DETERMINACION DEL PH Y TEMPERATURA OPTIMOS DE UNA AMILASA INTRODUCCION: Las enzimas son el grupo ms variado y especializado de las protenas,

su funcin es actuar como catalizadores, permitiendo que las reacciones que transcurren en los seres vivos puedan desarrollarse a un ritmo adecuado. Un catalizador, por definicin, es un compuesto que con su sola presencia aumenta la velocidad de la reaccin sin experimentar ninguna modificacin.1 Las enzimas son capaces de acelerar reacciones qumicas especficas en un medio acuoso, y en condiciones en las que los catalizadores no biolgicos, seran incapaces de realizar iguales funciones. El rendimiento global de una enzima depende de varios factores, tales como temperatura, pH, cofactores, activadores e inhibidores. Es posible que tenga una idea clara sobre el efecto del pH sobre las enzimas. La velocidad de una reaccin qumica y / o la actividad de la enzima est muy influenciado por la estructura de la enzima. O en otras palabras, un cambio en la estructura de la enzima afecta a la velocidad de reaccin. Cuando los cambios de pH de un medio en particular, conduce a la alteracin en la forma de la enzima. No slo en las enzimas, el nivel de pH puede afectar tambin a las propiedades de carga y la forma del sustrato. Dentro de un rango estrecho de pH, cambios en las formas estructurales de las enzimas y los sustratos puede ser reversible. Pero para un cambio significativo en los niveles de pH, la enzima y el sustrato puede someterse a la desnaturalizacin. En tales casos, no pueden identificarse. Por consiguiente, no habr reaccin como tal. Esta la razn por qu, pH afectan la actividad enzimtica. Al igual que ocurre con la mayora de las reacciones qumicas, la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas se incrementa con la temperatura. La variacin de la actividad enzimtica con la temperatura es diferente de unos enzimas a otros en funcin de la barrera de energa de activacin de la reaccin catalizada. Sin embargo, a diferencia de lo que ocurre en otras reacciones qumicas, en las reacciones catalizadas por enzimas se produce un brusco descenso de la actividad cuando se alcanza una temperatura crtica. Este efecto no es ms que un reflejo de la desnaturalizacin trmica del enzima cuando se alcanza dicha temperatura. Si representamos grficamente la variacin de la actividad de los enzimas en funcin de la temperatura dada la impresin de que existe una temperatura "ptima" anloga al pH ptimo estudiado anteriormente; hay que resaltar que esa aparente temperatura ptima no es ms que el resultado

de dos procesos contrapuestos: 1) el incremento habitual de la velocidad de reaccin con la temperatura y 2) la desnaturalizacin trmica de la enzima.2 PROCEDIMIENTOS Y METODOS: Se arm el siguiente sistema: I II 1.00 III 1.00 5.00 IV 1.00 V 1.00 VI VII VIII 1.00 1.00 1.00

Sol. Almidn 1% 1.00 Buffer fosfato 0.1M pH 4.6 Buffer fosfato 0.1M pH 6.6 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 Buffer fostat0.1M pH 9.0 Sol. NaCl 0.2% 1.40 1.40 1.40 1.40 1.40 1.40 1.40 Agua destilada 2.60 3.40 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00 Se mezcl e incubo los tubos VII a 37 C en la estufa durante 5min; el tubo VII se mantuvo en bao helado entre 0C y 4 C por 5min Solucin enzimtica 2% 0.6 0.6 0.6 0.6 0.6 0.6 0.6 0.6

Se mezcl y contino la incubacin. Los controles de la actividad enzimtica se realizaron a los 10 y 30 minutos de acuerdo a los sistemas siguientes. CONTROL DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA Control de sustrato no transformado.- La reaccin se realiz por la reaccin con iodo. Se arm las siguientes paralelas de los tubos marcados: Control 10 min. A1 Control 30 min. A2 cido clorhdrico 0.05 N I I II III IV V VI VI VII VII VIII

Agregar ambas series 5.00 5.00 5.00 5.00

5.00

5.00 5.00 5.00

Control de la actividad enzimtica a los 30 min Se cumpli los 10 primeros min y transferimos 0.5 ml del incubado a los correspondientes tubos de control y se mezcl. Agregamos a cada tubo control 0.5 ml de la sol. Iodada y mezclamos

Anotamos los resultados de acuerdo a las reacciones. Control de la actividad a los 30 min

Cumplidos los 30 min. De incubacin se transfiri 0.5 ml de incubado a los tubos de control y mezclamos. Y agregamos a cada tubo 0.5 ml de la sol. Iodada y mezclamos. Se anot los resultados.

Sin cambio de color Una ligera disminucin de color Un color ms intenso

0 + ++

Resultados

Tubo I Pudimos apreciar que si hubo una hidrolisis de almidn.

Tubo III Se pudo observar que en este tubo hubo una hidrolisis parcial.

Tubo V Se pudo observar que en este tubo no hubo una hidrolisis de almidn por la amilasa.

Tubo II Pudimos apreciar que si hubo una hidrolisis de almidn.

Tubo IV Se pudo observar que en este tubo hubo una hidrolisis parcial.

Discusiones
Para empezar, se ha de aclarar que las diluciones ptimas para salivas de diferentes personas son distintas porque las caractersticas y concentraciones de los compuestos varan de una persona a otra. Esto mismo ocurre con el pH salival y el tiempo de referencia. Por los experimentos que realizamos en el TP, no se puede conocer la forma en que el NaCl aumenta la actividad de la enzima, sin embargo, una vez finalizado el TP, nos informaron que recientes descubrimientos dieron a conocer que la - amilasa contienen los restos amino acdicos de su sitio Con respecto a la influencia del pH del medio en la actividad enzimtica de la - amilasa, podemos decir que a pH extremos (es decir, muy cidos o muy bsicos) la enzima no funciona, o al menos disminuye notablemente su actividad. Esto podemos concluir a partir de los experimentos realizados por otros grupos, que, manteniendo el resto de las condiciones iniciales midieron la actividad de la -amilasa en dos medios con pH extremos.

Conclusiones
Respecto al efecto del factor temperatura, cuando la enzima se halla en temperaturas bajas, no puede realizar una catlisis rpida. Mientras menos sea esta alteracin, la reaccin de la amilasa era cada vez menor; la reaccin si se da, solo que no se percibe con el ojo humano. La enzima conserva su estructura proteica natural. Por otro lado, cuando la enzima est expuesta, a una temperatura alta, la reaccin no se da, porque la enzima es desnaturalizada por la excesiva alteracin molecular que provoca que los enlaces de la enzima se disgreguen. Viendo esto podemos afirmar que temperatura corporal (37C) es la idnea para la catlisis eficiente de la alfa amilasa porque fue la temperatura con la cual la reaccin fue rpida y efectiva. La hiptesis fue comprobada. En cuanto al efecto del factor de la masa de NaCl, mientras ms sea la cantidad de iones de cloro provenientes de NaCl, la actividad enzimtica ser mayor. Por eso, a mayor cantidad de masa de cloruro de sodio, la actividad enzimtica de la amilasa ser ms rpida. La investigacin de fuentes nos permite reconocer que la saliva segregada es acompaada de una cantidad de iones de cloro propia de la secrecin; lo que nos deja una interrogante: Podra variar esta concentracin de iones en diferentes individuos y por tanto una mayor o menor velocidad de reaccin enzimtica de la amilasa? El mtodo usado para realizar la parte experimental si fue eficiente. Sin embargo, la preparacin de soluciones y las cantidades agregadas a los tubos de ensayo deben realizarse con sumo cuidado y precisin, pues a mayor precisin , se podr realizar una

mejor comparacin y visualizacin de los cambios de colores en los tubos de ensayo; lo cual favorece a una mejor marcacin del tiempo.

Bibliografa
1. Alan Fersht. 1980. Estructura y mecanismo de las enzimas. Editorial Reverte S.A. Impreso en Barcelona. 2. Myron L. Bender,Lewis J. Brubacher.2000. CATALISIS Y ACCION ENZIMATICA. Editorial Reverte S.A. ]Impreso en Espaa. 3. Bioqumica 108 (2010). Recuperado el 29 de Agosto del 2010 de: http://bioquimicauabc108.blogspot.com/2010/02/viernes-26-de-febrero-del-2010.html 4. Bioqumica Mdica (2007). http://enceti.blogspot.com/ Recuperado el 28 de Agosto del 2010:

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