Curso: Zootecnia Prof. Dr.

Jeandre Augusto dos Santos Jaques

Polmeros constitudos pelo mesmo conjunto de 20 aminocidos. Instrumentos atravs dos quais a informao gentica expressa. Ocorrem em todas as clulas. Ampla variedade (milhares de protenas em uma nica clula). Diversas funes:
Protenas de membrana (receptores, enzimas, canais de transporte), hormnios, anticorpos, transportadores solveis, fibras musculares, neurotoxinas, enzimas, etc.

1. 2. 3. 4.

Aminocidos
Peptdeos e protenas Desnaturao de protenas Funes das protenas (parte I)

Molcula orgnica que contm um grupo amina e um grupo carboxila ligados ao mesmo tomo de carbono (): Conjunto de 20 aminocidos como diferem um do outro?

Os aminocidos comuns em protenas so designados com abreviaes de trs letras e smbolos de uma letra.

Todos os aminocidos, exceto a glicina:

Carbono est ligado a quatro grupos diferentes:
Grupo carboxil; Grupo amino; Grupo R; Um tomo de H.

O tomo de carbono um centro quiral:

os 4 grupos diferentes podem ocupar 2 arranjos espaciais nicos (2 possveis estereoismeros).

Enantimeros: imagens especulares.

Configuraes absolutas de acares e aminocidos so especificadas pelo sistema D e L. Base: configurao absoluta do gliceraldedo. Estereoismeros com uma configurao relacionada ao L-gliceraldedo so designados L. A configurao absoluta no est necessariamente associada s propriedades pticas de uma molcula.

Aminocidos no essenciais

Enquanto a maior parte das bactrias pode sintetizar todos os 20, os mamferos sintetizam apenas cerca de metade deles geralmente aqueles com vias de sntese mais simples. Esses so os aminocidos no essenciais, no necessrios na dieta.

Aminocidos essenciais

Os aminocidos que devem ser obtidos atravs da dieta so chamados aminocidos essenciais. Maior complexidade para ser sintetizados. Aminocidos aromticos.
Metionina cistena Treonina Lisina Isoleucina Leucina Valina Histidina Fenilalanina Tirosina Triptofano Arginina (crianas)

Aminocidos de cadeia ramificada.

Os aminocidos podem ser agrupados em 5 classes principais com base nas propriedades de seus grupos R:
Grupos R apolares, alifticos;
Grupos R aromticos; Grupos R polares, no carregados; Grupos R carregados positivamente (bsicos); Grupos R carregados negativamente (cidos).

i. Grupos R apolares, alifticos

Os grupos R so apolares e hidrofbicos.

Tendem a se aglomerar entre si nas protenas.

flex. estrutural

Tioter apolar

ii. Grupos R aromticos

Relativamente apolares.

Grupo OH ponte de hidrognio grupo funcional.

iii. Grupos R polares, no carregados

So mais solveis em gua - possuem grupos funcionais capazes de formar ligaes de H H2O.

Hidroxil

Hidroxil

Tiol

Amida

Amida

iv. Grupos R carregados positivamente (bsicos)

Os mais hidroflicos so os carregados.

v. Grupos R negativamente carregados (cidos)

Os mais hidroflicos so os carregados.

Ambos com um segundo grupo carboxil.

Os grupos amino e carboxil de aminocidos, alm dos grupos R ionizveis, funcionam como bases e cidos fracos.

Quando um aminocido sem um grupo R ionizvel dissolvido em gua a pH neutro, ele passa a existir em soluo como um on dipolar ou zwitterion (do alemo on hbrido), o qual pode atuar tanto como um cido quanto uma base.

Zwitterion

Natureza dual (cido-base): anfteras.

Anflitos de eletrlitos anfotricos.

So polmeros de aminocidos.
Cada resduo de aminocido unido ao seu vizinho por um tipo especfico de ligao covalente. Resduo de aminocido?

Duas molculas de aminocidos podem ser ligadas covalentemente atravs da formao de uma ligao amdica, denominada ligao peptdica, formando um dipeptdeo. Formada pela remoo dos elementos da gua (desidratao) de um grupo -carboxil de um aminocido e o grupo -amino de outro:

2 resduos de aminocidos

Oligopeptdeo: poucos aminocidos.

Polipeptdeo: muitos aminocidos (massa molecular at 10.000).

unidos

Protena: pode possuir milhares de resduos de aminocidos.

Pentapeptdeo: Ser-Gly-Tyr-Ala-Leu

Protenas simples: so constitudas apenas por aminocidos.

Protenas conjugadas: contm grupos qumicos associados permanentemente aos seus aminocidos e a sua regio no aminoacdica denominada grupo prosttico.

Mioglobina e grupo heme

As protenas conjugadas so classificadas com base na natureza qumica de seus grupos prostticos:
Lipoprotenas contm lipdeos

Glicoprotenas contm grupos sacardicos

Metaloprotenas contm um metal especfico

Normalmente o grupo prosttico exerce um papel importante na funo biolgica da protena.

Diferenas estruturais principais determinantes da funo das protenas.

Protenas nativas conformao funcional. Quatro nveis de estrutura:
Estrutura primria.

Estrutura secundria.
Estrutura terciria. Estrutura quaternria.

Estabilidade tendncia conformao nativa.

em

manter

As interaes qumicas que medeiam estes efeitos incluem ligaes covalentes e no covalentes (interaes fracas). Covalentes: ligaes dissulfeto

No covalentes:
Interaes inicas. Interaes hidrofbicas. Pontes de hidrognio.

Ligaes covalentes
Compartilhamento de eltrons; Fortes.

Ligaes no-covalentes
Interaes - geralmente eletrostticas (+ e -); Individualmente fracas facilmente rompidas; Efeito cumulativo - numerosas; Estabilizam macromolculas supramoleculares; e estruturas

Rapidamente formadas e rompidas flexibilidade.

Tipo de ligao Covalente No-covalente Interaes inicas Pontes de hidrognio Interaes hidrofbicas Van der Waals

Energia de dissociao de ligao (kJ/mol) >210 4-80 12-30 3-12 0,3-9

Os tomos envolvidos na ligao peptdica so planares ressonncia/compartilhamento de parcial de eltrons entre o oxignio carbonlico e o nitrognio da amida.

Ligaes peptdicas C-N no podem girar livremente, por causa de seu carter parcial de ligao dupla. Rotao: N-C e C-C.

Cadeia polipeptdica: uma srie de planos rgidos, com planos consecutivos compartilhando um ponto comum de rotao no C.

a sequncia de ligaes covalentes.

aminocidos

unidos

por

Determina como a protena se enovela em uma estrutura tridimensional nica, o que determina a sua funo. Muitas doenas genticas humanas tm sido associadas produo de protenas defeituosas (ex. Distrofia muscular de Duchenne). Se a estrutura primria alterada, a funo da protena tambm pode ser modificada.

Pequenos padres de organizao tridimensional, estabilizados por ligaes fracas (interaes).

Alguns tipos de estrutura secundria ocorrem extensamente em protenas:
Hlices Conformaes Volta

Quando um padro regular no observado, a estrutura secundria chamada de indefinida.

Hlices

Arranjo simples estrutura helicoidal.

Os grupos R dos resduos de aminocidos se projetam para fora do esqueleto helicoidal. Em todas as protenas, a toro da hlice para o lado direito. Cerca de de todos os resduos de aminocidos das protenas encontrado em hlices . Se formam mais facilmente, pois a hlice otimiza as ligaes de hidrognio internas estabilidade.

Fatores que afetam a estabilidade da hlice

Interaes entre a cadeia lateral de um aminocido e a cadeia lateral do terceiro/quarto resduo adiante.
Pares inicos: carregados + vs. Interao hidrofbica: aromticos

Cargas parcialmente positivas e negativas

do dipolo da hlice ocorrem nos grupos amino e carbonil prximos s extremidades aminocidos carregados apresentam interaes estabilizantes. Sistema instvel aminocido carregado positivamente na extremidade aminoterminal.

Conformaes (ou folhas )

Cadeia polipeptdica zique-zague.

disposta em forma de

As ligaes de hidrognio so formadas entre segmentos adjacentes da cadeia polipeptdica. Os grupos R de resduos de aminocidos adjacentes se projetam em direes opostas.

As cadeias polipeptdicas adjacentes podem ser tanto paralelas quanto antiparalelas.

Orientao antiparalela

Voltas

Regies onde a cadeia polipeptdica inverte o seu sentido.

Ligam estruturas sucessivas de hlices e conformaes . Conectam as extremidades de dois segmentos adjacentes de uma folha antiparalela. A estrutura uma volta de 180 que envolve 4 resduos de aminocidos.

Os resduos de glicina e prolina frequentemente ocorrem em voltas .

Glicina resduo pequeno e flexvel. Prolina sua estrutura rgida em anel contribui para formao da volta .

Arranjo tridimensional total de todos os tomos de uma protena, mantido por:

Ligaes no covalentes: interaes fracas.

Ligaes covalentes: pontes dissulfeto.

Podem ser classificadas em:

Protenas fibrosas. Protenas globulares.

Protenas fibrosas

Adaptadas s funes estruturais. Em geral formadas por um nico tipo de estrutura secundria que se repete.

Todas insolveis hidrofbicos.

em

gua

aminocidos
e

Funes: suporte, forma, proteo, fora flexibilidade s estruturas nas quais ocorrem. Exemplos: -queratina e colgeno.

Protenas fibrosas / -queratina

Encontrada em mamferos em cabelos, plos, unhas, garras, penas, chifres, cascos, camada externa da pele.
Sentido horrio Supertoro + fora Sentido anti-horrio

Protenas fibrosas / colgeno

Resistncia e flexibilidade.
Tendes, cartilagens, matriz orgnica dos ossos, crnea dos olhos, periodonto, parede dos vasos sanguneos. Estrutura terciria (a/b): hlice no sentido anti-horrio, com 3 resduos de aminocido por volta. Estrutura quaternria (c): supertoro de 3 polmeros, sentido horrio. Geralmente Gly-X-Y, onde

X = Pro
Y = 4-Hyp

Protenas globulares

Forma mais compacta do que a observada pra as protenas fibrosas. Normalmente contm estruturas secundrias. diversos tipos de

Cadeias laterais hidrofbicas orientadas para o interior. A macromolcula se torna solvel em gua. Mltiplas funes: protenas reguladoras, enzimas, protenas de transporte (cidos graxos, gases), protenas motoras, imunoglobulinas.

Protenas globulares / mioglobina

Protena ligadora de O2 clulas musculares.

Estoque e facilitao da difuso de O2.

153 aminocidos e um grupo prosttico heme.

Cadeias laterais estveis interaes hidrofbicas.

Grupo heme mantido em uma fenda pouco exposta (preservar o estado Fe2+, que se liga ao O2)

Mioglobina Cadeias laterais

Algumas protenas contm duas ou mais cadeias polipeptdicas/domnios/subunidades, que podem ser idnticas ou diferentes. Estrutura quaternria? o arranjo destas subunidades proteicas (estruturas tercirias) em complexos tridimensionais.

Perda da estrutura tridimensional, suficiente para causar a perda de funo. Agentes desnaturantes: calor, pH extremo, solventes orgnicos, ureia e detergentes.

Os agentes desnaturantes desestabilizam as ligaes fracas.

Ligaes covalentes ntegras. (peptdicas) permanecem

Desnaturao de algumas protenas reversvel quando retornam s condies nas quais as estruturas nativas so estveis (renaturao).

Informao armazenada e expressa. Mecanismos para evitar erros na transmisso da informao gentica durante:
Replicao;
Transcrio; Traduo em protena.
Sequncia de aminocidos.
Estrutura tridimensional.

Apesar de todas as protenas terem o potencial de se dobrar em sua estrutura nativa, muitas necessitam de assistncia para atingir a configurao terciria correta;
Chaperonas moleculares: famlia de protenas que interagem com polipeptdeos parcialmente dobrados ou dobrados de forma incorreta. Hidrlise do ATP desenovelamento. Exemplos: energia para o

Protenas Hsp (heat shock proteins)

Chaperoninas

ou mais de todos os polipeptdeos sintetizados destrudo por no se dobrar corretamente. Os erros de dobramento podem causar ou contribuir para o desenvolvimento de doenas graves:
Doena de Alzheimer; Doena de Parkinson; Fibrose cstica. Doena da vaca louca Scrapie em ovelhas Encefalopatia espongiforme

Doena da vaca louca Scrapie em ovelhas Encefalopatia espongiforme

Agente causador Pron (PrP)

Prons: glicoprotenas da membrana celular (tecido nervoso).

Dobramento incorreto: PrPsc

A forma anormal pode converter a forma normal anormal Alterao propagada no tecido nervoso Contaminao interespcie Forma placas insolveis

Ovelhas vacas humanos

PrP -hlice

PrPsc folha-

As funes de muitas protenas envolvem a ligao reversvel com ligantes; Um ligante interage com uma regio da protena chamada de stio de ligao, que complementar a ele em tamanho, forma, carga e carter hidroflico ou hidrofbico. A adaptao estrutural que ocorre entre protena e ligante chamada de encaixe induzido.

As interaes entre protenas e ligantes podem ser reguladas, geralmente por meio de interaes especficas com um ou mais ligantes adicionais, que podem causar mudanas conformacionais na protena que afetam a interao com o primeiro ligante. As enzimas representam um caso especial de funo protica. Elas se ligam e transformam quimicamente molculas (catalisam reaes). Ligantes substratos.

Stio de ligao stio cataltico.

Funo Reserva (mioglobina).

Transporte (hemoglobina)

O O2 se liga a um on de ferro incorporado em um grupo prosttico chamado heme.

i. Sntese das porfirinas e do grupo heme

ii. Mioglobina iii. Hemoglobina

i. Sntese das porfirinas e do grupo heme

Porfirinas Molculas orgnicas com uma estrutura geral com 4 anis pirrlicos. Pode acomodar um on metlico em seu centro. Exs.: grupo heme (Fe2+), clorofila (Mg2+), catalase, citocromos. Defeitos na biossntese de porfirinas podem levar ao acmulo de intermedirios da via porfirias.

Grupo heme Consiste em uma complexa estrutura orgnica em anel, a protoporfirina IX, qual est ligado um nico tomo de ferro no estado ferroso (Fe2+).

i. Sntese das porfirinas e do grupo heme

(glicina + succinil-CoA)

Porfirinas

Grupo heme (Fe-protoporfirina IX) N N N N

O Fe2+ possui 6 stios de coordenao

ii. Mioglobina

Exemplo clssico de protena globular. Primeira protena a ter a sua estrutura terciria descrita pela cristalografia por raios X. 153 resduos de aminocidos. Grupo prosttico: hidrofbico. heme, em um bolso

2 resduos polares de histidina no interior da molcula interaes com o grupo heme e com a ligao ao O2. Relativamente insensvel a pequenas alteraes na [O2] dissolvido eficaz para o armazenamento no msculo.

Grupo heme 2 resduos de histidinas

Mioglobina

iii. Hemoglobina (Hb)

Exemplo de estrutura quaternria (tetrmero) 2 subunidades (141 resduos de aa) 2 subunidades (146 resduos de aa) Grupo prosttico: heme, em um bolso hidrofbico.

iii. Hemoglobina (Hb)

mioglobina (153 resduos de aa).

iii. Hemoglobina (Hb) Liga 4 molculas de O2 A ligao de cada molcula Hb apresenta cooperatividade positiva (protena alostrica).
Curva hiperblica Mioglobina.

Curva sigmide Hemoglobina.

A ligao da primeira molcula de O2 facilita a ligao da segunda, que facilita a ligao da terceira, que ento, facilita a ligao da quarta.

iii. Hemoglobina (Hb)

Transio de um estado de baixa afinidade (o estado T) para um de alta afinidade (o estado R) medida que mais molculas de O2 vo sendo ligadas. Qual o problema de uma protena que liga o oxignio com alta/baixa afinidade?
Alta: liga eficientemente o O2 nos pulmes, mas no o libera com eficincia nos tecidos. Baixa: libera com eficincia nos tecidos, no entanto, no capta com eficincia nos pulmes.

iii. Hemoglobina (Hb) e o efeito Bohr

A Hb tambm transporta H+ e CO2, dois produtos finais da respirao celular, dos tecidos para os pulmes e rins. A ligao do H+ e do CO2 tem uma relao inversa com a ligao do oxignio. O efeito da [H+] chamado de efeito Bohr. [H+] causa da afinidade da Hb pelo O2.

[H+] ausa da afinidade da Hb pelo O2.

iii. Hemoglobina (Hb) e o efeito Bohr

Efeito do pH sobre a ligao do O2 Hb

iii. Resumo do efeito Bohr

Pulmes Maior pH que no tecido metabolicamente ativo Hemoglobina libera H+ Msculo metabolicamente ativo Menor pH devido produo de H+ Hemoglobina liga-se ao H+

Hemoglobina liga-se ao O2 Hemoglobina libera O2

iii. A ligao do O2 com a Hb regulada pelo 2,3bifosfoglicerato

A ligao eletrosttica do 2,3-BFG a afinidade da Hb pelo O2 facilita a liberao nos tecidos. 1,3-BFG
(gliclise) Bifosfoglicerato mutase (BFGM)

2,3-BFG
(inibidor alostrico da Hb)

Excesso de 2,3-BFG eritrcito:

2,3-BFG

Fosfatase

3-fosfoglicerato
(gliclise)

Capaz de fazer a distino entre o prprio e o no prprio e destruir o que for identificado como no prprio. Eliminao de vrus, bactrias, protozorios, etc. A resposta imunolgica consiste em 2 sistemas:
Sistema imunolgico humoral
Infeco bacteriana, viral, extracelular.

Sistema imunolgico celular

Destruio de clulas hospedeiras infectadas.

Tipo celular Macrfagos Linfcitos B (clulas B) Linfcitos T (clulas T) Clulas T citotxicas (Tc)

Funo Ingerem por fagocitose partculas grandes clulas e

Produzem e secretam anticorpos Interagem com clulas hospedeiras infectadas por meio de receptores na superfcie das clulas T (TCR). Interagem com macrfagos e secretam citocinas (interleucinas) que estimulam a proliferao das clulas Tc, TH e B.

Clulas T auxiliares (TH)

Imunoglobulinas

No centro da resposta imunolgica humoral esto protenas solveis chamadas de anticorpos ou imunoglobulinas (Ig). As Ig se ligam a bactrias, vrus, molculas estranhas e as conduzem para a destruio.

Produzidas por linfcitos B 20% das protenas sanguneas.

Cada protena de reconhecimento do sistema imune (TCR, Ig) se liga especificamente a uma determinada estrutura qumica, distinguindo-a de todas as outras.

Imunoglobulinas

Antgeno
Molcula ou patgeno capaz de induzir uma resposta imunolgica.

Eptopo ou determinante antignico

Estrutura molecular especfica dentro do antgeno, onde as Ig ou TCR se ligam.

Imunoglobulinas

Os humanos possuem cinco classes de imunoglobulinas, cada uma com funes biolgicas distintas. A IgG a classe mais abundante, sendo uma protena em formato de Y com duas cadeias pesadas e duas cadeias leves. Os domnios prximos da extremidade superior do Y so hipervariveis dentro da vasta populao das IgGs e formam dois stios de ligao ao antgeno. A interao com o eptopo frequentemente envolve mudanas na conformao da IgG, o encaixe induzido.

Imunoglobulinas

Imunoglobulinas

Imunoglobulinas vs. antgeno

Reconhecimento e fagocitose

Tcnicas analticas

A reao especfica de um anticorpo com o seu antgeno a base de vrias tcnicas que identificam e quantificam uma protena especfica em uma amostra.

Representao esquemtica do mtodo geral:

Tcnicas analticas
ELISA (Enzyme Linked ImmunoSorbant Assay)

Exemplo: ELISA para testar a presena de anticorpos anti HSV (Herpes simplex virus) em amostras de sangue.
Poos cobertos com o antgeno (HSV).

IgG do sangue (anticorpo primrio) liga-se ao antgeno.

Anticorpo secundrio conjugado enzima. Ensaio enzimtico:

+ cor + anticorpos anti-HSV

Tcnicas analticas
Immunoblot (Western blot)
1. Preparo/extrao de protena da amostra.

2. Aplicao no gel e eletroforese para separao das protenas.

Tcnicas analticas
Immunoblot (Western blot)
3. Eletroforese transferncia para uma membrana.

Tcnicas analticas
Immunoblot (Western blot)
4. Deteco atravs do immunoblot:
Anticorpo primrio (IgG) liga-se protena de interesse.
Anticorpo secundrio (conjugado enzima). Ensaio enzimtico para revelao.

Membrana ps-transferncia:

Membrana revelada:

A contrao muscular resulta de interaes entre a miosina e a actina, acopladas hidrlise do ATP pela miosina. Actina + miosina > 80% da massa proteica do msculo.

Miosina

1sequncia polipeptdica fibrosa e 1 globular. Seis subunidades. Domnio globular: hidrlise do ATP para a contrao.

Miosina

Nas clulas musculares, as molculas de miosina se agregam:

Unidade contrtil: estrutura em forma de basto.

Actina

Segunda principal protena muscular. Actina G (globular/monomrica) e F (filamentosa). Liga e hidrolisa ATP: polimerizao.

Msculo esqueltico

1 fibra = 1 clula (multinucleada). 1 fibra 1000 miofibrilas Miofibrilas: filamentos finos e grossos regularmente organizados e complexados com outras protenas.

Contrao do msculo esqueltico

Deslizamento dos filamentos grossos sobre os finos

Perpendicular. ncora para fixao dos filamentos finos. Protenas: -actinina desmina vimentina

Linha M

Linha M Protenas: paramiosina protena C protena M

Mecanismo molecular da contrao muscular

O Ca2+ se liga troponina para iniciar a contrao

Impulso nervoso
influxo/liberao de Ca2+, ligao troponina ...

Enzimas

Miosina ATPase quebra (hidrlise) do ATP em ADP+Pi. No somente uma protena de ligao actina, mas tambm uma enzima. SERCA (sarco/endoplasmic reticulum Ca2+-ATPase). PMCA (plasma membrane Ca2+-ATPase).

A SEGUIR...