ciliado y en poblaciones
expuestas a Cd
2+
(24 h). Al igual que otras FQS, no parece existir una sobre-
expresin del gen en presencia del MP, al contrario de lo que sucede con MTs
de este ciliado. An no hemos podido detectar FQs (el producto de esta
enzima) en 7. t)ermop)ila, sin embargo la expresin de este gen hace posible
(siempre que la FQS se comporte como tal) la presencia de FQs en este
microorganismo. Esta es la primera vez que se detecta una FQS en un
protozoo ciliado (organismo con biologa de tipo animal), e, igualmente, es la
primera vez que surge la posibilidad de existencia de FQs en ciliados.
(Financiado por el proyecto BOS2002-01067, +D, MEC ).
*rotistolog-a 43.
R - 134
Cont!ibucin de ciliado$ de e$tacione$ de&u!ado!a$ de aua$ !e$iduale$
a la biofloculacin de &a!t,cula$
Arregui, L., Linares, M., Sanz, L. y Serrano, S.
(epartamento de +icro,iolog-a 111. Facultad de 6iolog-a. Universidad !omplutense de +adrid.
Los protozoos ciliados constituyen una de las comunidades ms importantes en
los reactores biolgicos de las plantas depuradoras de aguas residuales no
slo por su capacidad de depredacin sobre las bacterias, sino tambin porque
contribuyen al proceso de formacin de flculos o bioagregados (unidades
funcionales en la eliminacin de materia orgnica y contaminantes). Para
estudiar la relacin de los ciliados con el proceso de biofloculacin se utilizaron
cultivos de tres gneros de ciliados caractersticos de estaciones depuradoras,
que se incubaron en agitacin y en presencia de bolas de latex para facilitar la
formacin de agregados. Tanto en los cultivos axnicos como monoxnicos se
observ el desarrollo de agregados, si bien stos mostraron distinto tamao y
morfologa: en cultivos axnicos de 7etra)'mena sp. los flculos eran ms
pequeos y menos compactos que aquellos formados en cultivos monoxnicos
de Euplotes sp, y 6lep)arisma sp., en los cuales se observaron flculos muy
poco numerosos pero con mayor tamao y compactacin. Este resultado indica
que aunque las bacterias son importantes en la formacin de agregados los
ciliados incrementan significativamente la eficacia del proceso.
Para poner de manifiesto la naturaleza de los polmeros presentes en los
cultivos se emplearon distintas tcnicas de tincin especfica (colorantes y
lectinas comerciales acopladas a fluorocromos). Una distribucin heterognea
de material polimrico (carbohidratos, protenas, cidos nucleicos) se visualiz
alrededor de las bolas de latex que se mantenan adheridas unas a otras. Esta
matriz no se observ en las suspensiones control de bolas de latex, mientras
que en los controles con bolas de latex y bacterias s se detect pero con un
menor desarrollo.
Por otra parte, el tratamiento de las clulas con un agente inductor de la
exocitosis provoc la secrecin de cpsulas en 7etra)'mena sp., o de finas
capas de material polimrico distribuido por la superficie celular en
6lep)arisma sp. y Euplotes sp., ms patente en la zona oral.
En conclusin, tanto en cultivos del ciliado reptante asociado a la superficie del
flculo, como en los de las especies libre-nadadoras (a las que
tradicionalmente no se les atribuye ninguna asociacin con el flculo), se
detectaron en el medio sustancias polimricas que contribuyeron a la adhesin
de los agregados.
Este trabajo ha sido financiado por Ministerio de Ciencia y Tecnologa,
proyecto BOS2002-01042
*rotistolog-a 433
R - 191
Efecto$ de dife!ente$ antibitico$ en la mic!ofauna de fano$ acti"o$
Lpez-Doval, J.C.
1
; Salvad, H.
2
1
(epartament dTEcologia, Universitat de 6arcelona Avda (iagonal 643, 080.8 6arcelona.
=clope$doval%u,.edu.
.
(epartament de 6iolog-a Animal BUnitat 1nverte,ratsC, Universitat de
6arcelona, Avda (iagonal 643, 080.8 6arcelona.
Con el objetivo de estudiar la dinmica del componente bitico de los fangos
activos, se intent eliminar selectivamente microorganismos (bacterias,
protistas y metazoos) de este tipo de medios; para ello se hizo uso de
antibiticos de accin antiprocariota (Penicilina G, Polimixina B, Estreptomicina
sulfato, Kanamicina y Neomicina) y antieucariota (Colquicina y Ciclohexamida).
Estos antibiticos fueron usados en diferentes combinaciones y a diferentes
dosis, empezando por las prescritas en la bibliografa y superiores.
El uso de antibiticos antiprocariotas para disminuir la densidad bacteriana en
los cultivos de fangos activos demostr tener efectos txicos agudos sobre la
microfauna estudiada (el protozoo ciliado Euplotes muscorum y el rotfero
>ecane tenuiseta) y se observ crecimiento bacteriano en placa. Por otra parte
el uso de antibiticos antieucariotas no dio el resultado deseado, puesto que no
se observ la eliminacin de las poblaciones de organismos eucariotas (los
protozoos ciliados Vorticella convallaria, Euplotes muscorum y Uronema
nigricans; y el rotfero >. tenuiseta).
Los efectos txicos de los antibiticos antiprocariotas en organismos eucariotas
han sido ampliamente estudiados, si bien nunca se haban constatado efectos
en protozoos y rotferos. Respecto a la resistencia mostrada a la Colquicina y la
Ciclohexamida por los microorganismos eucariotas estudiados, tal vez esta sea
facilitada por la propia matriz del fango (bacterias y agregados de materia
orgnica e inorgnica), que puede secuestrar estas sustancias y hacerla menos
disponible a los organismos diana, o por las propias estrategias vitales de la
microfauna estudiada (presencia de huevos en los rotferos).
El uso de antibiticos no se mostr adecuado para nuestros propsitos. En
cambio si tenemos en cuenta el importante papel de los microorganismos
eucariotas en los procesos de fangos activos, y la presencia de medicamentos
de uso humano y veterinario en las aguas residuales urbanas, estas
observaciones ganan valor puesto que reflejan los posibles efectos de estas
sustancias en el funcionamiento de los sistemas de depuracin de aguas
residuales.

*rotistolog-a 434
R - 307
Re$&ue$ta$ de c!ecimiento en ciliado$ bacte!,"o!o$ de fano$ acti"o$ al
contenido C8N bacte!iano
Prez-Uz, B., Cabanillas, B.; Lpez-Montero, N.; Guinea, A.
(pto. +icro,iolog-a 111. Facultad !iencias 6iol;gicas. U!+. +adrid. pere$u$%,io.ucm.es
Los ciliados implicados en los procesos biolgicos del tratamiento de aguas
residuales son principalmente filtradores bactervoros. Estos microorganismos
llevan a cabo una depredacin selectiva, que viene determinada por el tipo de
estructuras orales que presentan y por el tamao y concentracin de la presa.
Algunos trabajos sugieren que adems del tamao, la geometra de la presa o
algn mecanismo de deteccin de su capacidad nutritiva por el ciliado podran
ser factores importantes, no slo de la selectividad, sino tambin de la
efectividad en la transmisin de materia a eslabones superiores de la cadena
trfica. Sin embargo, muy pocos estudios se han llevado a cabo sobre el efecto
que la calidad nutricional de las presas, en este caso las bacterias, tienen sobre
la selectividad de los ciliados. As, el objetivo de este trabajo ha sido determinar
el efecto de la calidad nutricional de distintas bacterias, en trminos de la ratio
C:N de biomasa bacteriana, en el crecimiento de los ciliados. Adems, se
pretende evaluar si esta diversidad nutricional se podra asociar a patrones
especficos de selectividad de los ciliados, depredadores primarios en el
ecosistema de fangos activos.
Los ciliados utilizados en este estudio fueron aislados del reactor biolgico de
plantas de tratamiento de fangos activos (Canal de sabel ). Se obtuvieron
cultivos clonales por micromanipulacin y se realizaron cultivos monoxenicos
en suspensiones bacterianas tpicas de aguas residuales: Entero,acter
aerogenes, Esc)eric)ia coli, 6acillus cereus y Enterococcus #aecalis (obtenidas
de la Coleccin Espaola de Cultivos Tipo-CECT) a una concentracin inicial
de 2.77x10
7
bacterias ml
-1
. Los anlisis C y N se llevaron a cabo con un
microanalizador elemental (CA-UCM) sobre bacterias cultivadas en las mismas
condiciones en las que eran suministradas en los experimentos de
depredacin.
La tasas C:N de las distintas bacterias analizadas mostraron diferencias,
siendo E. aerogenes la cepa que present menor ndice, es decir, la de mayor
calidad nutricional y E. #aecalis la de mayor ndice y, por lo tanto, menor valor
nutricional. El volumen de las bacterias estuvo inversamente correlacionado
con su ratio C:N, con excepcin de 6. cereus que, aunque present el mayor
volumen, su valor nutricional fue superior al de E. #aecalis. Nuestros resultados
indican que la captura de la presa esta determinada por su tamao y
morfologa, mientras que el crecimiento de la poblacin de ciliados, est
determinado por la calidad nutritiva de las bacterias.
Este trabajo ha sido financiado por el MCYT Proyecto BOS2002-01042
*rotistolog-a 433
R - 311
Identificacin de ene$ :ue codifican &!ote,na$ del metaboli$mo de
&olifo$fato$ ino!#nico$ en &!oti$ta$ foto$int'tico$
Albi-Rodrguez T. y Serrano A.
1nstituto de 6ioIu-mica Vegetal ' Fotos-ntesis, !&1!/Universidad de &evilla, 4109.. &evilla
BEspaLaC. aurelio%cica.es
Los polifosfatos inorgnicos, poliP, son polmeros lineales de residuos de
ortofosfato unidos entre s por enlaces pirofosfato (P-O-P) ricos en energa. Se
encuentran en organismos muy diversos (desde bacterias a metazoos y
plantas) donde pueden llegar a ser abundantes. Se emplean como reserva de
fosfato y como sustitutos del ATP en reacciones de fosforilacin; se ha
descrito,adems, su participacin en la tolerancia a diversos tipos de estrs.
Varias protenas enzimticas intervienen en el metabolismo de los poliPs, entre
ellas: la exopolifosfatasa (PPX, EC 3.6.1.11), que los hidroliza secuencial e
irreversiblemente por el enlace POP terminal a ortofosfato, y la polifosfato
quinasa (PPK, EC 2.7.4.1), que sintetiza poliP reversiblemente a partir de
ATP.En esta comunicacin presentamos la identificacin y caracterizacin por
vez primera de genes que codifican protenas PPX y PPK en protistas
fotosintticos, tales como algas rojas (!'anidiosc)'$on merolae, *orp)'ra
'e$oensis) y microalgas clorofceas (Volvox carteri). La caracterizacin
bioqumica preliminar de dichas actividades enzimticas en las microalgas
!)lam'domonas rein)ardtii, !)lorella #usca (clorofceas) y !'anidium
caldarium (rodofcea), mostr en todos los casos una absoluta dependencia de
cationes divalentes (niveles mximos con Mg
2+
y nulos en presencia de EDTA),
valores de pH ptimo alcalinos (8-9) y actividades mximas a 40-50 C. Sin
embargo, en la microalga !. rei)ardtii el nico EST que hemos encontrado en
bases de datos atribuible a una PPX es probablemente falso (de origen
bacteriano), y slo se han identificado hasta el momento en esta microalga
ortlogos de protenas vacuolares de levadura impicadas en el metabolismo de
polifosfatos en este compartimento celular. El estudio comparativo de las
secuencias de aminocidos deducidas de los genes **Y y **P encontrados
en protistas indica que los ortlogos de microalgas fotosintticas cloro- y
rodofceas son similares a sus ortlogos procariticos de enterobacterias y
cianobacterias, y concretamente sus PPXs pertenecen a la familia de
exopolifosfatasas con el dominio estructural Ppx-GppA. En esto se diferencian
de las exopolifosfatasas halladas en grupos de protistas no fotosintticos como
tripanosomtidos y ciliados, que pertenecen a otra familia (PPX1) con un
motivo estructural de fosfohidrolasas distinto denominado DHH-DHA2, hasta
ahora slo encontrado en poliPasas eucariticas. En resumen, dos familias de
exopolifosfatasas diferentes en estructura y filogenia molecular se han
encontrado en protistas, de las que la de tipo Ppx-GppA se ha conservado en
todo el linaje evolutivo fotosinttico.
Trabajo financiado por los Proyectos BMC2001-563 y BFU2004-843 (MCYT y
MEC) y PA CV-261 (Junta de Andaluca).
*rotistolog-a 436
TA<ONOMA9 >ILOGENIA 2 BIODI4ERSIDAD
T - 46
De$c!i&cin de nue"a$ ce&a$ ;alfila$ mode!ada$ &!oducto!a$ de
e-o&oli$ac#!ido y con ca&acidad de$nit!ificante%
Gonzlez-Domenech, C.M., Martnez-Checa, F., Quesada E., Del Moral, A.,
Bjar,V.
4rupo Exopolisac"ridos +icro,ianos B!V188C. (epartamento de +icro,iolog-a. Facultad de
Farmacia. Universidad de 4ranada. !ampus Universitario de !artu=a s<n 1801. 4ranada.
cmgodo%correo.ugr.es
La desnitrificacin es el principal mecanismo por el que el nitrgeno fijado del
suelo y de los medios acuticos vuelve a la atmsfera (Conrad, 1996; Philippot,
2002). La importancia de este proceso queda reflejada en las numerosas
revisiones que sobre el tema han aparecido en los ltimos aos (Bothe y col.,
2000; Petri e mhoff, 2000; Richardson, 2001; Philippot, 2002; Cabello y col.,
2004; Einsle y col., 2004). Sin embargo, existe poca informacin acerca del
proceso de desnitrificacin, y en general, sobre el ciclo del nitrgeno en suelos
hipersalinos, si bien se considera que las distintas actividades del ciclo pueden
verse muy influenciadas por la elevada concentracin salina (Hochstein y col.
1985; Zahran, 1997; Sorokin y col., 2003).
Procedentes de hbitats muy diversos, tanto del territorio nacional como de
Sudamrica, Asia y frica, se seleccionaron de nuestra coleccin de cultivo
quince cepas halfilas moderadas,que compartan las propiedades de producir
exopolisacridoy de desnitrificar.Se trata de bacilos Gram negativos, catalasa
positivos y quimiohetertrofos. Poseen carcter eurihalino, creciendo en un
amplio rango de concentraciones salinas, si bien su ptimo de crecimiento se
sita a valores intermedios. Aunque presentan un metabolismo respiratorio, en
condiciones de anaerobiosis o microaerobiosis pueden usar el nitrato y nitrito
como ltimos aceptores de electrones.
Taxonmicamente todas ellas se relacionan con la familia Halomonadaceae,
con excepcin de una cepa, aislada de las salinas de La Malah (Granada),
que aparece ms prxima a 1diomarinaceae.
La descripcin de estas bacterias halfilas y desnitrificantes resulta muy
interesante por el conocimiento que del proceso de desnitrificacin en
ambientes hipersalinospuede derivarse de ellas.

-Bothe H., Jost G., Schloter M., Ward B.B., Witzel K. 2000. FEMS Microbiol
Rev.
-Cabello P., Roldan M.D., Moreno-Vivian C.2004. Microbiology.
-Conrad R. 1996. Microbiol Rev.
-Einsle O., Kroneck P.M. 2004. Biol Chem..
-Hochstein L.., Tomlinson G.A. 1985. FEMS Microbiol Lett.
-Petri R., mhoff J.F. 2000. Syst Appl Microbiol.
-Philippot L. 2002. Biochim Biophys Acta.
-Richardson D.J. 2001. Cell Mol Life Sci.
-Sorokin DY, Antipov AN, Kuenen JG. 2003. Arch Microbiol.
-Zahran, H.H. 1997. Biol. Fertil.
7axonom-a, Filogenia ' 6iodiversidad 439
T - 47
Palaeossaccharomyces miocenensis8 una nue"a y e-tinta e$&ecie de
le"adu!a%
Veiga-Crespo, P., Poza, M., Blasco, L., Feijoo-Siota, L., Barros-Velzquez, J. y
Villa, T.G.
(pto. +icro,iolog-a ' *arasitolog-a. Fac. Farmacia. Universidad de &antiago de !ompostela. E/
mail0 veicres%usc.es
Los estudios de Paleomicrobiologa han estado desde siempre lastrados por la
dificultad de encontrar especimenes fsiles bien conservados y, a la vez,
aislados en la poca pasada donde se desarrollaron.
El mbar es una resina natural secretada por las plantas como medida de
defensa cuyas caractersticas naturales la convierten en una matriz ideal para
la preservacin del DNA fsil as como para el aislamiento de microorganismos
fsiles aislados en una poca geolgica pretrita.
La dificultad en trabajos con DNA fsil radica en la posibilidad de
contaminacin con fuentes de DNA actuales as como en la dificultad de
reproducir los resultados obtenidos. En nuestro laboratorio, recientemente,
hemos desarrollado un mtodo de esterilizacin y recuperacin de DNA fsil a
partir de piedras de mbar que nos ha permitido, mediante tcnicas de PCR,
obtener secuencias ancestrales de DNA de levaduras. Los avances en las
tcnicas de Microscopa Electrnica nos han permitido, as mismo, obtener
imgenes de las levaduras ancestrales contenidas en las piedras mbar del
Mioceno (30 mill aos de antigedad) procedentes de la actual Republica
Dominica.
El anlisis de las secuencias de DNA ancestral mediante estudiosde filogenia y
las imgenes obtenidas, nos han permitido establecer un nuevo gnero de
levaduras, filogenticamente relacionadas con las pertenecientes al gnero
&acc)arom'ces cerevisiae, cuya principal caracterstica es su pequeo
tamao. Este nuevo genero ha sido bautizado como *alaeosacc)arom'ces
siendo la especie englobada en l *alaeosacc)arom'ces miocenesis sp. nov.

T - 60
>otot!of,a ano-i'nica ae!obia de la mic!obiota a$ociada a la a$cidia
'ysto$ytes $ellechia+ei
Martnez-Garca, M.
(1)
, Daz, M.
(2)
, Ramos-Espl
(2)
,Antn, J.
(1)
B1C(epartamento de Fisiolog-a, 4en5tica ' +icro,iolog-a, Universidad de Alicante. E/mail0
m.martine$%ua.es. B.C(ivisi;n de 6iolog-a +arina, Universidad de Alicante.
!'stod'tes dellec)ia=ei es una ascidia marina que habita en ambientes
bentnicos rocosos de hasta 800 metros de profundidad en el Ocano
Atlntico, Pacfico, ndico y Mar Mediterrneo. Esta ascidia tiene un potencial
biotecnolgico interesante, ya que se han aislado e identificado varios
compuestos con actividad antitumoral frente a distintas lneas celulares
tumorales.
En estudios previos hemos visto que existe una microbiota que se asocia
especficamente a la tnica de la ascidia, que es el tejido comn que envuelve
a cada uno de los zooides de la colonia. Estacomunidad asociada se compone
de distintos filotipos todos ellos pertenecientes al grupo de Alfa
Proteobacterias. Adems hemos visto que toda la comunidad se transmite
verticalmente a la larva de la ascidia, y se asocia al tejido indiferenciado de la
larva denominado compartimento interno, que posteriormente conformar la
tnica en la colonia adulta.
A partir del anlisis de las secuencias del gen del rRNA 16S encontramos que
los microorganismos asociados a la ascidia estn filogenticamente prximos a
microorganismos marinos que realizan la fototrofa anoxignica aerobia, tales
como el gnero ?oseo,acter sp. y Er't)ro,acter sp.
El operon pu# est compuesto por genes (pu#6, pu#A, pu#> ' pu#+)que codifican
a subunidades que componen el complejo de captacin de la luzen la fototrofa
anoxignica aerobia. El gen pu#+codifica a una de las protenas que componen
el centro de reaccin.
En el presente trabajo se pretende estudiar si los microorganismos asociados
realizan la fototrofa anoxignica aerobia tanto en el adulto como en la larva
de!'stod'tes dellec)ia=ei.
Para ello se procedi a la construccin de cuatro genotecas del gen pu#+,
dosgenotecas de la colonia y la larva a partir de muestras de cidos nucleicos
totales amplificados por PCR, y dos genotecas de la colonia y larva construidas
a partir de muestras de RNA amplificados por RT-PCR. Para las reacciones de
PCR y RT-PCR se emplearon cebadores especficos.
Se analizaron 30 clonesde cada una de las genotecas. Tanto en las genotecas
de la larva construida a partir de amplificacin por PCR y RT-PCR, como en las
genotecas de la colonia construida a partir de amplificacin por PCR y RT-PCR
encontramos 8 secuencias distintas del gen pu#+ de microorganismos
relacionados con el gnero ?oseo,acter sp., Er't)ro,acter sp., ?oseateles sp.,
?)odovulum sp., ?)odospirillum sp. y ?)odopseudomonas sp., con
porcentajes de similitud del BLASTx mayores del 90%.
As por tanto, de los resultados del anlisis de las genotecas podemos concluir
que los microorganismos asociados a la ascidia !'stod'tes dellec)ia=ei poseen
el gen pu#+ relacionado con la fottrofa anoxignica aerobia y que adems
estn expresando dicho gen tanto en la fase adulta de la ascidia como en la
larva.
7axonom-a, Filogenia ' 6iodiversidad 44.
T - 78
Genoti&o "e!$u$ fenoti&o en la de$c!i&cin de e$&ecie$ bacte!iana$8 el
ca$o de Pseu$omonas stut0eri y P. cloriti$ismutans%
Cladera, A.M.; Garca-Valds, E.; Lalucat, J.
irea de +icro,iologia. Universitat de les 1lles 6alears. !rta Valldemossa, Om ,3. 01.. *alma de
+allorca B1lles 6alearsC. vd,sacc4%ui,.es
*seudomonas stut$eri es un microorganismo con una extraordinaria
variabilidad fenotpica y genotpica. Debido a esta enorme variabilidad
genotpica la especie se subdivide en genomovares, entendiendo a la
genomovar como un estatus taxonmico provisional que agrupa a cepas
genotpicamente similares dentro de una misma especie. En la actualidad se
conocen 18 genomovares diferentes.
Recientemente, Wolterink y colaboradores (2002), aislaron y caracterizaron la
cepa AW-1 comparndola con varias cepas de *. stut$eri, sin embargo fue
definida como especie nueva dentro del gnero *seudomonas, (*seudomonas
c)loritidismutans), por su incapacidad de utilizar el nitrato como aceptor de
electrones pero si el clorato en una respiracin anaerbica.
Para esclarecer la posicin taxonmica de la cepa AW-1 se llevaron a cabo
diversos estudios fenotpicos y genmicos con el fin de confirmar la afiliacin
de la cepa AW-1 como un miembro de la genomovar 3 de *. stut$eri .
En las pruebas fisiolgicas se obtuvo una cepa espontneamente adaptada
(AW-1A) capaz de crecer en condiciones desnitrificantes. Se demostr
mediante pruebas qumicas y mediante la deteccin de xido nitroso que esta
cepa era capaz de crecer en condiciones selectivas para desnitrificantes.
Adems se demostr la presencia de los genes de la desnitrificacin nir& y
nosS en la cepa AW-1.
Tambin se llev a cabo un anlisis multilocus con cepas de *. stut$eri y se
construy una rbol consenso resultado de la filogenia molecular conjunta de
las secuencias del 16S rDNA, las TS1 y las de los genes conservados rpo(,
g'r6, as como de los genes metablicos catA y nosS, que situaron la cepa
AW-1 como un miembro de la genomovar 3 de *. stut$eri.
Finalmente se aportaron evidencias de que la capacidad de utilizar el clorato
estaba presente en otras cepas de *. stut$eri pertenecientes a otras
genomovares diferentes a la gv. 3(cepas *seudomas sp. PDA, PDB, CFPBD,
PK) y de que seguramente se trataba de una caracterstica de transferencia
lateral (por la incongruencia observada en los rboles del 16S rDNA y del gen
de la clorito dismutasa, (cldC, por las diferencias en el contenido en GC% y en
los valores de RSCU del gen cld).
Con todos estos argumentos se propone la reclasificacin de *.
c)loritidismutans y considerarlo como un nombre junior de *. stut$eri.
T - 82
GTG
@
=+CR9 una ;e!!amienta &a!a la dife!enciacin de e$&ecie$ &!-ima$
en el 'ne!o 3ibrio%
Pascual, J.
1,2
, Cuesta, G.
2,3
, Macin, M.C.
1,2
, Garay, E.
1,2,4
, Pujalte, M.J.
1,2
1
1nstituto !avanilles de 6iodiversidad ' 6iolog-a Evolutiva B1!6i6EC,
.
(epartamento de
+icro,iolog-a ' Ecolog-a, '
4
!olecci;n EspaLola de !ultivos 7ipo B!E!7C. Universitat de ValKncia.
!ampus de 6ur=assot, 46100 ValKncia.
3
(epartamento de 6iotecnolog-a/+icro,iolog-a. Universidad
*olit5cnica de Valencia. EspaLa. pasmar%alumni.uv.es
La tcnica de REP-PCR utilizando el oligonucletido GTG
5
como cebador ha
sido propuesta como equivalente a los AFLP y la hibridacin DNA-DNA para la
resolucin del grupo de especies Vi,rio )arve'i/V.camp,ellii/V. roti#erianus, que
presentan una gran proximidad en fenotipo y genotipo (Gmez-Gil et al. 2004).
Con el fin de optimizar la identificacin de cepas de Vi,rio )arve'i virulentas
para lubina, esta tcnica se ha puesto a punto y se ha aplicado a 88 aislados
de diferentes especies de peces cultivados (doradas, lubinas y dentones), las
cepas tipo de V. )arve'i y V. camp,elli, y 7 cepas de referencia de V.
camp,ellii cedidas por el Dr. Gmez-Gil (!ollection o# AIuacultural 1mportant
+icroorganisms, CAM, Mxico). Los resultados obtenidos (con perfiles de 11 a
15 bandas por cepa, por trmino medio) fueron analizados (Pearson-UPGMA)
mediante el programa GelCompar v4.1. El anlisis permiti resolver un grupo
principal, compuesto por la mayora de los aislados, que se agruparon con la
cepa tipo de Vi,rio )arve'i NCMB 1280
T
, confirmando as la correcta
identificacin previa realizada sobre el fenotipo. En un segundo grupo
aparecieron reunidas todas las cepas de referencia de V. camp,ellii (CAM) y la
cepa tipo de dicha especie, NCMB 1894
T
. El tercer grupo reuni 13 cepas de
lubina, ms cercanas a V. camp,ellii que a V. )arve'i, pero con un bajo nivel
de semejanza. Un cuarto grupo de 6 cepas, aisladas de dorada, fue marginal.
La tcnica se ha aplicado a otro grupo de cepas, similares a V. ic)t)'oenteri y
V. scop)t)almi, que no han podido ser asignadas a ninguna de las dos
especies citadas. Son 24 aislados de dorada, que ocupan una situacin
intermedia entre ambas especies de acuerdo con los datos de secuenciacin
(gen 16S rDNA) e hibridacin DNA-DNA, as como las cepas tipo de V.
ic)t)'ioenteri CECT 5675
T
y V. scop)t)almi CECT 4638
T
, ms 5 cepas de
referencia de esta ltima especie. Tras el anlisis de agrupamiento, todos
nuestros aislados, menos uno, se agruparon formando un grupo compacto con
la cepa tipo de V. scop)t)almi y las restantes cepas de referencia de esta
especie, mientras que la cepa tipo de V. ic)t)'oenteri y uno de los aislados
quedaban claramente distantes.
Actualmente la tcnica se est aplicando a Vi,rio ponticus (Macin et al. 2005)
para confirmar la adscripcin de 19 cepas aisladas de dorada a dicha especie.
Los resultados conjuntos preliminares apuntan a la enorme utilidad de la
tcnica de rep-PCR con GTG
5
para identificar especies en el gnero Vi,rio.
Bibliografa:
Gmez-Gil et al. (2004). +icro,iolog' 150, 1769-1777.
Macin et al. (2005). &'st. Appl. +icro,iol. 27, 535-540.
T - 84
Genmica y filoenia de Salinibacter ruber
Valens-Vadell, M.
1
, Castresana, J.
4
, Pea, A.
2
, Amann, R.
3
, Antn, J.
2
, Rossell-
Mora, R.A.
1
1/ 1nstitut +editerrani dTEstudis AvanWats B!&1!/U16C. !< +iIuel +arIu5s ., 0190 Esporles. 1lles
6alears Bvieamvv0%ui,.esC. ./(ivisi;n de +icro,iolog-a, (ep. Fisiolog-a, 4en5tica ' +icro,iolog-a,
Universidad de Alicante, 03080 Alicante. 3/ +ax/*lancO/1nstitut #`r +arine +iOro,iologie. !elsiusstr.
1. (/.8339 6remen. 4/(epartamento de Fisiolog-a ' 6iodiversidad +olecular. 1nstituto de 6iolog-a
+olecular de 6arcelona, !&1!. 2ordi 4irona 18. 08034 6arcelona
&alini,acter es el primer gnero halfilo estricto del dominio 6acteria, del que
se demostr su relevancia ecolgica. ste se descubri inicialmente en
cristalizadores de salinas de Mallorca y Alicante pero posteriormente se
demostr una distribucin geogrfica mucho ms amplia. Este microorganismo
que puede llegar a constituir hasta el 27% de la microbiota autctona, se afila
con el gnero ?)odot)ermus formando una rama independiente y profunda en
el filum 6acteroidetes. El aislamiento en cultivo puro permiti clasificarla como
gnero y especie nueva &alini,acter ru,er (Antn et al., 2000, 2002). Se
caracteriza por ser un bacilo mvil con flagelacin polar, Gram negativo,
aerbico estricto, hetertrofo, y con un ptimo de crecimiento entre 20-30% de
salinidad. La especie se muestra geogrficamente homognea en cuanto a las
caractersticas taxonmicas analizadas.
Actualmente se dispone del 80% del genoma de la cepa tipo M31
T
secuenciado. En el presente estudio se pretende analizar un nmero de genes
esenciales representativo del genoma, y que codifiquen para protenas,
resolver cada filogenia individualmente y compararla con la reconstruccin
basada en DNAr 16S. Principalmente se pretende evaluar la reconstruccin
resultante de la concatenacin de todos los genes. Para ello han seleccionado
23 genes que, aunque suponen un 1% del genoma, se encuentran dispersos a
lo largo de ste. Adems, stos pertenecen a diferentes metabolismos tanto de
cidos nucleicos, como protenas y al metabolismo energtico. Para la
evaluacin se han ensayado varios algoritmos de reconstruccin como son Mr
Bayes, PHYML, PHYLP. As mismo, se han evaluado las topologas mediante
el uso de distintos filtros de conservacin de posiciones homlogas generados
con el programa Gblocks.
Los resultados preliminares muestran que las reconstrucciones filogenticas de
la mayor parte de los genes analizados son concordantes con la del DNAr 16S,
aunque en algunos casos se han observado topologas de rbol discordantes,
posiblemente debido a artefactos filogenticos. El rbol resultado de la
concatenacin con casi 10.000 posiciones homlogas recapitula en gran
medida la filogenia mostrada por el DNAr 16S.
Antn, J., et al. (2000) Appl Environ Microbiol 66, 3052-3057
Antn, J., et al. (2002) nt J Syst Evol Microbiol 52, 845-491
T - 87
Alfa&!oteobacte!ia$ ma!ina$8 nue"a$ a&o!tacione$ ta-onmica$
Arahal D. R.
1,2
, Macin M. C.
2,3
, Pujalte M. J.
2,3
, Garay E.
1,2,3
1
!olecci;n EspaLola de !ultivos 7ipo B!E!7C
.
(epartamento de +icro,iolog-a ' Ecolog-a
3
1nstituto
!avanilles de 6iodiversidad ' 6iolog-a Evolutiva. Universitat de ValKncia. !ampus de 6ur=assot.
46100 ValKncia, &pain. 7el0 ]34 96 334461.. Fax0 ]34 96 334318. e/mail0 ara)al%uv.es
En los ltimos aos el grupo de las alfaproteobacterias ha experimentado una
expansin muy considerable en cuanto al nmero de taxones que alberga,
habiendo superado ya el centenar de gneros. Un buen nmero de ellos, 33 en
la ltima actualizacin del 7axonomic outline #or t)e *rocar'otes (Garrity et al.,
2004) forma un clado, en base a la secuencia del 16S rDNA, bajo el nombre de
orden ?)odo,acterales que comprende mayoritariamente especies de
ambientes marinos o hipersalinos. Desde el punto de vista metablico son
bastante diversos y se piensa que desempean un papel importante en los
ciclos del carbono, azufre y nitrgeno. Dentro del grupo, la capacidad
fotosinttica es un carcter minoritario y taxonmicamente disperso.
En el presente ao han sido varias las aportaciones de nuestro equipo de
investigacin a la taxonoma de este grupo bacteriano: Macin et al. (2005a)
recoge la descripcin de un nuevo gnero y especie, 7)alasso,acter
stenotrop)icus, productor de bacterioclorofila a; Pujalte et al. (2005) describe
tambin un nuevo gnero y especie, :ereida ignava, en este caso no
pigmentado y muy prximo (en base al 16S rDNA) a un grupo de bacterias no
cultivadas simbiontes de varias especies de algas rojas del gnero *rionitis;
Macin et al. (2005b) contiene la descripcin de una nueva especie,
2annasc)ia ru,ra, que forma colonias de color rojo que penetran en el agar. A
estos trabajos habra que sumar otras dos publicaciones actualmente en
prensa y una en proceso de revisin.
El estrecho seguimiento que hemos venido haciendo de las muchas novedades
taxonmicas ocurridas en el orden ?)odo,acterales nos ha permitido constatar
una serie de problemas derivados de la confluencia de propuestas:
acumulacin de sinonimias, gneros polifilticos (ej. ?uegeria/?oseo,acter/
&tappia), falta de comparacin entre taxones prximos procedentes de estudios
simultneos independientes.
Otro problema grave es la falta de uniformidad en las descripciones, en algunos
casos claramente insuficientes, e incluso la falta de acierto en la forma de
abordar los estudios y la toma de conclusiones. Consideramos que todas estas
cuestiones merecen un anlisis y que se planteen soluciones como por ejemplo
la creacin de un Subcomit dentro del CSP para este grupo bacteriano que
elabore unos estndares mnimos para futuras propuestas.
Garrity GM et al. (2004) 1n Bergey's Manual of Systematic Bacteriology, 2nd
edn., release 5.0. DO: 10.1007/ bergeysoutline200405
Macin MC et al. (2005a) 1nt 2 &'st Evol +icro,iol 55:105-110
Macin MC et al. (2005b) 1nt 2 &'st Evol +icro,iol 55, 649-653
Pujalte MJ et al. (2005) 1nt 2 &'st Evol +icro,iol 55,631-636
T - 94
MICRO=MAR8 0na ba$e de dato$ &a!a una !e&!e$entacin din#mica de la
biodi"e!$idad mic!obiana ma!ina
Pushker, R., DAuria, G., Alba-Casado, J.C. y Rodrguez-Valera,F.
(ivisi;n de +icro,iolog-a, !ampus de &an 2uan, Universidad +iguel Hern"nde$, Apdo. 18, 03330.
&an 2uan, Alicante. E/mail0 =c.al,a%um).es
Desde hace 15 aos una larga cantidad de secuencias microbianas se han
caracterizado y estn disponibles en las distintas bases de datos existentes.
Muchas de estas secuencias, si no la gran mayora, se corresponden con
productos de PCR amplificados directamente de las muestras naturales,
clonando y secuenciando posteriormente. Ahora bien, del total de las
secuencias, que procedan de ambientes marinos apenas si llegarn a las 6000.
En cualquier caso, bases de datos de ADN tipo Genebank, aportan poca
informacin que relacione parmetros ecolgicos u oceanogrficos con la
biodiversidad estimada a travs del DNA secuenciado. Pues bien, aqu
describimos una base de datos pblica donde ambas fuentes informativas
(ecolgicas y oceanogrficas) han sido combinadas con secuencias,
caracterizadas taxonmicamente, para as tratar de establecer una conexin
entre las caractersticas geogrficas y los habitats para cada taxn, dentro de
los procariotas marinos, incluyendo aquellos no cultivados conocidos slo a
travs de su secuencia, para as poder realizar anlisis tanto ecolgicos como
biogeogrficos. Actualmente hay disponibles en la base de datos 11430
secuencias correspondientes a genes taxonmicos (16S ARNr, TS y 23S
ARNr) as como de protenas procedentes de libreras metagenmicas. Es una
herramienta por tanto que ayuda a integrar tanto los datos moleculares, como
su afiliacin taxonmica con las caractersticas ecolgicas y biogeogrficas,
permitiendo obtener una representacin dinmica de la diversidad marina
microbiana. Esta base de datos est disponible a travs de la direccin de
internet: http://egg.umh.es/micromar/
T - 107
Ca!acte!i)acin de bacte!ia$ ;ete!ot!fica$ im&licada$ en !eciclado de
nut!iente$ en la ca&a ftica de ta&ete$ mic!obiano$
Villanueva, L., del Campo, J., Navarrete, A., Barbern, A., Demajo, S.,
Guerrero, R. y Urmeneta, J.
(pto. de +icro,iolog-a, Facultad de 6iolog-a, Universidad de 6arcelona, Av. (iagonal 643. 080.8
6arcelona. E/mail0 villanueva%u,.edu
Los tapetes microbianos son ecosistemas procariticos complejos formados
por poblaciones de microorganismos fotoauttrofos, fotohetertrofos,
quimioauttrofos y hetertrofos. La fotosntesis oxignica es el principal
proceso de produccin primaria en los tapetes. Estudios previos han observado
que los procesos de fotosntesis y heterotrofia se encuentran asociados
metablica y estructuralmente en la capa ftica de los tapetes microbianos.
Esta asociacin facilita el uso e intercambio de sustratos y refuerza la
interdependencia fisiolgica entre sus miembros.
El objetivo de este estudio es caracterizar la poblacin de hetertrofos asociada
al nicho existente en torno a las cianobacterias filamentosas en un tapete
microbiano. Se pretende discernir el papel de los hetertrofos en la
mineralizacin del carbono orgnico en la capa ftica, y determinar qu tipo de
relacin mutualista se da entre los miembros de esta asociacin. Para ello, se
micromanipularon cianobacterias filamentosas del gnero >'ng,'a sp.
presentes en los tapetes, y se sigui a lo largo del tiempo la proliferacin de
bacterias hetertrofas en torno a sus vainas.
Se observ que en condiciones de crecimiento adecuadas para las
cianobacterias, la poblacin de hetertrofos segua proliferando pero stos no
podan crecer en ausencia del componente fottrofo. La poblacin de
hetertrofo dominante fue aislada en cultivo puro y posteriormente
caracterizada morfobioqumicamente y por secuenciacin del gen 16S rDNA.
La cepa aislada es un bacilo flagelado gram-negativo anaerobio facultativo,
clasificado como miembro del gnero *seudoalteromonas sp. El gnero
*seudoalteromonas se encuentra ampliamente distribuido en ambientes
marinos y contiene numerosas especies que sintetizan compuestos
biolgicamente activos as como enzimas extracelulares que les benefician en
la colonizacin de superficies y competencia por nutrientes. La composicin de
cidos grasos de la membranas, contenido en quinonas, asimilacin de
carbohidratos, sensibilidad a antibiticos, actividad surfactante, etc, se han
elegido como caracteres taxonmicos para la identificacin de la cepa. El
aislado presenta crecimiento en un amplio rango de salinidad, temperatura y
pH; actividad enzimtica lipasa, fosfatasa, DNasa, amilasa, hemoltica, entre
otras, lo que sugiere una amplia capacidad para habitar ambientes cambiantes
y para degradar una gran variedad de sustratos orgnicos. Otras bacterias
hetertrofas han sido aisladas de la capa ftica, por ejemplo miembros del
gnero Halomonas sp. La relacin cooperativa entre ambos gneros de g-
Proteobacteria ha sido observada en otros sistemas y podra favorecer un
reciclaje de nutrientes ms completo. Se han realizado estudios de localizacin
mediante microscopa de fluorescencia para determinar la importancia de
hetertrofos en la capa ftica.
T - 113
4alopontus asiaticus en% no"%9$&% no"%9 una nue"a ;aloa!:uea ai$lada de
un lao $alino en Monolia Inte!io!9 C;ina
Castillo A.M.
1
, Gutirrez M.C.
1
, Kamekura M. y Ventosa A.
1
1
4101. &evilla. anacastillo%us.es.
.
:oda 1nstitute o# &cienti#ic ?esearc), 2apan.
Las haloarqueas son un grupo de arqueas aerobias halfilas extremas, cuyo
crecimiento ptimo se encuentra en medios que poseen entre el 15 y el 25% de
NaCl. Actualmente se agrupan en dieciocho gneros diferentes, dentro de la
familia Halo,acteriaceae: Haloarcula, Halo,acterium, Halo,aculum,
Halo,i#orma, Halococcus, Halo#erax, Halogeometricum, Halomicro,ium,
Halor)a,dus, Haloru,rum, Halosimplex, Haloterrigena, :atrial,a, :atrinema,
:atrono,acterium, :atronococcus, :atronomonas ' :atronoru,rum. Estos
microorganismos se encuentran habitualmente en lagos hipersalinos (Mar
Muerto, Gran Lago Salado, Wadi Natrun, etc.), as como en salinas y suelos
salinos.
En China abundan los ambientes hipersalinos, como los que se encuentran en
Mongolia nterior, Xinjiang y la Regin Autnoma del Tibet. Recientes estudios
han permitido la descripcin de nuevas especies a partir de dichos hbitats.
La cepa EJ-46 es una nueva arquea aerobia halfila extrema, aislada de
sedimento salino del lago salado Ejinor, en Mongolia nterior,China. Este
microorganismo presenta una morfologa que vara entre bacilos rectos a
formas triangulares, cuadradas y de disco, y requiere para su crecimiento al
menos un 15% de NaCl, pero no necesita MgCl
2
. Crece entre valores de pH 6,0
y 9,0 y lo hace ptimamente en medios que contengan un 20% NaCl a pH 7,0.
Los anlisis de lpidos polares revelan la presencia de fosfatidilglicerol y
fosfatidilglicerolmetilfosfato derivados de C
20
C
20
y C
20
C
25
glicerol diter. Se han
detectado cuatro glicolpidos, uno de los cuales no se ha descrito previamente
en ninguna haloarquea. El ADN posee un G+C de 60,3 moles %. La
secuenciacin del gen que codifica el ARNr 16S muestra que esta cepa EJ-46
pertenece a la familia Halo,acteriaceae, pero existe una semejanza muy baja
con los otros miembros de dicha familia. Los valores ms altos de semejanza
obtenidos son de 94,8-94,9% con respecto a :atronococcus occultus y
:atronococcus am'lol'ticus, dos gneros que incluyen especies haloalcalfilas.
Basndonos en un anlisis fenotpico, genotpico, quimiotaxonmico y
filogentico, proponemos la clasificacin de este microorganismo dentro de un
nuevo gnero, con la denominacin Halopontus asiaticus gen. nov., sp. nov.

T - 115
Biodi"e!$idad de mic!oo!ani$mo$ :ue nodulan leumino$a$
Rivas R.
(epartamento de +icro,iolog-a ' 4en5tica. Edi#icio (epartamental de 6iolog-a. !ampus +iguel de
Unamuno. Universidad de &alamanca. 300. &alamanca. raul%AAAedu/micro.usal.es
La taxonoma de los rhizobia, bacterias capaces de fijar nitrgeno en simbiosis
con leguminosas, ha cambiado considerablemente desde los ltimos 20 aos.
El estudio de estos microorganismos se inici en 1888 cuando Beijerinck cultiv
por primera vez bacterias aisladas de un ndulo radical. Beijerinck llam a esta
bacteria 6acillus radicicola pero un ao ms tarde, Frank, renombr y public
este microorganismo en un gnero con una sola especie, ?)i$o,ium
leguminosarum. Este primer gnero original (?)i$o,ium), ha sido dividido con
el paso del tiempo en varios gneros diferentes debido en gran parte a la
introduccin de ms caractersticas genticas como la hibridacin DNA-DNA y
DNA-rRNA o simplemente al aumento del empleo de la secuenciacin de
rDNA. En este momento, sabemos que los microorganismos fijadores
simbiticos de nitrgeno que se asocian con leguminosas, no forman en
absoluto un grupo homogneo de microorganismos ya que, en la actualidad se
han descrito ms de 40 especies pertenecientes a 7 gneros distribuidos en 4
familias distintas. Adems, en los ltimos aos la situacin se ha hecho an
ms compleja debido a que se han aislado bacterias de ndulos de
leguminosas capaces de fijar nitrgeno pero filogenticamente alejados de los
tradicionales grupos de rhizobia en las alpha-proteobacterias. Estos nuevos
simbiontes encontrados, incluyen especies de +et)'lo,acterium, 6lasto,acter,
Dc)ro,actrum y (evosia en las alpha-Proteobacteria y 6urO)olderia y
?alstonia en las beta-Proteobacteria. Todas estas especies tienen en comn
adems de ser filogenticamente (16S rDNA) distintas de los rhizobia
originales, el hecho de que todas ellas presentan genes de nodulacin
similares a los que presentan los rhizobia. El inters de los investigadores en el
anlisis de la biodiversidad ha aumentado notablemente en los ltimos aos no
solo por el inters biotecnolgico que presentan los microorganismos sino
tambin porque cada da somos ms conscientes de la importancia y el valor
de la diversidad biolgica en los procesos ecolgicos.
T - 116
A&!o-imacin metaenmica al e$tudio de ;alofao$
Santos, F.
1
, Meyerdierks, A.
2
, Rossell-Mora, R.
3
, Amann, R.
2
and Antn, J.
1
1. (ivisi;n de +icro,iolog-a, (pto. Fisiolog-a, 4en5tica ' +icro,iolog-a, Universidad de Alicante,
03080 Alicante BFernando.&antos%ua.esC. .. +ax/*lancO/1nstitut #`r +arine +iOro,iologie.
!elsiusstr. 1. (/.8339 6remen. 3. 1nstitut +editerrani dTEstudis AvanWats B!&1!/U16C. !< +iIuel
+arIu5s ., 0190 Esporles. 1lles 6alears
Gran parte de los conocimientos que se poseen actualmente sobre halofagos
(fagos que infectan bacterias y arqueas halfilas) procede del aislamiento
desde calvas de lisis de cultivos puros, a partir de los cuales se han purificado y
caracterizado ms de una docena de virus asociados, sobre todo, a lisados de
Halo,acterium salinarum.
La abundacia de bacterifagos es siempre mayor que la abundancia de
procariotas. En los sistemas de salinas solares se ha observado el mismo
efecto a medida que la abundancia de procariotas aumenta desde los
estanques de baja salinidad hasta los cristalizadores. Sin embargo, hay pocos
datos que pongan de manifiesto qu factores son los responsables de la
muerte de arqueas y bacterias en estos estanques
La tcnica de electroforesis de campo pulsado (PFGE) se ha aplicado al
estudio de la diversidad de fagos de ambientes acuticos. El patrn de bandas
obtenido constituira una estimacin mnima del nmero de virus diferentes. Los
resultados de estos trabajos han mostrado que el rango de tamao para
genomas de halofagos se encuentra entre 10 y 533 Kb.
Nuestro trabajo, a partir de la aplicacin de PFGE a muestras de salinas con
concentraciones superiores al 22% de sales, puso de manifiesto la existencia
de una banda de 35 Kb presente en todas las salinidades, que podra tratarse
del genoma del halofago de mayor ubicuidad, por lo que se aplicaron tcnicas
de metagenmica ambiental encaminadas a la clonacin de dicho genoma
mediante el empleo de fsmidos derivados del fago lambda.
Tras la transformacin de una cepa de Esc)eric)ia coli susceptible de infeccin
por el fago lambda se obtuvieron 3 clones, de los cuales se escogi uno para la
secuenciacin completa del inserto, rompiendo el DNA total del fsmido para la
subclonacin de pequeos fragmentos (1.5 - 4 Kb) y la posterior secuenciacin
y ensamblaje de todo el genoma a partir de 180 clones.
Este es el primer genoma de un halofago no obtenido mediante tcnicas
clsicas de infeccin. La anotacin de su secuencia ya ha revelado la
existencia de protenas implicadas en su replicacin, en la modificacin de
aminocidos y un considerable nmero de protenas relacionadas con factores
de transcripcin. Desde el punto de vista ecolgico, este halofago podra estar
relacionado con el control de los niveles poblacionales de alguno de los
componentes procariticos mayoritarios en las salinas solares: la bacteria
halfila extrema &alini,acter ru,er o la arquea halfila extrema HaloIuadra
Aals,'ii.
T - 136
De la filoen'tica a la filoenmica8 a&licacin a la$ =+!oteobacte!ia$
endo$imbitica$ de in$ecto$
Comas, ., Moya,A., Gonzlez-Candelas, F.
1nstituto !avanilles de 6iodiversidad ' 6iolog-a Evolutiva. Universidad de Valencia. Apartado D#icial
..083. 4601/Valencia. andres.mo'a%uv.es
La creciente disponibilidad de secuencias de genomas completos y el
desarrollo de nuevos y ms rpidos mtodos de reconstruccin filogentica
estn permitiendo explorar el conjunto de los rboles filogenticos de cada uno
de los genes del genoma de cualquier especie, lo que ha conducido a la
aparicin de nuevos mtodos filogenmicos. En este trabajo presentamos los
resultados obtenidos con la utilizacin de distintos mtodos de anlisis
filogenticos y filogenmicos sobre el origen monofiltico de las g-
Proteobacterias endosimbiticas de insectos. El origen de este grupo es
bastante controvertido y ha sido objeto de varios resultados recientes muy
discrepantes. Adems, este anlisis nos ha permitido comparar la eficacia y
fiabilidad de los distintos mtodos de reconstruccin filogentica empleados y
su utilidad y aplicabilidad para estudios filogenmicos.
Hemos obtenido el rbol filogentico de cada uno de los 579 genes codificantes
identificados en el genoma del endosimbionte primario de las hormigas
carpintero, 6loc)mannia #loridanus, tras determinar sus presuntos ortlogos en
cada uno de 20 genomas adicionales de Proteobacterias. Entre estas se
encuentran 16 g-Proteobacterias (incluyendo todas las endosimbiontes de
insectos cuyo genoma ha sido secuenciado), 3 b-Proteobacterias y una a-
Proteobacteria. Diferentes mtodos de reconstruccin convergen en rescatar
un grupo monofiltico para las bacterias endosimbiticas. Sin embargo, slo 43
genes, tomados aisladamente, recuperan la misma topologa aceptada como
rbol de especies. La mayora de las discrepancias se deben a la localizacin
de las Xanthomonadales con las b-Proteobacterias y no a incertidumbres sobre
la localizacin o monofilia de los endosimbiontes. Los genes operacionales
rechazan en mayor proporcin el rbol de especies que los genes
informacionales. En global, hemos encontrado que alrededor de un 30% de los
genes analizados presentan una evolucin discordante a la definida en el rbol
de especies. Esta incongruencia puede darse por diversos motivos uno de los
cuales es la transferencia gnica horizontal.
En conclusin, hemos obtenido un fuerte apoyo para la hiptesis de monofilia
para los g-Proteobacterias endosimbiticas de insectos mediante una
combinacin de mtodos filogenticos y filogenmicos. Entre estos, el empleo
de un concatenado de secuencias gnicas proporciona un mtodo de
estimacin eficiente y robusto del rbol de especies. No obstante, otros
mtodos filogenmicos, como los basados en superrboles consenso son tiles
para revelar sealas filogenticos alternativas y deben incluirse en todo estudio
filogenmico integral.
T - 146
Identificacin mediante $ecuenciacin com&leta del en ?/S !DNA de
ce&a$ bacte!iana$ $olubili)ado!a$ de fo$fato ai$lada$ de la !i)o$fe!a de
ui$ante 5Pisum sativum7 en do$ $uelo$ de >!ancia%
Peix, A.
1
, Velzquez, E.
2
, Catroux, G.
3
and Laguerre, G.
3
1.1nstituto de ?ecursos :aturales ' Agro,iolog-a de &alamanca B1?:A/!&1!C. !< !ordel de
+erinas, 40/3. 3008 &alamanca. email0 alvarp%usal.es. ..(epartamento de +icro,iolog-a '
4en5tica. Edi#icio (epartamental de 6iolog-a. >a,. .09. Universidad de &alamanca. 3008
&alamanca. 3.U+? 1..9 1:?A/Universit5 de 6ourgogne j +icro,iologie et 45oc)imie des &ols k,
1:?A, 1 ?ue &ull', 6* 86310, .1063 (i=on !E(EY. France
El fsforo es el segundo elemento ms importante en la nutricin de las
plantas, siendo un factor limitante en su crecimiento y produccin. La mayor
parte del fsforo incorporado al suelo como fertilizante se inmoviliza al ser
secuestrado por los iones presentes en el mismo, y solo una pequea
proporcin queda en forma disponible para las plantas. Sin embargo existen
bacterias en el suelo capaces de solubilizar fosfatos insolubles, de modo que
aumentan la fraccin de fsforo disponible en el suelo, promoviendo de este
modo el crecimiento de las plantas. Las leguminosas proteaginosas son una
fuente muy importante de protenas en la alimentacin animal, y entre ellas el
guisante ocupa un lugar destacado en Europa, al ser ampliamente cultivado.
Por otra parte, se ha observado que la simbiosis rhizobium-leguminosa es muy
dependiente de los niveles de fsforo existentes, por lo que ste elemento es
especialmente importante en los cultivos de leguminosas, y en este sentido las
bacterias solubilizadoras de fosfatos podran tener adems un papel indirecto
en la promocin de crecimiento de plantas de guisante, mediante la facilitacin
de la simbiosis fijadora de nitrgeno. El objetivo por tanto de este estudio fue el
aislamiento e identificacin de cepas bacterianas solubilizadoras de fosfato
presentes en la rizosfera de guisante. Para ello se eligieron dos suelos
franceses con distintas caractersticas que fueron utilizados para el ensayo en
condiciones de invernadero. Se realizaron recuentos de microbiota total y de
microbiota solubilizadora de fosfato en medio YED-P por el metodo de dilucin
en placa, y se aislaron las cepas bacterianas que solubilizaban fosfato. Estas
cepas fueron sometidas a una caracterizacin molecular mediante anlisis
RFLP-ARDRA del gen ribosmico 16S con 4 endonucleasas. De acuerdo con
los resultados obtenidos, en un suelo se encontraron mayores recuentos de
microbiota total y solubilizadora de fosfato que en el otro, y asimismo los
recuentos fueron ms altos en el suelo rizosfrico que en el no rizosfrico.
Mediante el anlisis ARDRA 16S rDNA se observ una gran diversidad entre
las cepas aisladas tanto en el suelo rizosfrico como en el suelo no rizosfrico,
que se agruparon en unos 10 grupos genmicos. Actualmente se est
realizando la secuenciacin completa del 16S rDNA de un representante de
cada uno de estos grupos para identificar los aislados a nivel de gnero y
especie. El uso y manejo de estas cepas solubilizadoras de fosfato puede
aumentar la biodisponibilidad de fsforo y por tanto mejorar la produccin de
grano en cultivos de guisante.
T - 167
Identificacin de la$ e$&ecie$ del 'ne!o Debaryomyces mediante
$ecuenciacin
Martorell, P., Fernndez-Espinar, M.T. y Querol, A.
(epartamento de 6iotecnolog-a de los Alimentos, 1nstituto de AgroIu-mica ' 7ecnolog-a de
Alimentos B!&1!C, *.D. 6ox 3, E/46100 6ur=assot, ValKncia, EspaLa. pmartorell%iata.csic.es.
El gnero (e,ar'om'ces est comprendido por 15 especies [1], de las cuales 9
se encuentran asociadas a gran variedad de alimentos procesados.
Normalmente, su presencia en los alimentos no tiene efectos perjudiciales, sin
embargo, un excesivo crecimiento de estas levaduras, puede causar cambios
sensoriales indeseables por la formacin de malos aromas y sabores [2]. As,
se describen como contaminantes tpicos de yogures, helados, pescado,
marisco, etc. [3]. La utilizacin de mtodos rpidos y precisos para su
identificacin y diferenciacin resulta, por tanto, de gran inters.
En la ltima dcada, los mtodos de identificacin basados en secuencias de
los genes ribosomales 26S y 18S han adquirido gran importancia. Sin embargo,
en el caso del gnero (e,ar'om'ces, estos mtodos no han sido tiles dado el
bajo grado de divergencia nucleotdica que presentan estas regiones entre las
distintas especies. Otro mtodo muy utilizado para identificacin de especies
de levaduras es el basado en la amplificacin por PCR y posterior anlisis de
restriccin de la regin ribosomal 5.8S-TS. Sin embargo, resultados del
presente trabajo y de otros autores [4] muestran la falta de resolucin de esta
tcnica para diferenciar las especies reconocidas actualmente en el gnero.
Con objeto de proporcionar sistemas para la inequvoca identificacin de estas
especies, en el presente trabajo se propone la secuenciacin de la regin 5.8S-
TS y su posterior comparacin con secuencias de las bases datos para las
especies (. carsonii, (. etc)elsii, (. maramus, (. melissop)ilus, (. occidentalis
y (. 'amadae). Por otro lado, para aquellas especies que mostraron una gran
similitud de secuencia en esta regin ((. castellii, (. coudertii, (. )ansenii, (.
nepalensis, (. pol'morp)us, ( pseudopol'morp)us, (. ro,ertsiae, (. udenii y
(. vanri=iae), la mejor aproximacin es la comparacin de secuencias del gen
nuclear A!71.
Bibliografa
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(e,ar'om'ces Lodder and Kreger-van Rij Nom. Cons. n: The yeasts, a
taxonomic study (Kurtzman, C.P. and Fell, J.W., Eds.), pp. 157-173. Elsevier
Science Publishers, Amsterdam, The Netherlands.
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agricultural significance of yeasts. n: The yeasts, a taxonomic study (Kurtzman,
C.P. and Fell, J.W., Eds.), pp 157-173. Elsevier Science Publishers,
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Gen. Appl. Microbiol. 44, 399-404.
T - 189
Alta "a!iabilildad int!ae$&ecifica de lo$ ene$ y!AB y &a!CE en ce&a$
cl,nica$ de Stenotrophomonas maltophilia%
Valdezate S.
1
, Cervera .
1
, Alvarez D.
1
, Vindel A.
1
, Saz Nieto J.A.
1
, Baquero
F.
2
, Cantn R.
2
1
&ervicio de 6acteriolog-a. !.:.+. 1nstituto de &alud !arlos 111, +a=ada)onda and
.
&ervicio de
+icro,iolog-a. Hospital ?am;n ' !a=al. +adrid. =asae$%isciii.es
A diferencia de lo que sucede en otras bacterias gram-negativas, un alto
nmero de polimorfismos (SNPs, single nucleotide polymorphisms) ha sido
detectado en los genes gyrAB y parCE de &tenotrop)omonas maltop)ilia. En
este estudio se analiz la diversidad nucleotdica en los genes de las
topoisomerases -V respecto a las secuencias del 16S rDNA en cepas clnicas
de &. maltop)ilia. Tras la amplificacin y secuenciacin de los genes del 16S
rDNA (1442 bp), gyrAB (300, 369) y parCE (273, 519) en 30 cepas clnicas de
&. maltop)ilia caracterizadas por PFGE (ATCC 13637, 19 muestras
respiratorias, 5 sangre, y 4 con otros orgenes), se realizaron comparaciones
respecto a las secuencias en la cepa patrn ATCC 13637. Segn las
posiciones nucleotdicas del 16S rDNA 55/56/102/104 B4ould et al., 2A! .004),
se establecieron 3 grupos genmicos: A (n=13 cepas), B (n=14) y el C (n=3). Y
de acuerdo con el triple polimorfismo en aminocidos encontrado en ParE, se
consideraron 2 poblaciones: E1 (437-Met, 465-le, 477-Ser, 15 cepas) y E2-3
(437-Leu, 465-Val, 477-Ala o Thr, 15 cepas). Se observ que el 77%de las
cepas del grupo A del 16S rDNA presentaban una secuencia de ParE de tipo
E1, mientras que el 71% del grupo B presentaban el tipo E3. El rango del
nmero de SNPs acumulados en una misma cepa oscilaba en las secuencias
del 16S rDNA (214), gyrAB (112; 19), y parCE (18; 328).
Respectivamente, el nmero de sitios polimrficos/haplotipos identificados
fueron 42/14, 35/21, 36/20, 25/17 y 71/25 (DNA SP 3.51 software). En las
cepas con ParE tipos E2-3, la media del nmero de diferencias fue 1,6 veces
mayor que en la cepas con el tipo E1. Se observaron agrupamientos (Clustal
W, p-distance method; Mega, nj, 2000 bootstrap) en los grupos A/B para las
secuencias del 16S rDNA y gyrB, y entre los tipos E1/E3 para gyrA y parCE. No
se detectaron ningn agrupamiento respecto a los perfiles de PFGE.En las
cepas clnicas de &. maltop)ilia se detect una alta diversidad en las
secuencias de parE, y en menor grado en las secuencias del 16S rDNA, gyrAB
y parC. Segn los genes del 16S rDNA y parE, pudieron establecerse 2 grupos
principales (A1/E1, B/E3). El nmero de mutaciones polimrficas en cepas del
tipo E2-3, pero monomorficas en E1 fueron al menos 2 veces mayores en
gyrAB y en parE.
T - 237
Ca!acte!i)acin de actinomiceto$ endofito$ ai$lado$ de Pisum sativum
Carro Garca, L., MartnezMolina, E., Trujillo, M. E.
(epartamento de +icro,iolog-a ' 4en5tica. !< (octores de la ?eina &<:. 300&alamanca
*isum sativum es una leguminosa de grano que pertenece a la familia
Fa,aceaey se cultiva principalmente por sus semillas. Por ello, resulta
interesante el estudio de los distintos microorganismos endfitos de esta
planta, las funciones que realizan o interacciones que se dan entre ellos.

Para la realizacin de este estudio se recolectaron plantas de guisante de la
localidad de Caizal (Zamora), que posean diversos ndulos radicales.
Algunos de estos ndulos fueron recogidos y se procedi a su esterilizacin
externa utilizando HgCl
2
(2,5%) durante dos minutos. Posteriormente se
trituraron y se sembraron en medio YMA. Las placas se incubaron a 28 C
entre dos ytres semanas, aislndose veintinueve colonias con aspecto de
Actinomicetos.

Seguidamente se procedi a la caracterizacin fenotpica de los aislados, para
ello se realizaron estudios de morfologa en diferentes medios de cultivo (SA1,
Avena, YMA, Bennett), comprobando el crecimiento, el color del micelio (de
sustrato y areo) y la existencia de pigmentos difusibles. Se realizaron adems,
pruebas de crecimiento en distintas fuentes de carbono.

Para profundizar en la caracterizacin de las cepas aisladas se realizaron
perfiles de rep-PCR utilizando el oligonucletido BOX A1R, que permiten
discriminar a nivel intraespecfico. La gran variabilidad de perfiles obtenidos
mostr una elevada diversidad entre nuestros aislados. A partir de este punto
se seleccionaron algunas cepas para secuenciar el gen ribosmico 16S con el
fin de determinar la posicin filogentica de estos aislados.
T - 239
E$tudio de la di"e!$idad de bacte!ia$ ai$lada$ de aua de un lao
$ubte!!#neo de Mallo!ca%
Garca-Fraile P., Velzquez E., Mateos P.F., Martnez-Molina E. y Rivas R.
(epartamento de +icro,iolog-a ' 4en5tica +oleculares. Universidad de &alamanca Edi#icio
(epartamental de 6iolog-a. !ampus +iguel de Unamuno, 300. &alamanca.
El lago Martel, situado en la isla de Mallorca (Espaa), es un lago subterrneo
de aguas salinas de 177m de longitud, 30m de ancho y una profundidad de 5-
12m. La temperatura del agua es prcticamente constante y est en torno a los
18C. Su pH es de 7,5 (Rivas y col. 2005).
En este trabajo se ha llevado a cabo un estudio de la diversidad de bacterias
aerobias y anaerobias facultativas de una muestra de agua de este lago
tomada a 10 cm de profundidad. A partir de la muestra de agua, mediante
filtracin en membrana y utilizando como medio de cultivo YED e YED
implementado con 1,5% de NaCl se aislaron 15 cepas.
Para comenzar el estudio de estos aislados, se realiz una caracterizacin
fenotpica de las cepas mediante pruebas de produccin de enzimas y
utilizacin de fuentes de carbono.
Seguidamente se procedi a realizar su caracterizacin molecular. Para ello, en
primer lugar, se realizaron los perfiles de TP-RAPD, que permiten diferenciar
las cepas a nivel de especie o subespecie (Rivas y col. 2001). Se obtuvieron 11
perfiles diferentes, lo cual indica una elevada diversidad entre los aislados.
De cada uno de los grupos obtenidos se seleccion una cepa representativa
para obtener la secuencia del gen ribosmico 16S. La comparacin de las
secuencias completas obtenidas con las depositadas en las bases de datos
mostr que las cepas pertenecen a los gneros 6acillus, &tenotrop)omonas,
*seudomonas, *)oto,acterium, 7)alassospira, *seudoalteromonas,
!)romo)alo,acter, Halomonas ' +icrococcus, lo que confirma la alta
diversidad de especies bacterianas presentes en el lago Martel. El anlisis
filogentico de los aislados se llev a cabo mediante el mtodo neighbour-
joining (Saitou y Nei, 1987). Los porcentajes de similitud entre las secuencias
de las cepas de este estudio y las de la cepa tipo de la especie
filogenticamente ms prxima a cada una de ellas sugieren que algunos de
los aislados pueden constituir nuevas especies.

BBLOGRAFA:
Rivas, R., Velzquez, E. Valverde, A., Mateos, P. F., Martnez-Molina, E. 2001. A two
primers random amplified polymorphic DNA procedure to obtain polymerase chain
reaction fingerprints of bacterial species. Electrophoresis. 22:1806-1089.
Rivas, R., Snchez-Marquez S., Mateos, P. F., Martnez-Molina, E., Velzquez, E. 2005.
+artelella mediterr"nea gen. nov., sp. nov., a novel -proteobacterium isolated from a
subterranean saline lake. nt. J. Syst. Evol. Microbiol. 55:955-959.
Saitou, N., Nei, M. 1987. The neighbor-joining method: a new method for reconstructing
phylogenetic trees. Mol. Biol. Evol. 4:406-425.
T - 240
Identificacin de una ce&a ca&a) de de!ada! alcano$ ai$lada del lao
Ma!tel 5Mallo!ca7%
glesias-Garca O., Garca-Fraile P., Velzquez E., Mateos P.F., Martnez-
Molina E. y Rivas R.

La cepa bacteriana MACL 04 fue aislada de un lago subterrneo salino, lago
Martel, en Mallorca. Es una bacteria halfila, Gam negativa, aerbica, catalasa
y oxidasa positiva y de forma cocoide.
Para su aislamiento se parti de una muestra de agua tomada del lago Martel a
una profundidad de 10 cm en condiciones estriles, que se filtr mediante un
filtro de membrana de 45 m. Dicha membrana se incub en medio YED con
un 5% de NaCl a 28C.
Para su caracterizacin fenotpica se prob la utilizacin de fuentes de carbono
en medio sinttico (Gauthier y col. 1992), observndose su capacidad para
crecer utilizando alcanos como nica fuente de carbono. Esta capacidad de
degradar alcanos puede tener en el futuro importantes aplicaciones
biotecnolgicas, especialmente en el campo de la biorremediacin. Por ello, se
procedi a su caracterizacin taxonmica.
En primer lugar, se obtuvo la secuencia completa de su ADNr 16S y su
comparacin con las secuencias depositadas en las bases de datos, mostr
que posiblemente pertenece al gnero Alcanivorax, que contiene cuatro
especies: A. ,orOumensis (Yakimov y col. 1998), A. =adensis (Bruns y Berthe-
Corti, 1999), A. venustensis (Fernndez Martnez y col. 2003) y A. dieselolei
(Liu y Shao, 200%), todas ellas capaces de degradar alcanos y aisladas de
medios marinos pero ninguna de lagos subterrneos. El anlisis filogentico de
la secuencia basado en el mtodo Neighbour-Joining indic que la especie ms
prxima a la cepa MACL04 es Alcanivorax dieselolei,que al igual que nuestro
aislado es capaz de utilizar como nica fuente de carbono un amplio rango de
alcanos.
Para confirmar la relacin filogentica de nuestra cepa con el gnero
Alcanivorax y la especie Alcanivorax dieselolei, se realizaron y compararon los
perfiles de LMW RNA, comprobndose que nuestro aislado pertenece a la
especie A.dieselolei. Sin embargo, la cepa MACL 04 es capaz de utilizar un
mayor nmero de carbohidratos como fuentes de carbono y adems presenta
diferencias en la secuencia del TS con respecto a la cepa tipo de esta especie.
BBLOGRAFA:
Bruns, A. y Berthe Corti, L. (1999) nt j Syst Bacteriol 49, 441-448.
J. Fernndez-Martnez, M.J. Pujalte, J. Garca-Martnez, M. Mata, E. Garay, y F.
Rodrguez-Valera. nt J Syst Evol Microbiol, Jan 2003; 53: 331 - 338.
MJ Gauthier, B Lafay, R Christen, L Fernandez, M Acquaviva, P Bonin, and JC Bertrand.
nt. J. Syst. Bacteriol., Oct 1992; 42: 568 - 576.
Chenli Liu and Zongze Shao. nt J Syst Evol Microbiol, 55: 1181 - 1186.
MM Yakimov, PN Golyshin, S Lang, ER Moore, WR Abraham, H Lunsdorf, and KN
Timmis. nt. J. Syst. Bacteriol., Apr 1998; 48: 339 - 348.
T - 241
Ca!acte!i)acin de ce&a$ de !;i)obia de c!ecimiento lento ai$lada$ a
&a!ti! de ndulo$ efecti"o$ de Lupinus albus
lvarez, E.
1
, Gantois, .
1
, Gomis, V.
1
, Rivas, R.
1
, Len-Barrios, M.
2
, Willems, A.
3
,
Mateos, P.F.
1
, Martnez-Molina, E.
1
y Velzquez, E.
1
1. (epartamento de +icro,iolog-a ' 4en5tica. Universidad de &alamanca. &alamanca. &pain. ..
(epartamento de +icro,iolog-a. Facultad de Farmacia. Universidad de la >aguna. 7eneri#e. &pain.
3. >a,orator' o# +icro,iolog' BVE10VC, Facult' o# &ciences, 4)ent Universit', >edegancOstraat 33,
6/9000 4ent, 6elgium. E/mail0alvare$estela%)otmail.com
La especie >upinus al,us es una leguminosa cuyo cultivo puede adaptarse a
suelos pobres con amplio margen de pH y salinidad. Su elevado contenido en
protenas la hace muy adecuada para ser incluida en piensos animales. En
algunas regiones, principalmente del Sur de Espaa, se utiliza como aperitivo
en alimentacin humana. Las especies de >upinus generalmente establecen
simbiosis con rhizobia de crecimiento lento del gnero 6rad'r)i$o,ium, aunque
recientemente se han descrito dos especies de no-rhizobia capaces de nodular
>upinus al,us en Espaa y Argentina, respectivamente, *)'llo,acterium tri#olii
(Valverde et al., 2005) y Dc)ro,actrum lupini (Trujillo et al., 2005). No obstante,
y a pesar del inters agronmico y ecolgico de las especies de >upinus, hay
pocos estudios sobre la biodiversidad de los rhizobia que nodulan esta
leguminosa. El objetivo de este trabajo ha sido la caracterizacin de cepas
aisladas a partir de ndulos efectivos de >upinus al,us cultivadas en suelos de
Salamanca y Len. Todos los aislados presentaron crecimiento lento en medio
conteniendo manitol como fuente de carbono. El anlisis de los perfiles de TP-
RAPD mostr la existencia de varios grupos. La secuenciacin del gen
ribosmico 16S y del espacio intergnico 16S-23S mostr que estas cepas
pertenecen a la especie recientemente descrita 6. canariense (Vinuesa et al.,
2005) que es capaz de nodular diferentes leguminosas herbceas y arbustivas
en las slas Canarias. Los resultados de este trabajo muestran que la especie
6. canariense no est limitada a los suelos de las slas Canarias y la necesidad
de llevar a cabo estudios de biodiversidad de rhizobia que nodulan una misma
leguminosa en varias localizaciones geogrficas.

Refe!encia$8
Vinuesa, P., Len-Barrios, M., Silva, C., Willems, A., Jarabo-Lorenzo, A.,
Prez-Galdona, R., Werner, D., Martnez-Romero, E. 2005. nt. J. Syst. Evol.
Microbiol. 55: 569 - 575.

Trujillo, M.E., Willems, A., Abril, A., Planchuelo, A. M. Rivas, R., Ludea, D.
Mateos, P.F., Martnez-Molina, E., Velzquez, E. 2005. Appl. Envir. Microbiol.
71: 1318-1327.

Valverde, A., Velzquez, E., Fernndez-Santos, F., Vizcano, N., Rivas, R.,
Mateos, P.F., Martnez-Molina, E., gual, J.M., Willems, A. 2005. nt. J. Syst.
Evol. Microbiol. En prensa
T - 276
Comunidade$ mic!obiana$ en aua$ de ;emodi#li$i$
Gomila M.
1
, Gil J.
2
, Gasc J.
3
, Lalucat J.
1
1
(epartamento de 6iolog-a e 1+E(EA B!&1!/U16C. Universitat de les 1lles 6alears. !ampus U16,
01.. *alma de +allorca.
.
&ervei de +icro,iologia, Hospital Universitari &on (uretaF
3
Unitat de
:e#rolog-a, Hospital &on >lHt$erF *alma de +allorca, EspaLa. E/mail0 marga.gomila%ui,.es
A pesar de los tratamientos a que se someten las aguas de hemodilisis para
conseguir niveles muy bajos de bacterias y de endotoxinas, en las
conducciones se establecen comunidades microbianas formando biopelculas.
Al madurar las biopelculas se desprenden bacterias planctnicas que
contaminan esta agua. Su calidad microbiolgica se determina por los niveles
de bacterias cultivables, pero no todas las bacterias son cultivables en los
medios utilizados normalmente, sobre todo si proceden de medios oligotrficos,
como son las aguas de hemodilisis. Algunos patgenos potenciales, as como
bacterias en el estado "viable pero no cultivable deben estudiarse por mtodos
independientes de cultivo, para completar la informacin obtenida mediante las
tcnicas de cultivo.

Se ha realizado un estudio de la comunidad presente en las aguas de
hemodilisis del Hospital de Son Lltzer (Palma de Mallorca) mediante el
anlisis del agua en cuatro puntos del circuito de distribucin. Se ha extrado y
purificado el DNA total a partir de 20l de muestra filtrada por una membrana de
0.22 mm, y se ha generado una genoteca del DNA ribosmico 16S mediante
amplificacin con cebadores especficos y clonacin en Esc)eric)ia coli con el
"TOPO TA cloning kit. Se han obtenido 274 clones, se han analizado
filogenticamente los RFLPs obtenidos al cortar los insertos con enzimas de
restriccin (7aI y Hae) y se ha realizado un anlisis filogentico de las
secuencias correspondientes. Aquellas que tenan similitudes superiores al 96-
97 % se asignaron a la especie o grupo filogentico ms prximo en las bases
de datos. 135 clones corresponden a proteobacterias (25% de la subclase beta,
Her,aspirillum y AIua,acterium; 13% de la subclase alfa, A#ipia,
&p)ingomonas, +et)'lo,acterium, ?)odopseudomonas y *aracoccus; 11 % de
la subclase gama, clon no cultivado DSSD31). Slo 3 clones pertenecen al
grupo de !'top)aga y 45 clones (16 %) al grupo de las cianobacterias.

En la presente comunicacin se discuten estos resultados con los obtenidos
previamente por cultivo, demostrndose la necesidad de ambos para tener una
imagen global de la formacin de biopelculas en aguas de hemodilisis, as
como del funcionamiento de estas comunidades.
T - 290
T!an$fe!encia ;o!i)ontal y di"e!$idad int!ae$&ec,fica de Salinibacter ruber
Pea, A.
1
, Amman, R.
2
, Rossell-Mora, R.
3
, y Antn, J.
1
1
(epartamento de Fisiolog-a, 4en5tica ' +icro,iolog-a. (ivisi;n de +icro,iolog-a. Universidad de
Alicante.BArantxa.*en'a%ua.esC.
.
+ax/*lancO/1nstitut #`r +arine +iOro,iologie. !elsiusstr. 1. (/
.8339. 6remen.
3
1nstituto +editerr"neo de Estudios Avan$ados B!&1!/U16C. Esporles, 1slas
6aleares.
Los miembros del gnero &alini,acter son bacterias halfilas extremas cuyo
hbitat son los cristalizadores de las salinas solares. Estos microorganismos
estn filogenticamente afiliados al Superphylum 6acteroidetes-!)loro,i (Antn
y col., 2002) y ms concretamente con ?)odot)ermus marinus, una bacteria
termfila, halfila moderada, aislada de ambientes marinos (Sako y col., 1996).
El hecho de que &. ru,er comparta su hbitat con halfilos extremos del
Dominio Arc)aea nos hizo plantearnos el estudio de transferencia horizontal de
genes entre Arc)aea y &. ru,er.Dado que en la actualidad disponemos del 80%
del genoma de &. ru,er M31
T
secuenciado, hemos realizado una bsqueda de
genes de origen potencialmente arqueano presentes en &. ru,er. Para poder
establecer el origen arqueano de un gen, seguimos tres criterios, establecidos
por Gophna y colaboradores (2004).
De todos los genes que daban mejor hit con genes de Arc)aea, slo 22
cumplan los requisitos anteriormente establecidos. Estos genes han sido
sometidos a una reconstruccin filogentica y se ha procedido a su
amplificacin mediante PCR en la coleccin de miembros del gnero
&alini,acter, aislados de diversos puntos geogrficos.Entre los genes
analizados, encontramos, por ejemplo, un transportador de potasio, presente
en el 77% de la coleccin, mientras que hay genes, como el gen PyrE (Orotate
fosforibosiltransferasa), que slo est presente en un 6% de la coleccin. Con
estos resultados pretendemos adems, analizar en mayor profundidad la
diversidad intraespecfica de &. ru,er y su historia evolutiva.

Antn9 3%9 y col% 2002. nt. J. Syst. Evol. Microbiol. @.8 485-491.
Gui-a=Bo-a!eu9 N%9 y col% 1996. Aquat. Microb. Ecol. ??8 215-227.
Go&;na9 0%9 y col% 2004. TRENDS Microbiol. ?.8 213-219.
SaHo9 2%9 y col% 1996. nt. Syst. Bacteriol. B/8 1099-1104.
T - 292
Deteccin de un &o$ible &$eudoen en el en ca$! en 3ibrio cholerae
Farfn, M., Miana-Galbis, D., Fust, M.C. y Lorn, J.G.
(epartament de +icro,iologia i *arasitologia &anitHries, Facultat de FarmHcia, Universitat de
6arcelona, Avda. 2oan YY111 s<n, 080.8 6arcelona, e/mail0 m#ar#an%u,.edu
En un trabajo previo de gentica de poblaciones, basado en el anlisis de
secuencias nucleotdicas multilocus en una coleccin de cepas pertenecientes
al serogrupo O139 de Vi,rio c)olerae (1), se detect una mutacin en el gen
cadA que codifica la enzima lisina descarboxilasa. Esta mutacin introduca un
codn stop que inactivaba la funcin del gen.
Maurelli y col. (2) han descrito que una gran deleccin en el cromosoma de
&)igella que implica la prdida del gen cadA, conduce a un incremento de la
virulencia. Los autores interpretan este incremento debido a la accin inhibitoria
que la cadaverina ejerce sobre la enterotoxina de &)igella. La ausencia del gen
cadA impide, en esta especie, la formacin de cadaverina y la enterotoxina deja
de estar inhibida.
Teniendo en cuenta que la mutacin localizada en el gen cadA inactivara dicho
gen y dado el posible papel de esta enzima en la enterotoxigenicidad, se ha
credo interesante llevar a cabo el presente trabajo, con una coleccin de cepas
toxignicas y no toxignicas de V. c)olerae, que incluye distintos serogrupos,
siguiendo dos aproximaciones:
El estudio de la actividad lisina descarboxilasa en cepas que presentan esta
mutacin localizada en el gen cadA.
El anlisis, desde el punto de vista de gentica de poblaciones, de la
frecuencia y distribucin de esta mutacin en la poblacin estudiada, mediante
la secuenciacin de la regin de gen cadA donde se localiza la mutacin.
Los resultados previos parecen indicar una falta de correlacin directa entre
cepas toxignicas y mutacin en el gen cadA.
(1) Farfn, M. ' col. (2002) 2. 6acteriol. 184, 1304-1313.
(2) Maurelli, A.T. ' col. (1998) *roc. :atl. Acad. &ci. U&A 95, 3943-3948.
T - 310
E$tudio de la "a!iabilidad fenot,&ica de ce&a$ de cam&o de 4aemophilus
parasuis%
Cerd-Cullar M., Aragn V.
!entre de ?ecerca en &anitat Animal B!?e&AC. !ampus de 6ellaterra/UA6. 08193/!erdan'ola del
VallKs. 6arcelona. marta.cerda%cresa.ua,.es
Haemop)ilus parasuis es un bacilo Gram negativo pleomrfico, NAD
dependiente, que pertenece a la familia *asteurellaceae. Se trata de una
especie bacteriana muy variable en cuanto a virulencia, ya que adems de ser
el agente causal de patologas porcinas (enfermedad de Glsser,
bronconeumona catarral purulenta, muerte sbita) puede ser aislado del tracto
respiratorio superior de cerdos sanos.
Con el fin de profundizar en el estudio de la variabilidad fenotpica de H.
parasuis, se analizaron 52 cepas mediante 9 pruebas bioqumicas (catalasa,
ureasa, indol, rafinosa, lactosa, arabinosa, manitol, ONPG y neuraminidasa)
que permiten discriminar entre las diferentes especies NAD dependientes de la
familia *asteurellaceae aisladas habitualmente de cerdo. Adems, se realiz la
prueba de la oxidasa. Las cepas incluan aislados de pulmn, cavidad nasal y
casos sistmicos, as como cepas de referencia. Todas estas cepas haban
sido previamente confirmadas como H. parasuis mediante la secuenciacin del
ADNr 16S. Se observ una notable variabilidad fenotpica, con un nmero
importante de cepas con actividad fermentativa que difera de la de la cepa tipo
de la especie. Se asignaron las cepas a 5 perfiles bioqumicos diferentes (A, B,
C, D, E). El A (29%) engloba a las cepas que presentan el mismo perfil
bioqumico que la cepa tipo de H. parasuis; el B (56%) agrupa a las cepas
arabinosa positivo; el C (4%) agrupa a las cepas rafinosa positivo; el D (4%) a
las manitol positivo; y el E (7%) a las rafinosa y arabinosa positivos,
pudindose diferenciar stas ltimas del Taxon C por ser neuraminidasa
positivas. Todas las cepas resultaron oxidasa positivo, aunque est descrito
que H. parasuis es variable para esta reaccin, presentando un 53% de
positividad. Por otro lado, el 83% de las cepas eran neuraminidasa positivo,
resultado que concuerda con lo descrito en la literatura. No se ha observado
una asociacin clara de un determinado fenotipo con la virulencia.
T - 312
E$tudio de ce&a$ de cam&o de Daemo&;ilu$ &a!a$ui$ mediante mutilocu$
$e:uence ty&in%
Olvera A., Aragn V.
!entre de ?ecerca en &anitat Animal B!?e&AC, 08193/!erdan'ola del VallKs B6arcelonaC &*A1:.
alexandre.olvera%cresa.ua,.es
Haemop)ilus parasuis es el agente etiolgico de la enfermedad de Glsser y
otras patologas porcinas. Por otro lado, tambin puede aislarse del tracto
respiratorio superior de animales sanos y por lo tanto, diferentes aislados de H.
parasuis pueden presentar distinta virulencia. Hasta el momento, las diferentes
cepas han sido principalmente clasificadas utilizando serotipado, pero esta
tcnica no resulta suficientemente discriminatoria para estudios
epidemiolgicos; adems de haber una cantidad significativa de aislados no
serotipables. Una tcnica alternativa para diferenciar cepas de campo es la
entero,acterial repetitive intergenic consensus PCR (ERC-PCR). Esta tcnica
permite diferenciar aislados a nivel genotpico, pero los resultados obtenidos
son difciles de comparar entre distintos laboratorios. Con el objetivo de
conseguir un mtodo de diferenciacin de cepas que no presentara
ambigedades, desarrollamos un sistema de multilocus seIuence t'ping
(MLST). La seleccin de genes conservados para su uso en el MLST estuvo
restringida por el poco conocimiento que se tiene del genoma de H. parasuis.
En la bibliografa se hallaron cebadores universales para los genes de la
cadena ATP sintasa (atp(), subunidad de la RNA polimerasa (rpo6) y
elfactor de inicio de la traduccin F-2 (in#6). El locus malato deshidrogenasa
(md)) se amplific usando los cebadores del MLST de H. in#luen$ae sin
modificar. Finalmente, los genes 6-phosphogluconato deshidrogenasa (6pgd),
fumarato reductasa (#rd), y glyceraldehido-3-fosfato deshidrogenase (g3pd), se
amplificaron utilizando cebadores diseados por homologa con los genes
correspondientes de otras *asteurellaceae. Previamente, se haba demostrado
que los enzimas Mdh, 6Pgd y Frd de H. parasuis presentaban diferentes
movilidades electroforticas utilizando el mtodo conocido como multilocus
en$'me electrop)oresis (MLEE). Fragmentos de entre 500 y 600 pares de
bases fueron amplificados, secuenciados y alineados para ser analizados. Las
condiciones de amplificacin y secuenciacin se optimizaron con once cepas
de referencia y posteriormente se aadieron al estudio cepas de campo. El
nmero de alelos por locus presentaba una amplia variabilidad entre genes. A
travs de los perfiles allicos resultantes, las cepas analizadas se asignaron a
diferentes tipos secuenciales (seIuence t'pe), que en algunos casos resultaron
ser nicos, y se procedi a realizar un anlisis de tipo eBurst. Los resultados
obtenidos animan a ampliar el estudio a ms cepas de campo y a validarlo para
su uso en estudios epidemiolgicos y la identificacin de posibles clones de H.
parasuis.

T - 316
4alorubrum e00emoulense $&% no"%9 una nue"a a!:uea ;alfila e-t!ema
ai$lada de la launa E))emoul9 A!elia%
Kharroub, K.
1,2
, Monteoliva-Snchez, M.
1
, Quesada, T.
1
, Fuentes S.
1
,
Boulahrouf, A.
2
, Ramos-Cormenzana, A.
1
1. (epartamento de +icro,iolog-a. Facultad de Farmacia. Universidad de 4ranada. EspaLa. ..
(:A7AA, Facult5 des &ciences. Universit5 !onstantine. Algeria. mmonteol%ugr.es
Las arqueas halfilas extremas se clasifican dentro de la familia
Halo,acteriaceae. Se encuentran en ambientes hipersalinos tales como el Mar
Muerto, lagos salados, salinas solares, lagunas saladas. Son interesantes
desde el punto de vista industrial por las aplicaciones que actualmente se
realizan usando estos microorganismos, por ejemplo para la produccin de b-
caroteno, poli b-hidroxialcanoatos, etc...
Los miembros del gnero Haloru,rum estn extensamente distribuidos en los
ambientes salinos y juegan un papel muy importante en el ecosistema dentro
del ciclo del carbono y del nitrgeno.
Las muestras utilizadas en el presente trabajo fueron recogidas de la laguna
salada de Ezzemoul, localizada en el noroeste de Argelia. A partir de ellas se
aisl la cepa 5'1
T
. Dicha cepa fue sometida a un estudio taxonmico completo
realizndose una batera de pruebas morfolgicas, fisiolgicas, bioqumicas,
junto con pruebas de espectro de crecimiento a diferentes temperaturas,
concentraciones de sal y rangos de pH, adems de pruebas de sensibilidad a
antibiticos. El estudio se complet con la secuenciacin del gen del 16S rRNA,
determinacin del contenido G+C (mol %) y la hibridacin DNA-DNA de la cepa
5'1
T
con especies estrechamente relacionadas.
Los resultados obtenidos en este estudio nos llevan a concluir que se aisl una
nueva especie de arquea halfila extrema. Este aislamiento se caracteriza por
ser mvil, Gram-negativo, crecer entre el 15% y el 25% de NaCl. La
concentracin ptima de crecimiento es 20% de NaCl. El rango de pH en el que
se desarrolla oscila entre 6.5 y 9, pero su ptimo se encuentra entre 7-7.5.
Requiere Mg
2+
para crecer. El contenido G+C es de 61.9 mol%. Los anlisis
filogenticos basados en la comparacin de la secuencia 16S rDNA revelaron
que la cepa 5'1
T
se agrupaba con el gnero Haloru,rum. El bajo valor de la
hibridacin DNA-DNA justific la clasificacin de esta cepa como una nueva
especie de arquea halfila exrema para la que se propone el nombre de
Haloru,rum e$$emoulense sp.nov.
T - 370
E$tudio de la e"olucin de la mic!obiota fecal en ni6o$ du!ante el &!ime!
a6o de "ida%
Ferrer-Cebrin R.
1
, Vieites J.M.
2
, Monteoliva-Snchez M.
1
, Gil A.
2
, Ramos-
Cormenzana A.
1
(po. +icro,iolog-a
1
. (po. 6ioIu-mica ' 6iolog-a +olecular
.
. Facultad de Farmacia. Universidad de
4ranada. !ampus Universitario de !artu=a s<n. !.*.1801. r#c196%)otmail.com
Tras el nacimiento comienza la colonizacin del tracto gastrointestinal, estril
hasta ese momento. Despus del parto, el tracto gastrointestinal del recin
nacido empieza a ser colonizado por una gran diversidad de especies
microbianas. Conforme aumenta la edad, la comunidad microbiana en el tracto
intestinal se estabiliza (1).
El objetivo del presente trabajo es el estudio de la evolucin de la microbiota
fecal en nios sanos durante el primer ao de vida. Para dicho estudio, se
tomaron seis muestras fecales a 20 nios sanos a lo largo de su primer ao de
vida y se procedi al anlisis y recuento de los grupos microbianos ms
representativos de la microbiota fecal humana mediante cultivos especficos
para microorganismos aerobios, anaerobios, enterobacterias, bifidobacterias,
lactobacilos, clostridios, mohos y levaduras.
Los resultados obtenidos en el estudio no mostraron grandes diferencias en la
evolucin de los diferentes grupos microbianos, aunque cabe destacar la
disminucin en la concentracin de lactobacilos conforme aumenta la edad de
los nios. Tambin se apreci ausencia total de mohos y una baja
concentracin de levaduras en todas las muestras estudiadas.

Los resultados de este trabajo han sido financiados por el Proyecto NFABO
QLK1-CT-2002-02606 de la Unin Europea.

(1) Christine F. Favier, Willem M. de Vos, Antn D.L. Akkermans. Development
of bacterial and bifidobacterial communities in feces of newborn babies.
Anaerobe ( 2003). 219-229.
T - 384
.racilibacillus orientalis $&% no"%9 una nue"a e$&ecie ;alfila mode!ada
ai$lada en Monolia Inte!io!9 C;ina
Carrasco, .J., Mrquez, M.C. y Ventosa, A.
4101. &evilla. E/mail0 i=imene$%us.es
El gnero 4racili,acillus fue creado por Wain y col. (1999) y hasta el
momento, tan slo incluye dos especies de bacilos Gram positivos
esporulados, 4. )alotolerans y 4. dipsosauri. En el curso de un screening
realizado en distintos lagos salados de Mongolia nterior (China), encaminado a
caracterizar bacterias halfilas moderadas con posible inters industrial, se
aislaron tres cepas (designadas como XH-63, XH-62 y EJ-15) que tras estudios
de secuenciacin del gen ARNr 16S, mostraron estar relacionadas desde un
punto de vista filogentico con la especie 4racili,acillus dipsosauri, si bien el
porcentaje de semejanza encontrado entre las secuencias de las tres cepas
aisladas y la de 4. dipsosauri, fue inferior al 95,8%. A estas cepas se les
realiz un estudio fenotpico que incluy la realizacin de pruebas morfolgicas,
fisiolgicas, bioqumicas, nutricionales y de sensibilidad a distintos antibiticos.
Adems, se determin el tipo de pared celular de las mismas, el contenido en
bases guanina ms citosina (G+C) de su ADN, el tipo de quinonas y la
composicin en cidos grasos y lpidos polares.

Las tres cepas aisladas son bacilos Gram-positivos, mviles, aerobios estrictos
y formadores de esporas. Crecen en medios entre 0,9 y 20 % de sales totales y
ptimamente en medios con un 10 % de sales, a 37 C y a valores de pH de
7,5. Dan negativa la prueba de la oxidasa y positiva la produccin de catalasa.
El contenido en G+C de su ADN oscila entre 35,1 y 37,5 moles %, presentan
cido meso-diaminopimlico en su pared celular y menaquinonas con siete
unidades isoprenoides (MK-7) como componentes mayoritarios. Por otro lado,
la composicin en cidos grasos y lpidos polares de las tres cepas son
similares a las descritas para las especies del gnero 4racili,acillus.

Los resultados obtenidos en este estudio indican que las tres cepas aisladas
poseen caractersticas diferentes a las de otros microorganismos
caracterizados previamente y estn suficientemente alejadas desde el punto de
vista filogentico de las especies de 4racili,acillus descritas hasta la fecha,
como para constituir una nueva especie, para la que proponemos el nombre de
4racili,acillus orientalis sp. nov.

Wain, M., Tindall, B. J., Schumann, P. & ngvorsen, K. (1999). 4racili,acillus
gen. nov., with description of 4racili,acillus )alotolerans gen. nov., sp. nov.;
transfer of 6acillus dipsosauri to 4racili,acillus dipsosauri comb. nov., and
6acillus salexigens to the genus &ali,acillus gen. nov., as &ali,acillus
salexigens comb. nov. 1nt. 2. &'st. 6acteriol. 49, 821831.
4IROLOGA
V - 50
De$a!!ollo y e"aluacin de t'cnica$ de deteccin in situ del "i!u$ de
linfoci$ti$ en culti"o$ celula!e$%
Ferro P., Cano ., Garca-Rosado E., Alonso M.C., Castro D. y Borrego J.J.
(epartamento de +icro,iolog-a, Facultad de !iencias, Universidad de +"laga, !ampus
Universitario 7eatinos, s<n. .901 +"laga. ==,orrego%uma.es
La enfermedad de linfocistis es una de las enfermedades pisccolas ms
frecuentes en las instalaciones mediterrneas de acuicultura marina. Su agente
causal es el virus de la enfermedad de linfocistis (LCDV), miembro del gnero
>'mp)oc'stivirus, uno de los cuatro gneros descritos en la familia 1ridoviridae.
Los peces afectados por esta enfermedad presentan pequeos ndulos de
color blanquecino, localizados preferentemente en la superficie del cuerpo y
aletas. Se trata de una infeccin crnica auto-limitada, que suele ocasionar
brotes sucesivos en una misma poblacin.
La deteccin del virus in situ es una herramienta til para estudios de
patognesis, pero tambin puede constituir una importante tcnica de
diagnstico. El objetivo del presente trabajo ha sido el desarrollo y evaluacin
de tcnicas in situ que permitan la deteccin especfica del LCDV en cultivos
celulares inoculados utilizando la lnea SAF-1 (Bejar et al., 1997). Se han
estudiado dos mtodos inmunolgicos: inmunofluorescencia indirecta (F) e
inmunohistoqumica (HQ), utilizando un suero policlonal frente a una protena
estructural del virin de 60,1 kDa. Paralelamente se evalu la tcnica de
hibridacin in situ (HS) utilizando como sonda un fragmento de 270 pb del gen
que codifica la protena mayoritaria de la cpside. El marcaje de la sonda se
realiz mediante PCR usando nucletidos marcados con digoxigenina.
Se optimizaron parmetros que pueden influir en las tcnicas ensayadas, tales
como el tipo de permeabilizacin y fijacin, o las condiciones de hibridacin. De
los protocolos ensayados para la fijacin y permeabilizacin de las clulas, el
que proporcion mejores resultados para las tcnicas inmunolgicas fue el que
utiliza el fijador (formalina neutra tamponada) junto con el permeabilizante
(Tritn X-100 al 0,3%); en cambio para la HS el mejor resultado se obtuvo al
incrementar la concentracin del permeabilizante hasta el 3% durante 30 min
una vez eliminado el fijador.
Estas tcnicas han permitido la deteccin de antgenos vricos (F e HQ) y
genoma viral (HS) en clulas SAF-1 inoculadas con aislados de LCDV
procedentes de distintas especies de peces. Todos los aislados fueron
reconocidos con la misma intensidad por los anticuerpos o la sonda. Las
tcnicas de HS e HQ presentan similar sensibilidad, haciendo posible la
deteccin del virus en cultivos celulares inoculados con 10
3
TCD
50
/ml. La
tcnica de F present una mayor sensibilidad, siendo posible la deteccin del
virus en cultivos de clulas SAF-1 inoculadas con tan solo 10
1
TCD
50
/ml. En
todos los casos las clulas fueron procesadas a los 5 das post-inoculacin.
Bejar J, Borrego JJ & Alvarez MC. 1997. A continuous cell line from the cultured
marine fish gilt-head sea bream (&parus aurata, L.) Aquaculture, 150: 143-153.
Virolog-a 43
V - 85
Deteccin del "i!u$ de la ;e&atiti$ E en mue$t!a$ &a!eada$ de $ue!o y
;ece$ de ce!do$ de la Comunidad 4alenciana
Fernndez-Barredo S., Galiana C., Garca A., Vega S., Gmez M.T., Prez-
Gracia M.T.
(epartamento de Atenci;n &anitaria, &alud *R,lica ' &anidad Animal. Facultad de !iencias
Experimentales ' de la &alud. Universidad !ardenal Herrera/!EU. +oncada, Valencia.
teresa%uc).ceu.es
NTRODUCCN
La hepatitis E (HE) constituye la principal causa de hepatitis no A no B que se
transmite de forma entrica en pases en vas de desarrollo, generalmente de
forma epidmica. La mortalidad asociada a esta infeccin suele ser escasa,
pero puede aumentar hasta el 25% en mujeres gestantes en el ltimo trimestre
del embarazo. Se ha descrito en reas industrializadas una prevalencia
sorprendentemente elevada de anticuerpos entre la poblacin que no se
relaciona con los pocos casos detectados de hepatitis E en pacientes sin
historial de viaje a zonas endmicas. El ganado porcino se ha revelado en los
ltimos aos como un importante reservorio del virus. Por ello, el objetivo de
este estudio es determinar el status sanitario de las granjas porcinas de la
Comunidad Valenciana, en cuanto a la presencia del VHE y las etapas en las
que los cerdos son ms infectantes para otros animales e incluso para el
hombre.
MATERAL Y MTODOS
Se obtuvieron muestras pareadas de suero y heces del mismo animal en el
mismo momento, en un total de 131 cerdos distribuidos en 24 explotaciones
porcinas de la Comunidad Valenciana. Las heces se obtuvieron directamente
del recto y se depositaron en un envase estril. El suero se obtuvo por puncin
de la vena subclavia en condiciones aspticas. Las muestras de suero y heces
se sometieron a extraccin de ARN y posteriormente a retrotranscripcin y
nested-PCR, para posteriormente ser visualizadas en un gel de agarosa al 2%.
RESULTADOS Y DSCUSN
Se detect la presencia de ARN vrico en suero y/o heces de 30 animales
(22,9%), aunque en ninguno de ellos se observaron signos clnicos. La tasa
ms elevada de prevalencia se obtuvo en cerdos entre las 9 y las 12 semanas
de vida, tanto en las muestras de heces como en las de suero con un 57,14%.
El VHE se detect en ambos tipos de muestra a la vez en 9 animales, en su
mayora lechones entre las 8 y las 12 semanas de vida. Este es el primer
estudio en Espaa con un tamao muestral tan elevado y el primero que se
realiza tomando muestras pareadas de suero y heces del mismo animal en una
poblacin infectada naturalmente por el VHE. Ello nos ha permitido detectar en
qu fases productivas los cerdos son ms infectantes para otros animales o
para el hombre, adems del problema aadido de la utilizacin de los purines
como fertilizantes que podran contaminar acuferos y fuentes de agua de
bebida.
Virolog-a 44
V 246
Li$ina$ de fao$8 una nue"a alte!nati"a antibitica
Lpez, R., Garca, P. y Garca, E.
(epartamento de +icro,iolog-a +olecular, !entro de 1nvestigaciones 6iol;gicas, !&1!, +adrid. E/
mail0ru,en%ci,.csic.es
El cambio sufrido en el patrn de las resistencias bacterianas ha hecho que
desde hace unos aos se piense de nuevo en los fagos como una alternativa
teraputica al uso de los antimicrobianos empleados actualmente. Se
presentaen este trabajo el estado del arte sobre la utilizacin de los fagos y, en
particular, del uso de alternativas teraputicas tales como el empleo de las
enzimas lticas codificadas por los fagos para el tratamiento de &treptococcus
pneumoniae. Las enzimas lticas o muren-hidrolasas son protenas que
destruyen la pared celular de las bacterias. El empleo de dos de estas enzimas,
aisladas y caracterizadas en nuestro laboratorio (la amidasa Pal, codificada por
el fago Dp-1 y la lisozima Cpl-1, codificada por el fago Cp-1), permiti a
Fischetti y colaboradores erradicar el estado portador en la nasofaringe de
ratones infectados por neumococo y acuar el trmino en$i,i;ticos para estas
lisinas.
Recientemente, en nuestro laboratorio se han ampliado estos estudios
mediante el empleo de un modelo de sepsis murina con el fin de estudiar la
capacidad de las enzimas lticas de los fagos de neumococo para curar la
bacteremia producida en los ratones por la cepa &. pneumoniae 541 de
serotipo 6B. Los ratones que fueron tratados 1 h despus del desafo
bacteriano con Pal o Cpl-1 (200 mg; 1,100 unidades) fueron protegidos frente a
la infeccin. La bacteremia en ratones no protegidos alcanz una concentracin
en sangre >10
7
CFU/ml mientras que en los ratones protegidos por el
enzibitico el nmero de bacterias fue, en las primeras horas despus del
tratamiento, <10
6
UFC/ml y posteriormente no se detectaron bacterias.
Significativamente, se puso de manifiesto un efecto sinrgico mediante el
empleo simultneo de Pal y Cpl-1 ya que una dosis de 2.5 g de cada uno de
los enzibiticos bast para proteger a los ratones infectados. Recientemente,
hemos comprobado que el empleo de la enzima autoltica mayoritaria de
neumococo (amidasa LytA) tambin produca un efecto protector. Estos
resultados representan la primera aportacin experimental sobre el uso de los
enzibiticos en un modelo de sepsis y estimulan el anlisis futuro de otras
estrategias experimentales que incluyen el empleo de enzimas quimricas, ya
desarrolladas por nuestro grupo, que podran ser de utilidad teraputica en
otros microorganismos patgenos. La alta especificidad de especie y la
aparente inocuidad, en animales de experimentacin abre vas alternativas o
complementarias para combatir las enfermedades infecciosas con la ventaja
aadida de no afectar a la microbiota favorable al husped.

Virolog-a 43
V - 275
Deteccin de la infeccin con el "i!u$ Maedi 4i$na &o! ELISA y +CR en
anado o"ino e$tabulado y $ometido a in$eminacin a!tificial
Reina R
1
, Glaria
1
, Lucas N
1
, Cianca S
1
,

de Andrs X
1
, Crespo H
1
, Ganadero
T
2
, Lujn L
3
, Biescas E
3
,

Prez MM
3
, Berriatua E
4
, Amorena B
1
,

de Andrs D
1

1
1nstituto de Agro,iotecnolog-a, !&1!/U*:A +utilva 6a=a, :avarraF
.
Villava, :avarraF
3
Facultad de
Veterinaria, Universidad de Sarago$a, Sarago$aF
4
1nstituto Vasco de 1nvestigaci;n ' (esarrollo
Agrario B:E1PE?C. &anidad Animal, (erio, Vi$ca'aF ramses.reina%unavarra.es
El virus maedi visna (VMV) causa una enfermedad lenta multisistmica en
pequeos rumiantes y presenta una alta prevalencia en distintos pases,
incluyendo Espaa. La va horizontal de contagio es importante, aunque
especficamente la transmisin del virus va semen no se ha estudiado en
ovinos. Actualmente se emplean ELSAs de nueva generacin para la
deteccin de individuos seropositivos, pero las oscilaciones en el ttulo de
anticuerpos en sangre y el periodo requerido para su aparicin, hacen
necesario desarrollar mtodos de deteccin del propio virus (PCRs). Para
estudiar el valor diagnstico de un mtodo ELSA y diferentes PCRs
desarrolladas para distintas regiones del provirus, hemos utilizado 142 ovinos,
distribuidos en 4 grupos (A-D), procedentes de explotaciones con baja
seroprevalencia (0-10,5%) y mantenidos aislados en instalaciones
independientes. Mediante anlisis peridicos por ELSA y PCR, se demostr
que las PCRs detectaban animales infectados entre los seronegativos. Algunas
de estas infecciones se confirmaron en etapas subsiguientes mediante ELSA.
Del grupo de hembras A, se eliminaron las infectadas y el resto, libre de VMV,
se utiliz en un experimento de inseminacin artificial (.A.) para determinar si
el semen transmita el virus. En otros lentivirus se ha demostrado que el semen
puede hallarse infectado y transmitir la infeccin. Dado que algunos sementales
ovinos de alto valor gentico pueden estar infectados (segn ELSA y PCR en
sangre), es importante averiguar si su semen puede utilizarse en .A. sin
transmitir el VMV, y si esto ocurre cuando el semen es PCR negativo. Para ello,
se utilizaron dos sementales, uno negativo (ELSA y PCR) en sangre y semen y
otro asintomtico establemente positivo (ELSA y PCR) en sangre pero PCR
negativo en semen. En ambos sementales se verific la negatividad del semen
por PCR utilizando diferentes mtodos de aislamiento, fraccionamiento y
extraccin de ADN. Tambin se realiz un estudio citolgico del semen y se
verific la ausencia de infeccin mediante inmunocitoqumica (protena vrica
p25). Tras .A. de 19 ovejas con el semen de estos moruecos (9 de ellas con el
del semental seropositivo) y su anlisis peridico (a los -15, -2, 0, 1, 4, 6, 8, 11,
13, 15, 19, 22, 26, 30, 41, 56, 85, 103, 124, 160, 171, 202 y 280 das de la .A.),
se observ en todas ellas negatividad a ELSA y PCR, siendo por tanto el
riesgo epidemiolgico de transmisin muy reducido en dichas condiciones. Las
PCRs empleadas, incluyendo una PCR semi-cuantitativa desarrollada en este
estudio para estirpes de campo, permiten la seleccin de semen libre de virus y
de sementales con baja carga vrica en sangre.
Virolog-a 46
V - 336
De&atiti$ A8 la "a!iabilidad de un "i!u$ in"a!iable%
Pint, R.M., Aragons, L., Costafreda, M.., Snchez, G. y Bosch A.
4rupo de Virus Ent5ricos, (epartamento de +icro,iolog-a, Facultad de 6iolog-a, Universidad de
6arcelona. (iagonal, 643, 080.8 6arcelona. E/mail0 rpinto%u,.edu
El virus de la hepatitis A (HAV) pertenece al gnero Hepatovirus dentro de la
familia *icornaviridae, y a diferencia de muchos de los miembros de dicha
familia su variabilidad antignica es prcticamente nula, con la existencia de un
nico serotipo. Ello ha llevado a la generalizacin de considerar al HAV como
un virus invariable. Como virus RNA, el HAV posee una RNA polimerasa RNA
dependiente carente de capacidad correctora, y ello incide en la generacin de
un espectro de mutantes o quasiespecie durante la replicacin del RNA vrico.
Sin embargo, lo que s es cierto es que la mayora de mutaciones detectadas, a
nivel de la regin codificante para las protenas estructurales de la cpside, son
mutaciones sinnimas, con una frecuencia similar a la de otros picornavirus,
mientras que las mutaciones no-sinnimas se detectan en un orden de
magnitud inferior. Cules son los motivos que hacen que el HAV soporte peor
que otros virus relacionados las sustituciones aminoacdicas en su cpside?
A priori los codones sinnimos para un aminocido deberan presentar
frecuencias similares en el genoma del virus. Sin embargo existe un fuerte bias
en el uso de codones en el genoma del HAV, con codones abundantes y
codones raros para la prctica totalidad de aminocidos. Se ha propuesto que
los codones raros se usan poco porque su tRNA homlogo es poco abundante
dentro del pool de tRNAs. La funcin del uso de codones raros sera la de
enlentecer la traduccin proteica debido a que es probabilsticamente ms
difcil el apareamiento del codn raro con su anticodn-tRNA homlogo. De
hecho, en el genoma estructural del HAV los codones raros estn
estratgicamente situados en los extremos carboxi-terminales de los elementos
estructurados de la protena, modulando la velocidad de traduccin y
permitiendo un correcto plegamiento proteico. Si tenemos en cuenta que el
60% de los codones raros del genoma estructural del HAV codifican para
aminocidos que se hallan situados en la superficie de la cpside y que pocas
mutaciones no-sinnimas dan lugar a la sustitucin de un aminocido por otro
aminocido tolerable y codificado por un codon del mismo nivel de rareza,
podemos hipotetizar que el bias en el uso de codones contribuye a la poca
variabilidad fenotpica de la cpside del HAV. El HAV presenta fuertes
constricciones estructurales en su cpside, y cuando hablamos de
sustituciones aminoacdicas tolerables implicitamente inclumos el efecto de la
seleccin sobre la variabilidad del HAV. Un ejemplo de esto lo encontramos en
la seleccin negativa que el propio ciclo biolgico del virus puede ejercer sobre
la variabilidad de la cpside como puede ser la seleccin de cpsides que
escapen a la interaccin con los eritrocitos para evitar la eliminacin del virus
presente en sangre y la inviabilidad de variantes de unin.
Virolog-a 4

NDICE DE A0TORES
Abalde, J..............................................................209
Abelln, A............................................................101
Abreu Acosta, N..................................................259
Abriouel H..................................................31, 92, 94
Abrusci, C............................................................116
Acero V................................................................260
Acosta, F..............................................................355
Acosta, R...........................................................3, 25
Adelantado, C...............................49, 188, 189, 222
Ageitos J A...........................................................284
Ageitos, J. M........................................................282
Ageitos, J.M.........................................................281
Aguiar Gonzlez, E..............................................259
Agut M....................................................................32
Agut, M...................................................................15
Ansa J.A.............................................................298
Aira, A.M..............................................................276
Aladuea, A.................................................151, 353
Alarcn, B..............................................................69
Alba-Casado, J.C................................................449
Albar, J.P.............................................................345
Albi-Rodrguez T..................................................436
Alcaide, E.............................................................239
Alcaide,E..............................................................240
Alcal Martnez, B...............................................348
Alcoba-Florez J....................................................148
Alegre, M.T............................................................37
Alemn, A....................................................305, 378
Alimova, F. K.......................................................215
Allaert, C..............................................................410
Almela Ruiz L..................................................86, 87
Alonso J.L............................................................175
Alonso JM............................................................391
Alonso M.C..........................................................473
Alonso-Calleja, C.......................................12, 47, 85
Alonso-Casajs, N...............................................337
Alonso-Monge R..................................................398
Alonso, J.L...................................................176, 177
Alonso, J.M............................................................53
Alonso, M.................................................................2
Alonso, R...............................................62, 160, 360
Alvarez D.....................................................324, 458
lvarez de Cienfuegos G....................................162
lvarez J..............................................................164
lvarez M.L..........................................................102
lvarez S.............................................................143
lvarez, A........................................................18, 19
Alvrez, C..............................................................93
lvarez, E............................................................462
lvarez, J.....................................................158, 196
lvaro Benito, M..................................................348
Amann, R.....................................................446, 453
Amaro Torres, F..................................................432
Amaro, C..............................................................237
Amat, M.A............................................................142
Ambel Carracedo, M.P........................................201
Amigo Lozano, M.L..............................................167
Amman, R............................................................464
Amorena B...........................................................476
Amors, .....................................................176, 177
Anaya B...............................................................163
Anaya ...................................................................32
Andaluz, E...........................................................395
Andaluz, E...........................................................400
Anderson A..........................................................126
Anderson, R.........................................................261
Andrade, M.J.....................................4, 90, 105, 106
Andrs M.T..........................................................150
Antizar-Ladislao B...............................................203
Antn, J.......................................442, 446, 453, 464
Antn, N.......................................................286, 287
Aparicio, J.F.................................................286, 287
Apel AK................................................................306
Aragn V......................................................466, 467
Aragons, L.........................................................477
Arahal D. R..........................................................447
Arana DM.............................................................398
Arana, ................................................................256
Aranaz A..............................................................164
Aranaz, A.....................................................158, 196
Aranda E........................................................64, 111
Aranda F.J...........................................................206
Aranda, E.................................................10, 98, 110
Araque, ..........................................................16, 17
Arajo L................................................................339
Araujo, R..............................................................238
Arco N..................................................................198
Arenas, R...............................................................38
Argudn, M. A.......................................................168
Arias, J.M.1..........................................................193
Arias, M.E............................................127, 129, 292
Arijo, S.................................................................274
Arocha Henrquez, F.J........................................109
Arosemena L.......................................................188
Arosemena, L..............................................189, 222
Arranz, J. L..........................................................182
Arrebola, E...........................................................414
Arregui, L.............................................................433
Arroyo, M.............................................................151
Arruga, M. V.........................................................183
Arst H...................................................................325
Arst, H.N..............................................................332
Artolozaga, .........................................................261
Ascaso, C............................................................195
Asensio, M. A...........................................................3
Asensio, M.A......................................................2, 25
Astudillo A............................................................143
Aubourg S.P..........................................................79
Avelino F.F...........................................................210
Avendao-Herrera R...................................268, 269
Ayala Serrano J...................................................317
Ayala Serrano J.A................................................321
Ayala Serrano, J..................................................318
Ayala Serrano, J.A...............................................333
Ayala, J................................................................134
Ayo, B..................................................................261
Ayuso, A...............................................................146
Aznar, R...........................................................23, 69
Badosa, E.(1).........................................................63
Baena, M............................................................119
Balado M..............................................................351
Balado, M.............................................................376
Balboa, S.............................................................262
Ballart Sistach, D.................................................259
lndice de autores 48
Ballesta J.P.G......................................................344
Ballesta, J.P.G.............................................359, 368
Ballest, E............................................................265
Balsalobre, L........................................................137
Bances Gonzlez M......................................82, 270
Baeras, L.............................................................63
Baos S.......................................................307, 329
Baquero F............................................................458
Baquero, F...........................................................319
Barba, V...............................................................285
Barb J.................................................................372
Barbern, A..........................................................450
Barbs, C...............................................................55
Brcena C............................................................152
Barcina, ..............................................................256
Barja J.L...............................................................262
Baroja-Fernndez, E...........................................337
Barragn MJ........................................................363
Barrasa, J.M........................................................224
Barreiro C............................................................300
Barriuso-glesias M..............................................300
Barros-Velzquez J.........................................78, 79
Barros-Velzquez, J............................................441
Bartolom, R........................................................144
Bartolom, T..........................................................98
Beaz R.................................................................262
Becerril JM...................................................191, 192
Bjar,V.................................................................439
Belloch C.............................................................409
Ben Omar N...............................................31, 92, 94
Benito M. J.............................................................64
Benito M.J............................................................111
Benito, M.J...............................................10, 98, 110
Benz, R................................................................169
Berenguer, J........................................355, 356, 358
Bergua Burgos, J.................................................167
Beringola M.L.......................................................179
Bermejo C............................................................229
Bermejo F............................................................197
Bermdez, E..................................................2, 3, 25
Bernab M...........................................................234
Berncer ............................................................176
Berncer, ...........................................................177
Bernardo D..........................................................233
Bernardo, A...............................................18, 19, 73
Bernreiter A..........................................................339
Berriatua E...........................................................476
Berzal-Herranz A.................................................399
Beteta A...............................................................166
Bezos J................................................................164
Bezos, J.......................................................158, 196
Biescas E.............................................................476
Bjrnholm T.........................................................384
Blanch AR............................................................264
Blanch, A.R..................................................263, 265
Blanch, M.............................................................419
Blanco F.......................................................191, 192
Blanco J...............................................................397
Blanco Lpez, Y..........................................415, 421
Blanco M.T...........................................................166
Blanco, J..............................................................353
Blanco, J.E...........................................................353
Blanco, M.............................................................353
Blanco, Y.............................................................419
Blas, E..................................................................358
Blasco R...............................................................124
Blasco, J.M..........................................................375
Blasco, L........................................................22, 441
Blasco,L...............................................................338
Blzquez B...........................................................363
Blzquez, B..........................................................328
Bloemberg, G.......................................................420
Blume, V..............................................................361
Bofill, C.................................................................289
Bolumar T............................................................293
Bonjoch X.............................................................264
Bonjoch, X...........................................................265
Bordons, A.......................................................16, 17
Borge, C...............................................................361
Borges, N.............................................................159
Borrajo, R...............................................................48
Borrego J.J..........................................................473
Borrego Macas .................................................350
Bosch A................................................................477
Bosch R...............................................120, 178, 365
Botella, J..............................................................119
Boulahrouf, A.......................................................468
Bozal N................................................................204
Bravo D..................................................................67
Brett Finlay B.......................................................230
Briones V.............................................................154
Brito, B.................................................................428
Bujalance, C..................................................89, 141
Bujalance, M.C......................................................26
Bussink H.............................................................325
Cabado, A. G.........................................................93
Cabanillas, B........................................................435
Cabel, ...................................................................44
Cabrera, F. H. A..................................................215
Cceres P............................................................102
Calera, A..............................................................256
Calero-Rueda, O.................................................285
Calo-Mata P...........................................................78
Calvo C................................................................118
Calvo M.A..............................................................35
Calvo, M.A.............................................................49
Calvo, MA............................................188, 189, 222
Camacho A............................................................31
Camarero S.........................................................181
Campos C.A....................................................78, 79
Caada Moreno, P................................................99
Canals R..............................................................309
Canals, R.............................................239, 311, 312
Caas Ana .........................................................181
Candela L.............................................................207
Cano ..................................................................473
Cansado, J...........................................................374
Cantalejo Dez, M.J...............................................65
Cantn R..............................................................458
Cantn, R.............................................................145
Cantoral, J.M.......................................................232
Capita, R....................................................12, 47, 85
Carballo, J........................................................46, 48
Carb, M..............................................................232
Carmona M..........................................................363
Carmona, M.........................................................328
Carnicero A..........................................................126
Caro, ............................................................66, 112
Carrasco, .J........................................................470
Carret, R........................................................16, 17
Carrillo Mndez .................................................133
Carrillo Rosa, F.J...............................................122
Carro Garca, L....................................................459
Casado, E.M....................................................4, 105
Casermeiro, M.A..................................................199
Casqueiro F.J......................................................342
Casqueiro J..........................................................283
Casqueiro J..........................................................314
Cassinello, J..........................................................41
Castaeda R.E...................................................210
lndice de autores
49

Castillo A.M..........................................................451
Castresana, J.......................................................446
Castro D...............................................................473
Castro N...............................................................269
Castro, O................................................................35
Cataln, A............................................................383
Catalina, F...........................................................116
Catroux, G...........................................................455
Cava, F................................................................355
Cava, R....................................................................8
Cayuela, JM.........................................................101
Cazorla F.M.........................................................422
Cazorla, F.M................................................414, 420
Ceballos, R.A.......................................................349
Cebolla J..............................................................152
Cebolla Vieites, J. A............................................182
Cebollero E............................................................71
Cedillo R.M.L.......................................................210
Cerd-Cullar M..................................................466
Cerrato R.............................................................391
Cerrato R.............................................................197
Cervera ......................................................324, 458
Chabrilln, M........................................................267
Chvez B.E..........................................................210
Chenoll, E..............................................................23
Cheung A.L..........................................................390
Cheung, A.L.........................................................401
Chico, L................................................................400
Chigo J.M.............................................................330
Chiriac, A............................................................290
Christie-Oleza J.A...............................120, 178, 365
Churruca, E...........................................62, 160, 360
Cianca S..............................................................476
Cid VJ..................................................................230
Cid, A...................................................................209
Cid, V.J........................................................305, 378
Ciudad, T.............................................................395
Ciudad, T.............................................................400
Cladera, A.M........................................................443
Clavijo Olmos,C.M.................................................65
Cobeo, L............................................................332
Cobo Agudo M J................................................350
Cobos Rodrguez, J.G.........................................201
Coln B...................................................................64
Colin, B..........................................................11, 110
Colom, K................................................................62
Comas, ...............................................................454
Combina M............................................................52
Comellas L.............................................................32
Comino R.............................................................163
Conde R...............................................................396
Conde, R..............................................................402
Condn, S........................................................91, 96
Connerton .F.........................................................10
Corbaln, S............................................................49
Crdoba J.J.........................................................105
Crdoba M G........................................................80
Crdoba, J.J........................................8, 10, 11, 106
Crdoba, M.G..................................11, 98, 106, 110
Corpa. J.......................................................392, 394
Corts M..............................................................197
Corujo Fernndez A..............................................50
Corujo Fernndez, A.............................................54
Cosano C............................................................228
Costafreda, M.....................................................477
Costn Longares, A.............................................243
Crespo H..............................................................476
Cruz-Chamorro L.................................................162
Cubero Chvez, A.................................................99
Cubillo ................................................................161
Cuerda Correa, MT..............................................288
Cuesta G..............................................................175
Cuesta, G.............................................................444
Cuesta., G............................................................100
Cueva, R..............................................................402
DAuria, G....................................................253, 449
Dalcero A...............................................................52
de Andrs D.........................................................476
de Andrs X.........................................................476
de Armas, R.........................................................418
de Arriaga, D........................................................107
de Batlle J............................................................146
de Benito Armas,A...............................................212
de Cima, S...........................................................107
De Eugenio L......................................................185
de Juan L.............................................................164
de Juan, L....................................................158, 196
de la Campa A. G........................................135, 315
De la Fuente, M...................................................151
De la Losa, A.......................................................199
De la Rosa P..........................................................80
de la Rosa, M. C..................................................271
de la Rosa, M.C...................................................272
De la Rosa, M.C..................................................194
de la Rubia T.......................................................227
De las Rivas, B................................................27, 28
de Linares, C.......................................................193
De Llanos R...........................................................42
de los Ros, V.M..................................................345
De Lucas JR........................................................221
De Miguel M. J.....................................................375
de Miguel M.J......................................................396
de Pablo MA........................................................162
De Paz Videla M....................................................59
de Pedro, M.A......................................................355
De Rossi E...........................................................298
de Vicente A........................................................422
de Vicente, A...............................................414, 420
Dbarbouill, M...................................................304
Del Amo, A...........................................................116
Del Arco Aguiar, A.L............................................109
del Arco Aguilar, M......................................426, 427
del Campo, J...............................................246, 450
Del Campo, R......................................................319
Del Moral, A.........................................................439
Del Ro, E...............................................................12
Delgado M M......................................................179
Demajo, S............................................................450
Demarta, A...........................................................251
Depuydt L............................................................102
Deroncel V.........................................................204
Desco N.................................................................84
Deutscher J..........................................................327
Dhabi, G...............................................................353
Daz E..................................................................363
Daz M..................................................................303
Diaz P..................................................................384
Daz R..........................................................121, 136
Daz-Orejas R......................................................399
Daz-Rodrguez, N.................................................47
Daz-Rosales, P..........................................267, 274
Daz-Sarabia A M................................................284
Daz, E.................................................................328
Daz, M.................................................................442
Diaz, P.................................................................289
Daz, P.........................................................366, 382
Dez Villaseor, C................................................357
Dionsio, L..............................................................41
Dionsio, LPC.......................................................159
Domnech, M..........................................................6
Domnguez A.......................................................163
Domnguez L.......................152, 154, 161, 164, 165
Domnguez Rodrguez, L....................................182
Domnguez, A......................................................144
Domnguez, L......................................................347
Domnguez, L........75, 97, 147, 158, 196, 361, 381,
383, 385
Donate Correa, J.................................425, 426, 427
Drake, R...............................................................431
Echeita M.A.........................................................153
Echeita, M.A................................................151, 353
Eduardo, ..............................................................58
Eidallyn, G...........................................................337
Elizaquvel, P.........................................................69
Enrique, M.............................................................34
Epelde L.......................................................191, 192
Escolano, J..........................................................184
Escribano C.................................................170, 171
Escribano, C........................................................169
Escudero, E.........................................................165
Escudero, J.A..............................................381, 383
Espeso E.A..........................................................339
Espeso, E.A.................................................332, 345
Espinosa Texis AP..............................................225
Espuny, J.............................................................206
Esteban A............................................................303
Esteve-Zarzoso, B.................................................34
Esteve, C.............................................239, 240, 251
Falcocchio, S.......................................................366
Falcn M.A...........................................................126
Falcn Sanabria M. A..........................................125
Farelo F................................................................152
Farelo, F......................................................182, 381
Farfn, M.............................................................465
Fdz. de Aranguiz, A.............................................160
Feijoo-Siota, L...............................................22, 441
Feijoo-Siota,L.......................................................338
Fenosa, D....................................................364, 377
Fernndez de Aranguiz, A..................................360
Fernndez Lobato M...........................................350
Fernndez Lobato, M..................................348, 349
Fernndez M........................................................291
Fernndez Monistrol ............................................14
Fernndez Vecino, A.............................................33
Fernndez-Acero, F.J..........................................232
Fernndez-Arrojo L..............................................350
Fernndez-Astorga, A...........................62, 160, 360
Fernndez-Barredo S..........................................474
Fernndez-Espinar M.T..................................40, 42
Fernndez-Espinar, M.T......................................456
Fernndez-Garayzabal, J.F..................................75
Fernndez-Garayzbal, J.F................................361
Fernndez-Garayzbal, JF.................................347
Fernndez-Llario P..............................................197
Fernndez-Martnez J.........................................339
Fernndez-Martnez, J........................................345
Fernndez-Orts, E...............................................187
Fernndez-Ruano, L..............................................15
Fernndez-Santos, F...........................................416
Fernndez-Trujillo, J.P..........................................58
Fernndez-Vivas, A.........................................29, 30
Fernndez, A.............................................18, 19, 73
Fernndez, C.........................................................60
Fernndez, L...............................................107, 257
Fernndez, M. F....................................................55
Fernndez, N.......................................................134
Fernndez, P.........................................................77
Ferrndiz M. J......................................................135
Ferrer .................................................................409
Ferrer-Cebrin R.................................................469
Ferrer, D...............................................................275
Ferreras, E.R.......................................................356
Ferro P.................................................................473
Fierro F................................................................340
Fierro J.F..............................................................150
Figueras, M.J.......................................................251
Figueruelo Ojeda, E.............................................259
Flndez M............................................................229
Folgar, S..............................................................209
Fons J..................................................................155
Foronda Rodrguez, P.........................................259
Francisco, R.........................................................359
Franco-Domnguez E..........................................335
Franco, A.............................................................374
Franco, ...........................................................46, 48
Franco, L..............................................................353
Fresno, J.M............................................................38
Fresno, S.............................................................312
Fuentes S....................................................203, 468
Fuentes, S..............................................................89
Fueyo, J. M..........................................................168
Fust, M.C...........................................................465
G. de la Campa, A...............................................137
Gacto,, M.............................................................374
Gaju, N.................................................................184
Galn B................................................................185
Galn Castao, F..................................................33
Galan F................................................................163
Galn, B...............................................................200
Galiana C.............................................................474
Gallardo, J.J...........................................................35
Gallardo, ..........................................................382
Gallego J.L...........................................................128
Gallego V.............................................................249
Galofr, B............................................248, 275, 276
Galvez A................................................................31
Glvez A..........................................................92, 94
Gamazo C............................................................330
Ganadero T.........................................................476
Gantois, ..............................................................462
Garay E........................................................409, 447
Garay, E.......................................................244, 444
Garbisu C.....................................................191, 192
Garca A...............................................................474
Garca Alonso, E.J.................................................73
Garca Casanova, J.....................................426, 427
Garca de los Ros J............................................121
Garca Fernndez N............................................317
Garca Fernndez, N...........................................318
Garca Fontn, M.C...............................................46
Garca J.L............................................................185
Garca JL.............................................................363
Garca Lpez, ......................................................95
Garca Lpez, M. L................................................95
Garca M.T...........................................................249
Garca Martnez, J...............................................357
Garca Mendoza C..............................................233
Garca P...............................................................185
Garca-Albiach, R................................................319
Garca-Aljaro, C...................................................263
Garca-Armesto M,R..............................................66
Garca-Armesto, M.R..................................107, 112
lndice de autores
481

Garca-Bermejo .................................................136
Garca-del Portillo, F...........................................386
Garca-Estrada C.................................................336
Garca-Fraile P............................................460, 461
Garcia-Gil, L.J......................................................146
Garca-Guinea J..................................................123
Garca-Lpez, ..............................................68, 103
Garca-Lpez, M.L.........................................68, 103
Garca-Marcos A.................................................344
Garca-Pareja M.P...............................................104
Garca-Rico R.O..................................................340
Garca-Rosado E.................................................473
Garca-Surez M.M.............................................143
Garca-Valds, E.................................................443
Garca-Valdivia MS..............................................163
Garca, A..............................................................407
Garca, C. B.........................................................183
Garca, D................................................................56
Garca, E.............................134, 334, 341, 367, 475
Garca, J. L..................................................200, 334
Garca, J.L...........................................................328
Garca, M.....................................................147, 385
Garca, M.T..........................................................202
Garca, P..............................................................475
Garca, S................................................................81
Garre, V...............................................................220
Garreta A.............................................................206
Garrido, C............................................................232
Garrof, R............................................................410
Gasc J................................................................463
Gaya P...................................................................76
Gibello, A...............................................................75
Gil A.....................................................................469
Gil J......................................................................463
Gil M.L..................................................................217
Gil Pascual, A......................................................182
Gil R.....................................................................326
Gil, J.................................................................16, 17
Gil, J.V...................................................................44
Gimnez-Abin M...............................................234
Giraldo, R.............................................................369
Girbau, C...............................................62, 160, 360
Girn J.A..............................................................210
Glaria .................................................................476
Godoy, P..............................................................144
Gola, S.................................................................403
Gomariz Clemente M..........................................208
Gmez Hernndez M.J.......................................208
Gmez M.T..........................................................474
Gmez-Mampaso, E...........................................158
Gmez-Raja, J.....................................................395
Gmez-Valero, L.................................................354
Gmez, A...............................................................28
Gomez, D.............................................................242
Gmez, E. D........................................................100
Gmez, R.............................................................410
Gomila M.............................................................463
Gomis, V..............................................................462
Gonzaga, A..................................................364, 377
Gonzlez Arias, L..................................................38
Gonzlez Arzola K...............................................125
Gonzlez E.M........................................................76
Gonzlez Hevia M A............................................270
Gonzlez Hevia MA...............................................82
Gonzlez K..........................................................126
Gonzlez Paredes, A..........................................288
Gonzlez Prieto, J.................................................38
Gonzlez R............................................................71
Gonzlez R......................................................72, 74
Gonzlez Ruibal, L................................................33
Gonzlez-Candelas, F.........................................454
Gonzlez-Domenech, C.M..................................439
Gonzlez-Hevia, M.A..........................................157
Gonzlez-Jan, M.T..............................................24
Gonzlez-Jan, M.T..........................................6, 45
Gonzlez-Lpez..................................................118
Gonzlez-Muoz, M.T.................................122, 193
Gonzlez-Novo, A...............................................219
Gonzlez-Salgado A..............................................24
Gonzlez-Salgado, A........................................6, 45
Gonzlez-Snchez, M.A......................................420
Gonzalez-Sanz, R...............................................151
Gonzlez-Zorn, B................................381, 383, 385
Gonzlez, D.........................................................375
Gtz, F.................................................................393
Govantes, F.........................................................373
Goyache J............................................................154
Gozalbo D............................................................217
Grasa, B...............................................................183
Grill M.J..............................................................396
Grill, M.J.............................................................375
Gruas, C...............................................................183
Gubert M..............................................................154
Guerra Maestre, M.J..............................................33
Guerra, S.M.................................................286, 287
Guerrero, M C....................................................266
Guerrero, R.........................................246, 247, 450
Guevara, O..........................................................127
Guijarro, J. A........................................................258
Guijarro, J.A.........................................................257
Guijo M................................................................124
Guilln, F..............................................................292
Guilln, R...............................................................13
Guinea J.,.............................................................204
Guinea, A.............................................................435
Guio, M.J..............................................................119
Guisado, G...........................................................190
Gutirrez Fernndez F..........................................82
Gutirrez Gonzlez M J.......................................270
Gutirrez J.C........................................................432
Gutirrez M.C......................................................451
Gutirrez, M.........................................................107
Guzmn, C...........................................................250
Hardwidge PR......................................................230
Hassani, M.............................................................91
Hermoso de Mendoza J......................................391
Hermoso de Mendoza J......................................197
Hermoso de Mendoza M.....................................391
Hermoso de Mendoza, J.......................................53
Hermoso de Mendoza, M......................................53
Hernndez A..........................................................64
Hernndez Hernndez F.....................................225
Hernndez-Allica J......................................191, 192
Hernndez-Arriaga AM........................................399
Hernndez-Madrid, A..........................................315
Hernndez-Muoz, P.............................................77
Hernndez, A...................................................10, 55
Hernndez, D...........................................................8
Hernandez, E.......................................................100
Hernndez, M......................................................129
Herraiz, S.............................................................240
Herranz Fernndez S..........................................325
lndice de autores 48.
Herrera Arias, F.C.................................................95
Herrera, L.............................................................353
Herrera, R............................................................431
Herrera, S....................................................151, 353
Herrero, A............................................................156
Herrero, O..............................................................61
Hidalgo Romero, A................................................99
Higes Pascual, M...................................................14
Huguet, J.M.........................................................277
bez, E................................................................34
geo M...............................................................124
glesias-Garca O.................................................461
mperial, J............................................................428
rgang R...............................................................268
riarte M................................................................396
riberri, J...............................................................261
rigoyen, A..............................................................81
sern, A.M............................................................275
srael, S................................................................277
vars-Martnez, E.................................................253
versen L..............................................................384
Jimnez Gmez P.A............................................145
Jimnez Lpez C.................................................122
Jimnez M.............................................................36
Jimnez Martn, M...............................................109
Jimnez P.A.........................................................121
Jimnez-Daz, A..................................................368
Jimnez-Daz, R....................................................13
Jimnez-Valera, M................26, 139, 140, 141, 142
Jimnez, A...........................................................219
Jimnez, A...................................................343, 349
Jimnez, J............................................................219
Jimnez, M...............................................................6
Jimnez, N...................................................309, 312
Jofre J....................................................................20
Jofre Torroella J...................................................254
Jofre Torroella, J..................................................243
Jofre, J.........................................................250, 263
Jordano R..............................................................80
Juez, G................................................364, 370, 377
Juiz-Ro S............................................................352
Juz-Ro S............................................................351
Jurado, M...............................................................24
Jurado, M...........................................................6, 45
Juste, C................................................................144
Kamekura M........................................................451
Kamekura, M.......................................................364
Kargar M................................................................88
Karimova, L..........................................................215
Kharroub, K..........................................................468
Khong,K...............................................................374
Kiil, K....................................................................302
Knecht, E.............................................................393
Kuepfer, M...........................................................251
Kwon S-..............................................................126
Laborda F............................................................221
Labra L.P.............................................................210
Lagaron, J.M..........................................................77
Lago, J...................................................................93
Laguerre, G..........................................................455
Lalucat J..............................................120, 365, 463
Lalucat, J.............................................................443
Lamas M..............................................................283
Lamas-Maceiras M..............................................314
Lanfranconi M.P..........................................178, 365
Lanfranconi,M.P..................................................120
Lara Cambil A......................................................104
Larena MG...........................................................260
Larriba G..............................................................400
Larriba, G.....................................................395, 402
Larrosa, N............................................................144
Lasa ...........................................................330, 397
Lasa ...........................................................323, 390
Lasa, ..................................................................372
Lasa, ..................................................304, 393, 401
Latasa C...............................................................330
Latorre A......................................................326, 388
Latorre, A.............................................................354
Leal Guio, Y.........................................................259
Leal J.A................................................................234
Legaz Gonzlez, M.E..................................415, 421
Legaz, M.E..................................................418, 419
Leiva, M...............................................................139
Leiva, M.M...........................................................140
Lemonnier M........................................................399
Lemos M.L...........................................351, 352, 376
Lemus R...............................................................350
Len Barrios, M...................................425, 426, 427
Len-Barrios, M...................................................462
Len-Rubio, J.M..................................................267
Libana Martnez, P............................................182
Libana P.............................................................152
Lima-Costa, E........................................................41
Linares, M............................................................433
Linde Lpez L......................................................350
Linde Lpez, L.....................................................348
lionnet D...............................................................102
Liras P..........................................................307, 329
Llinares F.............................................................121
Llull, D..................................................................341
Lobato Alvarez M J..............................................270
Lobato Alvarez MJ.................................................82
Lpez Abarquero P................................................83
Lpez Abarquero, P...............................................54
Lpez Alonso, V.....................................................54
Lpez Daz, T.M....................................................51
Lpez G...............................................................152
Lpez Gonzlez-Coviella, N................................109
Lpez M.C...........................................................155
Lopez Orozco, G.................................................182
Lpez Prez, J.P.............................................86, 87
Lpez Robles, D.J.................................................21
Lpez-Aguilar C...................................................148
Lpez-Archilla, A................................................266
Lpez-Doval, J.C.................................................434
Lpez-Errasqun, E................................................24
Lpez-Errasqun, E............................................6, 45
Lpez-Garca M.T.......................................307, 329
Lpez-Goi, .......................................................375
Lpez-glesias C..................................................204
Lopez-Lopez, A...................................................253
Lpez-Montero, N................................................435
Lpez-Ocaa L......................................................36
Lpez-Portols J.A..............................................153
Lpez-Snchez M.J.............................................388
Lpez-Villarejo J..................................................399
Lpez, M....................................................18, 19, 73
Lpez, M.C............................................................60
Lpez, M.J...........................................186, 187, 190
Lpez, R......................................334, 341, 367, 475
Lorn, J.G............................................................465
Lorenzana L.M.............................................307, 329
Lorenzo Morales, J..............................................259
Lorenzo Snchez M.............................................317
Lorenzo Snchez, M...........................................318
Lorenzo-Daz F....................................................148
Lorenzo, M...........................................................134
Losada V................................................................79
Lucas N................................................................476
Lucas R......................................................31, 92, 94
lndice de autores
483

Lucas-Elio, P........................................................242
Lucas, M..............................................................227
Lucena F..............................................................264
Lucena F..............................................................250
Lucena Gutirrez F..............................................254
Lucena Gutirrez, F.............................................243
Lucena, F.............................................................248
Lucio L.................................................................166
Lugtenberg, B.J.J................................................420
Lujn L.................................................................476
Luque, ................................................................361
Macin M. C.........................................................447
Macin, M.C................................................244, 444
Macas Borrego, M.............................................348
Madrid,M..............................................................374
Magarios B................................................268, 269
Maiques E............................................................397
Maiques, E...........................................................372
Mallo, G.V....................................................305, 378
Maas, P..........................................................56, 91
Manna A.C...........................................................390
Manna, A.C..........................................................401
Manresa, A..........................................................206
Manso, ...............................................................200
Manteca A............................................................291
Manzanares, P.......................................................34
Maqueda M..........................................................102
Maqueda, M.............................................29, 30, 308
March L................................................................155
Marcobal., A....................................................27, 28
Marcos, J.F............................................................34
Marn Alberdi D....................................................350
Marn MJ..............................................................229
Marn S................................................................226
Marn, C.M...........................................................375
Marn, S.................................................................57
Marqus, A.M......................................................206
Marqus, P..........................................................410
Mrquez, M.C..............................................119, 470
Marquina, D.........................................................116
Marquina, P...........................................................96
Mart, M........................................................393, 401
Martn A.........................................................80, 111
Martn C...............................................................298
Martn H.......................................................228, 229
Martn J. F............................................................314
Martn J. V...........................................................179
Martin J.F.............................................................283
Martn J.F............................300, 307, 336, 340, 342
Martn JF......................................................306, 335
Martn M. C..........................................................168
Martn Reviejo, M................................................212
Martn Rueda, R..................................................182
Martn-Cardona C...............................120, 178, 365
Martn-Galiano A. J..............................................135
Martn-Gonzlez, A..............................................432
Martn-Platero, A.............................................29, 30
Martn-Snchez, ............................................29, 30
Martn, A..................................................11, 64, 105
Martn, H..............................................................231
Martn, J.F...................................................286, 287
Martn, M.C..........................................................156
Martn, S..............................................................346
Martnez -Culebras P.V.........................................84
Martnez A.T........................................................181
Martnez Arias, O...................................................95
Martnez C...........................................................152
Martnez Carretero, E..........................................259
Martnez Fernndez, C........................................182
Martinez J............................................................227
Martnez M.J........................................................181
Martnez Molina, E...............................................423
Martnez Surez JV.........................................59, 83
Martnez-Alonso, M.............................................184
Martinez-Arias, O.................................................103
Martinez-Blanch, J.F..............................................69
Martnez-Bueno, M..................................29, 30, 308
Martnez-Cach, A...............................................101
Martnez-Caamero M.........................................94
Martnez-Caamero M....................................31, 92
Martnez-Checa, F...............................................439
Martnez-Costa C................................................155
Martnez-Garca, M..............................................442
Martnez-Manzanares, E.............................267, 274
Martnez-Molina E.......................................460, 461
Martnez-Molina, E......................................416, 462
Martnez-Ruz, F..................................................193
Martnez-Surez, J. V............................................54
Martnez, A.T...............................123, 224, 285, 362
Martnez, B.............................................................13
Martnez, ..............................................62, 160, 360
Martnez, J. ........................................................343
Martnez, J.A..........................................................58
Martnez, M.J..............................123, 224, 285, 362
Martnez, N..........................................................157
Martnez, S.............................................................48
MartnezMolina, E................................................459
Martorell, P....................................................40, 456
Marzo, F...............................................................223
Mas J...................................................................207
Massera A..............................................................52
Masuelli R..............................................................52
Mata C.................................................................155
Mata, C..................................................................60
Mateo R.................................................................36
Mateo, E................................................62, 160, 360
Mateo, J.........................................................66, 112
Mateos A..............................................................164
Mateos Gonzlez, P............................................423
Mateos P.F..................................................460, 461
Mateos, A.....................................................158, 196
Mateos, P. F........................................................416
Mateos, P.F.........................................................462
Mateus, MP..........................................................159
Matres, V..............................................................119
Medina ................................................................36
Medina L.M............................................................80
Medina M.........................................................67, 76
Medina Prez, MM..............................................288
Mehdi Mirzaii..........................................................88
Mellado, E............................................202, 346, 379
Mena, O.............................................................4, 90
Mendes, M.V...............................................286, 287
Mndez F.J..........................................................143
Mndez-lvarez S...............................................148
Mendoza M. C.....................................................168
Mendoza, M.C.............................................156, 157
Menndez D........................................................128
Menndez, A........................................................258
Mercad E...........................................................204
Mercado L..............................................................52
Merchn F............................................................124
Merino ,S.............................................................309
Merino S...............................................................311
Merino, N.............................................................304
Merino, S.....................................................239, 312
Merroun, M.L.......................................................193
Mesa, S................................................................349
Mesas, J.M............................................................37
Meseguer Sarabia M.L........................................208
Meseguer Soria .................................................208
Meyerdierks, A.....................................................453
Mick V..................................................................298
Mills, D.A................................................................90
Miana-Galbis, D.................................................465
Miralles de mperial R..........................................179
Mojica, F..............................................................357
Mojica, F.J.M...............................................370, 377
Molina A...............................................................155
Molina M..............................................228, 229, 230
Molina V...............................................................155
Molina, A..............................................................145
Molina, J.M..................................................129, 292
Molina, M.............................................231, 305, 378
Molloy, B..............................................................349
Monedero V.................................................293, 327
Monforte, A.J.........................................................58
Monks Jantzen M............................................59, 83
Montadas A..........................................................121
Montalbn, M.......................................................308
Montemayor, M....................................................248
Monteoliva Snchez, M.......................................288
Monteoliva-Sanchez M........................................203
Monteoliva-Snchez M........................................469
Monteoliva-Snchez, M.................................89, 468
Montes Calatayud, Y.............................................99
Montes Calatayud,Y............................................201
Montes, R............................................................100
Montesi, M.A........................................................319
Montesi. A............................................................145
Montesinos, E........................................................63
Monz Snchez JL................................................50
Monz-Sanchez JL..............................................212
Mora, A................................................................353
Mora, M.T...............................................................49
Morales J.J..........................................................166
Morales, H...........................................................226
Morn-Zorzano, M.T............................................337
Morcillo, F............................................................193
Moreno H.............................................................111
Moreno M.A.........................................................161
Moreno Temprado R.............................................50
Moreno Temprado, R............................................54
Moreno-del lamo, M..........................................369
Moreno, E..............................26, 139, 140, 141, 142
Moreno, J.............................................186, 187, 190
Moreno, L.............................................................199
Moreno, M. A.......................................................383
Moreno, M.A.........................97, 147, 165, 381, 385
Morillo J.A............................................................203
Moriyn ..............................................................396
Moriyn, .............................................................375
Moscoso, M.........................................................334
Mosso, M. A.................................................194, 271
Mosso, M.A..........................................................272
Mourio S....................................................351, 352
Mourio, S...........................................................376
Mouwen, D.J.M......................................................85
Moya A.........................................................326, 388
Moya, R.......................................................129, 292
Moya,A.................................................................454
Muela, A...............................................................256
Muniesa M.............................................................20
Muniesa, M..........................................................263
Muoz G.A...........................................................210
Muoz L...............................................................260
Muoz R....................................................27, 28, 72
Muoz-Gmez AJ................................................399
Muoz-Ruiz, D.....................................................385
Muoz, D..............................................................347
Muoz, F.J...........................................................337
Muoz, P.M..........................................................375
Murciano C..........................................................217
Najimi, M..............................................................376
Naranjo L.............................................................283
Navarrete, A........................................246, 247, 450
Navarro M.D........................................................175
Navarro-Garca, F................................................199
Navarro, M...........................................................183
Navarro, M.D.......................................................177
Navarro1, M.D.....................................................176
Navas Fernndez J.........................................59, 83
Neef A..................................................................388
Nevot M................................................................204
Nogales B....................................................120, 365
Nogales B., Lalucat J..........................................178
Nombela C...................................................229, 398
Nowroozi J.............................................................88
Nuez Gutirrez M................................................59
Nez-Hernndez, C...........................................386
Nez, F....................................................2, 3, 8, 25
OConnor J.E.......................................................217
Obregn, V..........................................................334
Ocio, M.J................................................................77
Oguiza, J.A..........................................................302
Olivas .................................................................221
Olvera A...............................................................467
Orejas, M.......................................................61, 371
Orozco, A.L..........................................................127
Orruo, M.............................................................256
Ortega E.................................................................31
Ortigosa, M............................................................81
Ortiz Jareo S........................................................83
Ortiz Jareo, S.......................................................54
Ortiz Martnez, M.L................................................14
Ortiz, A.................................................................206
Ortiz, J....................................................................44
Osorio C...............................................................269
Osorio C.R...................................................351, 352
Osorio, C.R..........................................................376
Otero, A...........................................................51, 68
Overweg K...........................................................135
Pablo, G...............................................................402
Padilha da Silva W................................................59
Pagn, R....................................................56, 91, 96
Palacios E............................................................163
Palacios L............................................................228
Palacios, J.M.......................................................428
Palo-Nez E.J....................................................424
Panadero J............................................................42
Panizo, M...............................................................12
Parada Albarracin, J.A........................................223
Pardo, E.................................................................57
Pars, D.................................................................63
Pascolini C...........................................................122
Pascual, J....................................................244, 444
Pastor, F..J.................................289, 290, 382, 389
Pastrana, L............................................................46
Patio, B................................................................24
Patio, B............................................................6, 45
Payn Gonzlez A...............................................254
Peix, A..................................................................455
lndice de autores
483

Pelez A.............................................................128
Pelez Andrs A. ...............................................211
Pelegrn, A.............................................................30
Pea, A........................................................446, 464
Penads J............................................................330
Penads J............................................................323
Penads J. R.......................................................390
Penads J.R........................................................401
Penads JR.........................................................397
Penads, J...................................................392, 394
Penads, J...........................................................304
Penads, J.R.......................................................393
Penads, JR........................................................372
Pealva M.A........................................................325
Pealva, M.A.......................................................345
Perea, J.A............................................................361
Pereira C..............................................................159
Pereira G..............................................................391
Pereira G.............................................................197
Pereira, G...............................................................53
Pereira, R.M...........................................................41
Prez Cabo A......................................................233
Prez Galdona, R................................425, 426, 427
Prez Giraldo C...................................................166
Prez Leblic, M...................................................127
Prez Martnez G................................................293
Prez MM............................................................476
Prez P................................................................297
Prez Prez, M.N................................................109
Prez Pulido R.......................................................92
Prez-Boto D.......................................................153
Prez-Brocal V....................................................326
Prez-Garca A....................................................422
Prez-Garca, A...........................................414, 420
Prez-Gracia M.T................................................474
Perez-Jimnez, R................................................420
Prez-Leblic, M...................................................362
Prez-Martnez G................................................327
Prez-Nevado F............................................64, 111
Prez-Nevado, F.................................................110
Prez-Pardal S....................................................352
Prez-Redondo R........................................307, 329
Prez-Roth E.......................................................148
Prez-Uz, B.........................................................435
Prez, F...............................................................106
Prez,P................................................................374
Peris, B........................................................392, 394
Picart, P...............................................................389
Pint, R.M............................................................477
Priz Durn S.......................................................317
Priz Durn, S......................................................318
Priz, S.................................................................134
Pisabarro de Lucas, A.G.....................................223
Pla J.....................................................................398
Pla, J....................................................................403
Pla, M.....................................................................63
Pliego, C..............................................................420
Plou F.J................................................................350
Poblet-Mas, N......................................................146
Polaina, J.............................................................402
Pons, A..................................................................15
Porrero, M. C.......................................................383
Porrero, M.C................................................147, 165
Porra, O.............................................................373
Poza M.................................................................284
Poza M...................................................................78
Poza, M.........................................22, 281, 282, 441
Poza,M.................................................................338
Pozuelo M.J.........................................................145
Pozuelo, M.J........................................................319
Pozueta-Romero, J..............................................337
Prado M.................................................................78
Prado, S...............................................................262
Prieto A................................................................234
Prieto J.A...............................................................42
Prieto M.A............................................................185
Prieto-Gmez, J.....................................................85
Prieto, M....................................................12, 47, 85
Prieto, M. A..........................................................200
Prieto, R...............................................................428
Prim N..................................................................384
Prim, N.................................................................289
Puertollano E.......................................................162
Puertollano MA....................................................162
Pujalte M. J..........................................................447
Pujalte, M.J..................................................244, 444
Pushker, R...........................................................449
Quero, P...............................................................232
Querol A.................................................................42
Querol, A........................................................40, 456
Quesada A...........................................................124
Quesada E...........................................................439
Quesada Molina A...............................................317
Quesada Molina, A..............................................318
Quesada, A..........................................................134
Quesada, T..........................................................468
Quintana Carrizosa, M..........................................99
Rafailova, E.........................................................215
Ramilo, G...............................................................93
Ramrez G...........................................................175
Ramrez Gaona AY.............................................225
Ramrez M...........................................................102
Ramrez-Bahena, M.H.........................................416
Ramrez, L...........................................................223
Ramrez, S...........................................................311
Ramiro, R.............................................................151
Ramn D................................................................84
Ramn-Garca S..................................................298
Ramn, D.........................................................44, 61
Ramos A.J...........................................................226
Ramos Cormenzana, A.......................................288
Ramos D.G............................................................74
Ramos-Cormenzana A................................203, 469
Ramos-Cormenzana, A.................................89, 468
Ramos-Espl.......................................................442
Ramos, A.J............................................................57
Ramos, B.................................................................4
Ramos, C.............................................................420
Raso, J...................................................................56
Razeghi R..............................................................88
Recio, E...............................................................286
Redondo, P..........................................................121
Reguant, C.......................................................16, 17
Reguera Useros, J................................................21
Reina R................................................................476
Remacha M.................................................344, 359
Remacha, M........................................................368
Reuter M..............................................................135
Revuelta, J...........................................................368
Rey JM.................................................................391
Rey, J.....................................................................53
Riao, ...................................................................97
Ribas, F.......................................248, 275, 276, 277
Rico, R.M.............................................................274
Rigaut D...............................................................161
Rincn S..............................................................297
Rius, N...................................................................35
Rivas R........................................................452, 460
Rivas, R...............................................................462
Rivero, E..............................................................165
Robles Gancedo, S...............................................51
Rodicio M. R........................................................168
Rodicio, M.R................................................156, 157
Rodrigo Gil A.........................................................50
Rodriguez A.........................................................306
Rodrguez Bahena, M.H......................................423
Rodrguez E...........................................................76
Rodrguez Gabriel, M. A......................................231
Rodrguez Gallego M..........................................122
Rodrguez J.M.....................................................325
Rodrguez Navarro C.M......................................122
Rodrguez ....................................................78, 79
Rodrguez R.........................................................207
Rodrguez R...........................................................76
Rodrguez Rincn, F...........................................227
Rodrguez Snchez B...........................................59
Rodriguez- Calleja, J.M.......................................103
Rodrguez-Calleja, J.M..........................................68
Rodrguez-Dez M. E...........................................314
Rodrguez-Escudero .........................................230
Rodrguez-Escudero, ................................305, 378
Rodrguez-Garca A.............................................335
Rodrguez-glesias MA........................................163
Rodrguez-Lzaro, D...........................................146
Rodrguez-Mateos M...........................................344
Rodrguez-Molina, M.C.......................................424
Rodrguez-Valera,F.....................................253, 449
Rodrguez, A....................................................13, 55
Rodrguez, C...............................................271, 272
Rodrguez, E........................................................285
Rodrguez, .........................................................156
Rodrguez, J........................................................127
Rodriguez, M.......................................................157
Rodrguez, M.................................4, 11, 25, 90, 105
Rodrguez, M.C......................................................37
Rodrguez, S........................................................238
Rodrguez, Y................................................129, 292
Roig P..................................................................217
Rojas-Paz, C..........................................................47
Romalde J.L.........................................................262
Romalde JL..........................................................268
Romero B.............................................................164
Romero C............................................................198
Romero, B...................................................158, 196
Romero, D...........................................................422
Romero, E............................................................123
Romero, F............................................................139
Romero, P............................................................367
Rook, N................................................................407
Roqus, B............................................................407
Rossell-Mora, R.........................................453, 464
Rossell-Mora, R.A.............................................446
Rotger, R.............................................145, 305, 378
Roux A.................................................................330
Royuela M............................................................221
Ra, J..........................................................107, 112
Rubio M................................................................136
Rubio, R.................................................................53
Rudnicka J...........................................................325
Ruiz L...........................................................170, 171
Ruiz-Argeso, T...................................................428
Ruiz-Bravo, A..................26, 89, 139, 140, 141, 142
Ruiz-Moyano S....................................................111
Ruiz-Moyano, S.....................................................98
Ruiz-Romero, D.J................................................420
Ruiz, C.................................................................366
Ruiz, J..................................................................277
Ruiz, L..................................................................169
Russell N.J...........................................................203
Sacristn B..........................................................166
Sacristn Prez-Minayo, G...................................21
Sacristn San Cristbal, M.........................415, 421
Sacristn, N...........................................................38
Saz Nieto J.A.....................................................458
Sez Nieto J.A.....................................................324
Sala, N.................................................................410
Salazar N.............................................................291
Salazar, ..............................................................184
SalesGomes, M...................................................41
Salvad, H...........................................................434
San Milln, A.......................................381, 383, 385
Snchez J............................................................291
Snchez J............................................................128
Snchez JC.........................................................325
Snchez M...................................................136, 197
Snchez M. B......................................................343
Snchez MA........................................................391
Snchez Martn J.................................................211
Snchez S...........................................................391
Snchez Vaquero E.............................................104
Sanchez-Amat, A.................................................242
Snchez-Gorostiaga, A.......................................369
Snchez-Porro, C................................................379
Snchez, B....................................................90, 106
Sanchez, E..........................................................407
Snchez, G..........................................................477
Snchez, J. ..........................................................13
Snchez, M..........................................................219
Snchez, M. C.............................................194, 271
Snchez, M.C......................................................272
Snchez, S............................................................53
Sanchis Solera, J.................................................407
Sanchis V.............................................................226
Sanchs V...............................................................24
Sanchis, V..............................................................57
Santamara R.......................................................303
Santamarta ........................................................307
Santero, E............................................................373
Santiago, R..........................................................418
Santos B..............................................................297
Santos Buelga, J...................................................95
Santos C..............................................................344
Santos, F.....................................................416, 453
Santos, J. A...........................................................68
Santos, J.A..........................................................103
Santos,A..............................................................116
Sanz Lpez, A.......................................................14
Sanz, D..................................................................96
Sanz, E................................................................349
Sanz, J. M............................................................200
Sanz, L.................................................................433
Sarr, J................................................................206
Saso, L.................................................................366
Saucedo, G..................................................275, 276
Saugar, ..............................................................349
Seco, C................................................................256
Segura C................................................................32
Segura, P.....................................................392, 394
Selva, L........................................................392, 394
Seor, A...............................................................129
Serra-Moreno R.....................................................20
Serradilla, M.........................................................110
lndice de autores
48

Serrano A.............................................................436
Serrano, A...................................................369, 431
Serrano, S............................................................433
Shishkin, A...........................................................215
Shiva, C...............................................188, 189, 222
Silva F.J...............................................................326
Silva, F.................................................................220
Silva, F. J.............................................................354
Silva, L. R...............................................................70
Silvestre M.D.......................................................155
Silvestre, D............................................................60
Simn-Baamonde C............................................153
Smidt, H.................................................................89
Sola Castejn, F..................................................273
Sola-Landa A...............................................306, 335
Solano, F.............................................................242
Soria, E........................................................370, 377
Soriano C.............................................................161
Sosa, M.J.......................................................2, 8, 11
Soto J...................................................................198
Soto,T..................................................................374
Strauss J..............................................................339
Surez Estrella, F................................................186
Surez Surez A. B.............................................211
Surez-Estrella, F........................................187, 190
Suarez, A.............................................................227
Tabera L.................................................................72
Tamallo F.G.........................................................198
Tamayo, J.A.........................................................371
Tamburini, C........................................................253
Tapia-Paniagua, S.T...................................267, 274
Tarradas, C..........................................................361
Tejada, L..............................................................101
Tejedor, J.L............................................................75
Tejero, N................................................................53
Tllez S................................................................154
Teno Snchez, P.................................................167
Terebiznik, M.......................................................378
Terradillos, A...............................................275, 277
Teruel J.A............................................................206
Teshager, T...................................................97, 147
Teves F................................................................283
Toledo FL.............................................................118
Toledo-Arana A...................................................330
Toledo-Arana, A..................................................304
Toms Forns D....................................................50
Toms Forns, D.................................................212
Toms J...............................................................311
Toms, J......................................................309, 312
Toms, J.M..........................................................239
Toranzo AE..................................................268, 269
Tormo, M.A..................................................393, 401
Tornadijo, M.E.................................................38, 73
Torre, P..................................................................81
Torrejn R............................................................163
Torrella Mateu F......................................86, 87, 273
Torres-Labandeira J L.........................................284
Torres-Martnez, S...............................................220
Torres-Vila, L.M...................................................424
Torres, C................................................................97
Torres, E..............................................................209
Trias, R..................................................................63
Trotonda M.P.......................................................390
Troyano, N...................................................129, 292
Trujillo Toledo, M.................................................423
Trujillo, M. E...................................................70, 459
Tuxbatova, R. ....................................................215
Txakartegi, A........................................................261
beda C...............................................................397
beda, C..............................................................372
Ulln R.V..............................................................283
Urdaneta, E..........................................................223
Urdn, M.................................................................81
Urmeneta, J.........................................246, 247, 450
Ussery, D.W.........................................................302
Vaca ...................................................................342
Vaca, ..................................................................314
Vadillo Machota S................................................317
Vadillo Machota, S...............................................318
Vadillo, S..............................................................134
Valdezate S.................................................324, 458
Valdezate, S........................................................151
Valdivia, E................................................29, 30, 308
Valens-Vadell, M.................................................446
Valiente, E...........................................................237
Valladares Hernndez, B....................................259
Valle J..................................................................323
Valle Manzano, J.................................................318
Valle-Algarra F.M...................................................36
Valle, J.........................................................134, 401
Valle, P.................................................................107
Vallejo J A............................................................284
Vallejo, ...............................................................232
Vallejo, J. A..........................................................282
Vallejo, J.A...........................................................281
Valls, C...............................................................355
Valls, S.................................................................34
Valverde, A..........................................................416
Valverde, F..........................................................431
Vargas Arzola.J...................................................133
Vargas Garca, M.C.............................................186
Vargas-Garca, M.C....................................187, 190
Vzquez F............................................................143
Vzquez, C..................................................6, 24, 45
Vzquez, M. A.....................................................414
Vega Mendoza D.E.............................................321
Vega Mendoza, D.E............................................333
Vega S.................................................................474
Veiga P..................................................................79
Veiga-Crespo.......................................................281
Veiga-Crespo P...................................................284
Veiga-Crespo, P............................................22, 441
Veiga-Crespo,P...................................................338
Vela, A..........................................................75, 361
Vela, A................................................................347
Velasco T.............................................................283
Velzquez E................................................460, 461
Velzquez Prez, E.............................................423
Velzquez, E.................................70, 416, 455, 462
Velzquez, R.........................................................98
Ventosa A....................................................249, 451
Ventosa, A...........................119, 202, 346, 379, 470
Ventura M..............................................................32
Vergara-rigaray M...............................................323
Vergara-rigaray, M..............................................304
Viale, A. M...........................................................337
Viana, D.......................................................392, 394
Vicente Crdoba, C.....................................415, 421
Vicente, C....................................................418, 419
Vicente,J..............................................................374
Vieites J.M...........................................................469
Vieites, J. M...........................................................93
Viejo-Daz M........................................................150
Vigus N..............................................................207
Vila, G..................................................................410
Vilario M.L..........................................................262
Vilches, S.............................................................311
Villa T G...............................................................284
Villa T.G.................................................................78
Villa, T.G........................................22, 281, 282, 441
Villa,T.G...............................................................338
Villacastn, E..........................................................81
Villalba Doblas, A.M......................................99, 201
Villamn E............................................................217
Villanueva, L........................................246, 247, 450
Villaverde R.........................................................143
Vias M........................................................170, 171
Vias, M...............................................................169
Vincent O.............................................................325
Vindel A................................................................458
Viedo, B...............................................................69
Vinuesa T.....................................................170, 171
Vinuesa, T............................................................169
Vivas YG..............................................................260
Wells J.................................................................135
Wierzchos, J........................................................195
Willems, A............................................................462
Wirtz, K................................................................212
Yebra M.J............................................................327
Yepes A...............................................................303
Yiguez Ovando, R.............................................167
Yuste, M.................................................................34
Zalacain A............................................................171
Zamarro MT.........................................................363
Zarate O.......................................................191, 192
Ziga M..............................................................327
lndice de autores
489
lndice de autores
490
NDICE
Mic!obiolo,a de alimento$
A - 1
Efecto de una combinacin de Staphylococcus xylosus, Debaryomyces hansenii y Penicillium
chrysogenum en la generacin de voltiles durante la maduracin de lomos.
Alonso, M., Asensio, M.A., Bermdez, E., Sosa, M.J. y Nez, F.
Higiene de los Alimentos, Facultad Veterinaria. Universidad de
Extremadura. Apdo. correos 643. 1.!1 "#ceres.
$nune%&unex.es
A - 3
Sensibilidad del pptido antifngico de Penicillium crustosum a diversas proteasas.
Acosta, R.; Bermdez, E.; Nez, F. y Asensio, M. A.
Higiene de los Alimentos. Facultad de Veterinaria. Universidad
de Extremadura. 1!1, "#ceres. E-mail' racosta&unex.es.
A - (
Caracterizacin rpida de levaduras aisladas de jamn ibrico mediante anlisis de restriccin del
ADN mitocondrial
Casado, E.M., Andrade, M.J., Mena, O., Ramos, B. y Rodrguez, M.
Higiene de los Alimentos. Facultad de Veterinaria. Aptdo. de
"orreos 643. 1!1-"#ceres. E-mail' evamcs&)otmail.com
A - 6
Deteccin de Penicillium brevicompactum mediante PCR
Patio, B.1, Domnech, M.1, Gonzlez-Salgado, A.2, Jurado, M.2, Lpez-Errasqun, E.1,
Gonzlez-Jan, M.T.2, Jimnez, M.3 y Vzquez, C.1
1*pto. de +icro,iolog-a ... / de 01en2tica. Facultad de
3iolog-a. Universidad "omplutense de +adrid. 3 *pto. de
+icro,iolog-a / Ecolog-a de la Universidad de Valencia.
,elenp&,io.ucm.es
A - 4
Actividad lipoltica de microorganismos aislados del interior de jamn curado.
Sosa, M.J., Nez, F., Cava, R., Hernndez, D. y Crdoba, J.J.
Higiene / 5ecnolog-a de los Alimentos, Facultad de Veterinaria.
Universidad de Extremadura. Apdo. correos 643. 1.!1.
"#ceres. sosa%uil&unex.es.
A - 6
Secuenciacin y obtencin en los sistemas de expresin de E. coli y Pichia del enzima EPg222
obtenido de P. chrysogenum aislado de jamn curado
Benito, M.J., Connerton .F.2, Aranda, E., Hernndez, A. y Crdoba, J.J.1
7utrici8n / 3romatolog-a, Escuela de .ngenier-as Agrarias,
Universidad de Extremadura, "arretera de "#ceres s9n, 6!1
3ada:o%. 1Higiene de los alimentos, Facultad de Veterinaria,
Universidad de Extremadura, Avda. Universidad s9n, 1!1-
"#ceres. 0Food ;ciences, Universit/ o$ 7otting)am, ;utton
3onnington, <oug),oroug), <E10 (=*, =eino Unido.
A - 1(
Desarrollo de un mtodo de anlisis del perfil de protenas microbianas para la caracterizacin de
levaduras aisladas de productos crnicos
Colin, B., Martn, A., Rodrguez, M.1, Crdoba, J.J.1, Sosa, M.J.1 y Crdoba, M.G.
7utrici8n / 3romatolog-a. Escuela de .ngenier-as Agrarias,
Universidad de Extremadura, "tra. "#ceres s9n 6!1-3ada:o%.
lndice de autores
1
1Higiene de los Alimentos, Facultad de Veterinaria.
Universidad de Extremadura. Apdo. correos 643. 1.!1-
"#ceres. mdeguia&unex.es
A - 04
Eficacia antimicrobiana de algunos tratamientos descontaminantes en carne de pollo
Del Ro, E., Alonso-Calleja, C., Panizo, M., Prieto, M. y Capita, R.
Escuela ;uperior / 52cnica de .ngenier-a Agraria >E;5.A?,
Avenida de Astorga, s9n. 044-@on$errada, <e8n.
d)trcg&unileon.es
A - 0!
Caracterizacin de exopolisacridos producidos por Lactobacillus pentosus LPS26 y optimizacin
de su produccin
Snchez, J..1, Martnez, B.1, Guilln, R.2, Jimnez-Daz, R.2 y Rodrguez, A.1
1.nstituto de @roductos <#cteos de Asturias >.@<A-";."?, "tra.
.n$iesto, s9n, 333 - Villaviciosa, Asturias A
:isanc)e%&ipla.csic.es. 0*epartamento de 3iotecnolog-a de
Alimentos, .nstituto de la 1rasa >";."?, Apartado 1!4, 4110
- ;evilla
A - (1
Estudio microbiolgico de la miel de Guadalajara (Espaa)
Ortiz Martnez, M.L.(1), Fernndez Monistrol, .(1), Higes Pascual, M.(2) y Sanz Lpez, A.(2)
>1?*epartamento de +icro,iolog-a / @arasitolog-a. Universidad
de Alcal#. "ampus universitario. Facultad de Farmacia. 044!1
Alcal# de Henares >+adrid?. >0?"entro Ap-cola =egional.
+arc)amalo >1uadala:ara?. e-mail' mluisa.orti%&ua).es
A - (4
Aplicacin del diseo de experiencias en el estudio del comportamiento de Listeria monocytogenes.
Pons, A., Fernndez-Ruano, L. y Agut, M.
<a,oratorio de +icro,iolog-a, .nstitut Bu-mic de ;arriC
>Universitat =amon <lull?. Via Augusta 36, 41!-3arcelona.
montserrat.agut&iDs.edu
A - 64
Estudio de la produccin de precursores de carbamato de etilo por bacterias lcticas del vino, e
identificacin de los genes involucrados.
Araque, ., Gil, J., Reguant, C., Carret, R. y Bordons, A.
*epartament de 3ioDu-mica i 3iotecnologia, Unitat dEEnologia
del "entre de =e$erFncia en 5ecnologia dEAliments, Facultats
de Bu-mica i Enologia, "ampus ;escelades, Universitat =ovira i
Virgili, 43! 5arragona. e-mail'
mariaisa,el.araDue&estudiants.urv.es
A - 66
Anlisis de la expresin de los genes implicados en la ruta arginina deiminasa, en relacin con la
degradacin de arginina por Oenococcus oeni.
Gil, J., Araque, ., Reguant, C., Carret, R. y Bordons, A.
*epartament de 3ioDu-mica i 3iotecnologia, Unitat dEEnologia
del "entre de =e$erFncia en 5ecnologia dEAliments, Facultats
de Bu-mica i Enologia, "ampus ;escelades, Universitat =ovira i
Virgili, 43! 5arragona. e-mail' :uana.gil&estudiants.urv.net
A - !0
lndice de autores
11
Efecto de la acidificacin sobre los parmetros de crecimiento y la termorresistencia de
Enterococcus faecium
Fernndez, A., lvarez, A., Bernardo, A. y Lpez, M.
*pto. Higiene / 5ecnolog-a de los Alimentos. Universidad de
<e8n. "ampus de Vega%ana s9n. 04!1 <e8n. EspaGa.
a$rve&)otmail.comH Fax' 64! 061044H 5el' 64! 061143
A - !4
nfluencia de la temperatura de crecimiento sobre la termorresistencia de Listeria innocua
lvarez, A., Fernndez, A., Bernardo, A. y Lpez, M.
*pto. Higiene / 5ecnolog-a de los Alimentos. Universidad de
<e8n. "ampus de Vega%ana s9n. 04!1 <e8n. EspaGa.
avalordvet&)otmail.com H Fax' 64! 061044H 5el' 64! 061144
A - 4
Estudio de los parmetros que promueven la lisogenia de bacterifagos aislados de Escherichia
coli productoras de toxina shiga (STEC).
Serra-Moreno R.*, Muniesa M. y Jofre J.
Facultad 3iolog-a. *pto. +icro,iolog-a. Universitat 3arcelona.
Avda. *iagonal, 64(. 404. 3arcelona.
Irserramo4&,io.u,.edu
A - 43
Empleo de bacterias promotoras del crecimiento vegetal para la mejora de la calidad en calabaza
Reguera Useros, J..1; Sacristn Prez-Minayo, G.1 y Lpez Robles, D.J.2
1Jrea de +icro,iolog-a, 0Jrea de Eda$olog-a / Bu-mica
Agr-cola, Facultad de "iencias, Universidad de 3urgos, @la%a
de +isael 3aGuelos s9n, 61 3urgos, EspaGa. E-mail'
:iru&u,u.es
A - 6
Evolucin de los enzimas hidrolticos durante el envejecimiento de distintas variedades de vino
Blasco, L., Veiga-Crespo, P., Feijoo-Siota, L., Poza, M. y Villa, T.G.
*epartamento de +icro,iolog-a / @arasitolog-a. Facultad de
Farmacia. Universidad de ;antiago de "ompostela.
lucia,lasco&gmail.com
A - 61
Aplicacin de RAPDs para la tipificacin de especies de BAL alterantes de productos crnicos
envasados al vaco y refrigerados
Chenoll, E.1 y Aznar, R.1,2*
1.nstituto de AgroDu-mica / 5ecnolog-a de Alimentos, ";.".
Ap. correos !3, 3ur:assot, Valencia, 0*epartamento de
+icro,iolog-a, Univ. Valencia. Irosa.a%nar&uv.es
A - 63
Deteccin de cepas toxignicas de Fusarium en maz espaol
Jurado, M.; 1Patio, B.; 1Lpez-Errasqun, E.; Gonzlez-Salgado, A.; Gonzlez-Jan, M.T.;
2Sanchs, V.;1Vzquez, C.
*epartamento de 1en2tica.1 *epartamento de +icro,iolog-a
.... Facultad de 3iolog-a. Universidad "omplutense de +adrid.
"9 Kos2 Antonio 7ovais 0, 044-+adrid.0 *epartamento de
5ecnolog-a de los Alimentos, U5@V-"e=5A, Universidad de
<leida. m:uradog&,io.ucm.es
A - 6(
Produccin de micotoxinas por Aspergillus parasiticus y Aspergillus versicolor inoculados en queso
lndice de autores
111
Bermdez, E., Asensio, M.A., Rodrguez, M., Acosta, R. y Nez, F.
Higiene de los Alimentos, Facultad Veterinaria. Universidad de
Extremadura. Apdo. correos 643. 1.!1 "#ceres.
,ermude%&unex.es
A - 64
Ausencia de correlacin entre antibiosis in vitro e in vivo por lactobacilos probiticos.
Bujalance, M.C., Jimnez-Valera, M., Moreno, E. y Ruiz-Bravo, A.
*epartamento de +icro,iolog-a, Facultad de Farmacia,
Universidad de 1ranada. 14!1, 1ranada. E-mail'
ratoncillos&/a)oo.es
A - 11
Desarrollo de un sistema de tipado basado en la tcnica MLST para cepas de Lactobacillus
plantarum
De las Rivas, B., Marcobal, A. y Muoz, R.
*epartamento de +icro,iolog-a, .nstituto de Fermentaciones
.ndustriales, ";.", "9 Kuan de la "ierva 3, 046 +adrid.
rmuno%&i$i.csci.es
A - 10
Caracterizacin de SLpl4, una secuencia de insercin funcional en Lactobacillus plantarum
De las Rivas, B., Marcobal, A., Gmez, A. y Muoz, R.
*epartamento de +icro,iolog-a, .nstituto de Fermentaciones
.ndustriales, ";.", "9 Kuan de la "ierva 3, 046 +adrid.
a.marco,al&i$i.csic.es
A - 111
Estudio de la dinmica poblacional de las bacterias del cido lctico en el queso Cueva de la
Magah mediante tcnicas dependientes e independientes de cultivo.
Martn-Platero, A., Martn-Snchez, ., Fernndez-Vivas, A., Maqueda, M., Valdivia, E. y
Martnez-Bueno, M.
*pto. +icro,iolog-a. Facultad de "iencias. Universidad de
1ranada. ammartin&ugr.es
A - 110
Estudio de la diversidad gentica de enterococos presentes en un queso elaborado con leche
cruda de cabra
Pelegrn, A., Martn-Snchez, ., Fernndez-Vivas, A., Martn-Platero, A., Valdivia, E.,
Maqueda, M. y Martnez-Bueno, M.
*pto. +icro,iolog-a. Facultad de "iencias. Universidad de
1ranada. Fuentenueva s9n. 14!1-1ranada. E-mail'
mmartine&ugr.es
A - 114
Actividad antimicrobiana de aceites esenciales procedentes de plantas de la provincia de Jan:
empleo potencial en alimentacin.
Ortega, E., Camacho, A., Ben Omar, N., Lucas, R., Abriouel, H., Martnez-Caamero, M. y
Galvez A.
Jrea de +icro,iolog-a. *epartamento de "iencias de la ;alud.
Facultad de "iencias Experimentales. Universidad de Ka2n.
@ara:e <as <agunillas s9n. 03!1. KAL7. e-mail'
eortega&u:aen.es
A - 13
Produccin de micotoxinas estrognicas y tricotecenos por especies de Fusarium sobre arroz y
maz
Anaya, ., Segura, C., Ventura, M., Comellas, L. y Agut M.
lndice de autores
1V
.nstitut Bu-mic de ;arri# >U=<?, Via Augusta 36, 41!,
3arcelona A EspaGa. ivana/a&iDs.es
A - 13(
Programa PSCECAEX: estudio microbiolgico de las muestras de comidas preparadas
<a,oratorio de ;alud @M,lica de "#ceres. *irecci8n de ;alud
del #rea de "#ceres. ;ervicio ExtremeGo de ;alud.c9 Al$2reces
provisionales s9n. 11 "J"E=E;.
lidia.gon%ale%&sc.:untaex.es
A - 141
Estudio de la capacidad antimicrobiana de pptidos y extractos fenlicos frente a levaduras
alterantes de vino.
Enrique, M.1, Valls, S.1, Marcos, J.F.2, bez, E.1, Yuste, M.3, Esteve-Zarzoso, B.3 y
Manzanares, P.1
1*epartamento de 3iotecnolog-a de Alimentos /
0*epartamento de "iencia de los Alimentos, .nstituto de
AgroDu-mica / 5ecnolog-a de Alimentos, "onse:o ;uperior de
.nvestigaciones "ient-$icas >";."?, Apartado de "orreos !3,
461, 3ur:assot, ValenciaH 33odegas +iguel 5orres ;.A.,
Villa$ranca del @ened2s, 3arcelona. E-mail'
mariaenlo&iata.csic.es.
A - 14!
dentificacin de hongos filamentosos aislados de muestras de Cava
Gallardo, J.J., Castro, O., Rius, N. y Calvo M.A.(1)
*epartament de +icro,iologia i @arasitologia ;anitCries.
Facultat de FarmCcia. Universitat de 3arcelona. nrius&u,.edu.
>1? *epartament de ;anitat i dNAnatomia Animals. Facultat de
VeterinCria. Universitat AutOnoma de 3arcelona
A - 1(3
Estudio de la micobiota contaminante de uvas cultivadas en Espaa y caracterizacin de
Aspergillus tubingensis como productor de ocratoxina A mediante PCR- RFLP de la regin TS 1-
5.8S-TS2 del rDNA y LC-MS-MS
Medina, .1, Valle-Algarra, F.M.2, Mateo, R.2, Lpez-Ocaa, L.3, Jimnez, M.1*
1*pto.+icro,iolog-a / Ecolog-a. Facultad de 3iolog-a,
Universitat de ValFncia. 0*pto. Bu-mica Anal-tica. Facultad de
Bu-mica, Universitat de ValFncia. 3"olecci8n EspaGola de
"ultivos 5ipo >"E"5?. Universitat de ValFncia. *r. +oliner (,
E-461, 3ur:assot, Valencia, EspaGa.
A - 1(4
Potencial del plsmido crptico pRS4 de Pediococcus pentosaceus como vector de clonacin de
bacterias lcticas
Alegre, M.T.a, Rodrguez, M.C.b y Mesas, J.M.c
a*epartamento de +icro,iolog-a / @arasitolog-a,
,*epartamento de Fisiolog-a Vegetal, c*epartamento de
Bu-mica Anal-tica, 7utrici8n / 3romatolog-a >5ecnolog-a de
Alimentos?. Escuela @olit2cnica ;uperior, Universidad de
;antiago de "ompostela, 0!0-<ugo. E-mail'
mtalegre&lugo.usc.es
A - 163
Bacterias lcticas (lactococos) aisladas del queso de Genestoso durante su maduracin: actividad
antimicrobiana frente a cepas de referencia
lndice de autores
V
Gonzlez Arias, L., Arenas, R., Sacristn, N., Gonzlez Prieto, J., Fresno, J.M. y Tornadijo,
M.E.
*pto. de Higiene / 5ecnolog-a de los Alimentos. Universidad
de <e8n, 04!1-<e8n. E-mail' d)tmet&unileon.es
A - 16(
dentificacin y cuantificacin de la especie Saccharomyces cerevisiae directamente en vino
mediante la tcnica de PCR a tiempo real.
Fernndez-Espinar, M.T., Martorell, P. y Querol, A.
*epartamento de 3iotecnolog-a de los Alimentos, .nstituto de
AgroDu-mica / 5ecnolog-a de Alimentos >";."?, Apdo. !3,
461 3ur:assot, Valencia, ;pain. t$er&iata.csic.es
A - 1!
Freezing effects on the microbiological quality of goat cheese
Pereira, R.M.*1; SalesGomes, M.*1; Lima-Costa, E.*1; Cassinello, J.*2 and Dionsio, L.*1
I1Universidade do AlgarveAFE=7 "ampus de 1am,elas 4(-
136 Faro @ortugal I0*irecPQo =egional de Agricultura do
AlgarveA*=AA<1 @atacQo 41-64 Faro @ortugal. E-mail'
ldionis&ualg.pt
A - 1!6
Una cepa comercial de panadera como posible origen de colonizacin de aislados clnicos de S.
cerevisiae
De Llanos, R., Querol, A., Panadero, J., Prieto, J.A., Fernndez-Espinar, M.T.
*epartamento de 3iotecnolog-a, .nstituto de AgroDu-mica /
5ecnolog-a de Alimentos >";."?, @R 3ox !3, 461 3ur:assot,
ValFncia, EspaGa.
A - 14
Caracterizacin biotecnolgica de especies de hongos filamentosos de inters agroalimentario.
Ortiz, J.1,2, Cabel, .1, Ramn, D.1,2 y Gil, J.V.1,2
1*epartamento de +edicina @reventiva / ;alud @M,lica,
5oxicolog-a, 3romatolog-a / +edicina <egal. Facultad de
Farmacia, Universitat de ValFncia. Avda. Vicent Andr2s
Estell2s s9n. 3ur:assot 461 >Valencia?. 0.nstituto de
AgroDu-mica / 5ecnolog-a de Alimentos. "onse:o ;uperior de
.nvestigaciones "ient-$icas - @ol-gono de la "oma s9n. @aterna
4664 >Valencia?
A - 143
ncidencia de cepas de Aspergillus potencialmente productoras de ocratoxina A en cereales
Gonzlez-Salgado, A.1, Patio, B.2, Jurado, M.1, Lpez-Errasqun, E.2, Gonzlez-Jan, M.T.1
y Vzquez, C.1
1*pto. de 1en2tica / de 0+icro,iolog-a .... Facultad de
3iolog-a. Universidad "omplutense de +adrid.
covi&,io.ucm.es
A - 144
Estudio de la actividad antimicrobiana de las bacterias lcticas aisladas durante el proceso de
maduracin del "Chorizo de cebolla", un embutido tradicional elaborado en Galicia.
Garca Fontn, M.C.1, Franco, .1, Pastrana, L.2 y Carballo, J.1
1Jrea de 5ecnolog-a de los Alimentos / 0Jrea de 3ioDu-mica /
3iolog-a +olecular. Facultad de "iencias de Rurense.
Universidad de Vigo. "ampus Universitario, s9n. 304
Rurense. EspaGa. E-mail' car,atec&uvigo.es.
lndice de autores
V1
A - 166
Efecto de la temperatura, tipo de envasado y tiempo de almacenamiento en los niveles microbianos
de filetes de avestruz
Daz-Rodrguez, N., Capita, R., Rojas-Paz, C., Prieto, M. y Alonso-Calleja, C.
Escuela ;uperior / 52cnica de .ngenier-a Agraria >E;5.A?,
Avenida de Astorga, s9n. 044-@on$errada, <e8n.
d)tcac&unileon.es
A - 16!
Efecto de la temperatura, pH y concentracin de NaCl sobre la cintica de crecimiento de Bacillus
cereus en extracto de carne, tras un tratamiento trmico moderado.
Martnez, S., Borrajo, R., Franco, . y Carballo, J.
Jrea de 5ecnolog-a de los Alimentos. Facultad de "iencias de
Rurense. Universidad de Vigo. "ampus Universitario, s9n.
304 Rurense. EspaGa. E-mail' sidonia&uvigo.es
A - 164
Estudio enzimtico y actividad antimicrobiana de las cepas de Penicillium sp. empleadas en la
elaboracin de sumaia.
Adelantado, C., Corbaln, S., Mora, M.T. y Calvo, M.A.
*epartament de ;anitat i Anatomia Animals A Facultat de
VeterinCria. Universitat AutOnoma de 3arcelona. 4163
3ellaterra >3arcelona?. "arles.Adelantado&ua,.es
A - 0
Deteccin de Salmonella spp en muestras fecales de pollo mediante PCR vs. mtodos
inmunolgicos (VDAS)
Rodrigo Gil, A.1, Moreno Temprado, R.2, Corujo Fernndez, A.2, Toms Forns, D.1, Monz
Snchez, JL.1
1Ainia, @arDue 5ecnol8gico de Valencia, @aterna >Valencia? /
07utreco Food =esearc) "enter, "asarru,ios del +onte
>5oledo?. "orreo electr8nico' argil&ainia.es
A - 03
Microbiologa del proceso de obtencin del azcar de remolacha: principales gneros y especies
Robles Gancedo, S., Lpez Daz, T.M. y Otero, A.
*pto. *e Higiene / 5ecnolog-a de los Alimentos, Facultad de
Veterinaria, U. de <e8n, "ampus de Vega%ana, s9n, 04!1,
<e8n. d)ttld&unileon.es
A - 013
Origen y distribucin de Saccharomyces cerevisiae asociadas a la fermentacin espontnea en
vinos Malbec de Argentina
Mercado, L.1,2, Massera, A.1, Dalcero, A.2, Masuelli, R.3,2, Combina, M.1,2
1"entro de Estudios Enol8gicos, EEA-+endo%a, .75A. ;an
+art-n 34(3 >((!? <u:#n de "u/o, +endo%a, Argentina. E-
mail' lmercado&mendo%a.inta.gov.ar. 0"onse:o 7acional de
.nvestigaciones "ient-$icas / 52cnicas, Argentina >"R7."E5?.
3<a,oratorio de 3iolog-a +olecular, F"A, Universidad
7acional de "u/o, Argentina.
A - 00
La leche de ganado ovino y caprino como vehculo de Escherichia coli verotoxignicos y
enterohemorrgicos: investigacin de la contaminacin de la leche y posibles repercusiones
sanitarias para la elaboracin de queso.
Snchez, S., Alonso, J.M., Rubio, R., Tejero, N., Pereira, G., Hermoso de Mendoza, J.,
Hermoso de Mendoza, M. y Rey, J.
lndice de autores
V11
Unidad de @atolog-a .n$ecciosa / Epidemiolog-a. *epartamento
de +edicina / ;anidad Animal. Facultad de Veterinaria.
Universidad de Extremadura. Avenida de la Universidad, s9n.
1!1-"#ceres. 5el.' 60! 0(! 114. Fax' 60! 0(! 11.
sergiosp&unex.es
A - 001
Estudio de los subtipos de Listeria monocytogenes de un matadero de pollos mediante
electroforesis en campo pulsante
Lpez Alonso, V.1, Ortiz Jareo, S.1, Corujo Fernndez, A.2, Lpez Abarquero, P.1, Moreno
Temprado, R.2 y Martnez-Surez, J.V.1
1 5ecnolog-a de Alimentos, .7.A, "tra. de <a "oruGa Sm !N(,
041 +adrid. 0 Food =esearc) "entre >7utreco?, 4(6(
"asarru,ios del +onte, 5oledo. "orrespondencia'
victorialop&inia.es
A - 000
Leches fermentadas como vehculo para la administracin de Lactobacillus delbrueckii subs. lactis
UO 004, una bacteria probitica.
Fernndez, M. F.1, Rodrguez, A.2, Hernndez, A.2 y Barbs, C.1*.
1Universidad de Rviedo. Jrea de +icro,iolog-a. c9 Kuli#n
"laver-a s9n. 336. Rviedo. Asturias. 0.nstituto de @roductos
<#cteos de Asturias >.@<A-";."?. "arretera de .n$iesto, s9n.
333. Villaviciosa. Asturias. Ic,ar,es&uniovi.es
A - 00(
Requerimientos biosintticos para la reparacin de los daos subletales sobre la membrana celular
de Escherichia coli tras la aplicacin de Pulsos Elctricos de Alto Voltaje
Garca, D., Maas, P., Raso, J. y Pagn, R.
*epartamento de @roducci8n Animal / "iencia de los
Alimentos. Facultad de Veterinaria. Universidad de Tarago%a. c9
+iguel ;ervet, 1!!, (13, Tarago%a, EspaGa. pagan&uni%ar.es
A - 03
ncidencia de ocratoxina A y cepas productoras de OTA en caf verde. Modelos predictivos para el
crecimiento de Aspergillus ochraceus.
Pardo, E., Marn, S., Sanchis, V. y Ramos, A.J.
*pto. 5ecnolog-a de Alimentos, E5;EA, Universidad de
<leida. Av. =ovira =oure, 161, 0(164 <leida >EspaGa?. E.mail'
a:ramos&tecal.udl.es
A - 034
Podredumbres en lneas casi isognicas de meln (Cucumis melo, L.) durante su refrigeracin
Martnez, J.A.1, Monforte, A.J.2, Eduardo, .2 y Fernndez-Trujillo, J.P.3
1*pto. @roducci8n Vegetal. Universidad @olit2cnica de
"artagena. "ampus @aseo Al$onso U... (0. E5;.A. 303
"artagena >+urcia? :uanantonio.martine%&upct.es. 0<a,.
";."-.=5A de 1en2tica +olecular Vegetal, "tra. de "a,rils
s9n, 4344, "a,rils. 3arcelona. 3*pto. .ngenier-a de Alimentos
/ EDuipamiento Agr-cola. E5;.A. "artagena
A - 03(
Deteccin del dao celular subletal en Listeria monocytogenes sometida a tratamiento de altas
presiones hidrostticas en carne de pollo
Monks Jantzen, M1,2, Navas Fernndez, J1, De Paz Videla, M1, Rodrguez Snchez, B1,
Padilha da Silva, W2, Nuez Gutirrez, M1 y Martnez Surez, JV1
lndice de autores
V111
15ecnolog-a de Alimentos, .7.A, "tra. de <a "oruGa Sm !N(,
041 +adrid. 0Universidade Federal de @elotas, =io 1rande
do ;ul, 3rasil. "orrespondencia' m:ant%en&u$pel.tc)e.,r
A - 036
Anlisis de la composicin microbiana en embutidos crudos curados adicionados de cultivos
iniciadores y bioconservadores
Mata, C., Lpez, M.C., Silvestre, D. y Fernndez, C.
Universidad "ardenal Herrera-"EU. Edi$icio ;eminario s9n.
46113 +oncada >Valencia?. e-mail' cmata&uc).ceu.es
A - 0(0
Construccin y caracterizacin de cepas GRAS de la levadura industrial T73 que sobreproducen
glicosidasas de inters en enologa
Herrero, O.1,2; Ramn, D.1,2 y Orejas, M. 1
1 *epartamento de 3iotecnolog-a. .nstituto de AgroDu-mica /
5ecnolog-a de Alimentos. "onse:o ;uperior de .nvestigaciones
"ient-$icas. Apartado de correos !3, 3ur:assot 461
>Valencia?. 0 *epartamento de +edicina @reventiva / ;alud
@M,lica, 3romatolog-a, 5oxicolog-a / +edicina <egal. Facultad
de Farmacia, Universitat de ValFncia. Avda. Vicent Andr2s
Estell2s s9n. 3ur:assot 461 >Valencia?. o)errero&iata.csic.es
A - 0(!
Aplicacin de la tnica NASBA (Nucleic Acid Sequence-Based Amplification) a tiempo real para la
deteccin de RNA ribosmico de Campylobacter jejuni en muestras de pollo
Churruca, E., Girbau, C., Mateo, E., Martnez, ., Colom, K., Alonso, R. y Fernndez-Astorga, A.
*pto. .nmunolog-a, +icro,iolog-a / @arasitolog-a. Facultad de
Farmacia. Universidad del @a-s Vasco-EusSal HerriSo
Uni,ertsitatea. @aseo de la Universidad nV !, 16 Vitoria-
1astei%. E-mail' oi,c)ore&vc.e)u.es
A - 066
Evaluacin de sistemas de bioconservacin en fruta y hortalizas frescas frente a patgenos de
transmisin alimentaria
Badosa, E.(1); Trias, R.(1); Baeras, L.(2); Pars, D.(1); Pla, M.(1) y Montesinos, E.(1)
>1?.nstituto de 5ecnolog-a Agroalimentaria-"er5A-".*;AV.
Universitat de 1irona. "ampus +ontilivi, 1!!1. 1irona. E-
mai' emilio.montesinos&udg.es. >0?.nstituto de Ecolog-a
Acu#tica. Universitat de 1irona. "ampus +ontilivi, 1!!1.
1irona.
A - 066
Actividad killer de levaduras aisladas durante el proceso de elaboracin de aceitunas de mesa
Hernndez, A., Prez-Nevado, F., Aranda, E., Benito, M.J., Coln, B. y Martn, A.
Jrea 7utrici8n / 3romatolog-a, *pto. Tootecnia. Escuela de
.ngenier-as Agrarias, UEU. "tra. "#ceres s9n 6!1, 3ada:o%.
E-mail' a)ernande%&unex.es
A - 0!4
Estudios de vida til de pechugas de pollo Broiler envasadas en atmsferas modificadas
Clavijo Olmos,C.M.* y Cantalejo Dez, M.J.**.
IUniversidad de @amplona >"olom,ia?.Facultad de "ienciasH
IIUniversidad @M,lica de 7avarra. Escuela ;uperior de
.ngenieros Agr8nomos. Jrea 5ecnolog-a de Alimentos. "ampus
lndice de autores
1Y
de Arrosad-a, E-316, @amplona >7avarra?. e-
mail'cclaviol&)otmail.com
A - 0!!
Variantes genticas del gen stx2 de Escherichia coli O157:H7 aislada de leche de oveja.
Caro, .1. Mateo, J.2 y Garca-Armesto, M.R.2
1Universidad Aut8noma del Estado de Hidalgo, .nstituto de
"iencias Agropecuarias, 5ulancingo Hgo., 436, +2xico.
0*pto. de Higiene / 5ecnolog-a de los Alimentos, Universidad
de <e8n, 04! <e8n, EspaGa. d)ticc&unileon.es
A - 040
Coproduccin de nisina y lacticina 481 por nuevos aislados de Lactococcus lactis
Bravo, D. y Medina, M.
*pto. 5ecnolog-a de Alimentos, .7.A, "tra. de <a "oruGa Sm
!, 044 +adrid d,ravo&inia.es
A - 04(
Origen y diversidad de cepas de Staphylococcus aureus presentes en carne de conejo
Rodrguez-Calleja, J.M., Garca-Lpez, ., Otero, A., Santos, J.A. y Garca-Lpez, M.L.
Jrea de 7utrici8n / 3romatolog-a. *epartamento de Higiene /
5ecnolog-a de los Alimentos. Facultad de Veterinaria.
Universidad de <e8n. "ampus de Vega%ana, 04!1 - <e8nH
d)t:rc&unileon.es
A - 064
Desarrollo de un sistema de PCR a tiempo real para la deteccin y cuantificacin de
Staphylococcus aureus en alimentos.
Elizaquvel, P.1, Martinez-Blanch, J.F.2, Alarcn, B.1,2, Viedo, B.1,2 y Aznar, R.1,2*
1*epartamento de +icro,iolog-a / Ecolog-a, Universitat de
ValFncia. 0.nstituto de AgroDu-mica / 5ecnolog-a de
Alimentos, ";.". Irosa.a%nar&uv.es
A - 06(
dentificacin de levaduras presentes en vinos tintos de la regin portuguesa del Do
Silva, L. R.1,2, Trujillo, M. E.1 y Velzquez, E.1
1*epartamento de +icro,iolog-a / 1en2tica. Universidad de
;alamanca. Edi$icio *epartamental de 3iolog-a. <a,. 06.
"ampus +iguel de Unamuno. 3!! ;alamanca.
email'luis&esav.pt. 0*epartamento das .ndMstrias Agro-
Alimentares. Escola ;uperior Agr#ria de Viseu. @ortugal.
A - 066
Las levaduras vnicas desarrollan autofagia durante la segunda fermentacin de los vinos
espumosos
Cebollero E. y Gonzlez R
.nst. Ferment. .nd. >";."? ". Kuan de la "ierva 3, 046
+adrid. lta,era&i$i.csic.es
A - 064
Modificacin gentica de levaduras para acelerar el proceso de autolisis.
Tabera L., Muoz R. y Gonzlez R.
.nst. Ferment. .nd. >".;...".? ". Kuan de la "ierva 3, 046,
+adrid
A - 066
Estudio microbiolgico de mieles ms comunes de la provincia de Len, tras un almacenamiento a
temperatura ambiente y bajo refrigeracin
lndice de autores
Y
Garca Alonso, E.J., Fernndez, A., Bernardo, A., Lpez, M. y Tornadijo, M.E.
de <e8n, 04!1-<e8n. E-mail' d)tml$&unileon.es
A - 31
nters enolgico de la liberacin de manoprotenas por diversos mutantes de Saccharomyces
cerevisiae .
Ramos D.G. y Gonzlez R.
.nst. Ferment. .nd. >".;...".? "9 Kuan de la "ierva, 3H 046
+adrid. email' danireimos&i$i.csic.es
A - 33
Deteccin por PCR de bacterias zoonticas gram positivas en harinas de pescado
Tejedor, J.L., Vela, A.., Gibello, A., Fernndez-Garayzabal, J.F. y Domnguez, L.
<a,oratorio Visavet. Facultad de Veterinaria. Universidad
"omplutense +adrid. Hospital "l-nico Veterinario-@lanta
;8tano. Avda. @uerta de Hierro ;97. 044. +adrid.
:lte:edor&vet.ucm.es
A - 313
Actividad hidroltica de sales biliares y precipitacin de colesterol de bacterias lcticas y
bifidobacterias con potencial probitico
Gaya P., Gonzlez E.M., Rodrguez R., Rodrguez E. y Medina M.
*pto. 5ecnolog-a de Alimentos, .7.A, "tra. de <a "oruGa Sm
!, 044 +adrid mmedina&inia.es
A - 300
Estudio de la capacidad antimicrobiana de pelculas obtenidas a partir de quitosano
Fernndez, P.1, Hernndez-Muoz, P.1, Lagaron, J.M.1 y Ocio, M.J.1,2
1.nstituto de AgroDu-mica / 5ecnolog-a de Alimentos, ";.",
Apartado de correos, !3, 461 3ur:assot, Valencia. 0 *pto.
+edicina @reventiva, Facultad de Farmacia, Universidad de
Valencia, Vicente Andr2s Estell2s, s9n, 461 3ur:assot,
Valencia. E-mail' a:o&iata.csic.es
A - 33
nhibition of Listeria monocytogenes and Staphylococcus aureus by acidic heat-resistant
bacteriocins produced by lactic acid bacteria isolated from turbot (Psetta maxima)
Campos C.A.1, Rodrguez .2, Calo-Mata P.2,3, Prado M.2, Poza M.3, Villa T.G.3, and Barros-
Velzquez J.2,3*.
1*epartment o$ .ndustries, ;c)ool o$ Exact and 7atural
;ciences, Universit/ o$ 3uenos Aires, "iudad Universitaria
>1404? 3uenos Aires, ArgentinaH 0*epartment o$ Anal/tical
")emistr/, 7utrition and Food ;cience, <H."A, ;c)ool o$
Veterinar/ ;ciences, Universit/ o$ ;antiago de "ompostela, E-
0!0 <ugo, ;painH and 3"ollege o$ 3iotec)nolog/, .nstitute o$
ADuaculture, Universit/ o$ ;antiago de "ompostela, E-1(!40
;antiago, ;pain. E-mail' :,arros&lugo.usc.es
A - 331
Evaluation of the effects of a novel ozonised-slurry ice combined system on the microbial quality of
commercial fish species
Campos C.A.a,b, Rodrguez .a, Losada V.c, Aubourg S.P.c, Veiga P.a, and Barros-Velzquez
J.a,*.
a*epartment o$ Anal/tical ")emistr/, 7utrition and Food
;cience, ;c)ool o$ Veterinar/ ;ciences, Universit/ o$ ;antiago
lndice de autores
Y1
de "ompostela, E-0!0 <ugo, ;painH ,*epartment o$
.ndustries, ;c)ool o$ Exact and 7atural ;ciences, Universit/ o$
3uenos Aires, "iudad Universitaria >1404? 3uenos Aires,
ArgentinaH and c*epartment o$ ;ea$ood ")emistr/, .nstitute $or
+arine =esearc) >..+-";."?, "9 Eduardo "a,ello 6, E-3604
Vigo, ;pain. E-mail' :,arros&lugo.usc.es
A - 333
Efecto de la utilizacin de un conservante cido en magdalenas sometidas a diferentes condiciones
de almacenamiento
De la Rosa P. 1, Crdoba M G. 2, Martn A. 2, Medina L.M. 1 y Jordano R. 1
1*epartamento de 3romatolog-a / 5ecnolog-a de los Alimentos
>1rupo +icro,iolog-a de los Alimentos?, Universidad de
"8rdo,a, "ampus de =a,anales, 14!1 "8rdo,a 0
*epartamento de Tootecnia >Jrea de 7utrici8n /
3romatolog-a?, Escuela de .ngenier-as Agrarias, Universidad de
Extremadura, "tra. "#ceres s9n, 6!1 3ada:o%. E-mail'
al1mecal&uco.es
A - 336
Enterococos en quesos espaoles: presencia de enterococos resistentes a vancomicina
rigoyen, A., Ortigosa, M., Villacastn, E., Urdn, M., Garca, S. y Torre, P.
Jrea de 7utrici8n / 3romatolog-a. Universidad @M,lica de
7avarra. "ampus Arrosad-a s9n. 316 @amplona. e-mail'
aurora.irigo/en&unavarra.es
A - 343
Deteccin de Salmonella spp por el sistema de PCR A-BAX en productos alimenticios.
Bances Gonzlez, M., Lobato Alvarez, M.J., Gutirrez Fernndez, F. y Gonzlez Hevia M.A.
<a,oratorio de ;alud @M,lica del @rincipado de Asturias.
"amino de =u,-n s9n. 3311 Rviedo. Asturias.
marga,g&princast.es.
A - 344
Deteccin de Listeria monocytogenes en carne de pollo mediante PCR a tiempo real: comparacin
de muestras artificiales y naturales
Navas Fernndez J., Monks Jantzen M., Ortiz Jareo S., Lpez Abarquero P. y Martnez
Surez J.V.
5ecnolog-a de Alimentos, .7.A, "tra. de <a "oruGa Sm !N(,
041 +adrid. "orrespondencia' :aimen$&inia.es
A - 3(0
dentificacin molecular de cepas de Aspergillus productoras de Ocratoxina A en vino.
Martnez -Culebras P.V., Desco N. y Ramn D.
*epartamento +edicina @reventiva, Universidad de Valencia,
"ampus de 3ur:asot, 461, Valencia. pmartine%&iata.csic.es
A - 3(3
Aplicacin de redes neuronales artificiales a la identificacin de Campylobacter coli y C. jejuni
mediante espectroscopa de infrarrojos con transformada de Fourier
Mouwen, D.J.M.; Capita, R.; Alonso-Calleja, C.; Prieto-Gmez, J.; Prieto, M.
de <e8n, 04!1 <e8n, EspaGa. 5el' 64!061043. Fax'
64!061044. email' d)tmpm&unileon.es
A - 3(4
lndice de autores
Y11
Estudio morfolgico y ultraestructural de la actividad antifngica en hongos filamentosos por
metabolitos excretados por Bacillus spp. silvestres
*epto. 1en. / +icro,iolog-aI / *epto. Bu-mica Agr-colaII.
Universidad de +urcia. 31 Espinardo-+urcia.
torrella&um.es
A - 3((
Caracterizacin de metabolitos antifngicos inhibidores de mohos productores de micotoxinas
*epto. 1en. / +icro,iolog-aI / *epto. Bu-mica Agr-colaII,
Universidad de +urcia, 31 +urcia. torrella&um.es
A - 3(!
Lactobacilli as probiotic bacteria
KW7oXroo%i&)otmail.com
A - 361
Probiticos y enfermedad inflamatoria intestinal: monitorizacin molecular de su impacto en el
tracto gastrointestinal de ratones.
1,2Fuentes, S., 1Bujalance, C., 2Smidt, H., 1Ruiz-Bravo, A., 1Monteoliva-Snchez, M. y
1Ramos-Cormenzana, A.
1*epartamento de +icro,iolog-a, Facultad de Farmacia,
Universidad de 1ranada, EspaGa. 0<a,orator/ o$ +icro,iolog/,
Yageningen Universit/, 5)e 7et)erlands.
A - 3!1
dentificacin de bacterias en vino mediante T-RFLP.
Rodrguez, M.1, Andrade, M.J.1, Snchez, B.1, Mena, O.1 y Mills, D.A.2
1Higiene de los Alimentos. Facultad de Veterinaria. Aptdo. de
"orreos 643. 1!1-"#ceres. 0Viticulture and Enolog/.
Universit/ o$ "ali$ornia, *avis. E-mail' marrodri&unex.es.
A - 3!4
nfluencia del pH sobre la termorresistencia de Listeria monocytogenes y Pseudomonas aeruginosa
tras choques isotrmicos de distinta intensidad
Hassani, M., Maas, P., Condn, S. y Pagn, R.
*epartamento de @roducci8n Animal / "iencia de los
Alimentos, Facultad de Veterinaria. Universidad de Tarago%a."9
+iguel ;ervet, 1!!, (13 Tarago%a, EspaGa, 5el
346!6!61(41, Fax 346!6!61(6. Email'
pagan&posta.uni%ar.es
A - 3!(
Produccin de bacteriocinas por bacterias lcticas aisladas de ben saalga, un alimento tradicional
fermentado de Burkina Faso
Ben Omar N., Abriouel H., Prez Pulido R., Lucas R., Martnez-Caamero M. y Glvez A.
Area de +icro,iolog-a. *epartamento de "iencias de la ;alud.
"ampus <as <agunillas s9n. 03!1. KAL7. e-mail'
agalve%&u:aen.es
A - 3!!
Recuento de virus bacterifagos f-RNA y coliformes fecales en moluscos bivalvos de las ras
gallegas.
Ramilo, G.1, Lago, J.1, Alvrez, C.2, Vieites, J. M.1 y Cabado, A. G.1
1 Jrea de micro,iolog-a / ,iotoxinas. A7FA"R-
"E"R@E;"A. "ampus Univ Vigo 3631, Vigo. ;pain.
lndice de autores
Y111
agca,ado&an$aco.es. 0 Unidade de +icro,iolox-a. .nstituto
5ecnol8xico do +edio +ariGo. Vilaxo#n 36611, Vilagarc-a de
Arousa . 1alicia.
A - 3!6
Estudio gentico de las comunidades microbianas en alimentos amilceos fermentados de pases
Africanos
Abriouel H., Ben Omar N., Lucas R., Martnez-Caamero M. y Glvez A.
Area de +icro,iolog-a. *epartamento de "iencias de la ;alud.
"ampus <as <agunillas s9n. 03!1. KAL7. e-mail'
canamero&u:aen.es
A - 346
Ribotipado de cepas de Plesiomonas shigelloides de distintos orgenes
Martnez Arias, O.; Herrera Arias, F.C.; Garca Lpez, .; Garca Lpez, M. L. y Santos Buelga,
J.
Jrea de 7utrici8n / 3romatolog-a. *pto. de Higiene /
5ecnolog-a de los Alimentos. Facultad de Veterinaria.
Universidad de <e8n 04!1, <e8n. d)toma&unileon.es
A - 361
Efecto de la composicin del medio de deteccin en la sensibilidad a varios antibiticos de
Geobacillus stearothermophilus
Marquina, P.; Sanz, D.; Pagn, R. y Condn, S.
@roducci8n Animal / "iencia de los Alimentos. Facultad de
Veterinaria de Tarago%a. "9 +iguel ;ervet, 1!!, (13. e-mail'
pmarDuin&uni%ar.es
A - 364
Caracterizacin molecular de beta-lactamasas de espectro extendido en cepas de Salmonella
enterica de muestras fecales de animales sanos
Riao, .1, Moreno, M.A.2, Teshager, T.2, Domnguez, L. 2, Torres, C. 1
1*epartamento Agricultura / Alimentaci8n, Facultad "iencias,
Universidad <a =io:a, <ogroGoH 0*epartamento de ;anidad
Animal, Facultad de Veterinaria, Universidad "omplutense,
+adrid >e.mail' ioanaWriano&/a)oo.es?
A - 36(
Caracterizacin de mohos aislados de pimentn mediante PCR-RFLP
Ruiz-Moyano, S., Aranda, E., Benito, M.J., Velzquez, R., Bartolom, T. y Crdoba, M.G.
Escuela de .ngenier-as Agrarias, *pto. Tootecnia, Jrea de
7utrici8n / 3romatolog-a Universidad de Extremadura, "tra.
"#ceres s9n 6!1 3ada:o%. srms)&)otmail.com.
A - 40
Control microbiolgico de comidas preparadas procedentes de comedores colectivos de la
provincia de Badajoz
Hidalgo Romero, A., Villalba Doblas, A.M., Cubero Chvez, A., Montes Calatayud, Y., Caada
Moreno, P. y Quintana Carrizosa, M.
<a,oratorio ;alud @M,lica 3ada:o%. "9=onda del @ilar nV 00.
3ada:o% 60. e-mail' aurora.cu,ero&ses.:untaex.es
A - 4(
dentificacin por PCR de especies de Fusarium micotoxignicas
Gmez, E. D.; Cuesta., G.; Montes, R. y Hernandez, E.
lndice de autores
Y1V
*epartamento de 3iotecnolog-a, Universidad @olit2cnica de
Valencia. 4600 VA<E7".A, E;@AZA. rmontes&,tc.upv.es
A - 46
Evolucin de la flora lctica y de las caractersticas fsico-qumicas durante la maduracin del
queso de Murcia al vino.
Cayuela, JM., Martnez-Cach, A., Abelln, A. y Tejada, L.
*epartamento de "iencias de la ;alud. Jrea de *iet2tica /
7utrici8n. Facultad de "iencias de la ;alud. Universidad
"at8lica ;an Antonio. "ampus los Ker8nimos s9n. 31!
1uadalupe >+urcia?. e-mail' :mca/uela&pdi.ucam.edu
A - 40(
Diversidad microbiana en fermentaciones espontneas de mostos de uva: relacin con la calidad
Maqueda M.1, Depuydt L.1, lionnet D.1, lvarez M.L.2, Cceres P.1 y Ramrez M.1
1*epartmento de +icro,iolog-a, Universidad de Extremadura,
Avda Elvas s9n, 3ada:o%, EspaGa. 5l$no' 604046363.
pcaceres&guadiana.unex.es . 0Estaci8n Enol8gica, "onser:er-a
Agricultura / +edio Am,iente. Kunta de Extremadura.
Almendrale:o, 3ada:o%, EspaGa.
A - 40!
Deteccin de cepas de Psychrobacter mediante la deteccin del gen lip 1 por la tcnica de PCR.
Garca-Lpez, ., Rodriguez- Calleja, J.M., Martinez-Arias, O., Santos, J.A. y Garca-Lpez,
M.L.
Jrea de 7utrici8n / 3romatolog-a. *pto de Higiene /
5ecnolog-a de los Alimentos.Facultad de Veterinaria.
Universidad de <e8n. 04!1-<e8n. d)tigl&unileon.es
A - 406
Aplicacin de productos derivados de "Alliaceas" en desinfeccin ambiental de industrias
alimentarias
Garca-Pareja M.P., Lara Cambil A. y Snchez Vaquero E.
*pto. .[*9 *+" =E;EA="H "E75E= ;.<. "amino de
Ka/ena s9n Al)end-n. 1460 >1ranada? pilarg&domca.com
A - 433
Generacin de compuestos voltiles por levaduras aisladas de jamn ibrico
Andrade, M.J., Casado, E.M., Martn, A.1, Rodrguez, M. y Crdoba J.J.
Higiene de los Alimentos. Facultad de Veterinaria. Aptdo. de
correos 643. 1!1-"#ceres. E-mail' m:andrad&unex.es.
17utrici8n / 3romatolog-a. "iencia / 5ecnolog-a de los
Alimentos. Escuela de .ngenier-as Agrarias. 6!1-3ada:o%.
A - 434
Tipificacin de aislamientos de Debaryomyces hansenii obtenidos de jamn ibrico mediante
RAPD-PCR con cebadores mini y microsatliles
Snchez, B., Andrade, M.J., Crdoba, M.G.1, Prez, F.1 y Crdoba, J.J.
Higiene de los Alimentos. Facultad de Veterinaria. UEU.
1!1-"#ceres. e-mail' ,easanna&unex.es. 17utrici8n /
3romatolog-a. "iencia / 5ecnolog-a de los Alimentos. Escuela
de .ngenier-as Agrarias. 6!1-3ada:o%.
A - 44
Estudio de la capacidad antioxidante y antimicrobiana de extractos de P. blakesleeanus y otros
antioxidantes usados en la industria alimentaria
lndice de autores
YV
aFernndez, L., aRa, J., aValle, P., ade Cima, S., aGutirrez, M., ade Arriaga, D. y bGarca-
Armesto, M.R.
a *pto. de 3ioDu-mica / 3iolog-a +olecular. , *pto de Higiene
/ 5ecnolog-a de los Alimentos. Universidad de <e8n. 04!.
<e8n. EspaGa. >e-mail' d,,:ra&unileon.es?
A - 444
Deteccin de Campylobacter sp. en muestras de carnes de aves en la sla de Tenerife
Lpez Gonzlez-Coviella, N.; Arocha Henrquez, F.J.; Prez Prez, M.N.; Jimnez Martn, M. y
Del Arco Aguiar, A.L.
;ervicio de ;alud @M,lica / <a,oratorio. =am,la 1ral.
Franco,(3 - 346 ;9" 5eneri$e.
nlopgon&go,iernodecanarias.org
A - 44!
Caracterizacin de micrococaceas aisladas de embutidos de cerdo ibrico mediante perfil de
protenas extracelulares
Serradilla, M., Benito, M.J., Aranda, E., Prez-Nevado, F., Colin, B. y Crdoba, M.G.
Escuela de .ngenier-as Agrarias, *pto. Tootecnia, Jrea de
7utrici8n / 3romatolog-a Universidad de Extremadura, "tra.
"#ceres s9n 6!1 3ada:o%. mdeguia&unex.es
A - 444
Relacin entre la poblacin microbiana y el grado de hidrolisis de las proteinas miofibrilares en
jamones ibricos alterados
Moreno H., Prez-Nevado F., Benito M.J., Aranda E., Ruiz-Moyano S. y Martn A.
Jrea de 7utrici8n / ,romatolog-a. Escuela de .ngenier-as
Agrarias. UEU. 3ada:o%. )ermogon&/a)oo.es
A - 4(!
Optimizacin de una tcnica de PCR para la deteccin rpida (6 h de enriquecimiento) de ECVT en
productos lcteos de ovino sometidos a refrigeracin.
aCaro, .; bMateo, J.; cRa, J. y bGarca-Armesto, M.R.
aUniversidad Aut8noma del Estado de Hidalgo, +2:icoH ,*pto.
Higiene / 5ecnolog-a de los Alimentos / c*pto. 3ioDu-mica /
3iolog-a +olecular, Universidad de <e8n. 04! <e8n. EspaGa.
E-mail' d)tmga&unileon.es
Biode!adacin y Biodete!io!o
3 - 0
Biodegradacin de emulsiones fotogrficas por bacterias. Estudio mediante el mtodo indirecto de
impedancia.
Abrusci, C.1; Marquina, D.1; Santos,A.1, Del Amo, A.2; Catalina, F.3
1*epartamento de +icro,iolog-a ..., Facultad de 3iolog-a,
Universidad "omplutense de +adrid, "9 Kos2 Antonio 7ovais,
0, 044-+adrid. 0Filmoteca EspaGola, .nstituto de la
"inematogra$-a / de las Artes Audiovisuales, "9 +agdalena 1,
0410-+adrid. 3*epartamento de FotoDu-mica, .nstituto de
"iencia / 5ecnolog-a de @ol-meros, ";.", "9Kuan de la "ierva
3, 046-+adrid. ca,rusci&,io.ucm.es
3 - 06
Eficacia de la Asociacin S200C - Biosurfactante AD2 en la biodegradacin de hidrocarburos de un
crudo tipo Kirkuk
Calvo C, Toledo FL and Gonzlez-Lpez J
lndice de autores
YV1
*epartamento de +icro,iolog-a, Facultad de Farmacia, .nstituto
del Agua Universidad de 1ranada. "9 =am8n / "a:al nV 4.
14!1 1ranada. ccalvo&ugr.es
3 - !
Propiedades bactericidas de aceros inoxidables aleados con cobre y niobio
Baena, M..1, Mrquez, M.C.1, Matres, V.2, Guio, M.J.2, Botella, J.2 y Ventosa, A.1
1*epartamento de +icro,iolog-a / @arasitolog-a, Facultad de
Farmacia, Universidad de ;evilla, 4110 ;evilla. E-mail'
cmarDue%&us.es. 0"entro de .nvestigaci8n / Ensa/os,
Acerinox ;.A. Villa de @almones, 113!6 <os 3arrios >"#di%?
3 - 44
Rol fisiolgico de una salicilato hidroxilasa adicional nica en Pseudomonas stutzeri
Lanfranconi,M.P., Martn-Cardona C., Christie-Oleza J.A., Nogales B., Lalucat J. y Bosch R.
+icro,iolog-a, *to 3iolog-a, Universitat de les .lles 3alears
>U.3? "ta Valldemossa \m !,( A !100 @alma de +allorca. e-
mail' marianalan$ranconi&/a)oo.com.ar
3 - 1(0
La biotransformacin de aceites txicos y peligrosos reduce la concentracin de polifenoles.
Jimnez P.A.; Llinares F., Montadas A., Garca de los Ros J., Redondo, P., Daz R.
Universidad ;an @a,lo "EU., Fac. Farmacia, @.R. 3ox 6!
3oadilla del +onte, +adrid. pgimgom&ceu.es
3 - 0(
Uso de Myxococcus xanthus para la consolidacin de piedra ornamental. Aproximacin al
tratamiento "in situ.
Jimnez Lpez C.1, Pascolini C.1, Carrillo Rosa, F.J.2, Rodrguez Navarro C.M.2, Rodrguez
Gallego M.2 y Gonzlez-Muoz, M.T.1
1*pto. +icro,iolog-a / 0*pto. +ineralog-a / @etrolog-a.
Facultad de "iencias. Universidad de 1ranada. "ampues de
Fuentenueva s9n. 14!1 1ranada
3 - 041
Degradacin in vitro de los componentes de los discos compactos por un hongo aislado de un CD
biodeteriorado
Romero, E.1, Garca-Guinea J.2, Martnez, A.T.1 y Martnez, M.J.1
1"entro de .nvestigaciones 3iol8gicas, ";.", =amiro de
+ae%tu 6, 044 +adrid, 0+useo 7acional de "iencias
7aturales, ";.", Kos2 1uti2rre% A,ascal 0, 046 +adrid >e-
mail' eromero&ci,.csic.es?
3 - 043
Una nitrito/sulfito reductasa quimrica forma parte del opern de genes para la resistencia al
cianuro en Pseudomonas pseudoalcaligenes CECT5344.
Quesada A., Guijo M.., geo M.., Merchn F. y Blasco R.
*epartamento de 3ioDu-mica, 3iolog-a +olecular / 1en2tica.
Facultad de Veterinaria. Universidad de Extremadura. Avenida
de la Universidad ;7. 1!1-"#ceres.
3 - 330
Propiedades fsico-qumicas y cinticas de la enzima lacasa inmovilizada de Fusarium proliferatum
Gonzlez Arzola K. y Falcn Sanabria M. A.
*epartamento de +icro,iolog-a / 3iolog-a "elular. Facultad de
Farmacia. Universidad de <a <aguna. Avenida Astro$-sico
lndice de autores
YV11
Francisco ;#nc)e%. 3406. <a <aguna. 5eneri$e. "orreo
electr8nico' Satiga&)otmail.com
3 - 334
Estudio del potencial ligninoltico de dos cepas de Fusarium proliferatum aisladas de diferentes
hbitats
Carnicero A.1, Gonzlez K.1, Anderson A.2, Kwon S-.2 y Falcn M.A.1
>1? *epartamento de +icro,iolog-a / 3iolog-a "elular. Facultad
de Farmacia. Universidad de <a <aguna. Avda. Astro$-sico Fco.
;#nc)e% s9n. 3406 <a <aguna 5eneri$e. E-mail
ma$alcon&ull.es. 0? *epartment o$ 3iolog/. U5AH ;tate
Universit/. <ogan, U5 44300-(3(, U.;.A.
3 - 404
Fermentacin en estado slido de pulpa de caf con distintas cepas de Streptomyces. Posibles
aplicaciones del residuo fermentado
Orozco, A.L.1, Guevara, O.1, Prez Leblic, M..2, Arias, M.E.2 y Rodrguez, J.2
1*epartamento de 3iolog-a. U7A7 <e8n. 7icaragua.
0*epartamento de +icro,iolog-a / @arasitolog-a. Facultad de
Farmacia. 044!1 Alcal# de Henares. +adrid. EspaGa. E-mail'
:uana.rodrigue%&ua).es
3 - 43(
Biorremediacin "in situ de aguas subterrneas contaminadas con hidrocarburos del petrleo
Menndez D.1, Pelez A..1, Gallego J.L.2 y Snchez J.1
1Jrea de +icro,iolog-a. Facultad de +edicina. Universidad de
Rviedo. "9Kuli#n "laver-a, s9n A 336 Rviedo >Asturias-
EspaGa?, uo4466&uniovi.esH 0 "ampus de +ieres.
Universidad de Rviedo. "9 1on%alo 1ut. B., s9n A 336 +ieres
>Asturias-EspaGa?.
3 - 43!
Aplicacin de la lacasa producida por Streptomyces cyaneus CECT 3335 y de sistemas
lacasa/mediador en la decoloracin de colorantes textiles.
Hernndez, M., Molina, J.M., Moya, R., Rodrguez, Y., Seor, A., Troyano, N. y Arias, M.E.
*epartamento de +icro,iolog-a. Universidad de Alcal#. Alcal#
de Henares, 044!1 +adrid. E-mail' manuel.)ernande%&ua).es
Mic!obiolo,a Cl,nica
" - 16
dentificacin de parsitos intestinales emergentes Cryptosporidium parvum, Ciclospora
cayetanensis, sospora belli, Blastocystis hominis y Microsporidias en pacientes peditricos.
Carrillo Mndez . y Vargas Arzola.J.
*epartamento de +icro,iolog-a "l-nica. Facultad de "iencias
Bu-micas. Universidad Aut8noma 3enito Ku#re% de Raxaca. "d.
Universitaria Ex)acienda "inco ;eGores, Raxaca Rax. +2xico.
carrilloWivon&cat.ua,:o.mx carrilloWivon&)otmail.com
" - 00
Resistencia de Bacteroides fragilis a antimicrobianos beta-lactmicos: papel de la PBP2Bfr y de las
beta-lactamasas CfiA y CepA.
Priz, S.1, Quesada, A.1, Garca, N.1, Lorenzo, M.1, Garca, E.2, Valle, J.1, Vadillo, S.1 y
Ayala, J.3
1Facultad de Veterinaria, Avda. de la Universidad s9n, 1!1
"#ceres >e-mail' spiri%&unex.es?. 0Facultad de +edicina,
"ampus ]+iguel de Unamuno], 3!! ;alamanca. 3"entro de
lndice de autores
YV11
1
3iolog-a +olecular ];evero Rc)oa], ";."-UA+, 0446
"anto,lanco >+adrid?.
" - 31
Anlisis transcripcional de la respuesta de tolerancia a cido en Streptococcus pneumoniae
Martn-Galiano A. J.1&, Overweg K.2 , Ferrndiz M. J.1 , Reuter M. 2 , Wells J.2 y de la
Campa A. G.1
1"entro 7acional de +icro,iolog-a. .nstituto de ;alud "arlos
.... 0400, +a:ada)onda, +adrid, ;pain. 0.nstitute o$ Food
=esearc), 7orXic) =esearc) @arS, 7orXic) 7=4 !UA. United
\ingdom. ^*irecci8n actual' <e)rstu)l $_r 1enomorientierte
3ioin$ormatiS. Yissensc)a$ts%entrum Yei)enstep)an, Am
Forum 1, 4(3(4 Freising, 1erman/. `*irecci8n actual' 5)e
Universit/ o$ Amsterdam, ;Xammerdam .nstitute $or <i$e
;ciences, 7ieuXe Ac)tergrac)t 166, 114 YV Amsterdam, 5)e
7et)erlands. Adela 1. de la "ampa' agcampa&isciii.es
" - !3
Conocemos el nmero de infecciones por Yersinia enterocolitica O:9? que ocurren en Espaa?
Garca-Bermejo 1., Rubio M.2, Snchez M.1 y Daz R.2
1.;ervicio de +icro,iolog-a, Hospital Universitario de 1eta$e.
1eta$e. +adrid. 0.;ervicio de +icro,iolog-a "l-nica. "l-nica
Universitaria. Universidad de 7avarra. @amplona.
" - 41
Cepas de Streptococcus pneumoniae con genes parC y parE recombinantes: estudios
transcripcionales y de eficacia biolgica
Balsalobre, L. y G. de la Campa, A.
"entro 7acional de +icro,iolog-a, .nstituto de ;alud "arlos ...,
+a:ada)onda 0400, +adrid. lu%,al&isciii.es
" - 66
Actividad biolgica de componentes de la membrana externa de Yersinia enterocolitica O9 en
cultivos de esplenocitos murinos
Romero, F., Leiva, M., Moreno, E., Jimnez-Valera, M., Ruiz-Bravo, A.
Universidad de 1ranada. 1ranada 14!1. E-mail'
arui%,r&ugr.es
" - 6!
Actividad antiinflamatoria de la telitromicina en un modelo de shock sptico
Leiva, M.M., Ruiz-Bravo, A., Moreno, E., Jimnez-Valera, M.
lenaleiva&)otmail.com
" - 66
Modificacin por Lactobacillus plantarum de la funcin inmunitaria intacta y comprometida por un
tratamiento inmunosupresor.
Bujalance, C., Moreno, E., Ruiz-Bravo, A., Jimnez-Valera, M.
*epartamento de +icro,iolog-a, Faculad de Farmacia,
m:valera&ugr.es
" - 1
nmunomodulacin por moxifloxacino en ratones inmunolgicamente intactos y ratones
inmunocomprometidos.
lndice de autores
Y1Y
Amat, M.A., Moreno, E., Ruiz-Bravo, A. y Jimnez-Valera, M.
angelesamat)d%&)otmail.com
" - 13
Deteccin de neumolisina durante la infeccin neumoccica en ratones
Garca-Surez M.M.1, Vzquez F.1, Astudillo A.2, Villaverde R.1, lvarez S.1, Mndez F.J.1
1Jrea de +icro,iolog-a, *pto. 3iolog-a Funcional, Universidad
de Rviedo. 0Jrea de Anatom-a @atol8gica, Hospital "entral de
Asturias. "9 Kuli#n "laver-a nV 6, 336, Rviedo. Asturias.
garciamar&uniovi.es
" - 130
Toxiinfeccion alimentaria por Vibrio parahaemolyticus
Juste, C., Larrosa, N., Godoy, P., Domnguez, A., Bartolom, R.
Hospital Universitario Valle de He,r8n. 3arcelona.
c:uste&v)e,ron.net
" - 13!
Anlisis comparativo mediante tcnicas moleculares de esputos de enfermos de fibrosis qustica.
Montesi. A.1, Pozuelo M.J.1, Jimnez Gmez P.A.1, Molina, A.2, Cantn, R.2 y Rotger, R.3
1*pto. 3iolog-a "elular, 3ioDu-mica / 3iolog-a +olecular.
Facultad de Farmacia, Universidad ;an @a,lo-"EU.
Ur,ani%aci8n +onte @r-ncipe, 3oadilla del +onte. 04664
+adrid. 0;ervicio de +icro,iolog-a, Hospital =am8n / "a:al,
0434 +adrid. 3*pto. +icro,iolog-a .., Facultad de Farmacia,
Universidad "omplutense. 044 +adrid.
" - 143
Deteccin y anlisis de la huella molecular de Mycobacterium spp. mediante un nuevo sistema de
PCR-DGGE.
Poblet-Mas, N.1, Rodrguez-Lzaro, D.2, de Batlle J.3, Ayuso, A.4 y Garcia-Gil, L.J.1
1. <a,oratorio de +icro,iolog-a +olecular. Universitat de
1irona, "ampus de +ontilivi, 1!!11irona.
nuriapo,let&)otmail.com. 0. 3acterial +olecular
@at)ogenesis. Facult/ o$ +edical and Veterinar/ ;ciences.
Universit/ o$ 3ristol 3;4 (*U <ang$ord, 3ristol U.\.H 3.
;ervicio de An#lisis "l-nicos. Hospital Universitario Kosep
5rueta Av. FranPa s9n 1!! 1ironaH 4' "entro de .nvestigaci8n
3#sica de EspaGa >".3E?, +ercS, ;)arp and *o)ne, 040!
+adrid.
" - 144
Establecimiento de puntos de corte de seguimiento de resistencia a florfenicol en Escherichia coli
basados en la presencia de genes de resistencia
Moreno, M.A., Garca, M., Teshager, T., Porrero, M.C., y Domnguez, L.
*epartamento de ;anidad Animal, Facultad de Veterinaria,
Universidad "omplutense, 044, +adrid -
mamoreno&vet.ucm.es
" - 1!3
Resistencia a altos niveles de mupirocina en linajes pandmicos de Staphylococcus aureus
resistentes a meticilina(SARM).
Prez-Roth E1, Lpez-Aguilar C1, Alcoba-Florez J1, Lorenzo-Daz F1, Mndez-lvarez S1,2.
lndice de autores
YY
1Unidad de .nvestigaci8n, Hospital Universitario 7tra. ;ra. de
"andelaria >HU7;"?, 0*epartamento de 3iolog-a "elular /
+icro,iolog-a, Universidad de <a <aguna, ;9" de 5eneri$e. e-
mail' eduardorot)&)otmail.com
" - 160
nduccin de muerte celular programada por lactoferrina en clulas de Candida albicans.
Andrs M.T., Viejo-Daz M. y Fierro J.F.
<a,oratorio de +icro,iolog-a Rral. Escuela de Estomatolog-a.
Facultad de +edicina. Universidad de Rviedo. E-mail'
:$$ierro&uniovi.es
" - 164
Caracterizacin de Betalactamasas de Espectro Ampliado (BLEAS) en cepas de Salmonella
enterica de origen humano aisladas en 2004.
Ramiro, R., Gonzalez-Sanz, R., Arroyo, M., Valdezate, S., De la Fuente, M., Herrera, S.,
Aladuea, A. y Echeita, M.A.
<a,oratorio 7acional de =e$erencia de ;almonella / ;)igella
><7=;;E?. ;ervicio de 3acteriolog-a. "entro 7acional de
+icro,iolog-a. .nstituto de ;alud "arlos .... 0400
+a:ada)onda. +adrid. E-mail' aec)eita&isciii.es
" - 00
Medidas alternativas al uso de antimicrobianos en explotaciones porcinas
Lpez G., Libana P., Cebolla J., Farelo F., Brcena C., Martnez C., Domnguez L.

" - 004
Distribucin de serotipos de Campylobacter jejuni aislados en Espaa durante 2002-2004.
Simn-Baamonde C., Prez-Boto D., Lpez-Portols J.A., y Echeita M.A.
<a,oratorio de "amp/lo,acter. ;ecci8n de Entero,acterias.
;ervicio de 3acteriolog-a. "entro 7acional de +icro,iolog-a.
.nst. ;alud "arlos .... "tra. +a:ada)onda a @o%uelo, \m 0.
0400 +a:ada)onda. +adrid. EspaGa. "orreo electr8nico'
dp,oto&isciii.es
" - 043
Estudio y caracterizacin de factores de virulencia de E. coli aislados de un brote de colibacilosis
en codornices
Gubert M., Tllez S., Goyache J., Briones V., Domnguez L.
<a,oratorio V.;AVE5 -;anidad Animal -Facultad de
Veterinaria. Universidad "omplutense de +adrid. Hospital
cl-nico Veterinario- @lanta ;8tano. Avda. @uerta de Hierro s9n
044 +adrid. maguisgi,ert&vet.ucm.es
" - 04!
Efecto del lavado de las mamas sobre la calidad microbiolgica de la leche materna
Lpez M.C., March L., Mata C., Molina V., Molina A., Fons J., Martnez-Costa C., Silvestre M.D.
Universidad "ardenal Herrera-"EU, Edi$icio ;eminario s9n.
46113 +oncada >Valencia?. E-mail' dsilves&uc).ceu.es
" - 044
Caracterizacin de un integrn de clase 2 encontrado en dos cepas multirresistentes a
antimicrobianos de Salmonella enterica serotipo Virchow.
Rodrguez, .a, Martn, M.C.b, Herrero, A.a, Rodicio, M.R.a, Mendoza, M.C.a
aJrea +icro,iolog-a, *epartamento de 3iolog-a Funcional,
Universidad de Rviedo, c9 Kuli#n "laver-a 6, 336 RviedoH
lndice de autores
YY1
eirene4&/a)oo.es. ,.nstituto de @roductos <#cteos de Asturias
>.@<A?, Villaviciosa, Asturias
" - 0(1
Resistencia a antimicrobianos, integrones y plsmidos en aislamientos clnicos de Salmonella
enterica serotipo Brandenburg
Martnez, N.1, Gonzlez-Hevia, M.A.2, Rodriguez, M.3, Rodicio, M.R.1, y Mendoza, M.C.1
1*epartamento de 3iolog-a Funcional, Universidad de
Rviedo,c9 Kuli#n "laver-a 6, 336 Rviedo,
noemartine%alv&)otmail.com. 0<a,oratorio de ;alud @M,lica.
"onse:er-a de ;anidad. @rincipado de Asturias. 3;ervicio de
+icro,iolog-a. Hospital Universitario "entral de Asturias.
Rviedo.
" - 0(3
Evaluacin de la sensibilidad a antimicrobianos en Mycobacterium bovis y Mycobacterium caprae
de origen animal.
Romero, B.1, Bezos, J.1, lvarez, J.1, de Juan, L.1, Aranaz, A.1, Mateos, A.1, Gmez-
Mampaso, E.2 y Domnguez, L.1
1*pto. ;anidad Animal. Facultad de Veterinaria. Universidad
"omplutense de +adrid, 0 ;ervicio de +icro,iolog-a, Hospital
=am8n / "a:al, .+;A<U*, +adrid. ,romerom&vet.ucm.es
" - 0((
The effects of red and white wines on the growth in vitro of Helicobacter pylori
Mateus, MP1; Dionsio, LPC2; Borges, N3; Pereira C2.
1Escola ;uperior da ;aMde de Faro >E;;aF?, Universidade do
Algarve, Estrada de <oul2, 4-(1Faro, @ortugal
mplopes&ualg.pt H 0Faculdade de Engen)aria de =ecursos
7aturais >FE=7?, Universidade do AlgarveH 3Faculdade de
"iancias da 7utriPQo e AlimentaPQo >F"7A?, Universidade do
@orto
" - 0(6
Estudio de los mecanismos de resistencias de fluoroquinolonas, macrlidos y tetraciclinas en cepas
de C. jejuni y C. coli de origen humano y alimentario
Martnez, ., Mateo, E., Girbau, C., Churruca, E., Fdz. de Aranguiz, A., Alonso, R. y Fernndez-
Astorga, A.
1astei%. E-mail' aurora.$ernande%&e)u.es
" - 3
Anlisis de la poblacin bacteriana presente en ubres de novillas sanas gestantes y resistencia a
antimicrobianos
Rigaut D.Rigaut D., Soriano C.Soriano C., Cubillo .Cubillo ., Moreno M.A. y Domnguez L.
*pto. de ;anidad Animal. Facultad de Veterinaria. Universidad
"omplutense de +adrid- Av. @uerta de Hierro s9n- 044
+A*=.*. E-mail de contacto' drigaut&vet.ucn.es
" - 36
Accin de los concentrados proteicos de Lactobacillus plantarum sobre una lnea leucmica
humana
Puertollano E, Puertollano MA, Cruz-Chamorro L, lvarez de Cienfuegos G, de Pablo MA
lndice de autores
YY11
Universidad de Ka2n, Facultad de "iencias Experimentales,
Jrea de +icro,iolog-a, 03!1 KAE7 >;pain?. e-mail'
mpvacas&u:aen.es
" - 304
Genotipos de Papilomavirus humano detectados en muestras de displasia cervical
Galan F, Anaya B, Torrejn R, Palacios E, Domnguez A, Garca-Valdivia MS, Comino R,
Rodrguez-glesias MA
<a,oratorio de +icro,iolog-a, ;ervicio de 1inecolog-a /
Unidad de .nvestigaci8n. Hospital Universitario de @uerto =eal,
Universidad de "#di%. "arretera 7acional .V \m 66(, 11(1-
@uerto =eal >manuel.rodrigue%iglesias&uca.es?
" - 334
Deteccin de citoquinas mediante RT-PCR para el diagnstico de la tuberculosis en un rebao
caprino.
Bezos J., lvarez J., Romero B., de Juan L., Aranaz A., Mateos A., Domnguez L.
*epartamento de ;anidad Animal, Facultad de Veterinaria.
Universidad "omplutense de +adrid. Avda. @uerta de Hierro
s9n. 044. +adrid. :,e%osga&vet.ucm.es
" - 363
Relaciones entre frecuencia de mutacin y resistencia a los antimicrobianos en Escherichia coli de
origen animal
Escudero, E, Porrero, M.C., Rivero, E., Domnguez L., y Moreno, M.A.
Universidad "omplutense, Avda. @uerta de Hierro, s9n, 044,
+adrid, eescudero&vet.ucm.es
" - 414
Efecto de ritonavir en la adherencia de Candida dubliniensis a clulas epiteliales bucales.
Lucio L.; Morales J.J.; Beteta A.; Sacristn B.; Prez Giraldo C.; Blanco M.T.
*epartamento de +icro,iolog-a Facultad de +edicina.
Universidad de Extremadura. Avda. Elvas s9n. 3ada:o%. >E-
mail' matere&unex.es?
" - 414
Estudio retrospectivo de bacteriemia en pacientes sometidos a trasplante autlogo de progenitores
hematopoyticos
Amigo Lozano, M.L.1, Teno Snchez, P.2, Yiguez Ovando, R.2, Bergua Burgos, J.1.
1 ;ecci8n de Hematolog-aH 0 ;ecci8n de +icro,iolog-a.
"omple:o Hospitalario de "#ceres. Avda. @a,lo 7aran:o, s9n.
13 "#ceres. pilar.teno&ses.:untaex.es
" - 400
Aplicacin de marcadores genticos para la deteccin de islas de patogenicidad en Staphylococcus
aureus procedentes de portadores humanos
1Argudn, M. A., 1Fueyo, J. M., 1Rodicio M. R., 1Mendoza M. C. y 2Martn M. C.
1*epartamento de 3iolog-a Funcional >Jrea de +icro,iolog-a?,
Universidad de Rviedo, e .nstituto Universitario de
3iotecnolog-a de Asturias >.U3A?, c9Kuli#n "laver-a s9n, 336,
Rviedo. 0.nstituto de @roductos <#cteos de Asturias >";."?,
"arretera de .n$iesto s9n, 333 Villaviciosa, Asturias.
marianWargu&)otmail.com.
" - 4(6
Actinobacillus actinomycetemcomitans : it's outer membrane.
lndice de autores
YY11
1
Escribano, C1 ; Ruiz, L1 ; Vinuesa, T1 ; Benz, R2 ; Vias, M1
1;ecci8 de +icro,iologia. *epartament de @atologia i
5erapeutica experimental. Facultat *NRdontologia. Universitat
de 3arcelona. . Feixa <larga s9n 46!. Hospitalet de <lo,regat.
3arcelona. ;pain. 0 <e)rst)ul $_r 3iotec)nologie. Universit/ o$
Y_r%,urg. 1erman/. "orresponding aut)or'
escri,an0&mixmail.com
" - 46
Relationship between clinical and environmental isolates of Pseudomonas aeruginosa in the
hospital setting.
Ruiz L, Escribano C, Vinuesa T, and Vias M
+icro,iolog/ Unit. *epartment o$ @at)olog/ and Experimental
5)erapeutics. Universit/ o$ 3arcelona. "ampus de 3ellvitge.
Feixa <larga s9n 46!. Hospitalet de <lo,regat. 3arcelona.
;pain. lidiarui%m&u,.edu
" - 460
La importancia de una adecuada recogida de muestras, para el diagnstico micolgico de la tia
ungeal.
Zalacain A., Ruiz L., Escribano C., Vinuesa T., y Vias M.
Unidad de +icro,iolog-a. *epartamento de @atolog-a /
5erap2utica Experimental. Universidad de 3arcelona. "ampus
de 3ellvitge. Feixa <larga s9n 46!. Hospitalet de <lo,regat.
3arcelona. a%alacain&u,.edu
Mic!obiolo,a Medioambiental
E - 13
dentificacin de bacterias filamentosas con los morfotipos Nostocoida limicola , y con la
tcnica FSH en EDARs de la Comunidad Valenciana
Alonso J.L.1, Navarro M.D.1, Cuesta G.2, Ramrez G.1
1.nstituto de .ngenier-a del Agua / +edio Am,iente /
0*epartamento de 3iotecnolog-a, Universidad @olit2cnica,
"amino de Vera 14, 4600 ValenciaH e-mail'
:alonso&i)dr.upv.es
E - 16
Deteccin de Cryptosporidium en aguas y fangos de EDARs de la Comunidad Valenciana mediante
MS/FA y PCR
Amors, .1, Navarro1, M.D., Berncer .2 y Alonso, J.L.1
1.nstituto de .ngenier-a del Agua / +edio Am,iente,
Universidad @olit2cnica, "amino de Vera 14, 4600, Valencia /
0Entidad de ;aneamiento de AguasH e-mail'
iamoros&i)dr.upv.es
E - 1!
Deteccin de Giardia en aguas y fangos en EDARs de la Comunidad Valenciana
Navarro, M.D.1, Amors, .1, Berncer, .2 y Alonso, J.L.1
1.nstituto de .ngenier-a del Agua / +edio Am,iente,
Universidad @olit2cnica, "amino de Vera 14, 4600 Valencia /
0 Entidad de ;aneamiento de AguaH e-mail'
dolnala&doctor.upv.es.
E - (0
lndice de autores
YY1
V
Plasticidad genmica y mutacin: dos mecanismos genticos involucrados en la adaptacin de un
microorganismo ante un estrs qumico
Martn-Cardona C., Christie-Oleza J.A., Lanfranconi M.P., Nogales B., Lalucat J. y Bosch R.
+icro,iolog-a, *epartamento de 3iolog-a, Universitat .lles
3alears. "tra. Valldemossa \m. !,( - !100 @alma de +allorca.
e-mail' celia.martin&ui,.es
E - !1
Deteccin y desinfeccin de huevos de parsitos en lodos urbanos, para su posterior utilizacin en
agricultura.
Beringola M.L.; Delgado M M., Miralles de mperial R.; Martn J. V.
.nstituto 7acional de .nvestigaciones Agrarias >.7.A?. "rta. <a
"oruGa, Sm !.(. +adrid 044. l,eringo.&inia.es
E - 60
Las lacasas en presencia de mediadores fenlicos de origen natural son eficaces sistemas para
degradar contaminantes aromticos
Caas Ana .*, Martnez M.J., Martnez A.T. y Camarero S.
".3, ";.". =amiro de +ae%tu 6, 044 +adrid.
anacp&ci,.csic.es
E - 1(!
Diseo Experimental de Trazabilidad ndividual Porcina en Explotaciones ntensivas de Cerdo
Blanco.
Cebolla Vieites, J. A.; Domnguez Rodrguez, L.; Lopez Orozco, G.; Farelo, F.; Martnez
Fernndez, C.; Libana Martnez, P.; Martn Rueda, R.; Gil Pascual, A.; Arranz, J. L.
<a,oratorio V.;AVE5. Facultad de Veterinaria. Universidad
"omplutense de +adrid. Hospital "l-nico Veterinario - @lanta
;otano. Avda. @uerta de Hierro ;97. 044 +adrid.
Kace,oll&vet.ucm.es
E - 1!1
Deteccin y cuantificacin de Legionella spp en muestras ambientales mediante la metodologa de
RT-PCR
Gruas, C.*; Navarro, M.**; Grasa, B.**; Garca, C. B.* y Arruga, M. V.*
I<a,oratorio de "itogen2tica / 1en2tica +olecular. Facultad de
Veterinaria. +iguel ;ervet, 1!!- (13 TA=A1RTA.
II.nstituto +unicipal de ;alud @M,lica. "arretera de "ogullada
s9n. (14 TA=A1RTA. cgruas&uni%ar.es
E - 1!4
Diversidad microbiana del suelo agrcola cultivado con diferentes variedades de Pyrus communis
Escolano, J; Salazar, ; Martnez-Alonso, M; Gaju, N.
*epartamento de 1en2tica / +icro,iolog-a. Universidad
Aut8noma de 3arcelona. 4163 3ellaterra >3arcelona?. E-mail'
Kordi.Escolano&ua,.es
E - 14!
Nuevas perspectivas en la regulacin global de la ruta de sntesis de polihidroxialcanoatos en
Pseudomonas putida KT2442.
De Eugenio L..*, Galn B., Garca P., Garca J.L. y Prieto M.A.
*epartamento de +icro,iolog-a +olecular, "entro de
.nvestigaciones 3iol8gicas, ";.", "9 =amiro de +ae%tu,
044, +adrid. Ie-mail' lidem&ci,.csic.es
E - 06
Seleccin de inoculantes microbianos para procesos de compostaje de residuos vegetales.
Vargas Garca, M.C., Surez Estrella, F., Lpez, M.J. y Moreno, J.
lndice de autores
YYV
Jrea de +icro,iolog-a, *epartamento de 3iolog-a Aplicada,
Universidad de Almer-a, <a "aGada de ;an Ur,ano, 410
Almer-a. E-mail' mllope%&ual.es
E - 0!
Efecto de los extractos hmicos solubles, procedentes del compostaje de residuos hortcolas, sobre
microorganismos indicadores de la fertilidad del suelo
Surez-Estrella, F., Vargas-Garca, M.C., Lpez, M.J., Fernndez-Orts, E. y Moreno, J.
*pto. 3iolog-a Aplicada. Jrea de +icro,iolog-a. ".5E .. 3. <a
"aGada de ;an Ur,ano, 410, Almer-a. E-mail'
$suare%&ual.es
E - 06
Prevalencia de Penicillium rugulosum en archivos y bibliotecas del rea mediterrnea
Calvo, MA., Adelantado, C.,Shiva, C., y Arosemena L.
3ellaterra >3arcelona?. +ariangels."alvo&ua,.es
E - 01
Evolucin de la microbiota presente en una cadena de loncheado y envasado de embutidos tras la
instauracin de un sistema APPCC
Arosemena, L., Adelantado, C., Shiva, C., y Calvo, MA.
3ellaterra >3arcelona?. arosemenaleo&)otmail.com
E - 011
Decoloracin in vitro de colorantes industriales por ligninasas de microorganismos aislados a partir
de pilas de compostaje
Guisado, G., Lpez, M.J., Vargas-Garca, M.C., Surez-Estrella, F. y Moreno, J.
Jrea de +icro,iolog-a, *epartamento de 3iolog-a Aplicada,
Universidad de Almer-a, <a "aGada de ;an Ur,ano, 410
Almer-a. E-mail' gmaria&ual.es
E - 00!
Chelate-enhanced Pb phytoremediation: effect of EDTA and EDDS on microbiological indicators of
soil health
Hernndez-Allica J1, Becerril JM2, Epelde L1, Zarate O1, Blanco F1, Garbisu C1
17E.\E=, 3asDue .nstitute o$ Agricultural =esearc) and
*evelopment, c93erreaga, 1, E-4416 *erio, ;pain.
lepelde&neiSer.net. 0*ept. @lant 3iolog/ and Ecolog/,
Universit/ o$ t)e 3asDue "ountr/, @.R. 3ox 644, E-444
3il,ao, ;pain.
E - 004
Soil microbial biodiversity and biomass as microbiological indicators of the efficiency of a metal
phytoremediation process
Zarate O1, Hernndez-Allica J1, Becerril JM2, Epelde L1, Blanco F1, Garbisu C1
17E.\E=, 3asDue .nstitute o$ Agricultural =esearc) and
*evelopment, c93erreaga, 1, E-4416 *erio, ;pain.
cgar,isu&neiSer.net. 0*ept. @lant 3iolog/ and Ecolog/,
Universit/ o$ t)e 3asDue "ountr/, @.R. 3ox 644, E-444
3il,ao, ;pain.
E - 030
Bioadsorcin de Cr, Pb, Co, Mn, La y Ni por biomasa hmeda de una bacteria marina
lndice de autores
YYV
1
Gonzlez-Muoz, M.T.1, Morcillo, F.1, de Linares, C.2, Martnez-Ruz, F.3, Merroun, M.L.4 y
Arias, J.M.1
1*epartamento de +icro,iolog-a, 0*epartamento de 3ot#nica,
3*epartamento de +ineralog-a / @etrolog-a, Fac.de "iencias,
Universidad de 1ranada, Avda. Fuentenueva s9n. E-144
1ranada. 5el.' 6(4 04336!. Fax' 6(4 046446. E-mail'
:marias&ugr.es 4Forsc)ungs%entrum =ossendor$..nstitut $_r
=adioc)emie. 1ruppe $_r +oleSulare +iSro,iologie.*- 1314
*resden. Alemania
E - 034
Microbiota bacteriana del ambiente de una industria farmacutica
De la Rosa, M.C., Snchez, M. C. y Mosso, M. A.
*epartamento de +icro,iolog-a ... Facultad de Farmacia.
U"+. +adrid >044?.
e-mail' delarosa & $arm.ucm.es
E - 06
Diatomeas y protolquenes fsiles en un medio rico en jarosita en arenisca de Mount Fleming (Dry
Valleys, Antrtida)
Ascaso, C.* y Wierzchos, J.**
I*epartamento de Ecolog-a de ;istemas. .nstituto de =ecursos
7aturales >""+A?, ";.", ;errano 11( ,is. +adrid 046.
ascaso&ccma.csic.es. II;ervei de +icroscop-a Electr8nica,
Universidad de <leida. =ovira =oure 44, <leida. 0(164
E - 063
Contaminacin ambiental por Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis en una granja de
ganado caprino.
lvarez, J., Romero, B., Bezos, J., de Juan, L., Aranaz, A., Mateos, A., Domnguez, L.
*epartamento de ;anidad Animal, Facultad de Veterinaria.
Universidad "omplutense de +adrid. Avenida @uerta de Hierro
s9n. 044. +adrid. :alvare%&vet.ucm.es
E - 0!3
Seroprevalencias y factores predisponentes de la enfermedad de Aujezsky, la Brucelosis y la
Parvovirosis en una poblacin de jabales en un rea mediterrnea.
Cerrato R., Fernndez-Llario P., Corts M., Bermejo F., Snchez M., Pereira G. y Hermoso de
Mendoza J.
*epartamento de +edicina / ;anidad Animal, Universidad de
Extremadura. rcerrato&unex.es
E - 046
Fitorremediacin de suelos contaminados con Cromo utilizando Hirschfeldia incana-Pseudomonas
maltophilia
Arco N., Tamallo F.G., Soto J., Romero C.
*epartamento de Bu-mica / +edio Am,iente, Escuela ;uperior
@olit2cnica, Universidad Europea de +adrid, Villaviciosa de
Rd8n, 046! +adrid. mWcarmen.romero&uem.es
E - 303
Evaluacin sanitaria de la tecnologa de infiltracin rpida sobre el suelo.
Casermeiro, M.A.1; De la Losa, A.2; Moreno, L.2 y Navarro-Garca, F.3
1*ept. de Eda$olog-a, Fac. de Farmacia, U"+. 0*irecci8n de
Hidrogeolog-a / Aguas ;u,terr#neas, .nstituto 1eol8gico
lndice de autores
YYV
11
+inero de EspaGa, U"+. 3*ept. de +icro,iolog-a .., Fac. de
Farmacia, Universidad "omplutense de +adrid.
E - 304
Regulacin de la ruta de degradacin del cido 3-hidroxifenilpropinico en Escherichia coli.
Manso, .1, Galn, B.1, Sanz, J. M.2, Prieto, M. A.1 y Garca, J. L.1
1*epartamento de +icro,iolog-a +olecular. "entro de
.nvestigaciones 3iol8gicas >".3?-";.", "9 =amiro de +ae%tu,
6, 044 +adrid. 0.nstituto de 3iolog-a +olecular / "elular.
Universidad +iguel Hern#nde%. Avda. Ferrocarril s9n., 300-
Elc)e >Alicante?. macoi&ci,.csic.es
E - 364
Situacin de las aguas de piscina de la provincia de Badajoz
Villalba Doblas, A.M.(1), Ambel Carracedo, M.P.(2), Cobos Rodrguez, J.G.(3), Montes
Calatayud,Y.(4)
>1? <a,oratorio ;alud @M,lica 3ada:o%. "9=onda del @ilar nV 00.
3ada:o% 60. >0? EA@ "entro ;alud <os ;antos de +aimona.
"9<a 1ran:a 16. <os ;anto 603. >3? *ep. Bca. Anal-tica /
ElectroDu-mica. UEU. 3ada:o%. >4? <a,oratorio ;alud @M,lica
3ada:o%. "9=onda del @ilar nV 00. 3ada:o% 60.
anamaria.villal,a&sc.:untaex.es
E - 34
Degradacin de compuestos aromticos por las bacterias halfilas moderadas Halomonas
organivorans y Thalassobacilus devorans
Garca, M.T., Ventosa, A. y Mellado, E.
*epartamento de +icro,iolog-a / @arasitolog-a, Facultad de
Farmacia, Universidad de ;evilla. emellado&us.es
E - 340
Estudio de las comunidades microbianas asociadas a un proceso de compostaje experimental de
alpeorujo.
Morillo J.A.1, Antizar-Ladislao B.2, Beck A.2, Fuentes S.1, Monteoliva-Sanchez M.1, Ramos-
Cormenzana A.1, Russell N.J.2
1 *epartamento de +icro,iolog-a, Facultad de Farmacia,
Universidad de 1ranada. 0 .mperial "ollege <ondon, Y/e
"ampus, United \ingdom.
E - 44
Anlisis del material extracelular excretado por Pseudoalteromonas antarctica NF3 mediante
criofijacin por alta presin y criosustitucin
Nevot M., Deroncel V., Lpez-glesias C.1, Bozal N., Guinea J., Mercad E.
*epartamento de +icro,iolog-a / @arasitolog-a ;anitarias.
Facultad de Farmacia Universidad de 3arcelona. Avd. Kuan
UU... s9n 404 3arcelona.1 ;ervicios "ienti$ico-52cnicos de
la Universidad de 3arcelona. "orreo electr8nico'
mnevot&/a)oo.es
E - 41!
Glicolpidos bacterianos: Composicin y propiedadesfsico-qumicas
Marqus, A.M.1;Garreta A.1; Aranda F.J.2;Sarr, J.1; Teruel J.A.2;Espuny, J.1; Manresa, A.1;
Ortiz, A.2
1<a,oratori de +icro,iologia. Facultat de FarmCcia. Universitat
de 3arcelona. E-404 3arcelona. 0*epartamento de
3ioDu-mica / 3iolog-a +olecular-A. Facultad de Veterinaria.
lndice de autores
YYV
111
Universidad de +urcia. E-31 Espinardo. +urcia.
ammarDues&u,.edu
E - 40
Transporte y supervivencia de contaminantes microbianos en el suelo
Vigus N*, Rodrguez R**, Candela L**, Mas J*.
I*epartament de 1enFtica i +icro,iologia, Facultat de
"iFncies, Universitat AutOnoma de 3arcelona, 4163 3ellaterra.
3arcelona. Email' nuria.vigues&ua,.esII *epartament
dNEngin/eria del 5erren/, U@" "ampus 7ord, 3arcelona.
E - 406
Variacin estacional de la poblacin microbiana en cristalizadores de salinas de estanque mltiple.
Meseguer Sarabia M.L. ; Gomariz Clemente M.; Gmez Hernndez M.J.; Meseguer Soria .
*epartamento de +icro,iolog-a, Universidad +iguel
Hern#nde% de Elc)e. Avenida de la Universidad s.n.H Edi$i$cio
5orregaitan @l.,a:a. 300-Elc)e >Alicante?
E - 441
Estudio del efecto txico del Cu, Zn y Cd sobre la diatomea marina Phaeodactylum tricornutum
mediante la tcnica de citometra de flujo
Folgar, S.; Cid, A.; Torres, E. y Abalde, J.
<a,oratorio de +icro,iolog-a. Facultad de "iencias.
Universidad de A "oruGa, Ale:andro de la ;ota, nV 1, A "oruGa,
;pain. e-mail' s$olgar&udc.es
E - 44(
Metales Pesados considerados como Contaminantes de Agua y de Suelo afectan la expresin
flagelar de Escherichia coli enteropatgena.
Avelino F.F.1,2,, Labra L.P.3, Muoz G.A.2, Castaeda R.E..2, Chvez B.E.2, Cedillo R.M.L.2,
Girn J.A.4
@osgrado en "iencias Am,ientales1, "."+0, Facultad de
"iencias Bu-micas3 de la 3enem2rita Universidad Aut8noma
de @ue,la, +2xico. *epto de +icro,iolog-a e .nmunolog-a de la
Universidad de Ari%ona en 5ucson, U;A4. "iudad Universitaria
edi$. !6 comple:o de "iencias, tercer piso "iudad Universitaria,
"."+-."3UA@, tel >000? 033 0 1 ext.00 8 10, $ax >000? 006
(6 (, correo electr8nico $avelino$lores&/a)oo.com
E - 446
Diversidad bacteriana de suelos de la antrtida y capacidad de las bacterias para degradar
hidrocarburos.
Surez Surez A. B., Pelez Andrs A. . y Snchez Martn J.
Jrea +icro,iolog-a, *epartamento de 3iolog-a Funcional.
Facultad de +edicina. Universidad de Rviedo. "9 Kulian
"laver-a ;97, 336, Rviedo. anina6!6&/a)oo.es
E - 4(
Puesta a punto y estudio de efectos mutagnicos de los aerosoles producidos por la degradacin
de los compuestos orgnicos en la atmsfera.
1de Benito Armas,A., 2Martn Reviejo, M., 1Toms Forns, D., 1Monz-Sanchez JL y 2Wirtz,
K.
1ainia, @arDue 5ecnol8gico de Valencia, @aterna >Valencia? /
0"EA+ "entro de Estudios Am,ientales del +editerraneo,
@arDue 5ecnol8gico de Valencia, @aterna >Valencia?.
Ia,enito&ainia.es
lndice de autores
YY1
Y
Micolo,a
F - 1
Caractersticas de las cepas fngicas del gnero Trichoderma, aisladas en la regin del Volga de la
Federacin Rusa.
Cabrera, F. H. A., Tuxbatova, R. ., Karimova, L., Rafailova, E., Shishkin, A., Alimova, F. K.
\a%an ;tate Universit/, Facult/ o$ 3iolog/ and ;oil,
*epartment o$ +icro,iolog/. 14 \reml/ovsSa/a str., \a%an,
=epu,lic o$ 5atarstan, =ussian Federation. 404. E-mail'
alexca$u31&/a)oo.com.mx
F - (6
Toll-Like Receptor 4-defective mice carrying point or null mutations do not show increased
susceptibility to Candida albicans infections
Murciano C.*, Villamn E.*, Gozalbo D.*, Roig P.*, OConnor J.E.**, and Gil M.L.*
>I? *epartamento de +icro,iolog-a / Ecolog-a, Universitat de
ValFncia, "9 *r. +oliner (, 461 3ur:assot, ;painH e-
mail'celia.murciano&uv.es. >II? <a,oratorio de "it8mica,
"entro de .nvestigaci8n ]@rincipe Felipe]-Universitat de
ValFncia, Valencia, ;pain.
F - 11!
Anlisis molecular de la estructura de septinas en Candida albicans.
Gonzlez-Novo, A; Jimnez, A1; Snchez, M y Jimnez, J.
*epartamento de +icro,iolog-a / 1en2tica. .nstituto de
+icro,iolog-a 3ioDu-mica. Universidad de ;alamanca9";.".
Avda *octores de la =eina ;97. 3!! ;alamanca.
1*epartamento de +edicina. Facultad de +edicina.
Universidad de ;alamanca. "orreo electr8nico' anovo&usal.es
F - 146
Genes white-collar de Mucor circinelloides y regulacin de la expresin gnica por la luz.
Silva, F., Torres-Martnez, S. y Garre, V.
*epartamento de 1en2tica / +icro,iolog-a. Facultad de
3iolog-a. Universidad de +urcia. 3!1 +urcia. ;pain.
vgarre&um.es
F - 164
Validacin mediante estudios de infectividad del sistema de transformacin pyrG/pyr-4 como
herramienta para la identificacin de factores de virulencia de Aspergillus fumigatus
Olivas 1, Royuela M2, Laborda F1, De Lucas JR1
>1? *epartamento de +icro,iolog-a / @arasitolog-a >0?
*epartamento de 3iolog-a "elular / 1en2tica. "ampus
Universitario. Universidad de Alcal#. 044!1 Alcal# de Henares.
+A*=.*. e-mail' :oser.lucas&ua).es
F - 010
Capacidad de la degradacin de ochratoxina A por accin de aceites esenciales
Shiva, C., Adelantado, C., Arosemena, L. y Calvo, MA.
3ellaterra >3arcelona?. "arlos+artin.;)iva&ua,.es
F - 064
Nutritional value of protein from vegetative mycelia of edible mushroom Pleurotus ostreatus
Parada Albarracin, J.A.1, Urdaneta, E.2, Marzo, F.2, Ramrez, L.2 y Pisabarro de Lucas, A.G.2
lndice de autores
YYY
1Agrarian @roduction *epartment and Environmental ;cience
*epartment. @u,lic Universit/ o$ 7avarra E- 316 @amplona A
;pain and Universit/ o$ @amplona A "olom,ia, e-mail'
:ulianparada&/a)oo.com
F - 0!
Enzimas ligninolticas producidas por nuevos basidiomicetos aislados en la Sierra de Aylln
capaces de degradar colorantes industriales
Barrasa, J.M.1, Martnez, A.T.2 y Martnez, M.J.2
1*epartamento de 3iolog-a Vegetal, Universidad de Alcal#,
Alcal# de Henares, E-044!1, +adrid. 0"entro de
.nvestigaciones 3iol8gicas, ";.", =amiro de +ae%tu 6, 044
+adrid, >e-mail' m:martine%&ci,.csic.es?
F - 0!4
Aislamiento e identificacin de Sporothrix schenckii a partir de suelo y plantas de seis municipios
del estado de Puebla Mxico.
Espinosa Texis AP, Ramrez Gaona AY, Hernndez Hernndez F.
"entro de .nvestigaciones en "iencias +icro,iol8gicas,
posgrado en +icro,iolog-a, .nstituto de "iencias, 3enem2rita
Universidad Aut8noma de @ue,la. Facultad de +edicina
U7A+. Apartado @ostal b 1600, @ue,la, +2xico.
espinosatex&/a)oo.com
F - 3(
nfluencia del periodo de postcosecha en la acumulacin de patulina en manzana Golden
Morales, H., Marn S., Ramos A.J., Sanchis V.
*epartamento de 5ecnolog-a de Alimentos, "e=5A,
Universidad de <leida, =ovira =oure, 161, 0(164 <leida
F - 360
Caracterizacin del gen de la lacasa de Phanerochaete flavido-alba
Rodrguez Rincn, F.1, Suarez, A.2, Lucas, M., de la Rubia T., Martinez J.
1Universidad de @amplona >"olom,ia?H *epartamento de
+icro,iolog-a, 0*epartamento de 3ioDu-mica / 3iolog-a
+olecular. Facultad de Farmacia, "ampus de "artu:a,
Universidad de 1ranada, 14!1 1ranada, ;pain
F - 34(
Estudio de la funcin del extremo C-terminal no cataltico de la MAPK Slt2 de Saccharomyces
cerevisiae
Cosano C, Palacios L, Molina M, Martn H.
Universidad "omplutense. 044-+adrid. E-mail'
icosano&$arm.ucm.es
F - 34!
Regulacin de la sealizacin va MAPKs en Saccharomyces cerevisiae por la fosfatasa de
especificad dual Msg5
Flndez M, Marn MJ, Bermejo C, Nombela C, Martn H, Molina M.
Universidad "omplutense. 044-+adrid. ;pain. E-mail'
m:marinc&$arm.ucm.es
F - 4
Estudio del factor de virulencia de E. coli enteropatgena Map mediante expresin heterloga en
Saccharomyces cerevisiae
lndice de autores
YYY
1
Rodrguez-Escudero , Hardwidge PR, Brett Finlay B, Cid VJ y Molina M.
*epartamento de +icro,iolog-a .., Facultad de Farmacia,
Universidad "omplutense de +adrid
F - 401
Respuesta a arsnico: mecanismos de transduccin de seales en levadura.
Rodrguez Gabriel, M. A., Martn, H. y Molina, M.
Universidad "omplutense de +adrid. @la%a =am8n / "a:al s9n.
+adrid 044. miguelr&$arm.ucm.es
F - 43
Aislamiento e identificacin molecular de cepas de Colletotrichum causantes de antracnosis de
fresa en Andaluca Occidental
Garrido, C.; Carb, M.; Fernndez-Acero, F.J.; Quero, P.; Vallejo, .; Cantoral, J.M.
Facultad de "". del +ar / Am,ientales. <a,. +icro,iolog-a.
Universidad de "#di%. "ampus @uerto =eal 11(1 "#di%
>EspaGa?. :esusmanuel.cantoral&uca.es
F - 4(1
nteraccion entre el micopatogeno Verticillium fungicola y sus hospedadores Agaricus bisporus Y
Pleurotus ostreatus en la verticiliosis de los cultivos comerciales de championes y setas de ostra
Prez Cabo A., Bernardo D. y Garca Mendoza C.
"entro de .nvestigaciones 3iol8gicas, ";.", =amiro de +ae%tu
6, 044 +adrid
F - 4((
Un nuevo polisacrido de la pared celular de ciertos Loculoascomycetes.
Prieto A1, Bernab M.2, Gimnez-Abin M..1 y Leal J.A.2
1"entro de .nvestigaciones 3iol8gicas, ";.". c9 =amiro de
+ae%tu, 6. 044-+adrid. 0.nstituto de Bu-mica Rrg#nica,
";.". c9 Kuan de la "ierva, 3. 046-+adrid.
Mic!obiolo,a del Medio Acu#tico
H - 0(
Deteccin de anguilas portadoras del patgeno humano y de peces Vibrio vulnificus serovar E
mediante su aislamiento e identificacin por PCR
Valiente, E1 and Amaro, C1
1Universidad de Valencia, Edi$icio de investigaci8n,
*epartamento de +icro,iologia / Ecologia, 3ur:asot, Valencia,
EspaGa. carmen.amaro&uv.es
H - 34
Presencia de Campylobacter termotolerantes en aguas superficiales
Rodrguez, S.; Araujo, R.
*epartamento de +icro,iolog-a. Facultad de 3iolog-a.
Universitat de 3arcelona. Av. *iagonal 64(. 404 3arcelona.
sara)rodrigue%&u,.edu
H - ((
Vibrio vulnificus en anguilas silvestres del lago de LAlbufera (Valencia): primera referencia de la
existencia de cepas inmviles y virulentas para Anguilla anguilla
Esteve, C.1, Alcaide, E.1, Canals, R.2, Toms, J.M.2 y Merino, S.2
*pto. +icro,iolog-a / Ecolog-a >Univ. Valencia? 461
3ur:assot1H *pto. +icro,iolog-a >Univ. 3arcelona? 404
3arcelona0. estevem&uv.es
H - (!
lndice de autores
YYY
11
Predominio de Edwardsiella tarda en poblaciones silvestresde anguila Europea (Anguilla anguilla)
capturadas en el lago de l'Albufera de Valencia
Alcaide, E., Herraiz, S., Esteve, C.
*epartamento de +icro,iolog-a / Ecolog-a. Universidad de
Valencia. 461, 3ur:assot. Valencia. elena.alcaide&uv.es
H - 63
dentificacin y clonacin del gen que codifica la marinocina, una protena antimicrobiana
sintetizada por la bacteria marina Marinomonas mediterranea.
1Lucas-Elio, P., 1Gomez, D., 2Solano, F. y 1Sanchez-Amat, A.
*epartamento de 1en2tica / +icro,iolog-a1 / *epartamento de
3ioDu-mica / 3iolog-a +olecular 30, Universidad de +urcia,
31 +urcia, EspaGa. >patlucel&um.es?.
H - 6!
Cuantificacin e identificacin de enterovirus en efluentes terciarios de depuradoras. Estimaciones
de riesgo asociado al uso de estos efluentes.
Costn Longares, A, Jofre Torroella, J, Lucena Gutirrez, F.
Avda *iagonal 64(, Facultad de 3iolog-a de la Universidad de
3arcelona. Edi$. @rincipal, planta . 3arcelona404e-mail'
acostanlo&u,.edu
H - !6
Tipificacin molecular mediante RAPD-PCR de V. harveyi aislado de peces cultivados
Pascual, J.1,2, Macin, M.C.1,2, Garay, E.1,2,3, Pujalte, M.J.1,2
1.nstituto "avanilles de 3iodiversidad / 3iolog-a Evolutiva,
0*epartamento de +icro,iolog-a / Ecolog-a, / 3"olecci8n
EspaGola de "ultivos 5ipo >"E"5?. Universitat de ValFncia.
"ampus de 3ur:assot. 461 ValFncia, EspaGa.
macianro&uv.es
H - 16
Dinmica de acumulacin de poli-b-hidroxialcanoatos en los tapetes microbianos del delta del Ebro
y de la Camarga
Urmeneta, J., del Campo, J., Villanueva, L., Guerrero, R. y Navarrete, A.
*pto.de +icro,iolog-a, Facultad de 3iolog-a, Universidad de
3arcelona, Av. *iagonal 64(. 404 3arcelona. E-mail'
:urmeneta&u,.edu
H - 16
Anlisis de biomarcadores lipdicos de los tapetes microbianos del delta del Ebro a lo largo de un
ciclo circadiano: un estudio de biomasa, composicin poblacional, estado fisiolgico y estado redox
Navarrete, A., Villanueva, L., Urmeneta, J. y Guerrero, R.
*pto. de +icro,iolog-a, Facultad de 3iolog-a, Universidad de
3arcelona. Av. *iagonal, 64(. 404 3arcelona. E-mail'
anavarrete&u,.edu
H - 101
Comparacin de tcnicas citomtricas para la deteccin de Cryptosporidium spp. en muestras
ambientales.
Montemayor, M.1, Galofr, B. 2, Ribas, F. 2 y Lucena, F. 1.
1Avda. *iagonal 64(. *epartamento de +icro,iolog-a.
Facultad de 3iolog-a. Universidad de 3arcelona, 404,
3arcelona. mmontema/or&u,.edu.0@asseig ;ant Koan 36-43.
*ivisi8n <a,oratorios, ;ociedad 1eneral de Aguas de
3arcelona, 46 3arcelona
lndice de autores
YYY
111
H - 100
Methylobacterium isbiliense sp. nov., aislada de agua potable de Sevilla
Gallego V., Garca M.T. y Ventosa A.
Farmacia, Universidad de ;evilla, 4110 ;evilla.
vgallego&us.es
H - 104
Comportamiento de microorganismos patgenos e indicadores en dos procesos de higienizacin
de lodos.
Guzmn, C., Jofre, J., Lucena F.
Universidad de 3arcelona. Facultad de 3iolog-a. *epartamento
de +icro,iolog-a. Avenida. *iagonal, 64(. cp' 404.
cgu%malu!&docd3.u,.edu
H-133
Propuesta de un esquema bioqumico para la identificacin de Aeromonas hydrophila y A. caviae:
ensayo con cepas clnicas y ambientales
Kuepfer, M.1,3, Figueras, M.J.2, Demarta, A.3 y Esteve, C.1
*pto. +icro,iolog-a / Ecolog-a >Univ. Valencia? 461
3ur:assot1H *pto. +icro,iolog-a >Univ. =ovira i Virgili? 4301
=eus0, .stituto "antonale di +icro,iologia >Univ. 1inevra?
6( 3ellin%ona, ;ui%a3. lord/6&,lueXin.c)
H - 166
Caracterizacin de aislados de profundidad y superficie del microorganismo Alteromonas macleodii
vars-Martnez, E.1, DAuria, G.1; Tamburini, C.2; Lopez-Lopez, A.1; y Rodrguez-Valera,F.1
1 *ivisi8n de +icro,iolog-a, "ampus de ;an Kuan, Universidad
+iguel Hern#nde%, Apdo. 14, 3((. ;an Kuan, Alicante. 0.
"entro Rceanogra$ico de +arsella, U+= 611! - "7=; 9
Universit2 de la +2diterran2e, France
H - 166
Utilidad de la determinacin de bacterifagos para la evaluacin de los procesos empleados en la
reutilizacin de aguas
Payn Gonzlez A., Jofre Torroella J., Lucena Gutirrez F.
Avenida *iagonal 64(. Facultad de 3iolog-a. *epartamento de
+icro,iolog-a. Universidad de 3arcelona. Edi$icio anexo planta
. 3arcelona' 404. anpa/an&)otmail.com
H - 1!4
Separacin de clulas cultivables y no cultivables mediante gradiente de densidad
Orruo, M., Seco, C., Calera, A., Arana, ., Muela, A., Barcina, .
*pto. .nmunolog-a, +icro,iolog-a e .nmunolog-a. Fac. "iencia
/ 5ecnolog-a. Universidad del @a-s Vasco. Apdo. 644. 444
3il,ao. >isa,el.,arcina&e)u.es?
H - 1!(
Anlisis del cluster yhlBA implicado en la sntesis y secrecin de una hemolisina del patgeno de
peces Yersinia ruckeri
Fernndez, L.; Guijarro, J.A.
Jrea de +icro,iolog-a, *epartamento de 3iolog-a Funcional,
Facultad de +edicina, Universidad de Rviedo, "9 Kuli#n
"laver-a s9n, 336 Rviedo. >luci$erllamas&/a)oo.es?
H - 1!6
lndice de autores
YYY
1V
Electrotransfomarcin y construccin de genotecas de insercin por transposicin en el patgeno
de peces Lactococcus garvieae
Menndez, A.; Guijarro, J. A.
Jrea de +icro,iolog-a, *epartamento de 3iolog-a Funcional,
Universidad de Rviedo, Facultad de +edicina, Kuli#n "laver-a
s9n, 336 Rviedo >Asturias?.
>auroraesminom,re&)otmail.com?
H - 163
Quistes de Giardia en aguas residuales depuradas de Tenerife. Presencia de genotipos y
haplotipos de G. duodenalis.
Abreu Acosta, N1; Ballart Sistach, D1; Leal Guio, Y1; Figueruelo Ojeda, E1; Foronda
Rodrguez, P1; Lorenzo Morales, J1; Martnez Carretero, E; Aguiar Gonzlez, E2; Valladares
Hernndez, B1.
1.nstituto Universitario de En$ermedades 5ropicales / ;alud
@M,lica de "anarias. Universidad de <a <aguna. Avda.
Astro$-sico Francisco ;#nc)e%, s9n. <a <aguna. 5eneri$e. .slas
"anarias. Rrganismo Aut8nomo de 3alsas de 5eneri$e
>3A<5E7?. "a,ildo .nsular de 5eneri$e. e-mail' na,reu&ull.es
H - 166
Estudio de la presencia de Salmonella spp en Aguas de Zonas de Bao Naturales de la provincia
de Cceres.
Larena MG, Vivas YG, Muoz L, Acero V.
Unidad de +icro,iolog-a de Aguas. <a,oratorio de ;alud
@M,lica de "#ceres. 1erencia de ;alud del Jrea de "#ceres.
;ervicio ExtremeGo de ;alud. Kunta de Extremadura.
monica.gutierre%&sc.:untaex.es
H - 04
Respuesta quimiosensorial de protozoos bactervoros frente a compuestos producidos en la
interaccin protista-bacteria
Txakartegi, A., Ayo, B., Anderson, R., Artolozaga, ., riberri, J.
"iencia / 5ecnolog-a. Universidad del @a-s Vasco. Apdo.
644.444 3il,ao. $,c))ea&lg.e)u.es
H - 06(
Evaluacin de medios de cultivo para la deteccin de Vibrio tapetis, el agente causal de la
enfermedad del anillo marrn en almejas.
Balboa, S., Beaz R., Prado, S., Vilario M.L., Barja J.L., Romalde J.L.
*epartamento de +icro,iolog-a / @arasitolog-a. Facultad de
3iolog-a e .nstituto de Acuicultura. Universidad de ;antiago de
"ompostela. 1(!40. ;antiago de "ompostela. E-mail'
mpromal&usc.es
H - 34
Caracterizacin de un nuevo bacterifago portador del gen stx2g
Garca-Aljaro, C., Muniesa, M., Jofre, J., Blanch, A.R.
*epartament de +icro,iologia, Facultat de 3iolog-a,
Universitat de 3arcelona, Av. *iagonal, 64( 404 3arcelona.
E-mail' crgarcia&u,.edu
H - 3(
Evaluacin de la persistencia de las poblaciones de Bifidobacterium "in situ en agua de ro
mediante tcnicas moleculares y de cultivo.
Bonjoch X, Lucena F y Blanch AR.
lndice de autores
YYY
V
*epartament de +icro,iologia, Facultat de 3iologia. Av.9
*iagonal 64( 404.3arcelona. E-mail' x,on:oc)&u,.edu
H - 314
Evaluacin de mtodos moleculares para la determinacin del origen de la contaminacin fecal en
aguas basados en la deteccin de diferentes grupos bacterianos.
Ballest, E., Bonjoch, X. y Blanch, A.R.
*epartament de +icro,iologia, Facultat de 3iolog-a. Av.
*iagonal 64( 404, 3arcelona. E-mail' e,alleste&u,.edu
H - 31(
Estructura y dinmica del fitoplancton en la laguna de Sta. Olalla (Parque Nacional de Doana)
Lpez-Archilla, A.. y Guerrero, M C.
*pto. Ecolog-a. Facultad de "iencias. Universidad Aut8noma
de +adrid. "anto,lanco 0446. e-mail' ana,el.lope%&uam.es
H - 31!
Evaluacin in vitro de la susceptibilidad de bacterias potencialmente probiticas frente a diferentes
agentes antimicrobianos
Daz-Rosales, P., Chabrilln, M., Tapia-Paniagua, S.T., Len-Rubio, J.M., Martnez-
Manzanares, E.
*epartamento de +icro,iolog-a. Facultad de "iencias.
Universidad de +#laga. "ampus de 5eatinos. 06!1 +#laga. e-
mail' pdrosales&uma.es
H - 34
Medio de cultivo apropiado para ensayos "in vitro de susceptibilidad del patgeno de peces
Tenacibaculum maritimum
Avendao-Herrera R, rgang R, Romalde JL, Magarios B y Toranzo AE
3iolog-a e .nstituto de Acuicultura. Universidad de ;antiago.
1(!40 ;antiago de "ompostela, EspaGa. E-
mail'mpaet:l,&usc.es
H - 341
Presencia de mecanismos de captacin de hierro en Pseudomonas anguilliseptica
Castro N, Magarios B, Avendao-Herrera R, Osorio C y Toranzo AE
3iolog-a e .nstituto de Acuicultura. Universidad de ;antiago.
1(!40 ;antiago de "ompostela EspaGa. E-mail'
nurili&)otmail.com
H - 34(
Evaluacin del CAMP test reverso para la confirmacin de Clostridium perfringens en aguas.
Lobato Alvarez M J, Bances Gonzlez M, Gutirrez Gonzlez M J, Gonzlez Hevia M A
<a,oratorio de ;alud @M,lica del @rincipado de Asturias.
"amino de =u,-n s9n. 3311 Rviedo. Asturias.
m:osela&princast.es.
H - 34!
Diversidad microbiana de manantiales mineromedicinales bicarbonatados clcicos y sdicos.
Mosso, M. A., de la Rosa, M. C., Snchez, M. C. y Rodrguez, C.
U"+. +adrid >044?.
e-mail' a.mossoromeo&$arm.ucm.es
H - 346
Tapetes microbianos de manantiales bicarbonatados clcicos y sdicos
lndice de autores
YYY
V1
Snchez, M.C., Rodrguez, C., Mosso, M.A. y de la Rosa, M.C.
*epartamento +icro,iolog-a ... Facultad Farmacia. U"+.
+adrid >044?. mariaWs,&ole.com
H - 3(6
nactivacin de indicadores bacterianos y vricos de contaminacin en una planta piloto de
depuracin de aguas por el mtodo "Depuracin Simbitica
Sola Castejn, F. y Torrella Mateu F.
*epto. 1en. / +icro,iolog-a, Fac. 3iolog-a, Universidad de
+urcia, 31 +urcia. torrella&um.es
H - 3(6
Evaluacin in vitro de la susceptibilidad de Photobacterium damselae subsp. piscicida frente a
diferentes agentes antimicrobianos
Daz-Rosales, P., Tapia-Paniagua, S.T., Rico, R.M., Arijo, S., Martnez-Manzanares, E.
Universidad de +#laga. "ampus de 5eatinos. 06!1 +#laga. e-
mail' silvanateresa0&)otmail.com
H - 363
Biodiversidad de enterobactericeas en efluentes secundarios de EDAR sometidos a estrs por
cloracin
Terradillos, A., Galofr, B., Saucedo, G., sern, A.M.*, Ferrer, D.* y Ribas, F.
Aig_es de 3arcelona, A13A=. @aseo ;ant Koan 36-43 46
3arcelona. I AgFncia de ;alut @M,lica de 3arcelona.
Av.*rassanes 13-1( 41 3arcelona. gsaucedo&ag,ar.es
H - 364
Colonizacin de un reactor de biofilm por agua de distribucin
Aira, A.M., Saucedo, G., Galofr, B. y Ribas, F.
3arcelona. aaira&ag,ar.es
H - 36(
Ecologa de Legionella en un abastecimiento de agua
Ruiz, J., Terradillos, A., srael, S., Huguet, J.M. y Ribas, F.
3arcelona m/rdinrui%&)otmail.com
Mic!obiolo,a Indu$t!ial
. - 44
Aislamiento y clonacin del gen de la quimosina de Bubalis arnee bubalis en E. coli.
Vallejo, J.A.; Ageitos, J.M.; Veiga-Crespo; Poza, M. y Villa, T.G.
*epartamento de +icro,iolog-a, Universidad de ;antiago de
"ompostela ".@. 1(!6 ;antiago de "ompostela
:valle:o&usc.es.
. - 46
Purificacin y caracterizacin de una Sern proteasa de Bacillus licheniformis para la elaboracin de
masas queseras.
Ageitos, J. M.; Vallejo, J. A.; Poza, M.; Villa, T.G.
*epartamento de +icro,iolog-a, Universidad de ;antiago de
"ompostela. ".@. 1(!6, ;antiago de "ompostela.
mp:mam&usc.es
. - 1(4
Caracterizacin de la cepa P. chrysogenum L2, obtenida de la interrupcin del gen lys3 que
participa en la ruta biosinttica de lisina.
Velasco T., Naranjo L., Casqueiro J., Ulln R.V., Lamas M., Teves F. y Martin J.F.
lndice de autores
YYY
V11
.n,iotec. Av. =eal 1. 046, <e8n, EspaGa. Email'
tanveco&/a)oo.es
. - 164
Aplicacin de 1-3 glucanasas de Trichoderma harzianum MRT17 y Bacillus circulans WL-13 en el
tratamiento de candidiasis vaginal.
Poza M1, Daz-Sarabia A M1, Veiga-Crespo P1, Vallejo J A1, Ageitos J A1, Villa T G1 y Torres-
Labandeira J L2.
1 *epartamento de +icro,iolog-a / 0 *epartamento de
Farmacia 1al2nica, Facultad de Farmacia, Universidad de
;antiago de "ompostela, "ampus ;ur 1(!40, ;antiago de
"ompostela, A "oruGa. mpmpo%a&usc.es
. - 0!1
Control Biolgico del "pitch de eucalipto: Optimizacin/Alternativas para la produccin de la
esterasa de Ophiostoma piceae
Barba, V., Calero-Rueda, O., Rodrguez, E., Martnez, A.T. y Martnez, M.J.
"entro de .nvestigaciones 3iol8gicas, ";.", =amiro de +ae%tu
6, 044 +adrid
>e-mail' v,ar,a&ci,.csic.es?
. - 314
La colesterol oxidasa es un enzima esencial para la biosntesis del antifngico pimaricina.
Mendes, M.V. (1), Antn, N. (1), Recio, E. (1), Guerra, S.M. (1), Martn, J.F. (1,2) y Aparicio,
J.F. (1,2).
>1?.nstituto de 3iotecnolog-a, .73.R5E", <e8n. >0?Area de
+icro,iolog-a, Facultad de 3iolog-a, Universidad de <e8n,
<e8n. E-mailc deg:$a&unileon.es
. - 30!
dentificacin de pimM como regulador positivo de la biosntesis de pimaricina en Streptomyces
natalensis
Antn, N. (1), Mendes, M.V. (1), Guerra, S.M.(1), Martn, J.F. (1,2) y Aparicio, J.F. (1,2).
>1?.nstituto de 3iotecnolog-a, .73.R5E", <e8n. >0?Area de
+icro,iolog-a, Facultad de 3iolog-a, Universidad de <e8n,
<e8n. E-mail' degna$&unileon.es
. - 366
Estudio de encapsulacin y estabilidad de los arqueosomas obtenidos a partir de Halobacterium
salinarum.
Cuerda Correa, MT1; Gonzlez Paredes, A1; Medina Prez, MM2; Ramos Cormenzana, A1;
Monteoliva Snchez, M1.
1 *pto de +icro,iolog-aH 0 *pto de 5ecnolog-a Farmac2utica,
Facultad de Farmacia, Universidad de 1ranada, "ampus
Universitario de "artu:a s9n, 14!1, 1ranada.
anagonpar!6&)otmail.com
. - 341
Expresin y sobreproduccin de las lipasas LipA y LipC de Pseudomonas aeruginosa 42A2 en
distintos huspedes heterlogos.
Bofill, C., Prim, N., Pastor, F..J., Diaz, P.
*epartamento de +icro,iolog-a, Facultad de 3iolog-a,
Universidad de 3arcelona. Av. *iagonal, 64(. 3arcelona 404.
e-mail' pdia%&u,.edu
. - 36
lndice de autores
YYY
V111
Clonacin del dominio cataltico de la celulasa Cel9B de Paenibacillus barcinonensis. Efecto en el
refinado de la pasta de papel.
Chiriac, A.., Pastor, F..J.
Universidad de 3arcelona. Av. *iagonal 64(, 3arcelona 404.
e-mail' irris,cn&/a)oo.com
. - 36!
Diferenciacin morfolgica, muerte celular y produccin de antibitico en cultivos sumergidos de
Streptomyces.
Salazar N; Manteca A; Fernndez M; Snchez J.
Jrea de +icro,iolog-a. *epartamento de 3iolog-a Funcional.
Universidad de Rviedo. "9 Kuli#n "laver-a s9n. 336 Rviedo.
E-mail' >nusaga&)otmail.com?.
. - 436
Caracterizacin de una nueva lacasa producida por Streptomyces ipomoea CECT 3341. Aplicacin
en el blanqueo de pastas de papel.
Molina, J.M., Guilln, F., Moya, R., Rodrguez, Y., Troyano, N. y Arias, M.E.
Farmacia, Universidad de Alcal#. 044!1, Alcal# de Henares,
+adrid. E-mail' enriDueta.arias&ua).es
. - 4(3
Aprovechamiento del permeato de lactosuero para la obtencin de cido L-lctico en un reactor de
clulas inmovilizadas.
Bolumar T., Monedero V. y Prez Martnez G.
..A.5.A.- ".;...". 3ur:assot-Valencia
Mic!obiolo,a Molecula!
+ - 01
La GTPasa Rho5 de Schizosaccharomyces pombe, muy similar a Rho1p, se induce por la falta de
nutrientes
Rincn S.*, Santos B. y Prez P.
.nstituto +icro,iolog-a-3ioDu-mica. *epartamento de
+icro,iolog-a-1en2tica. "onse:o ;uperior de .nvestigaciones
"ient-$icas9Universidad de ;alamanca. 3!! ;alamanca.
EspaGa. I sarpadilla&usal.es
+ - 03
Contribucin de las bombas de eflujo a la resistencia intrnseca a antibiticos en Mycobacterium
tuberculosis
Ramn-Garca S.1, Mick V.1, Martn C.1, De Rossi E.2 y Ansa J.A.1.
1' 1rupo de gen2tica de +ico,acterias. *pto. +icro,iolog-a.
Facultad de +edicina. Universidad de Tarago%a. EspaGa. 0'
*ipartimento di 1enetica e +icro,iologia, UniversitC degli
;tudi di @avia, .talia. santirg&uni%ar.es
+ - 06
Caracterizacin de la respuesta al estrs por pH del opern F0F1-ATP sintasa en Corynebacterium
glutamicum ATCC 13032.
Barriuso-glesias M., Barreiro C. y Martn J.F.
.nstituto de 3iotecnolog-a de <e8n >.73.R5E"?. @arDue
cient-$ico de <e8n, Avda. del =eal, nV 1, 046. E-mail'
degm,i&unileon.es
+ - 04
lndice de autores
YYY
1Y
Anlisis genmico de factores sigma con funcin extracitoplsmica (ECF) en Pseudomonas
syringae
Oguiza, J.A.1, Kiil, K.2 y Ussery, D.W.2
1*epartamento de @roducci8n Agraria, Universidad @M,lica de
7avarra, 316 @amplona, 7avarra. 0"enter $or 3iological
;eDuence Anal/sis, *epartment o$ 3iotec)nolog/, 5)e
5ec)nical Universit/ o$ *enmarS, *\-04 </ng,/, *enmarS.
E-mail' :ose.ogui%a&unavarra.es
+ - 30
Acumulacin de la protena de unin a fosfato PstS a altas concentraciones de fructosa en
Streptomyces lividans. Efecto de la ausencia de PstS en la diferenciacin.
Daz M., Esteban A., Yepes A. y Santamara R.
*pto +icro,iolog-a / 1en2tica9.nstituto de +icro,iolog-a
3ioDu-mica. Universidad de ;alamanca9"onse:o ;uperior
.nvestigaciones "ient-$icas >";."?. Edi$icio *epartamental.
"ampus +iguel de Unamuno. @la%a de los *octores de la =eina
sn. 3!! ;alamanca. mardi&usal.es
+ - 36
Staphylococcus aureus produce biofilm independientemente de ica en ausencia del sistema de dos
componentes arlRS
Toledo-Arana, A.1; Merino, N.1; Vergara-rigaray, M.1; Dbarbouill, M.2; Penads, J.3 y Lasa,
.1
1<a,oratorio de 3io$ilms +icro,ianos. .nstituto de
Agro,iotecnolog-a / =ecursos 7aturales / *pto. de @roducci8n
Agraria, Universidad @M,lica de 7avarra-";.". @amplona-
316, EspaGa. 03iologie des 3act2ries pat)ogFnes C 1ram
positi$, *2partement de +icro,iologie Fondamentale et
+ed-cale >"7=;, U=A 01!0?. .nstitut @asteur. @aris !(!04.
Francia. 3Universidad "ardenal Herrera-"EU e .nstituto
Valenciano de .nvestigaciones Agrarias >.V.A?, 46113
+oncada, Valencia, EspaGa.
E-mail' ale:andro.arana&unavarra.es
+ - 3!
dentificacin de regiones de la protena de virulencia SigD de Salmonella con actividad sobre la
organizacin de actina, mediante el uso de Saccharomyces cerevisiae como modelo.
Alemn, A.*, Rodrguez-Escudero, .*, Mallo, G.V.**, Cid, V.J.*, Molina, M.* y Rotger, R.*
I*pto. +icro,iolog-a, Fac. Farmacia, Universidad
"omplutense, 044 +adrid. II*ivision o$ "ell 3iolog/,
Hospital $or ;icS ")ildren, 5oronto +(1 1U4 >"anad#?.
+ - 36
Estudio del control por fosfato de los genes phoA, phoB y phoC, codificando fosfatasas alcalinas en
Streptomyces coelicolor.
Apel AK, Sola-Landa A, Rodriguez A y Martn JF
.nstituto de 3iotecnolog-a de <e8n >.n,iotec?, @arDue "ient-$ico
de <e8n, Avda. =eal, nV1, 046 <e8n. E-mail'
degSap&unileon.es
+ - 4
Diferentes protenas se unen a la secuencia ARE para receptores de butirolactonas en
Streptomyces clavuligerus
lndice de autores
Y>
Santamarta .1,2, Prez-Redondo R.2, Lorenzana L.M.1, Lpez-Garca M.T.1, Baos S.1,
Martn J.F.1,2, Liras P.1,2
>1? .nstituto de 3iotecnolog-a .73.R5E". Avda. =eal 1, 041
<e8n, EspaGa. >0? Jrea de +icro,iolog-a, Facultad de "".
3iol8gicas / Am,ientales, Universidad de <e8n. "ampus de
Vega%ana s9n, 04!1 <e8n, EspaGa. direcci8n electr8nica'
degis)&unileon.es
+ - 41
Ensayos de expresin heterloga del gen as-48A cclicamente permutado que contiene la
secuencia lineal del pptido AS-48
Montalbn, M., Martnez-Bueno, M., Valdivia, E. y Maqueda, M.
Universidad de 1ranada. "ampus Fuentenueva s9n 14!1
1ranada. manuelml&ugr.es
+ - 40
Anlisis del sistema de flagelacin polar y lateral de Aeromonas hydrophila
Merino ,S.; Canals R.; Jimnez, N. y Toms, J..
Universidad de 3arcelona. Avda. *iagonal 64(, 404
3arcelona. e-mail' smerino&u,.edu
+ - 43
Una porina de 40kDa de Aeromonas salmonicida capaz de unir C1q: clonaje, secuenciacin,
susceptibilidad al suero e inmunoproteccin en peces.
Ramrez, S.; Vilches, S.; Canals, R.; Toms J. y Merino S.
3arcelona. e-mail' sramire%Wpeinado&)otmail.com
+ - 44
Caracterizacin gentica y estructural del ncleo del lipopolisacrido de Aeromonas hydrophilaAH-
3 (serotipo O:34)
Jimnez, N., Fresno, S., Canals, R., Toms, J. M., Merino, S.
3arcelona. e-mail' natalia:imene%&u,.edu
+ - 4(
Clonacin del gen de la Fenilacetil-CoA ligasa de Penicillium chrysogenum e implicacin en la
biosntesis de penicilina y en la resistencia al cido fenilactico
Lamas-Maceiras M.(1), Vaca, .(1,2),Rodrguez-Dez M. E.(1), Casqueiro J.(1,2) y Martn J. F.
(1,2)
1. Jrea de +icro,iolog-a, Facultad de 3iolog-a / "iencias
Am,ientales, 04!1, <e8n, EspaGa. 0. .nstituto de
3iotecnolog-a, .73.R5E", @arDue "ient-$ico de <e8n, <e8n,
EspaGa.
+ - (4
dentificacin de un represor del promotor del opern de la ATPasa F0F1 de Streptococcus
pneumoniae
Hernndez-Madrid, A.1 y de la Campa A. G.
"entro 7acional de +icro,iolog-a, .nstituto de ;alud "arlos ...,
0400 +a:ada)onda, +adrid. 1v!0)emaa&isciii.es
+ - 61
lndice de autores
Y>1
Deteccin del marcador de resistencia cep A en bacterias anaerobias estrictas aisladas de
infecciones animales.
Garca Fernndez N. 1, Lorenzo Snchez M. 1, Vadillo Machota S.1, Ayala Serrano J. 3, Priz
Durn S. 1, Quesada Molina A.2
1"#tedra de +icro,iolog-a e .nmunolog-a / 0"#tedra de
3ioDu-mica / 3iolog-a +olecular / 1en2tica, Facultad de
Veterinaria, Universidad de Extremadura, Avda. de la
Universidad s9n, 1!1 "#ceres. 3"entro de 3iolog-a +olecular
;evero Rc)oa ";."-UA+, 0446 "anto,lanco >+adrid?.
nuriag$Wvet&)otmail.com
+ - 60
Presencia del marcador de resistencia tetQ en bacterias anaerobias estrictas aisladas de
infecciones animales
Lorenzo Snchez, M.1, Garca Fernndez, N.1, Vadillo Machota, S.1, Valle Manzano, J.1.
Ayala Serrano, J.3, Quesada Molina, A.2, Priz Durn, S.1
1"#tedra de +icro,iolog-a e .nmunolog-a / 0*epartamento de
3ioDu-mica / 3iolog-a +olecular / 1en2tica. Facultad de
Veterinaria. Avda. Universidad s9n 11 "#ceres. 3"entro de
3iolog-a +olecular ;evero Rc)oa. ";."-UA+ 0446
"anto,lanco >+adrid?. mer/l(Wvalencia&/a)oo.es
Anlisis molecular de la colonizacin intestinal por Enterococcus en nios sanos durante sus
primeros aos de vida
Pozuelo, M.J.1., Montesi, M.A.1., Garca-Albiach, R.1, Baquero, F.2, Del Campo, R. 2
1*pto. 3iolog-a "elular, 3ioDu-mica / 3iolog-a +olecular.
Facultad de Farmacia, Universidad ;an @a,lo-"EU.
Ur,ani%aci8n +onte @r-ncipe, 3oadilla del +onte. 04664
+adrid. 0;ervicio de +icro,iolog-a, Hospital =am8n / "a:al,
0434 +adrid. marpo%&ceu.es
+ - !6
Clonaje, expresin, purificacin y determinacin de la actividad enzimtica de pbp4b de Escherichia
coli
Vega Mendoza D.E.* y Ayala Serrano J.A.
"entro de 3iolog-a +olecular ;evero Rc)oa de +adrid-
Universidad Aut8noma de +adrid-"ampus "anto,lanco-
0446Idvega&c,m.uam.es
+ - 1(
Coexistencia de vas alternativas de formacin de biofilm, ica dependientes e independientes, en
cepas de Staphylococcus aureus resistentes a meticilina
Vergara-rigaray M.1, Valle J.1, Penads J.2 y Lasa .1
1.nstituto de Agro,iotecnolog-a / =ecursos 7aturales.
Universidad @M,lica de 7avarra A "onse:o ;uperior de
.nvestigaciones "ient-$icas. @amplona 316, 7avarra. e-
mail' marta.vergara&unavarra.es. 0.nstituto Valenciano de
.nvestigaciones Agrarias >.V.A?, +oncada 46113, Valencia
+ - 104
Aplicacin de la tipificacin mediante VNTRs en cepas humanas de Brucella melitensis
responsables de casos espordicos y de brotes en Espaa
Valdezate S.1, Cervera .1, Alvarez D.1, Sez Nieto J.A.1.
1;ervicio 3acteriolog-a. ".7.+. .nstituto de ;alud "arlos ...,
+a:ada)onda. +adrid. svalde%ate&isciii.es
lndice de autores
Y>11
+ - 106
Protenas de la familia de las arrestinas median la sealizacin por pH en hongos filamentosos y
levaduras
Herranz Fernndez S.(1), Rodrguez J.M.(1), Bussink H.(2), Rudnicka J.(2), Snchez JC.(1),
Arst H.(2), Pealva M.A.(1), Vincent O.(1)
>1?"entro de .nvestigaciones 3iol8gicas >".3? ";.". =amiro de
+ae%tu, 6044 +adrid, EspaGaH >0? *epartment o$ .n$ectious
diseases, Facult/ o$ medicine, .mperial "ollege o$ ;cience,
tec)nolog/ ^ +edicine, *u "ane =oad, <ondon Y10 on7,
U\. ;ilvia04&ci,.csic.es
+ - 10!
Secuenciacin del genoma bacteriano ms pequeo: Buchnera aphidicola, endosimbionte del
pulgn Cinara cedri.
Prez-Brocal V., Gil R., Silva F.J., Moya A. y Latorre A.
.nstitut "avanilles de 3iodiversitat i 3iologia Evolutiva,
Universitat de ValFncia. amparo.latorre&uv.es
+ - 106
Anlisis molecular del sistema fosfotransferasa dependiente de fosfoenolpiruvato especfico de
glucosa en Lactobacillus casei y su papel en el control del metabolismo de azcares.
Yebra M.J.1, Monedero V.1, Ziga M.1, Deutscher J.2, Prez-Martnez G.1
1*epartamento de 3iotecnolog-a, .nstituto de AgroDu-mica /
5ecnolog-a de Alimentos, ";.", Apdo. "orreos !3,461
3ur:assot, EspaGa. ,tcmon&iata.csic.es. 0+icro,iologie et
12n2tiDue +ol2culaire, "7=;9.7=A9.7A-@1, U+=0(4(,
!44( 5)iverval-1rignon, Francia.
+ - 134
Regulacin de la benzoato-CoA ligasa, implicada en el catabolismo anaerbico del benzoato, en la
bacteria reductora de Fe() Geobacter metallireducens.
Carmona, M., Blzquez, B., Garca, J.L. y Daz, E.
"entro de .nvestigaciones 3iol8gicas-";.", =amiro de +ae%tu
6, +adrid 044. mcarmona&ci,.csic.es
+ - 136
El simportador de glucosa de Streptomyces coelicolor no es suficiente para complementar la
deficiencia en la utilizacin de glucosa en Streptomyces clavuligerus
Prez-Redondo R., Lorenzana L.M., Baos S., Lpez-Garca M.T., Liras P.
*epartamento de Ecolog-a, 1en2tica / +icro,iolog-a. Jrea de
+icro,iolog-a. Facultad de "iencias 3iol8gicas / Am,ientales.
"ampus de Vega%ana, 04!1. <e8n. correo electr8nico'
degmpr&unileon.es
+ - 14
BapA, una nueva protena de superficie que relaciona la formacin del biofilm con la virulencia de
Salmonella enteritidis
Latasa C1, Roux A2, Toledo-Arana A1, Chigo J.M2, Gamazo C3, Penads J4 y Lasa 1
1<a,oratorio de 3io$ims +icro,ianos. .nstituto de
Agro,iotecnolog-a. Universidad @M,lica de 7avarra- ";.".
@amplona, 316. 01roupe de 12n2tiDue des 3io$ilms. .nstitut
@asteur. @aris !(!04. France. 3*epartamento de +icro,iolog-a.
Universidad de 7avarra, 314 @amplona. 4.nstituto
Valenciano de .nvestigaciones Agrarias >.V.A?, +oncada,
46113. Valencia. cristina.latasa&unavarra.es
lndice de autores
Y>111
+ - 140
Discrepancias entre frecuencias de recombinacion y distancia fsica en Aspergillus: mplicaciones
en la identificacin de genes.
Cobeo, L.1, Espeso, E.A.1, y Arst, H.N.2
1*ept. +icro,iolog-a +olecular, "entro .nvestigaciones
3iol8gicas. ";.". =amiro de +ae%tu, 6. 044 +adrid
>EspaGa?. 0*ept. .n$ectious *iseases. Facult/ o$ +edicine.
.mperial "ollege <ondon. *u"ane =d. <ondon Y10 on7 >U\?.
lauraco,e&ci,.csic.es
+ - 144
Funcionalidad de PBP4b de Escherichia coli
Ayala Serrano, J.A.* y Vega Mendoza, D.E.
"entro de 3iolog-a +olecular ;evero Rc)oa de +adrid-
Universidad Aut8noma de +adrid-"ampus "anto,lanco-0446.
e-mail' :a/ala&c,m.uam.es
+ - 1(
Variacin allica del locus polimrfico lytB de estreptococos del grupo mitis: el gen implicado en la
separacin de las clulas hijas en neumococo
Moscoso, M., Obregn, V., Lpez, R., Garca, J. L., y Garca, E.
.nvestigaciones 3iol8gicas, ";."H =amiro de +ae%tu 6, 044
+adrid. e-mail' mmoscoso&ci,.csic.es.
+ - 1(1
Unin de PhoP a promotores de genes regulados por fosfato en Streptomyces coelicolor:
identificacin de las cajas PHO.
Sola-Landa A1, Rodrguez-Garca A1, Franco-Domnguez E1, y Martn JF1,2.
1.nstituto de 3iotecnolog-a de <e8n >.73.R5E"?, @arDue
"ient-$ico de <e8n, Av. =eal, 1, 046, <e8n. 0Jrea de
+icro,iolog-a. Fac. "". 3iol8gicas / Am,ientales, Universidad
de <e8n, "ampus de Vega%ana, s9n, 04!1, <e8n.
e-mail' degasl&unileon.es
+ - 1((
Regulacin del procesamiento de la isopenicilina N-aciltransferasa (AT) de Penicillium
chrysogenum por su preprotena.
Garca-Estrada C.1, Martn J.F.1,2.
1Jrea de +icro,iolog-a. Facultad de "". 3iol8gicas /
Am,ientales, Universidad de <e8n, "ampus de Vega%ana, s9n,
04!1, <e8n. 0.nstituto de 3iotecnolog-a >.73.R5E"?, @arDue
"ient-$ico de <e8n, Av. =eal, 1, 046, <e8n. E-mail'
d$tcge&unileon.es
+ - 1(6
The role of glycogen phosphorylase in regulating glycogen breakdown and maltodextrin
biosynthesis in Escherichia coli
Alonso-Casajs, N., Morn-Zorzano, M.T., Viale, A. M., Muoz, F.J., Eidallyn, G., Baroja-
Fernndez, E., Pozueta-Romero, J.
.nstituto de Agro,iotecnolog-a >U@7A9 ";."? "tra. +utilva
s9n. +utilva 3a:a 31160. 7avarra. E-mail'
maite.moran&unavarra.es
+ - 161
Aislamiento y caracterizacin de un plsmido endgeno de Gordonia jacobaea.
lndice de autores
Y>1
V
Feijoo-Siota, L., Veiga-Crespo,P., Blasco, L., Poza,M., Villa,T.G.
*pto +icro,iologia .Fac. Farmacia-"ampus ;ur s9n.
Universidad de ;antiago de "ompostela. ;antiago de
"ompostela. <a "oruGa ".@.1(!40.
$ei:oosiota&mixmail.com
+ - 160
Exporte nuclear en hongos filamentosos: generacin de una cepa de Aspergillus nidulans sensible
a leptomicina B.
Arajo L.1, Fernndez-Martnez J.1, Bernreiter A.2, Strauss J.2 y Espeso E.A.1
1"entro de .nvestigaciones 3iol8gicas, ".;..."., =amiro de
+ae%tu, 6 044 +adrid >EspaGa?. 0.nstitut $_r AngeXandte
1enetiS und Tell,iologie, 3R\U-Universit/ o$ 7atural
=esourcesand Applied <i$e ;ciences, +ut)gasse 14, A-116
Vienna >Austria?. lidiaar,a&ci,.csic.es
+ - 1!0
El gen pga1 de Penicillium chrysogenum, regula negativamente la conidiacin y se encuentra
involucrado en el crecimiento vegetativo en medio slido.
Garca-Rico R.O.1,2, Fierro F.1 y Martn J.F.1
>1? .nstituto de 3iotecnolog-a de <e8n >.73.R5E"?. Avda.
=eal,1. 046. <e8n, EspaGa. >0? *epartamento de
+icro,iolog-a, Facultad de "iencias 3#sicas. Universidad de
@amplona. @amplona, 7orte de ;antander. "olom,ia.
Email' degrgr&unileon.es
+ - 1!!
Caracterizacin molecular de una nueva lisina de un profago de Streptococcus mitis activa contra
paredes de Streptococcus pneumoniae
Llull, D., Lpez, R. y Garca, E.
"entro de .nvestigaciones 3iol8gicas. ";.". =amiro de +ae%tu,
6, 044 A +adrid. e-mail' dllull&ci,.csic.es
+ - 141
Desarrollo de un mtodo rpido, limpio y eficiente para la obtencin de isopenicilina N pura a partir
de Acremoniumchrysogenum.
Vaca . (1), Casqueiro F.J. (2), y Martn J.F. (1, 2).
1. .nstituto de 3iotecnologia de <e8n >.73.R5E"?. Av. =eal
s9n, @arDue "ienti$ico de <e8n. 0. Universidad de <e8n,
"ampus de Vega%ana s9n, 04( <e8n.
+ - 140
Estudios de los efectos de la eliminacin del gen pur8 del cluster de biosntesis de puromicina de S.
alboniger en S. lividans 1326
Snchez M. B., Martnez, J. . y Jimnez, A.
"entro de 3iolog-a +olecular d;evero Rc)oae, Universidad
Aut8noma de +adrid, "anto,lanco, 0446 +adrid.
m,sanc)e%&c,m.uam.es
+ - 146
Construccin de quimeras del factor EF2 de Aspergillus fumigatus sensibles a derivados de la
sordarina
Rodrguez-Mateos M., Garca-Marcos A., Remacha M., Santos C.1, Ballesta J.P.G.
"entro de 3iolog-a +olecular ;evero Rc)oa, "anto,lanco,
UA+ / ";.", +adrid 0446. 1*irecci8n actual, Universidad
Francisco de Vitoria. mariaWr&c,m.uam.es
lndice de autores
Y>V
+ - 144
dentificacin protemica de protenas de Aspergillus nidulans que interaccionan con la importina a.
Fernndez-Martnez, J.1, de los Ros, V.M.2, Pealva, M.A.1, Albar, J.P.2, Espeso, E.A.1
1*ept. +icro,iolog-a +olecular, "entro .nvestigaciones
3iol8gicas. ";.". =amiro de +ae%tu, 6. 044 +adrid
>EspaGa?. 0 <a,oratorio de @rote8mica. "entro 7acional de
3iotecnolog-a ";.", 0436 +adrid >EspaGa?.
:$ernande%&ci,.csic.es
+ - 04
Caracterizacin molecular del enzima lipoltico producido por la bacteria halfila moderada
Marinobacter lipolyticus
Martn, S., Mellado, E. y Ventosa, A.
Farmacia, Universidad de;evilla. rengel&us.es
+ - 014
Clasificacin de bacterias aisladas de procesos infecciosos porcinos. Tcnicas moleculares para la
identificacin de patgenos emergentes veterinarios.
Muoz, D; Vela, A; Fernndez-Garayzbal, JF; Domnguez, L.
<a,oratorio Visavet. ;anidad Animal. Facultad de Veterinaria.
Hospital cl-nico Veterinario. @lanta s8tano. Universidad
"omplutense de +adrid. deliamuno%1&/a)oo.es
+ - 01(
Caracterizacin de una enzima fructofuranosidasa de la levadura Xanthophylomyces dendrorhous.
Macas Borrego, M.., Alcal Martnez, B., Linde Lpez, L., lvaro Benito, M., Fernndez
Lobato, M.
*epartamento de 3iolog-a +olecular. "entro de 3iolog-a
+olecular ;evero Rc)oa >UA+-";."?. Universidad Aut8noma
de +adrid. E-mail' imacias&c,m.uam.es.
+ - 016
Estudio sobre las dos glicosiltransferasas de la agrupacin gnica ata de la ruta biosinttica del
antibitico nucleosdico A201A de Streptomyces capreolus
Molloy, B., Ceballos, R.A., Saugar, ., Sanz, E., Mesa, S., Fernndez Lobato, M., Jimnez, A.
"entro de 3iolog-a +olecular ;evero Rc)oa >UA+-";."?.
Universidad Aut8noma de +adrid. +adrid 0446.
,mollo/&c,m.uam.es.
+ - 01!
Caracterizacin de una nueva -glucosidasa de la levadura Xanthophyllomyces dendrorhous con
actividad transglicosidasa.
Linde Lpez L., Marn Alberdi D., Borrego Macas ., Cobo Agudo M J., Fernndez-Arrojo L.*,
Lemus R.*, Plou F.J.*., Fernndez Lobato M.
*epartamento de 3iolog-a +olecular. "entro de 3iolog-a
+olecular ;evero Rc)oa >UA+-";."?. Universidad Aut8noma
de +adrid. I.nstituto de "at#lisis / petroleoDu-mica >";."?.
"ampus UA+. dlinde&c,m.uam.es.
+ - 014
Caracterizacin de huvS, un nuevo receptor de membrana externa de grupos hemo en el patgeno
de peces Vibrio anguillarum
Mourio S., Juz-Ro S., Balado M., Osorio C.R., Lemos M.L.
lndice de autores
Y>V
1
*epartamento de +icro,iolog-a / @arasitolog-a, .nstituto de
Acuicultura, Universidad de ;antiago de "ompostela, 1(!40
;antiago de "ompostela. e-mail' susanaml&usc.es
+ - 016
dentificacin de un opern involucrado en la sntesis de siderforos en Photobacterium damselae
ssp. piscicida: similitudes estructurales con el sistema de sntesis y transporte de yersiniabactina en
Yersinia spp.
Juiz-Ro S.; Mourio S.; Prez-Pardal S.; Lemos M.L. y Osorio C.R.
*epartamento de +icro,iolox-a, .nstituto de Acuicultura,
Universidade de ;antiago, 1(!40, ;antiago de "ompostela
+ - 006
MLVA (Multilocus Variable-Number Tandem-Repeat Analysis) como mtodo alternativo para la
tipificacin de cepas de E. coli serotipo O157:H7 productoras de txina de Shiga.
Herrera, L.*, Franco, L.*, Aladuea, A.*, Herrera, S.*, Blanco, M.+, Blanco, J.E.+, Mora, A.+,
Dhabi, G.+, Blanco, J.+, y Echeita, M.A.*
I<a,oratorio 7acional de =e$erencia de ;almonella / ;)igella,
"entro 7acional de +icro,iologia, .nstituto de ;alud "arlos ...,
0400 +a:ada)onda, +adrid, EspaGa. [<a,oratorio de
=e$erencia de E. coli ><=E"?. *epartamento de +icro,iolog-a
/ @arasitolog-a. Facultad de Veterinaria. Universidad de
;antiago de "ompostela, "ampus de <ugo, 0!0.
aec)eita&isciii.es.
+ - 006
El proceso de reduccin genmica en el endosimbionte de pulgones Buchnera aphidicola
Gmez-Valero, L., Latorre, A., y Silva, F. J.
.nstitut "avanilles de 3iodiversitat i 3iologia Evolutiva,
Universitat de ValFncia, Apartat 004(, 46!1 Valencia. E-
mail' $rancisco.silva&uv.es
+ - 033
Estudio in vivo del crecimiento de la capa S de Thermus thermophilus HB8
Acosta, F., Cava, F., Valls, C. , de Pedro, M.A. , Berenguer, J.
"entrode 3iolog-a +olecular ;evero Rc)oa. Universidad
Aut8noma de +adrid-";.". "arretera de colmenar \m 1(.
0446. +adrid. $acosta&c,m.uam.es
+ - 044
Clonaje y sobreexpresin de enzimas termorresistentes
Ferreras, E.R., Berenguer, J.
"entro de 3iolog-a +olecular ;evero Rc)oa UA+-";.". "rta
"olmenar vie:o, \m 1(, 0446, +adrid. e-mail'
er$erreras&c,m.uam.es
+ - 04(
dentificacin de una nueva barrera a la infeccin por fagos basada en secuencias de DNA
repetidas
Dez Villaseor, C; Garca Martnez, J; Mojica, F
*ivisi8n de +icro,iolog-a. Universidad de Alicante. 34-
Alicante. mo:ica&ua.es
+ - 046
rpsL como marcador de seleccin en Thermus thermophilus.
Blas, E., Berenguer, J.
lndice de autores
Y>V
11
"entro de 3iolog-a +olecular ;evero Rc)oa UA+-";." la,
,c-13. "rta "olmenar \m 1(0446, +adrid. email'
e,galindo&c,m.uam.es
+ - 0(
Nuevo enfoque para estudiar, mediante el sistema de doble hbrido, las interacciones entre las
protenas P de S. cerevisiae.
Francisco, R., Ballesta, J.P.G. y Remacha M.
"entro de 3iolog-a +olecular d;evero Rc)oae >";." /
Universidad Aut8noma de +adrid?. "anto,lanco, 0446-
+adrid. r$rancisco&c,m.uam.es
+ - 0(4
Relacin entre el sistema general de glicosilacin y la supervivencia de Campylobacter jejuni.
Obtencin de cepas de C. jejuni con el gen pglB mutado.
Girbau, C., Churruca, E., Martnez, ., Mateo, E., Fernndez de Aranguiz, A., Alonso, R. y
Fernndez-Astorga, A.
1astei%. E-mail' cgir,au1&iSasle.e)u.es
+ - 0(4
Caracterizacin gentica de cepas de Streptococcus suis (serotipos 2 y 9) aisladas de ganado
porcino
Blume, V.1, Luque, .2, Borge, C.2, Vela, A..1, Domnguez, L.1, Perea, J.A.2, Tarradas, C.2, y
Fernndez-Garayzbal, J.F.1
1*epartamento de ;anidad Animal. Facultad de Veterinaria.
Universidad "omplutense. 044 +adrid. verena&vet.ucm.es.
0*epartamento de ;anidad Animal. Facultad de Veterinaria.
"ampus Universitario =a,anales.14!1 "8rdo,a.
+ - 061
Anlisis protemico preliminar de las protenas extracelulares producidas por Pleurotus eryngii en
diferentes condiciones de cultivo
Prez-Leblic, M.. 1*, Martnez, A.T.2, y Martnez, M.J.2
1*pto de +icro,iolog-a / @arasitolog-a, Univ. Alcal#,
044!1+adrid. 0"entro de .nvestigaciones 3iol8gicas, ";.",
=amiro de +ae%tu 6, 044 +adrid, >e-mail'
mipere%&ci,.csic.es?
+ - 06!
Anlisis gentico de la degradacin anaerbica de tolueno en Azoarcus sp. CB
Blzquez B., Zamarro MT., Barragn MJ., Garca JL., Carmona M., y Daz E.
"entro de .nvestigaciones 3iol8gicas-";.", =amiro de +ae%tu
6, 044 +adrid. 3las&ci,.csic.es
+ - 064
Evolucin del sistema de la chaperona DnaK en Archaea halfilas. Nueva visin sobre el origen y
funcin del sistema DnaK en los genomas de Archaea.
Fenosa, D.1, Gonzaga, A. 1, Kamekura, M.2 y Juez, G.1
1*ivisi8n +icro,iolog-a, Facultad de Farmacia, "ampus de ;an
Kuan, Universidad +iguel Hern#nde%, 3(( Alicante. 0 7oda
.nstitute $or ;cienti$ic =esearc), 7oda, 7oda-s)i, ")i,a-Sen,
Kap8n 0!4. d$enosa&um).es
+ - 0!0
lndice de autores
Y>V
111
Caracterizacin gentica y fisiolgica de SPst3, un elemento transponible regulado de
Pseudomonas stutzeri.
Christie-Oleza J.A., Lanfranconi M.P., Martn-Cardona C., Nogales B., Lalucat J. y Bosch R.
+icro,iolog-a, *to. 3iolog-a, Universitat de les .lles 3alears
>U.3?. "tra. Valldemossa \m. !,( A !100 @alma de +allorca.
e-mail' :osep)Wc)ristie&/a)oo.es
+ - 0!6
Clonacin, purificacin y caracterizacin de una nueva lipasa de Helicobacter pylori 26695
1*epartmento de +icro,iolog-a, Facultad de 3iolog-a,
Universidad de 3arcelona, Av. *iagonal 64(, 404 3arcelona,
EspaGa. 0*ipartimento di Fisiologia Umana ]Vittorio
Erspamer], UniversitC di =oma d<a ;apien%ae, @.le Aldo +oro
(, 14( =oma, .talia. Ie-mail' crui%&,io.u,.es
+ - 044
Las lisinas tipo LytA de dos fagos de Streptococcus mitis ilustran sobre la transicin monmero-
dmero de la principal autolisina de Streptococcus pneumoniae
Romero, P., Lpez, R., Garca, E.
"entro de .nvestigaciones 3iol8gicas >";."? =amiro de
+ae%tu, 6. 044 +adridH patromero&ci,.csic.es
+ - 04!
Estudio del papel regulador de las protenas P del tallo ribosmico.
Remacha, M., Jimnez-Daz, A., Revuelta, J. y Ballesta, J.P.G.
"entro de 3iolog-a +olecular d;evero Rc)oae. ";." /
Universidad Aut8noma de +adrid. 0446-"anto,lanco, +adrid.
miguel.remac)a&uam.es
+ - 061
Estudios sobre el ensamblaje de ORC, el complejo iniciador de la replicacin del DNA en
Saccharomyces cerevisiae
Snchez-Gorostiaga, A., Moreno-del lamo, M.*, Serrano, A., Giraldo, R.
.nvestigaciones 3iol8gicas - ";.", c9 =amiro de +ae%tu, 6,
044, +adrid.I E-mail' mmoreno&ci,.csic.es
+ - 36
Relevancia de la topologa del DNA como mecanismo de regulacin global en Archaea halfilas
Soria, E.1, Mojica, F.J.M. 1 y Juez, G.2
1*ivisi8n de +icro,iolog-a. Facultad de "iencias. Universidad
de Alicante. Apdo. 66. Alicante. soria&ua.es. 0*ivisi8n de
+icro,iolog-a. Facultad de Farmacia. Universidad +iguel
Hern#nde%. Apdo. 14. ;ant Koan dEAlacant. Alicante.
+ - 316
Evaluacin de los promotores de los genes xlnA y xlnB de Aspergillus nidulans para la produccin
heterloga de una ramnosidasa de inters industrial
Tamayo, J.A. y Orejas, M.
*epartamento de 3iotecnolog-a. .nstituto de AgroDu-mica /
5ecnolog-a de Alimentos >.A5A?. "onse:o ;uperior de
.nvestigaciones "ient-$icas >";."?. Apartado de "orreos !3.
461 3ur:assot >Valencia?. :uatara&iata.csic.es
+ - 30
Los antibiticos lactmicos inducen la respuesta SOS en Staphylococcus aureus y promueven
la transferencia horizontal de genes implicados en virulencia.
lndice de autores
Y>1
Y
Maiques, E; beda, C; Barb J, Lasa, ; Penads, JR
Universidad "ardenal Herrera -"EU- .nstituto Valenciano de
.nvestigaciones Agrarias, 46113, +oncada, Valencia.
emaiDues&uc).ceu.es
+ - 301
Anlisis de las secuencias necesarias para la unin a DNA y el control de la transcripcin por el
regulador AtzR de Pseudomonas sp. ADP
Porra, O.*, Santero, E. y Govantes, F.
"entro Andalu% de 3iolog-a del *esarrollo / *epartamento de
"iencias Am,ientales. Universidad @a,lo de Rlavide. "arretera
de Utrera, \m 1, 4113, ;evilla. IE-mail' opor$ue&upo.es
+ - 33!
Activacin, localizacin, y regulacin por la ruta SAPK de la MAP kinasa Pmk1 en
Schizosaccharomyces pombe.
Madrid,M.1, Soto,T.1, Khong,K.1, Franco, A.2, Vicente,J.1, Prez,P.3, Gacto,, M.1 y Cansado,
J.1
1*epartamento de 1en2tica / +icro,iolog-a, Universidad de
+urcia. 3!1 +urcia, 0*ivision o$ feast 1enetics. 7ational
.nstitute $or +edical =esearc)., <ondon 7Y! 1AA, U\H /
3.nstituto de +icro,iolog-a 3ioDu-mica. ";."9*epartamento de
+icro,iolog-a / 1en2tica, Universidad de ;alamanca. 3!!
;alamanca. *irecci8n de correo electr8nico' marisa&um.es
+ - 340
Anlisis gentico, inmunoqumico y biolgico de mutantes rugosos de Brucella melitensis para uso
vacunal
Gonzlez, D.1, Grill, M.J.2, De Miguel M. J.2, Muoz, P.M.2, Marn, C.M.2, Lpez-Goi, .1,
Blasco, J.M.2 y Moriyn, .1
1*pto. +icro,iolog-a, Univ. de 7avarra, @amplona, EspaGaH /
0Unidad de ;anidad Animal, "entro de .nvestigaci8n /
5ecnolog-a Agroalimentaria, 1o,ierno de Arag8n, Tarago%a,
EspaGa. dgon%ale%&unav.es
+ - 3(1
dentificacin de un cluster de genes involucrado en la sntesis de vancrobactina, un nuevo
siderforo producido por cepas del serotipo O2 de Vibrio anguillarum
Balado, M. Mourio, S. Najimi, M. Osorio, C.R. Lemos M.L.
*epartamento de +icro,iolog-a / @arasitolog-a, .nstituto de
Acuicultura, Universidad de ;antiago, ;antiago de "ompostela,
1(!40 <a "oruGa. m,alado&usc.es
+ - 36!
Origen y funcin de un dominio del megaplsmido pHV4, replicn esencial o minicromosoma, de la
Archaea halfila Haloferax volcanii.
Gonzaga, A.1, Fenosa, D.1, Soria, E.2, Mojica, F.J.M.2 y Juez, G.1
1*ivisi8n +icro,iolog-a, Facultad de Farmacia, "ampus de ;an
Kuan, Universidad +iguel Hern#nde%, Apdo. 14 ;ant Koan
dNAlacant, Alicante. 0*ivisi8n de +icro,iolog-a, Facultad de
"iencias, "ampus de ;an Vicente, Universidad de Alicante,
Apdo. 66, Alicante. agon%aga&um).es
+ - 3!0
Activacin de protenas G de la familia Rho por la protena SigD de Salmonella expresada en
clulas de mamfero.
lndice de autores
>
Alemn, A.*, Mallo, G.V.**, Terebiznik, M.**, Rodrguez-Escudero, .*, Cid, V.J.*, Molina, M.* y
Rotger, R.*
I*epartamento de +icro,iolog-a ... Facultad de Farmacia.
Universidad "omplutense de +adrid. 044 +adrid.
II*ivision o$ "ell 3iolog/, Hospital $or ;icS ")ildren,
5oronto, Rntario +(1 1U4, "anad#.
+ - 3!3
Estudios de secrecin de la haloproteasa CP1 producida por Pseudoalteromonas ruthenica CP76
Snchez-Porro, C., Mellado, E. y Ventosa, A.
Farmacia, Universidad de ;evilla. sanpor&us.es
+ - 3!4
Primera caracterizacin de la resistencia a fluoroquinolonas en Streptococcus suis
Escudero, J.A., San Milln, A., Farelo, F., Moreno, M.A., Domnguez, L., Gonzlez-Zorn, B.
Universidad "omplutense de +adrid, Avda @uerta de Hierro
s9n, 044-+adrid. ,g%orn&vet.ucm.es
+ - 343
Caracterizacin de la xilanasa A de Bacillus sp. BP-7. Comparacin con xilanasas de p alcalino y
bajo peso molecular de la familia 11.
Gallardo, ., Daz, P., Pastor, F..J.
Universidad de 3arcelona. Av. *iagonal 64(, 3arcelona 404.
e-mail' ogallard&,io.u,.es
+ - 344
Deteccin de armA, un nuevo mecanismo de resistencia a aminoglucsidos
Cataln, A., San Milln, A., Escudero, J.A., Porrero, M. C., Moreno, M. A., Domnguez, L.,
Gonzlez-Zorn, B.
s9n, 044-+adrid. anitaWcercedilla&)otmail.com
+ - 346
nteracciones entre la lipasa de Candida rugosa y bicapas lipdicas mediante Microscopa de
Fuerzas Atmicas. Aplicacin para el estudio de inhibidores de lipasas
Prim N.a, versen L.b, Bjrnholm T.b, Diaz P.a
a*epartamento de +icro,iolog-a, Universidad de 3arcelona,
Avda. *iagonal 64(, 3arcelona 404, e-mail' nprim&u,.edu.
,7ano ;cience "enter, *epartment o$ ")emistr/, Universit/ o$
"open)agen, UniversitetsparSen (, *\-01 "open)agen,
*inamarca
+ - 360
Resistencia a beta lactmicos en Haemophilus parasuis
San Milln, A., Domnguez, L. Garca, M., Muoz-Ruiz, D., Moreno, M.A., Gonzlez-Zorn, B.
s9n, 044-+adrid, alvsanmillan&)otmail.com
+ - 366
Estudio genmico de la respuesta de fibroblastos a la infeccin intracelular con Salmonella
Nez-Hernndez, C. y Garca-del Portillo, F.
lndice de autores
>1
*epartamento de 3iotecnolog-a +icro,iana. "entro 7acional
de 3iotecnolog-a-";.". *arXin 3. 0446 +adrid.
cnune%&cn,.uam.es
+ - 41
Blattabacteria, the endosymbionts of cockroaches, have congruent genome sizes of 650 kb
Neef A., Lpez-Snchez M.J., Latorre A., and Moya A.
"avanilles .nstitute $or 3iodiversit/ and Evolutionar/ 3iolog/,
Universit/ o$ ValenciaH Apartado @ostal 004(, 46!1
ValenciaH alexander.nee$&uv.es
+ - 43
Caracterizacin del sistema celuloltico de Stachybotrys atra BP-A
Picart, P. y Pastor, F..J.
*epartamento de +icro,iolog-a, Universidad de 3arcelona, Av.
*iagonal 64(, 404 3arcelona, EspaGa. e-mail'
picart&,io.u,.es
+ - 4!
El regulador global de virulencia sarA controla positivamente la expresin de Bap, una protena de
Staphylococcus aureus implicada en la formacin del biofilm
Trotonda M.P., Manna A.C., Cheung A.L., Lasa . y Penads J. R.
Universidad "ardenal Herrera-"EU A .nstituto Valenciano de
.nvestigaciones Agrarias >.V.A?, 46113, +oncada, Valencia.
ptrotonda&uc).ceu.es.
+ - 44
AMOS PCR una herramienta diagnostica til para la diferenciacin de las cepas de Brucella
abortus de campo y la cepa vacunal RB51
Pereira G, Cerrato R, Hermoso de Mendoza M, Snchez S, Alonso JM, Rey JM, Snchez MA,
Hermoso de Mendoza J
@atolog-a .n$ecciosa, Facultad de Veterinaria, "ampus
Universidad de Extremadura, 1!1-"#ceres.
,ru:ula01&/a)oo.es.
+ - 41
Tipado molecular de cepas de Staphylococcus aureus obtenidas de lesiones purulentas cuncolas.
Selva, L1; Viana, D1; Penads, J1,3; Peris, B1; Segura, P1 y Corpa. J1.
1*epartamento de Atenci8n ;anitaria, ;alud @M,lica / ;anidad
Animal, Universidad "ardenal Herrera-"EU, 46113 +oncada,
ValenciaH 0*epartamento de Bu-mica, 3ioDu-mica / 3iolog-a
+olecular, Universidad "ardenal Herrera-"EUH 3.nstituto
+oncada, Valencia. lselva&uc).ceu.es
+ - 411
Formacin de biofilm, dependiente de Bap, de especies patgenas de Staphylococcus: evidencia
de transferencia horizontal de genes?
Tormo, M.A., Mart, M., Knecht, E., Gtz, F., Lasa, . y Penads, J.R.
.nvestigaciones Agrarias >.V.A?, 46113, +oncada, Valencia.
migmar&uc).ceu.es
+ - 410
Factores de patogenicidad de diferentes cepas de Staphylococcus aureus procedentes de lesiones
de conejo
Viana, D1; Selva, L1; Penads, J1,3; Peris, B1; Segura, P1 y Corpa. J1.
lndice de autores
>11
1*epartamento de Atenci8n ;anitaria, ;alud @M,lica / ;anidad
Animal, Universidad "ardenal Herrera-"EU, 46113 +oncada,
ValenciaH 0*epartamento de Bu-mica, 3ioDu-mica / 3iolog-a
+olecular, Universidad "ardenal Herrera-"EUH 3.nstituto
+oncada, Valencia. dviana&uc).ceu.es
+ - 41(
Recombinacin Homloga en C. albicans: caracterizacin de mutantes rad51D.
Gmez-Raja, J1. Andaluz, E1. Ciudad, T1 y Larriba, G1.
1*epartamento de +icro,iolog-a, Facultad de "iencias,
Universidad de Extremadura, 3ada:o%. :gr&unex.es
+ - 416
mportancia de la fosfatidilcolina en la virulencia de Brucella
Conde R.1, Grill M.J.2, de Miguel M.J.2, Moriyn .1, riarte M.1
1*pto. de +icro,iolog-a. Facultad de +edicina, Universidad de
7avarra, @amplona / 0Unidad de ;anidad Animal, "entro de
.nvestigaci8n / 5ecnolog-a Agroalimentaria, 1o,ierno de
Arag8n, Tarago%a, EspaGa.
+ - 403
Qu son realmente las islas de patogenicidad de Staphylococcus aureus?
beda C, Maiques E, Blanco J, Lasa , Penads JR.
Universidad "ardenal Herrera-"EU 9 .nstituto Valenciano de
.nvestigaciones Agrarias. :penades&ivia.es
+ - 404
La MAPKK Pbs2 es esencial en la respuesta frente a estrs oxidativo en el hongo patgeno
Candida albicans.
Arana DM, Nombela C, Alonso-Monge R, Pla J.

+ - 431
Recent contributions of the parD (kid-kis) toxin-antitoxin system of plasmid R1
Lpez-Villarejo J1*, Muoz-Gmez AJ1,2 , Hernndez-Arriaga AM1, Berzal-Herranz A2 ,
Lemonnier M1and Daz-Orejas R1
1*epartmento +icro,iolog-a +olecular. "entro de
.nvestigaciones 3iol8gicas A ";.". "9 =amiro de +ae%tu, 6.
044 A +adrid, ;pain. Iemail' villare:o&ci,.csic.es. 0.nstituto
de @arasitolog-a / 3iomedicina ]<8pe%-7e/ra], ";.", @arDue
5ecnol8gico de "iencias de la ;alud, Avda. del "onocimiento
s9n, Armilla, E-141 1ranada, ;pain
+ - 430
Recombinacin no homloga (NHEJ) en Candida albicans: caracterizacin de mutantes HDF-1D.
Chico, L.1, Ciudad, T.1, Larriba G.1, Andaluz, E.1
1*epartamento de +icro,iolog-a, Facultad de "iencias,
Universidad de Extremadura, 3ada:o%. l/c)ic&gmail.com
+ - 436
SarA es un regulador positivo esencial para el desarrollo del biofilm en S. epidermidis.
Tormo, M.A., Mart, M., Valle, J., Manna, A.C., Cheung, A.L., Lasa, . y Penads J.R.
.nvestigaciones Agrarias >.V.A?,46113 +oncada, Valencia.
matormo&uc).ceu.es
+ - 434
lndice de autores
>111
Bsqueda de seales de hiperglicosilacin en glicoprotenas de levaduras
Conde, R , Cueva, R, Pablo, G, Polaina, J y Larriba, G.
Ùniversidad de Extremadura, *epartamento de +icro,iolog-a,
F. de "iencias, 6!1 3ada:o%. g.nstituto de AgroDu-mica /
5ecnolog-a de Alimentos, "onse:o ;uperior de .nvestigaciones
"ient-$icas, 4664 @aterna, Valencia. rconde&unex.es
+ - 4(0
Metabolismo del D-arabinitol en el hongo patgeno Candida albicans: papel de la D-arabinitol
deshidrogenasa Ard1p
Gola, S. y Pla, J.
Universidad "omplutense de +adrid, Faculdad de Farmacia,
*epartamento +icro,iolog-a .., @la%a de =am8n / "a:al s9n,
044 +adrid. ;usanne.1ola&$arm.ucm.es
No!mali)acin en Mic!obiolo,a
7-!
La mejora de la calidad analtica mediante ensayos intercomparativos
Sanchis Solera, J., Roqus, B., Rook, N., Garca, A., Sanchez, E.
Apdo.44, 0401-Valdemorillo >+adrid?
microSit&la,oratoriosmicroSit.com
7 - 66
Certificacin en la SO 9001:2000 de la CECT
Ferrer ., Belloch C., Garay E.
"olecci8n EspaGola de "ultivos 5ipo. Universidad de Valencia.
"ampus de 3ur:assot. 461 3ur:assot >Valencia?.
inmaculada.$errer&uv.es
7 - 1(6
Validacin intralaboratorio de mtodos de anlisis de bacterias coliformes y E. coli en aguas.
Allaert, C., Vila, G., Garrof, R., Gmez, R., Marqus, P., Sala, N.
Universitat de <leida. *epartament de 5ecnologia dNAliments.
=ovira =oure 161, 0(164 <leida. nsala&tecal.udl.es
Mic!obiolo,a de +lanta$
@ - (3
dentificacin de genes implicados en la biosntesis de mangotoxina por Pseudomonas syringae pv.
syringae. Papel en virulencia y supervivencia epiftica
Cazorla, F.M.; Prez-Garca, A.; Arrebola, E.; Vzquez, M. A.; de Vicente, A.
*epartamento de +icro,iolog-a, Facultad de "iencias,
Universidad de +#laga, 06!1-+#laga, EspaGa. e-mail'
adevicente&uma.es
@ - 64
Purification and characterization of the lysozyme-like bacteriocin secreted by Gluconacetobacter
diazotrophicus, which inhibits growth of Xanthomonas albilineans.
Blanco Lpez, Y., Sacristn San Cristbal, M., Legaz Gonzlez, M.E., Vicente Crdoba, C.
*epartment o$ @lant @)/siolog/, Facult/ o$ 3iolog/,
"omplutense Universit/, Kos2 Antonio 7ovais Av., 044
+adrid. E-mail' /,lanco&,io.ucm.es
@ - 46
Caracterizacin de cepas de rhizobia aisladas de trbol en suelos de diferentes caractersticas
edficas del noroeste de Espaa
Ramrez-Bahena, M.H.1, Valverde, A.2, Santos, F.3, Fernndez-Santos, F.1, Mateos, P. F.1,
Martnez-Molina, E.1, Velzquez, E.1
lndice de autores
>1V
1.*epartamento de +icro,iolog-a / 1en2tica. Edi$icio
*epartamental de 3iolog-a, "ampus +iguel de Unamuno,
3!! ;alamanca, ;pain. 0.*epartamento de @roducci8n
Vegetal. .=7A-";.", "9 "ordel de +erinas 4-(0, 3!4
;alamanca, ;pain. 3.*epartamento de Eda$olog-a / Bu-mica
Agr-cola. Edi$icio *epartamental de 3iolog-a, "ampus +iguel
de Unamuno, 3!! ;alamanca, ;pain. "orreo electr8nico'
lisinaWrW,&/a)oo.com.mx
@ - 114
Papel de fenoles en la resistencia de la caa de azcar frente a Ustilago scitaminea
Santiago, R.; de Armas, R.*; Legaz, M.E.; Vicente, C.
*epartamento de Fisiolog-a Vegetal, Facultad de 3iolog-a,
Universidad "omplutense. Avda. Kos2 Antonio 7ovais s9n
044, +adrid, EspaGa. I*epartamento de Fisiolog-a Vegetal,
Facultad de 3iolog-a, Universidad de la Ha,ana. "9 0( e9 K e ..
Vidado, "iudad de la Ha,ana 14, "u,a.
rocsanti&,io.ucm.es
@ - 116
Purification and properties of an unusual UDP-glucose dehydrogenase, NADPH-dependent, from
Xanthomonas albilineans.
Blanch, M.; Blanco, Y.; Legaz, M.E. and Vicente, C.
<a,orator/ o$ @lant @)/siolo/, Facult/ o$ 3iolog/,
"omplutense Universit/, Av. Kos2 Antonio 7ovais s9n, 044
+adrid, ;pain. E-mail' m,lanc)r&,io.ucm.es
@ - 10(
Aislamiento y caracterizacin de bacterias rizosfricas con potencial utilizacin en el control
biolgico de Rosellinia necatrix en aguacate.
Cazorla, F.M.1; Ruiz-Romero, D.J.1; Pliego, C.2; Gonzlez-Snchez, M.A.3; Prez-Garca, A.1;
Bloemberg, G.4; Lugtenberg, B.J.J.4; Perez-Jimnez, R.3; Ramos, C.2; de Vicente, A.1
1*pto. +icro,iolog-a / 0Jrea de 1en2tica, Fac. "iencias, Univ.
+#laga, 06!1-+#laga, EspaGaH 3 .FA@A-".FA. ")urriana,
+#laga, EspaGaH 4.nst. 3iolog/ o$ <eiden, 0333-A<, <eiden,
5)e 7et)erlands. e-mail' ca%orla&uma.es
@ - 14(
solation of specific receptors from cell walls of Xanthomonas albilineans for sugarcane
glycoproteins which participate in cellular recognition processes.
Sacristn San Cristbal, M., Blanco Lpez, Y., Legaz Gonzlez, M.E., Vicente Crdoba, C.
*epartment o$ @lant @)/siolog/, Facult/ o$ 3iolog/,
"omplutense Universit/, Kos2 Antonio 7ovais Av., 044
+adrid. E-mail' msacrist&,io.ucm.es
@ - 16
Antibiosis como principal mecanismo de accin de cepas de Bacillus subtilis en el biocontrol de
Podosphaera fusca.
Romero, D., Prez-Garca A., Cazorla F.M. y de Vicente A.
Universidad de +#laga, +#laga 06!1. e-mail' diegor&uma.es
@ - 003
La celulasa bacteriana CelC2 es crucial en el establecimiento de la simbiosis Rhizobium
leguminosarum bv. trifolii-Trifolium repens
lndice de autores
>V
Mateos Gonzlez, P., Rodrguez Bahena, M.H., Trujillo Toledo, M., Velzquez Prez, E. y
Martnez Molina, E.
*epartamento de +icro,iolog-a / 1en2tica. Universidad de
;alamanca. 3!! ;alamanca. ;@A.7. p$mg&usal.es
@ - 044
La viabilidad de los propgulos de Fusarium spp. en muestras de suelo desecadas: efecto del
tiempo de almacenamiento y del tipo de suelo
Rodrguez-Molina, M.C.1; Torres-Vila, L.M.2; Palo-Nez E.J.1
1"entro de .nvestigaci8n Finca d<a Rrdene. "onse:er-a de
.n$raestructuras / *esarrollo 5ecnol8gico. 614! 1uada:ira,
3ada:o%. 0;ervicio de ;anidad Vegetal. "onse:er-a de
Agricultura / +edio Am,iente. Avda. @ortugal s9n, 64
+2rida, 3ada:o%. E-mail'
carmen.rodrigue%&:untaextremadura.net
@ - 30(
Presencia de la actividad 1-aminociclopropano-1-carboxilato desaminasa en diversos aislados de
Lotus y Dorycnium spectabile
Donate Correa, J.; Prez Galdona, R. y Len Barrios, M.
*epartamento de +icro,iolog-a / 3iolog-a "elular. Facultad de
Farmacia. Universidad de <a <aguna. Avda. Astro$-sico Fco.
;#nc)e% s9n, 34!1. <a <aguna, 5eneri$e. :donate&ull.es
@ - 306
Diversidad de rizobios aislados de especies de Lotus endmicas de las slas Canarias.
Donate Correa, J.1; Prez Galdona, R.1; del Arco Aguilar, M.2; Garca Casanova, J.3 y Len
Barrios, M.1
1*epartamento de +icro,iolog-a / 3iolog-a "elular.
0*epartamento de 3iolog-a Vegetal >3ot#nica?. Facultad de
;#nc)e% s9n, 34!1. <a <aguna. 5eneri$e. 3;ervicio de .mpacto
Am,iental. Viceconse:er-a de +edio Am,iente del 1o,ierno de
"anarias. mileon,a&ull.es
@ - 366
Caracterizacin de rizobios aislados de la leguminosa endmica de las slas Canarias Dorycnium
spectabile.
Donate Correa, J.1; Prez Galdona, R.1; del Arco Aguilar, M.2; Garca Casanova, J.3 y Len
Barrios, M.1
1*epartamento de +icro,iolog-a / 3iolog-a "elular.
0*epartamento de 3iolog-a Vegetal >3ot#nica?. Facultad de
;#nc)e% s9n, 34!1. <a <aguna, EspaGa. 3;ervicio de .mpacto
Am,iental. Viceconse:er-a de +edio Am,iente. 1o,ierno de
"anarias. rpere%ga&ull.es
@ - 366
Anlisis gentico y protemico de genes controlados por reguladores de tipo Fur en la bacteria
endosimbitica de leguminosas Sinorhizobium meliloti
Brito, B.1, Prieto, R.1, mperial, J.2, Palacios, J.M.1, y Ruiz-Argeso, T.1
1<a,oratorio de +icro,iolog-a, E. 5. ;. .ngenieros Agr8nomos,
Universidad @olit2cnica de +adrid / 0". ;. .. ". "iudad
Universitaria s9n, 044 +adrid. ,elen.,rito&upm.es
+!oti$tolo,a
lndice de autores
>V1
= - 11
ntegradores de la bioenergtica de metabolismo y cambio de fase en protistas fotosintticos:
modelos para plantas
Valverde, F., Drake, R., Herrera, R. y Serrano, A.
.nstituto de 3ioDu-mica Vegetal / Fotos-ntesis, U;E-";.". Av.
Am2rico Vespucio 46. 4160-;evilla.
= - 3(
Fitoquelatinas en ciliados?: Aislamiento, clonacin, caracterizacin y anlisis de la expresin de
un gen que codifica una fitoquelatin-sintasa en Tetrahymena thermophila.
Amaro Torres, F., Martn-Gonzlez, A. y Gutirrez J.C.
*epartamento de +icro,iolog-a-.... Facultad de 3iolog-a. "9.
Kos2 Antonio 7ovais, 0. Universidad "omplutense >U"+?.
044 +adrid. E-mail' :uancar&,io.ucm.es
= - 134
Contribucin de ciliados de estaciones depuradoras de aguas residuales a la biofloculacin de
partculas
Arregui, L., Linares, M., Sanz, L. y Serrano, S.
*epartamento de +icro,iolog-a .... Facultad de 3iolog-a.
Universidad "omplutense de +adrid.
= - 161
Efectos de diferentes antibiticos en la microfauna de fangos activos
Lpez-Doval, J.C.1; Salvad, H.2
1*epartament dNEcologia, Universitat de 3arcelona Avda
*iagonal 64(, 404 3arcelona. :clope%doval&u,.edu.
0*epartament de 3iolog-a Animal >Unitat .nverte,rats?,
Universitat de 3arcelona, Avda *iagonal 64(, 404 3arcelona.
= - 3!
Respuestas de crecimiento en ciliados bactervoros de fangos activos al contenido C:N bacteriano
Prez-Uz, B., Cabanillas, B.; Lpez-Montero, N.; Guinea, A.
*pto. +icro,iolog-a .... Facultad "iencias 3iol8gicas. U"+.
+adrid. pere%u%&,io.ucm.es
= - 311
dentificacin de genes que codifican protenas del metabolismo de polifosfatos inorgnicos en
protistas fotosintticos
Albi-Rodrguez T. y Serrano A.
.nstituto de 3ioDu-mica Vegetal / Fotos-ntesis, ";."-
Universidad de ;evilla, 4160. ;evilla >EspaGa?.
aurelio&cica.es
Ta-onom,a9 >iloenia y Biodi"e!$idad
5 - 46
Descripcin de nuevas cepas halfilas moderadas productoras de exopolisacrido y con capacidad
desnitrificante.
Gonzlez-Domenech, C.M., Martnez-Checa, F., Quesada E., Del Moral, A., Bjar,V.
1rupo Exopolisac#ridos +icro,ianos >"V144?. *epartamento
de +icro,iolog-a. Facultad de Farmacia. Universidad de
1ranada. "ampus Universitario de "artu:a s9n 14!1. 1ranada.
cmgodo&correo.ugr.es
5 - 4!
Palaeossaccharomyces miocenensis: una nueva y extinta especie de levadura.
Veiga-Crespo, P., Poza, M., Blasco, L., Feijoo-Siota, L., Barros-Velzquez, J. y Villa, T.G.
lndice de autores
>V11
*pto. +icro,iolog-a / @arasitolog-a. Fac. Farmacia.
Universidad de ;antiago de "ompostela. E-mail'
veicres&usc.es
5 - 6
Fototrofa anoxignica aerobia de la microbiota asociada a la ascidia Cystodytes dellechiajei
Martnez-Garca, M. (1), Daz, M.(2), Ramos-Espl(2),Antn, J.(1)
>1?*epartamento de Fisiolog-a, 1en2tica / +icro,iolog-a,
Universidad de Alicante. E-mail' m.martine%&ua.es.
>0?*ivisi8n de 3iolog-a +arina, Universidad de Alicante.
5 - !4
Genotipo versus fenotipo en la descripcin de especies bacterianas: el caso de Pseudomonas
stutzeri y P. cloritidismutans.
Cladera, A.M.; Garca-Valds, E.; Lalucat, J.
hrea de +icro,iologia. Universitat de les .lles 3alears. "rta
Valldemossa, Sm !,(. !100 @alma de +allorca >.lles 3alears?.
vd,sacc4&ui,.es
5 - 40
GTG5-PCR, una herramienta para la diferenciacin de especies prximas en el gnero Vibrio.
Pascual, J.1,2, Cuesta, G.2,3, Macin, M.C.1,2, Garay, E.1,2,4, Pujalte, M.J.1,2
1.nstituto "avanilles de 3iodiversidad / 3iolog-a Evolutiva
>."3i3E?, 0*epartamento de +icro,iolog-a / Ecolog-a, /
4"olecci8n EspaGola de "ultivos 5ipo >"E"5?. Universitat de
ValFncia. "ampus de 3ur:assot, 461 ValFncia.
3*epartamento de 3iotecnolog-a-+icro,iolog-a. Universidad
@olit2cnica de Valencia. EspaGa. pasmar&alumni.uv.es
5 - 44
Genmica y filogenia de Salinibacter ruber
Valens-Vadell, M.1, Castresana, J.4, Pea, A.2, Amann, R.3, Antn, J.2, Rossell-Mora, R.A.1
1- .nstitut +editerrani dNEstudis AvanPats >";."-U.3?. "9
+iDuel +arDu2s 0, !16 Esporles. .lles 3alears
>vieamvv&ui,.es?. 0-*ivisi8n de +icro,iolog-a, *ep.
Fisiolog-a, 1en2tica / +icro,iolog-a, Universidad de Alicante,
34 Alicante. 3- +ax-@lancS-.nstitut $_r +arine
+iSro,iologie. "elsiusstr. 1. *-043(6 3remen. 4-*epartamento
de Fisiolog-a / 3iodiversidad +olecular. .nstituto de 3iolog-a
+olecular de 3arcelona, ";.". Kordi 1irona 14. 434
3arcelona
5 - 4!
Alfaproteobacterias marinas: nuevas aportaciones taxonmicas
Arahal D. R.1,2, Macin M. C.2,3, Pujalte M. J.2,3, Garay E.1,2,3
1"olecci8n EspaGola de "ultivos 5ipo >"E"5? 0*epartamento
de +icro,iolog-a / Ecolog-a 3.nstituto "avanilles de
3iodiversidad / 3iolog-a Evolutiva. Universitat de ValFncia.
"ampus de 3ur:assot. 461 ValFncia, ;pain. 5el' [34 66
3(44610. Fax' [34 66 3(4314!. e-mail' ara)al&uv.es
5 - 64
MCRO-MAR: Una base de datos para una representacin dinmica de la biodiversidad microbiana
marina
Pushker, R., DAuria, G., Alba-Casado, J.C. y Rodrguez-Valera,F.
lndice de autores
>V111
*ivisi8n de +icro,iolog-a, "ampus de ;an Kuan, Universidad
+iguel Hern#nde%, Apdo. 14, 3((. ;an Kuan, Alicante. E-
mail' :c.al,a&um).es
5 - 1!
Caracterizacin de bacterias heterotrficas implicadas en reciclado de nutrientes en la capa ftica
de tapetes microbianos
Villanueva, L., del Campo, J., Navarrete, A., Barbern, A., Demajo, S., Guerrero, R. y
Urmeneta, J.
*pto. de +icro,iolog-a, Facultad de 3iolog-a, Universidad de
3arcelona, Av. *iagonal 64(. 404 3arcelona. E-mail'
villanueva&u,.edu
5 - 113
Halopontus asiaticus gen. nov.,sp. nov., una nueva haloarquea aislada de un lago salino en
Mongolia nterior, China
Castillo A.M.1, Gutirrez M.C.1, Kamekura M. y Ventosa A.1
1*epartamento de +icro,iolog-a / @arasitolog-a, Facultad de
Farmacia, Universidad de ;evilla, 4110 ;evilla.
anacastillo&us.es. 07oda .nstitute o$ ;cienti$ic =esearc),
Kapan.
5 - 11(
Biodiversidad de microorganismos que nodulan leguminosas
Rivas R.
*epartamento de +icro,iolog-a / 1en2tica. Edi$icio
*epartamental de 3iolog-a. "ampus +iguel de Unamuno.
Universidad de ;alamanca. 3!!. ;alamanca. raul&XXXedu-
micro.usal.es
5 - 116
Aproximacin metagenmica al estudio de halofagos
Santos, F.1, Meyerdierks, A.2, Rossell-Mora, R.3, Amann, R.2 and Antn, J.1
1. *ivisi8n de +icro,iolog-a, *pto. Fisiolog-a, 1en2tica /
+icro,iolog-a, Universidad de Alicante, 34 Alicante
>Fernando.;antos&ua.es?. 0. +ax-@lancS-.nstitut $_r +arine
+iSro,iologie. "elsiusstr. 1. *-043(6 3remen. 3. .nstitut
+editerrani dNEstudis AvanPats >";."-U.3?. "9 +iDuel
+arDu2s 0, !16 Esporles. .lles 3alears
5 - 136
De la filogentica a la filogenmica: aplicacin a las g-Proteobacterias endosimbiticas de insectos
Comas, ., Moya,A., Gonzlez-Candelas, F.
.nstituto "avanilles de 3iodiversidad / 3iolog-a Evolutiva.
Universidad de Valencia. Apartado R$icial 004(. 46!1-
Valencia. andres.mo/a&uv.es
5 - 146
dentificacin mediante secuenciacin completa del gen 16S rDNA de cepas bacterianas
solubilizadoras de fosfato aisladas de la rizosfera de guisante (Pisum sativum) en dos suelos de
Francia.
Peix, A.1, Velzquez, E.2, Catroux, G.3 and Laguerre, G.3
1..nstituto de =ecursos 7aturales / Agro,iolog-a de ;alamanca
>.=7A-";."?. "9 "ordel de +erinas, 4-(0 3!4 ;alamanca.
email' alvarp&usal.es. 0.*epartamento de +icro,iolog-a /
1en2tica. Edi$icio *epartamental de 3iolog-a. <a,. 06.
lndice de autores
>1Y
Universidad de ;alamanca. 3!4 ;alamanca. 3.U+= 1006
.7=A-Universit2 de 3ourgogne i +icro,iologie et 12oc)imie
des ;ols j, .7=A, 1! =ue ;ull/, 3@ 46(1, 016( *i:on
"E*EU. France
5 - 16!
dentificacin de las especies del gnero Debaryomyces mediante secuenciacin
Martorell, P., Fernndez-Espinar, M.T. y Querol, A.
*epartamento de 3iotecnolog-a de los Alimentos, .nstituto de
AgroDu-mica / 5ecnolog-a de Alimentos >";."?, @.R. 3ox !3,
E-461 3ur:assot, ValFncia, EspaGa. pmartorell&iata.csic.es.
5 - 146
Alta variabilildad intraespecifica de los genes gyrAB y parCE en cepas clnicas de
Stenotrophomonas maltophilia.
Valdezate S.1, Cervera .1, Alvarez D.1, Vindel A.1, Saz Nieto J.A.1, Baquero F.2, Cantn R.2
1;ervicio de 3acteriolog-a. ".7.+. .nstituto de ;alud "arlos
..., +a:ada)onda and 0;ervicio de +icro,iolog-a. Hospital
=am8n / "a:al. +adrid. :asae%&isciii.es
5 - 03!
Caracterizacin de actinomicetos endofitos aislados de Pisum sativum
Carro Garca, L., MartnezMolina, E., Trujillo, M. E.
*epartamento de +icro,iolog-a / 1en2tica. "9 *octores de la
=eina ;97. 3!!;alamanca
5 - 036
Estudio de la diversidad de bacterias aisladas de agua de un lago subterrneo de Mallorca.
Garca-Fraile P., Velzquez E., Mateos P.F., Martnez-Molina E. y Rivas R.
*epartamento de +icro,iolog-a / 1en2tica +oleculares.
Universidad de ;alamanca Edi$icio *epartamental de 3iolog-a.
"ampus +iguel de Unamuno, 3!!. ;alamanca.
5 - 04
dentificacin de una cepa capaz de degradar alcanos aislada del lago Martel (Mallorca).
glesias-Garca O., Garca-Fraile P., Velzquez E., Mateos P.F., Martnez-Molina E. y Rivas R.

5 - 041
Caracterizacin de cepas de rhizobia de crecimiento lento aisladas a partir de ndulos efectivos de
Lupinus albus
lvarez, E.1, Gantois, .1, Gomis, V.1, Rivas, R.1, Len-Barrios, M.2, Willems, A.3, Mateos,
P.F.1, Martnez-Molina, E.1 y Velzquez, E.1
1. *epartamento de +icro,iolog-a / 1en2tica. Universidad de
;alamanca. ;alamanca. ;pain. 0. *epartamento de
+icro,iolog-a. Facultad de Farmacia. Universidad de la
<aguna. 5eneri$e. ;pain. 3. <a,orator/ o$ +icro,iolog/
>YE1V?, Facult/ o$ ;ciences, 1)ent Universit/,
<edegancSstraat 3(, 3-6 1ent, 3elgium. E-
mail'alvare%estela&)otmail.com
5 - 0!6
Comunidades microbianas en aguas de hemodilisis
Gomila M.1, Gil J.2, Gasc J.3, Lalucat J.1
1*epartamento de 3iolog-a e .+E*EA >";."-U.3?.
Universitat de les .lles 3alears. "ampus U.3, !100 @alma de
lndice de autores
>Y
+allorca. 0;ervei de +icro,iologia, Hospital Universitari ;on
*uretaH 3Unitat de 7e$rolog-a, Hospital ;on <lCt%erH @alma de
+allorca, EspaGa. E-mail' marga.gomila&ui,.es
5 - 06
Transferencia horizontal y diversidad intraespecfica de Salinibacter ruber
Pea, A.1, Amman, R.2, Rossell-Mora, R.3, y Antn, J.1
1*epartamento de Fisiolog-a, 1en2tica / +icro,iolog-a.
*ivisi8n de +icro,iolog-a. Universidad de Alicante.
>Arantxa.@en/a&ua.es?. 0+ax-@lancS-.nstitut $_r +arine
+iSro,iologie. "elsiusstr. 1. *-043(6. 3remen. 3.nstituto
+editerr#neo de Estudios Avan%ados >";."-U.3?. Esporles,
.slas 3aleares.
5 - 060
Deteccin de un posible pseudogen en el gen cadA en Vibrio cholerae
Farfn, M., Miana-Galbis, D., Fust, M.C. y Lorn, J.G.
*epartament de +icro,iologia i @arasitologia ;anitCries,
Facultat de FarmCcia, Universitat de 3arcelona, Avda. Koan
UU... s9n, 404 3arcelona, e-mail' m$ar$an&u,.edu
5 - 31
Estudio de la variabilidad fenotpica de cepas de campo de Haemophilus parasuis.
Cerd-Cullar M., Aragn V.
"entre de =ecerca en ;anitat Animal >"=e;A?. "ampus de
3ellaterra-UA3. 4163-"erdan/ola del VallFs. 3arcelona.
marta.cerda&cresa.ua,.es
5 - 310
Estudio de cepas de campo de Haemophilus parasuis mediante mutilocus sequence typing.
Olvera A., Aragn V.
"entre de =ecerca en ;anitat Animal >"=e;A?, 4163-
"erdan/ola del VallFs >3arcelona? ;@A.7.
alexandre.olvera&cresa.ua,.es
5 - 316
Halorubrum ezzemoulense sp. nov., una nueva arquea halfila extrema aislada de la laguna
Ezzemoul, Argelia.
Kharroub, K.1,2, Monteoliva-Snchez, M.1, Quesada, T.1, Fuentes S.1, Boulahrouf, A.2,
Ramos-Cormenzana, A.1
1. *epartamento de +icro,iolog-a. Facultad de Farmacia.
Universidad de 1ranada. EspaGa. 0. *7A5AA, Facult2 des
;ciences. Universit2 "onstantine. Algeria. mmonteol&ugr.es
5 - 3!
Estudio de la evolucin de la microbiota fecal en nios durante el primer ao de vida.
Ferrer-Cebrin R.1, Vieites J.M.2, Monteoliva-Snchez M.1, Gil A.2, Ramos-Cormenzana A.1
*po. +icro,iolog-a1. *po. 3ioDu-mica / 3iolog-a +olecular0.
Facultad de Farmacia. Universidad de 1ranada. "ampus
Universitario de "artu:a s9n. ".@.14!1. r$c16!6&)otmail.com
5 - 344
Gracilibacillus orientalis sp. nov., una nueva especie halfila moderada aislada en Mongolia nterior,
China
Carrasco, .J., Mrquez, M.C. y Ventosa, A.
lndice de autores
>Y1
Farmacia, Universidad de ;evilla, 4110 ;evilla. E-mail'
i:imene%&us.es
4i!olo,a
V - (
Desarrollo y evaluacin de tcnicas de deteccin in situ del virus de linfocistis en cultivos celulares.
Ferro P., Cano ., Garca-Rosado E., Alonso M.C., Castro D. y Borrego J.J.
Universidad de +#laga, "ampus Universitario 5eatinos, s9n.
06!1 +#laga. ::,orrego&uma.es
V - 4(
Deteccin del virus de la hepatitis E en muestras pareadas de suero y heces de cerdos de la
Comunidad Valenciana
Fernndez-Barredo S., Galiana C., Garca A., Vega S., Gmez M.T., Prez-Gracia M.T.
*epartamento de Atenci8n ;anitaria, ;alud @M,lica / ;anidad
Animal. Facultad de "iencias Experimentales / de la ;alud.
Universidad "ardenal Herrera-"EU. +oncada, Valencia.
teresa&uc).ceu.es
V A 046
Lisinas de fagos: una nueva alternativa antibitica
Lpez, R., Garca, P. y Garca, E.
.nvestigaciones 3iol8gicas, ";.", +adrid. E-
mail'ru,en&ci,.csic.es
V - 0!(
Deteccin de la infeccin con el virus Maedi Visna por ELSA y PCR en ganado ovino estabulado y
sometido a inseminacin artificial
Reina R1, Glaria 1, Lucas N1, Cianca S1, de Andrs X1, Crespo H1, Ganadero T2, Lujn L3,
Biescas E3, Prez MM3, Berriatua E4, Amorena B1, de Andrs D1
1.nstituto de Agro,iotecnolog-a, ";."-U@7A +utilva 3a:a,
7avarraH 0Villava, 7avarraH 3 Facultad de Veterinaria,
Universidad de Tarago%a, Tarago%aH 4.nstituto Vasco de
.nvestigaci8n / *esarrollo Agrario >7E.\E=?. ;anidad Animal,
*erio, Vi%ca/aH ramses.reina&unavarra.es
V - 336
Hepatitis A: la variabilidad de un virus invariable.
Pint, R.M., Aragons, L., Costafreda, M.., Snchez, G. y Bosch A.
1rupo de Virus Ent2ricos, *epartamento de +icro,iolog-a,
Facultad de 3iolog-a, Universidad de 3arcelona. *iagonal, 64(,
404 3arcelona. E-mail' rpinto&u,.edu
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