PRACTICA 4 RECONOCIMIENTO DE PROTEINAS

I.-RESUMEN La prctica de instruccin de laboratorio fue titulado "reconocimiento de la protena" la misma que tuvo como objetivo lograr el reconocimiento e importancia de las protenas, durante el desarrollo de la practica se explico que a la protena se le reconoce mediante el reactivo de biuret, el cual permite reconocer la protena. Asi tambin se puso algunos ejemplos como la protena de las lgrimas que tienen el nombre de lisosima que cumplen una funcin de proteccin, entre otros, as como su solubilidad en el agua, una vez que se identificaron algunas protenas quedo claro las funciones y la importancia de las protenas y finalmente concluyo en que la protena tiene cuatro niveles en su estructura. II.-INTRODUCCION.Las protenas son materiales que se desempean el mayor nmero de las funciones de las clulas de todos los seres vivos. Forman parte de su estructura bsica de los tejidos y desempean funciones metablicas y reguladoras tambin son seres vivos que definen la identidad de cada ser vivo, ya que son la base de la estructura del cdigo gentico ADN y de los sistemas de reconocimiento de organismos extraos en elsistema inmunolgico. Las protenas son biomolculas formadas por cadenas lineales de aminocidos. El nombre protena proviene de la palabra griega p??te??? ("proteios"), que significa "primario" o del dios Proteo, por la cantidad de formas que pueden tomar. Por sus propiedades fsico-qumicas, las protenas se pueden clasificar en protenas simples (holoproteidos), que por hidrlisis dan solo aminocidos o sus derivados; protenas conjugadas (heteroproteidos), que por hidrlisis dan aminocidos acompaados de sustancias diversas, y protenas derivadas, sustancias formadas por desnaturalizacin y desdoblamiento de las anteriores. Las protenas son indispensables para la vida, sobre todo por su funcin plstica (constituyen el 80% del protoplasma deshidratado de toda clula), pero tambin por sus funciones biorreguladora (forma parte de las enzimas) y de defensa (los anticuerpos son protenas). Las protenas desempean un papel fundamental para la vida y son las biomolculas ms verstiles y ms diversas. Son imprescindibles para el crecimiento del organismo. Realizan una enorme cantidad de funciones diferentes, entre las que destacan:

 Estructural. Esta es la funcin ms importante de una protena (Ej: colgeno), Inmunolgica (anticuerpos), Enzimtica (Ej: sacarasa y pepsina), Contrctil (actina y miosina). Homeosttica: colaboran en el mantenimiento del pH (ya que actan como un tampn qumico), Transduccin de seales (Ej: rodopsina) Protectora o defensiva (Ej: trombina y fibringeno) Las protenas estn formadas por aminocidos los cuales a su vez estn formados por enlaces peptdicos para formar esfingocinas. Las protenas de todos los seres vivos estn determinadas mayoritariamente por su gentica (con excepcin de algunos pptidos antimicrobianos de sntesis no ribosomal), es decir, la informacin gentica determina en gran medida qu protenas tiene una clula, un tejido y un organismo. Las protenas se sintetizan dependiendo de cmo se encuentren regulados los genes que las codifican. Por lo tanto, son susceptibles a seales o factores externos. El conjunto de las protenas expresadas en una circunstancia determinada es denominado proteoma. III.-MATERIALES Y METODOS.3.1.- MATERIALES: 3.1.1.- Reactivos: - Clara de huevo (albumina) - Acido actico - HNO3 - Sulfato cprico - Hidrxido de sodio - Acetato de plomo 3.1.2.- Materiales de laboratorio: - 6 tubos de ensayo - Gradilla - Mechero - Bao mara

3.2.-METODOS: 3.2.1- COAGULACION DE PROTEINAS.Las protenas, debido al gran tamao de sus molculas, forman con el agua SOLUCIONES COLOIDALES. Estas soluciones pueden precipitar con formacin de cogulos al ser calentadas a temperaturas superiores a los 70 C al ser tratadas con soluciones salinas, acido, alcohol. Etc. La coagulacin de las protenas es un proceso irreversible y se debe a su desnaturalizacin por los agentes indicados, que al actuar sobre la protena la desordenan por la destruccin de su ESTRUCTURA TERCIARIA y CUATERNARIA

Para ver la coagulacin de las protenas se puede utilizar clara de huevo, para conseguir ms volumen puede prepararse para toda la clase una dilucin de clara de huevo en agua, de forma que quede una mezcla an espesa. 1. Colocar en un tubo de ensayo una pequea cantidad de clara de huevo. 2. Aadir 5 gotas de cido actico y calentar el tubo a la llama del mechero. 3.2.2-REACCIONES COLOREADAS A. Reaccin Xantoproteica: Es debida a la formacin de un compuesto aromtico nitrado de color amarillo, cuando las protenas son tratadas con cido ntrico concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas proteinas con aminocidos portadores de grupos bencnicos, especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un lcali vira a un color anaranjado oscuro. Tcnicas: 1. Poner en el tubo de ensayo de 2 a 3 cc. de solucin problema (clara de huevo ). 2. Aadir 1 cc. de HNO3 concentrado. 3. Calentar al bao mara a 100: C..

4. Enfriar en agua fra 5. Aadir gota a gota una disolucin de sosa al 40%. B.-Reaccin de Biuret La producen los pptidos y las protenas, pero no los aminocidos, ya que se debe a la presencia del enlace peptdico (- CO- NH -)que se destruye al liberarse los aminocidos. Cuando una protena se pone en contacto con un lcali concentrado, se forma una sustancia compleja denominada biuret, de frmula:

que en contacto con una solucin de sulfato cprico diluida, da una coloracin violeta caracterstica. Tcnica: 1. 2. 3. 4. Tomar un tubo de ensayo y poner unos 3 cc. de albmina de huevo. Aadir 2cc. de solucin de hidrxido sdico al 20%. A continuacin 4 5 gotas de solucin de sulfato cprico diluida al 1%. Debe aparecer una coloracin violeta-roscea caracterstica.

C.-Reaccin de los aminocidos azufrados Se pone de manifiesto por la formacin de un precipitado negruzco de sulfuro de plomo. Se basa esta reaccin en la separacin mediante un lcali, del azufre de los aminocidos, el cual al reaccionar con una solucin de acetato de plomo, forma el sulfuro de plomo. Tcnica: 1. Poner en el tubo de ensayo de 2 a 3 cc. de albmina de huevo (clara de huevo). 2. Aadir 2 cc. de solucin de hidrxido sdico al 20%. 3. Aadir 10 gotas de solucin de acetato de plomo al 5%. 4. Calentar el tubo hasta ebullicin. 5. Si se forma un precipitado de color negruzco nos indica que se ha formado sulfuro de plomo, utilizndose el azufre de los aminocidos, lo que nos sirve para identificar protenas que tienen en su composicin aminocidos con azufre.

IV.- RESULTADOS Para el experimento 1.-

Al combinar la clara de huevo con 5 gotas de acido actico y al someterlo al fuego. - este es el resultado, la clara de huevo se coagula

Para el experimento 2.REACCION XANTOPROTEICA: Al combinar clara de huevo y aadir 1cc. De HNO3 , luego lo mandamos a calentar a 100C Si sale positivo se teir de color anaranjado o amarillo, por lo que se demuestra que posee protenas

REACCION DE BIURET:

Al combinar clara de huevo con 2 cc de solucin de Hidrxido de Sodio al 20% y 4 o 5 gotas de Solucin de sulfato cprico diluida al 1%

Se obtiene una mezcla de color violeta- roscea caracterstica, que se observa en las imgenes

REACCION DE LOS AMINOACIDOS AZUFRADOS Al mezclar clara de huevo con Hidrxido sdico al 20% y solucin de acetato de plomo al 5% , luego calentar el tubo El resultado que se observo es que la solucin final se observa de color amarillo con puntos negros

V.-CONCLUSIONES Que existen diferentes maneras para saber si algn compuesto contiene protenas protenas La clara de huevo, en todas las experiencias realizadas es un indicador de la presencia de protena Las reacciones ms utilizadas para la determinacin de protenas son: las REACCIONES COLOREADAS, mediante la utilizacin de la reaccin XANTOPROTEICA y BIURET

VI.-CUESTIONARIO 1.- En el caso de la desnaturalizacin de las protenas, indique Que estructuras de su conformacin (estructura primaria, secundaria, terciaria y cuaternaria) se deterioran? Se deterioran las estructuras de orden superior: secundaria, terciaria y cuaternaria:

En la desnaturalizacin de la estructura secundaria las protenas pierden todos los patrones de repeticin regulares como las hlices alfa y adoptan formas aleatorias. La desnaturalizacin de la estructura terciaria implica la interrupcin de:
Enlaces covalentes entre las cadenas laterales de los aminocidos (como los puentes

disulfuros entre las Cistenas).

Enlaces no covalentes dipolo-dipolo entre cadenas laterales polares de

aminocidos.

 Enlaces dipolo inducidos por fuerzas de Van Der Waals entre cadenas laterales no

polares de aminocidos. En la desnaturalizacin de la estructura cuaternaria, las subunidades de protenas se separan o su posicin espacial se corrompen.

2.- Cul es el principio de la reaccin xantoproteica? Las protenas en presencia de cido ntrico concentrado y en caliente forman uncompuesto de color amarillo, que toma un color anaranjado cuando se alcaliniza lasolucin 3.- En que se fundamenta la reaccin de Biuret? La reaccin o prueba de BIURET es un mtodo que detecta la presencia de compuestos con dos o ms enlaces peptdicos y, por tanto, sirve para todas las protenas y pptidos cortos. El reactivo del biuret (sulfato de cobre en una base fuerte) reacciona con los enlaces del pptido y cambia el color cuando entra en contacto con otra sustancia, tornndose VIOLETA. Mientras ms cantidad de protena est presente en la solucin, ms oscuro es el color. 4.- A que se debe la formacin de precipitado negro en la reaccin de las protenas con Hidrxido de sodio y acetato de plomo? Si se forma un precipitado de color negruzco nos indica que se ha formado sulfuro de plomo, Utilizndose el azufre de los aminocidos, lo que nos sirve para identificar protenas que tienen en su composicin aminocidos con azufre. Lo cual se nos hace mas fciles de reconocer a simple vista sin hacer anlisis en laboratorios.

VII.- REFERENCIA BIBLIOGRAFICA http://santiynicoquimica.blogspot.com/2012/06/practica-1-quimica-reconocimiento.html http://www.monografias.com/trabajos93/reconocimiento-proteinas/reconocimientoproteinas.shtml http://es.scribd.com/doc/135791083/Desnaturalizacion-de-Proteinas http://www.educa.madrid.org/web/ies.mateoaleman.alcala/PRACTICAS_EB_alumnos.pdf