UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN CRISTBAL DE HUAMANGA

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS

ESCUELA DE FORMACIN PROFESIONAL DE BIOLOGA

Dermatofitos asociados a micosis superficial humana, Ayacucho 2012.

TESIS PARA OBTENER EL TTULO PROFESIONAL DE BILOGO CON MENCION EN LA ESPECIALIDAD DE MICROBIOLOGA

PRESENTADO POR:

Bach. LUJAN RAMREZ, Yohn Smith

AYACUCHO, PER

2013

DEDICATORIA: A Dios todo poderoso. A mi madre con todo mi amor por su sacrificio, orientacin y apoyo en el logro de mi profesin. A mis hermanos, por el cario brindado y aos compartidos.

ii

AGRADECIMIENTO

A la Universidad Nacional San Cristbal de Huamanga, a

la

Escuela de

Formacin Profesional de Biologa por haberme brindado conocimientos, enseanzas y haberme acogido y forjado como profesional. A los maestros, docentes de la Facultad de Ciencias Biolgicas por sus enseanzas, orientaciones e incesantes esfuerzos en formar profesionales competentes. Mi ms sincero agradecimiento al Mg. Serapio Romero Gaviln, por su asesoramiento, orientacin y aliento permanente en la culminacin y elaboracin del presente trabajo. Al Dr. Vctor Alegra Valeriano y a la Blga. Ruth Huamn de la Cruz, por su apoyo en el desarrollo del presente trabajo.

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NDICE GENERAL Pgina2 DEDICATORIA AGRADECIMIENTO NDICE GENERAL NDICE DE TABLAS NDICE DE FIGURAS NDICE DE ANEXOS RESUMEN I. II. 2.1 2.2 2.3 2.4 2.5 2.6 2.6.1 2.6.2 2.7 2.8 INTRODUCCIN MARCO TERICO Antecedentes Hongos Micosis Micosis superficial Dermatofitosis Dermatofitos Clasificacin de los dermatofitos de acuerdo a su hbitat Clasificacin de dermatofitos de acuerdo a cuadros clnicos Clasificacin taxonmica de los dermatofitos Clasificacin y descripcin de los dermatofitos ii iii iv vi vii viii ix 1 3 3 5 6 6 7 7 9 10 14 15 15 16 17 20 21 22 22 23 25 25 26 26 27 30

2.8.1 Gnero Epidermophyton 2.8.2 Gnero Microsporum 2.8.3 Gnero Trichohyton 2.9 Factores de patogenicidad

2.10 Periodo de transmisibilidad 2.11 Factores predisponentes 2.12 Epidemiologia 2.13 Respuesta inmune a los dermatofitos III. 3.1 3.2 3.3 3.4 3.5 MATERIALES Y MTODOS Aspectos generales de la zona de muestreo Definicin de la poblacin y muestra Diseo metodolgico para la recoleccin de datos Tratamiento de la muestra Anlisis estadstico

iv

IV. V. VI. VII.

RESULTADOS DISCUSIONES CONCLUSIONES RECOMENDACIONES

31 44 50 51 52 56

VIII. REFERENCIA BIBLIOGRFICA ANEXOS

NDICE DE TABLAS Pgina Tabla 1. Clasificacin de los dermatofitos de acuerdo a su hbitat. Tabla 2. Clasificacin taxonmica de los dermatofitos. Tabla 3. Dermatofitos aislados con ms frecuencia en el hombre. Tabla 4. Gneros de dermatofitos con las especies ms frecuentes. Tabla 5. Frecuencia de micosis superficial humana con relacin al gnero, Ayacucho 2012. Tabla 6. Frecuencia de micosis superficial humana con relacin al distrito de residencia, Ayacucho 2012. Tabla 7. Frecuencia de micosis superficial humana con relacin al nivel educativo, Ayacucho 2012. Tabla 8. Frecuencia de micosis superficial humana con relacin a la higiene, Ayacucho 2012. Tabla 9. Frecuencia de micosis superficial humana con relacin al piso de vivienda, Ayacucho 2012. Tabla 10. Frecuencia de micosis superficial humana con relacin al piso del patio del colegio y/o trabajo, Ayacucho 2012. Tabla 11. Frecuencia de micosis superficial humana con relacin a la crianza de animales en la vivienda, Ayacucho 2012. Tabla 12. Frecuencia de micosis superficial humana con relacin al tipo de animal que cra en la vivienda, Ayacucho 2012. Tabla 13. Frecuencia de micosis superficial humana con relacin a la ocupacin, Ayacucho 2012. Tabla 14. Frecuencia de micosis superficial humana con relacin a la localizacin de la micosis, Ayacucho 2012. Tabla 15. Frecuencia de micosis superficial humana con relacin al grupo de edad, Ayacucho 2012. Tabla 16. Frecuencia de especie de hongo dermatofito identificado, Ayacucho 2012. 43 42 41 40 39 38 37 36 35 34 33 32 9 15 18 18

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NDICE DE FIGURAS Pgina Figura 1. Tipos de infeccin del pelo Figura 2. Anatoma de la ua Figura 3. Epidermophyton floccosum Figura 4. Microsporum canis, Microsporum gypseum Figura 5. T. mentagrophytes, T. rubrum y T. tonsurans. Figura 6. Tipos de conidios para los tres gneros anamorfos Figura 7. Tipos de macroconidios, microconidios, clamidosporas e hifas 11 12 16 16 17 19 20

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NDICE DE ANEXOS Pgina Anexo 1. Anexo 2. Anexo 3. Anexo 4. Anexo 5. Anexo 6. Ficha de registro de datos. Consentimiento informado. Flujograma para el aislamiento de dermatofitos. Tcnica de microcultivo. Tcnica de montaje Ua pie y ua mano con signos de micosis superficial humana, Ayacucho 2012. Anexo 7. Brazo y cabeza con signos de micosis superficial humana, Ayacucho 2012. Anexo 8. Toma de muestra y cultivo en placa Petri con agar selectivo para hongos patgenos. Anexo 9. Cultivo de hongo dermatofitos en agar selectivo para hongos patgenos y agar Sabouraud. Anexo 10. Aislamiento de hongos en cmara de flujo laminar y preparacin de cerapios. Anexo 11. Obtencin de posibles cepas de dermatofitos y preparacin para la tcnica de microcultivo. Anexo 12. Cultivo en cmara hmeda y obtencin de hongos filamentos (Tcnica de microcultivo). Anexo 13. Coloracin de estructuras filamentosas con azul de lactofenol e identificacin de especie dermatofito: Trichophyton rubrum. Anexo 14. Identificacin de especie dermatofito: Trichophyton mentagrophytes y estructuras asesoras. Anexo 15. Matriz de consistencia 70 71 69 68 67 66 65 64 63 62 57 58 59 60 61

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Dermatofitos asociados a micosis superficial humana, Ayacucho 2012. Autor : Bach. Lujan Ramrez, Yohn Smith. Asesor : Mg. Serapio Romero Gaviln. RESUMEN Se realiz un estudio bsico descriptivo con el objetivo de aislar e identificar los hongos dermatofitos asociados a micosis superficial humana en 100 personas con aparentes signos de micosis superficial del rea metropolitana de la provincia de Huamanga. Las muestras se tomaron por raspado con ayuda de un bistur y pinza desinfectados de las zonas afectadas de la piel, pelos, uas y espacio interdigital previa desinfeccin del tejido, en caso necesario se usaron hisopos estriles para muestrear el espacio interdigital. Las muestras biolgicas fueron transportadas en sobres de papel lustre con fondo oscuro elaboradas para tal fin, para su procesamiento inmediato al Laboratorio de Micologa y Epidemiologa de la Facultad de Ciencias Biolgicas de la Universidad Nacional de San Cristbal de Huamanga. Las muestras se cultivaron en una primera fase en agar selectivo para hongos patgenos e incubaron por 7 a 14 das a 25C, posteriormente los posibles dermatofitos identificados por sus caractersticas macroscpicas de las colonias fueron repicados en placas Petri conteniendo agar Sabouraud, se incubaron por 7 a 14 das a 25C. Las colonias compatibles a dermatofitos se repicaron en viales conteniendo agar Sabouraud para su posterior identificacin. La identificacin se realiz con base a las caractersticas macroscpicas y microscpicas mediante la tcnica del microcultivo. Se concluye que se encontr una frecuencia de 46% de micosis superficial humana en personas con signos de micosis. Las especies de dermatofitos identificados en orden de frecuencia fueron Trichophyton spp. (21) 45.6%, Trichophyton rubrum (17) 37.0% y Trichophyton mentagrophytes (8) 17.4%, los factores de riesgo asociados estadsticamente a la micosis superficial fueron la frecuencia de higiene (p=0,002), piso de la vivienda (p= 0,000), piso del patio del colegio y/o trabajo (p=0,001) y la crianza de animales en la vivienda (p=0,029). Palabra clave: Dermatofito, micosis superficial humana, Trichophyton.

ix

I.

INTRODUCCIN

Los dermatofitos y las micosis superficiales son las infecciones ms comunes de la piel y motivo frecuente de consulta dermatolgica, las mismas son producidas por dermatofitos y hongos levaduriformes. Los dermatofitos, que tienen la capacidad de digerir la queratina de la piel y nutrirse de ella, comprenden tres gneros: Microsporum, Trichophyton y Epidermophyton, y en funcin a su hbitat se clasifican en geoflicos, zooflicos y antropoflicos, respectivamente.1 Las micosis con mayor incidencia (las dermatofitosis y las candidiasis), son causadas por hongos que forman parte de la flora microbiana normal o estn muy adaptadas para sobrevivir en el husped humano.2 Los dermatofitos son hongos queratinolticos; es decir, tienen la capacidad de digerir y utilizar la queratina como sustrato. Las infecciones producidas por estos hongos se denominan dermatofitosis, aunque comnmente tambin son llamadas tias, trmino que procede del latn tinea y que significa gusano o polilla.3 Las dermatomicosis son frecuentes y estn producidas principalmente por los hongos queratinoflicos tipo dermatofitos, estos hongos son capaces de producir colonizacin en el estrato crneo de las uas, cabello, piel y en algunas ocasiones sus anexos. Para adquirir este tipo de infecciones se requiere del contacto con la fuente como el suelo, animales y puede transmitirse tambin de una persona a otra o por fmites.4

Las lesiones por dermatofitos se han considerado como una de las patologas ms frecuentes de la piel, las manifestaciones clnicas por este grupo de hongos se asocian con, la capacidad que tienen en utilizar la queratina, el tipo de molculas producidas que generan ms o menos inflamacin y el grado de inmunosupresin selectiva que pueden inducir y que permiten a algunos de estos hongos puedan permanecer en el estrato crneo de la piel produciendo manifestaciones crnicas o eventualmente ninguna sintomatologa directa.5 Un gran porcentaje de la poblacin mundial padece y desconoce que las dermatofitosis (tambin denominada tineas o tias) constituyen unas de las infecciones cutneas ocasionadas por hongos ms frecuentes y son uno de los motivos principales de las consultas mdicas por las molestias que ocasionan, como alteraciones estticas y fenmenos inflamatorios o de hipersensibilidad provocados por estos microorganismos.6 Las razones por los que se plante el presente trabajo de investigacin cuyos objetivos fueron los siguientes: Objetivo general Conocer los dermatofitos asociados a micosis superficial humana, Ayacucho 2012. Objetivos especficos Identificar los agentes dermatofitos asociados a micosis superficial humana, Ayacucho 2012. Relacionar los agentes dermatofitos a los factores de riesgo, Ayacucho 2012.

II.

MARCO TERICO

Los dermatofitos son un grupo de hongos potencialmente patgenos para el hombre y los animales, son filamentosos y queratinoflicos por lo que se desarrollan sobre la queratina presente en la piel, uas, pelos, etc. produciendo la enzima queratinasa que degrada la queratina para utilizarla como fuente de nutrientes.7 2.1 Antecedentes

A nivel internacional, nacional y local se cuenta entre otros con los siguientes trabajos. Raimond Sabouraud8, estudi las tineas y los agentes causales de las mismas y public en 1910 el primer monogrfico sobre micologa mdica, titulado Les teignes, que clasificaba a los dermatofitos en cuatro gneros: Achorion, Epidermophyton, Microsporum y Trichophyton. Su laboratorio era considerado el centro de referencia para la micologa mdica en Europa. Aldo Castellani, investigador de dicho centro, describi uno de los dermatofitos ms comunes: Trichophyton rubrum. Entre otras aportaciones de Sabouraud al campo de la micologa, destacan la descripcin de mtodos y medios de cultivo para el aislamiento e identificacin de dermatofitos. Garca y Col.9, aseguran que Microsporum gypseum es un hongo gefilo de amplia distribucin mundial, poco frecuente como agente de dermatofitosis en el hombre. En Cdiz, Espaa, entre 1997 y 2003, fue el quinto dermatofito aislado (6,0%), en 133

casos positivos, despus de Trichophyton mentagrophytes (24,8%), Microsporum canis (24,6%), Trichophyton rubrum (21,8%) y Trichophyton violaceum (6,8%). Sin embargo en 2003, la infeccin por este hongo ha sido observada repetidamente en esa rea (17,5%). Describieron ocho casos de infeccin por M. gypseum. Ruiz y Col.10, indican que de 71 nios de Mazuha, Mxico 2003, el 15,57% presentaron lesiones sugestivas de dermatofitosis en pies y uas. Demostraron infeccin fngica en 13 casos (18%), ocho hombres y cinco mujeres, con edad promedio de 12 y 13 aos, pero slo en siete casos (10%) se aislaron hongos patgenos. Todos tuvieron Tinea pedis y tres de ellos con afeccin de las uas (4,2%); en dos casos se aisl Trichophyton sp y en uno Candida albicans. Sarmiento y Col.11, realiz el estudio de estandarizacin e implementacin de las tcnicas en el diagnstico clnico de micosis cutneas en el laboratorio de micologa de la Pontificia Universidad Javeriana Bogot - Colombia 2006. Donde tomaron muestras a travs de raspados de la zona afectada para observar directamente y en cultivo encontraron que los agentes aislados con mayor frecuencia son Fusarium solani 31%, Trichophyton rubrum 26%, Scopulariopsis 13%, Trichophyton mentagrophytes 8%, Microsporum canis 5% y Epidermophyton floccosum 3%. Bejar y col.12, el estudio sobre Micosis Superficiales realizado en Lima - Per, 1991; de 2130 pacientes con diagnstico clnico, de micosis, realizaron cultivos micolgicos a partir de piel, pelo, cuero cabelludo y uas; donde reportaron 56.61% de casos positivos que tuvieron micosis, confirmando en el cultivo prevalecieron las especies de: T. rubrum 26.4% y T. tonsurans 66.6%. Zamalloa13 , el estudio sobre frecuencia de micosis superficial en escolares de la localidad de San Francisco - La Mar y sus aspectos epidemiolgicos 1997, refiere que se encontr una alta proporcin de micosis en los espacios interdigitales con 48% casos seguidos de onicomicosis con 35% casos.

Salvatierra14, realiz un estudio en dermatomicosis en escolares de Huanta Ayacucho y actividad antimictica de Tropaeolum majus L. mastuerzo, 1995, con un total de 306 muestras de personas que presentaban lesiones drmicas de micosis superficiales de la piel, uas y cuero cabelludo, 156 (50,98%) fueron positivos, observ una incidencia similar en hombres y mujeres, el hongo que ms aisl y con mayor frecuencia fue T. rubrum (27,58%) seguido de Candida spp (23,08%) y T. tonsurans (66,6%). Romero y Col.15, realizaron un estudio de dermatofitosis en estudiantes de la Institucin Educativa San Juan de la Frontera, Ayacucho-Per 2010; Se hallaron la frecuencia de 68% de dermatofitosis, 47% en muestras de los espacios interdigitales, 61.8% en nios que cran animales domsticos, 88.2% en aquellos cuyo piso de la vivienda es de tierra, no se encontr diferencia por gnero. La especie de dermatofito ms frecuente fue T. mentagrophytes (48.5%) seguido de T. rubrum (26.5%). 2.2 Hongos

Los hongos son microorganismos eucarioticos y cada clula fngica posee al menos un ncleo y membrana nuclear, retculo endoplasmatico, mitocondrias y aparato secretor. La mayor parte de los hongos son aerbicos obligados o facultativos. Son quimiotrpicos secretores de enzimas que descomponen gran variedad de sustratos orgnicos para dar nutrimentos solubles, que despus se absorben pasivamente o son captados por la clula mediante transporte activo. La mayor parte de los hongos patgenos son exgenos, siendo sus hbitats naturales el agua, el suelo y los desechos orgnicos.16 Segn Deacon4, son organismos eucariticos miceliales, heterotrficos que se alimentan por absorcin, cuyas caractersticas son: Son eucariotas y heterotrficos. Presentan talo micelial, levaduriforme y pseudomicelial.

 2.3

Las hifas muestran crecimiento apical. Sus paredes celulares son rgidas y estn formadas por quitina. Se alimentan a travs de su pared celular por absorcin. Se reproducen a travs de esporas sexuales y asexuales.

Micosis

Se conocen as a todas las infecciones clnicas producidas por los hongos en el hombre y animales, viven en la naturaleza (suelo agua y aire), la mayora de las micosis se adquieren por inhalacin, ingestin o inoculacin de esporas e implantacin traumtica. De acuerdo a la ubicacin de las infecciones, las micosis se clasifican en superficiales, subcutneas, sistmicas.7 2.4 Micosis superficial

Se denominan micosis superficiales a aquellas en las que el hongo coloniza la superficie queratinizada produciendo infecciones de la piel y anexos cutneos (pelo, piel y uas) producidas por diferentes especies de hongos. Las micosis superficiales vienen dadas por la localizacin del proceso que no va ms all del epitelio o capa ms externa de la piel. El hongo puede limitarse a la piel, pelo o uas con escasa respuesta inflamatoria y provocando un problema fundamentalmente esttico, u ocasionando una respuesta inflamatoria, aguda o crnica, ms o menos importante. Adems se producen reacciones alrgicas a los hongos provocando una lesin a distancia del lugar inicial de la infeccin.2 Denominado tambin dermatofitosis, se refiere aquellas lesiones producidas por un grupo especial de hongos que se encargan de colonizar la capa cornificada de la piel y sus anexos produciendo una variedad de manifestaciones clnicas cuya intensidad est asociada con el nicho ecolgico del hongo, con el tipo de respuesta inmune inducida con factores ambientales y posiblemente con factores genticos por parte del hospedero.5

Entre los siguientes tipos de micosis superficiales tenemos: Superficiales propiamente dichas Pitiriasis versicolor Tia negra Piedras Superficiales Dermatofitosis Candidiasis 2.5 Dermatofitosis

As se denomina a la infeccin de los tejidos queratinizados (piel, pelos y uas) ocasionada por un grupo de hongos queratinoflicos, taxonmicamente relacionados, a los que se ha denominado dermatofitos. Las dermatofitosis o tias son una variedad de infecciones micticas superficiales, cosmopolitas, que afectan a personas de cualquier edad, raza, sexo, ocupacin y nivel econmico. Son producidas por un grupo especfico de hongos filamentosos llamados dermatofitos.2 La infeccin puede estar limitada a la capa crnea o llegar a estratos ms profundos, sin invasin linftica. Estas micosis cutneas se encuentran entre las infecciones de mayor prevalencia en el mundo y dado que producen lesiones fcilmente observables, su presencia en el ser humano est documentada a lo largo de la historia.17 2.6 Dermatofitos

Los dermatofitos son un grupo de hongos estrechamente relacionados que tienen la capacidad de invadir tejidos queratinizados ( piel, pelos y uas ) produciendo infeccin en el hombre y en los animales, dermatofitosis, comnmente llamadas tias. La infeccin es generalmente cutnea y restringida a las capas cornificadas

por su incapacidad de penetrar tejidos profundos u rganos de huspedes inmunocompetentes.7 La etimologa del trmino dermatofito es muy antigua: proviene de los trminos griegos derm (que significa piel) y phyte (que significa planta). Sin embargo, debido a que los dermatofitos no estn filogenticamente relacionados con las plantas (como se crea antiguamente). Los dermatofitos son un grupo de hongos filamentosos taxonmicamente relacionados que tienen la capacidad de producir infecciones en la piel, el pelo y las uas tanto del ser humano como de los animales, invaden el tejido crneo de la piel y sus anexos.3 Los dermatofitos producen una variedad de enzimas digestivas con las que degradan su alimento, entre las que se encuentra la queratinasa. Esta enzima degrada la queratina por lo que estos hongos tienen la capacidad de invadir y alimentarse de los tejidos queratinizados de los animales, como el estrato crneo de la piel, las uas, el pelo, las pezuas, las escamas, las plumas, los cuernos, etc. Esto les permite crecer y reproducirse en cualquier medio que contenga queratina. Los dermatofitos son hongos queratinolticos; es decir, tienen la capacidad de digerir y utilizar la queratina como sustrato.3 Las infecciones producidas por estos hongos se denominan dermatofitosis, aunque comnmente tambin son llamadas tias, trmino que procede del latn tinea y que significa gusano o polilla.3 Los dermatofitos corresponden a un grupo de hongos miceliares que se caracterizan por: Su queratinofilia, es decir, su apetencia por desarrollarse sobre la queratina, escleroprotena insoluble presente en la piel y sus anexos.

Su actividad queratinoltica, capacidad (queratinasas)

de

producir

enzimas

que permiten la asimilacin de la queratina como

nutriente del hongo. 2.6.1 Clasificacin de los dermatofitos de acuerdo a su hbitat

Hasta el momento se han descrito a aproximadamente 40 especies de dermatofitos, los cuales adems, por su nicho ecolgico se han clasificado en tres grupos: Los antropoflicos, los zooflicos y los geoflicos. Los antropoflicos y zooflicos viven en la piel de personas o animales respectivamente; mientras que los geoflicos permanecen en restos de queratina que caen en el suelo y que estn en proceso de descomposicin; estos se diferencian de los zooflicos por su persistencia en la tierra y por ser encontrados habitualmente en hbitats no modificados por la presencia constante de animales; se cree que desde el punto de vista filogentico son los ms antiguos.18 Los hongos zooflicos y geoflicos tienen una mayor capacidad que los antropoflicos de generar ascomas y ascas; sin embargo, es ms frecuente el heterotalismo en los geoflicos que en los antropoflicos.18
Tabla 1. Clasificacin de los dermatofitos de acuerdo a su hbitat

Antropoflicos E. floccosum M. audouinii M. ferrugineum T. concentricum T. interdigitales T. rubrum T. schoenleinii T. tonsurans T. violaceum

Zooflicos M. canis M. gallinae M. persicolor T. erinacei T. mentagrophytes T. simii T. verrucosum

Geoflicos M. amazonicum M. cookei M. fulvum M. gypseum M. manum M. praecox M. racemosum T. ajelloi T. phaseoliforme T. terrestre
19 17

Basada en datos publicados por Grser y Rubio

2.6.2

Clasificacin de los dermatofitos de acuerdo a cuadros clnicos

Los hongos dermatofitos son altamente especializados y tiene la propiedad comn de degradar y utilizar la queratina produciendo una variedad de lesiones clnicas llamadas tias. Las tias pueden localizarse en diferentes zonas del cuerpo, recibiendo nombres especficos como: Tinea capitis en el cuero cabelludo y pelos, Tinea corporis en el cuerpo, Tinea manus en las manos, Tinea pedis en los pies, Tinea cruris en la ingle y parte superior del muslo y tia de las uas u onicomicosis, en este ltimo caso son afectadas las uas de la mano y de los pies.13 Las dermatofitosis presentan diferentes manifestaciones clnicas dependiendo del rea anatmica afectada y de la especie implicada en la infeccin. Clnicamente, se suele utilizar la palabra latina tinea seguida de la zona del cuerpo afectada (ejemplo: tinea capitis si la infeccin afecta al cuero cabelludo). Un individuo puede estar infectado por una o varias especies en varias reas anatmicas correspondiendo cada foco infeccioso a una inoculacin local.20 a. Tinea capitis o tia de la cabeza Esta dermatofitosis afecta la piel de la cabeza y/o el pelo principalmente en nios, aunque los adultos tambin pueden verse afectados. Pueden ser de dos tipos: Inflamatorias: Son producidas principalmente por las especies T. tonsurans, T. violaceum, T. mentagrophytes y T. schoenleinii, aunque algunas especies de Microsporum tambin pueden causar inflamacin. Las lesiones se caracterizan por presentar desde numerosas pstulas foliculares y abscesos hasta la formacin del llamado querion de Celso. Esta ltima lesin se caracteriza por la presencia de placas descamativas e inflamatorias adheridas al pelo y se manifiesta con eritema, edema, formacin de costras y la presencia de abscesos. La lesin es dolorosa y suele acompaarse de fiebre y adenopatas retroauriculares y laterocervicales. Esta infeccin est causada por T. mentagrophytes y T. verrucosum.20

10

No inflamatorias: Las tias tricofticas antropoflicas se caracterizan por presentar lesiones no inflamatorias que se manifiestan como una placa eritematosa de bordes descamativos y bien delimitados. Los cabellos en el interior de la escama aparecen fragmentados y ofrecen un aspecto de

puntos negros. Esta infeccin es causada por T. tonsurans y T. violaceum.18 Las tias microspricas se caracterizan por la presencia de una placa escamosa, blanquecina, de amplio dimetro y en la que se encuentran pelos parasitados de poca longitud. Los agentes causales son M. canis y M. audouinii. La infeccin en el pelo puede ser de dos tipos: ectotrix cuando los pelos estn parasitados en su superficie afectando el tallo capilar; o de tipo endotrix cuando el pelo est infectado en su interior.20

Figura 1. Tipos de infeccin del pelo. A) ectotrix; B) endotrix

b. Tinea corporis o tia del cuerpo Esta dermatofitosis localizada en el tronco, hombros, extremidades y cara afecta tanto a nios como adultos. La lesin tpica se denomina herpes circinado o tinea circinada debido al aspecto anular de las lesiones que forman una circunferencia. Al comienzo de la infeccin, las lesiones presentan una pequea placa escamosa que, con el tiempo, se va extendiendo sobre la piel. La manifestacin clnica de este tipo de tinea es variable, por lo que puede confundirse con otras dermatosis.20 Estas infecciones pueden ser de tres tipos:

11

Inflamatorias: Las lesiones son poco eritomatosas y son generalmente causadas por Microsporum spp.

Inflamatorias agudas: Las lesiones son muy inflamatorias y eritematosas, compuestas de pstulas y vesculas; son generalmente causadas por Trichophyton spp.

Severas: En pacientes con alteraciones del sistema inmunitario, las lesiones pueden ser generalizadas. La infeccin del folculo piloso puede invadir el estrato drmico de la piel ocasionando lesiones muy inflamatorias denominadas granuloma de Majocchi o granuloma perifolicular. El principal agente causal es T. rubrum.21

El uso de esteroides tpicos puede cambiar la apariencia clnica de la tinea corporis y ocasionar tinea incognito. Otra forma de tinea corporis es la llamada tinea imbricata. Las lesiones se caracterizan por presentar crculos concntricos y son causadas por T. concentricum.20 c. Tinea unguium o tia de las uas Reciben este nombre las dermatofitosis localizadas en las uas de las manos y pies. El 90% de todas las onicomicosis estn representadas por este tipo de tinea. Las uas pueden estar afectadas en diferentes zonas anatmicas (Fig. 3).

Figura 2. Anatoma de la ua

Los agentes causales pertenecen a los tres gneros de dermatofitos, pero sin duda es T. rubrum el principal agente causal.21

12

Las onicomicosis pueden clasificarse en cinco formas clnicas.21 Onicomicosis subungual distal-lateral (OSDL): Es la forma clnica ms comn. La infeccin comienza en el borde libre y los laterales de la parte ventral de la ua (hiponiquio). Onicomicosis blanca superficial (OBS): Afecta principalmente a la

tercera y cuarta ua de los pies. La infeccin comienza por la superficie dorsal de la placa de la ua. Onicomicosis subungual proximal (OSP): La ua comienza a ser

invadida por la parte proximal (lnula). Esta forma clnica puede, a su vez, englobar otro tipo de manifestacin muy comn en individuos subungueal

inmunocomprometidos

denominada

onicomicosis

blanca

proximal, la cual afecta principalmente la primera ua del dedo del pie. Onicomicosis endonix (OE): Esta forma clnica ha sido recientemente introducida en la clasificacin. Est asociada a infecciones del cuero cabelludo causadas por T. tonsurans o T. violaceum. En este caso, la infeccin comienza por la zona superficial de la ua e invade las capas profundas de la placa ungueal. Onicomicosis distrfica total (ODT): Es la forma ms severa. La ua est afectada en su totalidad. d. Tinea peds o tia de los pies Tinea peds es la infeccin ms comn causada por dermatofitos. Afecta a los espacios interdigitales de los dedos y a la planta de los pies. Tambin llamada pie de atleta debido a su elevada frecuencia entre los deportistas, probablemente debido al uso frecuente de calzado cerrado. rubrum.22 El principal agente causal es T.

13

Esta dermatofitosis suele presentar tres formas clnicas: Inflamatoria: Presencia de lesiones vesiculares generalmente en la regin dorsal del pie generalmente acompaadas de prurito y dolor.22 Interdigital: Lesiones macerativas y descamativas generalmente en el cuarto y quinto espacio interdigital.22 Mocasn: Lesiones eritematosas y descamativas de la planta del pie. Estas infecciones suelen ser crnicas y recurrentes.22 e. Otras dermatofitosis Otras dermatofitosis menos comunes son tinea cruris (dermatofitosis en las ingles), tinea manum (dermatofitosis en las manos) o tinea barbae (dermatofitosis en la barba). En pacientes inmunodeprimidos, suelen presentarse dermatofitosis atpicas donde el hongo infecta el tejido no queratinizado y provoca micetomas.23 2.7 Clasificacin taxonmica de los dermatofitos

La primera propuesta taxonmica para la clasificacin de los dermatofitos fue realizada por Emmons y Col.24, 1934. Los clasificaron en tres gneros: Microsporum, Trichophyton y Epydermophyton. Dicha clasificacin estaba basada en las caractersticas de los conidios, clulas reproducidas mediante una fase asexual, nica forma de reproduccin conocida hasta entonces. Sin embargo, a partir de 1960, varios estudios revelaron que los dermatofitos tambin podan reproducirse sexualmente mediante ascosporas; as pasaron a ser clasificados como ascomicetos dentro de la familia Gymnoascaceae.25 El descubrimiento del heterotalismo (dos tipos sexuales diferentes) y de la reproduccin sexual mediante ascosporas, se volvi una herramienta indispensable para la resolucin de un nmero importante de problemas taxonmicos. La taxonoma de los dermatofitos y su identificacin rutinaria en el laboratorio de Micologa clnica se basa fundamentalmente en criterios morfolgicos, macro y

14

microscpicos, relacionados con la fase de reproduccin asexual. Taxonmicamente (Tabla 2) se engloban en la divisin Eumycota, subdivisin Deuteromicotina, clase Hyphomycetes, orden Moniliales y familia Moniliaceae.26 Tabla 2. Clasificacin taxonmica de los dermatofitos
Reino Divisin Asexuados Subdivisin Clase Orden Familia Gnero Fungi Eumycota Deuteromycotina Hyphomycetes Moniliales Moniliaceae Epidermophyton Microsporum Trichophyton

2.8

Clasificacin y descripcin de los dermatofitos

Los dermatofitos son un grupo extenso y homogneo de hongos con caractersticas taxonmicas, antignicas, fisiolgicas y patognicas similares, distinguindose entre s por sus caractersticas macroscpicas y microscpicas, as como sus

propiedades enzimticas y nutricionales. Se clasifican en tres gneros: Microsporum (M), Trichophyton (T) y Epidermophyton (E).27 2.8.1 Gnero Epidermophyton

Las colonias son de crecimiento lento, al principio granulosas, luego se tornan aterciopeladas y pulverulentas, de color amarillo intenso o marrn amarillento; la superficie puede ser plana o plegada con centro cerebriforme. Los macroconidios son abundantes, claviformes, de pared lisa, pueden presentar de 1 a 9 septos y se disponen en grupos o aisladas. Los microconidios estn ausentes. Este gnero tiene dos especies reconocidas hasta el momento y nicamente E. floccosum (Figura 4) es patgeno humano.28, 30

15

Figura 3. Epidermophyton floccosum Macroconidios en agar Sabouraud, 15 das, 28C, Lactofenol azul de algodn, 400X.

2.8.2

Gnero Microsporum

Las colonias son de crecimiento rpido, planas, algodonosas pudiendo tornarse granulosas. Los colores en el anverso y reverso dependen de la especie. Los macroconidios son abundantes, fusiformes, de pared gruesa o delgada, lisa o rugosa y presentan 1 a 15 septos. Los microconidios son claviformes y crecen ssiles o sobre pequeos pednculos. Usualmente se disponen a lo largo de la hifa. Las especies cosmopolitas asociadas a infeccin en humanos son principalmente M. canis y M. gypseum (Figura 5). Otras especies estn restringidas geogrficamente, tal es el caso de M. audouinii que se asla con frecuencia en Estados Unidos y en algunas regiones de frica.28, 40

Figura 4. (a) Microsporum canis, (b) Microsporum gypseum. Macro y microconidios, en agar Sabouraud, 15 das, 28C, 400X. Puede observarse las diferencias en la morfologa y en el grosor de la pared entre los macroconidios de ambas especies.

16

2.8.3

Gnero Trichophyton

La velocidad de crecimiento, la morfologa y el pigmento de las colonias, vara de acuerdo a la especie. Los macroconidios pueden estar en escaso nmero o ausentes; son elongados, se caracterizan por tener paredes lisas y delgadas con 1 a 12 septos; nacen solitarios o en grupos. Los microconidios son abundantes, pueden ser globosos, piriformes o claviformes; su disposicin es solitaria o en grupos a ambos lados de la hifa sobre pednculos o ssiles, dependiendo de la especie (Figura 6)20, 28, 30 Las especies cosmopolitas ms frecuentemente involucradas en patologa humana son: T. rubrum, T. mentagrophytes y T. tonsurans. Existen otras especies, tambin cosmopolitas que se diagnostican con mucho menor frecuencia como el T. shoenleinii y T. violaceum.28, 30

Figura 5. Disposicin caracterstica y morfologa de los conidios de: (a) Trichophyton mentagrophytes, abundantes microconidios globosos dispuestos en racimos y presencia de hifas en espiral; (b) Trichophyton rubrum; microconidios claviformes dispuestos a lo largo de la hifa; (c) Trichophyton tonsurans, microconidios ovoides, piriformes y claviformes, dispuestos a lo largo de las hifas, los macroconidios son de forma irregular y escasos o ausentes. Agar Sabouraud, 15 das, 28C, 400X.

Actualmente, utilizando mtodos moleculares muchos gneros de dermatofitos estn siendo reclasificados e inclusive especies como T. rubrum y T. mentagrophytes son considerados, cada uno, un complejo de especies.19 Sin embargo, la falta de directrices claras con respecto a la taxonoma de estas especies y la imposibilidad de muchos centros de diagnstico de identificar molecularmente los aislamientos, hace que la taxonoma clsica sea la ms utilizada. Los gneros que agrupan a las especies productoras de dermatomicosis son:

17

Epidermophyton, Microsporum y Trichophyton, otras especies se distribuyen de forma ms o menos regular por todo el mundo, en efecto, tan slo 10 especies (Tabla 3), se aslan con una frecuencia elevada en la mayora de los laboratorios de Micologa clnica humana, representando el 99% de los cultivos positivos. De estas, nicamente seis especies: E. floccosum, M. canis, M. gypseum, T. rubrum, T. mentagrophytes y T. tonsurans, pueden llegar a ser las responsables de ms del 90% de los casos.29
Tabla 3. Dermatofitos aislados con ms frecuencia en el hombre Gnero Epidermophyton Microsporum Especie floccosum canis gypseum audouinii mentagrophytes rubrum verrucosum violaceum schoenleinii tonsurans

Trichophyton

Tabla 4. Gneros de dermatofitos con las especies ms frecuentes y algunas de las infecciones que suelen producir.

MICROSPORUM M. canis M. audouini M. gyseum TRICHOPHYTON T. mentagrophytes T. rubrum T. tonsurans T. schoenleini EPIDERMOPHYTON E. floccosum

Invaden piel, pelo y cabello. Dermatomicosis de animales, causan lesiones en anillo, Tia capitis. Tia capitis, epidrmica de los nios. Lesiones en anillos, Tia capitis. Invade piel, pelo y uas. Pie de atleta, diversas infecciones de piel y uas. Pie de atleta, Tia cruris. Tia capitis. Favus. Invade piel y uas. Pie de atleta, Tia cruris. 31 Fuente: Valdivia.

18

Las caractersticas morfolgicas macroscpicas y microscpicas de algunas especies de dermatofitos estn representadas en la Figura 7.

Segn Emmons Figura 6. Tipos de conidios para los tres gneros anamorfos. a) macroconidios; b) hifas espiraladas; c) cuerpos nodulares; d) microconidios; e) artroconidios; f) hifas en raqueta.

24

19

Figura 7. Diferentes tipos de macroconidios (a-f), microconidios (g-j), clamidosporas (k-m) e hifas (n-p).

2.9

Factores de patogenicidad

Las estructuras de los dermatofitos ms frecuentemente asociadas con el contagio, especialmente por especies con pobre produccin de esporas son: las artroconidias o clamidoconidias; cada una es una forma de resistencia del hongo que puede durar aos en el ambiente y por lo tanto tiene la capacidad de soportar las temperaturas altas, especialmente si estn entre escamas de piel o restos de cabellos.18 Las conidias germinan y empiezan a desarrollar hifas, se adhieren a la queratina y tratar de penetrar partes ms profundas de la piel; para ello hay diferentes mecanismos que facilitan la penetracin: una de ellas es la liberacin de enzimas

20

proteolticas como los glicopptidos y las queratinasas.18 En el ser vivo, los artroconidios se adhieren fuertemente a la membrana externa de las clulas del estrato crneo de la piel. Estos se van desarrollando hasta formar hifas las cuales van penetrando e invadiendo las clulas queratinizadas.32 La queratina es el sustrato que los dermatofitos necesitan para obtener los nutrientes necesarios para su desarrollo. Los dermatofitos metabolizan y digieren esta protena gracias a la produccin de lipasas, endopeptidasas, glucosidasas, nucleasas, queratinasas, colagenasas y elastasas. Estas enzimas, adems de favorecer la penetracin y el desarrollo micelial en el tejido queratinizado, ocasionan en el husped respuestas inmune de tipo inflamatorio.20 El suelo es el hbitat natural de varias especies geoflicas de los gneros Microsporum y Trichophyton. La infeccin a humanos ocurre tanto por animales infectados como por contacto directo con el suelo contaminado.20 Las dermatofitosis pueden adquirirse por contacto directo o indirecto con objetos contaminados (peines, cepillos, sombreros, calzado, instrumentos para limpiar las uas o ropa). La especie zooflica, M. canis puede infectar a varios miembros de una familia por contacto directo con animales de compaa (perros o gatos) o indirectamente a partir de alfombras, ropa contaminada o animales sanos que actan como portadores.32 2.10 Periodo de transmisibilidad

El hongo viable persiste por largo tiempo en los materiales contaminados. Algunos elementos fngicos pueden permanecer viables en el estadio seco durante cinco a siete aos, as el M. canis puede vivir un mnimo de trece meses.33 Las esporas fngicas pueden mantenerse viables durante al menos dieciocho meses, sobre todo en ambientes clidos.29

21

2.11

Factores predisponentes

Diversas circunstancias pueden favorecer estas infecciones: Uno de los factores es el clima, ya que en lugares hmedos y tropicales se observa el mayor nmero de infecciones micticas pero tambin en climas secos en el que predominan los dermatofitos de habitas geofilicos. Otro factor importante son los malos hbitos higinicos, el hacinamiento, el uso de zapatos cerrados, las zapatillas, ropa sinttica, etc. Otros factores predisponentes implicados son el calor, la oclusin, traumatismos, diabetes, tratamientos con corticoides, prcticas deportivas,

infecciones por HIV, etc.27 Los factores de riesgo ms comunes son: la humedad de diferentes reas del cuerpo por el no secado adecuado o por la inadecuada ventilacin que aumenta la hidratacin y la emisin de CO2, que pueden favorecer el crecimiento del dermatofitos; abrasin por el uso de calzado estrecho; aumento de la concentracin del inoculo, por el no cambio frecuente de la ropa interior y de los zapatos; el uso de piscinas, pero sobre todo de las reas adyacentes a la misma las cuales deben ser rugosas, factor que contribuye a la deposicin del hongo; duchas y vestidores pblicos, son sitios que por la humedad y el poco contacto con la luz directa asociado con el aseo deficiente o inadecuado permiten que las esporas permanezcan; el intercambio de toallas, ropa interior y ropa de cama; ser deportistas siendo los ms comprometidos aquellos que presentan mayor traumatismo en la piel como los atletas o aquellos que presentan mayor reblandecimiento de la queratina como los nadadores; haber tenido un trauma previo; el desplazamiento de grupos poblacionales y los viajes frecuentes.18 2.12 Epidemiologia

La distribucin de la dermatofitosis es universal, predominan en las zonas tropicales con climas clidos y hmedos, existiendo diferencias en cuanto a la distribucin geogrfica de las distintas especies de dermatofitos, afecta ambos sexos y todas las

22

edades. La frecuencia global de las micosis superficiales es muy alta, segn la OMS es del 20 a 25% de la poblacin general, de ellos 5 -10 % son por dermatofitos. Los seres humanos pueden contraer la enfermedad de animales infectados: perros, gatos y otros animales no domsticos.26 La incidencia y aislamiento de las distintas especies de dermatofitos vara mucho de unas regiones a otras del mundo siendo influidas por mltiples factores como: edad, sexo, grupo tnico, hidratacin, humedad, poder patgeno, resistencia del husped, fuente de infeccin, etc. Los dermatofitos tienen distribucin mundial, pero algunos se limitan a zonas geogrficas especficas; la distribucin geogrfica es dinmica, dados los movimientos migratorios, cambios climticos, modos de vida, universalizacin de prcticas deportivas, hbitos de salud, o viajes tursticos. Constituyen 15% de todas las micosis y tienen una frecuencia de 50% en la consulta dermatolgica.20 Son micosis cosmopolitas que predominan en zonas tropicales, se consideran como las ms frecuentes de las enfermedades por hongos. Afecta a sujetos de cualquier edad, raza o sexo, as como de cualquier medio socioeconmico u ocupacin. Las epidemias que afectan la cabeza estn relacionadas con T. tonsurans e infecciones subclnicas o fmites, y las relacionadas con M. canis estn en asociacin con perros y gatos; otras infecciones fuera de la cabeza estn relacionadas con hongos antropoflicos como los casos de T. rubrum.20 2.13 Respuesta inmune a los dermatofitos

Los dermatofitos inician la infeccin por un fenmeno de adherencia a la capa crnea, despus estos elementos germinan y empiezan la invasin de los queratinocitos; la infeccin se confina al estrato corneo y los anexos, excepcionalmente se afecta la capa granulosa. La colonizacin produce una

reaccin del husped debida a los productos metablicos del hongo que actan como factores de virulencia; las queratinasas o proteasas digieren queratina y liberan

23

antgenos (glucoprotenas) fngicos; las elastasas estn relacionadas con enfermedad aguda y las lipasas vinculadas con enfermedad crnica. En algunos pacientes hay reaccin inflamatoria intensa, en otros es mnima e incluso puede haber un comensalismo asintomtico entre hongo y husped: en la mayora la principal caracterstica es un infiltrado linfocitario perivascular en dermis superficial, y en fases tempranas de lesiones muy inflamatorias hay acumulacin perifolicular de neutrfilos; ms tarde, presencia de clulas gigantes alrededor de los folculos destruidos.32 La resistencia a las infecciones por dermatofitos puede inducir mecanismos, tanto inmunolgicos como no inmunolgicos. La colonizacin en el husped va a producir una reaccin debida a productos metablicos del hongo, digestin de queratina y liberacin de antgenos. La respuesta del husped depender de dos factores: 1. De la especie causal; se ha observado que las cepas de morfologa granular tienen produccin elevada de enzimas; tambin es probable que algunas cepas produzcan sustancias que eliminan las bacterias adyacentes y se sabe que la produccin de artroconidios se relaciona con la forma parasitaria. 2. Del grado de hipersensibilidad del husped: incluso se ha propuesto una actividad reguladora de proteasas, y quiz influya la temperatura y la localizacin de la enfermedad. Hay respuesta IgG, lgM, lgA e IgE y cierta evidencia de que los mnanos producidos por el hombre suprimen o disminuyen la respuesta inflamatoria. El desarrollo de inmunidad celular (IC) correlaciona hipersensibidad retardada y se asocia con curacin clnica y eliminacin del dermatofito; mientras que la falta o defectos de la IC predisponen al husped a dermatomicosis crnica o recurrente.26, 27

24

III.

MATERIALES Y MTODOS

Se realiz un estudio bsico descriptivo de octubre 2012 a febrero del 2013, en el Laboratorio de Micologa y Epidemiologa de la Facultad de Ciencias Biolgicas de la Universidad Nacional de San Cristbal de Huamanga, con el objetivo de aislar, identificar, y determinar la frecuencia o relacin de los hongos dermatofitos asociados a micosis superficial humana, Ayacucho 2012. 3.1 Aspectos generales de la zona de muestreo

Provincia de Huamanga La provincia de Huamanga es una de las once que conforman el departamento de Ayacucho, bajo la administracin del gobierno regional de Ayacucho. Limita al norte con la provincia de Huanta, al este con la provincia de La Mar y la regin Apurmac, al sur con la provincia de Vilcas Huamn y la provincia de Cangallo y al oeste con la regin Huancavelica. Divisin administrativa La provincia tiene una extensin de 2 981,37 kilmetros cuadrados y se encuentra dividida en quince distritos con una poblacin aproximada de 191 287 habitantes, el
rea metropolitana de la provincia de huamanga est constituida por los distritos de San Juan Bautista, Jess Nazareno, Carmen Alto y el distrito de Ayacucho que es su capital. La ciudad tiene un clima clido seco y templado.

25

3.2

Definicin de la poblacin y muestra a. Poblacin

Estuvo constituida por las personas con aparentes signos de micosis superficial humana del rea metropolitana de la provincia de Huamanga. Criterios de inclusin Personas con presencia de micosis superficial. Ambos sexos. Toda edad. Residentes de la ciudad de Huamanga.

Criterios de exclusin b. Personas que no acepten que se practique el anlisis. Personas visitantes. Personas que no presentan signos de micosis. Tamao de la muestra

El tamao de la muestra estuvo constituida por 100 personas voluntarias con signos de micosis superficial que cumplan con los criterios de elegibilidad del rea metropolitana de la provincia de Huamanga. c. Sistema de muestreo

No probabilstico, por conveniencia. 3.3 Diseo metodolgico para la recoleccin de datos a. Consentimiento y/o asentimiento

Se brind consentimiento informado a cada uno de los participantes, a quienes previamente se les hizo llenar una ficha de registro de datos y que se les inform sobre los objetivos del estudio y los posibles daos para su salud. b. Recoleccin de datos epidemiolgicos

Se obtuvo entrevistando a cada paciente con signos de micosis superficial

26

antes de realizar el muestreo y se realiz el llenado de la ficha epidemiolgica. c. Obtencin de la muestra biolgica

Se tom la muestra observando los signos de micosis superficial de las partes afectadas por los dermatofitos.34 Se rasp la zona afectada (cara, cuello, tronco, brazos, pierna, pie, ua de manos y pies) con ayuda de un bistur debidamente desinfectado y previa desinfeccin del tejido infectado y de las zonas hmedas con hisopos estriles embebidos con solucin salina fisiolgica.20 d. Transporte de la muestra

Cada una de las muestras fue transportada para su procesamiento inmediato al Laboratorio de Micologa y Epidemiologa de la Facultad de Ciencias Biolgicas de la Universidad Nacional de San Cristbal de Huamanga, en sobres de papel lustre con fondo oscuro y para las zonas hmedas (interdigitales, plantar, etc.) en viales estriles conteniendo una gota de solucin salina fisiolgica al 2%, cerrados y rotulados correctamente.20 3.4 Tratamiento de la muestra Examen directo Las muestras biolgicas se observaron microscpicamente mediante un examen en fresco usando hidrxido de potasio. Se coloc la muestra en el centro de un portaobjetos y se le agreg una gota de KOH al 10%. Se mezcl y se cubri con un cubreobjetos y se calent suavemente a la llama del mechero, para luego ser observado al microscopio a 40X.2, 20 Los exmenes directos realizados se consideraron como positivos cuando se observ hifas tabicadas, delgadas o artrosporadas en la muestra, para su posterior examen en cultivo. Esto se realiz solo para la orientacin en el trabajo de laboratorio.

27

Cultivo de la muestra Se dej caer pequeas porciones de muestra biolgica en placas Petri conteniendo agar selectivo para hongos patgenos y otros con agar Sabouraud.7 a. Aislamiento

Se cultiv en una primera fase con agar selectivo para hongos patgenos (Merckoplate) que contiene cicloheximida y cloranfenicol (cicloheximida que sirve para la seleccin de dermatofitos y cloranfenicol que inhibe considerablemente a la mayora de bacterias y mohos) e incub por 7 a 14 das a 25C, posteriormente los posibles dermatofitos identificados por sus caractersticas macroscpicas de colonias (superficie, textura, presencia y color de pigmento) fueron repicados en otras placas Petri conteniendo agar Sabouraud por un espacio de 7 a 14 das a 25C en incubacin. Cuando se observ una o ms colonias compatibles macroscpicamente con colonias de dermatofitos, se repic en viales con agar Sabouraud e incub por 7 a 14 das a 25C para la identificacin de las cepas.7, 20 b. Identificacin Examen macroscpico

Se consider las caractersticas culturales tales como el color de las colonias, su textura, velocidad de crecimiento de las colonias y la presencia de pigmento difusible en el agar. De forma general, la mayora de las cepas de dermatofitos presentan colores claros, con gamas de colores restringidos a tonos blanquecinos, amarillentos o marrones.20 Luego se realiz el microcultivo donde se observ las caractersticas microscpicas, para su identificacin.2, 20

28

Examen microscpico

Las preparaciones realizadas luego del microcultivo con azul de lactofenol, se observ al microscopio con una magnificacin de 400X. Se observ todas las estructuras microscpicas a tener en cuenta para la identificacin del dermatofito tales como la morfologa, el tamao, el nmero de septos, el grosor de la pared de los macroconidios y la morfologa y la disposicin de los microconidios sobre las hifas. Otras caractersticas tales como la presencia de clamidosporas, hifas en espiral, hifas en raqueta. La identificacin de las cepas se realiz bsicamente teniendo en cuenta los criterios de Rebell35 y Kane.3 3.4.1 Tcnica del microcultivo

Tambin llamado cmara hmeda. Es til para la identificacin de especies de hongos filamentosos. Permite la observacin de las estructuras microscpicas de hongos filamentosos que se distinguen con facilidad sin distorsin, alteracin o rompimiento de las mismas, esto pasa cuando el hongo se desarrolla directamente debajo del cubreobjetos. Forma parte de las pruebas para identificar gnero y especie. screening Se prepararon los dispositivos para el microcultivo y se llevaran a esterilizar. En condiciones estriles se coloc una pequea porcin de Agar Sabouraud sobre la lmina de portaobjetos. Se coloc la lmina con una porcin de Agar Sabouraud en una placa Petri, sobre una varilla en forma de U. Se sembr las colonias caractersticas de hongos con ayuda de un asa de kolle por los extremos del Agar.

29

Se cubri luego con una laminilla previamente desinfectada con metanol. Se agreg a la placa una pequea cantidad de agua estril, esto para humedecer el medio de cultivo.

Se incubaron a temperatura ambiente por 7 a 14 das hasta observar la presencia de crecimiento del hongo y la formacin de estructuras de reproduccin, una vez sucedido esto se realiz el montaje de la siguiente manera:

3.4.2

Tcnica de montaje Se quit el cubreobjeto y se coloc sobre una lmina limpia con la cara inferior (zona de crecimiento) hacia arriba.

Se retir el agar con un estilete y se elimin en un recipiente con fenol al 5 %.

Se coloc la lmina en una estufa de 30 C por 15 minutos. Se retir la lmina de la estufa y se adicion gotas de metanol neutro sobre la zona del crecimiento del hongo, se esper que se evapore.

Se coloc unas gotas de con azul de lactofenol y se dej actuar entre 15 a 30.

Se Tom el cubreobjetos con ayuda de una pinza y se coloc en forma invertida (zona de crecimiento hacia abajo) evitando el ingreso del aire.

Se sellaron los extremos con esmalte de ua. Se observ al microscopio a 400x, para su identificacin (Anexo 04).2, 18, 34

3.5

Anlisis estadstico

Los datos se ordenaron en tablas de contingencia con datos observados, porcentuales y estadsticos de chi-cuadrado36

30

IV.

RESULTADOS

31

Tabla 5. Frecuencia de micosis superficial humana con relacin al gnero, Ayacucho 2012. Micosis superficial No % N % 41,9 36 58,1 52,6 18 47,4 46,0 54 54,0 2 X = 1,085; Gl = 1; P = 0,298 N 62 38 100

Genero Masculino Femenino Total N 26 20 46

Si

Total % 100,0 100,0 100,0

32

Tabla 6. Frecuencia de micosis superficial humana con relacin al distrito de residencia, Ayacucho 2012. Distrito de residencia Ayacucho San Juan Bautista Jess Nazareno Carmen Alto Total Micosis superficial No N % N % 14 41,2 20 58,8 16 64,0 9 36,0 9 47,4 10 52,6 7 31,8 15 68,2 46 46,0 54 54,0 2 X = 5,375; Gl = 3; P = 0,146 Si

Total N 34 25 19 22 100 % 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0

33

Tabla 7. Frecuencia de micosis superficial humana con relacin al nivel educativo, Ayacucho 2012. Micosis superficial No Total N % N % N % Sin escolaridad 3 60,0 2 40,0 5 100,0 Primaria 6 33,3 12 66,7 18 100,0 Secundaria 18 60,0 12 40,0 30 100,0 Superior no universitario 9 37,5 15 62,5 24 100,0 Superior universitario 10 43,5 13 56,5 23 100,0 Total 46 46,0 54 54,0 100 100,0 2 X = 4,681; Gl = 4; P = 0,322 Nivel educativo Si

34

Tabla 8. Frecuencia de micosis superficial humana con relacin a la higiene, Ayacucho 2012. Frecuencia de higiene Diario Interdiario Una vez a la semana Total Micosis superficial No N % N 5 83,3 6 24 75,0 32 25 40,3 62 100

Si N 1 8 37 46 % 16,7 25,0 59,7

Total % 100,0 100,0 100,0 100,0

46,0 54 54,0 X2 = 12,429; Gl = 2; P = 0,002

35

Tabla 9. Frecuencia de micosis superficial humana con relacin al piso de vivienda, Ayacucho 2012. Micosis superficial No Total % N % N % 71,4 14 28,6 49 100,0 21,6 40 78,4 51 100,0 46,0 54 54,0 100 100,0 X2 = 25,010; Gl = 1; P = 0,000 Si

Piso de vivienda Tierra Concreto Total N 35 11 46

36

Tabla 10. Frecuencia de micosis superficial humana con relacin al piso del patio del colegio y/o trabajo, Ayacucho 2012. Piso del patio del colegio y/o trabajo Tierra Concreto Total Micosis superficial Si No Total % N % N % 61,1 21 38,9 54 100,0 28,3 33 71,7 46 100,0 46,0 54 54,0 100 100,0 2 X = 10,791; Gl = 1; P = 0,001

N 33 13 46

37

Tabla 11. Frecuencia de micosis superficial humana con relacin a la crianza de animales en la vivienda, Ayacucho 2012. Crianza de animales Si No Total Micosis superficial Si No Total % N % N % 51,9 37 48,1 77 100,0 26,1 17 73,9 23 100,0 46,0 54 54,0 100 100,0 2 X = 4,768; Gl = 1; P = 0,029

N 40 6 46

38

Tabla 12. Frecuencia de micosis superficial humana con relacin al tipo de animal que cra en la vivienda, Ayacucho 2012. Micosis superficial No N % 20 66,7 6 60,0 1 33,3 2 40,0 5 38,5 2 40,0 0 0,0 1 12,5 17 73,9 54 54,0

Tipo de animal Perro Gato Gallina Cuy Perro y gato Perro, gato y gallina Perro, gato y cuy Perro, gato y otros Ninguno Total N 10 4 2 3 8 3 3 7 6 46

Si % 33,3 40,0 66,7 60,0 61,5 60,0 100,0 87,5 26,1 46,0

Total N 30 10 3 5 13 5 3 8 23 100 % 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0

39

Tabla 13. Frecuencia de micosis superficial humana con relacin a la ocupacin, Ayacucho 2012. Micosis superficial Si No % N % 34,4 21 65,6 56,0 11 44,0 85,7 1 14,3 50,0 5 50,0 25,0 3 75,0 57,1 3 42,9 57,1 3 42,9 12,5 7 87,5 46,0 54 54,0 X2 = 12,281; Gl = 7; P = 0,092

Ocupacin Escolar Universitario Obrero Militar Jubilado Comerciante Ama de casa Profesional Total N 11 14 6 5 1 4 4 1 46

Total N 32 25 7 10 4 7 7 8 100 % 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0

40

Tabla 14. Frecuencia de micosis superficial humana con relacin a la localizacin de la micosis, Ayacucho 2012. Localizacin de la micosis Ua de mano Ua de pie Planta pie Interdigital Tronco Cabeza Ua mano y ua pie Ua pie y planta pie Ua pie y interdigitales ua pie y tronco ua mano y tronco Ua mano y cabeza Total Micosis superficial Si No % N % 28,6 5 71,4 50,0 10 50,0 30,0 7 70,0 66,7 3 33,3 25,0 9 75,0 75,0 1 25,0 42,9 4 57,1 61,5 5 38,5 62,5 3 37,5 100,0 0 0,0 33,3 2 66,7 16,7 5 83,3 46,0 54 54,0

Total N 7 20 10 9 12 4 7 13 8 1 3 6 100 % 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0

N 2 10 3 6 3 3 3 8 5 1 1 1 46

41

Tabla 15. Frecuencia de micosis superficial humana con relacin al grupo de edad, Ayacucho 2012. Micosis superficial Si No % N % 33,3 6 66,7 34,8 15 65,2 56,3 14 43,7 53,8 6 46,2 70,0 3 30,0 16,7 5 83,3 28,6 5 71,4 46,0 54 54,0 X2 = 8,675; Gl = 6; P = 0,193

Grupo de edad 0 a 9 aos 10 a 19 aos 20 a 29 aos 30 a39 aos 40 a 49 aos 50 a 59 aos a 60 Total N 3 8 18 7 7 1 2 46

Total N 9 23 32 13 10 6 7 100 % 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0

42

Tabla 16. Frecuencia de especie de hongos dermatofitos identificados, Ayacucho 2012. Especie de hongo dermatofito identificado Trichophyton rubrum Trichophyton mentagrophytes Trichophyton spp. Total Micosis superficial N 17 8 21 46 % 37,0 17,4 45,6 100,0

43

V.

DISCUSION

En nuestro trabajo de investigacin habiendo muestreado a 100 (100%) personas con signos y sntomas de micosis superficial, en 46 (46%) de ellos se aisl un caso de hongo dermatofito. En la tabla 5, mostramos que las personas del sexo femenino estuvieron ms afectados (52,6%) en comparacin a un (41,9%) del masculino. Segn la prueba del Chi2 no hay predileccin por el gnero (p=0,298). Valdivia31, en un estudio realizado en Lima report que de 6,842 pacientes 576 casos positivos fueron para el sexo masculino y 405 casos positivos para el sexo femenino, resultado contrario al nuestro, al igual que los resultados encontrados por Zamalloa13, en San Francisco la Mar, segn su estudio hay predominancia del sexo masculino (45 casos) sobre el femenino (42 casos), del mismo modo Infante37, encontr 52,3% en el sexo masculino y 47,7% en el sexo femenino; en tanto que Salvatierra14, demostr una incidencia similar en hombres y mujeres. Estos resultados probablemente sean explicados por que aparentemente hay una mayor incidencia de dermatomicosis en el sexo masculino. Adems, la gran mayora de los varones se dedican a la agricultura, crianza de animales domsticos y estos presentan una mayor exposicin con la tierra que predisponen a la infeccin de las uas de las manos y pies, as como el contacto con los animales que pueden estar expuestos a la contaminacin.38

44

Actualmente se observa que tales diferencias de comportamiento de tipo laboral, practica de deporte, uso de piscinas, etc. ya no pertenece solo al gnero masculino. En la tabla 6, muestra que las frecuencias superiores de personas afectadas por la micosis superficial son San Juan Bautista 64%, Jess Nazareno 47,4%, Ayacucho 41,2%; no existe asociacin estadstica (p=0,146). Centeno y Marcano39, aseguran que las micosis superficiales son enfermedades producidas por hongos que afectan tejidos queratinizados, como la capa crnea de piel, pelos y uas, as como las mucosas. El hongo puede tener escasa respuesta inflamatoria, provocando un problema fundamentalmente esttico o bien una respuesta aguda o crnica ms o menos importante; en otros casos, puede producir reacciones alrgicas. Asimismo, esta micosis constituye una de las entidades dermatolgicas ms comunes de la prctica clnica; sin embargo, es difcil el diagnstico correcto, debido a que estas infecciones pueden exhibir presentaciones atpicas o ser confundidas con entidades de apariencia similar. El 60% de las personas sin escolaridad y con nivel educativo secundario respectivamente resultaron ser ms afectados por dermatofitosis, tampoco se observa predisposicin respecto al nivel educativo (p=0,322) (Tabla 7). Los estudiantes de las diferentes edades, de ambos sexos, y de los diferentes aos de estudio, pueden ser susceptibles a contraer infecciones fngicas si estas estn expuestos a factores de riesgo que estn presentes en el medio ambiente como lo es la presencia de polvo o tierra, presencia de animales domsticos, uso comn de baos, etc. que pueden contener las esporas de los hongos patgenos.20 La tabla 8, muestra que la micosis superficial est asociada estadsticamente a la frecuencia de higiene de la personas (p= 0,002), puesto que se encontr una 59,7% de micosis superficial en la personas que realizan su higiene una vez por semana, seguido de 25% en los que lo hacen de forma interdiaria. Otros factores importantes que debemos tener en cuenta son las malas

45

condiciones de higiene tanto personal como ambiental, el grado de hacinamiento en que viven muchos pobladores lo que conlleva a que tienen que compartir camas, ropas, peines contaminados, contacto con animales domsticos, etc.26 Estos hongos necesitan para su infeccin ciertos factores como calor, sudor, uso de calzado estrecho o de plstico, mala higiene, lo cual permite al hongo establecerse entre el borde libre de las uas e iniciar la digestin de la queratina con direccin a la matriz.40 Existe dependencia entre el piso de la vivienda (p= 0,000) (Tabla 9), 71% fue la frecuencia ms alta de micosis superficial encontrada en personas que tienen el piso de la vivienda de tierra; igual caso ocurre con el tipo de piso del patio del colegio y/o trabajo (p= 0,001) (Tabla 10), 61,1% fue la frecuencia de micosis superficial correspondiente a las personas que estudian o trabajan en lugares con piso de tierra. Para Murray1, el principal hbitat, desde la edad de los tiempos fue el suelo (hongos geoflicos) donde se desarrollaron al enriquecerse la tierra con la queratina de las escamas provenientes de los grandes saurios, al extinguirse fueron parcialmente desplazados del suelo por bacterias, adaptndose a los animales (hongos zooflicos) y tambin al hombre (hongos antropoflicos), aunque su desarrollo se efecta en la queratina sta no constituye un metabolito esencial para su alimentacin y hasta hoy se desconoce la causa de esta predileccin. La tabla 11, muestra una frecuencia de micosis superficial de 51,9% en la personas que cran animales en la vivienda, en comparacin al 26,1% en los que no cran animal alguno, el valor de (p=0,029), la prueba de chi2 muestra que existe asociacin con relacin a la crianza de animales en la vivienda. Existe mayor probabilidad de infectarse con algn dermatofito cuando se cran ms animales en casa, tal como lo muestran nuestros resultados de la Tabla 12, el 100% de las personas que cran perro, gato y cuy presentaron micosis superficial, seguido de 87,5% para los que cran perro, gato y otros.

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Los gneros Trichophyton, Microsporum, Epidermophyton son de gran importancia sanitaria, tanto en medicina humana como en veterinaria por la presentacin de epidemias y antropozoonosis. Los animales juegan un papel importante en la ecologa de los dermatofitos, puesto que adems de enriquecer el suelo con material queratinoso constituyen una fuente primaria y directa de infeccin. Es as que distintos estudios reflejan un aumento considerable de las dermatofitosis en humanos por agentes zooflicos, debido al contacto cada vez mayor entre el hombre y sus animales de compaa, considerndose a M. canis como la especie ms implicada; siendo el perro y el gato la principal fuente de contagio, lo cual corrobora con el presente trabajo de investigacin.41 Segn la tabla 13, los obreros presentaron la mayor frecuencia de micosis superficial con 85,7%, seguido de los comerciantes y amas de casa con 57,1% respectivamente, los universitarios con 56%, y porcentajes inferiores al 30% en los escolares, militares, jubilados y profesionales. No se observ asociacin estadstica (p=0,092). Los dermatofitos son ms frecuentes a nivel mundial. Esto podra explicarse por un lado porque la actividad hormonal favorece a la colonizacin en estas zonas, as como la prctica de actividades deportivas que podran favorecer el contagio. Parece existir un aumento en su incidencia (o al menos en su diagnstico) en las ltimas dcadas, lo cual se considera un tributo de la civilizacin al uso de calzado (especialmente el deportivo, ms oclusivo, que impide la correcta transpiracin), siendo ms frecuente en diferentes profesiones con calzados oclusivos, como ocurre por ejemplo en los soldados, y en aparente relacin al uso de piscinas, duchas y vestuarios comunitarios. Existe un predominio de casos en varones. Casi siempre constituye una infeccin crnica, y suele estar causada por T. rubrum, en menor medida por T. mentagrophytes.42

47

La tabla 14, muestra que no existe predileccin alguna segn la prueba de chi2 (p=0,316) de los hongos dermatofitos de buscar una localizacin especial en alguna parte del cuerpo de las personas incluidas en el estudio, pero se pueden resaltar frecuencias altas de 100% en la ua del pie y tronco, 75% en la cabeza, 66,7% en el espacio interdigital de los pies. La explicacin que se le da con respecto a la localizacin de la lesin, es que las infecciones en mayor porcentaje se encuentran en las uas de las manos y de los pies denominado tambin onicomicosis, causados por T. rubrum que suelen afectar al espesor total de la ua, la cual queda al final completamente destruida. Existe casi siempre antecedente de infeccin previa de los dedos, de manos o pies, pudiendo ser invadidas una o ms de ellas. La tia de las uas es sin duda la ms resistente de todas la infecciones fungosas y no muestra tendencia alguna a la curacin espontnea.2 Gonzlez43, refiere que la piel de las personas puede infectarse con hongos en las diferentes zonas del cuerpo donde exista elevada transpiracin, o lugares de mayor exposicin a los agentes patgenos cuando acuden a las piscinas o practican algn deporte. Con respecto al grupo de edades, se observa que no existe predileccin por algn grupo de edad, aunque se ha encontrado relativas altas frecuencias a medida que la edad avanza, frecuencias que van del 50% al 70% en personas de 20 a 49 aos de edad, resultado corroborado por la prueba de chi2 que no ha mostrado significacin estadstica (Tabla 15). Brooks y Col.16, fundamentan dicho resultado ya que mencionan que existe evidencias de que la susceptibilidad del hospedero se incrementa por la humedad, calor, traumatismo, qumica especfica de la piel, composicin de la grasa, transpiracin, edad joven, exposicin intensa y predisposicin gentica, la incidencia es ms alta en climas hmedos y clidos y en condiciones de hacinamiento, el uso

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de calzado cerrado, zapatillas y calcetines sucios, dan calor y humedad para la infeccin a los pies, sumado a que el suelo contiene conidios gefilos y zofilos que permanecen viables por bastante tiempo; aseveraciones que apoyan nuestros resultados. En nuestro trabajo encontramos las ms alta frecuencia de Trichophyton spp., con 45,6%, seguido de T. rubrum con 37% y T. mentagrophytes con 17,4% (Tabla 16). En el Per, Guevara y col.44, en un estudio realizado en dermatofitos causantes de tia en las uas en pacientes del hospital nacional Daniel A. Carrin, reportaron como el dermatofito ms frecuente a T. rubrum (93,5%). Escobar45, asegura que la alta prevalencia de dermatofitosis y especialmente de micosis ungueales, es debida a las condiciones ligadas a los estilos de vida de la poblacin, el entrenamiento, ejercicio fsico intenso y prolongado, sudoracin, secado insuficiente y uso de botas, que favorecen la persistencia y la aparicin de dermatomicosis y micosis ungueales. Romero y Col.15, encontr 68% de estudiantes con dermatofitosis. Fueron los espacios interdigitales de los pies la zona anatmica ms afectada por dermatofitos (47%).

49

VI.

CONCLUSIONES

1. Se muestrearon 100 (100%) personas con signos de micosis superficial, en 46 (46%) de ellos se aisl un caso de hongo dermatofito y un 54 (54%) otras micosis no dermatofiticas. 2. Las especies de dermatofitos identificados en orden de frecuencia fueron Trichophyton spp. (21) 45.6%, Trichophyton rubrum (17) 37.0% y Trichophyton mentagrophytes (8) 17.4%. 3. Los factores de riesgo asociados estadsticamente a la micosis superficial fueron la frecuencia de higiene (p=0,002), piso de la vivienda (p= 0,000), piso del patio del colegio y/o trabajo (p=0,001) y la crianza de animales en la vivienda (p=0,029).

50

VII.

RECOMENDACIONES

Se realicen ms trabajos de investigacin en dermatofitos para catalogar las especies ms frecuentes en los procesos infecciosos de la piel, ya que son las infecciones ms comunes y motivo frecuente de consulta dermatolgica, debido a que todas las personas estamos expuestas a estos microorganismos que no son fcil de identificarse debido a los costos elevados de su aislamiento y al mismo comportamiento del microorganismo.

51

VIII. 1.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

2. 3.

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ANEXOS

56

ANEXO 1. Tabla 17. Ficha de registro de datos I. DATOS DE IDENTIFICACIN N.................. Edad......................................Sexo: M ( ) F ( ) Residencia Actual: Ayacucho San Juan Bautista Nazarenas Carmen Alto ( ) ( ) ( ) ( )

Grado de escolaridad:

Sin escolaridad Primaria Secundaria Superior No universitario Superior Universitario

( ) ( ) ( ) ( ) ( )

II.

CONDICIONES DE HIGIENE Ud. con que frecuencia se baa? Diario ( ) Interdiario ( ) Una vez a la semana ( ) Una vez al mes ( ) FACTORES DE RIESGO Piso de vivienda..... Piso patio colegio. Crianza de animales: si ( ) no ( )

III.

Animales que cra: perro ( ) gato ( ) cuy ( ) gallina ( ), otro ( ) Ocupacin : . IV. LOCALIZACIN DE LA MICOSIS ua mano ( ) ua pie ( ) brazo ( ) pierna ( ) pelo ( ) cara ( ) cuello ( ) tronco ( ) planta ( ) palma ( ) interdigital ( ) ingle ( ) glteo RESULTADO: Examen directo : Positivo ( ) Negativo ( ) Cultivo : Epidermophyton.. Microsporum. Trichphyton..

57

ANEXO 2. Tabla 18. Consentimiento informado Ttulo: Dermatofitos asociados a micosis superficial humana, Ayacucho 2012. 1.- Propsito: La Universidad Nacional de San Cristbal de Huamanga est realizando una investigacin en casos de Dermatofitos asociados a micosis superficial humana, Ayacucho 2012. Los dermatofitos tambin conocidos como tias constituyen una de las infecciones cutneas ocasionadas por hongos ms frecuentes y es uno de los motivos ms frecuentes de consultas mdicas por las molestias ocasionadas por los microorganismos. Por lo que deseamos realizar el presente estudio con el fin de conocer, identificar, aislar para conocer la prevalencia de esta infeccin. 2.- Participacin: En este estudio participaran todas las personas con signos de micosis superficial humana, Ayacucho 2012. 3.- Procedimiento: Para realizar este estudio necesito tomarle a Ud. Una muestra de la infeccin presuntiva de micosis superficial, empleando un bistur estril, la muestra obtenida ser procesada en el Laboratorio de Micologa del rea Acadmica de Microbiologa de la Facultad de Ciencias Biolgicas de la Universidad Nacional de San Cristbal de Huamanga. De encontrarse positivo se le comunicar directamente manteniendo la confidencialidad y absoluta reserva de esta informacin. 4.- Riesgo: El procedimiento a Ud. No le ocasionar ningn malestar ni consecuencias posteriores. Solo podr sentir una molestia pasajera o un dolor leve al momento de que se tome la muestra. 5.- Beneficios: Ud. Se beneficiar con los exmenes podr saber si tiene la infeccin por pie de atleta, la participacin en este estudio no le costar a Ud. Absolutamente nada. 6.- Participacin voluntaria: La participacin en este estudio ser totalmente voluntario. Si no desea participar, no habr ningn tipo de represara. Ser Ud. Quien decida voluntariamente su participacin en este estudio. La Universidad Nacional de San Cristbal de Huamanga no le ofrecer compensacin econmica alguna. 7.-Informacin adicional: Para obtener mayor informacin sobre la investigacin Ud. Puede conversar con el bilogo Mg. Blgo. Serapio, Romero Gaviln, docente de la Facultad de Ciencias Biolgicas. Por favor, si acepta participar recuerde que lo hace de forma voluntaria, luego de leer este documento, en seal de ello, le solicitamos firmar este documento en el lugar que le indica respectivamente. Telef. : 971557141 - Rpm. #971557141 Nombre del participante: Firma del participante: Fecha:..//

Nombre de la responsable de estudio: Firma de la responsable de estudio: Fecha:..//

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ANEXO 3. MUESTRA: ZONA AFECTADA DE LA PIEL, PELOS, UAS, OTROS DESINFECCIN DE LA ZONA AFECTADA CON ALCOHOL AL 96%

RELIZAR EL RASPADO DE LA ZONA AFECTADA

TRANSPORTAR AL LABORATORIO DE MICOLOGA

OBSERVACIN DIRECTA CON KOH AL 10%

SEMBRAR EN PLACAS CON AGAR SELECTIVO PARA HONGOS PATGENOS INCUBAR A 25 C POR 7 14 DIAS

REPICAR LOS POSIBLES DERMATOFITOS IDENTIFICADOS POR LAS CARACTERSTICAS MACROSCPICAS DE LAS COLONIAS (SUPERFICIE, TEXTURA, PRESENCIA Y COLOR DE PIGMENTOS)

SEMBRAR EN PLACAS CON AGAR SABOURAUD

INCUBAR A 25 C POR 7 14 DIAS

REPICAR COLONIAS BLANCAS, AMARILLENTAS, CREMOSAS, ALGODONOSAS, GRANULOSAS, POSIBLES DERMATOFITOS AISLAMIENTOS DE LAS POSIBLES COLONIAS DE DERMATOFITOS EN VIALES CON AGAR SABOURAUD MICROCULTIVO

IDENTIFICACIN OBTENCIN DE SCREENING CEPARIO DE DERMATOFITOS Figura 8. Flujograma para el aislamiento de dermatofitos

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ANEXO 4. SCREENING

Placa con Agar Saboraud

cortar el Agar en pequeos bloques de aproximadamente 1 x 0.5 cm

Colocar un bloque de Agar sobre la lmina portaobjetos

A partir de una colonia sembrar con el asa en los extremos del bloque

Colonia

Cubrir con una laminilla desinfectado con metanol.

Colocar la lmina en una placa + agua destilada estril o glicerina al 10%

Incubar a temperatura ambiente por 7 a 14 das

Figura 9. Tcnica de microcultivo

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ANEXO 5. Quitar el cubreobjetos y colocar sobre una lmina limpia con la cara inferior (zona de crecimiento) hacia arriba.

Retirar el agar con un estilete y eliminar en un recipiente con fenol al 5 %

Colocar la lmina en una estufa de 30 C por 15 minutos.

Retirar la lmina de la estufa y adicionar gotas de metanol neutro sobre la zona del crecimiento del hongo, esperar que se evapore.

Colocar unas gotas de azul de lactofenol deje actuar entre 15 a 30

Tome el cubreobjetos con ayuda de una pinza y coloque en forma invertida (zona de crecimiento hacia abajo) evitando el ingreso del aire.

Sellar los extremos con esmalte de uas

Observar al microscopio para la identificacin Figura 10. Tcnica de montaje

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ANEXO 6.

Figura 11. Ua pie y ua mano con signos de micosis superficial humana, Ayacucho 2012.

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ANEXO 7.

Figura 12. Brazo y cabeza con signos de micosis superficial humana, Ayacucho 2012.

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ANEXO 8.

Figura 13. Toma de muestra y cultivo en placa Petri con agar selectivo para hongos patgenos.

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ANEXO 9.

. Figura 14. Cultivo de hongo dermatofitos en agar selectivo para hongos patgenos y agar Sabouraud.

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ANEXO 10.

Figura 15. Aislamiento de hongos en cmara de flujo laminar y preparacin de cerapios.

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ANEXO 11.

Figura 16. Obtencin de posibles cepas de dermatofitos y preparacin para la tcnica de microcultivo.

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ANEXO 12.

Figura 17. Cultivo en cmara hmeda y obtencin de hongos filamentos (Tcnica de microcultivo).

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ANEXO 13.

Figura 18. Coloracin de estructuras filamentosas con azul de lactofenol e identificacin de especie dermatofito: Trichophyton rubrum.

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ANEXO 14.

Figura 19. Identificacin de especie dermatofito: Trichophyton mentagrophytes y estructuras asesoras.

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ANEXO 15. Tabla 19. Matriz de consistencia

TITULO PROBLEMA OBJETIVOS MARCO TEORICO VARIABLES E INDICADORES VARIABLE INDEPENDIENTE Gnero. Distrito de residencia. Nivel educativo. Higiene. Piso de vivienda. Piso del patio del colegio y/o trabajo. Crianza de animales en la vivienda. Tipo de animal que cra en la vivienda. Ocupacin. Localizacin de la micosis. Grupo de edades. Especie de hongo identificado. VARIABLE DEPENDIENTE Micosis superficial Dermatofitos: Trichophyton, Epidermophyton, Microsporum. METODOLOGA

Dermatofitos asociados a micosis superficial humana, Ayacucho 2012.

Cules son los dermatofitos asociados a micosis superficial humana, Ayacucho 2012?

OBJETIVO GENERAL Conocer los dermatofitos asociados a micosis superficial humana, Ayacucho 2012. OBJETIVOS ESPECIFICOS Identificar los dermatofitos asociados a micosis superficial humana, Ayacucho 2012. Relacionar los dermatofitos a los factores de riesgo, Ayacucho 2012.

- Antecedentes. - Hongos. - Micosis. - Micosis superficial. - Dermatofitosis - Dermatofitos - Clasificacin de los dermatofitos de acuerdo a su habitad. - Clasificacin de dermatofitos de acuerdo a cuadros clnicos - Clasificacin taxonmica de los dermatofitos - Clasificacin y descripcin de los dermatofitos - Gnero Epidermophyton. - Gnero Microsporum - Gnero Trichohyton - Factores de patogenicidad - Periodo de transmisibilidad - Factores predisponentes - Epidemiologia - Respuesta inmune a los dermatofitos

Poblacin Estuvo constituida por las personas con aparentes signos de micosis superficial humana del rea metropolitana de la provincia de Huamanga. Tamao de muestra El tamao de la muestra estuvo constituida por 100 personas voluntarias con signos de micosis superficial que cumplan con los criterios de elegibilidad del rea metropolitana de la provincia de Huamanga. Sistema de muestreo No probabilstico, por conveniencia. Mtodos y tcnicas para la recoleccin de datos Consentimiento y/o asentimiento Se brind consentimiento informado a cada uno de los participantes, a quienes previamente se les hizo llenar una ficha de registro de datos y que se les informo sobre los objetivos del estudio y los posibles daos para su salud. Obtencin de la muestra Se tom la muestra observando los signos de micosis superficial de las partes afectadas por los dermatofitos. Se rasp la zona afectada (cara, cuello, tronco, brazos, pierna, pie, ua de manos y pies) con ayuda de un bistur debidamente desinfectado y previa desinfeccin del tejido infectado y de las zonas hmedas con hisopos estriles embebidos con solucin salina fisiolgica. Procesamiento de la muestra Examen directo Cultivo de la muestra Aislamiento Identificacin Tcnica de microcultivo Anlisis estadstico Los datos se ordenarn en tablas, grficos y se aplicar la prueba de Ji cuadrado (X2).

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