03/06/2011 03/06/2011

BACILO DE KOCH
INTRODUCCIN
infectadas con Mycobacterium tuberculosis, bacilo

Se estima que alrededor de un tercio de la poblacin mundial estn causante de la tuberculosis; aproximadamente 8 millones de ellos enferman anualmente y cerca de dos millones mueren por la enfermedad, an cuando se cuenta con tcnicas de diagnstico sencillas, precisas y con tratamientos eficaces. La transmisin de los bacilos de la tuberculosis se produce casi

exclusivamente por medio de ncleos suspendidos en pequeas gotas que son expulsadas con la expectoracin de las personas afectadas por tuberculosis pulmonar. Estas pequeas gotas pueden permanecer infectantes en el aire durante bastante tiempo y pueden ser inhaladas por otras personas. La infeccin de los contactos es ms probable cuando conviven o permanecen durante un tiempo prolongado cerca del enfermo que est expectorando bacilos y en un ambiente poco ventilado. No todas las personas infectadas aproximadamente, se enferman, slo una de las ms susceptibles. La cada diez personas puede son tuberculosis

manifestarse en cualquier rgano, porque Mycobacterium tuberculosis se disemina por todo el organismo; sin embargo, la enfermedad pulmonar es la ms frecuente, debido a que el bacilo necesita abundante oxgeno para multiplicarse. En los pulmones de los enfermos se pueden formar cavidades en las que se alojan grandes poblaciones de bacilos que pueden ser detectados en muestras de esputos. El diagnstico de certeza de tuberculosis puede hacerse en forma confiable en el laboratorio, demostrando la presencia de bacilos en una muestra de la lesin por medio de la baciloscopia (examen microscpico) o el cultivo. Para que la baciloscopia sea positiva es preciso que la muestra tenga como mnimo, entre 5.000 y 10.000 bacilos por mililitro de muestra. Este alto contenido de bacilos se encuentra en los pacientes con tuberculosis pulmonar, especialmente en aquellos con enfermedad avanzada y con lesiones cavitadas. Estos pacientes son los que transmiten los bacilos manteniendo la enfermedad en la comunidad.

La baciloscopia es la tcnica de eleccin para el diagnstico rpido y control del tratamiento de la tuberculosis pulmonar del adulto. Es simple, econmica y eficiente para detectar los casos infecciosos, por eso es la herramienta fundamental de un programa de control de la tuberculosis. Agregando a esto, esta la coloracin de Ziehl Neelsen, la cual es una tcnica de tincin diferencial rpida para la identificacin de microorganismos patgenos como es el caso de la Mycobacterium tuberculosis. La coloracin de Ziehl Neelsen es la tcnica ms apropiada para ser utilizada en todos los laboratorios de los pases de Amrica Latina. Es la recomendada por la Organizacin Mundial de la Salud (OMS) y la Unin Internacional Contra la Tuberculosis y Enfermedades Respiratorias (UICTER) por ser la que asegura resultados reproducibles con un entrenamiento sencillo y la ms econmica. Esta tincin est basada en el calentamiento del colorante para que este atraviese la pared bacteriana que contiene ceras. Al suspender el calentamiento y enfriar con agua, provoca una nueva solidificacin de los cidos grasos de modo que el colorante ya no pueda salir de la bacteria. Por otro lado el calentamiento aumenta la energa cintica de las molculas del colorante lo cual tambin facilita su entrada a las bacterias. Las bacterias que resisten la decoloracin son de color rojo y las que no, se observan de color azul, ya que se utiliza azul de metileno como tincin de contraste. Publicado por karen Lrez en 20:19 9 comentarios: Enviar por correo electrnicoEscribe un blogCompartir con TwitterCompartir con Facebook

CARACTERISTICAS MORFOLGICAS Y ESTRUCTURALES DE Mycobacterium tuberculosis.

Las mycobacterias en general pueden variar mucho en su morfologa, desde formas cocoides pequeas a largos filamentos, M. tuberculosis suele tener una morfologa caracterstica, bacilo delgado de forma recta o ligeramente curvada en frotis teidos, y su tamao suele ser de 1-4 micras de largo por 0,3-0,5 micras de ancho. Ocasionalmente, forma ramificaciones verdaderas que se observan en cultivos enriquecidos y en frotis de ganglios linfticos gaseosos.

Son bacilos no formadores de esporas, sin flagelos ni cpsula. La estructura celular de M. tuberculosis consta de una gruesa pared, separada de la membrana celular por el espacio periplsmico, con cuatro capas. La ms interna es el glicopptido o peptidoglicano con molculas de N-acetilglucosamina y cido-N-glucolilmurmico (en lugar del habitual N-acetilmurmico) con cortas cadenas de alanina. Esta capa es el esqueleto de la bacteria que le da forma y rigidez. Externamente, hay otras 3 capas compuestas, una por polmeros de arabinosa y galactosa, otra formada por cidos miclicos (que son cidos grasos derivados) y otra superficial formada por lpidos como los sulfolpidos, el cord factor, llamado as por su aparente asociacin con la forma acordonada con que se agrupan las mycobacterias virulentas, y los micsidos que son al igual que el anterior glicolpidos. No difiere del resto de las bacterias en cuanto al citoplasma y el ADN nuclear. Las mycobacterias son aerobios estrictos y no crecen en ausencia de oxgeno. La M. tuberculosis se desarrolla de forma adecuada en medios simples que contienen una fuente de carbono, una de nitrgeno e iones de metales esenciales entre ellos hierro y magnesio. Para su cultivo, se requiere un medio ms complejo que contenga una base de patata-huevo o una base de agar-suero. Los bacilos tuberculosos tienen un crecimiento muy lento incluso en condiciones ptimas y requiere de 10 a 20 das de incubacin a 37C. Aunque la proliferacin puede tener lugar a un pH que oscila entre 6 a 7.6, el pH ptimo de crecimiento es de 7.

Las mycobacterias son muy resistentes a la desecacin. El medio ambiente en el que se encuentran constituye un factor muy importante para su viabilidad. Por ejemplo, cuando se exponen a la luz solar directa, los bacilos tuberculosos de los cultivos son destruidos en 2 horas, pero si estos estn presentes en el esputo, pueden permanecer viables durante periodos ms largos. Las mycobacterias son ms resistentes a la desinfeccin con productos qumicos que otros microorganismos no formadores de esporas, probablemente como consecuencia de su contenido en lpidos. Son sensibles al calor hmedo y son destruidos por las temperaturas de pasteurizacin. Publicado por karen Lrez en 20:13 No hay comentarios: Enviar por correo electrnicoEscribe un blogCompartir con TwitterCompartir con Facebook

CONTAGIO, EVOLUCIN Y DISEMINACIN DE LA TUBERCULOSIS.

La tuberculosis es una enfermedad contagiosa. Al igual que el resfriado comn, se propaga por el aire. Slo las personas enfermas de tuberculosis pulmonar pueden transmitir la infeccin. Cuando tosen, estornudan, escupen o hablan, los sujetos infectados propulsan en el aire los grmenes de la enfermedad, conocidos como bacilos tuberculosos. Basta con que una persona inhale unos pocos grmenes para que contraiga la infeccin.

La evolucin de la bacteria va de innumerables tubrculos miliares en todos los rganos lo que constituye la llamada tuberculosis miliar o granulia. El desarrollo de una tuberculosis generalizada durante la evolucin del complejo primario (generalizacin precoz) es un fenmeno poco frecuente. Ms a menudo esta generalizacin ocurre cuando el complejo primario est curado (generalizacin tarda). En este ltimo caso, el foco de origen de las metstasis tuberculosas se encuentra en algn otro rgano, como rin, prstata, trompas de Falopio, etc. En la tuberculosis miliar se desarrollan ndulos del tamao de un grano de mijo,

en casi todos los rganos; predominan en pulmn, hgado, rin, bazo y meninges. Las metstasis se originaran de preferencia del componente ganglionar linftico reblandecido, ya que ste tiene mayores relaciones con la circulacin sangunea. Se presenta como ndulos caseificados, que se extienden y pueden destruir grandes porciones del rgano. Pueden ulcerarse los ndulos y abrirse al exterior, directa o indirectamente. Tambin pueden cretificarse, lo que representa una forma de curacin. A veces, la tuberculosis orgnica compromete varios rganos, constituyendo la llamada tuberculosis orgnica mltiple o tuberculosis polisistmica. Publicado por karen Lrez en 20:09 1 comentario: Enviar por correo electrnicoEscribe un blogCompartir con TwitterCompartir con Facebook

PROCEDIMIENTOS A SEGUIR PARA LA OBTENCIN DE MUESTRAS DE LESIONES PULMONARES Y EXTRAPULMONARES.

<!--[if !supportLists]--> <!--[endif]-->Muestras de lesiones pulmonares.

Para que el laboratorio pueda obtener resultados confiables no slo es necesario que ejecute las tcnicas correctamente. Tambin necesita recibir una buena muestra, obtenida en cantidad suficiente, colocada en un envase adecuado, bien identificada, conservada y transportada. La muestra ms examinada es el esputo, debido a que la tuberculosis pulmonar es la ms frecuente. Sin embargo, dado que la enfermedad puede manifestarse en cualquier rgano, con menor frecuencia puede requerirse la investigacin de muestras muy variadas: orina, lquido cefalorraqudeo, lquido pleural, lquido asctico, sangre, pus de cavidades abiertas, biopsias. Estas muestras de lesiones extrapulmonares deben procesarse tambin por cultivo.

<!--[if !supportLists]-->

<!--[endif]-->Muestras de esputo:

El envase debe tener las siguientes caractersticas: <!--[if !supportLists]--> dimetro. <!--[endif]-->Boca ancha de no menos de 50 mm de

<!--[if !supportLists]--> <!--[endif]-->Capacidad entre 30 y 50 ml para facilitar que el paciente pueda depositar la expectoracin con facilidad dentro, sin ensuciar sus manos o las paredes del frasco y para que en el laboratorio se pueda seleccionar y tomar la partcula ms adecuada, con comodidad, para realizar el extendido. <!--[if !supportLists]--> <!--[endif]-->Cierre hermtico con tapa a rosca, para evitar derrames durante el transporte y la produccin de aerosoles cuando

se abre en el laboratorio. Las tapas a presin generan mayor riesgo de formacin de aerosoles y salpicaduras en el momento de ser retiradas. <!--[if !supportLists]--> <!--[endif]-->Material plstico transparente resistente a roturas para poder observar la calidad de la muestra cuando la entrega el paciente, evitar roturas y derrames de material infeccioso y para que tambin pueda ser desechado. Como la eliminacin de los bacilos por el esputo no es constante, es conveniente analizar ms de una muestra de cada paciente para el diagnstico de la tuberculosis. La primera muestra puede detectar aproximadamente el 80% de los casos positivos, la segunda agrega un 15% y la tercera un 5% ms.

<!--[if !supportLists]--> <!--[if !supportLists]--> privacidad.

<!--[endif]-->Obtencin espontnea del esputo: <!--[endif]-->Elegir un lugar bien ventilado y que ofrezca

<!--[if !supportLists]--> <!--[endif]-->Entregar al paciente el envase de recoleccin ya rotulado con su nombre o nmero de identificacin y el servicio que solicita, la baciloscopia. <!--[if !supportLists]--> <!--[endif]-->Solicitar al paciente una buena muestra de esputo, indicndole que inspire profundamente llenando sus pulmones de aire tanto como sea posible, retenga el aire un momento y expulse luego la expectoracin con un esfuerzo de tos, tratando de arrastrar las secreciones del pulmn. <!--[if !supportLists]--> <!--[endif]-->Recoger el esputo producido dentro del envase tratando de que entre en su totalidad, sin manchar sus manos o las paredes externas del frasco. <!--[if !supportLists]--> <!--[endif]-->Repetir esta operacin otras dos veces colocando todas las secreciones en el mismo frasco. <!--[if !supportLists]--> <!--[endif]-->Limpiar el exterior del envase con un pauelo de papel y lavarse las manos con abundante agua y jabn.

<!--[if !supportLists]-->

<!--[endif]-->Calidad de la muestra:

La muestra de esputo mucopurulenta, proveniente del rbol bronquial, es la que asegura mayor probabilidad de que se puedan observar bacilos. Una buena muestra tiene aproximadamente 3 a 5ml, es generalmente espesa y mucoide. Puede ser fluida con partculas de material purulento. El color es

variable (blanco, amarillento y hasta verdoso). A veces son sanguinolentas. Las secreciones nasales, farngeas o la saliva no son buenas muestras para investigar tuberculosis, aunque es conveniente examinarlas de todas formas, porque siempre existe la posibilidad de que contengan parte de la expectoracin o bacilos expulsados por la tos que hayan quedado en la boca, nariz o faringe.

<!--[if !supportLists]-->

<!--[endif]-->Muestras de lesiones extrapulmonares.

Todas las muestras extrapulmonares deben cultivarse. En algunos casos porque la escasa cantidad de bacilos de la tuberculosis presentes slo podr ser detectada por cultivo, en otros para confirmar o descartar que la muestra contenga mycobacterias ambientales saprofitas (como en el caso de la orina que resulta con baciloscopia positiva) o, excepcionalmente patgenas. La baciloscopia de los lquidos con volumen mayor a 1 ml debe ser realizada luego de centrifugarlos 15 minutos a 3000g, y la de tejidos despus de disgregar el material. Por esta razn es altamente recomendable que la baciloscopia de estas muestras sea realizada en el mismo laboratorio que cultivar la muestra.

<!--[if !supportLists]-->

<!--[endif]-->Biopsias y material resecado:

La obtencin de estos materiales est reservada al personal mdico. En el caso de biopsia de endometrio, la muestra debe consistir preferentemente en raspado uterino tomado durante la primera fase del ciclo menstrual o en el perodo de ovulacin. <!--[if !supportLists]--> <!--[endif]-->Envase: estril.

<!--[if !supportLists]--> <!--[endif]-->Conservantes: uno o dos mililitros de solucin fisiolgica o agua destilada estril para evitar la desecacin. No agregar formol porque es letal para el bacilo, la porcin de la muestra reservada para el estudio histopatolgico debe ser separada para ser preservada en formol al 10%. <!--[if !supportLists]--> <!--[endif]-->Conservacin: el material debe ser enviado inmediatamente al laboratorio para su cultivo o ser conservado refrigerado y al abrigo de la luz hasta su envo. Publicado por karen Lrez en 19:58 No hay comentarios: Enviar por correo electrnicoEscribe un blogCompartir con TwitterCompartir con Facebook

MTODO DE COLORACIN DE ZIEHL NEELSEN

La tincin de Ziehl Neelsen fue desarrollada inicialmente por Paul Ehrlich para poner de manifiesto la presencia de los bacilos causantes de la tuberculosis en muestras clnicas de pacientes. Esta tcnica es capaz de diferenciar los bacilos Acido Alcohol Resistentes (BAAR).

La tcnica de Z-N fuerza la penetracin de la fucsina bsica en la pared celular mediante la accin combinada del fenol y el calor, que aumentan la fluidez de la capa de cidos miclicos: el calor derrite el componente ceroso y el fenol acta a modo de disolvente, permitiendo el paso del colorante bsico que se une a los cidos miclicos con carga negativa. Cuando cesa la aplicacin de calor y/o se elimina el exceso de fenol mediante un lavado con agua, la pared recupera su consistencia cerosa, pero las molculas de fucsina quedan atrapadas en su espesor. Con la coloracin de Ziehl Neelsen se observan como bastoncitos delgados, ligeramente curvos, rojo fucsia, destacndose claramente contra el fondo azul.

<!--[if !supportLists]-->

<!--[endif]-->Coloracin:

<!--[if !supportLists]--> <!--[endif]-->Disponer dos varillas de vidrio en forma paralela, a una distancia de aproximadamente 5 cm entre una y otra, una sobre un soporte dentro del lavabo/pileta de coloracin. <!--[if !supportLists]--> <!--[endif]--> Filtrar la cantidad de fucsina necesaria para las tinciones a realizar en la jornada. Si el nmero de baciloscopia a colorear es pequeo, se puede filtrar la fucsina directamente cuando se la deposita sobre el extendido a travs de un pequeo embudo con papel de filtro. <!--[if !supportLists]--> <!--[endif]-->Colocar sobre el soporte las lminas fijadas conservando el orden numrico con el extendido hacia arriba y manteniendo una separacin de al menos 1cm entre ellas. <!--[if !supportLists]--> <!--[endif]-->Cubrir totalmente la superficie del extendido con fucsina bsica fenicada recin filtrada. Dispensar el colorante con suavidad, sin salpicar y sin tocar con el gotero o con el embudo los extendidos.

<!--[if !supportLists]--> <!--[endif]-->Con la llama de un hisopo embebido en alcohol calentar suavemente por debajo de los extendidos, con movimientos de vaivn, hasta que observe que se desprenden los primeros vapores blancos. No calentar con mechero. <!--[if !supportLists]--> <!--[endif]-->En caso de derrame del colorante, reponer la fucsina, no dejar secar el preparado. <!--[if !supportLists]--> <!--[endif]-->En el trmino de aproximadamente cinco minutos calentar tres veces hasta emisin de vapores; esto es suficiente para que la fucsina penetre adecuadamente en el bacilo y se fije a sus lpidos. No hervir la fucsina porque la pared de los bacilos puede destruirse y colorearse mal. <!--[if !supportLists]--> <!--[endif]-->Con una pinza, levantar cuidadosamente la lmina portaobjetos desde el extremo ms cercano al operador. Enjuagar con abundante agua a baja presin, con un frasco o un grifo. Lavar muy suave y cuidadosamente la superficie eliminando totalmente la solucin de fucsina. Girar el extendido y lavar con cuidado tambin la parte posterior. <!--[if !supportLists]--> <!--[endif]-->Inclinar el portaobjetos para eliminar el exceso de agua y as evitar diluir los reactivos que se utilizarn a continuacin.

<!--[if !supportLists]-->

<!--[endif]-->Decoloracin:

<!--[if !supportLists]--> <!--[endif]-->Cubrir la totalidad del extendido con solucin decolorante y dejar actuar aproximadamente 3 minutos. <!--[if !supportLists]--> presin. <!--[endif]-->Enjuagar con abundante agua a baja

<!--[if !supportLists]--> <!--[endif]-->Verificar que el extendido se ha decolorado (las partes ms gruesas del extendido a lo sumo conservan un leve tinte rosado). Si se observan cmulos rojos o coloracin rosada intensa, volver a cubrir con solucin decolorante, dejarla actuar entre uno y tres minutos y enjuagar nuevamente. <!--[if !supportLists]--> portaobjetos <!--[endif]-->Eliminar el exceso de agua inclinando el

<!--[if !supportLists]--> <!--[endif]--> <!--[if !supportLists]--> azul de metileno.

Coloracin de fondo:

<!--[endif]-->Cubrir todo el extendido con solucin de

<!--[if !supportLists]-->

<!--[endif]-->Dejar actuar durante un minuto.

<!--[if !supportLists]--> <!--[endif]-->Enjuagar las lminas en ambas caras con agua a baja presin y limpiar parte inferior con un algodn si ha quedado coloreada. <!--[if !supportLists]--> <!--[endif]-->Observar si las lminas conservan la numeracin clara y visible. Si no es as volver a numerarlas. <!--[if !supportLists]--> <!--[endif]-->Dejar secar las lminas a temperatura ambiente, apoyndolas en posicin vertical en un soporte sobre un papel absorbente. No apoyar papel absorbente sobre el extendido. Publicado por karen Lrez en 19:55 No hay comentarios: Enviar por correo electrnicoEscribe un blogCompartir con TwitterCompartir con Facebook

BACILOSCOPIA: OBSERVACIN DE LOS BACILOS TUBERCULOSOS

La baciloscopia, es la tcnica fundamental en toda investigacin

bacteriolgica de la tuberculosis, en la deteccin de casos y control de tratamiento, con un costo bajo y de rpida ejecucin. La baciloscopia es una tcnica que permite identificar al 70-80% de los casos pulmonares positivos, es decir, es muy bajo el riesgo de equivocarse al diagnosticar tuberculosis. La baciloscopia puede ser realizada en laboratorios de cualquier complejidad, que posean un microscopio con lente de inmersin en buenas condiciones, algunos insumos de bajo costo e instalaciones simples en el laboratorio. Deben seguirse normas bsicas sencillas que aseguren calidad y minimicen los riesgos, Es recomendable que el rea sea exclusiva, pero no siempre es posible.

<!--[if !supportLists]--> Neelsen

<!--[endif]-->Lectura de extendidos coloreados por Ziehl

<!--[if !supportLists]--> <!--[endif]-->Ubicar cerca del microscopio todos los elementos necesarios: -aceite de inmersin. -pauelos o trozos de papel suave. -el Registro del Laboratorio. -una lapicera. -una caja para guardar portaobjetos.

-un frasco con xilol o con etanol a 70%. <!--[if !supportLists]--> <!--[endif]-->Depositar una gota de aceite de inmersin en un extremo del frotis, sin tocar el preparado con el gotero. <!--[if !supportLists]--> <!--[endif]-->Enfocar el extendido donde ha colocado la gota de aceite, con la lente 100x de inmersin. <!--[if !supportLists]--> <!--[endif]-->Observar cada campo microscpico en superficie y profundidad, moviendo permanentemente el tornillo micromtrico, antes de desplazarse al campo contiguo. <!--[if !supportLists]--> <!--[endif]-->Seguir un recorrido en lneas rectas, sistemtico para recorrer el extendido evitando repetir la lectura de algunos campos. <!--[if !supportLists]--> <!--[endif]-->Observar la calidad del extendido y de la coloracin. Si no fuesen buenas, repetir nuevamente la baciloscopia de esa muestra. <!--[if !supportLists]--> las Causas. <!--[endif]-->Si se observan anormalidades, identificar

<!--[if !supportLists]--> <!--[endif]-->Contar el nmero de campos que ha ledo y el nmero de BAAR que ha identificado. <!--[if !supportLists]--> <!--[endif]-->Para calcular el promedio de BAAR encontrados por campo, sumar el total de BAAR contados y dividir ese total por el nmero de campos observados. Cuando los bacilos se presentan agrupados, una estimacin aproximada del nmero de bacilos presentes en el cmulo es suficiente para calcular este promedio. <!--[if !supportLists]--> <!--[endif]-->Los campos ledos deben ser campos microscpicos tiles. Se considera campo microscpico til a aquel en el cual se observan clulas bronquiales (leucocitos, clulas ciliadas) o fibras mucosas, que aparecen teidos de azul. <!--[if !supportLists]--> <!--[endif]-->El extendido preparado tal como fue descrito permite observar 100 campos microscpicos en lnea recta. <!--[if !supportLists]--> <!--[endif]-->Un microscopista experimentado completa la lectura de 100 campos en aproximadamente cinco minutos. <!--[if !supportLists]--> <!--[endif]-->Al finalizar la lectura, girar el revolver de los objetivos y retirar el portaobjetos de la platina. <!--[if !supportLists]--> <!--[endif]-->Comprobar el nmero de identificacin y registrar el resultado.

<!--[if !supportLists]--> <!--[endif]-->Antes de examinar el portaobjetos siguiente, limpiar suavemente la lente de inmersin con un trozo de pauelo de papel absorbente. Esto evita la transferencia de material al siguiente frotis que se va a leer. Publicado por karen Lrez en 19:50 No hay comentarios: Enviar por correo electrnicoEscribe un blogCompartir con TwitterCompartir con Facebook

CONCLUSIN
La coloracin de Ziehl Neelsen, recomendada por la Organizacin Mundial de la Salud, es el mejor mtodo de coloracin para los bacilos tubrculos, ya que estos pertenecen al genero de cido alcohol resistente (BAAR), donde esta tincin acta sobre la capa de peptidoglicano de la Mycobacterium tuberculosis tindolas de rojo fucsia, esto gracias a las reacciones fsicoqumico que produce en dicha bacteria, para su diferenciacin se utiliza el azul de metileno como contraste. Para la observacin de los bacilos tuberculosos se emplea la baciloscopia, que es la tcnica fundamental en toda investigacin bacteriolgica de la tuberculosis, la cual por su eficacia en cuanto a la deteccin de casos, control de tratamiento, bajo costo y de rpida ejecucin, es utilizada a nivel mundial dando buenos resultados, y con muy pocas probabilidades de errores al diagnosticar tuberculosis