MANUAL DE MICROBIOLOGA

PRACTICA 8 Medios de cultivo y tcnicas de siembra Introduccin Las bacterias deben ser cultivadas en los medios correspondientes de laboratorio para caracterizar su crecimiento, hacer su identificacin y determinar sus actividades metablicas Las t!cnicas de aislamiento, permiten la obtencin de microor"anismos a partir de muestras comple#as $suelo, a"ua, alimentos, etc % en las &ue hay "ran diversidad microbiana, as' como comprobar la pureza de los cultivos obtenidos Los cultivos puros est( formados por un solo tipo de microor"anismo) y son indispensables para conocer las caracter'sticas morfol"icas, propiedades de tincin, actividad bio&u'mica, pato"enicidad, sensibilidad a antibiticos e identificacin de las especies microbianas Objetivos Conocer las diferentes t!cnicas de aislamiento en medios de cultivo slido para la obtencin de cultivos puros de bacterias Conocer los medios de cultivo de uso "eneral, diferenciales y selectivos

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Materiales de laboratorio por equipo 0 5echeros * Asa bacteriol"ica en punta * Asa bacteriol"ica en aro 2 tubos de caldo nutritivo 2 Tubo con a"ar nutritivo 2 Ca#as de Petri con a"ar nutritivo * ca#as de Petri con a"ar 6TP * Ca#as de Petri con +57 Actividad de la practica T!cnica de estr'a cruzada

Material del equipo Cinta adhesiva $mas&uin% Cerillos * Plumn indeleble o l(piz "raso 1ranela Colores Cloro

* +n la parte posterior y e,terior de la ca#a, dividirla en - cuadrantes Tomar una muestra con el asa previamente flameada y fr'a, inocular la muestra haciendo -./ estr'as simples muy #untas de lado a lado sobre el primer cuadrante 0 1lamear el asa de inoculacin y hacer "irara la ca#a Petri un cuarto de vuelta Abrir nuevamente la ca#a y enfriar el asa de siembra tocando la superficie del medio le#os de la zona de estr'as reci!n hechas 2 Rozar con el asa una vez la superficie del con#unto ori"inal de estr'as y hacer un se"undo "rupo de estr'as en el se"undo cuadrante, esta vez mas separadas y en una sola direccin - Repetir el paso 0 y 2 para el tercer cuadrante $enfriar en el mismo lu"ar &ue el anterior% y para el cuarto cuadrante no se flamear( el asa, las estr'as ser(n m(s separadas o abiertas

3iembra en tubos * 3embrar en los tubos de a"ar nutritivo $inclinados%, con el asa previamente esterilizada, realizando una pe&ue4a estr'a desde aba#o hasta el pico,

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finalizando con una picadura en la base y en los tubos de a"ar nutritivo en forma recta por picadura 2. Incubar los tubos a 2/ C durante 0- hrs 2 Los tubos con caldo nutritivo se de#aran en a"itacin 3iembra de ca#as de Petri con medios diferenciales y selectivos . * 8ividir en tres partes, una ca#a de Petri con +57 y a"ar 6TP, sembrar por estr'a simple 2. Incubar a 2/ C en forma invertida durante 0- hrs

Resultados Recopilar la informacin de la caracterizacin colonial de cada cepa en el cuadro de resultados. Bacteria1 Bacteria 2 3in inocular $2%

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Aislamiento estr'a $a"ar nutritivo%

por cruzada

1orma9 Color Tama4o$mm% 7orde 3uperficie Aspecto +levacin Luz transmitida Luz refle#ada Consistencia 5edio +57 5edio 6TP

3iembra en medios selectivos diferenciales y 2 1 3 2 1 3

7acteria * 1orma Color Tama4o Tama4o$mm% 7orde 3uperficie Aspecto +levacin Luz transmitida

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Luz refle#ada Consistencia 7acteria 0 1orma Color Tama4o Tama4o$mm% 7orde 3uperficie Aspecto +levacin Luz transmitida Luz refle#ada Consistencia

Nota9 la descripcin colonial puede hacerse considerando los si"uientes criterios Forma: circular, irre"ular, filamentosa o rizoide Borde: entero, lobulado, aserrado Super icie: lisa o ru"osa !specto: h:meda, seca, butirosa "levacin: conve,a, de plana, hundida Tubos inclinados a"ar nutritivo9 #u$ transmitida: transl:cida, opaca #u$ re lejada: brillante, mate %onsistencia: dura, blanda, mucoide

Bacteria1

Bacteria 2

3in inocular

Crecimiento9 arborescente, filiforme, rizoide, disperso, puntiforme Color Bacteria1 Bacteria 2 3in inocular Tubos de caldo nutritivo

Crecimiento9 superficie como pel'cula, como sedimento, turbidez en todo el

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tubo Color Bacteria1 Tubos rectos de a"ar nutritivo Bacteria 2 3in inocular

Crecimiento9 en forma de pel'cula superficial, a lo lar"o de la picadura, solo en el fondo Color %uestionario * ;<ue es el a"ar y de donde se obtiene=, ;cu(les son los

nutrimentos &ue proporciona a los microor"anismos=

;Cu(l es la composicin &u'mica de los medios +57, 6TP, 55=

;cu(les son los componentes o propiedades responsables de su

funcin como medios selectivos o diferenciales=

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;Por &u! el a"ar nutritivo es un medio de uso "eneral para el

cultivo de bacteria= Propon"a al"unas sustancias &ue se le a"re"ar'an para hacerlo selectivo para bacterias >ram ne"ativas=

Fic&as catolo'r( icas del material biblio'r( ico su'erido que se encuentran en la biblioteca de la )M!* 1icha ?o 0@A8 CLA3I1ICACIB? /@* A280C2 5/D@ I37?9 T'tulo9 5anual de 5edios de Cultivos E Publicacin patrocinada por 5+RC6 Autor9 +ditorial9 Alemania9 + 5+RC6, *CCD 8escripcin9 2// p T+5A39 * 5ICRB7IBLB>IA . CFLTIGB3 . 5A?FAL+3 H 0 5ICRB7IBLB>IA I?8F3TRIAL . I?8F3TRIA <FI5ICB 1AR5AC+FTICA . I?G+3TI>ACIB? I 8+3ARRBLLB H 2 5+8IB3 8+ CFLTIGB >RA?FLA8B3 . PR+PARACIB? . CB?3+RGACIB? ?otas9 Incluye referencias biblio"r(ficas e 'ndice 1icha ?o *-*A CLA3I1ICACIB? A*A D*- 5/D@p I37?9 CA8.@*/@.*D.D T'tulo9 Pruebas bio&u'micas para la identificacin de bacterias de importancia cl'nica E Jean 1 5ac 1addin, Irma Lorenzo trad Autor9 5ac 1addin, Jean 1 +ditorial9 5!,ico 9 5!dica Panam!ricana, *CCD 8escripcin9 2D* p T+5A39 * 7ACT+RIBLB>IA . LA7BRATBRIB, R+ACTIGB3 8+ . GIRF3 H 0 5ICRBBR>A?I35B3 . B73+RGACIB? . 5A?FAL H 2 7ACT+RIA3 . I8+?TI1ICACIB? . LA7BRATBRIB

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?otas9 1otocopia de ori"inal