ANLISIS MICROBIOLGICO DE ALIMENTOS

TEMA: Recuento de hongos en un alimento balanceado de marca comercial para pollos OBJETIVO: Determinar la presencia y recuento de hongos en un alimento TCNICA: Mtodo de las diluciones sucesivas y siembra en superficie de Agar FUNDAMENTO: El presente anlisis permite determinar la presencia de hongos contaminantes, sean stos ambientales o propios del alimento por contaminacin durante o despus de su elaboracin. DESARROLLO: esar e!actamente "# gr del alimento a anali$ar cuya poblacin f%ngica se desea estudiar. A&adir la muestra de alimento a '# ml de ( )* d+e ,agua destilada estril contenida en un erlenmeyer, agitar hasta alcan$ar la mayor disolucin posible. El contenido del erlenmeyer ,agua ms alimento- constituye la .suspensin madre/ . 0ener preparado "# tubos de ensayos estriles con ' ml de ()* d+e cada uno y "# placas de etri estriles con #," ml de Rosa de 1engala ,colorante-, #,"ml de 2lorenfenicol ,antibitico inhibidor de crecimiento bacteriano- y "# ml de Agar papa de!trosa ,o 3aboraud 4lucosa-. 2olocar en el primer tubo " ml de la suspensin madre , de esta forma obtendremos as5 la primera dilucin de la muestra, esto e6uivale a la dilucin "7"# 6ue es lo mismo "#8". 2olocar " ml de la dilucin "7"# al segundo tubo, obtendremos as5 la segunda dilucin, esto e6uivale a la dilucin "7"## 6ue es lo mismo "#8). 2olocar " ml de la dilucin "7"## al tercer tubo, obtendremos as5 la tercera dulucin, esto e6uivale a la dilucin "7"### 6ue es lo mismo "#89. 2olocar " ml de la dilucin "7"### al cuarto tubo, obtendremos as5 la cuarta dilucin, esto e6uivale a la dilucin "7"#### 6ue es lo mismo "#8:. 2olocar " ml de la dilucin "7"#### al 6uinto tubo, obtendremos as5 la 6uinta dilucin, esto e6uivale a la dilucin "7"##### 6ue es lo mismo "#8;. En todos los casos se hace por duplicado ,utili$ando de esta manera los "# tubos estriles con ' ml de ()* d+e. <ota7 cuando se preparen las placas de etri colocar en la placa estril el colorante y antibitico y luego agregar el Agar estril a una temperatura 6ue pueda ser soportado por la mano. ,tener cuidado 6ue solidifica muy rpidamente-.

=na ve$ agregado el Agar agitar la placa por movimientos giratorios sobre la mesada. En cada una de las placas de etri se colocar #," ml de cada uno de los tubos ,utili$ar por cada una de las diluciones una pipeta estril distinta- 0endremos as5 ; placas originales y ; duplicados. roceder a sembrar la muestra sobre la superficie del Agar con esptula de Drigals>y estril ,flameado sobre la llama y enfriada sobre la tapa de la placa-. De?ar secar sobre mesada y luego proceder a incubar las "# placas previo rtulo con la dilucin 6ue contiene, en forma invertida en estufa de cultivo a )@A2 durante ; d5as. Al cabo del ;A d5a de incubacin proceder al reali$ar el recuento de colonias. RECUENTO 4eneralmente las placas 6ue contienen las diluciones "7"# y "7"## ,primeras dos diluciones no se tienen en cuenta por la gran cantidad de colonias. 3e comien$a la lectura de la %ltima dilucin hacia atrs. 2ontar las colonias crecidas en cada una de las placas originales ,se supone 6ue tiene 6ue se idtico al conta?e en su duplicado-. El total de colonias se multiplica por "# por el factor de dilucin, es decir7 p. e?.7 en la placa ; cuya dilucin es de "7"##### lo 6ue e6uivale a "# 8; se contaron B colonias, tendremos7 B C "# C "#; D B##.### =E2+gr de alimento 2uanto mayor sea la dilucin, menor ser el n%meo de colonias 6ue se tienen 6ue contar. <ota7 cuidado 6ue no se multiplica p. e?.7C "#8; sino por "#;,Fer es6uema de traba?o-

ESQUEMA DE TRABAJO:

MUESTRA A !ME"T#

10 grs. 90 ml agua destilada estril

1 ml

1 ml

1 ml

1 ml

1 ml

9 ml agua d/e dil. 1:10 01 ml

9 ml agua d/e dil. 1:100 0.1 ml

9 ml agua d/e dil. 1:1000 0.1 ml

9 ml agua d/e dil. 1:10000 0.1 ml

9 ml agua d/e dil. 1:100000 0.1 ml

0.1 ml Atb 0.1 ml color. 10 ml Agar

0.1 ml Atb 0.1 ml color. 10 ml Agar

0.1 ml Atb 0.1 ml color. 10 ml Agar

0.1 ml Atb 0.1 ml color. 10 ml Agar

0.1 ml Atb 0.1 ml color. 10 ml Agar

4ermn G. uigdomenech 0cnico 3uperior en Microbiolog5a y 1iotecnolog5a Rosario, Mar$o de )##: germanpuigdomenechHciudad.com.ar germanpuigdomenechHhotmail.com
3