Investigacin y Amazona 2011; 1(2): 48- 52

ISSN 2223-8492

CUANTIFICACIN DE POLIFENOLES TOTALES Y ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE EN HOJAS, CORTEZA, FLORES Y FRUTO DE DOS VARIEDADES DE GUAYABA (Psidium guajava L.)
Elizabeth Ordoez Gmez,1 Aurelia Len Arvalo,1 Darlyn Retegui Das1 y Manuel Sandoval Chacn2
Recepcionado: 13 de junio 2012. Aceptado: 20 de agosto 2012.

Resumen
En la Amazona peruana la guayaba es un fruto nativo y no tiene plantaciones establecidas, el agricultor deja a la guayaba que crezca en los linderos ya que su madera es cotizada para utilizar como lea (combustible), las hojas son muy utilizados en la medicina folclrica y el fruto para el procesamiento de jugos y rellenos para dulces elaborados de manera artesanal. El objetivo fue objetivos cuantificar el contenido de polifenoles totales y evaluacin de la actividad antioxidante medida por la capacidad de inhibir radicales DPPH en hojas, flores, corteza y fruto de dos variedades de guayaba ( Psidium guajava L.). La hoja (tiernas, maduras y yemas terminales), corteza, flores y frutos de las variedades rosada y blanca fueron recolectados, blanqueados en agua a ebullicin por 30 seg., oreado temperatura ambiente (25C)/ 2-3 h, secado 65C/ 14- 16 h molido y envasado. En las muestras se realiz la determinacin de polifenoles totales y la capacidad de inhibir el radical del radical 2,2diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH). Segn los resultados el mayor contenido de polifenoles totales correspondi a las hojas tiernas de guayaba rosada 16,466 0,46 EAG (g/100g) y blanca 15,388 0,24 EAG (g/100g) y el menor contenido se encontr en el fruto variedad rosado 1,435 0,01 EAG (g/100g) y blanco 0,363 0,01 EAG (g/100g). La mejor capacidad de inhibicin el radical DPPH lo present las hojas tiernas de ambas variedades rosada IC50 14,086 0,09 g/mL y blanca IC5015,463 0,25 g/mL y la menor capacidad lo presento el fruto. En conclusin, la guayaba tienen un potencial para ser usado como neutraceutico a las hojas (tiernas, maduras y yemas terminales), corteza y flores y como bebida funcional a la fruta procesada. Descriptores: Guayava, antioxidantes, Polifenoles, radicales libres, DPPH.

Abstract
Guayaba is a very well know Amazonian fruit that is used mainly in the artisanal manufacturing of refreshments and jellies. Despite of the demand that exist for this fruit, there are not commercial cultivations of this plant; hence, it is an under cultivated crop because farmers use this resource for fencing pastures, fire wood and sell the leaves for complementary medicine. The objectives of this study were: 1) quantify total polyphenols and 2) determine the antioxidant activity of leaves (young, adults and terminals), bark, flowers and fruit of two varieties of guayaba (rose and white) by assessing their capacity to inhibit DPPH. Prior to using the leaves, they were treated with not water for 30 sec then left at room temperature for 2-3h, and dried at 65C for 14-16h. results for total polyphenols (EAG g/100g)were rose and white young leaves 16, 4660,46 and 15,3880,24; rose and white bark 14,6880,40 and 0,363 0,01 respectively. The results for antioxidant capacity expressed as IC 50 demonstrated that young leaves from rose and white guayaba showed more efficient antioxidant capacities IC50 14,086 0,09 g/mL than other parts of the plant. In conclusion, guayaba has a potencial to be used as a nutraceutical to the leaves (tender, mature and terminal buds), bark and flowers as functional drink processed fruit. Key words: Guayaba, antioxidant, Polyphenols, free radicals, DPPH

Facultad de Ingeniera en Industrias Alimentarias, Universidad Nacional Agraria de la Selva (UNAS), Tingo Mara - Per. E-mail: suordoneze@hotmail.com 2 Centro de Investigacin de Productos Naturales de la Amazonia (CIPNA - UNAS), Tingo Mara Per.

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ISSN 2223-8492 actividad antibacterifago y estudios antifngicos demuestran que la tintura de hojas es activa contra Candida albicans, Candida Krusei, Candida parapsilosis y Candida stellatoidea con una CIM de 1-2 mg/ml, (5). En el marco de la presente informacin se plante los siguientes objetivos cuantificar el contenido de polifenoles totales y evaluacin de la actividad antioxidante medida por la capacidad de inhibir radicales DPPH en hojas, flores, corteza y fruto de dos variedades de guayaba (Psidium guajava L.). Materiales y mtodos El presente trabajo se realiz en el Centro de Investigaciones de Productos Naturales de la Amazona (CIPNA) de la Universidad Nacional Agraria de la Selva (UNAS), ubicado en la ciudad de Tingo Mara, Provincia de Leoncio Prado, Departamento de Hunuco. Material biolgico La hoja (tierna, madura y yema terminal), corteza, flores y frutos de las variedades rosada y blanca fueron recolectados de huertas familiares ubicadas en el distrito de Rupa Rupa provincia de Leoncio Prado departamento de Hunuco. La recoleccin de la muestra se realiz en las maanas, las hojas fueron blanqueadas a ebullicin y por 30 segundos con la finalidad de inactivar la enzima polifenol oxidasa (para evitar la oxidacin de las catequinas). Oreado tendiendo las muestras sobre mallas de plstico a temperatura ambiente (25C)/ 2-3 hr., fueron secados 65C en estufa por 14- 16 hr., se moli en un molino helicoidal y separado en una malla de 1 mm de dimetro y finalmente fue envasado en bolsas y sellado hermticamente. Reactivos Metanol al 95%, 1,1 diphenyl-2-pycryl hidrazil (DPPH), agua destilada, desionizada, (+)catequina, solucin de Folin-Ciocalteu. Equipos de laboratorio Balanza analtica, espectrofotmetro uv/vis, estufa, bao mara, desionizador de agua, vortex, microondas, refrigerador, centrifuga, destilador de agua. Mtodos analticos Para la determinacin de Polifenoles totales se utiliz el mtodo de espectrofotometra (6, 7), en la evaluacin de la actividad antioxidante se evalu la capacidad de inhibir radical DPPH (8, 7).

Introduccin
Los alimentos adems de aportar nutrientes, contiene una serie de sustancias no nutritivas que intervienen en el metabolismo secundario de los vegetales; sustancias colorante (pigmentos), aromticas, reguladores del crecimiento, protectores naturales frente, que no tienen una funcin nutricional clsicamente definida, o no son considerados esenciales para la salud humana, pero que pueden tener un impacto significativo en el curso de alguna enfermedad y estos son los fitoqumicos o sustancias bioactivas. Los aantioxidantes son sustancias que a bajas concentraciones reduce, retrasa significativamente o previene la oxidacin de un sustrato. Son compuestos que prolongan la vida til de alimentos, protegiendo contra el deterioro causado por la oxidacin, inhiben la propagacin de radicales libres por eso son utilizados para prevenir el deterioro de los alimentos, evitando la rancidez de las grasas y los cambios de color (1). Los antioxidantes son sustancias qumicas que inactivan los radicales libres o inhiben su produccin, impidiendo as deterioro en las clulas, estos ceden un electrn al radical libre, oxidndose y transformndose en un radical libre dbil que es inofensivo, en algunos casos puede llegar a regenerarse como en el caso de la vitamina E (2). En la Amazona peruana la guayaba (Psidium guajava L.) es un fruto nativo por que no se tiene plantaciones establecidas, el agricultor deja a la guayaba que crezca en los linderos ya que su madera es cotizada para utilizar como lea (combustible). Por otro lado este fruto es utilizado para el procesamiento de jugos, nctares y rellenos para dulces de manera artesanal sin establecer el verdadero valor nutricional ni antioxidante. En el Valle del Alto Huallaga se cuenta con varios ecotipos de guayaba blanca, roja criolla y rosada cada uno de ellos con caractersticas sensoriales muy especiales principalmente en aroma, color y sabor (3). En Taiwn la guayaba es una fruta muy popular y es usado como agente hipoglicemico en la medicina folclrica, el t de guayaba infusin de hojas y frutos secos ha sido recientemente comercializado como una bebida y se le considera propiedades antidiarreicas, antipiretico, antimicrobiano y bioantimutagenico (4). El extracto acuoso de hojas frescas tienen moderada actividad antifngica (Fusarium oxysporum), los extractos acuosos de tallo y hojas tienen

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Investigacin y Amazona 2011; 1(2): 48- 52 Metodologa experimental. Los polifenoles totales se determin a 700 nm y los resultados fueron expresado en g de cido galico/100g. muestra seca. Para la evaluacin del radical DPPH se hizo reaccionar 25l de muestra con 975l de DPPH y las lecturas se realizaron a 515 nm. Los resultados se expresaron en IC50 (ug/ml) y fueron analizados mediante el modelo estadstico Diseo Completo al Azar (D.C.A), sometidos al programa estadstico SAS y la prueba de Tukey (p<0,01). Resultados y discusin Cuantificacin de polifenoles totales El cuadro 1 muestra los resultados de la cuantificacin de los polifenoles totales en los diferentes tratamientos en estudio y podemos indicar que en ambas variedades existi diferencia estadstica significativa, haciendo la comparacin de medias mediante Tukey (p<0,01) para cada variedad podemos indicar que en ambas variedades el mayor contenido de polifenoles lo present la hoja tierna. En la hoja tierna de la variedad rosada el contenido fue 16,466 g EAG/100g de muestra seca. La hoja tierna present el mayor contenido de quercitina 1236 mg/Kg peso seco, comparado a la hoja joven (yema terminal) 620 mg/Kg peso seco y la hoja senescente 566 mg/Kg peso seco, adems la hoja tierna contiene 150 mg/Kg peso seco de mercitina, en tal sentido el autor recomienda que la extraccin comercial conviene aprovechar las hojas tiernas. El mismo autor indica que los flavonoides aumentan conforme avanza el desarrollo de las hojas (9). Las infusiones de hojas de guayaba son comercializados en Japn como una bebida saludable, ya que las hojas contienen triterpenoides, flavonoides, alcaloide y taninos (10). Todos los extractos elaborados en la presente investigacin fueron hidroalcoholicos teniendo como resultado menor contenido de polifenoles, 57,53 g EAG/100g de muestra seca con extracto etanlico y 51,16 g EAG/100g de muestra seca con extracto acuoso (11). Un contenido de 36,2 g EAG/100g de muestra seca de hoja de guayaba liofilizada (10). Asi mismo, 16,6 g EAG/100g (4).

ISSN 2223-8492 Cuadro 1. Resultados de polifenoles totales en las variedades y diferentes partes de la planta de guayaba. Variedades Componen Rosado Blanco tes EAG(g/100g) EAG (g/100g) Corteza 14,688 0,40 b 14,143 0,24 b Hoja tierna 16,466 0,46 a 15,388 0,24 a Hoja 13,219 0,42 bc 12,862 0,20 c
madura Hoja yema terminal Flor Fruto

12,932 0,41 c

13,674 0,18 bc

12,323 0,19 c 8,572 0,12 d 1,435 0,01 d 0,363 0,01 e Los valores representan (promedio SEM) los datos provienen del experimento (n=9) valores de una misma columna con superndices diferentes son significativos. (p<0.01) Comprando los resultados en las hojas de guayaba blanca los valores fueron similares, siendo la hoja tierna la que present el mayor contenido 15,388 g EAG/100g, seguido de la hoja yema terminal 13,674 g EAG/100g y el menor correspondi a la hoja madura 12,862 g EAG/100g; al respecto se indica que en varias especies los flavonoides varan sustancialmente entre genotipo, cambio estacional, edad, daos de la hoja y sitios de ubicacin. Con respecto al contenido de polifenoles en la corteza de guayaba rosada fue 14,688 g EAG/100g y en la blanca 14,143 g EAG/100g; como se puede apreciar los contenidos son similares. Al comparar 7 variedades de mango el contenido de polifenoles en corteza y extracto acuoso se ha reportado en la variedad Kent 97,74 TEAG (gAG/100g) y 97,6 TEAG (gAG/100g) en extracto etanolico. En este mismo trabajo se indica que la corteza contienen una xantona glicosilada llamada mangiferina (2,B-D glucopiranosil-1,3,6,7-tetrahidroxi 9-xantona) este tiene efecto potente en captar oxgeno singlete (12). Respecto a la flor en la variedad rosada se encontr 12,323 g EAG/100g base seca y en la blanca 8,572 g EAG/100g base seca como se puede apreciar entre las variedades existe diferencia. La flor contienen mercitina 95 mg/kg peso seco y quercitina 986 mg/kg peso seco, lutena 12 mg/kg peso seco y kamperol 87 mg/kg peso seco comparado a la corteza y la hoja estas no tienen estos componentes. Los componentes antes indicados fueron mayores en la etapa fenolgica de botn floral y luego decrece hasta que se desarrolla la flor; as mismo, se reconoce que el botn floral existe 50

Investigacin y Amazona 2011; 1(2): 48- 52 mayor cantidad de flavonoides y se considera como un mecanismo de defensa de herbvoros, adems la cubierta de tricomas y spalos tambin pueden tener una funcin protectora para los rganos reproductores en desarrollo estos flavonoides tambin disminuyen posteriormente en el desarrollo floral (9). En el fruto se report el menor contenido en la variedad rosada 1,435 g EAG/100g y en la blanca 0,363 g EAG/100g. El fruto tiene una escaza concentracin de polifenoles. El mismo autor encontr en fruto apigenina 160 mk/kg peso seco y quercitina 129 mg/kg peso seco siendo el menor contenido comparado a todos los componentes (9). En guayaba pero, roja y blanca 0,029; 0,050 y 0,045 g EAG/100g (12) y en banana 0,051 g EAG/100g, manzana 0,035 g EAG/100g y naranja 0,075 g EAG/100g (13). Determinacin de la capacidad de inhibir el radical 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH). En el Cuadro 2 se presenta los resultados del coeficiente de inhibicin IC 50 del radical DPPH en las dos variedades y las diferentes partes de la planta de guayaba. En la variedad rosada se encontr que existe diferencia estadstica significativa y comparando las medias mediante la prueba de T ukey (p0,01) encontramos que la mayor inhibicin del radical DPPH sucedi en la hoja tierna y la madura IC 50= 14,086 0,09 y IC 50=15,207 0,41 g/mL respectivamente, por el contrario la menor inhibicin sucedi en el fruto IC 50= 45,923 0,03 g/mL. En la investigacin realizada en la evaluacin de la actividad antioxidante de extracto de hojas de guayaba concluyo indicando que la guayaba posee una actividad antioxidante muy buena y esto se atribuye principalmente el contenido de compuestos fenlicos (4). Si comparamos en la variedad rosada el mayor contendido de polifenoles correspondi la hoja tierna seguida de la madura y al realizar la prueba de la inhibicin del radical DPPH tambin mostro tener la mayor capacidad de atrapar los radicales libres. Se ha demostrado que existe una buena correlacin entre los radicales anin superoxido, ABTS+ y radical peroxilo con el contenido de polifenoles presentes en el extracto de hojas (4).

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Cuadro 2. Evaluacin de la capacidad de inhibir el radical DPPH en las variedades y diferentes partes de la planta de guayaba.

Con respecto a la variedad de guayaba blanca podemos indicar que la mayor capacidad de inhibicin lo presento la hoja tierna IC5015,463 0,25 g/mL y menor eficiencia se logr en el fruto IC 50 65,675 0,12 g/mL, por otro lado tambin podemos indicar que en ambas variedades la corteza y flor tuvieron una menor actividad antioxidante, como se sabe las plantas tienen su mecanismo de defensa tales como los polifenoles, flavonoides, cido ascrbico, oligoelementos que actan controlando las especies reactivas del oxgeno (EROS) que son sustancias que daan los componentes celulares y estn distribuidos en diferentes partes de la planta (14). Comparando las variedades rosada y blanca podemos indicar que en ambas las hojas tiernas tuvieron la mayor actividad antioxidante IC 50=14,086 0,09 g/mL y IC5015.463 0,25 g/mL respectivamente. IC50 10,7 g/mL en hojas de guayaba (15) y comparando estos resultados con hojas de plantas tenemos en hierba luisa (Cymbopogon citratos Staph) reporta IC50 834,6 g/mL (16); para el Cedrn (Aloysia triphilla) IC50 329,6 g/mL (17) en yemas terminales de guanabana IC50 84,610 g/mL. (18). En cascara de camu camu pintn se report IC50 834,6 g/mL (19). Conclusiones El mayor contenido de polifenoles totales correspondi da las hojas tiernas de guayaba rosada 16,466 0,46 EAG(g/100g) y blanca 15,388 0,24 EAG(g/100g) y el menor contenido se encontr en el fruto variedad rosado 1,435 0,01 EAG(g/100g) y blanco 0,363 0,01EAG (g/100g).La mejor capacidad de inhibicin el radical DPPH lo present las hojas tiernas de ambas variedades rosada IC5014,086 0,09 g/mL y blanca IC5015,463 0,25 g/mL y la menor capacidad lo presento el fruto. 51

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